Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Совершенствование методов стандартизации и контроля качества противоопухолевых лекарственных средств, производных хлорэтиламина на основе аминокислот

РГ6 од - 8 ОНТ 1996

на правах рукописи

ШПРАХ ЗОЯ СЕРГЕЕВНА

СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДОВ СТАНДАРТИЗАЦИИ И КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ, ПРОИЗВОДНЫХ ХЛОРЭТИЛАМИНА НА ОСНОВЕ АМИНОКИСЛОТ.

15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

МОСКВА -1996

Работа выполнена в Научно-мседгдоватетском Иисппук Эхспсргшентшьгю Дндгностки и Терапия Опухолей Онкологического научного цешра Россайско Академии медицинских наук.

Научные руководители:

- доктор фармацевтических наук, профессор Арзамасцев А.П.

- кандидат фармацевтических наук Оборотова Н.А.

Оффнинмсьные оппоненты:

- доктор фармацевтических наук Боковикова Т.Н. • кандидат фармацевтических наук Нечаева Е.Б.

Ведущее учреждение - Научно-иосладовательский нпеппут Фармаадш МЗМП Р<3

Зшдагга состоится 9 6 г. в "_" чао. на з&с&дашш даосертац

онного Совета Д.074.05.06. при Московской ысдзщнпской екодзшш и И.М.Сеченопа по адресу: г.Москва, Суворовский бульвар, д.13.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ММА нм. И.М.Сечено (г.Москва, Зубовская пл., д.1).

Автореферат разослан ** £ г.

Ученый секретарь диссертационного Совета Д.074.05.06.кандидат фармацевтических

наук, доцент Н.П.Садчикова

- ] -

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Проблема злокачественных новообразований, несмотря на иачигелыше успехи, достигнутые в изучении опухолевого процесса и разработке етодов профилактики и лечения, остается одной из важнейших в современной ме-ицине (Процеико J1J3- и др., 1982). При этом наибольшее практическое исполз.зо-ание в противоопухолевой химиотерапии находят алхилирующие агенты, приме-яемые как самостоятельно, тах и в комплексном лечении больных (Блохин H.H. и р.,! 984).

К этому классу относятся изученные в представляемой работе производные ди-!-хлорэтал)-амина (ХЭА) сарколизии (ОЛ^чх-амино-р-[п-ди-(2-хлорэтил)-амино1-енилапанина гидрохлорид), асалии (этиловый эфир К-р\Г-ацетил-п-ди-(2-хлор-гил)-амииофенилалакил]валина; дипептид сарколнзина), которые успешно при-еняются при лечении больных семиномой яичка, при лимфо- и ретикулосаркоме и ругих формах злокачественных новообразований (Блохин H.H., 1984; Переводчи-оваН.И. и др.,1993), и хлоп»фен (>Г,К'-ди-(2-хлорэтил)-4-хлорфенилапаниногид-азида гнпрохлорид), показавший высокую противоопухолевую активность в экс-ерименте.

Поскольку химико-фармацевтические исследования сарколизиьа и асалина про-одились в 60-70-е годы, методики их анализа с современной точки зрения недоста-эчно совершенны, что не обеспечивает объективной оценки их качестаа. Для акциза этих препаратов отсутствуют достаточно надежные методы, позволяющие on-еделять соединения в присутствии продуктов их деградации и возможных тсхно-огических примесей. Кроме того, в настоящее время в НИИ ЭДиТО ОНЦ РАМН азработаны новые усовершенствованные лекарственные формы этих препаратов:

шшфнлизированная лекарственная форма сарколизина дня внутривенных шгьск: ний н таблетки не шиша для псроральнаго применения. Все это потребовало проведения комплекса хнмико-фармацезтнческих исследований, в который входит в\>1-бор критериев и параметров стандартизации лекарственного вещества и лекарственной формы, разработка способов определения контрольных точек технологического процесса приготовления лскформы и изучение стабильности новых лекарственных форм этих препаратов в различных условиях для определения сроков годности.

Вышеизложенное определяет актуальность и практическую значимость исследований по разработке новых и совершенствованию существующих методик оценки качества противоопухолевых препаратов, производных ХЭЛ. Учитывая высокую гидролитическую неустойчивость соединений изучаемого класса, представляет научный и практический интерес изучение стабильности препаратов (субстанций, лекарственных форм, растворов-концентратов) в процессе их наработки и хранения д ля создай« нормативно-технической документации.

Цель исследования • разработка методов стандартшашш субстанций и лекарственных форм сарколизина, хлогифена и ос&яииа, шучение стабильности препаратов.

ОйМВНЬ"? ЗМИЧН ИСУШТОВШИ

- Выбор критериев и методов оценки качества субстанций н лекарственных форм на их основе;

- Разработка методики количественного определения асалина в субстанции;

- Разработка методов количественного определения препаратов в новых лекарственных формах и технологических концентратах методом УФ-спектрофотометрнн;

• Исследование однородности (чистоты) лекарственных средста методой хроматографии в тонких слоях сорбента;

- Определение стабильности растворов хлогнфена;

• Изучение стабильности сархолиэнна, хлогнфена и асалина в лекарственных формах в хранении при изучении сроков годности.

Научная новизна. Предложены методологические подходы х выбору критериев ч методов оценки качества противоопухолевых препаратов, производных ХЭА.

Впервые разработана методика количественного определения сарколизнна в апогокомпопентной лиофшшзированной лекарственной форме и технологическом >астворе-концентратр методом УФ-спектрофотометрии. Показана возможность шалгоа сложной лекарственной формы для инъекций методом ТСХ, который по-1ВОшкя определять основное вещество в присутствии продуктов его гндрошгшче-ясой деградации н вспомогательных веществ.

Предложена методика количественного определения асалнна в субстанции методам сжигания в колбе с кислородом.

Изучены хроматографическне свойства асалина в "субстанции и лекарственной юрме.

Установлена целесообразность использования метода УФ-спектрофотометрии та количественного анализа асалина в лекарственной форме.

Определен срок годности таблеток асалина и лнофнпизированных лекарствен-ых форм сарколизина и хлогнфена.

Практическая значимость. Предложенные методики определения качества сар-о лизина методом УФ-спектрофотометрии и хроматографии в тонких слоях сор-ента в лекарсгве|шой форме и технологическом концентрате апробированы в Отеле фармацевтической экспертизы Фармакологического комтчгга МЗ РФ и вклю-

чены в проект Временной фармакопейной статьи "Сарколюин по 0,02 г для инъ-

екций" .

Методики стандартизации асалина к субстанции и таблетках одобрены Отделом фармацевтической экспертизы Фармакологического комитета МЗ РФ и включены в проекты ВФС "Асалин" и "Таблетки Асалина по 0,25 г".

Материалы по исследованию стабильности хлогифека в растворах использова мы при разработке лабораторного технологического регламента на проиэоодстос анофилизкровшшого хлогифена для инъекций. Данные о стабильности и срока; годности сарколизииа и асалина в лекарственных формах включены и соответст вующие проегты ВФС.

Связь исследований с проблемным планом Фармацевтических наук. Диссерт&ши выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ НИИ ЭДиТС ОНЦ РАМН и проблемой "Фармация" Научного Совета JtolO РАМН "Фармако логка и фармация" по специальности ! 5.00.02 "Фармацевтическая химия и ферме котозим", номер госрегмстрации 0J8600I8873 и планом научно-иоследоватсдьски работ НИИ ЭДиТО ОНЦ РАМН, номер госрегистрации 01910001729 01910001682.

Апробация работы. Результаты исследований доложены на I Конференции конкурсе НИИ ЭДиТО ВОНЦ "Терапия, днагностха и профилактика опухолей эксперименте" (Москва, 1990), на рабочем Совещании ответственных исполнителе (Болгария,С»!)- Материалы предстаьлены на Национальном фармацевты ческо конгрессе (Румыния,1994), II и III Российских Национальных конгрессах "Челов< н лекарство" (Москва.1995,1996), VI Международном конгрессе по противоопух' левой химиотерапии (Франция, 1996).

По материалам диссертации опубликовано 12 работ.

На защиту выносятся результаты экспериментальных исследований и их теоретическое обоснование:

- методика количественного определения асалина в субстанции методом сжигания в колбе с кислородом;

- методики количественного определения сарколизина, хлогифена н асалина в новых лекарственных формах методом прямой УФ-спекгрометрни;

• результаты изучения стабильности хлогифена в растворах;

• метод!пси контроля качества сарколизина. хлогифена и асалина методом хроматографии я тонких слоях сорбента (субстанции и лекарственные формы);

• результаты определения сроков годности инъекционных лекарственных форм гаржолгоина и хлогифена (включая исследования методом "ускоренного старения три повышенной температуре") н таблеток асалина.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора лнте-эотуры, 4-х глав экспериментальной часта, выводов, списка литературы и приложений. Работа »пложена на 215 страницах машинописного текста, содержит 28 рисунков, 33 таблицы. Библиография включает 215 наименований, в том числе 109 Еностранных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во введении отражены актуальность, научная новизна и практическая значи-гость работы, определены цели и задачи исследований.

В обзоре литературы даны физико-химические характеристики сарколизина, логифена и'асалина, проведен критический анализ методов определения иссяе-уемых веществ в субстанциях и лекарственных формах.

В четырех главах экспериментальной часта приведены результаты выполненных ксследомишй

При этом в соответствии с требованиями действующей в России нормативно-технической документации по контролю качества лекарств предварительно отобраны критерии качества н определены оптимальные значения параметров для стандартизации субстанций н лекарственных форм исследуемых препаратов.

]. жыанх.К9№ч<хту?т<?г<? рпр«кдвдм аемгош. спркмтння н

хлогиф^на (субствншш. декарсгасшшс формы и технологические растворы'

щцштнкы) Кддотвшшщй пнплиз аешмй й стбствнаин

В основу определения количественного содержания асалинв в субстанции по лолсен метод сжигания в колбе с кислородом (ГФ XI, вып. 1,1987). Навеска препа рата (около 0,05 г) и концентрация титрующего раствора нитрата окненой ртуп (0.05 моль/л) подобраны экспериментально таким образом, чтобы свести к мнмн муму возможные источники ошибок.

Б таблице 1 приведены данные шести независимых определений содержали] осадила в субстанции серии 29-94 в пересчете не высушенное вещество. Как вида т таблицы, получаемые результаты воспроизводимы, относительная ошибка сред него результата не превышает 1,5^«.

Незначительное завышение результатов анализа может быть обусловлено при сутствнем в субстанции примесей ацетнлеарколизина н хлор гидрата этиловог эфира валила, количество которых находится на пределе чувствительносги метода ки. Сочетание метода сжигания в кислороде I. проверкой однородности препарат

методом тонкослойной хроматографии, определением температуры плавления и данными УФ-спектрометрии гарантирует достоверную оценку кичества препарята.

Таблица 1

Результаты количественного определения всалина в субстанции методом сжигашм в колбе с кислородом {P=r95%,tpje2,57, п™6)

Серия Навеска, г Обьем тит- Найдено асалнна, Метрологические

субстанции ранта, мл % характеристики

29-94 0,04985 4,26 100,03 г e 100.62%

0.04620 4,00 101,31 S «0,9233

0,05010 4,31 100,70 Sj «0,3921

0.05125 4,44 101,41 Ах - 1,0086

0,05095 4,3! 99,02 £ = 1,00%

0,04130 4,09 101,22

Кдазазвотуиный »швшавюлюии&аа'?гйф<тв в теадннд (дахйВЕгвишьк-Айа: мы и технологические растворы-ко)шснтрата1 методом УФ-спсгорофоточргрод

В УФ-спектр пх ароматических ХЭА я растворах метанола и в подкисленных водных растворах имеются две полосы поглощения с максимумами при 260±2 им и 301 ±2 им, при этом интенсивность первой полосы на порядок превосходит интенсивность второй (Блажех Й. и др.,1965; Кнкоть Б.С. и др.,1975).

Работа проводилась на регистрирующем спектрофотометре "Carry 219" ¡"Vanan") и спектрофотометре СФ-46.

Новая лекарственная форма сарколизнна для инъекции включает в свой состав ряд вспомогательных ингредиентов, поглощающих УФ-излучение в обласп» 200-<00 нм. Кроме того, в лекарственной форме возможно присутствие продуктов гидролиза сархолизина, имеющих спектр поглощения, аналогичный основному действующему веществу.

Количественный анализ сарколизина в лекарственной форме проводили при длине волны 30112 им, используя дня создшшя постоянного п одинакового рН специально подобранный растворитель Н. Установлено, что в этих условиях присутствие до 10% примесей продуктов деградации сарколизина (моногидроксисар-колизина, МГС, и днгидроксисарколизина, ДГС) не сказывается на результатах его количественного определения (таблица 2), а вспомогательные ингредиенты лекарственной формы не изменяют спектральных характеристик сархолнзина.

Таблица 2

Поглощение растворов сарколизина, продуктов его дгхредацин и технолопгчг-ской примеси этилового эфира сарколизина (ЭЭС) о растворах метанола н хлори-

стоводородной кислоты (рН=2,3)

Серия субстанции Оиош, (0,02 мг/мл) Ом!»» (0,2 мг/мл)

Растворитель Растворитель

метанол НС1 ыетанол НС1

120191 1,234 0,352 1,220 0,357

130191 1,260 0,351 1,216 0,358

140191 1,282 0,354 1,230 0,358

160191 ' 1,220 0,362 1.196 0,373

170391 1,212 0,370 1,206 0,398

ЭЭС 1,538 0,363 1,522 0,398

МГС 1,174 0,040 1,200 0,046

ДГС. 0,934 0,020 1,026 0,020

Оптимальный интервал концентраций для количественной оценки при соблюдении линейной зависимости оптической плотности от концентрации сарколизина составляет 0,05 • 0,5 мг/мл. Рабочая концнпрацня около 0,4 мг/мл. Из таблицы 2 видно, что поглощение продуктов деградации сарколизина в растворах хлористо-

водородной кислоты (в отличие от растворов в метаноле) ня порядок ниже, чем поглощение самого сархолюмна.

Результаты количественного определения сарколизина в лекарственной форме представлены в таблице 3. Установлено также, что концентрат лекарствегшой формы стабилен а течение не менее двух часов. Относительная сшибка определения не превышает 2%.

Таблица 3

Результаты количественного определения саряолиэняа в лехарегеенной ферме для инъекций методом УФ-спектромегрин (длина волны 301 нм, растворитель Н; Р=95%, ^/^2,57, п~б)

Серия лекарственной формы флакона Найдено

Сарколизина, г Метрологические характеристики

011194 1 0,0192 - х 0,0193

2 0.0194 Б 2,00 10^

3 4 5 6 0.0195 0,0195 0,0192 0.0191 Я* а1 ё 8,17 10-* 2,151<Н 1,09%

020295 1 0,0194 X 0,0194

2 0,0198 в 3,41 10^

3 4 5 6 0.0192 0,0192 0,0189 0,0197 & Дх § 1,39 10-5 3,57 10* , 1,84%

В УФ-спектре хлогифена в водных растворах наблюдаются три характеристиче-жие полосы поглощения с максимумами при 2б0±1 нм; 266+1 нм и 274+1 нм. Раз эаботху методики спекгрофогомегтрического количественного определения прела-»ата в лекарственной форме проводили при 260 нм, одновременно определяя соот-

ношения значений оптических плотностей при указанных выше длинах волн дш проверки отсутствия примесей, поглощающих в той же области спектра.

Поглощенно водных растворов хлогифена подчиняется закону Бугере-Ламбер та-Бер» в диапазоне концентраций 0,03-0,3 иг/мл, Результаты количественного on редедммя хлогнфена в оаалнчных сериях лекарственной формы предрг&шюны i табдкце 4-

Таблица 4

Результаты количественного определения хлогифена в лекарственной форме дли ш<ьекцкй методом УФ-спехгромпрнн (даша водны 260 lui; растворитель вода

Серия шжарстжодой формы Найдено

Хлогифена, г Метрологические характеристики lyxo/DV*

011092 , 0;259 0,263 0,263 0,266 0.256 0,258 х 0,259 S 3,19-10-' Si 1,30-10» AÏ 3,35-10J 2 1.29У« 0.8Ç9 1,330

021092 0,247 0,248 0,249 0,252 0,248 0,252 x 0,249 S 2,19» 10-» Si 8,94-10» Дх 2,30-10-» S 0,89% 0,861 1,330

Исследования, выполненные на модельных смесах лекарственной формы реальна. показали, что вспомогательные ингредиенты, входящие в состав таблеток, не погаощшгг Уф-излучгние в области поглощения асалнна и не изменяют характер его спектра.

Для эхсгры-нровьння всалииа >п тполеток выбран этанол. Эффективность однократной экстракции около 99%. Подчинение спектров спиртовых экстрактов зияп-ну Бугсра-Ламберта-Бера при дойне волны 2б0±1 нм наблюдали в диапазон« концентраций 2-40 мкг/мл. Предел обнаружения 0,25 мкг/мл. Рабочая концентрация около 25 мкг/мл.

Таблица 5

Результаты количественного определения асалина в лекарственной форме методом УФ-спектрометрнн (длина волны 260 нм*, растворитель зтиловый cfinpnr, Ра

95%, tp/=2,57,n=6)

Серия пегарственной формы Н» пробы Найдено

Асалина, г Метрологические характеристики

081192 1 0,2510 X 0,2486

2 0,2478 S 2,49-10»

3 0,2518 S* 1,02-10-'

4 0,2490 Дх 2,62* 10-»

5 0,2454 В 1,05%

б 0,2466

010293 1 0.2409 X 0,2401

2 0,2415 S 1,80-10»

3 0,2402 S* 7,34-1 (И

4 0,2386 Дх 1,89-10'

5 0,2421 е 0,79%

6 0,2374

Как видно из таблицы 5, отноаггельная ошибка количественного определения асалина в лекарственной форме не превышает 1,5%.

Изучение.стабильности растворов хдогнфена

В водных растворах производные ХЭЛ легко гилролизуются с образованием растворимых моно- и дигидроксинроизводных (Ягужиискнй Л.С. и др., 1969;

Hart wing К.О. et al., 1988), не обладающих противоопухолевым действием (Ross W.CJ., 1962).

Кинетические кривые гидролиза хлогифена получали, определяя количественное содержание ноне хлора о растворах меркуриметрическим методом при различных температурных режимах. Экспериментальным путем установлено, что гидролиз

водных растворов хлогифена описывается кинетическим уравнением псеадо-

«

первого порядка. В таблице б приведены значения констант скорости гидролиза (к), жадс показателя линейной регрессии, вычисленные по методу наименьших квадратов, периоды полураспада (tic) и коэффициенты корреляции (г). Зависимость к от температуры описывается уравнением Аррениуса:

7,4839 10« RT

к » 9,5059 • 10« • с

Таблица б

Константы скорости реакции гидролиза хлогифена (к), периоды полупревраще-

ния 0i/s) h коэффициенты корреляции (г)

Анализируемый раствор рН Т,вК k.-10-Vi tiа, час г

Раствор хлогифена в воде Раствор хлогифена в стандартных буферах 2,24 293 4,34 ±0,06 443,6 0,9993

2,20 313 30,51 ±7,80 63,1 0,9925

2,20 333 148,Ю±21,32 13,0 0,9949

2,20 373 3153,15 ±221,58 0,6 0,9975

1,68 293 9,02 ±0.16 231,4 0,9991

3,56 293 1.31 ±0,02 1469,5 ~ 615,0 0,9985

6,86 293 3,13 ±0,06 0,9959

1 9,18 293 9,39±0,18 205,0 0,9992

Покоз&но сушестэешюе замедление процесса гидролиза хлогнфена при увеличь л«! концентрации соединения в растворе. Определены аетивационные параметры ipouecca • энергия, этропия и энтальпия охтивации.

2.ЕаэгаРоткя.мггедик контроле кйчгша.лсквртаснндй фермы садкшпинадм шъекиий. хдогифенн и асадина (субстанции и лскпрсгаснныс формы) методом вшетагвафот ИЛУНКИЛ Ш8&,<?<да&нта

Предложены методики анализа методом ТСХ лиофильно высушенной лекарст-еиной формы сарколизина, а также субстанций и лекарственных форм хлогифена асалнна.

Работа проводилась на готовых пластинках для тонкослойной хроматографии Silufol UV 254"("Kava!ier", Чехия) и "Kieselget 60 F254"(HMerck", Германия) с шциной слоя сорбента 0,25 мм на алюминиевой фольге или стекле.

Системы растворителей подобраны с учетом литературных данных по хроыато-»ефическому анализу аминокислот и производных ХЭЛ ("Hand-book of thin-layer iromalography", 1991).

Исследование лекарственной формы еярколизнна проводили с системе раство-гтсдгй и-бугаиол-70% уксусная кислота-вода в соотношении 6:3:2. В выбранной [схеме вспомогательные компоненты лекарственной формы, проявляясь на хрома-грамме в виде четких пятен (аскорбиновая, гяютаынновая кислоты), или полос >-иашшт) по лини:! хода растворителей, а также пятна ПВП на старте, не мешают ¡ределешпо хек самого сархояизнна, так и продуктоз его деградации (рис.1). Открываемый минимум для всех компонентов лекарственной формы составляет 5 • Ю'7 г при проавлеиии УФ-спетом и 1,0 ■ !0"7 г при обработке хромого граммы створом нннгндрина.

Дополнительными исследованиями методом ТСХ показано, что раствор-концентрат лгкарсгаеиноЯ формы сарколизина стабилен в течение двух часов. Технологические операции стерильной фильтрации, разлива во флаконы н лилфнлиза-ции не оказывают существенного влияния на хромктографические характеристики

сарколюииа.

л

Рис.1. Хромато грамма лекарственной формы сарколизина для инъекций с.020295 в системе н-бутанол-70%уксусная кислота-пода 6:3:2; сорбент "ЗПиГо1 НУ 254". 1 - сарколизнн (40 мкг); 2,5 • продукты деградации сарколизина; 3 • аскорбиновая кислота; 4 • глютаминовая кислота.

Для анализа субстанции и лекарственной формы хлогифена выбраны две системы растворителей. Система, включающая хлороформ-метанол-уксусную кислоту (лед.) 45:10:1. использована для разделения основного действующею вещества и продуктов его гидролитических превращений, а система хлороформ-метанол-вода 16:6:1 позволяет различить хлогифен и технологические примеси (и-хлорфеиилаланин и хлорэтилгндразин). Открываемый минимум для хлогифена и

возможных сопутствующих веществ одинаков и составляет 1 мкг (УФ-с»ст) и 0.5 мкг (нингидрнн и о-толндин).

Стабильность хлогифена в процессе хроматографировакия в обеих системах подтверждена двумерной хроматографией.

Разработанная методика использована дня изучения устойчивости хлогифена и эастворе-кониентрпте (не менее б часов/.

' . Объектами хроматографического исследования также являлись субстанция н -абистки асалина. Эффективность разделения асалнна и возможных специфических фнмссей в различных системах оценивали, рассчитывая величину разделяющей пособносгн.

Реально в препарате возможно присутствие аиетклелркоднзнна и хлоргидрата тизоеого эфира ваднна, обнаруживаемых в виде дополнительных (теневых) пятен пробах асакина свыше 500 ux$.

Чувствительность методики ■ 0,5 шт веществ в пробе при прояяленнк УФ' 59ТОМ н 1,0 мкг • при проявлении раствором ниигиарина шш парами нода.

Разработанная методика использована для анализа лекарственной формы аса-она. Пргцгзаритйдьно основное вещество экстрагировали ta таблеток этиловым миртом. Полноту экстракции асалнна оценивали, ср&вшгеая на хромаю граммах вощядь зоны адсорбции спиртового извлечения и интенсйвностъ ее окрашивания пятнами проб субстанции асалнна, а также по данным УФ-спектрофотометрнн в одигьных опытах.

З.ИзУчеиие стабильности и определение сроков годности протипоопухолсвм: лекарственных средств, производных ХЭА

Для определения сроков годности лекарственных форы с&рколнзима. хлогифеи и вселинв последние хранили в холодильной камере при температуре +8°с± 2°с Аналш качествапрепаратов проводили через каждые б месяцев по веем критериям включенным в проекты ВФС, по методикам, разработанным для стандартизаши (см. 1,2).

В таблице 7 приведены результаты количественного определения сарколцзшщ лекарственной форме с.161191 через 6.12.18 и 24 месяца хранения.

Таблица 7

Результаты количественного определения сарколтнна в лекарственной форм для инъекций с.(61 (91 методом УФ-спехтромстрнн при изучении сроков годносг

(Р= 95%, 1рл=2,57, п=6)

Серия Срок N Найдено

лекарственной хранения. пробы Сархолизина, г Метрологические

формы мес. характеристики

161191 - 1 0,0219 X 0.0220

2 0,0224 Б 2,90-10-«

з 0,0218 % 1,18-1СН

0,0222 Ах 3,04» 10-*

5 6 0,0219 0,6216 Б 1.38%

6 1 0,0219 X 0,0221

2 0,0221 % 2,32-10-»

3 0.0223 %х 9.49- Ю-5

4 0.0218

5 0,0221 Ах 2.44-10-«

6 0,0224 С 1,10%"

1 12 I 0,0220 X 0,0221

2 0.0227 Б 3,16-ю-<

3 0,0221 1,29-10-«

4 0,0218

5 1 0,0219 Ах 3,32-10-«

6 ! 0,0221 1 е 1,50%

Продолжение таблицы 7

Срок N Нейдсло

кгспрсгееяной храпения, Пробы Сарколизниа, г Метрологические

Ьорыы нее. характеристики

18 1 0,0218 X 0,0220

2 0,0216 S 2,65-10-«

3 0,0223 St 1,08-1(Н

4 0,0221

5 0,0212 Лх 2,78-10-«

б 0,0219 8 1,26%

24 1 0,0216 - X 0,0221

2 0,0222 S 3,26 »10^

3 0,0226 Si 1,33- 1<Н

4 0,0221

• 5 0,0222 Лх 3,42-ИИ

б 0,0220 s 1.55%

К&чгслгво летфорыы сархолизина контролировали также методом тонкослойной

?0иатеграфин. Отмечено, что в течение двух с половиной лет изменения спек-тльвш. п хроматограф«?чесгасх характеристик сарколхшша не происходит. , Лдя гэтерствеивой формы улргнфеня дополнительно проведено определение ¡епа Годаости «гтодоы "ускоренного старения при повышенной тсмпгратуре". В бякцг 3 значения экспериментальных сроков годности, коэффициенты

отвгггсгаш н расчетные сроки годности препарата. РассчитшшьШ срок годности кзрстеелиой формы хлогифена составляет два с половиной года при 20"с и ил use пята лег при хранении в холодильной камере.

Таблица 8

ОпЕЗЗИЮНае срока годности лекарственной формы хлогифена для инъекций ме-

цои "ускоренного старения"

о Коэффициент Экспериментальный срок Срок годности, сут.

«ютзетствня годности, сут.

0 4 230 904

0916

0 16 58 928

Установлено, что константа скорости деградации хлошфена в лекарственной форме резко возрастает с повышением температуры, и данная зависимосп описывается уравнением Арреииуса:

4,5269*10' ЛТ

к = 8.4152 • 10« е

Данные, полученные при "ускоренном стареют" подтверждены при хранешл хлошфена при температуре +8 0 ±2 * С (таблица 9).

Таблица 9

Результаты количественного определения хлогифена в лекарственной форм с.031092 для инъекций методом УФ-спектрометрии при изучении сроков годносг

(Ра95%, 1г.)=2.57, п^б)

Серия Срок хра- Найдено

лекарственной нения,мет. Хлогифена, Метрологические О*0/!)*4 О»0/ОЭТ4

формы г характеристики

031092 - 0,250 X 0,248 0,869 1,300

0,249 Э 1,34-10»

0,247 & 5,48-10"4

0,247

0.247 Ах * 1,41-10'

0,248 г 0,57%

б 0,233 X 0,236 0,860 1,337

0,239 Б 3,35-10-»

0,234 1,37-10»

• 0,240 «•г *

0,233 Дх 3,51-10-»

0,239 ё 1.49%

18 0,249 х . 0.246 0,864 1,336

0,247 Э 4.69-10»

0,249 й: 1,91-10»

0,237 1 ■

1 1 0.245 Дх 4.92-10-» 1 1 , 1

0,249 С 2.00% ! !

30 0,242 X 0.245 ! 0,860 1,328

0,240 $ 3.22-10» 1 ■ . '

I 1 0,246 1 & 1,32-10»' !

! 1 ! 0.249 I ■ 1 ■■

! 0.245 ; д* 3.39-10'

: • ! 1 0.246 ! г ' 1,38%

В таблице 10 представлены результат количественного определен!«

Таблица 10

Результаты количественного определения асалина в таблетках с.010293 методом УФ-спектрометрнн при изучении сроков годности (Р=95%, 1сг=2,57, п=6)

Серия лекар- Срок- № ' Найдено

ственной фор- хранения, пробы Асашша.г Метрологические

мы мес. характеристики

010293 - 1 0,2417 X 0,2385

• 2 0,2429 Я 3,25-10-'

3 6,2379 й 1,33-10-'

4 0,2381

5 0,2369 Ах 3,42-10'

б 0,2340 Б 1,43%

6 1 0,2412 X 0,2388

2 0,2449 Б 4,39-10'

3 0,2379 & 1,78-10-»

4 0,2402

5 0,2376 А* 4,58 • 10'»

б 0,2321 & 1,92%

12 1 0,2401 X 0,2371

2 0,2384 8 3,65-10»

3 0,2414 1,49-10-»

4 0,2342

5 0,2317 Ах 3,84-10-»

6 0,2370 Е 1,62%

18 1 0,2410 X 0,2360 •

2 0,2312 Б 3,41-10»

3 0,2368 5! 1,39-10-»

4 0,2452 Ах 3,58-10»

5 6 0,2381 0,2339 § 1,52%

24 1 0,2401 X 0.2371

2 0,2429 8 3,69-10'»

3 0,2319 81 1,51-10-'

4 0,2338 Дх 3,87-10»

5 6 0,2376 0,2360 £ 1,63%

По данным спектрофотометрического определения содержание основного деГ»^

стующего вещества в лекарственной форме в течение двук дет не снижается. Это

подтверждается также тем, что в течение указанного срока хроматографнческн характеристики асалнна не изменяются. Следовательно, лекарственная форма оса лниа в таблетках стабильна в течение не менее двух лет при хранении в холодиль ной камере.

ВЫВОДЫ

1 .Предложены методологические подходы к выбору основных критериев и мстодо: оценки качества противоопухолевых препаратов, производных хлорэтиламнна сарколизнна, хлогифена н асалнна.

2. Разработана методика количественного определения асалнна в субстанции мето дом сжигания в колбе с кислородом.

3. Разработаны высокочувствительные, унифицированные, специфичные методам для количественного определения сархолизина, хлогифена и асалнна в лекарствен ных формах и технологических растворах-концентратах методом прямой УФ' спектрофотометр ни,

- Показано, что методики позволяют определять изученные соединения з при сутствии продуктов их гидролитической деградации и вспомогательных веществ.

- Относительная ошибка определения препаратов спсюрофотометрическим методом не превышает 2%.

4. Разработаны чувствительные, селективные методики определения качества сар-колизина, хлогифена и асалнна в лекарственных формах методом хроматографии £ тонких слоях сорбента, позволяющие разделять основное действующее вещество продукты его разложения или полупродукты синтеза и вспомогательные ингредиенты лекарственных форм.

- Определены открываемые минимумы при про паленин УФ-светом (X 254 нм). тшгндриноы и о-тояиднном для саркадюина, хлогифена, асалина, продуктов их деградации и вспомогательных ингредиентов лекарственных форм.

• Выявлено, что раствор-концентрат лекарственной формы сарколизнна стабилен в течение двух, а раствор хлогифена • в течение шести часов, при комнатной температуре.

5-Изучена устойчивость исследуемых препаратов в различных условиях.

- Установлено, что гидролиз хлогифена в растворах описывается кинетическими уравнениями первого порядка. При этом зависимость константы скорости гидролиза от температуры описывается уравнением Аррениуса:

7,4839-Ю4 RT

к = 9,5059 - 10« • е

- Методом "ускоренного старения Гфи повышенной температуре" определено, что срок годности лекарственной формы хлогифена составляет не менее двух с по-аоаиной лет при +20°С ± 2°С и не менее пяти лет при хранении в холодильной камере (+8*С ± 2"С). Вывод подтвержден прямыми экспериментами изучения сроков годности хлогифена.

• Установлено, что лекарственные формы сархолизина-лно и асалина а таблетках зтабильны в течение двух лет при хранении в холодильнике (+8"С ± 2"С).

Список опубликованных работ по теме диссертации

I. Краснова М-А., Шпрах З.С., Оборотов» Н.А., Мартынова И.А., Хайдуков ЭЛ. Чиаяитичесхие и технологические подходы к созданию лиофилнзнрованной лекар-лвенной формы ИМБ-97 (хлогифена). II Материалы I конференции-конкурса НИМ ЭДнТО.-М.,1990.- С.17-21.

2. Краснова МЛ., Шпрах З.С., Панчева С. К вопросу о создании нормативно технической документации по контролю качества потенциального противоопуг.о левого препарата ИМБ-97(хлогифена). //Материалы Рабочего совещания. -София 1991. -2с.

3. Временная фармакопейная статья: Хлогифен. Утверждена НИИ ЭДнТО OHU РАМН 25.05.93.- 7 с.

4. Временная фармакопейная статья: Сарколизии-лио по 0,02 г для инъекций. Ут вержаеиа ФК МЗ РФ 15.11.94.-41 с.

5.Z-Shpr&kh.B. Kikoij. Pharmaceutical assays of new preparations derivatives о nitrogen mustard based on aminoacids, its peptides and hydrazidcs (Sarcolysm, Asalir and 1MB-97 (Chlogiphen))7/A1X-LEA Congress National de Farmacie: Rezuraat.- Cluj Napoca,RomSnia,1994.- P.309-310.

6. Временная фармакопейная статья: Асалии.Утверждена ФК МЗ РФ 12.01,95.-21 с

7. Временная фармакопейная статья: Таблетки асалина по 0.25 г. Утверждена ФР МЗ РФ 12.01.95.- 17 с.

8. Кикоть Б.С., Оборолва НА., Мартынова И.А.. Шпрах З.С., Смирнова З.С Разработка лиофилизированной лекарственной формы ИМБ-97 (хлогифена) и с предклиническая оценка.//11 Российский национальный конгресс "Человек и лекар ство":Тезлокл.-М.,1995.- С.198.

9. Кикоть Б.С., Шпрах З.С. Фармацевтические исследования новых противоопу холеных лекарственных средств, производных хлорэтиламина на основе аминокис лот, их пептидов и гпдразидов (сарколтоин, асалин, ИМБ-97(хлогифен)).//Н Рос сийский национальный конгресс "Человек и лекарство":Тез.докл.-М.,1995.- С.199.

Г). Оборотов» Н.А., Хайдуков ЭЛ.. Перетолчина Н.М.. Шпрах З.С., Кихогь Б.С.. арташова ТА., Устшскина С.В., Смирнова Л.И., Сыркин АХ. Новая лекарствен-ля форма сарколшнна /Л! Российский национальный конгресс "Человек и лекар-во": Тез. докл. -М.,1995.- С.202..

I. Z.Shprakh, N.Oborotova.^B-Kikotji. Pharmaceutical assays of new preparations rrivatives of nitrogen mustard based on aminoacids, its peptides and hydrazides a.colysin, Asalin and IMB-97 (Chlogiphen))i/6th International Congress of Antiulcer TreatmentiAbstr.- Peris, 1996.- P.208.

. Шпрах 3.C., Кикоть B.C., Оборотов« H.A., Полозкова АЛ. Изучение сроков дности новых лекарственных форм противоопухолевых препаратов, проиэвод-IX хлорэтиламина (ХЭА)-ЯШ Российский национальный конгресс "Человек ч ле-рстаои:Тез. докл. -М.,1996:- С.202.

Участоег киожктельной техники РКЦ РАМН

к печати 4 9. <5. 9 ¿J Заказ 9? Тираж -100 экз.