Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.01) на тему:Создание и исследование лекарственных форм мефопрана и димефосфона для применения в гинекологии

рГ£ ОЛ ' Ч МР 1335

На правах рукописи

Камаева Светлана Сергеевна

СОЗДАНИЕ И ИССЛЕДОВАНИЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ МЕФОПРАНА И ДИМЕФОСФОНА ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ В ГИНЕКОЛОГИИ

15.00.01 - технология лекарств и организация фармацевтического дела

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

МОСКВА - 1995

Работа выполнена в Казанском государственном медицинском университете им.С. В. Курашова Министерства здравоохранения

и медицинской промышленности Российской Федерации Научный руководитель:

Кандидат фармацевтических наук, доцент С.Н.Егорова

Официальные оппоненты:

Доктор фарм. наук, профессор А.И.Артемьев

Доктор фарм. наук, ст. н. с. Э.З.Каган

Ведущее учреждение:

Московская Медицинская Академия им. И.М.Сеченова

Защита состоится г. в ^^ часов

на заседании Специализированного Ученого Совета Д 074.28.01 при Научно-исследовательском институте фармации по адресу: 117418, г.Москва, ул.Красикова, 34.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ фармаци]

Автореферат разослан "^г! " «-1995 г.

Ученый секретарь Специализированного Ученого. Совета Д 074.28.01 кандидат фармацевтических наук, старший научный сотрудник Л.М.Боброва

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Гинекологические заболевания инфек-ционно-воепалительно-аллергического генеза широко распространены, высока такие частота их хронизаций, что является причиной нетрудоспособности и бесплодия женщин. Лечение названных заболеваний требует комплексной терапии с одновременным использованием антисептических, противовоспалительных, противоаллергических и стимулирующих регенерацию лекарственных препаратов. Сочетанием указанных эффектов характеризуются оригинальные, синтезированные в Казани, фосфорооргани-ческие соединения - димефосфон (Б.А.Арбузов, А. О.Визель с соавт., 1967) и кефопран (Б.А.Арбузов, А.Н.Пудовик, 1950).

Димефосфон внедрен в клиническую практику коллективами сотрудников Казанского медицинского университета и Института органической и физической химии им.А. Е. Арбузова РАН. Димефосфон рекомендован Фармакологическим комитетом для местного применения в форме 15% раствора в качестве антисептического средства, а также средства, повышающего барьерно-за-щтные функции кони и слизистых оболочек, и используется для лечения ран, ЛОР-заболеваний, в стоматологии и для профилактики мукозитов при радиационной терапии злокачественных новообразований. Для использования димефосфона в гинекологии, в особенности, в амбулаторных условиях, целесообразна разработка пенного аэрозоля для вагинального применения.

Теми же коллективами изучен структурный аналог димефосфона - мефопран, который также обладает вышеуказанными эффектами и отличается большей активностью в отношении стимуляции процессов регенерации, что делает перспективным его

использование для местной терапии воспалительных заболевание гениталий.

Для успешного внедрения мефопрана и димефосфона в гинекологическую практику необходимо было разработать их рациональные лекарственные формы.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось исследование фармацевтических свойств новых лекарственных веществ - димефосфона и мефопрана - и создание их лекарственных форм для местного применения в гинекологии.

Для достижения поставленной цели было необходимо решит! следующие задачи:

- провести выбор вспомогательных веществ, совместимых с мефопраном, и обосновать вид лекарственной формы для местного применения в гинекологии,

- разработать оптимальный состав и технологию лекарственных форм мефопрана с учетом его терапевтической концентрации и физико-химических свойств, оценить стабильносп лекарственных форм при хранении,

-. теоретически и экспериментально обосновать состав и разработать технологию пенного аэрозоля димефосфона,

- определить фармацевтическую доступность мефопрана и д мефосфона из лекарственных форм;- установить влияние фармаце! тических факторов на высвобождение мефопрана и димефосфона,

- обосновать возможность применения разработанных лекарственных форм для лечения воспалительных заболеваний ге ниталий на модели острого кольпита у крыс.

Научная новизна работы.

Методом равновесного диализа с использованием метод

математического планирования эксперимента установлено, что большей фармацевтической доступностью обладают растворы мефопрана на воде и рыбьем жире в концентрации 1%, при увеличении концентрации высвобождение мефопрана из растворов снижается, по-видимому, вследствие межмолекулярного взаимодействия как между молекулами самого мефопрана, так и между молекулами мефопрана и растворителя; на модели формалинового кольпита у крыс найдено, что мефопран и димефосфон в разработанных лекарственных формах эффективны также в концентрации 1%, которая обеспечивает наилучшие сроки выздоровления животных при наименьшем проценте осложнений в силу наличия противовоспалительных, антиаллергических, стимулирующих регенерацию и антимикробных свойств препаратов в отношении золотистого стафилококка, кишечной палочки и гемолизирующего стрептококка.

Методом скрининга средств с противовоспалительной активностью установлено наличие зависимости между способностью мефопрана замедлять термическую денатурацию бежа и его противовоспалительными свойствами; тест оценки сохранения способности растворов мефопрана тормозить термическую коагуляцию белка в процессе хранения разработан как критерий стабильности растворов мефопрана при хранении.

В процессе исследований установлено, что подскорлуповая оболочка куриного яйца адекватно имитирует диализные мембраны при изучении фармацевтической доступности мефопрана и ди-мефосфона из лекарственных форм; методом наименьших квадратов установлена прямая зависимость между высвобождением мефопрана и димефосфона из гинекологических лекарственных форм

через матку кролика и подскорлуповую оболочку куриного яйцг что позволяет использовать ее в качестве полупроницаем( мембраны.

Практическая значимость работы. На основании проведе! ных исследований разработаны и внедрены:

- состав и технология водных и масляных растворов м( фопрана для применения в ветеринарной гинекологии ("Време! ное наставление по применению мефопрана для лечения острых хронических эндометритов у коров в порядке широкого прои; водственного опыта", утверждено Главным управлением ветерг нарии с Государственной ветеринарной инспекции 28.12.1990г. );

- технология и контроль качества растворов мефопрана условиях аптек ("Методические указания по технологии и кон: ролю качества растворов мефопрана в условиях аптек", акт аг робации Татарского республиканского Центра по контролю з производством и качеством лекарств от 16.03.94г.);

- состав и технология пенного аэрозоля димефосфона (ав внедрения в учебный процесс на кафедре технологии лекаре1 Казанского медицинского университета от 08.09.93г.);

- методика использования подскорлуповой оболочки кури ного яйца в качестве мембраны при изучении фармацевтическс доступности лекарственных препаратов методом равновесно! диализа (акты внедрения в учебный процесс на кафедрах технс логии лекарств Казанского медуниверситета от 25.Об.ЭЗг Пермского фарминститута от 21.01.94г., Алтайского мединстр: тута ст 26.01.94г., Тюменского мединститута от 08.02.94г. Ярославского мединститута от 14.03.94г., на кафедре аптечнс

технологии лекарств Украинской фармацевтической академии от 02. 09. 93г. ).

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на Республиканской научной конференции "Проблемы фармации, подготовки и использования провизорских кадров" (Пятигорск, 1993), региональной научно-практической конференции "Современные методы диагностики и лечения" (Те-тюши, 1993), заседаниях Ученого Совета фармацевтического факультета Казанского медицинского университета (1993, 1994), совместном заседании научных обществ фармакологов и акушеров-гинекологов Республики Татарстан (Казань, 1993), юбилейной научной конференции, посвященной 50-летию НИИ фармации (Москва, 1994), 7 международном симпозиуме по фармацевтической технологии (Анкара-Турция, 1994).

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 3 работ.

Связь задач исследования с проблемным планом Фармацевтических наук.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом ГКНТ 0.43.01. "Создание новых эффективных лекарственных средств, разработка технологии промышленного производства новых препаратов и их лекарственных форм Ш госрегистрации 01.9.20.003893), Межведомственным Советом по фармации N 47 АЙН РФ и в рамках Государственной Программы Республики Татарстан "Лекарственные средства" (раздел II, п.4 "Мефопран -новое лекарственное средство гинекологического назначения для медицины и ветеринарии").

- - 6 -

Обьем и структура диссертации.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальных исследований, общих выводов, списка литературы и приложения. Работа изложена на 153 листах машинописного текста, иллюстрирована 27 таблицами, 10 рисунками. Библиография включает 205 источников литературы, из которых 47 на иностранных языках.

Во введении сформулированы актуальность, цель и задачи исследования, научная новизна и практическая значимость работы.

Глава 1 содержит обзор литературы по вопросам как современного состояния проблемы применения лекарственных фор« местного действия для лечения заболеваний женской половой сферы, так и использования фосфороорганических соединений е медицине.

В главе 2 описаны физико-химические свойства мефопране и димефосфона, представлена характеристика использованные для изготовления лекарственных форм вспомогательных веществ, приведены методики исследования.

Глава 3 содержит сведения по обоснованию вида лекарственной формы мефопрана, ее технологическому, биофармацевтическому, физико-химическому, фармакологическому исследованию с обоснованием используемой для биофармацевтическогс изучения модельной мембраны.

В главе 4 приводятся результаты исследований по разработке оптимального состава и технологии пенного интраваги-нального аэрозоля димефосфона, изучению его специфическоГ фармакологической активности.

- 7 -

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Объектами исследования явились: димефосфон - диметило-вый эфир 1, 1-диметил-З-оксобутилфосфоновой кислоты (ВФС 42-1299-83) и мефопран - метиловый эфир 1-метил-диметокси-фосфорилпропановой кислоты, синтезированные в технологической лаборатории ИОФХ им. А.Е.Арбузова РАН. В работе использованы вспомогательные вещества (ВЗ): вода очищенная, масло какао, масло подсолнечное, парафин, рыбий жир, вини-лин, глицерин, димексид, натрия хлорид, оксиэтилированные спирты, высшие жирные спирты С16 - Сл, сульфоэтоксилат, твин-80, ПЗО-400, ПЭО-1500, гелевин; лекарственные средства - рекутан, этоний, фурацилин.

Лекарственные формы (растворы, мази, суппозитории, таблетки, аэрозоли) изготовляли в соответствии с требованиями ГФ XI.

, Совместимость мефопрана с ВВ изучали в зависимости от их природы: с жидкостями - по расслоению диспергированной в мешалке при 140 об/мин смеси в микробюретке, порошками - по

х

поглощению мефопрана (визуально и под микроскопом при 8 -кратном увеличении), мазевыми и суппозиторными основами - по расслоению и "выпотеванию" капель мефопрана и димефосфона (визуально и под микроскопом при 8*-кратном увеличении).

Количественное определение функционально-замещенных фосфонатов проводили спектрофотомегрически на СФ-46: мефопрана - при длине волны 475 нм после проведения гидроксамовой пробы, димефосфона - при длине волны 435 нм после реакции с 2, 4-динитрофенилгидразином. *

* Методики разработаны в ИОФХ им. А.Е.Арбузова РАН.

Наличие продуктов гидролиза мефопрана в растворах определяли методом тонкослойной хроматографии на пластинках "Силуфол"УЗ 254 и "Сорбфил": в качестве подвижной фазы использовали эта нол 96% и смесь этанол: хлороформ (1:1), проявителем служил 1 раствор нитрата серебра в смеси с 2% бромтимолового синего

Количественное содержание модельного лекарственного вещества - фурацилина - в диализате определяли фотоэлектроко-лометрически на ФЗК-2 при длине волны 450 нм.

Противовоспалительную активность мефопрана In vitro оценивали спектрофотометрически по его способности предотвращать термическую коагуляцию альбумина (Тринус Ф.П., Клебанов Б. И., Мохорт H.A., 1974).

Высвобождение лекарственного вещества изучали методом равновесного диализа в изотонический раствор натрия хлорида через подскорлуповую оболочку куриного яйца и через мышечнук стенку матки кролика. Микробную чистоту растворов мефопрана и пенных аэрозолей димефосфона определяли в соответствии с требованиями PS XI.

Антимикробную активность растворов мефопрана определяли совместно с асс. кафедры микробиологии Исхаковой Р.Г. в отношении следующих видов микроорганизмов: Staphylococcus aureus, Escherichia coll. Streptococcus pyogenes.

Определение микробной чистоты проводили на базе Республиканского Центра по контролю за производством и качеством лекарственных средств при содействии бактериолога Л.А.Гай-фуллиной.

Пенные аэрозоли с димефосфоном нарабатывали на базе НИИХТЛС (г.Харьков). Технологические характеристики пенных аэрозолей (смачивающую способность, плотность, тип выдачи.

Еремя жизни пен) изучали по методикам Башуры Г.С. (1978).

Эксперименты по оценке влияния растворов мефопрана и аэрозолей димефосфона на течение и исход острого кольпита (Кричковская Л.В.. 1989) у крыс проводили соответственно на '63 и 37 белых беспородных крысах, при этом использовали общепринятые методы клеточного анализа периферической крови и мазков из влагалищного содержимого. Ректальную температуру и вагинальную температуру животных измеряли на приборе ТПЭМ-1 (исследования выполнены совместно с кафедрой фармакологии и ЦНИЛ КГМУ при содействии асс. Зиганшиной Л. Е. ).. Результаты экспериментов обработаны статистически по ГФ XI.

ПОЛУЧЕНИЕ И БИОФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ РАСТВОРОВ МЕФОПРАНА ДЛЯ МЕСТНОГО ПРИМЕНЕНИЯ В ГИНЕКОЛОГИИ С целью выбора вида лекарственной формы мефопрана была изучена совместимость его с ВВ. Мефопран (бесцветная прозрачная жидкость со слабым характерным запахом) не поглощается ВВ, используемыми для производства вагинальных таблеток и таблеток, предназначенных для получения растворов (глюкоза, натрия хлорид, натрия тетраборат, кислота борная, геле-вин); "выпотевает" в виде капель из суппозиториев и мазей, приготовленных как на обезвоженных (вследствие гидролитической неустойчивости мефопрана) гидрофильных, так и на гидрофобных и абсорбированных основах (полиэтиленоксиды, масло какао, твердый жир кондитерский на основе пластифицированного саломаса, вазелин и его сплавы с ланолином); причем, добавление стабилизаторов - аэросила, эмульгатора Т-2. эмульсионных восков - не приводило к стабилизации системы.

Установлена растворимость мефопрана в воде (неограниченнс растворяется), рыбьем жире (1:5,37), винилине (1:4,46), подсолнечном масле (1:8,5), вазелиновом масле (1:72,92). Особенности физико-химических свойств мефопрана (несмешиваемость с рядом ВВ и гидролитическая неустойчивость) позволяет использовать его в гинекологии в форме экстемпорально изготовленных растворов.

Для выбора оптимального растворителя мефопрана было необходимо изучить фармацевтическую доступность ЛВ из растворов различного состава. Установлена способность мефопране растворять целлофан - традиционный материал для полупроницаемых мембран в биофармацевтических методиках, основанных на диализе. Это предопределило попытку апробирования в биофармацевтических исследованиях гинекологических - лекарственны?; форм подскорлупозой оболочки куриного яйца (ПОКЯ), представляющей собой двуслойную пергаментообразную мембрану толщиной 6,8±3,7 мкм, состоящую в основном из протеиновых волокон, переплетенных между собой и скрепленных цементирующим белковым веществом (Романов А.И., Романова А.И., 1952).

Изучено влияние мефопрана на пропускающую способность ПОКЯ. С этой целью свежепрепарированную ПОКЯ, выдержанную в 10%-ном растворе мефопрана в течение 1 часа, использовали для изучения высвобождения модельного лекарственного вещества - фурацилина из раствора (таблица 1).

Результаты проведенных исследований свидетельствуют об отсутствии достоверно значимой разницы между высвобождением фурацилина через ПОКЯ, обработанную и необработанную мефоп-раном.

Таблица 1

Влияние обработки мефопраном ПОКЯ на высвобождение фурацилина

N Количество фурацилина, перешедшее в Р

и/и Время, раствор через ПОКЯ. %

мин Интактная Мембрана, обрабо- t факт

мембрана танная 10 %-ным

раствором мефопрана

1 30 17,53 ± 5,92 13, 10 ± 3, 96 ~оГбТ""~

2 60 27,96 ± 6,74 21,67 i 5,68 0,72

3 90 37,38 ± 18,27 28, 80 ± 7, 00 0,45

4 120 46,30 + 7,47 36, 50 ± 7, 58 0,51

5 150 42,06 * 6,93 43, 00 ± 8, 96 0,50

6 180 47,60 * 7,19 46,10 ± 8, 09 0,63

t St =2,78

Изучено проникновение ЛВ через ПОКЯ и мышечную, стенку свежепрепарированной матки кролика. По методу наименьших квадратов рассчитаны параметры линейной зависимости между высвобождением мефопрана через ПОКЯ и матку кролика (табл.2) и коэффициенты корреляции. Отмечаемая при этом высокая корреляционная связь между высвобождением мефопрана через матку кролика и ПОКЯ (И от 0,984 до 0,998) позволяет использовать ПОКЯ для биофармацевтического изучения гинекологических лекарственных форм.

Таблица 2

Параметры линейной регрессии высвобождения мефопрана из растворов через подскорлуповую оболочку куриного яйца и матку кролика

Лекарственная ! Уравнение линейной регрессии при

форма МФП !_высвобождении мефопрана_

!через матку кролика ! через ПОКЯ

1% водный раствор!Y = 16,67 + О,1234Х !Y = 32,723 +- 0.8421Х

5% водный раствор!Y = 0,047 +- 0,036Х !Y = 0,417. + 0,1157-Х

1% р-р на рыбьем ! !

жиое !Y = 1,431 + О,0933Х !Y = 10,73 + О,1613Х

5% р-р на* рыбьем ! !

жире ! Y = 0,74 +■ 0,0201Х !Y = 0,041 + О, 0015Х

Изучено высвобождение мефопрана In vitro из водных

растворов различной концентрации (рис.1).

Установлено линейное высвобождение мефопрана из водных

растворов независимо от модели. При этом увеличение концентрации растворов мефопрана с 1% до 5% сопровождается снижением скорости его проникновения через обе модельные мембраны, по-видимому вследствие межмолекулярного взаимодействия как между молекулами мефопрана, так и между молекулами мефопрана и растворителя. Полученные результаты коррелируют с исследованиями Студенцовой И.А., Исмагилова В.Ш. (кафедра фармакологии КГМУ), установивших ту же зависимость - повышение эффективности 1%-ного раствора мефопрана по сравнению с 5%-ным на модели воспаления роговицы кролика.

Высвобождение мефопрана из водных растворов через ПОКЯ

О 1'0 20 " 36 £б Ш §0

Время высвобождения, мин

1 - высвобождение мефопрана из 1%-ного водного раствора

2 - высвобождение мефопрана из 2%-ного водного раствора

3 - высвобождение мефопрана из 5%-ного водного раствора

4 - высвобождение мефопрана из 10%-ного водного раствора

Рис. 1

Изучено высвобождение мефопрана из 1%-ных растворов в неводных вязких растворителях, широко применяемых в гинекологии - рыбьем жире, винилине, подсолнечном масле - и рассчитаны параметры линейной регрессии (рис.2, таблица 2).

В наибольшей степени мефопран высвобождается из раство-роз в рыбьем жире и масле подсолнечном.

- 13 -

Высвобождение мефопрана из 1%-ных неводных растворов

2

о 152бШ

1 - раствор в рыбьем жире

2 - раствор в масле подсолнечном

3 - раствор в винилине

Рис. 2

Б0 go-Время, мин

Для выбора оптимальной концентрации и вида носителя мефопрана в растворе использовали метод математического планирования эксперимента - построение плана латинского квадрата 3 х 3. Установлено существенное влияние вида растворителя и концентрации растворов мефопрана на степень его высвобождения с преимущественным высвобождением из 1%-ных растворов в воде и рыбьем жире.

Особую значимость для растворов гинекологического назначения представляет наличие противомикробной активности в отношении патогенной микрофлоры, обусловленной лекарственным веществом, а в лучшем случае и его носителем.

Исследование антимикробной активности 1%-, 2%-, 5%-ных растворов мефопрана в воде, рыбьем жире, подсолнечном масле в отношении Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Escherichia coll показало наибольшую выраженность противо-микробного действия у растворов мефопрана всех исследуемых концентраций, приготовленных на рыбьем жире.

Определение микробной чистоты 1%- и 5%-ных растворов мефопрана на воде и рыбьем жире, изготовленных в условиях аптеки и хранившихся при комнатной температуре, проводилось в течение 10 дней при ежедневном посеве на питательный агар, среды Эндо и Сабуро. Было установлено полное отсутствие роста микроорганизмов в исследуемых образцах.

Изучение гидролитической стабильности 1%-ных водных растворов, хранившихся при комнатной температуре, проводили методом тонкослойной хроматографии на пластинках "Силуфол" УФ-254 и "Сорбфил" (рис.3). На хроматограммах обнаружены пятна продукта гидролиза мефопрана с Г ~0, 72 у раствора, хранившегося в течение 3-х лет (полностью гидролизованный раствор). Свежеприготовленный раствор мефопрана пятен продуктов гидролиза не давал. В процессе хранения 1%-ного раствора мефопрана при комнатной температуре на 12 день хранения Хроматограммы мефопрана в процессе хранения

О

© G>©

О

© 0 ©

О

О

© О 0

о

о

© о ©

I II III IV

I - хроматограмма на 1 день хранения раствора мефопрана

II - хроматограмма на 10 день хранения раствора мефопрана

III - хроматограмма на 12 день хранения раствора мефопрана

IV - хроматограмма на 30 день хранения таствора мефопрана

1 - 1%-ный раствор мефопрана, срок хранения 3 года

2 - субстанция мефопрана

3 - исследуемый оаствор мефопрана

Рис. 3

появляется пятно с R f~0,51 промежуточного продукта гидролиза мефопрана. По мере хранения раствора мефопрана R f пятна меняется, что свидетельствует о дальнейшем углублении процесса гидролиза.

При определении сроков годности растворов мефопрана была использована отмечаемая в литературе ( Тринус Ф. П., Клебанов Б.Ш., Мохорт H.A., 1974 ) корреляция между способностью вещества предотвращать термическую коагуляцию белка и наличием противовоспалительной активности. Было установлено, что свежеприготовленные растворы мефопрана проявляют защитное действие в 0,0002%-0,002%-ной концентрации. По истечении 10 дней хранения растворов их способность предупреждать тепловую денатурацию белка резко снижается, независимо от концентрации мефопрана в растворе, а после 20 дней хранения полностью нивелируется (рис.4). На основании проведенных исследований рекомендуемый срок хранения растворов мефопрана - 10 дней.

Торможение тепловой денатурации белка в процессе хранения растворов мефопрана при +4° С

у 00

§ 80-КЗ

ь*

53

§ 40-^ 20'

£

ннФэ

I

■I

i I.

§

!

* - р< С,С5 i

ш

О 0,105% 0,021% 10,5 10% 2,110%

т- свежеприготовленный р-р "я - р-р на 15 день хранения р-р на 5 день хранения пт- р-р на 20 день хранения р-р на 10 день хранения р-р на 30 день хранения

Рис.4

- 16 -

Ежедневная оценка количественного содержания мефопрана в 1%- и 5%-ных водных и масляных растворах в процессе хранения при различных температурах ( +4°, +18°, +37° С) и анализ рН показали снижение концентрации мефопрана в растворах в процессе хранения.

Возможность местного применения растворов мефопрана для лечения воспалительных заболезаний гениталий изучалась на модели формалинового кольпита у крыс. В качестве препаратов сравнения были выбраны 0,555-ный раствор этония, обладающий противомикробным действием, и рекутан - галеновый препарат из ромашки, сочетающий ранозаживляющий и противовоспалительный эффекты.

Местное лечение кольпита у крыс различными препаратами с помощью ежедневно меняемых тампонов способствовало уменьшению воспалительного процесса. Наиболее благоприятные изменения, выражавшиеся в нормализации показателей периферической крози, ректальной и вагинальной температуры были получены при применении 1%-ного раствора мефопрана на рыбьем жире. Выздоровление в этом случае наступало на И ¿0,5 день, осложнения возникали в 14% случаев. Использование 1%-ного водного раствора мефопрана и растворов рекутана и этония приводило к возникновению осложнений в 29%, 43%, 14% случаев соответственно. При использовании 5%-ного раствора мефопрана на рыбьем жире выздоровление затягивалось, воспаление переходило в хроническую форму, в большинстве случаев сопровождаясь осложнениями.

Результаты проведенных экспериментов предполагают возможность использования 1%-ных растворов мефопрана в рыбьем

жире и воде в качестве нового лечебного средства для лечения воспалительных заболеваний женских половых органов. РАЗРАБОТКА И БИОФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

ПЕННОГО АЭРОЗОЛЯ ДИМЕФОСФОНА Пенные аэрозоли перспективны для местного применения в гинекологии, однако использование мефопрана в данной лекарственной форме затруднено вследствие его гидролитической нестабильности. Что касается внедренного в медицинскую практику димефосфона, то он характеризуется по сравнению с мефопраном при несколько меньшем спектре действия большей гидролитической устойчивостью.

При разработке состава пенного аэрозоля с димефосфоном были проведены исследования по Еыбору вспомогательных веществ с использованием в качестве критериев показателей совместимости их с ФСС и качества получаемых пен (составы аэрозолей, в т.ч. аэрозолей-плацебо, приведены в таблице 3).

Таблица 3

Состав пенных аэрозолей

N N образца Димефос-фон, % Пенообразующие вспомогательные в-ва, % ! Растворитель, % Хла-дон-.12

! Вода Высшие!Глице-спирты! рин С 16- ! С 21 !

0С-20 Твин-80 Сульфо-этокси-лат !

1 — 4, 0 _ _ 177, 2 2,5 8,0 8,3

2 - - 4, 0 - 177, 2 2,5 8,0 8.3

3 - - - 4, 0 ! 77,2 2,5 8,0 8,3

4 1, о 4, 0 - - ! 76, 2 2,5 8,0 8,3

5 5,0 4,0 - - 172,2 2,5 8,0 8,3

6 10, 0 4, 0 - - ! 67,2 2,5 8,0 8,3

7 15, 0 4, 0 - - ! 62,2 2,5 8.0 8,3

8 1,0 - 4,0 - ! 76,2 2,5 8,0 8,3

9 5, 0 - 4,0 - ! 72,2 2,5 8,0 8,3

10 10, 0 - 4.0 - ! 67, 2 2,5 8,0 8,3

11 15, 0 - 4,0 - ! 62,2 2,5 8,0 8,3

12 5, 0 - - 4,00 ! 72,2 2,5 8,0 8,3

13 10,0 - - 4,00 167,2 2,5 8,0 8,3

В результате изучения технологических характеристик для дальнейшего изучения отобраны составы NN 4-7, содержащие в качестве пенообразователя 0С-20 и обеспечивающие образование мелкоячеистой пены, оптимальной в отношении смачивающей способности и времени жизни пен. Аэрозоли получали по технологической схеме, представленной на рис.5.

Технологическая схема производства пенного аэрозоля димефосфона

ТП-1 Изготовление концентрата Эмульгатор >~Отвеиивание

Высшие спирты--—Нагревание

Вода очищенная-Эмульгирование

Охлаждение

Глицерин - —-*••'* Отвешивание

Димефосфон --—" ' Смешение

ТП-2 Наполнение концентратом баллона!

Хладон-12

ТП-3

Контроль и оценка качества

ТП-4 - Упаковка и маркировка готовой продукции

Дозирование

Вакуумирование

Герметизация

-> Дозирование

^ Качественный и количественный анализ Проверка герметичности баллонов

■ Бракерак

звка_

"Готовый продукт^

Упаковка и маркировка—\ — — ---- — -------1

Рис. 5

При изучении высвобождения ЛВ из аэрозолей в качестве модельной мембраны использовали ПОКЯ, т.к. димефосфон, как и мефопран, растворяет целлофановую мембрану.

С целью исключения возможного воздействия димефосфона на ПОКЯ и изменение ее проникающей способности изучали высвобождение модельного ЛВ - фурацилина - из водного раст-

вора через свежепрепарированную и выдержанную в течение 1 часа в 15%-ном водном растворе димефосфона ПОКЯ. Результаты, представленные в таблице 4, свидетельствуют об отсутствии влияния димефосфона на пропускающую способность ПОКЯ и позволяют использовать ее для изучения высвобождения димефосфона из лекарственных форм.

Таблица 4

Влияние обработки димефосфоном ПОКЯ на высвобождение

фурацилина

Продолжительность экспозиции, ч Количество фурацилина, прошедшее чеоез ПОКЯ в диализат (в % от исходного') Р<0,05 t ф

Интактная ! Обработанная ПОКЯ ! димефосфоном ПОКЯ

0,5 1 1,5 2 24 6,55+2,87 15,78±3, 73 22,81±4,15 32,44±8,14 46,13±8, 24 5,22±1,87 15,13±2,42 22,79±4,55 32,70±5, 48 44, 30±6, 28 0,38 0,14 0,003 0,03 0,17

г эг = 4, з

Наблюдение за пенными аэрозолями димефосфона в течение 2-х лет хранения при комнатной температуре по критериям: тип Еыдачи пень;, внешний вид, смачивающая способность, время жизни пены, подлинность, количественное содержание димефосфона, величина рН позволили сделать заключение о стабильности лекарственной формы. Кроме того, выявлена микробиологическая чистота всех образцов аэрозоля после 18-ти месячного хранения, обусловленная антисептическим действием димефосфона, что позволяет не включать консерванты в состав пенного аэрозоля.

Результаты экспериментов по изучению высвобождения димефосфона через ПОКЯ из пенного аэрозоля, представленные в таблице 5, показали замедленное высвобождение лекарственного

вещества по сравнению с официнальными растворами той не концентрации.

Таблица 5

Высвобождение димефосфона из лекарственных форм через подскорлуповую оболочку куриного яйца

Продолжительность экспозиции, час

Количество димефосфона, прошедшее через ПОКЯ в диализат, в % к исходному уровню

Из водного раствора С15%)!Из пенного аэрозоля (15%;

0,25

0.45,

1, 50

2, 00 3, 00

24, 00

31.98*17,23 46,56±10,95 46, 88±11,53 55,65± 6.71 55,94± 5,18 59, 27± 0,47

5, 70±6,15 9,50±4,05 10, 75±2, 80 13,22±2,10 16,56±0,13 43, 19±0, 26

Терапевтическая эффективность пенных аэрозолей димефосфона различных концентраций (1%. 5%, 10%, 15%) была изучена на модели формалинового кольпита у крыс с использованием в качестве референс-препарата пенного аэрозоля "Гипо-золь", содержащего метилурацил, облепиховое масло и эта-зол-натрия. Наилучшие результаты были получены при использовании пенного аэрозоля с концентрацией димефосфона 1% с нормализацией показателей крови и выздоровлением животных на 13 сутки (осложнения - 33,33%). Лечение же крыс пенными аэрозолями с концентрацией димефосфона 5% и 10% завершалось выздоровлением животных на 15 сутки от начала лечения при том же числе осложнений. В то же время лечение крыс референс-препа-ратом приводило к их выздоровлению на 16 сутки при 50% осложнений, причем, высокий лейкоцитоз наблюдался до 10 дня лечения. При лечении животных контрольной группы -осложнения имели место в 83, 3% случаях, воспаление переходило в хроническую форму, либо приводило к образованию влагалищно-прямо-

кишечных свищей.

' Полученные результаты явились основанием для рекомендации 1%-ного аэрозоля димефосфона к внедрению в медицинскую практику для применения в гинекологии.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. На основании технологических, биофармацевтических, микробиологических, фармакологических исследований созданы лекарственные формы малотоксичных фосфороорганических соединений для применения в гинекологии: мефопрана - водный и масляный раствор, димефосфона - пенный аэрозоль.

2. Установлено, что традиционный материал диализной мембраны - целлофан - растворяется при контакте с мефопра-ном и димефосфоном. В качестве диализной мембраны подобрана подскорлуповая оболочка куриного яйца, которая оказалась пригодна для биофармацевтического изучения вагинальных лекарственных форм по показателям скорости высвобождения и фармацевтической доступности.

3. Методом корреляционного анализа установлено наличие прямой зависимости между высвобождением мефопрана из растворов через изолированную матку кролика и подскорлуповую оболочку куриного яйца.

4. С использованием метода математического планирования эксперимента выявлено существенное влияние природы растворителя и концентрации раствора мефопрана на его фармацевтическую доступность: при увеличении концентрации раствора мефопрана высвобождение уменьшается. Использование полярных растворителей также приводит к повышению высвобождения мефопрана из растворов.

- 22 -

5. Установлено, что растворы мефопрана на рыбьем жире проявляют антимикробную активность в отношении Staphylococcus aureus. Streptococcus pyogenes и Escherichia coli; водные растворы мефопрана проявляют антимикробную активность в отношении Streptococcus pyogenes при 72-часовом контакте с культурой микроорганизмов; при использовании подсолнечного масла в качестве растворителя мефопрана наблюдается замедление роста изучаемых микроорганизмов.

6. При хранении растворов мефопрана наблюдается увеличение показателя термической коагуляции белка, что соответствует снижению защитного действия мефопрана. Изменение показателей термической коагуляции белка соответствует изменению физико-химических характеристик раствора (повышение концентрации продуктов гидролиза, появление дополнительных пятен на хроматограмме). В связи с этим впервые предложен тест оценки стабильности растворов мефопрана по сохранению ими способности замедлять термическую коагуляцию белка как критерий сохранения противовоспалительной активности.

7. На модели формалинового кольпита у крыс по показателям: дню заживления, ректальной и вагинальной температурам, нормализации показателей периферической крови (СОЭ, лейкоцитов, эритроцитов), мазка из влагалищного содержимого - обоснована оптимальная концентрация растворов мефопрана - 1%.

8. В результате изучения технологических характеристик пенных аэрозолей (типа выдачи пены, плотности пены, смачивающей способности пены, времени жизни пены) с димефосфоном выявлен оптимальный пенообразователь - 0С-20.

- 23 -

9. На основе микробиологических исследований доказана возможность производства пенного аэрозоля димефосфона без консерванта.

10. На основе изучения фармакологического действия пенного аэрозоля димефосфона по показателям дня заживления формалинового кольпита, нормализации показателей периферической крови (снижение лейкоцитоза, СОЭ) установлено, что оптимальная концентрация димефосфона в аэрозоле - 1%.

11. Предложена технология производства пенных аэрозолей димефосфона и водных и масляных растворов мефопрана. Составлены методические указания по приготовлению водных и масляных растворов мефопрана в условиях аптек, технология апробирована в Татарском Республиканском Центре по контролю за производством и качеством лекарств. Фрагменты работы внедрены в учебный процесс на кафедрах технологии лекарств Казанского медуниверситета, Пермского фарминститута, Алтайского мединститута. Тюменского мединститута. Ярославского мединститута и на кафедрэ аптечной технологии лекарств Украинской фармацевтической академии.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Егорова С.Н., Камаева С.С. Обоснование состава основы вагинальных суппозиториев препарата N 1 по критерию температуры плавления /Казань: Казан.мед.ин-т, 1991.-Деп. во ВНИИМИ 6.12.92, N Д-21950.-ЗС.

2. Егорова С.Н., Камаева С.С. Обоснование концентрации и вида носителя мефопрана в жидкой лекарственной форме методом математического планирования эксперимента /Казань: Ка-

зан. мед. ИН-Т, 1992.- Деп. ВО ВНИИМИ 24.И.92, N Д-22913. -7с.

3. Исследования кафедры технологии лекарств Казанской мединститута по созданию новых лекарственных препаратов /По-целуева Л.А., Егорова С.Н., Меркурьева Г.Ю., Мустафин Р.И., Камаева С. С. // Проблемы фармации, подготовки и использования провизорских кадров: Материалы респ.науч.конф.- Пятигорск, 1993.- С.113-114.

4. Егорова С.Н., Зиганшина Л.Е., Камаева С.С. О возможности использования пенного аэрозоля димефосфона для местного применения в гинекологии //Современные методы диагностик] и лечения: Материалы регион.научно-практ.конф..-Кеизань-Тегю-ШИ, 1993.- С.17-18.

5. Егорова С.Н., Зиганшина Л.Е., Камаева С.С. Использование подскорлуповой оболочки в качестве модельной мембран: для биофармацевтического изучения вагинальных лекарственны форм //Фармация и фармакология: Материалы научно-практ конф. - Пермь, 1993.- С. 87.

6. Обоснование возможности использования подскорлупово оболочки в качестве диализной мембраны для оценки высвобож дения мефопрана и димефосфона /Поцелуева Л.А., Егорова С.Н Чабаненко Е.А., Камаева С.е.. //Актуальные проблемы фармаце тической технологии: Материалы юбилейной научной конф.- М. 1994.- Сб.науч.трудов НИИ фармации.- Т.XXXII,- С.86-88.

7. Тест оценки стабильности противовоспалительных пре паратов / Поцелуева Л.А., Егорова С.Н., Камаева С. С., Зигак шина Л.Е. //Решение актуальных задач фармации на современнс этапе: Тезисы докладов научной конференции, поев. 50-лета НИИ .фармации, Москва, 1994.-С.135.

8. Egorova S.N.. Kamaeva S.S. The Use of Hen Egg Under-lell Cover for Blopharmaceutical Research of Gynaecological •ug Forms /Importance and influence of Harmonization of ;andards on Industrial pharmacy: Programme, lecture and ister Abstracts of 7-th IPTS, -Ancara-Turkey. 1994.-P.45.

Тодписано к печати 15. 02. t-Зумага тшкмрафская

Формат 60x90/16 Печать офсетная Заказ V Ь Бутлерова, 49

/сл.печ.л. I, ^

Тираж (00

Зфсетшлй участок КГМУ, Казань,