Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Разработка способов флуориметрического определения производных хромен- α -пирона и карбокромена и их применение в фармацевтическом, биофармацевтическом и фитохимическом анализе

Р Г Б ОД

I , ОЛ ОЗ

На правах рукописи

ГРИГОРЬЕВА ТАТЬЯНА МИХАЙЛОВНА

РАЗРАБОТКА СПОСОБОВ ФЛУОРИМЕТРИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ ХРОМЕН- а -ПИРОНА

И КАРБОКРОМЕНА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОМ, БИОФАРМАЦЕВТИЧЕСКОМ И ФОТОХИМИЧЕСКОМ АНАЛИЗЕ

15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

КУРСК-1999

Работа выполнена в Курском государственном медицинском университете.

Научный руководитель: доктор фармацевтических наук,

профессор А.А.Хабаров

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук,

профессор В.Н.Бубенчикова

доктор фармацевтических наук, профессор Н.С.Евтушенко

Ведущая организация - Научно-исследовательский

институт фармации

Защита состоится « 1999 г. в 15 часов на

заседании диссертационного совета К 084.57.02 при Курском государственном медицинском университете (305033, г. Курск, ул. К.Маркса,3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Курского государственного медицинского университета.

Автореферат разослан 1999 г. Ученый секретарь

диссертационного совета //

кандидат медицинских наук, доцент г^д*/ ¿Л Е.НЛашин

РЛ?/ • о

Общая характеристика работы

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ. Современное развитие фармации и медицины, расширение номенклатуры лекарственных средств, требует постоянно развивающихся и совершенствующихся методов анализа биологически активных соединений в различных объектах. В лекарственных формах с целью контроля их качества, в растительном сырье, служащем источником получения широкой группы препаратов, в биологических жидкостях организма человека для проведения фармакокинетических исследований, коррекции схемы дозирования лекарств с целью их рационального, безопасного, эффективного и индивидуального назначения.

Для этого необходимы современные, высокочувствительные и селективные, точные методики качественного и количественного анализа лекарственных веществ в различных объектах.

Большинство научных исследований в этом направлении основываются на использовании различных приемов анализа органических соединений и поиске новых путей решения поставленных задач.

В арсенале методов, применяющихся в фармацевтическом, биофармацевтическом и фитохимическом анализе, особое место занимает флуоресцентный анализ, обладающий высокой точностью, селективностью и чувствительностью. Известно достаточное количество способов флуориметрического определения органических и неорганических веществ в различных объектах. Однако, применение их в фармацевтическом и биофармацевтическом анализе имеет все еще ограниченный характер в связи с недостаточной изученностью способности соединений различного химического строения флуоресцировать при достижении определенных условий.

Вместе с тем, известно, что способностью флуоресцировать обладают природные и синтетические кумарины, широко использующиеся в качестве лекарственных средств, в том числе и

производные хромен- а -пирона и карбокромена. Однако, это их свойство совершенно недостаточно изучено и поэтому мало используется в практических целях.

В связи с этим представляется актуальным изучение способности производных хромен-а-пирона и карбокромена образовывать флуоресцирующие продукты реакции и разработать на этой основе высокочувствительные, селективные и точные способы их флуориметрического определения, пригодные для целей фармацевтического, биофармацевтического и фотохимического анализа.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью работы является разработка способов флуориметрического определения производных хромен-а-пирона и карбокромена в лекарственных формах, биологических жидкостях организма человека и растительном сырье.

Для достижения поставленной цели решали следующие задачи:

- изучить современное состояние вопроса по анализу производных хромен-а-пирона и карбокромена;

- изучить оптимальные условия флуоресценции производных хромен-а-пирона и карбокромена;

- выбрать условия экстракционного выделения и хроматографического разделения изучаемых соединений из биологических жидкостей и растительного сырья;

- разработать флуориметрические способы определения карбокромена в лекарственных формах и биологических жидкостях (кровь,моча);

- изучить возможность применения разработанного способа определения карбокромена в крови и моче для фармакокинетических исследований и расчета схемы дозирования препарата;

- изучить химическое строение основного продукта биотрансформации карбокромена в организме;

- разработать флуоресцентные способы определения пиранокумарина виснадина в лекарственных формах с целью контроля их качества и в исходном растительном сырье;

- разработать флуориметрический способ определения пиранокумарина пеуценидина в растительном сырье.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ.

На основании проведенных экспериментальных исследований изучены условия флуоресценции производных хромен-а-пирона и карбокромена. Выбраны условия экстракционного выделения и хроматографического разделения производных хромен-а-пирона и карбокромена из биологических жидкостей и растительного сырья. Впервые разработаны способы определения карбокромена в лекарственных формах и биологических жидкостях (кровь,моча) с использованием флуоресцентного метода. Впервые разработаны флуоресцентные способы определения пиранокумаринов виснадина в лекарственных формах с целью контроля их качества и в исходном растительном сырье, пеуценидина - в растительном сырье. С применением разработанного способа определения карбокромена в крови и моче изучены основные фармакокинетические параметры и рассчитаны схемы дозирования препарата. Определено количественное содержание пиранокумаринов в растительном сырье: виснадина - в плодах Апиш у^зпада и корнях РЫо^&сагрш вШтсш, пеуценидина - в плодах Реисеёапиш огеозеНпит.

НАУЧНО - ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ.

Результаты изучения флуоресцирующей способности карбокромена, виснадина и пеуценидина положены в основу разработанных новых способов их качественного и количественного определения в различных объектах.

Способы определения карбокромена и виснадина в лекарственных формах дают возможность повысить их качество в процессе промышленного производства, а способы определения в

исходном растительном сырье - усилить контроль его качества по содержанию действующих веществ, поэтому эти способы рекомендованы для внедрения в контрольно-аналитические лаборатории на предприятиях-изготовителях. Способы определения виснадина и пеуценидина в растениях позволили также использовать их в изучении химического состава растительного сырья.

Разработанный флуориметрический способ определения карбокромена в крови позволил использовать его в клинических исследованиях с целью коррекции схем дозирования препарата с учетом индивидуальных особенностей организма пациента, для эффективной и безопасной фармакотерапии карбокроменом.

Разработанные способы анализа апробированы и использованы в научных исследованиях и учебном процессе ряда высших учебных заведений при изучении аналитической и фармацевтической химии, клинической фармакотерапии, фармакогнозии студентами, аспирантами и научными работниками.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ. На основании проведенных исследований внедрены: способ определения карбокромена -

- в Государственном научно-исследовательском институте по стандартизации и контролю лекарственных средств (акт № 14 от 10.03.1998 г.),

- в Научно-исследовательском институте фармации, в исследованиях лаборатории биологических и физико-химических методов контроля качества лекарственных средств (акт № 26 от 9.04.1998 г.),

- в учебном процессе и научных исследованиях в Пятигорской государственной фармацевтической академии, на кафедре фармацевтической химии (акт № 55 от 20.05.1998 г.), в испытательном фармацевтическом центре «Фармакон» Курского государственного медицинского университета (акт № 12 от

19.05.1998 г.), в Пермской государственной фармацевтической академии, на кафедре фармацевтической химии факультета последипломного образования (акт от 01.03.1999 г.), на кафедре фармацевтической химии Санкт-Петербургской государственной химико-фармацевтической академии (акт от 11.05.99 г.); способы определения виснадина и пеуценидина -- в учебном процессе и научных исследованиях на кафедре аналитической химии в Тюменской государственной медицинской академии (акты №№ 68,69 от 24.12.1998 г.), в Запорожской государственной медицинской академии, на кафедре аналитической химии (акты от 17.02.1999 г.), в испытательном фармацевтическом центре «Фармакон» Курского государственного медицинского университета (акт № 17 от 26.05.1998 г. и акт № 27 от 23.12.1998 г.).

Курским областным правлением Всероссийского химического общества им. Д.И.Менделеева утверждены и выпущены методические рекомендации «Флуоресцентный анализ некоторых производных кумарина» (Курск, 1999 г.)

СВЯЗЬ ИССЛЕДОВАНИЙ С ПРОБЛЕМНЫМ ПЛАНОМ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК. Представленные результаты исследований относятся к теме-заданию «Разработка новых, совершенствование и унификация существующих методов исследования лекарственных веществ», включенных в проблему «Фармация» (01.9.70003273). Диссертация выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Курского государственного медицинского университета по проблеме «Фармация», номер государственной регистрации 01.9.30009247.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Материалы диссертационной работы доложены на 2-м и 4-м Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (г. Москва, 1995 и 1997 гг.), научной

конференции «Решение актуальных задач фармации на современном этапе», посвященной 50-летию НИИ фармации (г. Москва, 1994 г.), 4-й Всесоюзной конференции по аналитической химии органических веществ (г. Москва, 1991 г.), Всероссийской научной конференции «Экологические интоксикации: биохимия, фармакология, клиника» (г.Чита, 1996 г.), межвузовской научно-производственной конференции «Актуальные проблемы современной фармакотерапии» (г. Саратов, 1996 г.), конференции «Актуальные проблемы профессиональной и экологической патологии» (г.Курск, 1994 г.), конференции «Актуальные вопросы медицинской науки», посвященной 60-летию Курского госмедуниверсигета (г. Курск, 1997 г.), итоговых научных конференциях «Актуальные проблемы медицины и фармации» (г. Курск, 1996 и 1999 гг.).

ПУБЛИКАЦИИ. По материалам диссертационных исследований опубликовано 11 работ, в том числе 1 методические рекомендации.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертационная работа изложена на 121 странице машинописного текста, содержит 37 таблиц и 10 рисунков, состоит из введения, четырех глав, включая обзор литературы, выводов, списка литературы, включающего 157 источников, в том числе 69 работ зарубежных авторов.

НА ЗАЩИТУ ВЫНОСЯТСЯ СЛЕДУЮЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ:

- результаты изучения условий флуоресценции карбокромена, пиранокумаринов виснадина и пеуценидина;

- способы определения карбокромена в биологических жидкостях (кровь, моча) и лекарственных средствах флуоресцентным методом;

- способы качественного обнаружения и количественного определения виснадина в лекарственных формах и в исходном растительном сырье, пеуценидина - в растительном сырье.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

Анализ препарата карбокромен в лекарственных формах флуоресцентным методой

Широкое распространение карбокромена в терапии ИБС, длительность его назначения, необходимость проведения терапевтического мониторинга с целью эффективного, безопасного и индивидуального его применения, требует разработки методик определения карбокромена в биологических жидкостях организма человека - крови, моче. Очень важен и контроль качества препаратов, содержащих карбокромен. Существующие способы анализа карбокромена были рассмотрены нами в первой главе, из которой следует необходимость создания более доступных, точных, воспроизводимых способов его определения, обладающих высокой чувствительностью, селективностью и экспрессностью.

Флуоресцентный метод определения органических соединений обладает, как мы отмечали выше, высокой чувствительностью, экспрессностью, достаточно прост и воспроизводим, а использование трех спектров для характеристики оптических свойств изучаемого вещества (поглощения, возбуждения и излучения) позволяет достичь высокой селективности.

Нами были выбраны необходимые реактивы, условия определения (растворители, величина рН, температура, спектральные характеристики и др.) для разработки наиболее чувствительного и селективного способа определения карбокромена в различных объектах, пригодного как для целей фармацевтического анализа, так и для биофармацевтических и фармакокинетических исследований.

- Исследования проводились на субстанции карбокромена (регистрационный номер 74.1126.3).

В качестве реактива выбрана концентрированная серная кислота, возникающая флуоресценция карбокромена стабильна в течение не менее 48 часов. Были определены спектры возбуждения и излучения флуоресценции карбокромена после реакции. Измерения проводили на спектрофлуориметре фирмы «Хитачи» МРР-2А. Знание спектральных характеристик позволило в дальнейшем для определения карбокромена использовать отечественный флуориметр «Квант-5» с выбранными на основании полученных спектров светофильтрами. Спектральные характеристики флуоресценции карбокромена представлены в таблице 1.

Как следует из результатов, представленных в данной таблице, величина стоксового смещения составляет 56 нм.

На основании полученных спектров карбокромена выбраны первичный и вторичный светофильтры для дальнейших измерений относительной интенсивности флуоресценции на лабораторном флуориметре марки «Квант-5».

Таблица 1

Спектральные характеристики флуоресценции карбокромена

с серной кислотой (концентрация карбокромена - 5 мкг/мл).

Длины волн возбуждения, нм Длины волн излучения, нм Стоксов сдвиг, нм

от ДО шах от до тах 56

300 390 359 380 460 415

Первичный светофильтр выбран с максимумом пропускания 365 нм, близким к максимуму на спектре возбуждения карбокромена, вторичный светофильтр - с максимумом пропускания 408 нм в области от 375 до 450 нм, что соответствует максимальной длине волны на спектре излучения (флуоресценции) карбокромена. Выбор светофильтров для измерений флуоресценции карбокромена

позволяет существенно увеличить чувствительность и точность его количественного определения. Вторичный светофильтр подбирался комбинацией оптических цветных стекол из набора образцов по ТУ 3.729-73 : марки стекол из прилагаемого к прибору набора - ПС-11, СС-5, СЗС-22.

Далее был изучен диапазон линейной зависимости между интенсивностью флуоресценции карбокромена и его концентрацией с целью дальнейшего построения калибровочных графиков для количественного определения.

С этой целью готовили серии разведений карбокромена в диапазоне концентраций от 0,001 мкг/мл до 10 мкг/мл. Для этого к рассчитанному объему водного раствора карбокромена добавляли концентрированную серную кислоту до получения общего объема анализируемого раствора 10 мл и измеряли интенсивность его флуоресценции при выбранных длинах волн возбуждения и излучения, достигаемых путем подбора светофильтров. Установлено, что в этом диапазоне соблюдается линейная зависимость между относительной интенсивностью флуоресценции карбокромена и его содержанием в анализируемой пробе. Вся область линейной зависимости подразделена на 4 участка: от 0,001 до 0,010 мкг/мл, от 0,010 до 0,100 мкг/мл, от 0,100 до 1,000 мкг/мл и от 1 до 10 мкг/мл. Это вызвано ограниченностью шкалы значений относительной интенсивности флуоресценции от 0 до 100%. В каждом из этих поддиапазонов интенсивность флуоресценции раствора с максимальной концентрацией устанавливали на 100% по шкале прибора, а интенсивность флуоресценции предыдущих растворов измеряли по отношению к нему. Таким образом было получено 4 калибровочных графика во всей области линейной зависимости, в соответствии со спецификой метода флуориметрии.

Подобранные оптимальные условия флуоресценции карбокромена с концентрированной серной кислотой и условия ее регистрации позволили разработать методики фармацевтического анализа карбокромена в субстанции и различных лекарственных

формах с целью контроля их качества. Были разработаны способы качественного и количественного определения карбокромена в лекарственной форме - таблетках карбокромена по 0,075 г (регистрационный номер - 74.1126.19.) и субстанции (номер 74.1126.3). Относительная ошибка разработанного способа определения карбокромена в таблетках флуориметрическим методом (±1,95 %), в субстанции (± 0,80%) не превышает ошибку, установленную требованиями Государственной Фармакопеи СССР 11 издания для этого метода (±5%).

Биофармацевтический анализ в фармакокинетическое исследование карбокромена

В качестве биологических жидкостей, наиболее полно характеризующих процессы фарамакокинетики и биотрансформации лекарственного вещества, обычно используются кровь и моча.

Предварительно нами была исследована экстрагирующая способность ряда органических растворителей и условия их использования для выделения карбокромена из биологических жидкостей организма человека. В качестве экстрагенга было предложено использовать хлороформ при рН = 9,0 - 11,0, что позволило достичь максимальной полноты извлечения из водного раствора (до 99,99%). Затем были разработаны методики количественного определения карбокромена в крови и моче, которые апробированы на модельных смесях с известным содержанием препарата. Проведена статистическая обработка результатов анализа. Относительная ошибка определения карбокромена в крови составила 8,50 %, в моче - 8,35 %. Была определена полнота извлечения карбокромена из модельных смесей крови и мочи. Для крови полнота извлечения составила 84 %, для мочи - 89 %.

Методики, разработанные на модельных смесях крови и мочи, были применены нами для определения карбокромена в этих биожидкостях, полученных от здоровых добровольцев, на которых проводились исследования некоторых аспектов фармакокинетики карбокромена.

При хроматографировании экстрактов из крови и мочи было предварительно выявлено, что карбокромен в организме человека подвергается биотрансформации. Исходя из химической структуры карбокромена нами было предположено, что в процессе биотрансформации наиболее вероятно протекание гидролиза карбокромена, поэтому нами были предприняты попытки идентифицировать его метаболиты. С этой целью после экстракционного выделения продуктов биотрансформации карбокромена были применены хроматографические, ИК-спектрофотометрическне и спектрофлуориметрические методы. Из субстанции карбокромена химическим путем были получены продукты кислотного и щелочного гидролиза, которые сравнивались с предполагаемыми метаболитами. Интерпретация ИК-спектров карбокромена и продукта его гидролиза, выделенного из мочи и крови, позволила предположить, что гидролиз карбокромена протекает по сложно-эфирной группе. ИК-спектры представлены на рисунках 1 и 2. Карбокромен содержит две сложно-эфирные группировки: обычную и лактонную, что находит свое отражение в ИК-спектре - присутствуют две сильные полосы при 1705 и 1750 см (рис.1). Полоса при 1705 см обусловлена поглощением карбонильной группы лактонного кольца, полоса при 1750 см -нециклической сложно-эфирной группы. В ИК-спектре метаболита карбокромена присутствует лишь одна полоса в области колебаний карбонильной группы при 1690-1700 см-1 (рис.2).

ИК-спектр карбокромена

Рис.1

ИК-спектр метаболита карбокромена.

Исчезновение полосы при 1750 см может свидетельствовать о расщеплении нециклической сложно-эфирной группы с образованием свободной карбоксильной группы, область колебаний которой 1690-1700 см При этом поглощения карбоксильной группы и карбонильной группы лактонного цикла сливаются в одну широкую полосу, что обычно происходит, если карбоксильные группы молекулы из-за удаленности друг от друга не взаимодействуют между собой.

В ходе эксперимента было установлено, что и сам карбокромен и его метаболит образуют флуоресцирующее соединение с серной кислотой одинакового строения. Это же подтверждают и их идентичные УФ-спектры. Известно, что фармакокинетику и биодоступность лекарственного средства можно определить по одному из его метаболитов. Т.к., по нашему мнению, карбокромен в организме метаболизирует с образованием продукта кислотного гидролиза, который в выделенном из организма состоянии образует, в свою очередь, флуоресцирующее соединение с концентрированной серной кислотой, поэтому для изучения фармакокинетики карбокромена можно использовать разработанный нами флуоресцентный способ определения его метаболита, что нами и было сделано.

Были рассчитаны ориентировочные сроки взятия проб крови и мочи для изучения фармакокинетики карбокромена, в которые осуществлялся отбор биологических проб и проводилось количественное определение метаболита карбокромена. Определена динамика содержания карбокромена в крови, на основании которой рассчитан ряд его фармакокинетических параметров - констант скорости абсорбции и элиминации, кажущейся начальной концентрации, объема распределения и периода полуэлиминации. Затем с использованием одночастевой фармакокинетической модели со всасыванием была рассчитана схема дозирования карбокромена при пероральном приеме таблеток по 0,075 г. С использованием разработанного нами способа определения карбокромена в моче была изучена экскреция карбокромена с мочой. Установлено, что с мочой он выводится из организма в виде кислого метаболита на 71,4% в течение первых 5 часов после однократного приема в виде таблеток. Определено на основании рассчитанного периода полуэлиминации, что на 99,99%, т.е. практически полностью, карбокромен выведется из организма в течение 10 часов.Таким образом, было показано, что разработанные нами способы

определения карбокромена и его метаболита в биологических жидкостях пригодны для целей биофармацевтического анализа.

Флуориметрическое определение виснадина и пеуценидина в лекарственном растительном сырье и лекарственных формах

При изучении флуоресцентных свойств кумариновых соединений нами было установлено, что такой способностью при реакции с окислителями обладают виснадин и пеуценидин, по химическому строению относящиеся к производным кумарина -пиранокумаринам или хромен-а-пиронам. Поэтому, нами были выбраны оптимальные условия флуориметрического определения виснадина и пеуценидина: количества реактивов, растворители, рН среды. Для виснадина в качестве реактива выбран водный насыщенный раствор брома, для пеуценидина в среде н-буганола концентрированная азотная кислота. Были изучены спектральные характеристики флуоресценции этих соединений и область линейной зависимости интенсивности флуоресценции от их концентрации с целью построения калибровочных графиков. Установлено, что линейность для виснадина соблюдается в диапазоне концентраций от 0,5 до 10 мкг/мл, для пеуценидина - от 0,01 до 10 мкг/мл. Для виснадина максимумы спектров возбуждения и излучения флуоресценции составили соответственно 382 и 433 нм, для пеуценидина - 375 и 425 нм.

Т.к. эти соединения достаточно широко используются в медицине в виде препаратов, получаемых из растительного сырья, нами были изучены и выбраны условия экстракции и хроматографического разделения исследуемых пиранокумаринов. Для их хроматографирования методом ТСХ предложен оптимальный состав систем растворителей, позволяющий достичь наибольшей полноты разделения.

Были разработаны способы определения пиранокумаринов в растительном сырье: виснадина - в плодах Ашпи visnaga и корнях

РЫо)оШсагрш вйшсш, пеуценвдина - в плодах Реисес1апит огео8е1тит. Установлено, что виснадина в этих видах сырья содержится соответственно 0,08 и 0,7 %, пеуценидина - 0,025 %. Также разработаны способы определения виснадина в субстанции ависана и стандартном образце фловерина (номера регистрации 70.151.6 и 81.610.3), в лекарственных формах, содержащих виснадин: таблетках «Ависан», покрытых оболочкой, по 0,05 г (регистрационный номер 70.151.7),и таблетках «Фловерин» по 0,05 г (регистрационный номер 81.610.7). Установлено, что виснадина в субстанции ависана содержится 0,08 %, в стандартном образце фловерина - 0,7 %, в таблетках ависана - по 0,0024 г и таблетках фловерина - по 0,0017 г. Разработанные способы имеют небольшую относительную ошибку определения.

ВЫВОДЫ:

1. Изучены условия флуоресценции карбокромена, виснадина, пеуценидина. Определены спектральные характеристики флуоресценции изучаемых соединений и продуктов их реакций. Установлено, что для флуоресцирующего продукта реакции карбокромена максимум спектра возбуждения флуоресценции составляет 359 нм, максимум спектра излучения - 415 нм, для виснадина соответственно 382 и 433 нм, для пеуценидина - 375 и 425 нм. На основании полученных спектров выбраны светофильтры для наиболее чувствительного и селективного анализа данных веществ.

2. Определена область линейной зависимости интенсивности флуоресценции исследуемых соединений от их концентрации. Для карбокромена линейность сохраняется в диапазоне концентраций от 0,001 до 10 мкг/мл, виснадина - от 0,5 до 10 мкг/мл и пеуценидина - от 0,01 до 10 мкг/ мл.

3. Выбраны условия экстракции и хроматографического разделения пиранокумаринов виснадина и пеуценидина из растительного

сырья. Впервые разработаны способы определения пиранокумаринов в растительном сырье: виснадина - в плодах Атш у1зпа§а и корнях РЬкуо&сагрш вйшсш, пеуценидина - в плодах Реисеёапиш огеоБе1тит. Установлено, что виснадина в этих видах сырья содержится соответственно 0,08 и 0,7 %, пеуценидина - 0,025 %.

4. Разработаны способы определения виснадина в субстанции ависана и стандартном образце фловерина, в лекарственных формах, содержащих виснадин: таблетках ависана по 0,05 г и таблетках фловерина по 0,05 г. Способы характеризуются высокой чувствительностью и точностью, относительная ошибка определения составляет соответственно ±1,45%, ±1,32%, ±4,0% и ±4,95%. Установлено, что виснадина в субстанции ависана содежигся 0,08 %, в стандартном образце фловерина - 0,7 %, в таблетках ависана по 0,0024 г и таблетках фловерина по 0,0017 г.

5. Разработаны методики качественного и количественного определения карбокромена в субстанции и лекарственной форме. Проведено количественное определение карбокромена в субстанции и таблетках по 0,075 г, изучены метрологические характеристики. Установлено, что относительная ошибка определения составляет соответственно ±0,8% и ±1,95%.

6. Исследована экстрагирующая способность ряда органических растворителей и условия их использования для выделения карбокромена из биологических жидкостей организма человека. В качестве экстрагента предложено использовать хлороформ при рН = 9,0-11,0.

7. Разработаны методики количественного определения карбокромена в крови и моче, которые апробированы на модельных смесях с известным содержанием препарата. Проведена статистическая обработка результатов анализа. Относительная ошибка определения карбокромена в крови составляет ±8,50 %, в моче - ±8,35 %. Определена полнота

извлечения карбокромена из модельных смесей крови и мочи. Для крови полнота извлечения составляет 84 %, для мочи - 89 %.

8. Из крови и мочи выделен метаболит карбокромена, который идентифицирован методами тонкослойной хроматографии, ИК-спектроскотш и спектрофлуориметрии как продукт гидролиза карбокромена С целью определения строения метаболита карбокромена получены химическим путем продукты щелочного и кислотного гидролиза карбокромена, проведен их сравнительный анализ с выделенным из биологических жидкостей метаболитом. Установлено, что метаболит карбокромена и продукт его кислотного гидролиза идентичны по химическому строению. На основании проведенных исследований сделано предположение, что биотрансформация карбокромена происходит по сложно-эфирной группировке.

9. С использованием разработанного способа количественного определения карбокромена в крови изучена динамика его содержания в крови после перорального приема таблеток по 0,075 г. На основании одночастевой фармакокинетической модели со всасыванием рассчитана схема дозирования карбокромена при пероральном приеме таблеток.

Ю.На основании разработанного способа определения карбокромена в моче изучена его ренатьная экскреция. Установлено, что с мочой он выводится из организма в виде кислого метаболита на 71,4% в течение первых 5 часов после однократного приема в виде таблеток. Определено, что на 99,99%, т.е. практически полностью, карбокромен выводится из организма в течение 10 часов.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ ОПУБЛИКОВАНО В СЛЕДУЮЩИХ РАБОТАХ:

1. Григорьев O.A., Иванов В.М., Хабаров A.A., Махоткина Т.М.

Флуоресцентный метод в санитарно-химическом анализе

органических веществ // VI Всесоюзная конференция по аналитической химии органических веществ. 23-25 января 1991 г. Москва: Тез.науч.конф.- М., 1991 .-С.55.

2. Хабаров A.A., Кочинова О.Ф., Григорьев O.A., Махоткина Т.М., Сафонов A.B. Изучение экспериментальной фармакокинетики некоторых производных кумарина, бензимидазола и бензотиазола с применением методов ВЭЖХ и флуориметрии // Актуальные проблемы профессиональной и экологической патологии: Тез. науч.конф. -Курск, 1994. -С.ЗЗЗ.

3. Григорьев O.A.,. Хабаров A.A., Кочинова О.Ф., Махоткина Т.М. Исследования в области биофармацевтического анализа // Решение актуальных задач на современном этапе: Тез.науч. конф. поев. 50-летию НИИ фармации.- М., 1994.-С. 176.

4. Григорьев O.A., Комиссаров В.И., Кочинова О.Ф,, Махоткина Т.М., Репалова Н.В., Хабаров A.A. Синтез, нейротропная активность, анализ и фармакокинетика производных 2-аминотетрагидробензотиазола, кумарина и некоторых противоопухолевых антибиотиков // Человек и лекарство: материалы II Российского национального конгресса.-М., 1995.-С.28.

5. Махоткина Т.М., Григорьев O.A. Изучение перекисного окисления лигшдов хсмилюминесцентным методом, разработка флуоресцентных способов определения антибиотиков антрациклинового ряда и кумаринов II Актуальные проблемы медицины и фармации: Тез.науч. конф,- Курск,1996.-С.114.

6. Григорьев O.A., Новиков О.О., Новиков Д.А., Хабаров A.A., Махоткина Т.М. Универсальный фотометр для медико-экологических и биофармацевтических исследований // Экологические интоксикации: биохимия, фармакология, клиника: Тез. науч.конф.-Чита, 1996.-Т.2.-С.234.

7. Хабаров A.A., Новиков О.О., Новиков Д.А., Григорьев O.A., Махоткина Т.М., Королев В.А. Флуориметрическое определение некоторых фармакологически активных соединений // Актуальные