Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Разработка методов анализа и стандартизации нового отечественного препарата из группы 1,4-бензодиазепина

У #

На правах рукописи

РАМЕНСКАЯ ГАЛИНА ВЛАДИСЛАВОВНА

РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ АНАЛИЗА И СТАНДАРТИЗАЦИИ НОВОГО ОТЕЧЕСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА ИЗ ГРУППЫ 1,4-БЕНЗОДИАЗЕПИНА

15.00.02. - фармацевтическая химия и фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК

Москва - 1997

Работа выполнена в Московской медицинской Академии им. И. М. Сеченова и на базе НИИ Фармакологии РАМН

Научные руководители: Доктор фармацевтических наук профессор В.И.Прокофьева Кандидат химических наук Б.М.Пятин

Официальные оппоненты: Доктор фармацевтических наук

Т.Н.Боковикова

Кандидат фармацевтических наук Е.Б. Нечаева

Ведущее учреждение: Центр по химии лекарственных средств - Всероссийский научно - исследовательский химико-фармацевтический институт им. С. Орджоникидзе (ЦХЛС-ВНИХФИ)

Защита состоится ^/У^^/а^ 199¿г. в часов на заседании Диссертационного Совета Д-074.05.06 при Московской Медицинской Академии им. И. М. Сеченова (г.Москва, Никитский бульвар, д. 13).

С диссертацией можно ознакомиться в Фундаментальной библиотеке ММА им. И. М. Сеченова (г.Москва, Зубовская пл., д.1). Автореферат разослан

Ученый секретарь Диссертационного Совета Д-074.05.06, кандидат фармацевтических наук, доцент

Н. П. Садчикова

ОГ.1ЦЛЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Лк^1уш[ьнр(ль тсм1.г 11есмофя на то, что за последние 20 лет в мировой медицинской практике стало использоваться несколько десятков тран-квнлшагоров бензодиазспииовой структуры, характеризующихся анксио-литической, иротивосудорожной, гипнотической и миорелаксаитной активностью, проблема создания новых бензодиазепиповых препаратов остается актуальной. Цели поисковых работ в последние годы направлены на создание таких структур бетодиазепинового ряда, которые будут обладать силыювыраженнымн определенными видами действия и минимальным побочным -эффектом ( Лведнсова Л.С., 1996).

Совместные исследования Института фармакологии PA MI I и Одесского физико-химического инстигуга им. А. В. Богатского АН Украины привели к созданию нового соединения - шшазеиама, который нредставля-ет собой гемисукцинат 3-окси-7-бром-5-(о-хлорфенил)-1,2-дш нлро-ЗН-1,4-беизодиазепнн-2-оиа.

Целенаправленные фармакологические исследования этою соединения, проведенные в Институте фармакологии РАМИ, показали его преимущества перед известными препаратами этого типа действия, сочетающего мощные снотворный, седативный и транквилизирующий эффекты без сопутствующего побочного миорелаксантного действия ( A.C. 1828645 A3 СССР). Эти исследования также установили необходимость создания лекарственной формы цкназепама с содержанием активного вещества - 0,0005; 0,001 и 0,002 г. В результате чего , в лаборатории готовых лекарственных форм НИИ фармакологии РАМН, были созданы таблетки циназепама указанных дозировок.

В связи с предстоящим внедрением этого препарата в лечебную практику представляется актуальным, наряду с фармакологическими испы-

■ линями 1и>ч1пь сю фшико-химические свойства, разработать методы кошромя и стандартизации, на их основе - нормативную документацию на субстанцию и лекарственную форму.

Цель _ исследования: изучение физико-химических свойств нового о/счестенмо/о тппошка из труппы 1,4-бен1одиазеш1на - циназепама, разработка методик контроля его качества, разработка методик анализа лекарственной формы, исследование стабильности субстанции и лекарственной формы, а также разработка на этой основе проектов Временных фармакопейных статей (ВФС) на субстанцию и лекарственную форму.

Задачи исследования:

1. Изучить спектральные характеристики циназепама и его примесных соединений (УФ-,ИК-спектрофотометрия, ПМР-, масс-спектроскопия).

2. Исследовать хроматографическое поведение цтшазепама, промежуточных продуктов его синтеза и возможных продуктов разложения с помощью методов ТСХ и ВЭЖХ, разработать методики унифицированного хроматографпческого анализа циназепама.

3. Исследовать стабильность субстанции под воздействием факторов окружающей среды, провести анализ субстанции циназепама с использованием термических методов анализа.

4.Разработать методики количественного определения циназепама в субстанции (тигриметрическне методы) и в лекарственной форме (спектрофотометрия, ВЭЖХ).

5. Выбрать огггимальны'е условия для оценки качества таблеток циназепама по тесту "Растворение".

6. Изучить стабильность субстанции и таблеток циназепама при хранении ; рекомендовать рациональный вид упаковки таблеток циназепама.

Научная новизна. Впервые проведено комплексное изучение физико-химических свойств оригинального отечественного гипнотика из группы

1,4-бензодиазепина - циназепама. Определены спектразьные характеристи-кн циназепама и возможных его примесей. На основании результатов изучения хроматографического повеления цнназепама и его примесных соединений выбраны 01ггималы1ые условия их разделения и идентификации методами ТСХ и ВЭЖХ. При комплексном использовании методов дерива-тот рафии, определения температуры плавления но ГФ XI, ИК-спектрофогометрии, титрования по К. Фшнеру и ГЖХ показано, что препарат не плавится , а разлагается под действием высоких температур. Разработаны методики количественного определения субстанции цнназепама и его лекарственной формы. На основании комплексного изучения качества субстанции и твердой дозированной лекарственной формы - таблезок цнназепама, и исследований стабильности в различных условиях даны рекомендации по рациональным видам упаковки и условиям хранения, показано, что для установления сроков годности цнназепама и его лекарственной формы использование метода "ускорешгого старения" невозможно, так как под воздействием высоких температур препарат разлагается.

Практическая значимость работы. На основании результатов »пучения физико-химических свойств цнназепама разработаны методики контроля качества и стандартизащш его субстанции и лекарственной формы.

Практические результаты вошли в проекты ВФС на субстанцию и таблетки циназепама по 0,0005 г, 0,001 г и 0,002 г.

Внедрение в практику. Методики анализа и стандартизации нового оригинального гипнотика - циназепама - внедрены в Опытно-технологическом отделе и Лаборатории готовых лекарственных форм НИИ фармакологии РАМН для контроля качества препарата

Полученные данные вошли в проекты ВФС на субстанцию и лекарственную форму циназепама.

Проанализированные но проекту ВФС таблетки циназепама были перелапы на фармакологические испытания.

Апробация работы. Основные результаты доложены на межпабора-юрнои конференции в НИИ фармакологии РАМН ( Москва, 30.01.1997).

Апробация работы проведена на научно-практической межкафед-ралыюй конференции фармацевтического факультета ММА им. И.М Сеченова (Москва, 28.02.1997).

Связь задач исследований с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертация выполнена в соответствии с государственной научно-технической программой - "Создание лекарственных средств методами химического п биологического синтеза" / Направление 02.09. / и рамках плановой темы НИР НИИ фармакологии РАМН -"Изыскание новых лекарственных средств на основе рецепторнмх механизмов действия" ( Номер юс регистрации 01950002859.), а также в рамках плановой темы кафелры фармацевтической химии ММА имени И.М.Сеченова "Стандартизация и контроль качества лекарственных средств (производные фенотнанша. стероидные препараты, серосодержащие препараты, местные анестетики и др.)" (Номер гос.рептстрации 01930006967).

Публикации по работе. По результатам выполненных исследований опубликовано 6 печатных работ.

На защиту выносятся:

1. Результаты комплексного изучения физико-химических свойств нового гипнотика - шшазепама.

2. Разработанные методики контроля качества и стандартизации циназепама.

3. Результаты по изучению стабильности при хранении циназепама и его лекарственной формы.

4. Разрабопшные метдики контроля качества и стаидарппании лекарственной формы.

Структура н обьем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы ( глава 1), пяти глав экспериментальной части (главы 2-6), выводов, списка литературы и приложений. Работа изложена на 157 страницах машинописного текста, содержит 29 таблиц, 32 рисунка и схем. Список литературы включает 84 источника отечественной и 85 зарубежной литературы.

Во введении раскрыта актуатьность темы, определены пели и задачи исследования, научная новизна и практическая значимость.

В первой главе, на основании анализа литературных данных, рассмотрены особенности фармакологического действия лекарственных средств, обладающих транквилизирующим действием; представлены физико-химические методы анализа препаратов, производных 1,4-бензодиазепина; описаны способ получения, фармакология и фармахокине-тика нового оригинального препарата - циназепама.

Вторая глава посвящена изучению физико-химических свойств нового производного 1,4-бензодиазепина - циназепама.

В третьей главе описаны спектразьные характеристики циназепама и его возможных примесей.

В четвертой главе приводятся разработанные нами методики тонкослойной и высокоэффективной жидкостной хроматографии для анализа субстанции циназепама.

В пятой главе представлены результаты комплексного исследования по анализу таблетированной лекарственной формы циназепама.

В шестой главе содержатся результаты по изучению стабильности субстанции и лекарственной формы циназепама и определению сроков годности.

ОСНОВНОЕ СОД К РЖА НИК РАБОТЫ

В 1990 году впервые был синтезирован новый препарат из 1руппы 1,4-беизодиазешша - шшазепам, представляющий собой гсмисукцинат 3-оксн-7-бром-5-(о-хлорфенил)-1,2-дигидро-ЗН-1,4-бензодиаэепин-2-она

В НИИ фармакологии были проведены исследования на анксиолити-чсскую, нротивосудорожную, седатнвную, снотворную активность, токсичность, антипшоксические, миорелаксантнке свойства, а тшеже была изучена фармакокинетика препарата в опытах на животных. Исследования проводили в сравнении с известными препаратами из группы 1,4-бсизодиазеппна. Проведенные исследования показали, что действующие дозы (ЭДзо) циназепама, при которых наблюдается специфический эффект, шгже. чем у других препаратов этой группы (ЭД50 циназепама 0,07 мг/кг; ЭД50 феназеиама 1,05 мг/кг). Миорелаксантный эффект циназепама развивается при использовании более высоких доз, чем седатнвный. Особенностью снотворного действия циназепама в отличие от других снотворных этой группы (нитразепам, флунитразепам) является его способность увеличивать длительность не только медленоволнового, но и парадоксального сна при неизменном количестве его эпизодов, что делает его снотворный эффект более физиологичным.

Исходным соединением для синтеза циназепама является феиазепам. Исходя из условии синтеза циназепама, а также путей его метаболизма, основными возможными примесями в препарате могут быть как промежуточные продукты синтеза циназепама, так и продукты его разложения:

Н

.0

М.м. 465,70

Феназеиам I

Ы-окись феназенама И

сохи.

3-ацетоксифеназепам III

НО-С

II о

с - он

II

о

3-оксифеназепам 5-бром-2'-хлор-2-амшю- Янтарная кислота

бензофенон

IV V VI

1.Объекты, материалы и методы исследования.

Объектами данного исследования являлись шесть серий субстанция циназенама, образны субстанций феназенама, Ы-окиси феназенама 3-окенфеназенама, З-ацетоксифеназепама, 5-бром-2-хлор-2-аминобензофено-на и янтарной кислоты, ситггезированные в ФХИ им. Д.В.Богатского, а также 15 серий таблеток циназенама трех дозировок -0,0005;0,001 и 0,002 г (по пять серий каждой дозировки), полученных в лаборатории готовых лекарственных форм НИИ фармакологии РАМН.

В процессе исследования в соответствии с поставлештыми задачами использованы различные методы анализа.

При изучении и определении таких показателей качества щшазепама, как "Внешний вид", "Растворимость", "Прозрачность и цветность раство-

ров". ( .\:н.ф;пн;1я зола", "Тяжелые металлы" использовали методики ГФ XI издания. Определение температуры плавления проводили по методике I Ф XI тлання. а также дериватографическим методом. Для определения показателя "Потеря н массе при высушивании" использовали методы дери-накирафпи. высушивания г. изотермическом режиме, титрования реактивом Фишера, latonoi. .• »¡атграфии. Для количественной оценки циназс-пама в cvociaiiiiii;; применяли тшрнметрические методы анализа.

С целью определения подлинности циназспама были изучены химические реакции, а также его спектральные характеристики методами УФ-(на приборе Specord) , ИК- ( па приборе Perkin Elmer), ПМР- (на приборе Broker) и масс-спектроскопии (на приборе МАТ-90).

Для анализа чистоты субстанции и таблеток циназепама нами были разработаны методики 'ГСХ и ВЭЖХ анализа.

Полученные на анализ таблетки циназепама были оценены по всем требованиям обшей статьи ГФ XI издания. Для количественной оценки ци-^ назепача в таблетках были использованы методы спектрофотометрии и ВЭЖХ. Метод спектрофотометрии в УФ области был также использован для анализа таблеток по показателю "Однородность дозирования" и оценки таблеток по тесту "Растворение".

При установлении сроков годности субстанцию и .таблетки циназепама в процессе хранения подвергали полному анализу по всем показателям.

2. Изучение свойств циназепама. Разработка методик анализа .

По внешнему виду циназепам представляет собой белый мелкокристаллический порошок без запаха. Растворимость субстанции циназепама в различных растворителях представлена в таблице 1.

I аблипа I

Растворимость субстанции циназепача в различных раа воршелях

Раа порти ель Растворимость Катетория растворимости

Спирт метиловый от I до 2 Легко растворим

ДМСО от 5 до 7 Легко растворим

Ацетон от 30 до 60 Умеренно растворим

Спирт этиловый 95 %, ог 100 до 110 Мало растяорим

хлороформ

Ацетонитрил от 130 до 155 Маю растворим

Вода, эфир более 10000 I фактически нерастворим

0,1 М НСТ, 0.1 М N»011 более 10000 Практически нерастворим

Показа гели "Внешний вид","Прозрачность", "Цветность" использовали при изучении стабильности штназепама иол воздействием на него окислителей, света. В качестве окисляющего агента использовали 33 % раствор гтсроксида водорода. Для изучения влияния света навеску препарата подвергали действию дневного (солнечного) света »течение (месяца. Во всех случаях изменений указанных показателей не наблюдалось.

При исследовании влияния растворов кислот и щелочей готовили 1 % растворы препарата в ацетоне, куда добавляли 0,1 М раствор хлористоводородной кислоты и 0,5 М спиртовой раствор КОН. Растворы оставляли на 4 суток. Химические изменения, происходящие в растворах, определяли методом 'ГСХ. При этом наблюдаюсь появление пятен на уровне свободной янтарной кислоты и 3-оксифеназепама, что свидетельствует о пиролизе сложноэфирной группы.

При определении температуры плавления анализ 6 серий субстанции штназепама показал, что препарат разлагается под действием высоких температур и не имеет четкой температуры плавления. Термическая деструк-

имя обцмииж Пила доказана методом инфракрасной спектроскопии (смеюры исходных и расплавленных образцов резко отличаются), изменением смешного пила и массы образцов, а также данными тонкослойной

\рпм,| их рафии.

Комплексное использование таких методов как дериват отрафия, вы-с\питание и изотермическом режиме , метод титрования реактивом К Фишера, тюкая хромаготрафия дало сопоставимые результаты и иозво-лнзо итаиоппть величину показателя "Потеря в массе при высушивании" -менее 0,5 %. а также доказать, что потеря в массе при высушивании образной цинаюпама обусловлена наличием в субстанции адсорбционной влаги, а не осьзтчиых количеств органических растворителей.

Л.зч быстрой и точной идентификации, а также отличия циназепама от лр)1и\ производных 1,4 - бешодиазешыа предлагается проводшь реакцию с решршшом на янтарную кислоту после кислотного гидролиза.

Дзя количественной оценки циназепама в субстанции после проведенных исследований нами было выбрано потенциометрическое тифова-ние ленимолярным спиртовым раствором пшроксида натрия в среде ацетона. Также показана возможность использования в качестве растворителя лимет и тформамида (ДМФА).

Метр(>логические характеристики метода титрования в среде неводных растворителей для количественного определения циназепама представлены в таблице 2. Как следует из данных таблицы относительная ошибка определения при использовании певодного растворителя - ДМФА (1.30 %) выше относительной ошибки при использовании ацетона (0,69 %).

По фактическим данным, полученным при определении образцов циназепама, содержание действующего вещества в субстанции составляет от 98.51 % до 99,89 %. Поэтому предлагаем нормировать содержание циназепама в субстанции: не менее 98 % в пересчете на сухое вещество. Относи-

тельная ошибка определения среднею результата при аналте 6 серий образно'.) субаапции цнназепама - от 0,10 до 0,49 % при использовании ацетона, и oí 0,91 до 1,04 при использопании ДМФА.

Габдица 2

Meipo.'ioi ические характеристики метода титрования в среде не водны:; растворшелей для количесгвенмого определения цнназепама (Р~Ч5%, п=6)

Растворш ель S"' S S, Д\

Ацетон 99,58 0,4336 0.6585 0.2688 0.69 0,69

ДМФА 99,36 1,5252 1,2350 0,5041 1,29 1,30

При изучении спектральных характеристик цнназепама были сняты и

изучены УФ-спектры поглощения 0,001 % (2*10'5М) и 0,005 % (1*Ю^М) растворов субстанции цнназепама в спирте этиловом 95 % в области ятин волн от 200 до 400 нм , а также рассч!гтаны основные оптические характеристики полученных электронных полос из тести независимых определений образцов субстанции цнназепама . Полученные УФ-спектры представлены на рисунках 1,2.

С целыо изучения влияния рН среды на характер спектра цнназепама были сняты УФ-спектры растворов субстанции цнназепама в смеси спирт этиловый 95% - вода - 0,1 М раствор хлористоводородной кислоты (10 : 85 : 5) и в смеси спирт этиловый 95% - вода - 0,1 М раствор гидроксида натрия (10 : 85 : 5). Отмечено отсутствие влияния степени ионизации на характер УФ-спектра цнназепама.

Нами рассмотрена возможность использования УФ-спектроскопии для идентификации цнназепама и его примесей. УФ-спектры возможных примесных соединений цнназепама: феназепама, М-окисн феназенама, З-ацетоксифеназепама, 3-оксифеназепама, бензофенона были получены в тех же условиях , что и спектр субстанции цнназепама (рисунок 1,2).

Рисунок-/

УФ - спектры 0,001 % растворов циназепама и его примесных

Рисунок

УФ - спектры 0,005 % растворов циназепама и его примесных

1 - Цииазепам 4 - 3-ацетоксифеназепам

2 - Феназепам 5 - 3-оксифеназепам

3- >^-окись феназепама 6 - 5-бром-2-хлор-2-амино-бензофенон

Отмечено значительное совпадение УФ-спектров циназепама, фена-зенача, З-апетксифеназепама и 3-оксифеназепама, что говори I о возможности использования спектроскопии в УФ-области для подтверждения подлинности циназепама юлько в сочетании с другими физико-химическими методами анализа.

3. Хроматографический анализ цинатепача.

Хроматографическне методы аназиза были использованы для анализа чистоты субстанции и таблеток циназепама, а также для количественного определения содержания циназепама в таблетках.

При выборе условий анализа методом ТСХ нами были опробованы 30 систем растворителей, из которых выбранны 2 системы , пригодные для разделения изучаемых соединений . Значения ЯГ тпучаемых соединений в выбранных системах на пластинках К1'е$е!«е1 60Р254 ,8ЛиГо1 иУ представлены в таблице 3.

Таблица 3

Значения Rf циназепама и его примесных соединений

Соединение Kieselgel 60F254 Silufol UV-254

хлороформ- ацетон - гек- хлороформ- ацетон - гек-

ацетон-мета- сан - хлоро - ацетон-мета- сан - хлоро -

нол (16:2:1) форм(2,2:1:2) нол (16:2:1) форм(2,2:1:2)

Циназеттам 0,12 0 0,25 0,25

Примесь I 0,46 0,36 0,47 0,35

Примесь II 0,29 0,20 0,33 0,23

Примесь III 0,55 0,49 0,66 0,49

Примесь IV 0,34 0,23 0,41 0,23

Примесь V 0,67 0,60 0,89 0,64

Примесь VI 0,11 0 0,10 0

Наилучшее раллелеиие препарат и примесей I-V наблюдается на пластинке Kieselgel в системе сослана: хлороформ-ацетоп-метаиол (16:2:1), а разделение примеси VI и препарата наблюдается на пластинке Silufol. 11омому анализ примесей I-V и VI рекомендуем проводить отдельно.

Самая высокая чувствительность к исследуемым веществам достигается на пластиках Kieselgel при облучении хроматограмм УФ-светом (0,1 мкт). При этом пиназепам и ею возможные примеси проявляются в виде пятен фиолетового цвета на светлом фоне.

Предел обнаружения цнназеиама и его примесей при облучении УФ-светом практически одинаков, это позволяет использовать в качестве свидетеля для проведения полуколичестЕсннои оценки содержания примесей, субстанцию феназеиама.

При хромают рафнческом исследовании циназепама в 6 образцах препарата обнаружены технологические примеси I, III, IV. Примеси II, V, VI в образцах не обнаружены. На основании анализа "чистоты" шести серий образцов субстанции циназепама установлено, что суммарное содержание примесей во всех образцах не превышает 2%.

Проведенные исследования позволили включить данную методику ТСХ в проект ВФС в раздел "Посторонние примеси". Учитывая, что примесь янтарной кислоты (VI) пи в одном образце субстанции не была обнаружена, чтобы не усложнять ТСХ-анализ, в проекте ВФС предложена методика с использованием только пластинок Kieselgel.

При подборе условий хромагографического разделения методом ВЭЖХ исследования проводили на жидкостном-хроматографе "Hewlett Packard 1050" (США) со спектрофотомстрпческим детектором с переменной длиной волны. Детектирование осуществляли при длине волны 234 нм.

Результаты исследования показали, что при использовании колонки "Zorbax ODS", оптимальное разделение исследуемых веществ наблюдается

ii подвижной фазе соаава: метанол - пола (65:35) со скоростью потока -1 мл/мин Хромаюграмма молельной смеси веществ представлена на рисунке 3. Коэффициент удерживания для веществ I, И, 111. IV. V составляет 9,18; '1,64; 9,99; 6,78; 22,36 соответственно.

Разработанная метлика ЮЖХ была использована нами для количественною определ'ения содержания примесных соединений в с)бсганннн цнназепама методом абсолютной калибровки.

Метрологические хараккр>;сыки метла ВЭЖХ для количественного определения примесных соединений в цшшепаме для каждою соединения представлены в таблице 4.

Таблица 4

Метрологические характеристики метода ВЭЖХ для количественного

определения примесных соединений в цшшепаме (Р=95%, п~6)

11азванпе

соединения х, % S ДХ £ •/ т /0

Примесь I 100,23 0,8800 0,3600 0,92 0,93

Примесь 11 99,65 1,1300 0,4613 1,19 1,19

Примесь III 99,78 1,0496 0,4300 1,10 1,10

Примесь IV 99,32 0,7139 0,2900 0,75 0,75

Примесь V 99,40 0,8900 0,3600 0,93 0.94

Как следует из данных таблицы точность методики составляет от 0,75 до 1,19%, воспроизводимость от 0,29 до 0,46. Истинное содержание изучаемых соединений в пробе находится в рассчитанных доверительных границах , следовательно данная методика свободна от систематических ошибок.

Рисунок 3

Хроматограмма модельной смеси циназепама и его возможных примесей

о

с<< г<а>

с-

Г<-( СТ>

и

V,-«м

Ц - Циназепам

I - Феназепам

II - М-окись феназенама

III - 3-ацетоксифеназепам

IV - 3-оксифеназепам

V - 5-бром-2-хлор-2-амино-бензофенон

Среднее суммарное количественное содержание примесных соединении , определенное меюдом В')ЖХ, хорошо подтверждает данные, полученные методом ТСХ.

Метод В')ЖХ Пыл использован также для определения кочичестен-ного содержания цтпшеилма в таблетках. Для этой цели нами предложена подвижная фаза состава: анетошприл - 0,1 М гидрофосфатный буфер (30'70) В указанных условиях циназепам имеет время выхода 9,0 минут, при этом форма пика симметрична, коэффициент удерживания 6,6 (рисунок 4). Количественное определение проводит! методом внешнего стандарта. В качестве стандартного вещества использовали субстанцию циназепама, отвечающую всем требованиям проекта ВФС. Относительная ошибка разработанной методики составляет от 1,05 до 1,42 %.

4.Анализ таблеток циназепама по и.иииь; и.001 н 0,002 г Таблетки циназепама трех дозировок были оценены по всем требованиям общей статьи ГФ XI издания. При этом "истираемость" не превышала 2 %, а "распадаемость" была не более 10 мин.

Рисунок 4

Хроматограмма (ВЭЖХ) таблеток циназепама

Для количественной оценки пиназепамл н таблетках был также ис-полмонап спектрофогометрпческип метуд (СФ), который предложен нами и проект ВФС. Количественное определение проводили при длине волны 23-1 им. Вспомогательные вещества в данной области не поглощают и не мешакп определению. Растворы ;тля измерения оптической плотности го-1ИВИ1И в симр 1С типовом. СФ меюд количественного определения был использован изкже для оценки таблеток по показателю "Однородность дотирования" Метрологические характеристики СФ метода для таблеток трех лошровок представлены в таблице 5.

Таблица 5

Метрологические характеристики СФ метода количественного определения

цнназспама в таблетках трех дозировок (Р=95%, п=6)

Дозировка. х. 5 Б* 1(Р,0гаол Дх гГ-

г %

0.0005 0.0005061 6,285* 10"'' 2,566* 10"6 2,57 6,59* 10"6 1,30

0.001 0.001077 2,128* 10"5 8,687* 10"6 2,57 2,24*10° 2,07

0,002 0,002025 2,041*10° 8,330*10"'' 2,57 2,14*10'? 1,06

Нами подобраны оптимальные условия для определения фармацевтической доступности таблеток цнназспама по гесту "Растворение". Онре-ле теине пропалили на приборе типа "вращающаяся корзинка". Количественную оценку высвобождающегося цнназспама проводили спектрофо-тометрическнм методом. Полученные результаты (рисунок 5) позволили включтггь в проект ВФС в раздел "Растворение" норму, что в раствор за 20 минут должно перейти не менее 80 % вещества.

Рисунок 5

Кривы* высвобождения деиствукицего вещества из таблеток цхиаэепаыа трех дозяротот

5 10 15 20

- Табшткм 1|«н«мпм>а по 0 0005 —Твбпгтш 1»«нвипам* по 0 ТО1 — Т»^л»т»|» т 0 ОС?

.____]

5.Установление сроков годности субстанции и таблеток циназепама.

Субстанция циназенама не выдерживает действия повышенных температур, поэтому применение метода "ускоренного старения" для установления сроков годности было невозможно. Образцы субстанции циназе-пама хранили в естественных условиях сроком 3 года. В процессе хранения образцы субстанции подвергали полному анализу по всем показателям качества. На основании полученных данных сделан вывод о том, что субстанция устойчива при хранении в естественных условиях. До внедрения препарата на заводе предлагаем установить срок годности на субстанцию циназепама - 2 года.

Таблетки циназепама также подвергались постоянному контролю в процессе хранения в естественных условиях. При этом анализ осуществлялся таблеток хранившихся в банках оратгжевого стекла и в контурной ячейковой упаковке. Результаты исследования позволяют рекомендо-

пап. оба )ш вила упаковки.Исследования но хранению таблеток циназена-ма продолжаются . Па данный момент срок годности таблеток циназепама установлен - 1 год

На основании проведенных исследований в проекты ВФС на субстанцию и таблетки циназепама включены методы анализа, представленные в тблипе 6.

Таблица 6

Методы анализа предложенные в проекты ВФС

11аимсноиание Методы анализа

показателей Субстанция циназепама Таблетки циназепама

Подлинность УФ-спектр, ИК-спектр (по прилагаемому рисунку), химическая реакция УФ-спектр, ТСХ

Посторонние тех тех

примеси

Количественное Погеншюметрическое ти- Спектрофотометрия

содержание рованис в нсводных средах

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

I. Проведено комплексное изучение физических, физико-химических и химических свойств нового отечественного препарата производного 1,4-бензодиазепина - циназепама:

• определены показатели "растворимость", "прозрачность", "цветность" . Показано, что шшазепам не гигроскопичен, устойчив к воздействию окислителей, света. Разлагается под действием растворов кислот и щелочей до 3-оксифеназепама;

• с помощью термических методов анализа показано, что препарат разлагается под действием высоких температур и не имеет четкой температу-

ры плавления, по ному показатель "температура плавления" не может быть использован для оценки качества препарата и не включен в проект НФС;

• разработаны методики количественного определения циназепама в субстанции методом иотенциометрического титрования спиртовым раствором щелочи в среде ацетона или днметилформамида (относительные ошибки метода составляют + 0,69 % и + 1.30 % соответственно):

• получены спектральные характеристики циназепама: УФ-.ИК-, ЯМР'Н масс-снек|ры. Показана возможность их использования для идентификации циназепама;

• на основе результатов исследования хроматографических свойств циназепама и его возможных примесных соединений разработана ТСХ-мстодика для идентификации и оценки "чистоты" препарата;

• установлено, что основными примесями в циназепаме являются феназе-пам, 3-оксифеназепам, 3-анетоксифеназепам, при этом их количество не превышает 2 %;

• изучена хроматографическая подвижность циназепама в условиях обра-шенно-фазной ВЭЖХ. Разработана методика количественного определения примесей в циназепаме.

2. По данным исследования качества образцов таблеток циназепама установлены технологические показатели качества: "внешний вид", "размер","истираемость", "распадаемость".

3. Разработана спектрофотометрическая методика для определения количественного содержания циназепама а таблетках , однородности дозирования и проведения теста "Растворение".

4 РтраГтнша ВТЖХ методика определения количественного содержания пшшснпма в таблетках и количественпого определения примеспмх соединении и таблетках.

5 Ппчена стабильность субстанции и таблеток циназепама в условиях естественного хранения.

6 Выбрана оптимальная упаковка для таблеток циназепама: контурная ячейковая упаковка и банки оранжевого стекла с пластмассовыми навинчиваемыми крышками.

7. На основании проведенных исследований разработаны методики контроля качества и установлены параметры качества циназепама и его лекарственной формы, которые положены в основу проектов ВФС на "Циназепач" и "Таблетки циназепама 0,0005 г, 0,001 г и 0,002 г"

11о гемс диссертации опубликованы следующие работы:

1. Применение тонкослойной хроматографии для идентификации производных 1,4-бензодиазепииа/Г.В.Раченская, О.Б.Сгепаненко, Б М Пятин,

B.В Каштанова, В.И.Прокофьева //Формирование ириортетои лекарственной политики: Тез. докл. Российская науч. конф.- Москва. 1 <595. -

C. 139.

2. Изучение некоторых физико-химических свойств нового отечественного препарата из группы 1,4-бепзодиазепина /Г.В.Раменская, О Б. Степанен-ко, Б М.Пятин, В.В.Каштанова, В.И.Прокофьева // Формирование приоритетов лекарственной политики: Тез. докл. Российская науч. конф. -Москва, 1995. - С. 138.

3. Применение спектральных и хроматографттеских методов в контроле качества нового препарата из |руппы 1,4-бензодиазепина /Г.В Раменс-кая , О.Б.Сгепаненко, Б.М.Пятин, В.И.Прокофьева // Человек и лекарство: Тез. локл. III Российс. наштон. контр - Москва, 1996,- С.319.

4. Идентификация лекарственных средств труппы 1,4-бензолиазеиина по колебательным и электронным спектрам поглощения /М.Л.Жиляева , Л.Р.Трофимов, Г.В.Раменская, В.И.Прокофьева, Л.Н.Лотяштин //Фармация. - 1996, № 5. - С.35-36.

5. Исследование физико-химических свойств циназепама с использованием термических методов анализа / Г.В.Раменская, В.И.Прокофьева, В.Ю.Решетняк, Б.М.Пятин, О.Б.Сгепаненко // Человек и лек-во: Тез. докл. IV Российс. нанион. конгр.- Москва, 1997. - С.337

6. Разработка методик высокоэффективной жттдкостной хроматографии для анализа нового гипнотика - циназепама / Г.В.Раменская, В.И.Прокофьева, Б.М.Пятин, О.Б.Сгепаненко // Человек и лек-во: Тез. докл. IV Российс. национ. конгр.- Москва, 1997. - С.336