Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Современные подходы к оценке качества лекарственных препаратов, содержащих эфирные масла и терпеноиды эфирных масел, на примере ромашки аптечной цветков

На правах рукописи

/

УАНКПО Сегбехин Бие Берже

WЛNKPO Sëgbehm В1е Berger

СОВРЕМЕННЫЕ ПОДХОДЫ К ОЦЕНКЕ КАЧЕСТВА ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ, СОДЕРЖАЩИХ ЭФИРНЫЕ МАСЛА И ТЕРПЕНОИДЫ ЭФИРНЫХ МАСЕЛ, НА ПРИМЕРЕ РОМАШКИ АПТЕЧНОЙ ЦВЕТКОВ

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ Диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Санкт-Петерб}. ООЭ45 1Б5Э 2008

003451659

Диссертационная работа выполнена на кафедре фармацевтической химии ГОУ ВПО Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Российской Федерации.

Научный руководитель:

Доктор фармацевтических наук профессор Саканян Елена Ивановна

Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук профессор Буданцев Андрей Львович

Кандидат фармацевтических наук Смирнова Ирина Геннадьевна

Ведущая организация:

Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) Российской академии сельскохозяйственных наук (РАСХН).

Защита диссертации состоится « 25 » ноября 2008 г. в 17 часов на заседании диссертационного совета Д 208.088.01 при ГОУ ВПО Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия по адресу: 197376, Санкт-Петербург, ул. проф. Попова, д. 14.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке академии по адресу: 197227, Санкт-Петербург, пр. Испытателей, д. 14. лит. Б.

Автореферат разослан « 24 » октября 2008 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат фармацевтических наук

Марченко Н. В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

В настоящее время на мировом рынке фармацевтических препаратов доля средств растительного происхождения составляет около 40 %, причем, в последние годы наметилась устойчивая тенденция к ее увеличению.

Среди групп лекарственного растительного сырья (ЛРС), содержащих различные биологически активные вещества, лидирующее положение занимают эфирномасличные растения.

Так, из 326 видов лекарственного растительного сырья, включенных в Государственный Реестр лекарственных средств РФ, на долю эфирномасличного приходится около 19 %.

Общеизвестно, что важнейшим вопросом при создании фитопрепаратов является стандартизация и повышение уровня объективной оценки их качества.

Однако необходимо признать, что в связи с разнородностью и многокомпонентностью состава эфирных масел, вопросы стандартизации фитопрепаратов на их основе до настоящего времени, в большинстве случаев, остаются открытыми. Эта задача может быть решена только при использовании в анализе лекарственного растительного сырья и лекарственных средств, содержащих эфирные масла, стандартных образцов терпеноидной природы, т.е. основного класса действующих веществ, входящих в состав как исходного сырья, так и готового лекарственного средства.

К числу наиболее широко представленных на зарубежном и отечественном фармацевтическом рынке видов эфирномасличного лекарственного растительного сырья следует отнести ромашки аптечной цветки, которые издавна применяются в медицинской практике в качестве противовоспалительного лекарственного средства или служат сырьем для получения сборов, экстрактов и других лекарственных средств.

Анализ действующей нормативной документации показал, что стандартизация этого лекарственного растительного сырья осуществляется по количественному содержанию эфирного масла без учета его компонентного состава, что впоследствии создает определенные сложности при стандартизации препаратов, получаемых на его основе. '

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Российской Федерации.

Целью настоящего диссертационного исследования является обоснование и разработка современных подходов к оценке качества эфирномасличного растительного сырья и лекарственных средств на его основе, на примере лекарственного растительного сырья "Ромашки аптечной цветки" - "Chamomilla recutita flores", сем. Астровых - Asteraceae L. Задачи исследования

1. Провести анализ современного состояния использования эфирномасличного лекарственного растительного сырья и препаратов на его основе и требований, предъявляемых к их качеству.

2. Получить и провести сравнительный анализ эфирных масел ромашки аптечной цветков и возможных примесей к этому ЛРС по качественному и количественному компонентному составу.

3. Осуществить выбор компонента эфирного масла ромашки аптечной цветков, предназначенного к использованию в качестве стандартного образца.

4. Предложить способ получения стандартного образца терпеноидной природы, определить его основные показатели качества и создать проекты нормативной документации на стандартный образец.

5. Разработать методы стандартизации ромашки аптечной цветков, эфирного масла и лекарственных средств их содержащих с использованием стандартного образца терпеноидной природы.

6. Разработать проекты "Изменений и дополнений" к существующей нормативной документации на лекарственное растительное сырье "Ромашки аптечной цветки" и общей фармакопейной статье "Масла эфирные". Научная новизна

Впервые изучен качественный и количественный компонентный состав, не только эфирного масла ромашки аптечной цветков, но и возможных к ней примесей. Установлено, что терпеноидный состав эфирного масла ромашки аптечной цветков

представлен не менее чем 30 соединениями, эфирного масла ромашки душистой цветков, пупавки полевой цветков и ромашки нспахучей цветков - не менее чем 20 соединениями. При этом только в эфирном масле ромашки аптечной цветков обнаружены производные азулена, в частности, хамазулен и спатчуленол.

На основании проведенных исследований, установлено, что для стандартизации ромашки аптечной цветков, эфирного масла и лекарственных средств на их основе, целесообразно использовать в качестве стандартного образца гвайазулен.

Предложена схема получения стандартного образца из гвайазулена технического и определены показатели его качества.

Впервые разработаны методики, позволяющие, используя стандартный образец гвайазулена, проводить оценку качества, как исходного эфирномасличного сырья, так и лекарственных средств на его основе.

Практическая значимость и уровень внедрения работы Практическая значимость диссертационного исследования заключается в том, что результаты были использованы при составлении проектов следующих документов:

- Проект ФС на гвайазулен - стандартный образец;

- Проект "Изменений и дополнений" к фармакопейной статье "Ромашки аптечной цветки" по показателям "Подлинность", "Числовые показатели", "Количественное определение";

- Проект "Изменений и дополнений" к общей фармакопейной статье "Масла эфирные" по разделам "Подлинность" и "Количественное определение".

Материалы включены в курс лекции по фармацевтической химии по разделам "Терпеноиды" и "Физико-химические методы анализа лекарственных средств природного происхождения" (Акт о внедрении).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Результаты сравнительной качественной и количественной оценки компонентного состава эфирных масел ромашки аптечной цветков, ромашки душистой цветков, пупавки полевой цветков и ромашки непахучей цветков.

2. Показатели качества стандартного образца гвайазулена и методики их оценки.

3. Методики оценки качества ЛРС "Ромашки аптечной цветки" и эфирного масла ромашки аптечной цветков с использованием стандартного образца гвайазулена.

4. Методики оценки качества лекарственных средств, содержащих ромашки аптечной цветки, с использованием стандартного образца гвайазулена.

5. Проекты нормативной документации на гвайазулен - стандартный образец, изменения и дополнения к существующей нормативной документации на ЛРС "Ромашки аптечной цветки" и ОФС «Масла эфирные».

Апробация работы

Основные положения работы доложены на Региональной научно-практической конференции с международным участием "Достижения, проблемы и перспективы фармацевтической науки и практики" (Курск, 2006), конгрессе "Традиционная медицина - 2007" (Москва, 2007), 62-ой и 63-ой научной конференции по фармации и фармакологии "Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции" (Пятигорск, 2007, 2008), региональной научной конференции студентов и аспирантов «Молодые ученые - практическому здравоохранению» (Санкт-Петербург, 2007), научно-практической конференции «Фармация из века в век» (Санкт-Петербург, 2008).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 8 научных работ.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, 4 глав экспериментальных исследований, выводов, списка литературы и приложений. Работа изложена на 132 страницах машинописного текста, содержит 45 таблиц, 36 рисунков.

Библиографический указатель включает 130 источников литературы, из них 70 на иностранных языках.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Глава 1. Обзор литературы

В этой главе изложены общие сведения о состоянии использования лекарственных препаратов, содержащих эфирномасличное сырье, эфирные масла и требований, предъявляемых к их качеству.

Представлен обзор литературных данных об опыте применения эфирномасличного растительного сырья и контроле его качества в сравнении с требованиями, предъявляемыми зарубежной нормативной документацией по отношению, в частности, к ромашки аптечной цветкам - Chamomillae recutitae L. Flores, и сведения о введении и применении стандартных образцов в мировой практике фармацевтического анализа.

Дана общая характеристика Chamomilla recutita L., ЛРС "Ромашки аптечной цветки", обобщены сведения о химическом составе эфирного масла ромашки аптечной цветков и препаратов на их основе. Изложены подходы к анализу терпеноидных соединений и эфирных масел с использованием современных физико-химических методов анализа.

Глава 2. Материалы и методы исследования В настоящей главе описываются использованные методы и методики, приборы, хроматографические системы, сорбенты и реактивы, стандартные образцы.

Объектами исследований служили:

- ЛРС "Ромашки аптечной цветки - Chamomilla recutita L. flores", "Ромашки душистой цветки - Chamomilla suaveolens L. flores";

- Растительное сырье цветки пупавки полевой - flores Anthémis arvensis L., цветки ромашки непахучей - flores Matricaria inodora L.;

- Лекарственные средства «Ромашки аптечной цветки - Chamomilla recutita L. flores», «Сбор грудной № 4», «Ромазулан», «Рекутан»;

- Образцы эфирных масел, полученные из изучаемых видов растительного сырья;

- Образцы спиртовых и спирто-водных извлечений из изучаемых видов растительного сырья и лекарственных средств «Ромашки аптечной цветки», «Сбор грудной № 4».

Отбор проб, анализ растительного сырья и оценку качества эфирных масел проводили по методикам ГФ XI изд.

Анализ эфирных масел, спиртовых и спирто-водных извлечений проводили методами тонкослойной хроматографии на пластинках "Silufol UV-254" и "Sorbfil ПТСХ-П-А-УФ", ГЖХ с хромато-масс-спектрометрическим детектированием (ГХ-

МС) на газовом хроматографе НР-5890 с масс-селективным детектором НР-5972 "Hewlett-Packard" с базами масс-спектральной информации WILEY 275, NIST 98.L и NBS 75 K.L.

Высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ) проводили, используя микроколоночный жидкостный хроматограф "Милихром А-02" с колонкой "Silasorb SPH С18".

УФ- спектры регистрировали на спектрофотометре СФ-2000; ИК- спектры - в дисках калия бромида на ИК-Фурье-спектрометре ФСМ-1201; 'Н- и С-ЯМР-спектры - в дейтерохлороформе на спектрометре АМ-500 "Bruker" ( 500 МГц); масс-спектры - на масс-спектрометре НР-5972.

Гвайазулен - стандартный образец получали путём очистки образца гвайазулена технического методом колоночной хроматографии низкого давления.

Показатели качества стандартного образца определяли в соответствии с требованиями ОСТ 91500.05.001-00 "Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения" и рекомендациями ВОЗ и ICH, а также на основании анализа существующей нормативной документации на стандартные образцы по следующим показателям: описание, растворимость, температура плавления, подлинность (УФ-, ИК-, 'Н- и 13С-ЯМР-спектроскопия, удельный показатель поглощения, ВЭЖХ; ГЖХ), чистота (посторонние примеси (ВЭЖХ), вода (титрование по К.Фишеру), остаточные органические растворители (ГЖХ)), количественное определение (ВЭЖХ, ГЖХ).

Микробиологические исследования проводили по методикам и в соответствии с требованиями статьи "Методы микробиологического контроля лекарственных средств" ГФ XI изд. и изм. № 3 от 19.03.2003 г.

Статистическую обработку, результатов и валидационную оценку методик проводили в соответствии с требованиями ГФ XI изд., (вып.1, с. 199) и ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

Глава 3. Сравнительное изучение компонентного состава и антимикробной активности эфирных масел ромашки аптечной цветков, ромашки душистой цветков, пупавки полевой цветков и ромашки нснахучей цветков

Приведены результаты исследований, проведенных с целью выбора основных компонентов эфирного масла для оценки качества ЛРС и эфирного масла ромашки аптечной цветков.

Определение количественного содержания эфирного масла в растительном сырье

Прежде всего, были изучены товароведческие показатели заготовленного растительного сырья "Ромашки аптечной цветки" и примесей - "Ромашки душистой цветки", "Цветки пупавки полевой", "Цветки ромашки непахучей".

Количественное определение эфирного масла в исследуемых объектах проводили в соответствии с требованиями ГФ XI изд. вып. 2 ст. 7. Результаты представлены в табл.1.

Таблица 1 - Результаты определения содержания эфирного масла в анализируемых

объектах (п=5, Р > 95%)

Наименование растительного сырья Содержание эфирного масла, % Внешний вид

Ромашки аптечной цветки 0,57 ±0,04 тсмно-синий

Ромашки душистой цветки 0,40 ±0,12 зеленый

Пупавки полевой цветки 0,31 ±0,07 светло-желтый

Ромашки непахучей цветки 0,41 ±0,13 светло-зеленый

Анализ данных табл. 1 свидетельствует о том, что максимальное содержание эфирного масла обнаружено в ромашки аптечной цветках и составляет в среднем 0,57 %, а минимальное содержание - в пупавки полевой цветках в среднем - 0,31 %. Содержание эфирного масла в цветках ромашки душистой и цветках ромашки непахучей составляет в среднем по 0,40 %.

Эфирное масло ромашки аптечной цветков отличается интенсивной темно-синей окраской, что может быть обусловлено различием компонентного состава эфирных масел.

Определение физико-химических характеристик эфирных масел Для полученных образцов эфирных масел, в соответствии с требованиями ОФС «Масла эфирные», определяли основные физико-химические характеристики (табл.2).

Таблица 2 - Результаты определения физико-химических показателей эфирных

масел (п=5, Р>95%).

Физико-химические показатели

Наименование эфирного масла

Ромашки аптечной цветков

Ромашки душистой цветков

Пупавки полевой цветков

Ромашки непахучей цветков

Плотность при 20°С

0,962 - 0,970

0,941 - 0,952

0,937 - 0,950

0,947 - 0,960

Показатель преломления при 20°С

1,5220- 1,5330

1,4280- 1,4570

1,4960- 1,5110

1,5115- 1,5300

Кислотное число

5,2-12,5

11,7-15,3

4,1-7,1

25,4 - 30,8

Эфирное число

6,1 - 12,0

24,9-38,1

25,9-34,1

37,5-45,3

Анализ данных, представленных в табл. 2 позволяет сделать заключение о том, что физико-химические показатели можно использовать лишь для предварительной идентификации и оценки качества, так как они не отражают изменений компонентного состава и не позволяют различать эфирные масла.

В связи с этим, нами проведено сравнительное изучение компонентного состава эфирных масел анализируемых образцов растительного сырья.

Исследования состава эфирных масел методом газожидкостной хроматографии

Идентификацию компонентов проводили по масс-спектрам электронного удара, фиксируя следующие показатели: названия соединений, времена удерживания, величины количественного вклада в смесь, индекс сходства (Match quality) библиотечного и полученного спектров. Полученные результаты представлены на рис. 1 и в табл. 3

2 2**07 Лт-QT

i 1

1 Г

t

i

аоооооо

409Q0OQ •<000000 яооооао

i

г

Ny~jÍ_

1

L

20.00 2S.OO ÜOOO 3Q.<

Рис. 1 - Фрагмент ГЖ-хроматограммы эфирного масла ромашки аптечной цветков Условные обозначения: 1- Р-фарнезен; 2 - спатчуленол; 3 - 2-[5-метил-5-(4-метилциклогекс-3-ен-1-ил)тетрагидрофуран-2-ил]пропан-2-ол; 4 - (-)-а-бисаболол, 5 - бисаболона оксид; 6 - хамазулен; 7 - (-)-а-бисаболола оксид (А); В -гексагидрофарнезилацетон; 9 - (2^)-9,12-октадекадиеновая кислота; 10 -трикозан; 11 - пентакозан

В аналогичных условиях были получены ГЖ-хроматограммы для всех изучаемых видов эфирных масел.

Анализ хроматограмм свидетельствует о том, что терпеноидный состав эфирного масла ромашки аптечной цветков представлен не менее чем 30 соединениями моно- и сесквитерпеноидной природы. При этом количественное содержание отдельных компонентов варьирует от 0,07 до 28,01 %. В состав эфирного масла ромашки душистой цветков входит не менее 20 соединений моно- и сесквитерпеноидной природы. Содержание отдельных компонентов варьирует от 0,08 до 20,40 %. В состав эфирного масла пупавки полевой цветков входит не менее 20 соединений моно- и сесквитерпеноидной природы. При этом содержание отдельных компонентов варьирует от 0,07 до 9,85 %. В состав эфирного масла ромашки непахучей цветков входит не менее 20 соединений моно- и сесквитерпеноидной природы. Количественное содержание отдельных компонентов варьирует от 0,83 до 7,34 %.

Анализ данных представленных в табл. 3 свидетельствует о том, что превалирующими компонентами эфирного масла ромашки аптечной цветков являются соединения сесквитерпенового ряда - оксиды бисаболола и бисаболона, а-бисаболол, хамазулен и спатчуленол.

Таблица 3 - Результаты определения компонентного состава эфирных масел (п=5. Р>95%).

Основные компоненты эфирного масла, %

Ромашки аптечной цветков Ромашки душистой цветков Пупавки полевой цветков Ромашки непахучей цветков

(-)-а-бисаболола оксид (А) 28,01 ±1,88 а- и Р-фарнезен 35,43 ±0,82 а-фарнезен 12,47 ±0,12 Р-фарнезен 9,85 ±0,09

2-[5-метил-5-(4-метилциклогекс-3-ен-1 -ил)-тетрагидрофуран-2-ил]-пропан-2-ол 18,71 ± 1,44 а-пинен 5,71 ±0,18 Копаенол 9,85 ±0,09 (-)-а-бисаболола оксид (А и Б) 15,04± 0,29

Бисаболона оксид 14,27 ±0,73 Мирцен 5,40 ±0,09 Бисаболона оксид 8,67 ±0,47 Октакозан 4,42 ±0,36

(-)-а-бисаболол 10,78 ±0,80 (-)-а-бисаболол оксид (А и Б) 10,23±0,33 а-бисаболон 5,12 ±0,12 Фарнезол 4,25 ±0,08

Хамазулен 5,37+0,37 Лимонен 4,69 ± 0,78 Пентакозан 3,54 ±0,43 Артемизия кетон 3,29 ±0,24

Спатчуленол 3,16 ±0,12 Фарнезол 2,57 ±0,05 Фарнезол 3,21 ±0,05 Р-пинен 2,81 ±0,14

Для эфирного масла ромашки душистой цветков превалирующими компонентами являются соединения сесквитерпенового ряда - а- и Р-фарнезен, оксиды бисаболола и др.; эфирного масла пупавки полевой цветков -сесквитерпеновые соединения - а-фарнезен, бисаболона оксид, копаенол, фарнезол, а-бисаболон; ромашки непахучей цветков - сесквитерпеновые соединения, такие как оксиды бисаболола А и В, транс-р-фарнезен и фарнезол. Содержание других терпеноидов не превышает 0,05%.

Проведенная сравнительная оценка качественного и количественного состава изучаемых эфирных масел показала, что производные азулена - хамазулен и

спатчуленол являются наиболее специфичными соединениями эфирного масла ромашки аптечной цветков, следовательно, именно эти соединения целесообразно использовать для паспортизации эфирного масла ромашки аптечной цветков.

Однако, согласно литературным данным, эти соединения неустойчивы, что ограничивает возможность их применения в качестве стандартных образцов.

Вместе с тем, ряд зарубежных производителей предлагают использовать при оценке качества оригинальных препаратов гвайазулен, который по своей химической структуре очень близок к основным компонентам эфирного масла ромашки аптечной цветков (рис.2).

СНг СН3

Рнз н,С

н3с

Рис. 2 - Соединения группы азулена

Поэтому нами были проведены специальные исследования по изучению возможности использования этого соединения в качестве стандартного образца в практике отечественного фармацевтического анализа.

Исследование состава эфирных масел методом тонкослойной хроматографии

Прежде всего представлялось целесообразным провести исследования по определению оптимальных условий ТСХ эфирных масел.

Осуществлен подбор оптимальных условий проведения ТСХ. Наилучшее разделение терпеноидов достигнуто в системе состава гсксан - эфир диэтиловый (8 : 2). СОВС были выбраны на основании результатов проведенной ГЖХ и анализа зарубежной нормативной документации.

На хроматограмме эфирного масла ромашки аптечной цветков обнаружено не менее 7 пятен терпеноидных соединений, ромашки душистой цветков - не менее 5, эфирного масла пупавки полевой и ромашки непахучей цветков - по 2 пятна терпеноидных соединения (рис. 3).

-Р. «0.90 .*">■" ..................

,«.•0,15

Рис. 3 - Схема ТСХ эфирных масел

анализируемых объектов (система

растворителей гексан : эфир (8 : 2)).

Условные обозначения:

!9 фЯ,-0,!9 ,»■■!),» fR,=0 60 J - Эфирное масло ромашки аптечной

,«>•0,50 цветков

,«■■0.42 -Я-0.41 1.0.40 2 - Эфирное масло ромашки душистой

цветков

3 - Эфирное масло пупавки полевой цветков

4 - Эфирное масло ромашки непахучей

цветков

5 - СОВС а - бисаболола

6 - СОВС борнилацетата

1 2 3 4 5 6 7 8 7 • СОВС борнеола

8 ■ СОВС гвайазулена

Анализ хроматограммы показал, что производные азулена присутствуют лишь в эфирном масле ромашки аптечной цветков, что подтверждает возможность применения ТСХ для определения подлинности изучаемого вида эфирного масла и подтверждают целесообразности использования для этих целей в качестве стандартного образца гвайазулена.

Общеизвестно, что выбор стандартного образца для контроля качества лекарственного растительного сырья и фитопрепаратов определяется природой биологически активных веществ, ответственных за основной фармакологический эффект. В связи с этим, нами проведено сравнительное изучение антимикробной активности эфирных масел и гвайазулена.

Результаты исследований показали наличие выраженной антимикробной активности у эфирного масла ромашки аптечной цветков и гвайазулена в отношении микроорганизмов группы Bacillus, Escherichia, Staphylococcus, Pseudomonas и антифунгальной активности в отношении Candida. Антимикробная активность эфирных масел других видов ромашек выражена слабее.

Глава 4. Получение стандартного образца гвайазулена и определение его показателей качества

В настоящей главе приведены основные результаты выполненных «следований по созданию стандартного образца гвайазулена. Для этой цели был спользован гвайазулен технический, применяемый в парфюмерно-косметической ромышлениости. Результаты оценки степени его чистоты, выполненные методом ГСХ, свидетельствовали о неоднородном составе образца гвайазулена технического. 1рименение методов ГЖХ и ВЭЖХ позволило установить, что количество римесей составляет порядка семи, с относительным суммарным содержанием коло 25 % (рис.4 и 5).

Рис. 5 - Хроматограмма гвайазулена технического (метод ВЭЖХ) Условные обозначения: 1 - 4 - примеси, 5 - гвайазулен.

Для очистки технического гвайазулен нами предложен метод колоночной хроматографии низкого давления. В качестве сорбента использовали силикагель С-18, Элюирование проводили смесью гексан - эфир, с повышающимся содержанием эфира диэтилового в смеси от 0 до 20%.

7

Г УА.Л*-Д-А- —--Л—____ . .. .. | ■ —

Рис. 4 - Хроматограмма гвайазулена технического (метод ГЖХ) Условные обозначения: 1 - 7 - примеси, 8 - гвайазулен.

А

Чистоту полученного стандартного образца гвайазулена оценивали методами ТСХ, ГЖХ и ВЭЖХ. Результаты (рис. 6, 7; табл. 4, 5) свидетельствуют о том, что образец содержит не менее 98,5 % основного вещества, а содержание неидентифицированной примеси составляет не более 1,5%.

Чг-

Рис. 6 - Хроматограмма гвайазулена очищенного (метод ГЖХ) Условные обозначения: 1 - примесь, 2 - гвайазулен

Таблица 4 - Данные ГЖХ гвайазулена очищенного

№ пика на хроматограмме Относительное содержание компонента, %

1 1,20

2 98,80

я^1-V.

/ V

Рис. 7 - Хроматофамма гвайазулена очищенного (метод ВЭЖХ) Условные обозначения: 1 - примесь, 2 - гвайазулен

Таблица 5 - Данные ВЭЖХ гвайазулена очищенного

№ пика на хроматограмме Время удерживания (мин.) Относительное содержание компонента, %

1 7,88 1,50

2 15,18 98,50

Подтверждение структуры и подлинности полученного стандартного образца

Для подтверждения структуры и подлинности СО использовали методы ИК-пектроскопии, УФ-спектрофотометрии, 'Н-, 13С-ЯМР-спектроскопии, масс-пектрометрии. Результаты свидетельствовали о полном совпадении спектров тандартного образца гвайазулена со спектральными данными электронных баз анных.

В масс-спектре стандартного образца гвайазулена наблюдался пик олекулярного иона 198 m/z (М*, 85 %); сигнал 183 m/z (М* - СН3, 100 %); сигнал 68 m/z (М*- СНз-СНз, 17 %); сигнал 155 m/z (М* - СН3-СН3-СН3) 12%).

В ИК- спектре в области длин волн от 4000 до 400 см"1 отмечаются арактерные полосы поглощения в области 1600 - 1300 см"1 и 3100 - 2800 см"1.

На УФ- спектрах полученного образца гвайазулена в области длин волн от 200 о 400 нм имеются выраженные максимумы поглощения при следующих длинах олн:

- 244±2; 282±2; 349+2 и 368±2 нм (0,001% раствор в спирте этиловом 95%);

- 242±2; 284+2; 349+2 и 368±2 нм (0,001% раствор в гептане);

- 243±2; 284+2; 349+2 и 365±2 нм (0,001% раствор в гексане);

Определение показателей качества стандартного образка гвайазулена

Анализу подвергались образцы полученных 5 серий СО гвайазулена.

Определены основные показатели качества разработанного стандартного образца, составлен проект ФС.

Установлено, что СО гвайазулена малогигроскопичен, при этом максимальная способность к поглощению воды в пределах 2,0 - 2,5% наблюдается только в условиях 100% влажности. Учитывая термолабильность гвайазулена, его следует хранить в сухом защищенном от света месте, при температуре 8 ~ 12°С.

Экспериментально был определен срок хранения (не менее 2 лет - срок наблюдения). Исследования продолжаются.

Глава 5. Разработка методов оценки качества лекарственного

растительного сырья "Ромашки аптечной цветки" и лекарственных средств на его основе с использованием стандартного образца гвайазулена

В настоящее время, ЛРС "Ромашки аптечной цветки" стандартизуется лишь по количественному содержанию эфирного масла, что не отражает в полной мере качество лекарственного растительного сырья.

Например, стандартизация препарата "Рекутан", до настоящего времени, осуществляется по реакции на флавоны и определению содержания эфирного масла гравиметрическим методом, что фактически является определением сухого остатка отгона.

В связи с этим, нами разработаны унифицированные методики определения подлинности и количественного содержания азуленов в ромашки аптечной цветках и препаратов на ее основе с использованием СО гвайазулена.

Определение подлинности ромашки аптечной иветков

На первом этапе, методами ТСХ и ГЖХ изучен терпеноидный состав спиртовых извлечений, полученных из анализируемых объектов. При этом методом ТСХ установлено, что только в спиртовом извлечении из ромашки аптечной цветков и сбора грудного № 4, содержится терпеноидное соединение, которое по значению ЯГ и окраске пятна соответствует СО гвайазулена, что может быть использовано для определения подлинности ромашки аптечной цветков и сбора грудного № 4.

Полученные результаты (рис. 8 и 9) свидетельствуют о возможности использования, как эфирного масла, так и спиртового извлечения ЛРС для определения подлинности ромашки аптечной цветков с применением СО гвайазулена.

0,68 JR.s-o.36

0.32

^К-э-о.ао

в 0.51 а.зб

1 2

Рис. 8 - Схема ТСХ спиртового извлечения ромашки аптечной цветков (система растворителей гексан - эфир (8 : 2)).

Условные обозначения:

1 - Спиртовая вытяжка ромашки

аптечной цветков

2 - СО гвайазулена

Рис. 9 - Схема ТСХ эфирного масла ромашки аптечной цветков (система растворителей гексан - эфир (8 : 2)). Условные обозначения:

1 - Эфирное масло ромашки

аптечной цветков

2 - СО гвайазулена

Количественное определение суммы азуленов в ЛРС "Ромашки аптечной цветки" в пересчете на гвайазулен Суммарное содержание азуленов в ромашки аптечной цветках определяли методом ГЖХ эфирного масла, с применением в качестве внутреннего стандарта СО гвайазулена (рис. 10).

Рис. 10 - Хроматограмма эфирного масла ромашки аптечной цветков при введении стандартного образца гвайазулена

Условные обозначения: 1- р-фарнезен; 2 - спатчуленол; 3 - 2-[5-метил-5-(4-метилциклогекс-3-ен-1-ил)тетрагидрофуран-2-ил]пропан-2-ол; 4 - (-)-а-бисаболол, 5 - бисаболона оксид; 6 - хамазулен; 7 - (-)-а-бисаболола оксид (Л); 8 -гексагидрофарнезилацетон; 9 - 12-октадекадиеновая кислота; 10 -

трикозан; 11 - пентакозан; в - гвайазулен

Воспроизводимость методики количественного определения азуленов в пересчете на гвайазулен .установлена в 6 независимых повторностях. Метрологические характеристики методики приведены в табл. 6.

Таблица 6 - Метрологические характеристики методики количественного

определения суммы азуленов в эфирном масле ромашки аптечной цветков

Хер, % Б2 Б Р «Р,0 Ах е, %

8,56 0,00667 0,08165 0,95 2,57 0,16 1,89

Из данных табл. 6 следует, что относительная ошибка определения не превышает ± 1,89.

Результаты валидационной оценки предложенной методики приведены в таблице 7.

Таблица 7 - Результаты валидационной оценки методики количественного определения суммы азуленов в пересчете на гвайазулен.

Валидационные параметры Критерии валидности Результаты испытаний

Специфичность 1 - хроматограмма 0,01% раствора СО гвайазулена 2 - хроматограмма 1 % раствора эфирного масла

Пригодность роматографическ ой системы 0,75<То.05<2,5 сходимость инжекций (50Т„,%) - эфирного масла < 0,5 - СО гвайазулена < 5,0 То 05- эфирного масла: 1,321,37; Тоо5- СО гвайазулена: 1,25-1,39 50ТН: эфирного масла 0,3%; яоти: СО гвайазулена 3,0% N не менее 1000 т.т.

Линейность результатов г>0,995 г=0,9997; у=24,7х - 0,019

Правильность Незначимость коэффициентов в уравнении регрессии «взято аналита - найдено аналита» ГЬ=0,14 и 1а=0,5 < 1таб(95%,6)=2, 09

Сходимость результатов я0Т|„% <10 Расчетный метод нормировки; 50ТН: 3,3-4,6%

Разработанные методики использованы при определении подлинности и количественного содержания азуленов в препаратах ромашки аптечной цветков: "Ромазулан", "Рекутан", "Сбор грудной № 4".

Определение подлинности препаратов "Ромазулан", "Рекутан" "Сбор грудной№4" с использованием стандартного образца гвайазулена

1.09 ¿15.1,17

¿и. 1 ¿15.1,01 ^У.0,82

0.68 ^5-0.65 ¿11.0,70

^5-0,55

¿^•5-0,48

¿Ь-о.зо

г 2 3 -4

Рис. 11 - Схема ТСХ ромазулана, рекутана и спиртового извлечения из сбора грудного № 4 (система растворителей гексан - эфир (8 : 2)). Условные обозначения:

1 - Ромазулана;

2 - Рекутана;

3 - Спиртовая вытяжка сбора грудного №4;

4 - СО гвайазулена.

Количественное определение азуленов в лекарственных препаратах "Ромазулан" и "Рекутан" в пересчете на гвайазулен Для количественного определения суммы азуленов разработаны методики,

основанные на использовании ГЖХ с применением СО гвайазулена, после

соответствующей пробоподготовки.

Метрологические характеристики методик приведены в табл. 8

Таблица 8 - Метрологические характеристики методик количественного определения суммы азуленов в препаратах "Ромазулан" и "Рекутан"

Наименование препарата ХСр, % Б2 Б Р «Р,0 Дх е, %

Ромазулан 0,026 0,00000017 0,00041 0,95 2,57 0,0007 2,72

Рекутан 0,016 0,00000039 0,00063 0,95 2,57 0,0004 2,83

Как видно из данных табл. 8 относительная ошибка определения в препаратах

"Ромазулан" и "Рекутан" не превышает ± 2,72 % и ± 2,83 % соответственно.

Отсутствие систематических ошибок предлагаемых методик подтверждено в опытах с добавками гвайазулена (табл. 9).

Таблица 9 - Результаты опытов с добавками гвайазулена

Содержание азуленов в пересчете на гвайазулен, мг/мл Добавлено гвайазулена, мг Должно быть, азуленов в пересчете на гвайазулен, мг/мл Найдено азуленов в пересчете на гвайазулен, мг/мл Ошибка

Абс., мг Отн., %

Эфирное масло ромашки аптечной цветков

84,68 21 105,68 104,41 -1,27 -1,20

85,57 43 128,57 130,16 1,59 1,24

84,75 64 148,75 150,46 1,71 1,15

85,46 85 170,46 167,68 -2,78 -1,63

"Ромазулан"

0,2571 0,0652 0,3223 0,3159 -0,0064 -1,99

0,2610 0,1315 0,3925 0,4007 0,0082 2,08

0,2586 0,1958 0,4544 0,4441 -0,0103 -2,27

0,2579 0,2620 0,5199 0,5102 -0,0097 -1,87

"Рекутан"

0,1698 0,0439 0,2137 0,2189 0,0052 2,43

0,1723 0,0878 0,2601 0,2535 -0,0066 -2,54

0,1730 0,1318 0,3048 0,2989 -0,0059 -1,92

0,1756 0,1758 0,3514 0,3601 0,0087 2,47

Установлено, что относительная ошибка определения при доверительной ероятности 0,95 не превышает относительную ошибку среднего результата и ледователыю методики лишены систематической ошибки.

По разработанным методикам проанализировано 10 опытных серий ЛРС Ромашки аптечной цветки" и по 5 серий лекарственных препаратов "Ромазулан" и Рекутан".

На основании полученных результатов установлено, что содержание суммы зуленов в эфирном масле ромашки аптечной цветков в пересчете на гвайазулен олжно быть не менее 7 %, норма содержания азуленов в пересчете на гвайазулен в екарственных препаратах "Ромазулан" и "Рекутан" - не менее 0,02 % и 0,01 % оответственно.

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ВЫВОДЫ

1. Анализ современного состояния использования эфирномасличного лекарственного растительного сырья показал, что его доля составляет порядка 20 % от общего числа видов лекарственного растительного сырья, разрешенных к применению на территории Российской Федерации. Существующие требования и методы оценки качества этих видов сырья нуждаются в приведении их в соответствие с требованиями международных стандартов.

2. Определены количественное содержание и физико-химические характеристики эфирных масел в цветках ромашки аптечной и возможных ее примесях. Установлено, что полученные данные могут быть использованы только для предварительной оценки качества эфирного масла и лекарственного растительного сырья "Ромашки аптечной цветки".

3. Проведено сравнительное изучение химического состава эфирных масел ромашки аптечной цветков, ромашки душистой цветков, пупавки полевой цветков, ромашки непахучей цветков. Показано, что основными компонентами эфирных масел являются соединения сесквитерпенового ряда, в частности производные бисаболола. Установлено, что лишь в эфирном масле ромашки аптечной цветков содержатся производные азулена, которые могут быть использованы для стандартизации лекарственного растительного сырья "Ромашки аптечной цветки".

4. Подтверждено наличие выраженной антимикробной и антифунгальной активности эфирного масла ромашки аптечной цветков и гвайазулена. Установлено, что антимикробная активность эфирных масел других анализируемых объектов выражена слабее.

5. Доказана целесообразность использования, в практике отечественного фармацевтического анализа, гвайазулена в качестве стандартного образца для оценки качества ромашки аптечной цветков, эфирного масла и препаратов на их основе. Предложена схема его получения из гвайазулена технического.

6. Установлены показатели качества стандартного образца гвайазулена и предложены методики их оценки.

7. Разработаны методики определения подлинности и количественного содержания терпеноидов азуленового ряда в ромашки аптечной цветках и препаратах на ее основе: эфирном масле, сборе грудном №4, "Рекутан" и "Ромазулан", с использованием стандартного образца гвайазулена.

8. Полученные результаты впервые использованы для создания проектов ФС на "Гвайазулена - стандартный образец"; изменений и дополнений к фармакопейной статье "Ромашки аптечной цветки" по показателям "Подлинность", "Числовые показатели", "Количественное определение"; изменений и дополнений к общей фармакопейной статье "Масла эфирные" по разделам "Подлинность" и "Количественное определение".

Список работ, опубликованных по теме диссертации

. Уанкпо, Бие Берже. К вопросу о стандартизации и контроле качества эфирного масла ромашки аптечной (Chamomilla recutita L.) / Уанкпо Бие Берже, Саканян Е.И., Карасавиди А.О // Достижения, проблемы и перспективы фармацевтической науки и практики Материалы региональной научно-практической конференции (с международным участием), посвященной 40-летию Фарм. Фак. КГМУ 2006. - С. - 252 - 254

. Уанкпо, Бие Берже. Эфирномасличное лекарственное растительное сырье и современные подходы к методам его стандартизации / Бие Берже Уанкпо, Е.И. Саканян, А.О. Карасавиди // "Традиционная Медицина - 2007": Сборник научных трудов конгресса (г. Москва, 1 - 3 марта, 2007г.) Федерального научно клинико-экспериментального центра традиционных методов диагностики и лечения Росздрава. - 2007 - С. 94 - 97.

. Уанкпо, Бие Берже. К вопросу стандартизации и контроля качества эфирного масла и препаратов на основе ромашки аптечной (Chamomilla recutita L.) / Бие Берже Уанкпо, Е.И. Саканян, А.О Карасавиди // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. Пятигорской ГФА, Санкт-Петербургской ГХФА. Вып. 62 - 2007 - С. 253 - 254.

. Уанкпо, Бие Берже. К вопросу стандартизации и контроля качества лекарственных средств, содержащих эфирные масла и их компоненты / Бие Берже Уанкпо, Е.И. Саканян II Тезисы докладов Региональной научной конференции студентов и аспирантов «Молодые ученые - практическому здравоохранению» 18-19 апреля 2007 г. - СПБ.: Изд-во СПХФА, 2007. - С. 39 -41

5. Уанкпо, Бие Берже Современные подходы к методам стандартизации эфирного масла / Бие Берже Уанкпо, Е.И. Саканян, А.О Карасавиди II Вестник российской военно-медицинской академии. - 2007. № 1(17). - С. - 151

6. Уанкпо, Бие Берже. К вопросу об антимикробной активности эфирного масла ромашки аптечной цветков / Бие Берже Уанкпо, Е.И. Саканян, А.О Карасавиди // Фармация из века в век: сборник научных трудов. Часть IV.Биохимические, Биотехнологические исследования: - СПБ.: Изд-во СПХФА, 2008. - С. 11 - 14

7. Уанкпо, Бие Берже. Разработка подходов к получению стандартного образца для оценки качества препаратов ромашки аптечной / Бие Берже Уанкпо, Е.И. Саканян, А.О Карасавиди И Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. Пятигорской ГФА. Вып. 63 - 2008 -С. 217-218.

8. Уанкпо, Бие Берже. Оценка качества препаратов Ромашки аптечной / Бие Берже Уанкпо, А.О. Карасавиди, Е.И. Саканян // Фармация. - 2008. № 6. - С. - 19 - 24

Юля Sam

На правах рукописи

УАНКПО Сегбехин Бне Берже

СОВРЕМЕННЫЕ ПОДХОДЫ К ОЦЕНКЕ КАЧЕСТВА ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ, СОДЕРЖАЩИХ ЭФИРНЫЕ МАСЛА И ТЕРПЕНОИДЫ ЭФИРНЫХ МАСЕЛ, НА ПРИМЕРЕ РОМАШКИ АПТЕЧНОЙ ЦВЕТКОВ

Специальность 15.00.02 —фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Печать Н.В. Андриановой

Подписано к печати 22.10.2008. Формат 60 х 90/16. Бумага тип. Печать ризограф. Гарнитура «Тайме». Печ. л.3,0. Тираж 100 экз. Заказ 751

Санкт-Петербург 2008

Актуальность темы

В настоящее время на мировом рынке фармацевтических препаратов доля средств растительного происхождения составляет около 40 %, причем, в последние годы наметилась устойчивая тенденция к ее увеличению [52].

Среди групп лекарственного растительного сырья (ЛРС), содержащих различные биологически активные вещества, лидирующее положение занимают эфирномасличные растения. [24]

Так, из 326 видов лекарственного растительного сырья, включенных в Государственный Реестр лекарственных средств РФ, на долю эфирномасличного приходится около 19 % [16].

При этом можно выделить следующие направления их применения в фармацевтической практике:

- только в качестве лекарственных средств (можжевельника обыкновенного плоды, тмина обыкновенного плоды и др.); только в качестве растительного сырья для получения эфирных масел и лекарственных препаратов. Эфирные масла, выделенные из этих видов сырья (гвоздики цветки, аниса звездчатого плоды, мяты перечной листья) могут являться действующими компонентами лекарственных средств, а могут использоваться в качестве вспомогательных веществ (корригирующие вкус, запах и т.д.). В этом качестве широко применяются в медицине и другие виды эфирномасличного сырья, не включенные в Государственный Реестр (корицы кора, бергамота листья и цветки, розмарина листья и др.) [16].

Необходимо отметить, что эфирные масла могут служить также источником отдельных терпеноидных соединений, которые в дальнейшем используются в медицинской практике как лекарственные вещества или в аналитической практике в качестве стандартных образцов (ментол — из масла мяты, эвгенол — из масла гвоздики), хотя в последнее время для их получения все чаще применяют методы химического синтеза;

- ив качестве лекарственных средств, и в качестве лекарственного растительного сырья для получения лекарственных препаратов {ромашки аптечной цветки, валерианы лекарственной корневища с корнями, шалфея лекарственного листья и др.) [16].

Официнальное лекарственное растительное сырье, предназначенное для использования в качестве лекарственного средства и лекарственного растительного сырья для получения лекарственных препаратов, подвергается постадийному товароведческому анализу, включающему: приемку лекарственного растительного сырья, отбор средней и аналитической проб, определение подлинности, определение содержания примесей, определение влажности, определение зараженности амбарными вредителями, количественное определение (если это предусмотрено ФС).

В частности, для эфирномасличного лекарственного растительного сырья, раздел "Количественное определение" ФС подразумевает определение содержания эфирного масла. Однако, в соответствии с требованиями ГФ XI изд., определение содержания эфирного масла предусмотрено не во всех видах эфирномасличного сырья.

Качество эфирномасличного растительного сырья, используемого только для получения эфирных масел и не включенного в Реестр лекарственных средств РФ, оценивается в соответствии с техническими условиями (ТУ), отраслевыми стандартами (ОСТ) и государственными стандартами (ГОСТ), например ГОСТ 28607-90 "Сырье эфирномасличное цветочно-травянистое. Методы определения примесей".

Качество эфирных масел, включенных в Государственную Фармакопею (масло мяты перечной, эвкалиптовое масло), оценивается в соответствии с требованиями статьи "Масла эфирные" [14] по показателям: "Описание", "Растворимость", "Подлинность", "Посторонние примеси", "Числовые показатели" (плотность, оптическая активность, показатель преломления, кислотное число, эфирное число и др.).

Общеизвестно, что важнейшим вопросом при создании фитопрепаратов является стандартизация и повышение уровня объективной оценки их качества [52].

Однако необходимо признать, что в связи с разнородностью и многокомпонентностью состава эфирных масел, вопросы стандартизации фитопрепаратов на их основе до настоящего времени, в большинстве случаев, остаются открытыми. Эта задача может быть решена только при использовании в анализе лекарственного растительного сырья и лекарственных средств, содержащих эфирные масла, стандартных образцов терпеноидной природы, т.е. основного класса действующих веществ, входящих в состав как исходного сырья, так и готового лекарственного средства.

К числу наиболее широко представленных на зарубежном и отечественном фармацевтическом рынке видов эфирномасличного лекарственного растительного сырья следует отнести ромашки аптечной цветки, которые издавна применяются в медицинской практике в качестве противовоспалительного лекарственного средства или служат сырьем для получения сборов, экстрактов и других лекарственных средств.

Анализ действующей нормативной документации показал, что стандартизация этого лекарственного растительного сырья осуществляется по количественному содержанию эфирного масла без учета его компонентного состава, что впоследствии создает определенные сложности при стандартизации препаратов, получаемых на его основе.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Российской Федерации.

Целью настоящего диссертационного исследования является обоснование и разработка современных подходов к оценке качества эфирномасличного растительного сырья и лекарственных средств на его основе, на примере лекарственного растительного сырья "Ромашки аптечной цветки" - "Chamomilla recutita flores", сем. Астровых - Asteraceae L.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Провести анализ современного состояния использования эфирномасличного лекарственного растительного сырья и препаратов на его основе и требований, предъявляемых к их качеству.

2. Получить и провести сравнительный анализ эфирных масел ромашки аптечной цветков и возможных примесей к этому JIPC по качественному и количественному компонентному составу.

3. Осуществить выбор компонента эфирного масла ромашки аптечной цветков, предназначенного к использованию в качестве стандартного образца.

4. Предложить способ получения стандартного образца терпеноидной природы, определить его основные показатели качества и создать проекты нормативной документации на стандартный образец.

5. Разработать методы стандартизации ромашки аптечной цветков, эфирного масла и лекарственных средств их содержащих с использованием стандартного образца терпеноидной природы.

6. Разработать проекты "Изменений и дополнений" к существующей нормативной документации на лекарственное растительное сырье "Ромашки аптечной цветки" и общей фармакопейной статье "Масла эфирные".

Научная новизна

Впервые изучен качественный и количественный компонентный состав, не только эфирного масла ромашки аптечной цветков, но и возможных к ней примесей. Установлено, что терпеноидный состав эфирного масла ромашки аптечной цветков представлен не менее чем 30 соединениями, эфирного масла ромашки душистой цветков, пупавки полевой цветков и ромашки непахучей цветков - не менее чем 20 соединениями. При этом только в эфирном масле ромашки аптечной цветков обнаружены производные азулена, в частности, хамазулен и спатчуленол.

На основании проведенных исследований, установлено, что для стандартизации ромашки аптечной цветков, эфирного масла и лекарственных средств на их основе, целесообразно использовать в качестве стандартного образца гвайазулен.

Предложена схема получения стандартного образца из гвайазулена технического и определены показатели его качества.

Впервые разработаны методики, позволяющие, используя стандартный образец гвайазулена, проводить оценку качества, как исходного эфирномасличного сырья, так и лекарственных средств на его основе.

Практическая значимость и уровень внедрения работы

Практическая значимость диссертационного исследования заключается в том, что результаты были использованы при составлении проектов следующих документов:

- Проект ФС на гвайазулен - стандартный образец;

- Проект "Изменений и дополнений" к фармакопейной статье "Ромашки аптечной цветки" по показателям "Подлинность", "Числовые показатели", "Количественное определение";

- Проект "Изменений и дополнений" к общей фармакопейной статье "Масла эфирные" по разделам "Подлинность" и "Количественное определение".

Материалы включены в курс лекции по фармацевтической химии по разделам "Терпеноиды" и "Физико-химические методы анализа лекарственных средств природного происхождения" (Акт о внедрении). Апробация работы

Основные положения работы доложены на Региональной научно-практической конференции с международным участием "Достижения, проблемы и перспективы фармацевтической науки и практики" (Курск, 2006), конгрессе "Традиционная медицина - 2007" (Москва, 2007), 62-ой и 63-ой научной конференции по фармации и фармакологии "Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции" (Пятигорск, 2007, 2008), региональной научной конференции студентов и аспирантов «Молодые ученые - практическому здравоохранению» (Санкт-Петербург, 2007), научно-практической конференции «Фармация из века в век» (Санкт-Петербург, 2008). Публикации

По теме диссертации опубликовано 8 научных работ. Основные положения, выносимые на защиту:

1. Результаты сравнительной качественной и количественной оценки компонентного состава эфирных масел ромашки аптечной цветков, ромашки душистой цветков, пупавки полевой цветков и ромашки непахучей цветков.

2. Показатели качества стандартного образца гвайазулена и методики их оценки.

3. Методики оценки качества JIPC "Ромашки аптечной цветки" и эфирного масла ромашки аптечной цветков с использованием стандартного образца гвайазулена.

4. Методики оценки качества лекарственных средств, содержащих ромашки аптечной цветки, с использованием стандартного образца гвайазулена.

5. Проекты нормативной документации на гвайазулен - стандартный образец, изменения и дополнения к существующей нормативной документации на JIPC "Ромашки аптечной цветки" и ОФС «Масла эфирные».

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ВЫВОДЫ

1. Анализ современного состояния использования эфирномасличного лекарственного растительного сырья показал, что его доля составляет порядка 20 % от общего числа видов лекарственного растительного сырья, разрешенных к применению на территории Российской Федерации. Существующие требования и методы оценки качества этих видов сырья нуждаются в приведении их в соответствие с требованиями международных стандартов.

2. Определены количественное содержание и физико-химические характеристики эфирных масел в цветках ромашки аптечной и возможных ее примесях. Установлено, что полученные данные могут быть использованы только для предварительной оценки качества эфирного масла и лекарственного растительного сырья "Ромашки аптечной цветки".

3. Проведено сравнительное изучение химического состава эфирных масел ромашки аптечной цветков, ромашки душистой цветков, пупавки полевой цветков, ромашки непахучей цветков. Показано, что основными компонентами эфирных масел являются соединения сесквитерпенового ряда, в частности производные бисаболола. Установлено, что лишь в эфирном масле ромашки аптечной цветков содержатся производные азулена, которые могут быть использованы для стандартизации лекарственного растительного сырья "Ромашки аптечной цветки".

4. Подтверждено наличие выраженной антимикробной и антифунгальной активности эфирного масла ромашки аптечной цветков и гвайазулена. Установлено, что антимикробная активность эфирных масел других анализируемых объектов выражена слабее.

5. Доказана целесообразность использования, в практике отечественного фармацевтического анализа, гвайазулена в качестве стандартного образца для оценки качества ромашки аптечной цветков, эфирного масла и препаратов на их основе. Предложена схема его получения из гвайазулена технического.

6. Установлены показатели качества стандартного образца гвайазулена и предложены методики их оценки.

7. Разработаны методики определения подлинности и количественного содержания терпеноидов азуленового ряда в ромашки аптечной цветках и препаратах на ее основе: эфирном масле, сборе грудном №4, "Рекутан" и "Ромазулан", с использованием стандартного образца гвайазулена.

Полученные результаты впервые использованы для создания проектов ФС на "Гвайазулена - стандартный образец"; изменений и дополнений к фармакопейной статье "Ромашки аптечной цветки" по показателям "Подлинность", "Числовые показатели", "Количественное определение"; изменений и дополнений к общей фармакопейной статье "Масла эфирные" по разделам "Подлинность" и "Количественное определение".