Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.01) на тему:Разработка, технологические, биофармацевтические и фармакологические исследвоания новых лекарственных форм нейропротекторного действия на модели фенибута и мефебута

ои13и„.____На правах рукописи

Сепп Владислав Валентинович

РАЗРАБОТКА, ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ, БИОФЛРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ И ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ НОВЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ НЕЙРОПРОТЕКТОРНОГО ДЕЙСТВИЯ НА МОДЕЛИ ФЕНИБУТА И МЕФЕБУТА

15.00.01. - технология лекарств и организация фармацевтического дел.« 14.00.25. - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

7 4 МАЙ 2007

Курск - 2007

003060186

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Волгоградский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научные руководители: доктор фармацевтических наук, профессор

Степанова Элеонора Федоровна доктор медицинских наук, профессор Тюренков Иван Николаевич

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, профессор

Панкрушсва Татьяна Александровна кандидат фармацевтических наук, доцент Крикова Анна Вячеславовна

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Санкт-Петрбургская химико-фарчацечтчческая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится «30» мая 2007 года в «75"^» часов на заседании диссертационного совета К 208 039 01 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (305041, г. Курск, ул К Маркса, 3)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО КГМУ Росздрава

Автореферат разослан «» апреля 2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета

Пашин Е.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Значительный рост количества сердечнососудистых заболеваний в мире, поражение ими наиболее трудоспособной части населения делает все более актуальным поиск новых эффективных лекарственных препаратов с кардио- и нейропротекторными свойствами для лечения этих патологий Среди путей создания новых лекарственных препаратов наиболее перспективным и продуктивным остается принцип модификации структуры эндогенных физиологически активных веществ

Производные гамма-аминомасляной кислоты (ГАМК) - медиатора торможения в ЦНС — используются в медицине достаточно давно, и, как показывает практика, успешно Сочетание ноотропного и нейропротекторного действия, нормализующего влияния на мозговое кровообращение со слабым седативным эффектом делает эти лекарственные препараты практически незаменимыми в консервативной терапии нарушений мозгового кровообращения самого различного генеза, а также когнитивных функций головного мозга

Фенибут является широко применяемым в клинике лекарственным веществом, обладающим ноотропным, нейропротекггорным, слабым анксиолитическим действием, антигипоксической активностью У мефебута - производного фенибута - экспериментально выявлена ноотропная активность, противогипоксическое и противоишемическое действие, способность улучшать физическую работоспособность и ускорять ее восстановление

Известно, чтог1 в практике применения лекарственных средств существенное влияние на скорость и степень проявления терапевтического эффекта оказывает не только лекарственное вещество, но и весь комплекс фармацевтических факторов, задействованных в процессе разработки лекарственного препарата вид и количество вспомогательных веществ, физико-химические свойства формообразующих компонентов, способ введения, вид лекарственной формы, а также технология ее производства

\

В настоящее время в клинике успешно применяется таблетированная лекарственная форма фенибута, однако введение лекарственных средств в форме таблеток не всегда адекватно задачам лечебного процесса Так, таблетированные формы не рекомендуют принимать детям до семи лет В ряде случаев таблетки оказывают раздражающее действие на слизистую оболочку желудочно-кишечного тракта, а с учетом длительности курсового применения ноотропных средств, это нежелательное действие становится фактором, ограничивающим длительное применение препарата По современным рекомендациям ВОЗ инвазивные способы введения лекарственных препаратов имеют ограниченные показания Поэтому при ряде острых состояний требуется такая лекарственная форма, которая обеспечивала бы максимально быстрое поступление лекарственного препарата в кровяное русло, минуя при этом действие ферментов желудочно-кишечного тракта и печеночного метаболического барьера В связи с вышеизложенным станоншеи несомненной актуальность поиска и разработки оригинальных лекарственных форм нейропсихотропных препаратов, таких как фенибут и мефебут, и их фармакологические исследования

Цели и задачи исследования. Целью исследований является создание новых лекарственных форм фенибута и мефебута - сиропа и суббукального геля, — проведение технологических, биофармацевтических и фармакологических исследований, составление нормативной документации

Для реализации цели предстояло решить следующие задачи

- изучить основные тенденции в практике применения ноотропных средств, в частности производных ГАМК, и обосновать необходимость создания новых лекарственных препаратов на основе мефебута и фенибута,

- провести анализ современного состояния и перспектив развития технологии трансдермальных лекарственных форм, разработать состав и технологию изготовления корригированной лекарственной формы для исследуемых моделей - сиропа и провести его технологические и биофармацевтические исследования,

разработать состав и технологию изготовления суббукального геля мефебута и провести его технологические, реологические и биофармацевтические исследования,

- провести изучение влияния фенибута в разработанной лекарственной форме (сиропе) в сравнении с его субстанцией на спонтанную двигательную активность и ориентировочно-исследовательское поведение, память и обучение, мнестическую функцию,

- провести фармакологическое исследование нейротропной активности мефебута в разработанных лекарственных формах (сиропе и суббукальном геле) в сравнении с его субстанцией,

- изучить влияние мефебута в разработанных лекарственных формах на мозговое кровообращение в условиях ишемии головного мозга,

- изучить возможное местнораздражающее действие суббукального геля мефебута,

- разработать методику количественного определения фенибута и мефебута в лекарственных препаратах,

- составить нормативную документацию на разработанные лекарственные

* *

препараты фенибута и мефебута - фармакопейную статью предприятия (ФСП)

Научная новизна проведенных исследований заключается в следующем впервые создана транедермальная лекарственная форма на модели оригинального отечественного лекарственного вещества мефебута, проведены ее технологические, реологические и биофармацевтические

исследования, в результате чего установлена целесообразность и оптимальность технологической схемы, предложены оригинальные жидкие корригированные лекарственные формы — сиропы мефебута и фенибута для внутреннего применения, предназначенная для использования в детской практике, впервые проведены

фармакологические исследования нейротропной активности суббукапьного геля мефебута Показана и обоснована эффективность мефебута в виде суббукальной лекарственной формы по сравнению с его субстанцией, обоснованы методически и выполнены фармакологические исследования нейротропной активности корригированных лекарственных форм — сиропов фенибута и мефебута, отмечены различия в их активности Впервые установлено, что мефебут в виде 2% геля более выражено, чем сироп увеличивает церебральный кровоток как в условиях нормы, так и в условиях ишемии головного мозга Впервые показано, что разработанный 1ель мефебута при нанесении на слизистую десны животных не оказывает местного раздоажающего действия Впервые выполнено аналитическое сопровождение технологического процесса с использованием методов ВЭЖХ и спектрофотометрии

Практическая значимость работы. Разработанный в результате проведенных комплексных исследований 2% гель мефебута может применяться в качестве ноотропного средства со слабым анксиолитическим эффектом при нарушениях мозгового кровообращения, в случае, когда применение пероральных и инвазивных лекарственных форм препаратов затруднено

Можно предполагать, что предложенные оригинальные сиропы фенибута и мефебута могут быть использованы в детской и в гериатрической практике, а гель мефебута и в условиях терапии неотложных состояний

Внедрение результатов работы в практику. Разработан и принят к рассмотрению ОАО «Екатеринбургская фармацевтическая фабрика» (г

Екатеринбург) проект фармакопейной статьи предприятия (ФСП) на сироп фенибута 2% (акт внедрения от 10 03 2006 г )

Основные положения, выносимые на защиту. На защиту выдвигаются следующие положения и результаты исследований результаты технологических и биофармацевтических исследований геля мефебута 2%, результаты технологических и биофармацевтических исследований сиропов фенибута 2% и мефебута 2%, результаты фармакологических исследований суббукального геля мефебута 2%, результаты фармакологических исследований сиропов мефебута 2% и фенибута 2%, результаты оценки качества разработанных лекарственных форм методом ВЭЖХ, спектрофотометрически

Апробация и публикация результатов исследования: Основные положения диссертационной работы доложены на 61-й открытой итоговой научной конференции студентов и молодых ученых Волгоградского государственного медицинского университета «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины» (г Волгоград, апрель 2003 г), П1 региональной научно-практической конференции молодых ученых и студентов «Медицинская наука и здравоохранением (г Анапа, апрель 2005 г), 63-и открытой итоговой научной конференции студентов и молодых ученых Волгоградского государственного медицинского университета «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины» (г. Волгоград, апрель 2005 г), 4-й и 5-й конференции молодых ученых Северо-Осетинской государственной медицинской академии «Молодые ученые - медицине и практическому здравоохранению» (г Владикавказ, май 2005 г , 2006 г ), 61-й региональной конференции по фармации, фармакологии и подготовке кадров (г Пятигорск, февраль 2006 г)

По результатам исследований опубликовано 7 печатных работ Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук: Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно -

исследовательских работ ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Росздрава» в рамках проблемы «Фармация».

Объем и структура диссертации Диссертационная работа изложена на 134 страницах машинописного текста, содержит 49 таблиц, 21 рисунок, состоит из «введения», обзора литературы (1 глава), 1 главы, посвященной материалам и методам исследований, 3 глав собственных исследований, общих выводов, списка литературы и приложений Список литературы включает 135 источников, в том числе 47 иностранных

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 1. Разработка состава и технологические исследования геля мефебута Первый этап наших исследований заключался в подборе вспомогательных компонентов, которые обеспечивали бы высокую степень высвобождения действующего вещества и способствовали улучшению структурно-механических свойств геля. С этой целью изучалась возможность применения ПЭГ-400, ПЭГ-1200, Ыа-КМЦ, МЦ, карбопола-940 и др (табл 1)

Таблица 1 - Состав гелевых композиций с мефебутом

Компоненты геля Вид основы, в %

МЦ КМЦ ПЭГ 400 + ПЭГ 1200 карбопоч-940

1 2 3 4 5

Мефебут 2,0 2,0 2,0 2,0

1 ] роп и л е шли кол ь 10,0 10,0 - 15,0

Трилон Б 0,03 0,03 - 0,03

Натрия метабисульфит 0,10 0,10 - 0,10

Консервант (нипагин, нипазол) 0,3 0,3 0,3 0,3

МЦ 6,0 - - -

КМЦ - 6,0 - -

ПЭ1 400 - - 67 -

ПЭГ 1200 - - 31 -

Карбопол - - - 1,0

Натрия гидроксид - - - 0,3

Вода очищенная 59,0 59,0 65,0 59,7

При выборе оптимальной основы использовали следующи

технологические и биофармацевтические методики диффузии в 2°,

желатиновый гель, диффузии через полупроницаемую мембрану; исследование реологических свойств полученных нами гелей проводили с помощью прибора Bmokfield PV-DV П+PUO (USA).

Результаты биофармацевтических исследований гелей на указанных основах приведены на рис. 1.

час

Рисунок I - Диаграмма степени высвобождения действующих веществ из гелей на разных гелевых основах

Как следует из рисунки, наиболее полно и равномерно действующие вещества высвобождались из геля на основе карбопола-940.

Результаты исследования структурно-механических характеристик приведены в табл. 2.

Таблица 2 - Эффективная вязкость гелей с мефебутом

Скорость сдвига Дс"' Эффективная вязкость (г[), Па*с

¡ель на основе Na КМЦ гель на основе МЦ гель на основе карбопола-940

0,333 243,0 318,0 1560,0

0.6 146,7 193,37 1070,21

1,0 94,0 125,0 734,0

1,8 57,27 75,06 475,94

3,0 37,66 50,00 305,64

5,4 23,71 31,3 -

Касательное напряжение сдвига, действующее в геле, определяли по

двум диапазонам жесткости прибора, отличающимся по чувствительности измерения, для каждого из которых имеется своя цилиндровая константа.

Оказалось, что значения эффективной вязкости укладываются а границы реологического оптимума консистенции, а предел адгезионной

прочности находился в области 5,85-6,0, что свидетельствует о значительной вязкости и липкости полученного геля Из таблицы видно, что вязкость гелей с мефебуюм зависит от скорости сдвига Гели с мефебутом обладают аномальной вязкостью, что подтверждает функциональная зависимость ее значений от скорости сдвига

Реограмма на примере геля, полученного на основе карбопола-940, приведена на рис 2 Полученные кривые образуют значительные петли гистерезиса

Дс' 160 140 120 100 80 60 40 20 О

0 1 2 3 4

х, ч/м2

Рисунок 2 - Реограмма течения геля с мефебутом на основе карбопола-940

Наличие восходящих и нисходящих петель гистерезиса указывает на то, что исследуемые гели обладают тиксотропными свойствами Наличие тиксотропных свойств у исследуемых гелей характеризует хорошую намазываемость и способность к выдавливанию из туб Построенные кривые течения также подтверждают, что гели с мефебутом являются структурированными системами

Течение гелей начинается после некоторого приложенного напряжения,, необходимого для разрыва элементов структуры В период вновь убывающего напряжения вязкость исследуемых систем по восстановлению прежней структуры запаздывает Участки прямых на реограмме течения соответствует полному разрушению структуры

Механическая стабильность (МС) для гелей на основах МЦ, карбопол составила от 1,02 до 1,32, для геля на основе КМЦ- 2,57

Это позволяет предполагать, что гель на основе карбопола-940 можно признать оптимальной гелево й композицией для мефебута Нами предложена следующая технологическая схема получения геля с мефебутом (рис 3) Наиболее значим технологический этап гомогенизации геля, который может быть выполнен с использованием современных гомогенизаторов

ВР I I Санитарная обработка

ВР 1 3 Санитарная подготовка

ВР 1 4 Подготовка воздуха

ВР 3 I Мойка флаконов и крышек

ВР 3 2 С\ шка флаконов и крышек

ВР 4 I Отмеривание и отвешивание ингредиентов

I 777 з I Приготовление аозы очищенной

ТП 5 2 Приготовление раствора мефебута

ТТТ 5 3 Фильтраиия раствора

ТП 6 I Набухание преобразователя

ТП 6 2 Загчщение гелеобралователя

ТП б 3 Фильтрация гелевой основы

ТП 7 I Смешивание компонентов

ТП 7 2 Гомогенизация

| ТП 7 3 Стандартизация ген

| УМО 8 I Фасовка продукта ^

УМО 8 2 Упаковка продукта

| ВР I 2 Санитарная обработка обору довзния

1п.

ь

>

ВР I Кг Санитарная годготоака

производства

ВР 2 Получение воды очишенной

1

ВР 3 Подготовка

1, ВР 4 Кт Подготовка

Г сырья

ТП 5 Поту-чемие раствора мефебута

Потери

•ШбКт

Принтов п^нне основы

геля

ТП 7 Кт Получение

гетя

-4

Потери

УМО в Фасовка и упаковка готовой про (УКЦИИ

Готовая На склад

ПроЛУКЦНЯ

Рисунок 3 - Технологическая схема производства геля мефебута

Таким образом, предложенная схсма традиционно и технологична, может быть выполнена в рамках фармацевтического предприятия

Количественное определение мефебута в 2% геле проводили с помощью УФ-спектрофотометрии при длинах волн 244 нм и 263 нм, сначала в максимуме поглощения при 244 им, затем при 263 нм При измерениях использовали рабочий стандартный образец (PCO) мефебута, оптическую плотность которого измеряли при тех же длинах волн Установлено содержание мефебута в геле 1,99%±0,0093%

Также нами была проведена разработка методики качественной идентификации и количественного определения мефебута в геле методом ВЭЖХ Работу проводили на приборе «Милихром А-02», снабженном колонкой размером 2x75 мм, в качестве сорбента использовали Силасорб С18 Для реализации поставленной задачи был выбран градиентный ре-чч"; элюирования. При выборе методики ВЭЖХ анализа хроматографировали водные растворы субстанции мефебута в изократическом и градиентном режиме с детекцией при длине волны 280 нм, соответствующей максимуму поглощения лекарственного средства Установлено содержание мефебута в геле 1,99%±0,0028%

Количественное определение нипагина и нипазола проводили методом ВЭЖХ с использованием внешнего стандарта Колонку термостатировали при температуре 30°С Детектирование пиков проводили с помощью ультрафиолетового детектора при длине волны 254 нм Последовательно в колонку хроматографа вводили 20 мкл калибровочного и испытуемого раствора Установлено содержание консервантов 0,05%±0,0034%

Сроки годности геля устанавливали по следующим критериям описание, однородность, подлинность, количественное содержание мефебута в геле Гели (5 серий) хранили в широкогорлых банках из оранжевого стекла с навинчивающимися крышками в естественных условиях Было установлено, что срок годности геля составляет 2 года

2. Разработка состава и технологические исследования сиропов

фенибута и мефебута В педиатрической практике находит широкое применение фенибут Он применяется при логоневрозах, астенических состояниях подросткового возраста, психических отклонениях развития и других заболеваниях и синдромах Определенные неудобства при использовании лекарственных препаратов ГАМК в детской и гериатрической практике связаны с отсутствием на фармацевтическом рынке необходимых лекарственных форм ГАМК

Далее нами был разработана лекарственная форма - сироп Растворение действующего вещества (фенибут и мефебут) в значительном объеме сиропа снижает риск развития побочных эффектов со стороны желудочно-кишечного тракта Кроме того, коррекция вкуса в значительной мере облегчает прием и делает лечение более приятным Сиропы мефебута и фенибута готовили по традиционной технологии Для этого нами были изучены простой сахарный сироп, раствор сорбита, раствор фруктозы и их сочетания

Для предварительной биофармацевтической оценки жидких лекарственных форм использовали модельный метод "m vitro", основанный на диализе действующих веществ через полупроницаемую мембрану с последующим их определением в диализате (рис 4) Испытания проводили методом диализа через целлофановую мембрану при температуре 37 ± 1°С Через каждые 2 часа проводили забор проб, которые анализировали спектрофотометрическим методом при длинах волн 244 нм и 263 нм (для мефебута) и 257 нм и 275 нм (для фенибута

Было установлено, что действующие вещества - фенибут и мефебут — достаточно полно и равномерно высвобождаются из сиропов

Исследования микробиологической чистоты, проведенные по стандартной методике ГФ XI показали, что сиропы нестерильны и обсеменены, в основном, бактериальной флорой Свежеприготовленные

сиропы укладываются в нормы микробиологической чистоты категории 36, однако бактериостатическим действием основа не обладает и необходимо использование консервантов (табл 3)

Было установлено, что добавление консервантов улучшает микробиологическую чистоту сиропов мефебута и фенибута Таблица 3 — Результаты определения микробиологической чистоты сиропов мефебута и фенибута

Объект исследования -консервант Число жизнеспособных микроорганизмов в 1 г основы Наличие бактерий

бактерий грибов

хранение 30 суток хранение 6 месяцев хранение 30 суток хранение 6 месяцев

Натрия бензоат 0,2% 40 90 менее 10 менее 10 нет

Натрия бензоат 0,5% 20 50 менее 10 менее 10 нет

Нипагин 0,1% 60 180 менее 10 менее 10 нет

Нипагин 0,2% 40 по У\} -____ 1 л мсм€с 1и ------1 п МЬПЬЬ 1 V/ нет

Консервирующие свойства у натрия бензоата и нипагина оказались приблизительно одинаковые по отношению к бактериальной флоре Натрия бензоат лучше растворим в водной среде и, имеет нейтральный вкус и запах, поэтому мы выбрали его для консервации сиропа в концентрации 0,05%

Наблюдение за хранением сиропов фенибута и мефебута проводили на 5 лабораторных сериях в естественных условиях Критерием служило соответствие анализируемого образца требованиям разработанной нами ФСП Предварительно установлено, что сиропы мефебута и "фенибута стабильны в течение 2-х лет В результате проведенных исследований был установлен окончательный состав сиропов фенибута и мефебута

Фенибут (мефебут) 5,0

Сорбит 40,0

Сахароза (или фруктоза) 24,0

Натрчя бензоат 0,0

Вода очищенная до 100,0

Технологическая схема сиропов фенибута и мефебута приведена на рис 5

ВР I I Санитарная обработка

BP I 2 Санитарная обработка оборчдования

BP I 3 Санитарная подготовка

BP I 4 Подготовка воц\\а

ВР 1 Мойка ф1акомов м крышек

ВР 3 2 Смака фпаконов и крышек

ВР 4 I Отмеривание л oTBiUinsahrU. и (Гргог eures

ВР 4 2 Измспьченне и отвешивание чефсб\та

ТП 1 Приготовление во tu очишенной

7П 2 Прнготов1енис раствора «ефебутэ

"TTI ■» 3 Фильтрация раствора

ТП 6 I Растворение сахара в вод*.

ТП 6 2 Гомогенизация сирога

ТП 7 2 Гомогенизация

ТП 7 3 Стандартизация rei»

УМО 8 I Фасовка гтродл кта

УМО 8 2 Упаковка прод> кта

3—

К-1

>-1

In

ВР 1 Кт Санитарная

подготовка

производства

♦

ВР 2 Потлчение воды

очищенной

4

ВР 3 Подготовка

* тары

ВР 4 Кт Подготовка сырья

ТП 5 Получение раствора мефебмз (¿eurfva)

ТП6 Кт

Приготовление сиропа

ТП 7 Кт Получение сиропа мефебута (фен иб\та)

УМО 8 Фасовка и \паковка готовой продукции

Потери

Потери

Готовая На склад

продл кция

Рисунок 5 - Технологическая схема сиропов фенибута и мефебута

Таким образом, технологическая схема производства сиропа позволяет использовать как монокорригирующую систему в виде раствора сахара, так и комбинированную в виде сахара и сорбита Количественное определение мефебута и фенибута в сиропах проводили с помощью УФ-спектрофотометрии с использованием PCO, оптическую плотность растворов измеряли при двух длинах волн - 244 нм и 263 нм для мефебута и 257 нм и 275 нм для фенибута

Установлено содержание мефебута в сиропе 1,99%±0,0548%, фенибута в сиропе 2,00% ±0,0691 %

3. Фармакологические исследования суббукального геля мефебута и сиропов фенибута и мефебута Изучение психотропной активности сиропа фенибута 2%, сиропа мефебута 2% и 2%-ного геля мефебута проводилось в стандартных психофармакологических тестах «Открытое поле» (ОП), «Приподнятый крестообразный лабиринт» (К-Л), «Условная реакция пассивного избегания» (УРПИ), «Тест экстраполяционного избавления» (ТЭИ), позволяющих оценить состояние спонтанной двигательной и ориентировочно-исследовательской активности, возможное анксиолитическое, антифобическое действие, когнитивных функций животных, а также уровни эмоционального реагирования Влияние лекарственных препаратов на состояние церебрального кровотока изучалось в условиях экспериментальной ишемии головного мозга, вызванной одномоментной необратимой окклюзией общих сонных артерий Регистрацию локального мозгового кровотока проводили в теменной области головного мозга крыс с помощью ультразвукового допплерографа для исследования кровотока

После курсового применения фенибута и мефебута в виде сиропа и мефебута в виде геля отмечалось существенное в сравнении с контролем повышение горизонтальной двигательной активности Также достоверно увеличивалась суммарная ориентировочно-исследовательская активность (рис 6)

(Л

II н

К О

с а

■_ О]

й 0

л н

+ о

Покрои ниб^т.' 2'И.

О;;.> ! мс^сбута

2%

СЗ ¡СЛ1. МГ:|>С\;, : Л □ (сироп)

Ш \г'Ч .1\У. I субстанция

Рмефеуут СубсШМЦНЛ

в контроль

Рисунок 6 - Влияние на ориентировонно-исследовательское повеление животных » тесте «открытое поле»

При зтом по выраженности перечисленных -эффектов пероральные формы фенибута и мефебута практически не уступали этим же веществам при их и нтр от ¡ер и тонеаль н о м аведении. Мсфебут-гель достоверно превосходил в данном тесте и мефебут-сироп, и мефебут-еу беганцию.

Число выходов в центральную зону открытого поля было значительно выше у животных, полу чае ЩИК феннбут и мефебут в лекарственных формах.

При этом по выраженности перечисленных эффектов пероральные формы фенибута и мсфебута не уступали этому же веществу при его интроперитонеальном введении. Мефебут в лекарственной форме и его субстанция оказывали более выраженное действие по сравнению с сиропом фенибута и его субстанцией, а мефебут-['ель достоверно превосходил в данном тесте и мефебут-сироп, и мефебут-субстан цию,

В тесте приподнятого крестообразного лабиринта изучаемые вещества во всех лекарственных формах оказывали однонаправленное действие: вызывали достоверное по отношению к контролю увеличение времени, проводимого животными в открытых рукавах лабиринта, что свидетельствует о снижении уровня тревожности и страха (рис.7).

2 »

а. ш

□ 13[>смя й

Открыт Ь^ рукзвах

□врцмЧ Р

V1 >. Р Ь ГЫХ

рукщлх

О нремя и

центральной юис

сиийЛ снроп геЛЬ КОНТРОЛЬ фСНЦЙут »:.■»■ I роль

фсшбущ мсфобут? "'Г'"': ■ £) СИРА1'

г% п.

Рисунок 7 - Продолжительность пребывания ъ различных отсеках крест-лабиринта

Антитревожный компонент был более выражен у животных, получавших фен и бут, чем мефебут в разработанных лекарственных формах.

Одновременно у животных, получавших мефсОут, си мечено уменьшение времени, проводимого в центральной зоне (как показатель положительного влияния на скорость принятия решения) и увеличение двигательной активности (по сумме стоек и переходов в различные отсеки лабиринта).

Влияние лекарственных препаратов на процессы обучения и памяти было изучено в тестах УРПИ и ТЭИ (рис. 8). Тест УРПИ выполнялся в три этапа: □ первый день животные обучались навыку избегания аверсивной среды, во второй день проводилось первое воспроизведение навыка, на основании результатов которого формировались однородные группы по латентному периоду первого захода в темный отсек и времени пребывания в нем, затем после курсового приема препаратов проводилось повторное воспроизведение навыка.

180,0160,0140,0-^ 120,08 юо,о-«

3 80,0-ш

я 60,040,020,00,0 \

Рисунок- В - Влияние на обучение и намять животных в гесте «условная реакция пассивного избегания»

На основании полученных данных (рис.8) можно сделать вывод о том, что фенибут и мефебут в исследуемых лекарственных формах улучшают сохранение памятного следа. Мефебут в форме сиропа незначительно уступал субстанции по влиянию на память и обучение, а в виде геля заметно превосходил по ноотропному действию мефебут и в виде сиропа, и в виде водного раствора.

Тест гжстрагголяционпого избавления выполнялся в два этапа сразу после введения препаратов: в первый день изучалось влияние исследуемых лекарственных форм препаратов на обучаемость животных, во второй день проводилось воспроизведение навыка для оценки памяти. Но результатам этого теста было выявлено положительное влияние на параметры обучения и памяти всех лекарственных форм изучаемых препаратов. Так, на второй день животные всех групп, получавших мефебут и фенибут в виде субстанции й в лекарственных формах быстрее решали задачу экстраполя ционного избавления, чем животные контрольных групп. При повторном воспроизведении этого теста разница в принятии решений еще более очевидна. Так, время избавления от аверсивной среды животных, получавших мефебут-сироп и, особенно, мефебут-гель было в 2,5 раза короче

чем у животных контрольных групп В изучаемых лекарственных формах мефебут и фенибут не уступают по влиянию на мнестическис функции субстанции

Ранее было установлено, что фенибут, существенно не влияя на мозговой кровоток в условиях нормы, повышает функциональную устойчивость мозгового кровообращения в условиях значительных флуктуации системного артериального давления Действие мефебута на »»озговую гемодинамику ранее не изучалось Поэтому было изучено влияние лекарственных форм мефебута в сравнении с субстанцией этого препарата на мозговой кровоток в условиях глобальной ишемии мозга допплерографическим методом Исходный мозговой кровоток у животных контрольных групп составлял в среднем 24+0,42 уел ед, среднее артериальное давление равнялось 90-100 мм ртст Уровень локального мозгового кровотока у животных, получавших мефебут в различных лекарственных формах был выше, чем у животных контрольных групп и составил в группе, получавшей сироп 26,1±0,4 уел ед, гель - 27,1±1,2 уел ед, а раствор для интраперитонеального введения - 27,2±0,5 уел ед На фоне окклюзии общих сонных артерий и снижения системного артериального давления локальный мозговой кровоток у животных контрольных групп снижался более чем в два, составляя на 30-й минуте после окклюзии в среднем около 36% от исходного уровня, в то время как в группах животных, получавших мефебут в виде сиропа и в виде геля мозговой кровоток составил, соответственно, в среднем 69% и 74% от исходных показателей Мефебут в виде 2% геля сильнее чем сироп увеличивал церебральный кровоток как в условиях нормы, так и в условиях глобальной ишемии головного мозга Таким образом, мефебут в условиях глубокой редукции церебральной гемодинамики, вызванной двухсторонней перевязкой общих сонных артерий (крупнейших магистральных сосудов, питающих мозг) способствует меньшему падению мозгового кровотока в сравнении с контролем

Исследование раздражающего действия геля с мефебутом проводили при 10-дневной аппликации на слизистую десны (табл 4, 5) Таблица 4 — Влияние геля с мефебутом на воспаление (отек) слизистой десны у крыс

Группа животных №п/п Препарат Содержание биожидкости в % Изменение содержания биожидкости, Д%

1 (контрольная) Физиологический раствор 59,23 + 3,81 0

2 (опытная) Гель с мефебутом 60,11 +2,96 1,5 ±2,3

Таблица 5 - Влияние 10-дневной аппликации геля с мефебутом на слизистую десны на состояние микроциркуляции

Группа животных № п/н Препарат Vam (скорость кровотока в слизистой десны), уел ед

1 (контрольная) Физиологический раствор 8,93 + 0,36

2 (опытная) Гель с мефебутом 8,62 ± 0,40

Таким образом, полученные в этой серии экспериментов данные свидетельствуют о том, что гель с мефебутом местного раздражающего действия не оказывает (не вызывает гиперемии, отека, снижения кровотока в слизистой оболочке десны)

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1 Проведен выбор и осуществлено биофармацевтическое обоснование новых оптимальных лекарственных форм фенибута и мефебутам — корригированных сиропов и суббукального геля мефебута

2 Разработан суббукальный гель мефебута (2%) с использованием композиции вспомогательных веществ - гелеобразователя карбопол-940 и консервантов - нипагина и нипазола (0,05%)

3 Выполнены его биофармацевтические исследования in vitro и проведено определение реологических параметров на вискозиметре Brookfield PV-DV II+PUO (USA) Были впервые доказаны его тиксотропность, оптимальные адгезивные свойства, определена механическая стабильность, равная 1,15

4 Установлены нормы качества для геля мефебута 2% с использованием методик количественного определения действующих компонентов -

ВЭЖХ (при длине волны 280 нм) и спектрофотометрии (при длинах волн 244 и 263 нм) Количественное содержание мефебута составило 1,99°/Ш),0028% (при определении с помощью ВЭЖХ) и 1,99%±0,0093% (при спектрофотометрическом определении)

5 Разработаны составы корригированных лекарственных форм - сиропов -мефебута и фенибута и показано, что оптимальной корригирующей системой является комбинированная - сахар и сорбитол

6 Установлены нормы качества для сиропов фенибута 2% и мефебута 2% с использованием спектрофотометрической методики количественного определения действующих компонентов (при длинах волн 244 и 263 нм для мефебута и 257 нм и 275 нм для фенибута) Количественное содержание мефебута составило 1,99%+0,0548% и фенибута 2,00%+0,0691%

7 Проведены фармакологические исследования нейротропной активности разработанных лекарственных форм (сиропов) фенибута 2% и мефебута 2% Выявлено, что они оказывают достоверно более выраженное ноотропное действие, чем их субстанции, а сироп мефебута 2% оказывал на животных более выраженное ноотропное действие, чем сироп фенибута 2%

8 Суббукальный гель мефебута оказывает более выраженное ноотропное действие, чем его субстанция и чем сиропы фенибута 2% и мефебута 2% Доказано, что эффективность действия мефебута в 2% геле превосходит по результатам его действие при внутрибрюшинном введении водного раствора мефебута

9 Гель мефебута 2% при однократной и десятидневной аппликации на слизистую десны не вызывает заметной гиперемии, отека, ухудшения микроциркуляции, т е не оказывает раздражающего действия

10 Составлен и принят к рассмотрению проект фармакопейной статьи предприятия на разработанный сироп фенибута 2% для Екатерчнбургской фармацевтической фабрики

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1 Исследования ноотропной активности суббукальной и пероральной лекарственных форм мефебута И Тез докл IV конференция молодых ученых Северо-Осетинской государственной медицинской академии - Владикавказ,

2005 - С 75-76

2 Багметов, М Н Спектр психотропной активности сиропа мефебут / МН Багметов, В В Епишина // Человек и лекарство тез докл 12-го Рос нац конгр 18-22 апреля 2005г -М,2005 - С 638

3 Степанова, Э Ф Сравнительная оценка психотропной активности различных лекарственных форм мефебута / Э Ф Степанова, В В Епишина, МН Багметов//Человек и лекарство тез докл 12-го Рос нац конгр 18-22 апреля 2005г - М , 2005 - С 705-706

4 Степанова, Э Ф Биофармацевтические и фармакологические исследования корригированных лекарственных форм фенибута и мефебута / Э Ф Степанова И Н Тюренков // Тез докл V конференция молодых ученых Северо-Осетинской государственной медицинской академии - Владикавказ,

2006 - С 78-79

5 Карапетьян, Г В Производные ГАМК перспективы использования в медицине и разработка ректальных лекарственных форм аминалона / Г В Карапетьян, Э Ф Степанова // Медлайн-зкспресс - СПб , 2006 -№4 -С 47-49

6 Тюренков, И Н Разработка состава и исследование новых лекарственных форм на основе ГАМК / И Н Тюренков, Э Ф Степанова // Известия ВУЗов Северо-Кавказский регион. Естественные науки Спец выпуск Фармакология - Ростов-на-Дону, 2006-С 30-31

7 Степанова, Э Ф Разработка состава, технологические, биофармацевтические и фармакологические исследования сиропа фенибута / Э Ф Степанова, И Н Тюренков, И А Насырова // Омский научный вестник -2006 -№37 (прилож) - С 150-152

Сдано в набор 2/04 200? г Подписано в печать 27 04 2007 г Формат 30x42'/° Бумага офсет ная Гарнитура Times New Rom Печать ротапринтная Уел печ л 1,0 Тираж 100 экз Заказ № $63^ Ротапринт ГОУ ВПО Пятигорская ГФА Росздрава г Пятигорск, пр Калинина, 11