Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Использование фотометрии и газо-жидкостной хроматографии для определения производных 1,4-бензодиазепина в лекарственных формах и биологических объектах

РГ Б ОД

1 ^ сш ^ \Дгй"н И С Т Е Р С Т В О ЗДРАВООХРАНЕНИЯ

азербайджанской республики

АЗЕРБАЙДЖАНСКИЙ МЕДЙЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ Им. Н. НАРИМАНОВА

На правах рукописи

КАРАЕВ ЭЛЬДАР АБДУЛЛА оглы

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ФОТОМЕТРИИ И ГАЗО-ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ

1,4—БЕНЗОДИАЗЕПИНА В ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМАХ И БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТАХ

15.00.02 Фармацевтическая химия и фармакогнозия

А ВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

БАКУ— 19 »4

Работа выполнена на кафедре фармацевтической химии Азербайджанского медицинского университета им. Н. Нариманова.

Научный руководитель: доктор фармацевтических наук.

профессор А. М. АЛИЕВ. Официальные! оппоненты: доктор фармацевтических наук,

- профессор Г. Б. ИСКЕНДЕРОВ; кандидат фармацевтических наук, научный сотрудник Ш. А. ТОПЧИЕВА Ведущая организация — Азербайджанский государственный

институт усовершенствования врачей им. А. АЛИЕВА.

Защита состоится ... 19S5 года в

«.....» часов на заседании специализированного совета

Б/Н 076.01 при Азербайджанском медицинском угисегситете им. Н. Нариманова (370022 Баку, ул. Бакиханова, 23).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотек; АМУ им. Н. Нариманова.

Автореферат разослан «....£.»................. 1994 года

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат фармацевтических н доцент

А. ТАХМАЗОВ

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА. РАБОТЫ робото позвящона иссдодоваиав производит 1,4-бензодиазепина в лекарственных формах и биологических объектах.

Актуальность работи.Проиэводнно 1,4-бонзодиазопийа являются главнима представителя;/:! транквилизаторов широкого профиля.Час-тоо примононио отих препаратов нородкоприводит к породоэировко, a токяо к сунцндв..ьпой коли прш/онення.Зозникаот необходимость опрэдолония и обнаружения транквилизаторов в биологичоских объектах и H0H3B9CTHUX кассах для установления диагностики отравления и наблюдения за фор.;аяок:гчотичосіш. .1 прранетрами.З послоднео время наблпдаотся увеліп’онио арсенала лекарственны}, препаратов,производных І,4-Со!ізодиозелшіа,что тробуот разработки нових,погко-доступннх. и зконсішчншс методик их определения в различных объектах.

реакция, образования азоссаднншшй с дальне Кик.«, фотометрическим

о про де лени с и її ^-нозщлосошшх производных 1,4-бонз'ідігазопіша широко применяется ¡¡з-за виссксЛ чувствительности и легковьтолнп^о-сти г/отоднки.З качество азссочотак^ого кемцононта используотся 1-:іефгол,2-но|)тол,резорцин и П-(1-паЬтил)-птнлондисмин дигидро-хлерид.Последний нсгед болсо :::нрсксо прін/снопно благодаря високоЛ контрастности окрашивания п зодораствориг/сст.ч азопрсизводного.

Слодуот .OT!!OTHTÎ?,4TO !І-(І-Пй^ТПЛ)-ЗТИЛСНДНШ.".ЇН днгидрохлорид труднодоступен,его синтез кногостадкоц і: раствори і.зляотся і/оло-СТСЙКП^Л при КСІЩПТНСЛ температуре. . •

Нахогїдояио болоо доступного п р.-знецопнего компонента,а такло расширенно арсенала компонентов азссочотения’ является актуальним.

Ко осново ро ¡з кліпі сзосочотзпгя по£ут ґить определены такга производные■ 7-піл^Й5.-І^'!-с0їізодгпзоп:п!а,п^сла восстановления до со-отвзтствугс/х ?-зм::коссздпкеч::Л.разработкя соответствующих сг.осо- . Сов ¡"/ост пзучнез :: практическое з начете.Одним пз перспективных кс.*?псненгоп азоссчзтлнкл является "-фенйл-І-ііофтіїлпїлш.коториЯ раннєє б'іл продлепон Л.М.Алповкм для цолоЛ фармацевтического анализа,в частности,л.тл опрэдолония йол.иоЕ-;'] кислот и никотпнамила.

Karr изгестпо,продукты гидролиза П^-земокенннх производных

1,4-бзіподніі' зілшз.в частности,еибазена не способны образовать озосоэд::кош!я,гз-за блокирования радикалам прсматглоской амино-группч.Для определения таких прсизводшсс 1,4-бонзодиазсплка представляет кнтзрес БЫЯСПСННЭ ЗСЗ."С."ЛСС7Н ьСПОЛЬЗСВеКІ'Л ¡.'ОТОДП газо— пидксстноЯ хроматографии с термогош ыч детектором.

’ Гель и зад ,чц исслодогпггтгя. На осново архивных еттердэлс ; Гзс-іублшишского Токсикологического "ентрг ?,3 Азорбайдгліскоїі рос-уб-

лики изучить состояние отравлений препаратами группы 1,4-бензодиа-аепина со времени организации этого центра т.е. за последние 10 лет ( 1962-1991 г. ). ^

Учитывая потребность фармацевтического и хим: .со-токсикологичео-кого анализа нами была поставлена цель - разработать доступные способы исследования.производных 1,4-бензодиазепина в лекарственных формах и биологических объектах. . .

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи: . ' , • . ■ .

I.Определить частоту отравлений препаратами группы 1,4-*ензоди8~ ачпинпв среди общих отравлений, а также сре^л отравлений лекарственными препаратами.

2.Провести скрининг среди езокомпонентов и выбрать лодходящий компонент азосочетания. '

3.Выбрать оптимальные условия для образования азосоединений продуктами превращения (гидролиза и восстановления) производных

1,4-бензодиазепина и разр^ботвть методики их идентификации.

¿.Применить разработанные методики для целей хроматографии в тонких слоях сорбента. . ' . .

5.Разработать методики количественного определения нозепгма.хлозе-пида и феназепама фотометрией в лекарственных формах и биологических объектах.

6.Разработать методики идентификации и количественного определения сибазона с использованием газо-жидкостной хроматографии.

Научная новизна работы.'Для анализа ^-незамеченных п 7-нитро-' производных 1,4-бензодиазепина в риде первичного ароматического амина изучен и прадлогоц взокоыпонепт - и -фенкл-1-нафтилвмпн.На: основгз этой реакции разработана система анализов производных 1,4-бензодиазепина, которая вкдшаот хроматографические.фотоколорлмэт-рические и спектрофотонетрическио методы. • '

Высказано предположение об взо-гидразонноИ таутомерии азосое-динениД.под влиянием pH среды и полярности растворителя.

Установлены оптимальные условия, для образования азосоодинениА. установлены условия полного гидролиза нозепвыв в присутствии

о н.хлористоводородной кислоты до 2-аишо-5-хлор5еизофенона в зо- ' висимости от температуры, '

Предложена схема и методика исследования биологических нидкос-тей(:/г'чв,кровь)на наличие ыозепама и феназепама.Определены границы обнаруаения и определения стих веществ.

Разработан способ анализа сибазсна в крови метолом газо-жнд-костной хроматографии.

Показано возможности применения указанных методик гул исследовании трупного материала.

Практическое мначение работы.Разработаннцо способы анализа внедрены в учебный процесс на кафедрах фармацевтической химии Азербайджанского медицинского университета и Туркменского государственного медицинского института,в процессе лабораторной диагностик) республиканского Токсикологического Центра ,',3 Азербайджана, КПУО "Судебно-медицинская экспертиза и патологическая анатомия" и в Азербайджанском НИИ проблем судебной экспертизы.криминалисти-ки и криминалогии.

Основные положения диссертации,выносимые на защиту:

- анализ состояние отравлений препаратами группы 1,4-бензодиа-зепинов в республике за 1982-1991 г;

- выбор оптимальных условий для гидролиза некоторых производных 1,4-бензодиазёпина, проведение хромогенной реакции, разделение хроматографией в тонко;* слое сорбента и их детектирование;

- методики обнаружения и определения нозепама, феназепама и хло-зепида в лекарственных форглах и биологических объектах фотометрией

и ТСХ с использованием в качестве азокомпонента Н -4онил-1-нафтил-амина; ' -

-методики обнаружения 7-нитро-1,4-бензодиазепинов;

- методика обнаружения и определения сибазона в крови газо-акд-костной хроматографией.

Апробация работы.работа доложена и обсуждена на заседаниях кафедры фармацевтической химии, проблемной комиссии по фэрг.!8".ни и химии Азмедуниверситета, на меккафедральне.м заседании фармацевти-. ческого факультета Азмедуниверситета.Фрагменты диссертационной работы были доложены н опубликован}’ в виде тезисов в материалах 1У Республиканской Научной Конференции Молодых ученых вузов Азербайджана, Научной конференции профессорско-преподовртельского состава Азербайджанского медицинского университета,лосвятенная итогам 1%3 года, Научно-практической конференции молодых медицинских ученых республики и ка Научной конференции,лосвя!!;ен"сй 75 летию со дня рождения Миева р.г.

Публикация.По материалам диссертации опуб.-иксвэ.ч') 5 печатных работ, в том числе методические рекомендации, ут-вог.кг.с-я:.:!;.!

-4 - ■ ■

байдгвкской республики для внедрения .в практику:"фотоматрическоо определение производных 1,4-бонзодназешгна в биологических объектах и лекарственных фермах"(тираж - 500 эта.).Ряд методик вошли в учебник "руководство к лаборатории.« занятиям по фармацевтической химии" (на азербайджанском языкв).Баку, "Маарпф", 19?Д.

Объом и структура. работы.Еиссортация изложена на 155 страницах машинописного текста, состоит из введения, 6-тк глав и выводов, со-дорзшт 14 таблиц и 13 рисунков. Библиография включает 158 источника, из них 82 инострашых.

Содержание рзботы.Первая глава диссертационной роботы поовлзд-на обзору літератури.Во второй главе поквэано распростронение от-равлониі. производит« 1,4-бензодиазошша в Аэсрбаиддшне.З тротьей главо описывается поиск подходящего азокомпонента и высказывается предположение о структуре образованного сзосоодинения в зависпмос-ти от рЧ среды и полярности растворителя. 3 четвертой главе описано определение бензодиазопинов в лекарственных формах. В пятой главе описаны методики определения Оонзодиазепинов в биологических объектах. Шестая глава посвящена анализу сибазона методом газо-лид-костной хроматографии. 3 приложении даїш акты внедрения результатов научно-исследовательских работ в пра.'.гику.

Материалы и методы исследований.На осново архивных материалов (I982-IS9I г.) Республиканского Токсикологического Центра ИЗ .Азербайджана изучены соооянио отравлений препаратам: группы бонзодио-зепинов в наиай республике. • ’

3 экспериментах использовали 0,1% раствор Н-^енил-І-пафтпламл-на в 40% этаноле. 3 качество стандартных образцов использовали субстанции, отвечавшие требованиям соотвотетвукцих фармакопейных с.отьей. .

Спектры поглощения азопронзводных, динамик}’ образования окрашивания и устойчивость во в ре: .єни определяли ца спектрофотометрах С2-26 и СС- 45 в кивотах с рабочей толцииой Ю vjj. При разработке цотодик.количоствэпного опродолепил измерения проводили ІШ фотоколориметрах СЭК-77 и КСК-2/ЛІ.

Величину рл контролировали рн-катроы ЭЗ-74 с использованием стопллнного электрода.

Восстановлепио 7-ниті>-і,4-бензодназошшов проводили с по-иоцьи цинковой шли в пробирке и олово (II) хлористого на хроматографа.

Методику определения сибазона проводили на газо-жядкостном хроматографе Цвет-530 а тертоионным детектором.Эти исследования проводились в республиканском токсикологическом Центре М3 Азербайджанской' республики.

результати исследований и юс обсуждение.

СОСТОЯНИЕ ОТРАВЛЕНИЙ З АЗЕРБАЙДЖАНЕ ПРОИЗВОДНЫМИ

І.4-ЕЕНЗЦЩШЕПША Изучены архивные материалы Республиканского Токсикологического центра’'ЛЗ Азербайджана о первых дней его открытия,т.е.со второй половини 1982 года до'1 января 1992 годо.Установлоно.что отравления препаратами группы бензодяазопинов среди оввцх отрав-лвниЗ.а такте среди отравлений лекарственными пропарптвми занимает значительное касто,т.о. 4,9 и 10*8$ соответственно.

Установлено,что часто встречаются отравления в основном пятью производными 1,4-бензодиазёпино - хлозепид.сабазон.нитразопая, иозепом и феназепамом.Отмечено,что у женщин средний показатель отравлений составляет 68,8&,У мужчин - 31,2%,в у детой - 16,8!? (Тпбл.1). ■ ' .

. ■ Таблица I

распространение отравлений препаратами бензодивзопинового . рядз по годам

гсды ЧИСЛО ПОСТУПИВШІЇ • больных • число отравлений производит бензодиа-заппно % отравлений относительно обгщм отравлениям % отравлений относительно лекарствен, пропер.отр,

сбдао от-ра вловия отравление лек. тгрэпар.

1582 250 17 6,8

1983 709 275 53 ' 8,2 21

1234 953 ■ •122 Є6 6-, 9 15.7

1985 1159 531 53 ' 5,0 10.9

1986 1193 522 67 ‘ 5,6 12.9

’ 1987 1156 583 50 . 4,2 8.6

. 1983. 355 532 33 3,8 6,2

1959 965 ' -102 23 '2,4 5.7

1990 1020 ■ 355 ’ 22 2,2 Є.П

1991 934 312 32 3,4 10.2

, срздп • 4,9 :с.б

ВИБОР АЗОКОМПОНЕНТА •

В целях НОХСВЩОНИЛ чувотвительных И УСТОЙЧИВЫХ КОМПОНОНТОВ азоо^чэташш при определении производных _1,4-<5ензодаазашта в ввдо первичного ароматического амина производи аналитический окрщншг последуя 1-нафтол, 2-нафтол, б-окышшолин, 1-ивфтил-еыин, 2-нофтцлашн, N -фенпл-1-вефпшшцн, И -фоннл-г-нвфталвш'н.

Для получения первичных сроматичосккх саганов нокоторао Ц*-неашощоннно производные (нозепаа, хлозопид, нятразепам, феназе-псм) были переведены путей гидролиза в банзсфеиони. Производниэ, оодераапдае в 7-огл псшозошш натрогруппу (ннтразепои, клоааэепаи в флпштразопаы) были восстановлены до ооответствугеих 7-ймкло~ беязодиазопкиов.

Установлено, что N-фенЕЛ-1-нвфтилшин является самш.' подходящий реагентом и образованное взосоодинопия икс ют положитольнко споктрофотшатричаские дштыо п но уступает азосоеданени/ь’!, образованным о помочью М-(1-нвфтйл)-»тилевдиаыии днгадрохлорздо (рпоЛх табл.2).

Рио.I.Спектры поглощения взояроизводцых,полученных путей сочотения «¡азотированного 2-емино-5-хлорбонэс4'0но-на (ДХБ} с: 1-н&фтолсм(1),М-фенил-1-и:4тйлеккнсы(2),

1-нвфтцлвм1П10м(3)1М-фонил-2-нафткло.у;<!;оы(4),8-скск-

хинолином(5) и N -('-на4тк.ч)-эткланди(1мин дигвдрохло-ридом(б);.£в I ом;С5-26.

Споптрофотомзтрнчасксз язучошю показало, что озопроизводішо, пспучошшо сочотаїпзсм М-фзппл-І-НЕфтплкяша с діюзотарованшм продуктпла гидролпап нозопаип п хлозоігада, сіект <V.a,t0 пря 560 ігі, іЇ9!газояс-'.!3 - 570 іпл, нитрозепамз - 550 км. При атом оброзоваїшпз ОЗОСОЗД’ЛНеиИЯ C'ODT рзз.’лчіїугз окрзопу D ЗПЗІГСПМССПІ ОТ pil роство-

рі (ргс,2).

Бисішзпно проддолсліетіо об азо-глдразсішоЗ таутсморли озо-осодалонп,“;, под шшлннсм рП_срздп її полярності! рзотзорптзлл»

' Рис„2.Спектри поглсг,-знпя азосседкігониії дпззотирепгшного АХБ с Л/—і" о г!:іл—І—її а J- ти.’иг c*.j в 30EUC!:r.;0ci:i от pH

■ рпстворо: 0,-15(1);0,65(2);0,8(3);1,2(4)',2,2(5);9,5(6)*

С ~ 20-25 .’.!кг/.мл. £ ~ І c:.!;C5-2S.

Усїпнсплзно, что псзопз?! лолпосізд игдролппуатсл до

5-хлог^оппо(-зноиа (АХБ) прл ІСО°С - за 15 г;:г:гуі',іір;і І20°С - зп 5 ”ллуг :з G Пох’іорлс'гс.зодорсдііс.і: і:;;слсі'0.;.:лг.с:::'::л:.!і0.'і усїсЛчп-зссть окрпс::іі азсссодллоігвЛ дсоїяглзтсч іігл сссїпс”г.:і:гл ізод:і: оїпчол (1:3,5), хотсрзл ссатлгллз? і-.гл pü^O.-IQ Б-3 п:хс?.

Уст:лсвло:ю,чго 7-питро-і,4-<;слзод::г.гапп!К!« иос-’п пссогспс:*.^';-іїпл до 7~г*::шспрсязводшгх а дглзотлропзігяя обрпзудгг о II "V3i-”л-

І-пг.Т.т;тдг::шс*і пртг р'Ь<0,';5 глубоксокрзр'зкпіга азопрсизлсд-ткого 7-п';::пспг::!г:ії''лпп! ятіїрсзопг.'з-Л.ог8 ирл г"0 ¡".".а 7-г.’.’:::!^прс:із-яодт;п глнтопп:?я *- 590 nt,о У-^і'лпстзслпподшг! &ятвггз?в«> i'ü - С?0 .ти ' ‘ ‘

FoaronT

(азосостелля-

е^зя)

. Нозепоу п глозепэд поело ггдролпза

Сонпзепгг,? пог.*.: гядсоляза

Б'/твэзег.зм поело

ГСДЕОЛЗЗа

зсостаяоалеккл

Окрзскз

‘ГЗК0..Е:

Окраска Л

Ь'ЗГ.С.,!1М

Окрика Д,,ако„ Окраска Л,акс>1

Н.” НМ

I —Иг ¿.тел СЕрзниио-малинсЕзя 530

I252T ПОСТСПСНЛО ПС-чозоат.

2-Не*тол 1!аглао2о-прзмозгл

Но »с-'еот зыраяоияо- -

ГО «3KC£jyi!3

6-г;:с.’!п:пол:ш розоЕзя.Онраскз ус- 510 тойчЕза при pH.II

1Ч1С-ЬТЕЛ££1Н СирЗНеВО-каЛИЕОЕОЯ 530 Окраска держатся около 7 днеЗ.^ри pH 6 еяроневая

2-Нофт]!ле;.'ИН розоэо-крешовзя 495

К-Зснкл-1-нв1— фиолетовая.Оксзска 5сС тиломен устойчиза 5-6 ч.при рН^0,45

Н-5оакл-2-1!э4>- Блэднс-мплкновая ТИЛСМИН ’----------

И-СЬкафткл)-

этклокдйемин

Гкгидрохлорнд

_____ _______ 514

'Kps pH 1-роз свая 512

При pH 10-иглияивея,52С чороз НОСК.ДНОЯ бледнеет п образует иа-линозн£ ссадог.

Сиреневая 55С-

Окрзсга устоП^ез в ч.

Сороково- 535 Г2Л1Ш02гЯ

Сиреневая 545

Кремовая

фиолетовая 5*7С •Окраска УСТОЙЧИВО 5-6ч-

J-Hi? 0,45

Синяя 605

С::нэ-ф::о-

ЛеТОЕБЯ

регезоя

Кремовая

Спнс-ч.::с- 5В0 Ксо^сгзя Л070ЕС.Я

Р03СЕС-уа-535 С-репевая- 520 каляноЕзя

СИрЗКОЕПЯ Сир-эке ??я 55С

рсзсзс-крз-

!-!СЕГ:Я

$3олчтсвЁЯ 5£С-

Скренесс- 555 резевлл °

i иолетс-Езя

СзадотоЕля 5&G Сяр-знзвзя 540 £;:0."г70?.2Я 535

:сенти:’і!клц;!я

разрзботшш мотодккл ііденті:^пкаіді!ії производных і,4-бонзодиа-зотглна .Определенно нсзеп8'.’а,:слсз2п::дя,нктразс:жіа :і фоназопа.’.’о оснспіпзсо гся на сбрззоданкз глубог.сокрапсншы азолрслзводних /;-іе;П:л-І-н^?ил5:0Гна с диазотироЕШШ!;;.г/ продукте:.™ их г;!дроглі-їїп.откгнййєкіШ :-:;ккмуи для нозепэма - 0,1 икг/.мл.для фонозспп-‘•■О - 0,25 г.::*:гА:л,ддя хлозешіда - 0,2 місг/мл.

7-Н'*:тро-І,•і-іоіізод’їозепглц (нхтрззопс.м,:<лснйзєпсм її флг-шт-рязепь:.:) били определены сссле ззсстснозлония ;к g пелсщьи цтін-::озо;і пклії до 7-з.ч;снопрсизводнілі при последующем д;:ззотироЕаші-с:.‘ 2 пзесочотеииеи С II -^ЄНПЛ~І-НЄ5Т2ЛС!іИНОМ.0ТКриВСОїЯі,1 МЯНКМуМ для пигргзопкла - 0,7 :.:кг/:.;л,злд хдонззепема - 0,3 икг/мл,для флг.н;ггразепз.’.:г - 0,5 жтД-л.Для прдг/.орз hv.zù дали oze.vu прозра-:юзепема л нктрззосаїа:

п

Нозєиі

“» ' А £Б

П.—

"Ч

П::тразздг:.’;

j

P.ï-UV.0 + Гіа '•! 0о + 2 і: СІ

-№сг +Г.Н20)

Яг — N =W

[Яг-fJEÍljCI +

♦

- ECI

HN-CeH5

Для исентг4икящ!11 ПРОИЗБСДННХ 1,4-б9Н30ДИа38ПИНВ был прикован в метод хроматографии з тонкоа слоо сорбента.Разделение бон-зодказешщов В H8TKBHCÜ влдо Cjj¿ осушостален - в система хлоро-(¿орьг-а&ир (75:25),в вкде Сензофенонов - в системе бензол.7-ш:т-роСонзодиязек:кы хроматографировались в системе растворителей хлорофоры-офар (1:1).

Еензсдвазохкны в натсЕзси балл определены на хроматографической пластинке " Sorbí;!’ с помощь» ровктква Драгондорфа. Зелпчакы Rf хлозепвдв составляет О.С5»сибазсна- о,6;нозепама-0,1;феназепауа- С,3.

Бензсдназепгни в &¡u;c Ссцзсфоыэиоз была обнаружены ка хроматографической пласт низ "SorbíU" пряншпо^, основанным на получен;::: еэосседкиеняя с coí.cís.2 i„' -фокил-1-на(1Тила1ина.Зол1!чи1Ш íit боазсфононов.поязпЕ-иес." на пластинке в влде фиолетовых пятен составляет для AS-0,45 и для 5-брои-АХБ (продукт, пщрала-'•т ^окьзбпа.’ла)- 0.6.Предал оЗксрухешш составляет для фоиезепз-ма у, позепаь:а - 0,05 ют .для ддозашща - I шег в'пятно. '

Для определения пролгзед^х 7-яятробокзодиазеш:на поело хро-¿¡стсгредироваиая к e'úzjzzlzzzs сластппгс: хрематогрзхллу просматривает под УО-лучвм;!.7-5^трзб211зод1шзс:шш обнаруживается в езде коричневых пятен.УстЕИО^леЕО, чт о 7-нптро0;удодаа'зошаш твкго могут бить опредолени на гр~.;атогргф::ческоД пластинке после все-етшшнлонкя с помопьв сло^з (II) хлористого,с послодуода даа-зотированнеа 8зосочатЕЕ22.\:.2:^И1тШ1Ш R{ состввляэт С,30;0,37;

0,55 (Сглуфол У&-356) z 0.23;С,33*0,44 (Sorbíil) соответственно для нитразопама.клопЕЗЕшшв п флгиитразопеаа.Продели обнару-иш пзтразепаиа - I гисг^илошаепс^а - 0,5 «кг и флюттразопа-U2 - 2 -кг в пятне. .

ОПРЕДЕЛЕНИЕ :В '.ТЛБЛЕТКАХ '

Разработаны фотометрические .метода .количественного определения нозапама .хлозешда и феназоппыв в таблетках.

. ' - IT -

Методи основаны на гнрэвадонгл нсзепел-з л хлсзеаидв в 2-аммно-5-хлор<5онзофянони я ^оивзог.рув а ^-Р^ино-бнЗрог.'-с-хлорбокэофснсна с иослодупскм диезоткровением и азссочетанием с псусїьп Ц- фенид-Т-нв^таЛагака.Стносктакькив ошибки составляют для нозопямб -1.3,27л,для хяозапкдв -£4,29#.для Цяиазепсма -£3,12.(Табл.3).

Т80ЛКСЭ 3.

Результати количественного определения нозевд^а и ^онозегвме э таблетках (л =5).

• Препарат, _

соргл А С1 ti 6

X «/=0.95 A,¿%

Тпбл«тк:( тазопаиэ по с,CI г ("pcff а")

6C320 99,4 2,63 1,17 3,25 3,27

Таблотїсі фоиазоязув ПО 0.ССО5 г

43C6SI; 95,624 Ї,4І 0,63 1,75 1,83

140352 97,316 2,45 І.С9 З.СЗ 3,1

■ ПСШЯ03.«П)В ЕЇОЛОПШСК5И 38ІКССТЕЗ -

Уотзпоэлзии оатк^альниэ я достушшо условия зкстрзкпзя псзо-. сака я ({зпазошйя из крог;п п гопи. пря вссгадокипга ярова,з п*ллз улуз-злал охстрзвдл позапсгз п фоназопа’п d пат.’тпс:: (ішиз^зішо.’г) зядз и уогрз”отл г.эрззодо оргзитгосг:ого рсизорзтолл d поднуо Сазу,а тоігго для создала» оп'пггалъпогэ зезчзшш pH, яспользоззи 0у*эр:и:3 раствор - пасш;э»гшЗ раствор стропил хлорида, доподошшЗ 2Ъ% стЕпакса до рз 9,2 - прз з:сстрогпрог.зшт ізозопсіга л рл 8,9 -прл экстрзгирсаллзз (їгзпазопз:.'з.Прз vaieu условиях экстрэгнрсмшго поззпзігз я іїояпззпсігз rjiiperj ссетавдяэт от S0.E3 до 97,3;t п о?

,G7;:' до G3,tí соотазгстгзэто.

Для ппстряг:!роьгнля ародукт(Г"гі!др05їзо нозогшма - АХБ из крою п метл попользовала гаптан.тзторый кззл<иедот ДХБ ст 92,2? до

07,Tí* а кропи и от 93,^1 до 26.6Í а иечо.Для зкстрзпфовзлля продукта гядрслязз .¿«юзопзма - 5нЗрсл-ЛХЕ пз кронч иипользовзлл з4ир,а КЗ иочп с::?сь ізорої,ор*-зтанолз (9:1),с дальне&коЯ очкст-К02 ІІ-ЗТОДС! ЗГрСі'ЗТОГрГфДН З ТОНКОЇ! СЛСЭ ссрбзнта.Пропоит эктре-гирозанил 5-бром-АХЕ из кровя состо&тяет от 92,6 до 94,-1?,а из .’-¡ст.: от 73,2 до 76,Й*.

разрзсотєіи ."еТОДИШ! фотоуотрячвского опродслния ноиопо.'.'а

и финегепо\:с з б;:олог;:ческос объектах на ос.чов« диазотцроааник продуктов ¡ос кислотного гидролиза с иос.".оду'сц;ш язоеочетакизм.

Прадстевлен споссо анализа нозопс.и ^виоэепе^а 1) двух нас-р и в.;;о а и ях, с с 1: о ь а: I:; и 1; на сгтрсдолоиг.х ь л^г/лним з;да и в ы-.-до продукта их гидрол'/.эс»

Для разр}'се:и;я сбр^зоьашгих глз:-;у:-.>!г.:дс13 ь к:сче кснользоье-ли кислотный гэдролта.

разработан способ анальаб.осаоьааний на сочетзииз катодов хроматографии в тонком слое сорбенте: ¡: с-накгройотокотр/и н цк-дикоЯ облести споктрз.Зцбрек глюонт прк хроагтогр^г.роэешш.

”отод::к;: еирсбкрсьэкц т. кровх к мс.че у лиц, отрзтшшхея г?з:-ып проверата.1.'.!:.

Продясспока схека исслодоаякпя б^слог'/ласких гулкостей (иочь, кровь) ии каличио нозспама фокозспи;о.Спределош: гранты об-

наружения к опрэдслош'.я этих иацоетй (?*'.бл.4).

Твй;ип;к 4

результаты ксличесгвекного определения иогепкма к фопс-зопауе з крови г> Пйтланом виде и) после пряного гидролиза (II) к в ;/оче поело прл:.юго гидролиза (III)

~~ дсбовло-'' Ны:‘цЦС!НО,в %_____________________

Препарат цо>в м;р X , (5 <5 г ^«=0,95 А>+%

Ноэопам I 5 . 97,3 1,4 0,53 1,75 1,8

10 32,7 ' 1,75 0,78 2,2 2,4

16 20,5 1,54 0,69 1,9 2,1

II 5 92,2 1,12 0,5 1,33 1,51.

10 94,1 1,4 0,63 1,75 1,66

16 97,? 1,0 0,45 1,25 1,28

III 5 96*6 2,07 0,92 2,55 2,64

10 95,4 2,7 1,21 3,33 3,52

- 20 93., 5 V* 1,07 2,97 3,13

Сеназепау I 5 88,4 2,21 1,17 3,25 3,63

10 08,0 3.03 1,53 3,83 4,35

20 87,0 3,26 1 (4 о 4,Со 4,63

II 5 9-1,4 4,34 1,34 5,32 5,71

10 92,6 2,3 1,03 2,86 3,09

20 93,0 1,9 0,85 2,36 2,54

III 5 76,8 2,28 1,02 2,83 3,68

10 73,6 2,97 1,33 3,69 5,01

20 73,2 3,05 1,33 3,78 5,. 1.5

07.I7S¿nJS,^, CHACCHA J ХРОВЛ ЇЗТОЛСЧ

• г/ло-зщкссткс:! лтс:.їатогрл::сі

работа B’JHO.'JiOiia на хрсузтогрэ;,а Цпот—530 с їор::о:гсн:ік.ч ло-твхторю.Коппсцтр'гпйЯ. сибазона з :;рог,' рзсчитап .«атодсп гнуг-рппз.’і стс:!лортпзги5!:: с учотсч отнссатсльчсго гзссвого ncapj-зочного ко:-{'ілісісиїп.кстсрнЛ для сябпзспа устднеалоп - 0,87.

В глпзсссî гаутрзьпого стандарта прл:-з:!лл-*. і:-ззаігм.і2Х лсс'одс-з:н"з с.::£азо:>а проводила на I ї/зтрозсЛ схзг-гсниеЛ колсл: j с zv.yr-р.'п:*.;*. лл.т’.ггрсм ?, і'.'і,содор:аг,::Л 3:> 07-210 im Хрс:*.лтс::о M-Svrer (0,125 - 0,160 :■'!). ' ‘

В у^зп'лпг: услс:л"і:с ;:спр"ЕЛол:::п :эг?’^т:п уд~и;:;г"л;*я д.тл с::Сззсиз :т г.,ззип:,:.*з сссї^ялт.:? ссотг'ітстг-зіио 2 с 69 с.

ОТНССЛТЗЛГЛСЗ Врг:." уДОрїШ’ЗНГП СЛЙ-ЇЗСІЛ^ОСДЛ отзісолг-злї-нсо '

з?з!*я ул-лр~л:пп:п:о кззопг-'а пглшіть рзлтлг: ол;:л::пз,ссстазляа?

2 "'лій 32 с (рлс.З).

По^зрзлло плсг.ідоЛ cntci! лрсзодллл "гзтодсч трзугаиилка”. Зкстрзглропзллз слбззслп из кропл прозсдлдл г^лрсч прл pH 9,2, котор’.’Л пслупзтсл с ncvcr.n буєрного рзстлорз - лзс.лцзшого рзстпор п‘~-*с:!г.и :!Г.осс,з,де::здз;шого 253 г^глагеч ло р'! 9,2.

07-210 -

I ill

■‘2 0 i""u

Fnc.3 лрс;'этогр~ч.“л рзстзорз е::0азояп (2) л .•:ззся2:гз(1) з зталслз.^атуїїтпігл пз'по-лсл:?э с КСП02ГЛГЛСЗ <£«сД ЗЛ 07-210.

. - 14 -

Метод позволяет определить 0.05 икг с::безсна в I «л крова. Процент извлечения скбозона из кров^ в контрольных опытах сос-тчвал от 91,05 до ЭЗ.ВО^.Относитольншг оаибко мотодика спрэде- ' лзнкя сабвзона в крови составляет ¿1,78? (Табл.5).

V

Таблица 5

Результаты количественного определения снбазсна в крови .

Неучено -

добавлено егбазона, Г "

в и кг х « £<*=0,55 к'^

I - 23,80 1,35 0,60 1,67 1,78

2 ' 52,44 0,48 0,21 , 0,56 - 0,63

4 31,05 1,11 0,50 1,39 1,53

ШВОДЫ ; . . •

1.Изучением архивных материалов Республиканского Тсксикологачес-. кого Центра ш Азербайджанской республики установлено,что отравления проперзта\к грухши. 1,4-бонзсдкозошшов среди ебздх отравлзшШ.п токео ср"да отравлений лзкарствонншш препаратами зонзкоот значительнса место - 4,э л Ю,Ой соответственно.

При это:.! часто встречаются отравления сладугсдоп: тфзпоратшта: хлозеннд.сибь^он.иптрэзенсм.цозехшу. и ¿:еназоиемол. ,

2.Установлено,что пр;; определении 1,4-б£Ш30днэз01ШК0в в е:що г^р-. алчного ароматического с.м;ша М^вши-ОДаЗгагиздг является '

ПОДХОДЯЩИМ рООГиНТОМ.ЛЗОСОеДШ10Ш!Д,Обр&ЗОЕШНШО с К -феШ!Л-1-

нефтнламиисм х«;сиг пововителышо ешкт-ро^ото^трлчеою-ш показатели,не устуиазда азосооданинаям, образовании'.) с пемедьь • М -(1-на^тел)-зтилзндиа'.сш дпгадрохлоргда.

3.№зктрофотс;.:отр;:ческоз изучение доказало,что азопро;:звод1шо<;

. полученные с по.моцьэ N -фшЕл-Х-на^талаьшна с диазстироизшш:,:;; продуктам гидролиза- нозопама у. хлозепзда/ииеют Л ,,,кй пр11 560 км (чувствительность реакция0,1 шх/илдля нозепоыа и 0,2 икг/мл - дпл хлозепидБ),иатразот!з:ла ~ Ь50 им и фсыазояам-570 шл (чузствито.-гшссть реакции - 0,25 ыкг/ал).

4.Установлено,что 7-1гатро-1,4-бшпоииаЗ'лта1Ш поело восстановло-НИЛ ДО 7-ЭШ!НОПрОНЗВОД!ШХ ЩМ ПОСЛОДУЮСОМ ДИОЗОТИрОВОНИИ и азосочотапки с N -фоклл~1-ирфтилг;л1Нс.ч образуют глубоксокра-Е01пшо озопрокзводнио: соответствующее нзопроиаводиоо яитроао-пама ¡таоот \!!ШС прл 500 пм (чувствительность - 0,7 икг/мл), глоказепама - 590 та (чувствительность - '0,3 мкг/мл) .флшитра-зопама - 570 йм (чувствительность - 0,5 мкг/мл).

б.Ваброн» оптимальные уоловяя для пиролиза некоторых произвол- ' них 1,4-бвнзодивзепикл,провэдон’/я хрсыогенноЛ реакции,разделения хроиптогрофиой в тонком слое сорбонта.о также их детектирования; ■ , ,

о)Из;' юно кинетика гадр^ етза нозепома до 2-2мзшо-5-хлорбокзо-|оиона в 6 л.хлористоводородной кислоте в зависга'.сти от тем- • порзтуры,которая составила при 120°С за 5 цзш.,прп 10О°С за 15 иин.

б)Устаноадоно,что мзкегиальиел интенсивность к устойчивость ок-

рвеедних рзствороз кковт ¡госто при соотцовонии воде ¿этанол (1:3,5) я рй<0,45. .

в)Длл раздолоия.. 7-нптробонэодваэоплиов о понолыз ТСХ прэдло-

ЯОНЫ СПСТО?Я1! ХЛ0р0ф0рг.»-5фПр (1:1),ДЛЯ других бОИЗОДИОЗОПИНОВ-

хло^сформ-э^ар (75:25).

г)Дотектирован1!о этих вьцэ^тэ па хро.магогрж.*ах метаю пропо-

, дчть в УО-облоота,рэоктавом Дрягандорфп и ррокивой азосочи-тапял,после порэг.едокп* их в соствотствуюсио ош«щ а диазо-тарсизтш. ■ . ■ .

5.Высказано прэлпологэняо об сзо-гцдрззонно*! таутомерии ззоссл-длкаииЛ,образованных о И -фо1Ш~1-на{)Тилт-!ннсм в зависимости от рЛ сроды а полярности раотвор'ятеля. . ' • '

р.разработаны гзтолпгл ндентгфткэю-'п производных 1,<}-<5о1гаодиоз0-пина п коллчостваниого определения нозепзма.хлозспида а фона, зепо?.’а з таблзтках.Относитслышэ ошибки составляют для нозепа-.’-'з ±3,22,для хлозогкда +<1,29*, для '^окззопага +3,1?.

(.Разработаны нетодига 4отс:.:отрлчоского определения нозопа.'.гэ и фаназопсма в хтрссг! п почв на осговэ дивьотирсвания продуктов гидролиза с псслодуглти а? '>сочеташ!е*4.Уст8Нивлв«ш опт;:м.ш.кк1 и доступтл изловил экстрагирования, позопш'э и ¿оказопега из

КрОВЯ И УОЧН. .

«Разрзбстая способ анализа иоьопзмз'п ^назопс^а.п’ Саодоппсог -ких обьоктах, осповзняый яз сочотадшэ «отидез .хркгатографаа ■ з-' тонксгл слое сорбента г опаятрофотсаэ* ркя я'гаяюоЗ сАласта' спектра.

10.Разработана методики газохрсиатографнчоского определения си-Оазоив в крови с относительной ошибкой +1,78?,с применением терыоионного детектоад.В качестве внутреннь.'о стандарта ис- " пользован мозапам.Мэтодяка позволяет определить 0,05 ыкг си-баэо^а в I ул крови.

По тема диссертации долоданы и оптОглковпп.ц '

сладудаие работы: •

I.Определение производных 1,4-бонзодиазепвпа в бнологичаскш: объектах и лекарственных формах // УГУ Республиканская Научная Коа$ерэццгя ыолсдых учених вузов Азербайджана,

26-27 декабря 1991 г. Тозиси докл.-Баку, 1993.-4.1.-0.81-65.

2.фотоштрачвокоа опроделонзо проазводнше 1,4-бонзодпазепзна в биологических объектах и лекарствошщх фор;;ах, ¡¡.¡зтод.роко-нзн.-Баку, 1994.- 20 с.(Соав.» ¿.Ц.Аяиев), .

З.Опродолошіо некоторых производных 7-вптро-І,4-Зонзодиазеішна.# Научная конференция сро^сссорско-приподавательского состава дзербоДдгапского цадящнекого уцавзроитота, посвадонаап итогам 1993 года. Тезисы докл.-Баку, 1994.- С.32ь-327.

4.Опродолонно гакоторше цровзводных 1,4-бопзодпозешша в бпологл-' чоекпх средазиТезиси докладов научно-практической кои$ерзи-ции молодых шдацанекпх учених роспублякл.-Баку,1934.-0.79-79. ; •' - ' ■ . -

5.Определение сибазока в крови катодам гозо-гшдкостной хрсаатог-

■ рафпн.маторлалц ваучноД ков*>ерокщш, посвяцошшо 75 до тот со дня Р05Д0ШІЯ Алиева Р.Г.-Баку, 1994.- С.47-47.

¿ОТОМЗГШЛ 'Із ГЛЗ-ї/AJE хроматсгрлешсьзідан

ИСГ.ЯЛДЭ ЕП'ЭКЛЭ 1,4-БЕИЗОдаАСШИЇІ ТвРЭМЭЛ: ?;шн

дэр.-.'лн їоршаршдл вэ биолснн сБаг*глзрдз

• • T3"J!íHIl •

X Y Л А С З ■

Муасир доппдэ Г,4-бонзоц’.тзппин торзмзли дэрчанлар и лртг-tacu илэ элагэдар ¡ізмин препарятларш мухтзлиф <^ек?лэрдэ ачализичз имхач перзн jenii, асач пэ вгтисаь-і чзЬотдан сзмэрзли то"jинат усулларимі Japsyawvacii obpypitjJsth чс.ідана 'tu jo.

''гспуб-тнк.-’.млда 1,4 бсчзодиазепнч тор;у.,ізлзрн илз озЬ«г5Лзнмз-лзр’.і ojpcHí.oic мэгсэдн илэ A33p5aj4a.4 Республикасн CsJ-.ij j3 Назир-л:фі Республика Токсиголожи .Мзркозии ачнландян, jo"riíf І982-чи илнч шшнчи japjcKwait 1992—чи ил janmpwi І-чз кнни олач архип натсриалларч яравдь’рнлмі.тачр. MyoJJoh олуні.упиур с:і, бу груп прппаратлар^ач, зсасзч бети - хлозепид, снбазоч, нитразепам, чо-зепач то фоназспамла ззЬзрлснмэлэрэ даЬа тоз-тсз раст кзличир. Костзрчзіс лазі.’«д!ф ки, бснзсдиазегсичлзрлз ззЬзрлзчмзлзр укуіг.і по дормаиларла заЬзрлзимзлзр арасг.чда ¡іураф-лг олараг 4,9 пз 10,8? гз’піспл едир. ¡.Ггз^^эчлз'тддрчя.птир ки, ззЬзрлзнмзлзрич орта :шс-тзр:іч'.їсі! гапьгчлар.арасі.тщс. СВ.О.кн'.гнлор арасігіда 31,2, уіяпглар

■ арастідп ::сз Іб,В7 ол.’утдур. .

fí^-ояээи олча^ач І,4-бензодиазепнч торзчэлзрини бпрли арсчз-тнк а”ич пэклинэ ксчнрдикдзч ссчр: aaopeaKcitja зсасіліда t3"Jhh сдзрлсч MYsjjcu олунгушур іш, II -Фэнил-Х-чафсилачич бу мзгсздло лзокоглочсчт кимч мунз’фзгн,} j зтло чст^ф^дэ олуча бил эр, чунгаї алліші озсСчрлсгг-гэлз. іпгсбзт спектрофотометри:: костэричилзрз ма-ли!;днр. ' ' ' .

Споі:трофо?о?.:отр'ля тз"^:інатла myoJJsm слут7'.:дур ка, Н -фамл~

< І-нафтилзїдч нозеп-ім сз хлозспидин дчааолагдігрлл^п Ьидролиз i.ioh-суллсрч илз 560 нч (роакси^анш Ьзосдслз.пчі нозспам учти -7,1 шсг/ мл, хлезепид Y4V4 - 0,2 wer/tut', ікггрггсізд по феказспачія диазо-л^гт.-і:рі«г*т-з Ьндролиз чэЬсуллары илэ г.сэ їг.-лофиг олараг 550 вз 570 нм (р?а-";и^анїм Ьзссаслі.ти - 0,25 іг.:г/глї далра узучлугларітч-да :пкс:і!у,ч удма ворнр.

7-Н:;тро-ІІ4-бечзод;*азопшілзр дз чзтнчзенчдз 7-^-інн-

бирлэтчз езкличз саліпідиГдан пз диазол; до.’рилді-тд'ш сонра II-фенил-

І-наЛггиламіїнла ке^-бзнепиз^и рзнхли азобо^алар змала катирир: мувафиг олараг нитразепам - 5В0 нм (реакси;)йнш Ьзссаслмрн -

0.7 мкг/мл1, кл^назепам - 590 нм (реаксі^аннм Ьзссаслням - 0,3 мкг/ млі, флучитразепам - 570 нм (реаксі^аньш Ьзссаслі.ірь: - 0,о мкг/

1.иО далра узунлугларьпща максимум удма^а малин азобирдзима.лар амала катирир. Квсті-рилзн препаратлар учун Еукер-Дамбєрт-Бер га-нуну ?-50 мкг/мл гатшнтда єзуну доррулдур.

МуЬитин рН-н па Ьалледичинин полЗарлирьп-і ,ан асильї олараг амала калан азобирлашмаларин гуру лупу - азо-Ьидразон таутомер/^асн ба-расинда фарзи;);)а ирали сурулмущдур.

1.4-Еензодиазепин терамаларинин Ьядрзлизи, хромокен- реаксіда-ньш апарьтлмасьт, онларьін назик табагали хромат ографя^ а у сулу ила бвлунмаси па та'^ин олунмасм учун опттал шараит сечилмишдир.

1.4-Бензодиазепин терачалари у'гун е^ннлик, чозепам, хлозепид

ва феназепам учун иса таблетларда млгдарн та’^инат усулу таклиф олунмутцур.Нисби хата нозепам учун +3,2?, хлозепид учун + 4,29?, феназепам учун +3,1?! ташкил едир. •

Нозепам ва феназепамн ганда ва сидикда та'^ин єтмак учун он-ларьін Ьидролиз маЬсулларнньїн диазолапщнрнлдш’дан сонра азобир-лаша амала катнрмасина асаслаїан, езувда назик табагали хро-матографи;}а ва спектрофотометри^ усулларикн чамландиран та"-Зинат усулу тзклиф олуш.гушдур. . - .

Сибазонун гаада тз’^ини термоион детекторлу газ'-ма^е хрома-тографи^асьт васитасила апарьглмьгццьір.Бу усул +1,7855 нисби хата- ■

¿а- малик олмагла 0,05 ьпсг сибазону. І мл’ ганда тз’^и.н стма.іа им-кан верир. . •

Uoing of Fhoto=otric end Gao-liquid Chromatography for Dotornining Derivatives of 1,4-Benzodlazepina in Reaedy Druga and Biological Fluids

' S u n п a г у •

At preeent it in very icportant to ostablioh new eaay and profitable cethoda of analysing the dorivativea of "1,4—benzodiazepine remedy dxuga аз they are encreaeing day by day.

By studying the archive naterialo of tho Azerbaijan Ilealth Miniotry Republic Toxicological Centro fron 1902 till 1992 it waa eatabliohed that ar.ong intoxicatera with resedioo of group 1,4-benzodiazopine and generally with other druga taicea important place - 4,9# nnd 10,0;$ accordingly.

In such eacae intoxication (poiaoning) often occuro with the following nedicinear chlozcpid, oibazon, nitrazepaa, погорая and phenazepan. It waa established that tho average of intoxication asong tho vonen is 68,C3, or.ong the nen - 31*2# end anong the children - 16,8#.

It was stated that during determination benzodiazepines no the primary arorcatic anin H-phenyl-1-naphthyleainé is tho suitable resgont. Azocoabination forsod with K-phonyl-l-naphthylanino, have positive apectropliotocstrlc indicea, whioh don’t yield nzo-coabinations forced with the help of H-(1-naphthyl)-ethilendiaaiE? dihydrochlorid. ' .

Gpectrophotonetric ctmdy of azocc=binationa nhowcd that azo-cerivativea,getting with the help Iî-phonyl-1-naphthylanine with diazotizating products of fcydrolize of погорал and cUlozepid, havo ùpen 560 пз (senoiritiva roaction - 0,1 cîrg/nl - for nozs-pan and 0,2 nkg/nl - for chlorapid), nitrazepaa - 550 пя and phe-nazepaa - 570 nn (3en3ivitive reaction - 0,25 nkg/nl).

It waa established that 7-nitro-"l,^-bonzodiazspinea after restoration till V-anino-darivativeo on following dinzoticatinç and azoconbination with H-phsnyl-l-naphthylasine lorned docply - coloured azodorivntivea: id^qaats azodcrivativca nitrarspaa, havo cn 580 na (cenolvitivo - 0,7 ¡ürg/al), clonazepan - 5?0 м (aon-oivitivo - 0,3 rirg/nl), phlunitrazopas - 5V0 cn (censivitivo -0,5 rirg/uil). Euger-Lanbort-Eser’a law io obeyed for then» dm»53 in the concentration rarju 2-50 е±з/п1-.

Tho optimal conditions havo' been chooon for liydrolize of oorao dorivativoc 1,4—bonzodiazepino, for carrying out chronogon roac-tion, ’divicion by thin-loyor chromatography and aloo ito dotoc-tion. . .

It wao BUGEOated that azo-hydrnzone tautoraeria of azocombina-tiono formed with I!-phenyl-1-naphthylanino doponding t’oon pH -oviroraont and polarity of diecolver.

Mothodo of 1,4-benzodiazepine dorivativen’ idontification and quantativo dotormination of nozopaa, chlozopid and phonazopan in table to worked out.Rolativo miotakoG composed for nozepam + 3»2^, for chlozopid + for phonazopan + 3,1^.

Kotlndo of photometric determination of nozepam and phonazc-pon in blood and urino on tho baaeo of diazotizationg products of hydrolizo with tho following azoconbination woro dovioed. Optinal accocoiblo conditions of extracting nozopaa and phonazopan frcm blood and urino wore dotorminod.

Tho way of nozepam and phonazopan analycio in biological ob-Jectc havo boon vorkod out formed on combinative methods of thin-loyor chromatography and spoctrophotoaotry in vioual fiold of ' cpectr.

liothod of GaG-Q^;!:'o”i1t0GraP^i0 determination Gibazon in blood (with rolativoly mistake ■* 1,7C^) has boon worked out ucin^ thornoion detoctor.Ao innor standard nezapem was uood. Tho nathodc which woro offorod, can rovcal 0,5 nkg cibazon in 1 nl of blood.