Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.01) на тему:Разработка и исследование лекарственных форм противовирусного действия

Всесоюзное объединение "Сопзфармация" при Минздраве СССР

ВСЕСОЮНЫЯ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ФАРМАЦИИ

На правах рукописи

ЕЛАГИНА Ирина Антониевна

РАЗРАБОТКА И ИССЛЕДОВАНИЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ ПРОТИВОВИРУСНОГО ДЕЙСТВИЯ

15.00.01 - технология лекарств и организация фармацевтического дела

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Моснва - 1991

Работа выполнена во Всесоюзном научяо-иоследовагельоком институте фармации (БНИИФ) Б/0 "Согзфармация" при Миниотеротве здравоохранения СССР.

Научный руководитель:

кандидат фармацевтичеоких наук,

старший научный оотрудняк Н.С.Козырева

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук,

профессор Л.П.Истранов

кандидат фармацевтических наук,

старший научный оотрудняк, Н.И.Бессонова

Ведущая организация - Харьковская фармацевтическая академия.

Защита состоится яб " НОА.6^\$ 1991 р. в часов на заседании Специализированного Ученого Совета Д 074.28.01 при Всесоюзном научно-иоследовательском институте фармации (117418, Москва, ул.Красшсова,д. 34).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНИИФ.

Автореферат разослан " / « О/ГГ^/гЛ 1991 г.

Ученый секретарь Специализированного Совета Д 074.28.01 кандидат фармацевтических наук,

старший научный сотрудник Л.М.Боброва

Актуальность гены. Создание ■ внедрен«« новых высокоэффективных лекарственных средств является одной и основных задач современной фармацевтическое науки.

Актуальность выбора направленна н объектов исследования обусловлена тем, что профилактика н лечение вирусных заболеваний! среди которых одно иэ ведущих мест занимает герпетическая инфекция, является острой проблемой практического здравоохранения. По данным ВОЗ в различных регионах земного шара вирусом простого герпеса (ВПГ) инфицировано от 65 до ЭО/Ь населения.

В нашей стране заболевания, обусловленные ВПГ, пока не подлежат обязательной регистрации. Однако, по предварительным данным число госпитализированных больных герпетической инфекцией превышает 2,5 млн. в год. Герпетические кератиты и иридоцинлии; составляют оноло 60% от общего количества больных с поражениями роговицы. К офтальмологам ежегодно обращается 100-300 тысяч больных с различными формами офтальмогерпеса. Больные гениталъ-ным герпесом в СССР составляют около 0,5/» населения.

Значительная распространенность герпетической инфекции, ограниченный выбор лекарственных препаратов для лечения, обуславливав! актуальность поиска противогерпетических средств.

Одним из направлений поиска противогерпетических средств является разработка высокоэффективных препаратов, обладающих строго избирательным действием по отношению к вирусу простого герпеса I и 2 типов.

Среди таких соединений интерес представляют синтетические аналоги пирофосфата - фосфоноуксусная и фосфономуравьиная кислоты, синтезированные в нашей стране по оригинальный методикам в Институте физиологически активных веществ АН СССР.

- ч -

Свойства препаратов активно ингибировать репродукцию ВПГ-1 и ВПГ-2 доказаны рядом отечественных и разубежных исследователей (Львов Н.Д., Самойлович Е.О. и др. 1989 г., Обег£ (Ь. О 1989 г.).

Однако применение данных веществ в фармацевтической практике нашей страны до настоящего времени ограничено из-за отсутствия эффективных лекарственных форы.

Цель исследования. Разработка научно-обоснованных составов и технологии получения стабильных и эффективных мазей на основе фосфоноуксусной кислоты для лечения кожного и гениального герпеса, а такае глазных лекарственных форы для лечения различных видов офтальыогерпеса.

Основные задачи исследования. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- экспериментально-теоретически обосновать состав и разработать технологию лекарственных форм фосфоноуксусной кислоты в виде казей и глазшх кспель;

- разработать методики качественного и количественного определения фосфоноуксусной кислоты в субстанции и лекарственных формах;

- на основе имеющихся методик исследовать физико-химические, физико-иеханичесние и биологические свойства мазей и глазных капель фосфоноуксусной кислоты;

- изучить стабильность разработанных лекарственных форм в процессе длительного хранения;

- изучить специфическую активность и биологическую безвред-•'¿оть разработанных лекарственных форм;

- на основании полученных результатов составить нормативно-техническую документацию, представить необходимые материалы

в Фармакологический комитет Минздрава СССР для получения разрешения на клинические иопытаняя.

Научная новизна. Теоретически л экспериментально обоснованы составы я технология лекарственных форм в виде мазей и глазных капель о новым комплексообразующим соединением -фоофоноукоусной кислотой, обладающей протявогерпетяческой актяв-ностью. Исоледована возможность количественного определения фосфоноуксусной кислоты в лекарственных формах о помощью фотокояорн-мегрической методики, основанной на предварительном разрушения С-Р связи я образования окрашенного соединения о реактивом на фос-фаг-ион. Изучена стабильность разработанных лекарственных форм фосфоноуксусной кислоты о использованием современных методов исследования ( ИК-опектроскопии и тонкослойной хроматографии) я установлен срок годности равный двум годам естественного хранения.

Практическая значимость работы заключается в том, что в результате проведенных исследований разработаны состав и технология 1% мази фосфоноукоусной киохоты для лечения геяитального герпеса, 25? мази - для лечения кожного герпеса, а также состав н технология 0,05% и 0,1% глазных капель для лечения офтальмогерпеса. На разработанные лекарственные формы составлена нормативно-техническая документация ( проекты ВФС на субстанцию и лекарственные формы фосфоноуксусной кислоты), которая находится на рассмотрении во Всесоюзном центре экспертизы лекарственных средств МЗ СССР ( письмо Фармакологического комитета МЗ СССР 211-7389/570).

Апробация работы. Результаты исследований доложены на Всесоюзной конференция мояодах ученых "Современные аспекты создания и изучения лекарственных форм ( Баку, 1984 г.), конференции молодых ученых я специалистов ВНИИ антибиотиков ( Москва,

1985 г.), конференции молодых ученых я специалистов ВНИИ® "Молодые ученые - научно-техническому прогрессу в фармация" ( Москва, 1986, 1987 гг.), рабочем совещания по применению комплексонов в медицине во. ВНИИ ШО ИРЕА ( Москва, 1990 г.).

СВЯЗЬ задач доследования о проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в ооответогвии о планом научно-исследовательских работ Всесоюзного научно-ясследовагельоко,-го института фармации МЗ СССР ( Я гос. регистрации 01.86.0I230I8), проблемно® комиссии "Фармация" Научного Совета АМН СССР № 48 "Фармакология и фармация" , а также в соответствия о комплексной программой научных исследований АН и АМН СССР "Фундаментальные наука -. медицине".

Положения, выяооямне ла защиту:

- опгямалькый состав, рациональная технология 1% и 25? мазей фосфоноуксуоной кислоты, методики качественного и количественного определения активной субстанция я результаты исследований стабильности разработанных лекаротвенкых форм в процессе длительного хранения;

- технологии сосгав 0,1% я 0,05% глазных каталь на основа фосфоноуксуоной кнслогн, методики качественного и количественного

их определяя а резульгатн исследований стабильности лекарственных форм в процессе длительного хранения;

- результаты исследования высвобождения фосфоноукоусной кислоты из мазей и глазных капель;

- результаты исследования специфической прогивогерпетяческой активности и биологической безвредности лекарственных форм фоофо-ноуксусной кислоты.

Публикация. По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ, 2 работы приняты к печати.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, 4-х экспериментальных глав, общих выводов, библиографии и содержит 139 страниц машинописного текста, в той числе 33 таблицы, 12 рисунков, 3 приложения. Библиографический указатель включает 165 источника литературы, из них 66 на иностранных языках.

Во введении сформулированы актуальность, научная новизна и практическая заачимость работы, указаны объем и структура диссертации.

В обзоре литературы (глава I) приведены сведения о применении современных противогерпетических сродств и лекарственных форы на их основе для лечения различных фор« герпеса.

Во второй глава представлены данные о физико-химических методах исследования. Дана характеристика объектов исследования (лекарственное вещество, вспомогательные вещества). Изложены экспериментальные результаты разработки методик количест венного определения фосфоноуксусной кислоты и обнаружения возможных продуктов разложения ее в лекарственных формах.

В третьей главе отражены результаты исследований по разработке оптимального состава и рациональной технологии глазных капель фосфоноуксусной кислоты, определены сроки хранения препарата.

В четвертой главе приведены результаты исследования по разработке состава и технология 1% мази фосфоноуксусной кислоты для лечения генитального герпеса и 2$ мази - для лечения жохного герпеса, определены сроки хранения препарата.

В пятой главе описаны результаты изучения в опытах ¿л v!éio и /л vivo на животных специфической прстиво-герпетической активности разработанных глазных капель на модели

экспериментального офтальмогерпеса и мазей на модели ножного ■ гениального герпеса.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

В соответствии с целями и задачами настоящей работы объектами исследования явились: фосфояоуксуская кислота, синтезированная во ВНИИ НПО ИРЕА и ИФАВ АН СССР, вспомогательные вещества: вазелин, глицерин, ланолин, метилцеллюлоза, натрий-карбоксиметил-целлюлога, полиэтиленонсиды 400 и 1500, эмульгатор к I, твин-80, шшагин, нипазол, натрия тетраборат. Для упаковки лекарственных форы использованы стеклянные флаконы для медикаментов вместимостью 10 мл (ОСТ 64-2-79-72), укупоренные резиновыми пробками марки И-51-1 с металлическими колпачками (ОСТ 64-7-85-79) под обкатку, алюминиевые тубы с лаковым покрытием (ОСТ 64-7-88-72).

В процессе исследования широко применялись современные физико-химические методы анализа: тонкослойная хроматография, ИК-спеитроскошш, фогоколориметркя и др. Определение эффективной вязкости мазевых композиций проводили на ротационном вискозиметре "Реотест-г" (ГДР), используя конус-пластинчатое измерительное устройство. Для оценки знсвсбождающей способности лекарственных форм использовали мегод равновесного диализа через полупроницаемую мембрану.

Для количественного определения фосфоноуксусной кислоты в лекарственных формах разработана фотоколориметрическая методика определения активного инградиента. Методика основана на определении общего фосфора в препарате по реакции окрашивания о реактивом на фосфат-ион. Чувствительность методики составляет 100 мкг фосфоноуксусной кислоты s I мл. Подчинение основному закону светопоглощевия наблюдается в пределах концентраций от 300 до

600 мкг/мл. Относительная оиибиа определения находятся в пределах от 2,65$ до 3,0056 для глазных капель в от 1,24% до 1,48$ для нагев.

С целыз идентификации лекарственных веществ в мазях и глазных каплях, изучения их химической стабильности в процессе длительного хранения, подтверждения отсутствия взаимодействия нейду компонентами использован метод хроматографии в тонком слое сорбента на пластинках "Силуфол". Для хроматографического разделения органических экстрактов мазей и глазных капель подобраны системы растворителей: для глазных капель - № I хлороформ-метанол-вода (6:2:1), № 2 - хлороформ-метанол (4:1), й 3 - хлорофорц-ацв-тоя-этаноз (1:1:4-), для мазей: te I - хлороформ-ацетон-метанол (1:1:4), )й 2 - хлорофори-метанол-этанол (1:2:3). В результате исследования были рассчитаны показатели для фосфоноуксусной кислоты и некоторых'вспомогательных веществ.

При установлении сроков годности лекарственных форм с фосфоноуксусной кислотой кроме количественного содержания и наличия возможных продуктов разложения определяли также значения рН, стерильность, вязкость мазей. Лекарственные формы также контролировали на отсутствие механических включений для глазных капель, изменение цвета, запаха, отсутствие зернистости мазей и др.

Определение антимикробной активности консерванта (0,1% нипа-

гина с нипазолом), обеспечивающего стерильность лекарственных

форм проводили на 7 тест-культурах: SCett Skj,(i$Moccccm. аитм, JbaiHivA ) Jbacit&A егг&мt Pînidoimo^aA. «w^'nii^

Cctndiola- aiéîcaiv,, РниьШпит ne Mu m

Оценку специфической активности и биологической безвредности лекарственных форм фосфоноуксусной кислоты проводили совместно с Институтом вирусологии им. Д.И.Ивановского на базе лаборатории сравнительной вирусологии (зав.лаб. докт.мед.наук И.Ф.Ба-ринский).

Специфическую противогерпетичесную активность глазных капель изучали на подели экспериментального офтальмогерпеса морских свинок и кроликов. Эффективность мазей определяли на модели генитального и кожного герпеса морских свинок и нролидоа. В качестве препаратов сравнения использовали полудан, 3% мазь мего-сина и 0,5% мазь оксолина.

Разработка состава и технологии глазных капель с фосфоноуксусной кислотой

Создание глазных лекарственных форм фосфоноуксусной кислоты обусловлено многообразием клинических проявлений герпетических поражений глаз, различной тяжестью протекания инфекции, ограниченным выбором лекарственных средств для лечении офтальыогерпеса.

Концентрация фосфоноуксусной кислоты выбрана по рекомендации клиницистов на основании результатов, полученных в экспериментах на животных, с учетом того, что для лечения перзвчных форм герпеса достаточно 0,0555 содержания активной субстанции в глазных каплях, для лечения же тяжелых рецидивирующих форм герпеса необходимы более высокие концентрации фосфоноуксусной кислоты.

В связи о 2ом, чтс раствор фосфоноуксусной кислоты имеет резко выраженную кислую реакцию (pli 1,0-1,2) и оказывает раздражающее действие на слизистые оболочки, для нейтрализации раствора изучено применение буферных систем; фосфатного буфера (рН=7,0), боратного буфера (рН=8,0) и раствора натрия тетрабората (рН=8,5). Из всех изученных буферов оптимальным нейтрализующим агентом оказался раствор натрия тетрабората в соотношении 1:2, обеспечивающий рН раствора фосфоноуксусной кислоты в коньюнктивальной полости глаза в пределах от 5,0 до 6,0. Кроме того, натрия тетра-борат обеспечивал изотоничность раствора глазных капель.

Одним из показателей качества глазной лекарственной формы

являете}, ее стерильность. Микробиологическими исследованиями установлено, что растворы фосфоноуксусной кислоты в концентрации менее I% легко подвергаются микробиому загрязнению, в связи с чем при кх изготовлении необходимо добавление консервантов и стерилизация.

В качестве консервантов использовали выпускаемые отечественной промышленностью и широко применяемые в офтальмологической практике производные пара-гидроксибензойной кислоты - нипагин и нипазол, которые хорошо совместимы с фосфоноуксусной кислотой и обеспечивают стерильность глазных капель в процессе хранения.

На основании проведенных исследований предложен состав глазных капель фосфоноуксусной кислоты: фосфоноуксусной кислоты 0,05 и 0,1 г, натрия тетрабората 0,1 и 0,2 г, нипагина 0,1 г, воды очищенной до 100 ил.

Технология приготовления глазных капель: раствори готовали в аспетических условиях, используя стол монтакный пылезащитный. В мерной посуде вместимостью 100 мл последовательно растворяли в горячей воде натрия тетраборат, нипагин, фосфоноукоуснуо кислоту. Глазные капли разливали во флаконы по 10 ил, укупоривали резиновыми пробками и металлическими колпачками под обкатку, стерилизовали пароы под давлением при 120°С в течение 8 мин. Глазные капли оценивали по показателям подлинности, количественного содержания фосфоноуксусной кислоты, значению рН, по внешнему виду, отсутствию механических примесей, стерильности

В процессе исследования изучена возможность приготовления пролонгированных глазных капель фосфоноуксусной кислоты, предназначенных для лечения рецидивирующих форм офтальмогерпеса. При выборе пролонгирующего полимера использовали экспериментальные исследования по изучению соваестзыости фосфоноуксусной кислоты с

различными полимерами, а также результаты исследования скорости высвобождения активной субстанции из растворов с различной концентрацией полимера. В качестве пролонгагора для растворов фосфоно-уксусной кислоты была выбрана метилцеллюлоза в концентрации от 0,5$ до Динамика концентрации фоофоноуксусной кислоты в диали зате через определенные промежутки времени представлена на рис.1.

Динамика высвобождения фосфоноукоусной кислоты из глазных капель, содержащих различные концентрации пролонгатopa.

С%

. - ! '> «г:, ? - .1,5% МЦ, 3 - 2%.щ, 4 - 3%т

Ряс. I.

Результаты исследования показали, что максимальноо содержание фосфоноуксусной кислоты через I ч в диализате наблюдается для глазных капель на 0,5% 1Щ - 95^. Медленнее шло высвобождение жз глазных капель на основе 2% и 5% 1Щ (соответственно 68% и 64%). Однако глазные капли на 3% МЦ были ближе к гелям и труднее закапывались в глаза, поэтому окончательно для создания пролонгированных глазных капель выбрана ИЦ в концентрации 1%. Глазные капли готовили в асептических условиях на воде очищенной по общепринятой технологии.

Исследование стабильности глазных капель в процессе хранения проводили на 5-ти сериях вещества в условиях повышенной температуры 60°С и комнаткой температуры.

Критериями качества глазных капель служили: величина рЯ раствора, стерильность, количественное содержание вещества и отсутствие продуктов разложения. Кроме того, о качестве растворов судили по ЯК-спектрам до и после хранения.

О результатах определения количественного содержания фосфоноуксусной кислоты в глазных каплях и изменений значения рН при исследовании г "условиях ускоренного старения" в течение времени, эквивал$г".,-:гто 2-у годам зотзстввнного хранении, сваде»-г данные табл. I.

Из данных, приведенных в табл. I видно, что в процессе хранения глазных капель практически не происходит изменения значения рН и количественного содержания фосфоноуксусной кислот:-;. Это позволяет сделать вывод о стабильности глазных капель в течение 2-х лет хранения в естественных условиях. Результаты хроматогра-фического анализа и ИК-спектроскопии подтвердили отсутствие продуктов разложения з лекарственной форме.

Таблица I

Изменение концентрации, значения рН глазных капель фосфоноуксусной кислоты в процессе хранения при

т^пия"1™!*?-1 исходные Шосле стерли- Шосле 24 нес.

главных юра капель, ___|______ {рН .]____ ] " ! ]рн 1 г 5! {рН ! ! с !

0,05 5,60 100,3+0,2 5,60 100,3+0,2 5,60 100,5+0,6

0,1 I 5,30 100,2+0,2 5,28 100,2+0,3 5,25 100,9+0,4

0,1 на МЦ 5,36 100,0+0,1 5,30 100,1+0,1 5,38 100,1+0, е

0,05 5,60 100,2+0,1 5,61 100,2+0,3 5,60 100,1+0,2

0,1 _п 5,26 100,0*0,4 5,29 100,1+0,3 5,30 100,4+0,3

0,1 на 1Щ 5,35 100,1+0,5 5,35 100,1+0,3 5,40 100,1+0,6

0,05 5,50 101,1+0,4 5,50 102,0+0,5 5,55 100,9+0,4

0,1 В 5,32 100,3+0,5 5,30 100,1+0,5 5,29 99,8+0,4

0,1 на Щ 5,30 99,9+0,6 5,31 99,8+0,3 5,30 99,9+0,4

0,05 5,60 100,4+0,1 5,55 100,2+0,3 5,55 100,3+0,2

0,1 Л 5,32 100,2+0,6 5,30 100,1+0,5 5,30 100,0+0,4

0,1 на МЦ 5,40 100,4+0,3 5,38 100,3+0,3 5,40 100,4+0,2

0,05 5,55 100,1+0,5 5,53 100,1+0,4 5,65 100,4+0,2

0,1 У 5,30 99,8+0,2 5,30 98,9+0,1 5,35 98,9+0,2

0,1 на МЦ 5,43 100,4+0,3 5,40 100,6+0,3 5,40 100,5+0,3

*> С-

С - концентрация в относительных процентах

Разработка состава и технологии ыазей о фосфоноуксуслой кислотой

Учитывая медицинские аспекты назначения и применения пази фосфояоунсусной киолоты, было проведено исследование по подбору носителя, обеспечивающего максимальное поступление лекарственного вещества в ткани коки. При создании мазевых основ использовали различные комбинации вспомогательных веществ (табл. 2).

Таблица 2

Состав мазевых основ

Название компонента

¡^Количество компонента £г)_в основе К° _

I ПТ]~Г}~4 {5~{1 у 7"["Г{1"|10 Уп~

Вазолкн Ланолин

Полиэтиленоксид 400

Полиэтиленоксид 1500

Полиэтиленоксид 4000

80

20

60 70 30 20

80 20

70

15

Вода очищенная 75 80 72 74 71 74

Глицерин 20 10 20 20 20 20

Метилцеллюлоза /Иг --Карбоксиметил-целлюлоза 5 5 4 6 С б

Твин-80 5 4 4

Эмульгатор № I 10

Поливинилпарролидон 10

15

Выбор основы проводили на основании способности 1% и 2$ мазей фосфоноуксусной кислоты высвобождать активный компонент через полупроницаемую мембрану. Результаты исследования показали,

чю наилучшим образом фосфоноуксусная кислота высвобождается из гидрофильных основ (ооновы 6-11). Однако, предварительные исследования специфической проти^огврпетической активности мазей показали, что для лечения генитальвого герпеса не подходят мази на полизтиленоксидяых основах, так как они вызывали раздражение слизистой оболочки. При лечения же кожного герпеса наоборот мази на полиэтиленоксидной основе обеспечивали поглощение экссудата, образующегося при появлении язв. В дальнейшем проводили исследования по разработке мазей двух составов: для лечения кохного и генитальвого герпеса.

Следующим этапом исследования был подбор оптимальной концентрации действующего вещества в мазях. В экспериментах на животных установлено, что фосфоноуксусная кислота в концентрации 2$ обеспечивает максимальный терапевтический эффект. Вместе с тем, на модели генитального герпеса показано, что в данной концентрации ФУК вызывает раздражение слизистой оболочки, снижение же концентрации активной субстанции до 1% устраняет данный недостаток и не сниаает лечебного эффекта.

Для оценк»! консистенции мазевых основ готовили водные растворы метилцеллюлсзы и натрий-карбоксиметилцеллюлозы и мази с различным соотношением полизтилевоксидов, исследовали их реологические параметры.

Результаты расчетов эффективной вязкости мазей показали, что наиболее вязкими являются гели МЦ;АЙСМЦ. Величина эффективной вязкости Ъ% геля ЦЦ при скорости деформации 1,80 с-1 равняется 5740 Па.С, а 4$ и 6% гелей соответственно 2070 Па.с и 12755 Па.с. Наиболее близксйпо консистенции к вазелину оказалась основа 5% гель метилцеллюлози.

Окончательный выбор концентрации основы в мази сделан на основании исследований в опытах Ы у'Но методом равновесного -диа-

яиэа через полупроницаемую мембрану. Проводял диализ мазей, приго. говленных на основе 4%, 5% а 6% гежя МЦ. В качестве раствора сравнения использовали I% водный раствор фосфоноуксуояой кислоты.

Анализ кинетических кривых, представленных на ряо.2, показывает, что вещество легко диффундирует через полупроницаемую мембрану. Максимальное содержание фоафоноуксусной'киолоты в диализате для мази на оонове 5 % геля МЦ достигалось через два часа и составило 58,4%, для 45? геля МЦ - 645?, для 6 % геля МЦ - 5С#. Высвобождение фосфоноуксусной кислоты из контрольного раствора происходило в течение 15 мин и достигало

Кинетика внвобохдения фосфоноуксусной кислоты из 12 мази, на основе метилцеллюлозн

время (ч)

I - .ЕЙ гель МЦ; 2 - 4% гель МЦ; 3 - В% гель МЦ; 4 - контроль

Рис. 2.

Таким образом, по результатам изучения реологических характеристик растворов Щ и кинетики высвобождения фосфоноуксусной кислоты из мази, в качестве основы для I% мази использовали 5% гель ЫЦ.

Для устранения раздражающего действия мази с фосфоноуксусной кислотой, а также с целью предотвращения микробной загрязненности и высыхания мазей, приготовленных на гидрофильной основе, в состав лекарственной формы введены такие компоненты как, натрия тетраборат, глицерин, нипагин в сочетании с нипазолом.

На основании проведенных исследований разработан оптимальный состав и технология мази с фосфоноуксусной кислотой для лечения генитального герпеса: фосфоноуксусной кислоты - 1,0 г; натрия тетрабората - 2,0 г; метилцелиюлозы - 5,0 г; глицерина - 20,0 г; нипагяна - 0,08 г; нипазола - 0,02 г; воды очищенной до 100,0 г.

Технология приготовления мази заключалась в набухании МЦ в горячей воде, растворении натрия тетрабората, консервантов, ФУК и добавлении полученного раствора в гель МЦ.

Полученная мазь представляла собой прозрачную гелеобразную массу без запаха.

Следующим этапом исследования явилась разработка оптимального состава мази для лечения кожного герпеса. В качестве основ использовали различные комбинации и соотношения полизтилекоксидов 400, 1500 и 4000.

Результаты исследования реологических свойств полиэтиленок-садных основ показали, что наиболее близкой по консистенции к вазелину была основа, содержащая 80 г ПЭ0-400 и 20 г ПЭ0-1500.

Исследование кинетики высвобождения фосфоноуксусной кислоты из мази на ПЭС основах показали, что максимальное содержание фосфоноуксусной кислоты в диализате достигалось через 1,5 часа

для мази на основе I - 52 % , для мази на основе 17 - 6Э? (рио.З).

Кинетика высвобождения фосфоноукоусной кислоты из мазей на полиэтиленокоидной основе

г

О--,-,---—г

I г 4 с

время (ч)

состав II - *1; соотав Ш - 2} состав 1У - 3; контроль -раствор фосфоноукоусной кислоты - 4.

Рис« 3.

Таким образом, на основании изучения реологических характеристик мазей на ПЭО основах и высвобождения активной субстанции в качестве мазевой основы для приготовления 2 % мази фосфоноукоусной кислоты отобрана основа 1У, содержащая 80 г ПЭ0-400 и 20 г ПЭ0-1500.

Для устранения раздражающего действия мази с фосфоноукоусной кислотой в состав лекарственной формы введен натрия теграборат в соотношении 1:2.

Ва основании проведенных исследований разработан состав и технология 2% мази фосфоноуксусной кислоты для лечения кохного герпеса: фосфоноуксусной кислоты 2,0 г,- натрия тетрабората - 4,0г; полнзтиленоксида 400 - 75 г; полнэтиленоксида 1500 - 19,0 г.

Технология иази: навеску ПЭ0-1500 расплавляли в фарфоровой чашке на водяной бане. Е готовому расплаву добавляли натрия тетра-борат, фосфоноуксусную кислоту, перемешивали до однородности, затеи добавляли ПЭО 400.

Мазь по внешнему виду представляла собой сыетанообразную массу без запаха.

Пять серий 1% и мазей фосфоноуксусной кислоты были расфасованы в алюминиевые тубы. Часть их была заложена на хранение при температуре 20°С, а другая чисть - исследовалась по методике "ускоренного старения".

При хранении мазей в них могут происходить изменения структурно-механических свойств. Результаты измерения реологических свойств мазей фосфоноуксусной кислоты показали, что на протяжении двух лет наблюдения величина эффективной вязкости практически не изменяется, что свидетельствует о физической их стабильности.

О химической стабильности IJ5 и 2% мазей фосфоноуксусной кислоты судили по исследованы) хроматографической чистоты, изменению значения рН и количественного содержания лекарственного вещества в мазях.

Исследование хроматографической чистоты 1% и 2$ мазей фосфоноуксусной кислоты выявило постоянство, значения идентифицированных лекарственных веществ. Отсутствие новых пятен на хро-матографических пластинках позволило сделать вывод о стабильности лекарственного и вспомогательных веществ в препарате на протяже-

ни двух лез наблюдения.

Оценку количественного содержания фосфоноуксусной кислоты и изменения значения рН проводили также в мазях, хранившихся при температуре 20°, 30°, 40°С через промежутки времени, эквивалентные 6 месяцам хранения при обычных условиях. Проведенные исследования подтверждают высказанное ранее цредположение о химической стабильности лекарственного препарата. Содержание лекарственного вещества в мазях сохраняется в пределах, практически не отличающихся от первоначальной величины на протяжении двух лет наблюдения.

Исследование специфической противогерпетической активности лекарственных форм фосфоноуксусной кислоты

Противогерпетическую активность глазных капель фосфоноуксусной кислоты определяли в культуре клеток и на животных в отношения ВПГ I (штамм Л^)« В качестве препарата сравнения использовали отечественный противогерпегачесний препарат полудан. В табл. 3 представлены результаты определения лечебного эффекта 0,05% и 0,1% глазных капель.

Данные, приведенные в табл. 3, свидетельствуют о тон, что у животных, леченных полуданом и фосфоноувсусной кислотой тяжесть клинических проявлений офтальмогерпеса была выражена значительно слабее (лечебный эффект составил соответственно 26, 38%).

Выздоровление животных от энцефалита наступало на 4 дня раньпе, чей в контрольной группе.

Одновременно было проведено исследование эффективности глазных капель на модели офтальмогерпеса кроликов. Лечебный эффект 0,05% ж 0,1% глазных капель составил соответственно - М6% и 58%. Продолжительность заболевания совращалась на 8 дней по сравнению с контрольной.

Таблица 3

Эффективность лечения офтальмогерпеса морских свинок

Т

Препарат

¡количество [суммарный индекс ТзащитныйГ 2йиш? выраженности сим- эффект, Р животных 1П10ма1ИКИ в баллах % !

! I ! !

Полудан ФУК 0,05% ФУК + полудан ФУК 0,1% Контроль

5 5 5 5 10

16,0+3,9 14,0+3,6 9,9+3,0 13,3+3,6 21,5+3,1

26 го,оо1

37 <0,001 58 <0,001

38 <0,001

Следующим этапом исследования явилось сравнительное изучение противогерпетической активности 1% и 2% мазей фосфоноукоусной кислоты на модели генитального и кожного герпеса. Результаты исследования представлены в табл. 4.

Таблица 4

Эффективность 1% и 2$ мазей фосфоноукоусной кислоты при экспериментальном геяигальноы и ножной герпесе

Препарат

------------т

|Злительность_заболевания1

| сутки

т

с иве, баллы

Тлечебный !эрект,% ! (Г* 0,001)

Мегосин 3$, мазь ФУК 1)2, мазь Контроль Оксолин 0,5% ФУК 2% Контроль

14,6+3,5 9,3+1,0 15,5+3,4 13,6+3,5 9,3+1,0 16,5+1,5

>0,05 <0,001

>0,05 ¿0,001

50,0+14,2

28,5+7,8

74,0+12,9

38 62

39 62

Как видно из данных, представленных в табл. 4, 1% мазь фосфоноукоусной кислоты обладала более выраженным противогерпетичес-

ким эффектом, чем 3% мазь мегосина. Лечебный аффект составил для 1% мази 62%, а для Ъ% мази мегосина 38%. Эффективность 2% мази фосфоноуксусной кислоты (лечебный эффект 62$) также был выае, чем оксолиновой мази (лечебный эффект 39%), длительность, заболевания сокращалась на 7 дней.

При изучении переносимости I% и 2% мази фосфоноуксусной кислоты, проведенной на базе МНИИ педиатрии и детской хирургии МЗ РСФСР и Института гигиены труда и профзаболеваний Ш СССР, установлено, что они не оказывали токсического, местнораздражаю-цего, сенсибилизирующего действия на лабораторных животных. Составлены проекты ВФС на I% и 2% мази ФУК, которые вместе с материалами доклинических испытаний мазей направлены в Фармакологический комитет Минздрава СССР.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ:

1. Теоретически и экспериментально обоснованы составы и разработана технология 1% мази фосфоноуксусной кислоты для лечения генитального герпеса состава: фосфоноуксусной кислоты 1,0 г, натрия тетрабората 2,0 г, нипагина в сочетании с нипазолом. 0,1 г, аетилцеллвлозы 5,0 г, .воды очищенной до 100,0 г.

Мазь обладазт оптимальными реологическими параметрами, обеспечивает достаточно полное высвобождение фосфоноуксусной кислоты (85-99$)1 стабильна в течение двух лет хранения в алюминиевых тубах. Лечебный эффект I% мази фосфоноуксусной кислоты на модели генитального герпеса составил 62%.

2. Подобран состав и разработана технология 2% мази фосфоноуксусной кислоты для лечения кожного герпеса, содержащей в г: фосфоноуксусной кислоты 2,0; натрия тетрабората 4,0; полиэтилен-оксида 400 - 75; полиэтиленоксида 1500 - 19,0, стабильной в те-

чение двух лег хранения. Лечебный эффект 2$ иази фосфоноуксусной кяологы на модели кожного герпеса - 63%.

3. В результате проведенных исследований подобран состав и технология 0,0556 я 0,1? глазных капель, 0,1% пролонгированных глазных капель, предназначенных для лечения различных видов офгалвмогерпеса. Глазные капли стабильны в течение двух лет хранения при комнатной температуре. Лечебный эффект 0,1$ глазных капе пель - 58$; 0,05? глазных капель - 48$.

4. Разработана методика количественного определения фоофоно-уксусной кислоты в 156,2% мазях и 0,05?, 0,152 глазных каплях, основанная на определении общего фосфора. Относительная ошибка определения фосфояоуксусной кислоты в мазях находится в пределах от 1,24$ до 1,45$, в глазных каплях от 2,65$ до 2,68$.

5. В экспериментах на животных изучена специфическая проти-вогерпетическая активность лекарственных форм фосфоноуксусной кислоты и подтверждено, что мази я глазные капли проявляют высокую противогертотическую активность и снижают длительность заболевания в 2 раза. Разработанные лекарственные формы не оказывают местнораздражающего, токсического, сенсибилизирующего и парааллергизирующего дейотвяя на лабораторных животных.

6. Разработана нормативно-техническая документация на лекарственные формы я субстанцию фосфоноукоусной кяологы, которая находится на рассмотрении во Всесоюзном цеятре экспертизы лекарственных средств ИЗ СССР ( письмо Фармакологического комитета МЗ СССР « 211-7389/570).

По теме диссертации опубликованы следующие работы:

1. Барышникова Г.И., Косырева Н.С., Тихончук H.A. Разработка и создание лекарственных форм с комплексообразующими соединениям.// Тез.докл.Всесоюзн.конференции "Современные аспекты создания и оценки лекарственных форм". Баку, 1984. С. 68-70,

2. Львов Н.Д., Самойлович Е.О., Мухина P.M. и др. Противо-герпетическая активность препаратов ацикловира и фосфоноуксусной кислоты In- v/iU) .// Химиотерапия и химиопрофилантина вирусных инфекций. Особо опасные и медленные инфекции. - Минск, 1985.

С. 26-30.

3. Косырева Н.С., Барышникова Г.И., Тихончук И.А. Исследование возможности создания лекарственных форм на основе яоылленсо-образующих соединений.// Научные труды ВНЙЙФ. Технологические аспекты создания лекарственных форм. - 1986. С. 179-182.

4. Елагина И.А., Львов Н.Д., Косырева Н.С. Исследование реологических свойств и специфической противогерпетической активности ыази с фосфоноуксусной кислотой.// Тез.докл.межрайонной конференции ГНИИСПС. - 1988- С. 16-17.

5. Львов Н.Д., Самойлович Е.О., Тихончук И.А. и др. Противо-геряетическая активность отечественных производных фосфономв кислоты и их сочетаний с индукторами интерферона на модели оф-тальмогерпеса.// Вопр.вируоологии - 1989.- 2.- с. 186-192.

6. Львов Н.Д., Самойлович £.0., Тихончук И.А. и др. Противовирусная активность ряда отечественных химиопрепарагов, индуктора интерферона ларифана и их комбинаций на модели экспериментального генитального герпеса морских свинок.// Вопр.вирусологии. - 1990.- № 4 - с. 338-342.