Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Особенности фармакокинетики фексофенадина при совместном применении с верипамилом и негрустином



—"оис>ы г 1э

Скуридина Екатерина Алексеевна

ОСОБЕННОСТИ ФАРМАКОКИНЕТИКИ ФЕКСОФЕНАДННА ПРИ СОВМЕСТНОМ ПРИМЕНЕНИИ С ВЕРАПАМШЮМ И НЕГРУСТННОМ

15 00 02 — фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Москва-2007

003058719

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Московская Медицинская Академия им И М Сеченова Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию

Научный руководитель:

Доктор фармацевтических наук,

профессор Галина Владиславовна Раменская

Официальные оппоненты*

Доктор фармаце втических наук Виктор Владимирович Чистяков

Доктор фармаце втических наук,

доцент Владимир Леонидович Белобородое

Ведущая организация:

Государственное Учреждение Научно-исследовательский Институт Фармакологии имени В В Закусова РАМН

Диссертационного Совета Д 208 040 09 в Московской Медицинской Академии им ИМ Сеченова по адресу 119019, Москва, Никитский б-р, 13

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ММА им И М Сеченова по адресу 117998, г Москва, Нахимовский пр-т, д 49

Автореферат разослан « /У» апреля 2007 г

Ученый секретарь Диссертационного Совета доктор фармацевтических наук,

Защита состоится « 2007 г

часов на заседании

профессор

Наталья Петровна Садчикова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы

Фексофенадин, производное гидроксиметилпиперидина и бензолуксусной кислоты, широко используется в последние годы для устранения симптомов сезонного аллергического ринита, симптомов хронической идиопатической крапивницы Являясь в основном «сезонным» препаратом, фексофенадин часто применяется на фоне терапии основного заболевания

Известно, что фармакологический эффект зависит от концентрации препарата в зоне рецептора, которая, в свою очередь, коррелирует с концентрацией в плазме крови В то же время на концентрацию оказывает влияние ряд факторов, таких как состояние органов и систем, пища, возраст, генетические факторы и другие Одним из основных факторов является взаимодействие лекарственных средств при их совместном приеме [Пальцев М А и др , 2004, Roberts S А , 2001, White R Е , 2000]

Среди видов взаимодействия (фармацевтическое, фармакокинетическое и фармакодинамическое) именно вследствие фармакокинетического взаимодействия возникает наибольшее число побочных эффектов при совместном применении лекарственных средств

Для изучения фармакокинетического взаимодействия, прежде всего, необходим аналитический метод, позволяющий уверенно следить за концентрацией лекарственного средства не менее 3-4 периодов полувыведения [Кукес В Г , Стародубцев А К , 2003]

В настоящее время наиболее перспективным и широко использующимся для этих целей является метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с различными типами детекции В связи с тем, что в отечественной литературе отсутствуют методики определения фексофенадина в плазме крови, а методики зарубежных авторов трудоемки, экономически недоступны или обладают

недостаточными точностью и селективностью, актуальной является разработка высокочувствительной и экономически доступной методики определения фексофенадина в плазме крови, в том числе в присутствии других ксенобиотиков Все вышеизложенное определило цели и задачи исследования

Цель исследования: изучить особенности фармакокинетики фексофенадина при совместном применении верапамила и негрустина

Задачи исследования:

1 Изучить хроматографические характеристики фексофенадина и разработать методику ВЭЖХ для его обнаружения в плазме крови

2 Подобрать условия экстракции и количественного определения фексофенадина в плазме крови методом ВЭЖХ

3 Изучить динамику концентрации фексофенадина в плазме крови человека и лабораторных животны> до и после курсового приема верапамила

4 Рассчит ать фармакокинетические параметры фексофенадина после его однократного перорального приема на фоне верапамила у людей и животных

5 Изучить динамику концентрации фексофенадина в плазме крови человека и лабораторных животны> до и после курсового приема негрустина

6 Рассчит ать фармакокинетические параметры фексофенадина после его однократного перорального приема на фоне негрустина у людей и животных

7 Оценить влияние верапамила и негрустина на фармакокинетику фексофенадина

Научная новизна.

Впервые разработана методика определения фексофенадина в плазме крови методом НЭЖХ с использованием спектрофотометрического детектора и изократического режима элюирования

Впервые изучены фармакокинетические параметры фексофенадина после совместного приема с верапамилом и экстрактом зверобоя у человека и лабораторных животных

Показана способность верапамила повышать, а экстракта зверобоя понижать содержание фексофенадина в плазме крови человека и лабораторных животных

Практическая значимость работы.

Разработанная методика определения фексофенадина в плазме крови методом ВЭЖХ внедрена и применяется в Филиале «Клиническая фармакология» НЦ БМТ РАМН при проведении фармакокинетических исследований

Полученные результаты изменения фармакокинетики фексофенадина при совместном применении верапамила и негрустина были пользованы при подготовке учебного пособия «Нежелательные эффекты лекарственных средств» (М Издательский дом «Русский врач», 2006)

Апробация работы.

Апробация работы проведена на кафедре фармацевтической химии с курсом токсикологической химии

Основные результаты работы доложены на ХН-м и ХШ-м Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2005 и 2006 гг), Пятой международной конференции «Клинические исследования лекарственных средств» (Москва, 2005 г), Х-м международном съезде Фитофарм 2006 «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения» (Санкт-Петербург, 2006 г )

Связь задач исследования с проблемным планом:

Диссертационная работа выполнена на кафедре фармацевтической химии с курсом токсикологической химии ММА им И М Сеченова в соответствии с плановой темой «Совершенствование контроля качества лекарственных средств» (номер государственной регистрации - 01 200 110545)

Публикации по работе.

По резулы атам выполненной работы опубликовано 5 печатных работ

Основные положения, выносимые на защиту.

1 Разработанная методика ВЭЖХ для обнаружения и количественного определения фексофенадина в плазме крови

2 Данные концентрации фексофенадина на фоне совместного применения верапамила или негрустина у лабораторных животных и пациентов

3 Результаты оценки влияния верапамила и негрустина на фармакокинетику фексофенадина у животных и человека

Структура и объем диссертации.

Диссертационная работа состоит из введения, главы «Обзор литературы», экспериментальной части, состоящей из главы «Материалы и методы», главы «Разработка методики ВЭЖХ для определения фексофенадина в плазме крови», двух глав, посвященных результатам исследования и их обсуждения, общих выводов, практических рекомендаций, библиографического указателя из 128 наименований (г том числе 20 отечественных и 108 зарубежных источников литературы), и приложений, содержащих иллюстративный материал

Работа изложена на 128 страницах машинописного текста, содержит 22 рисунка, 20 таблиц и 9 приложений

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Оборудование, реактивы и материалы

В работе использовалась хроматографическая система «Shimadzu» (Япония) со спектрофотометрическим детектором, интегратором «Shimadzu С-R6A», петлевым краном-дозатором (инжектором для ввода пробы) типа «Reodyne 7125» (США) с петлей ввода на 50 мкл В анализе использовалась колонка «ц-Bondapack Phenyl» 3,9 х 300 мм (зернение 10 мкм) Ввод проб в петлю хроматографа производился с помощью шприцов «Hamilton» (США)

На этапе разработки методики анализа фексофенадина применялись также обращеннофазные хроматографические колонки Separon С18 (3 х 150 мм, 7 мкм), Phenomenex Luna CI8 (4,6 х 150 мм, 5 мкм), Symmetry Sheild RP8 (5 мкм), Диасфер 110-Нитрил (4 х 150 мм, 5 мкм)

В качестве вспомогательного оборудования применялась центрифуга «Heraeus-christ Labofuge GL», встряхиватель для пробирок «Shaker S3», вибросмеситель «Vortex», роторно-вакуумный испаритель «RV 05 basic 1-В»

Разработка методики проводилась с использованием субстанции фексофенадина гидрохлорида, предоставленной фирмой (Aventis Pharmaceuticals Inc, Франция) Субстанция имела сертификат качества, подтверждающий количественное содержание фексофенадина гидрохлорида 99,2 % Количественное определение фексофенадина в плазме крови проводилось после приема испытуемыми таблеток Телфаст (фексофенадина гидрохлорид), производства Aventis Pharmaceuticals Inc , Франция

На этапе подбора условий экстракции фексофенадина из плазмы крови и выбора состава подвижной фазы использовались следующие реактивы марок «для ВЭЖХ» и «ХЧ» ацетонитрил, дихлорметан, этилацетат, натрия гидроксид, кислота хлористоводородная, триэтиламин, этиловый спирт,

диэтиловый эфир, кислота уксусная, кислота ортофосфорная, гептан, хлороформ, три> лоруксусная кислота

Тактика фармакокинетического исследования

В исследовании фармакокинетики препарата Телфаст принимали участие 14 пациентов (7 мужчин и 7 женщин) Возраст испытуемых варьировал от 28 до 52 лет Средний возраст составил 42,3 + 0,5 лет Пациенты принимали все лекарственные препараты по медицинским показаниям Всем испытуемым, получавшим до исследования Н1-блокаторы, БМКК и препараты на основе экстракта зверобоя, данные препараты были отменены не менее чем за 7 дней до начала исследования

В первый день исследования отбор образцов крови производился непосредственно перед приемом испытуемыми одной таблетки Телфаст, 180 мг и через каждые 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 12, 24 часа после приема Затем пациентов разделили на 2 группы первая группа принимала по 80 мг препарата Изоптин (верапамил) производства «Knoll AG» (Германия) три раза в день в течение 10 дней, 2-я группа - капсулы Негрустин, содержащие 425 мг сухого экстракта зверобоя 3,5-6 1, «Hexal AG» (Германия) 3 раза в день в течение 14 дней На следующий день после завершения приема верапамила или негрустина пациенты обеих групп принимали таблетку Телфаст 180 мг и через вышеуказанные промежутки времени производился отбор образцов крови

По аналогичной схеме было проведено исследование фармакокинетики фексофенадина у 12 кроликов (6 животных в группе с приемом верапамила и 6 животных в группе с негрустином)

Образцы крови для количественного определения фексофенадина отбирались в объеме 5 - 7 мл Пробы центрифугировались для отделения плазмы при 3000 об/мин в течение 10 минут и хранились до анализа при температуре -37 "С

Количественное определение фексофенадина гидрохлорида в плазме крови человека и животных проводили методом ВЭЖХ

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В результате серии экспериментов с использованием различных колонок и составов подвижных фаз для анализа фексофенадина в плазме крови оптимальными была признана приведенная ниже методика хроматографирования Оптимальной для анализа фексофенадина была признана колонка для обращеннофазной хроматографии Waters ц-Bondapack Phenyl 3,9 х 300 мм, сорбент которой представляет собой гранулы силикагеля с химически привитыми фенильными гидроксилами Длина волны спектрофотометрического детектора для определения фексофенадина была определена экспериментально и составила 220 нм

Наилучшее разделение пика фексофенадина от пиков соэкстрактивных веществ наблюдалось при скорости подвижной фазы 1 мл/мин Состав подвижной фазы для анализа фексофенадина подбирался на этапе разработки методики анализа Оптимальным оказался следующий состав подвижной фазы кислота уксусная 1,8 %, с содержанием триэтиламина 0,5 %, доведенная кислотой ортофосфорной концентрированной до рН 4,0 и ацетонитрил в соотношении 68 32 по объему

Экстрагирование фексофенадина из плазмы крови добровольцев и лабораторных животных проводили следующим образом к 1 мл плазмы добавляли 250 мкл 2 М кислоты хлористоводородной, перемешивали на приборе «Vortex», а затем добавляли по 2 мл дихлорметана, этилацетата и диэтилового эфира и помещали на 10 минут на встряхиватель для пробирок После центрифугирования в течение 10 минут при 4500 об/мин органический слой отбирали в колбы для упаривания и при помощи роторно-вакуумного испарителя удаляли растворитель Сухой остаток растворяли в 250 мкл подвижной фазы, из них 50 мкл наносили на колонку хроматографа

Хроматографические характеристики разработанного метода представлены в таблице 1, образцы полученных хроматограмм - на рисунках 1, 2 иЗ

ЭТАКТ

айШ^^иу] —тггг

1 О

------= п.изз

^ТОР

Рисунок 1. Образец хроматограммы, полученной из водного раствора фексофенадина 1000 нг/мл (¡г= 13,933 мин.).

СТАРТ

Рисунок 2 Образец хроматогралты, полученной из плазмы крови с содержанием фексофенадина 1000 нг/мл (1г = 13,173 мин.).

5.ии

Рисунок 3. Образец хроматограммы, полученной из плазмы крови, не содержащей фексофенадина.

Количественное определение препарата проводилось методом абсолютной калибровки по высоте пика фексофенадина Для этого использовались калибровочные растворы с концентрациями препарата 50, 100, 200, 400, 600, 800, 1000 нг/мл Приготовление калибровочных растворов осуществляли пугем добавления к плазме крови, не содержащей фексофенадин стандартного раствора с концентрацией препарата 10 мкг/мл в количестве 5, 10, 20, 40, 60, 80, 100 мкл Для приготовления 10 мл стандартного раствора 10 мг субстанции фексофенадина растворяли в 10 мл метанола (раствор А), затем к 1

мл раствора А добавляли 9 мл воды дистиллированной и тщательно перемешивали (раствор Б) Стандартный раствор получали путем разбавления 1 мл раствора Б 9 мл воды дистиллированной Далее поступали, как указано выше В указанном диапазоне концентраций калибровочная зависимость имела линейный характер (рисунок 4)

Таблица 1

Хроматографические характеристики метода анализа фексофенадина в водном растворе и в плазме крови

Хроматографические параметры В водном растворе В плазме крови

Время удерживания, мин 13,9 13,2

Число теоретических тарелок Ы= 16(1гЛУ12)2 3835 3428

Высота, эквивалентная теоретической тарелке, ВЭТТ(Ь) = ШЧ, мкм 78,2 87,5

Приведенная ВЭТТ, ПВЭТТ = ВЭТТМс 1278,2 1142 6

Селективность, А = (1г2 - Ь)/^, -1)) 1,22 1,17

Коэффициент удерживания, К = й- Ли 4,5 53

Коэффициент емкости, К = (й1 - 3,5 4,0

Wi 2- ширина пика на полувысоте, мм,

to— мертвое время колонки (время удерживания несорбируемого компонента), мин,

tri — время выхода фексофенадина, мин,

tr2 - время выхода пика, ближайшего к пику фексофенадина, мин

Рисунок 4. Калибровочный график фексофенадина в плазме крови.

Уравнение калибровочной зависимости для определения фексофенадина в плазме крови

у = ах + Ъ== 0,0597х - 0,0068, где у - высота пика фексофенадина, мм, х -содержание фексофенадина в стандартном растворе, нг/мл Коэффициент регрессии гдля данной калибровочной зависимости равен 0,9923

Предел обнаружения фексофенадина в плазме крови составил 8,4 нг/мл Для оценки точности и воспроизводимости разработанной методики определения фексофенадина в плазме крови по результатам 5 параллельных измерений 6 концентраций препарата были рассчитаны метрологические характеристики метода (таблица 2)

Таблица 2

Метрологические характеристики разработанной методики количественного определения фексофенадина в плазме крови, 5, = 2,78

Концентрация стандартного раствора(нг/мл) Результаты статистической обработки полученных данных

X з2 Дх X ± Дхср 5ср, %

100,0 101,6 11,2 42 101,6 + 3,3 4,1

200,0 200,2 32,0 7,0 200,2 ±5,7 3,5

300,0 299 2 59,6 9,6 299,2 + 7,7 3,2

400,0 399,0 84,6 11,4 399,0 ±9,2 2,9

500,0 499,3 148 0 15,1 499,3 ±12,2 3,0

600,0 598 6 131,2 14,2 598,6+ 11,5 2,4

Полученные результаты показывают необходимую точность разработанной методики количественного определения фексофенадина (относительная величина систематической ошибки не превышала 4,1 % при определении фексофенадина в водном растворе и 6,8 % при определении в плазме крови) Разработанная методика была использована нами в фармакокинетическом исследовании фексофенадина при совместном приеме с верапамилом и негрустином

На рисунке 5 представлены фармакокинетические кривые фексофенадина в плазме крови кроликов до приема верапамила

4 6 * 10 12 14 16 1Я 2И 22 24

Время ПОС1С приема фексофснадина ч

4 б в 10 12 14 16 18 20 22 24 Время поспе приема фексофснадина ч

Рисунок 5 Динамика содержания фексофенадина в плазме крови кроликов до приема верапамила (п = 6)

Рисунок 6. Динамика содержания фексофенадина в плазме крови крочиков после приема верапамила (п = 6)

Средняя максимальная концентрация в плазме крови (Стах) составила 240,4 + 18,2 нг/мл (СУ = 8 %), время, необходимое для ее достижения (Ттах) 4 ч (СУ = 0), а период полувыведения (Т1/2) - 9,4 + 7,0 ч (СУ = 75 %)

На рисунке 6 показаны фармакокинетические кривые фексофенадина после приема верапамила Необходимо отметить значительное увеличение межиндивидуального разброса значений концентраций у кроликов после приема верапамила по сравнению с разбросом концентраций до его приема (СУ для Стах с 8 % увеличился до 43 %, а для Ттах увеличился с 0 до 84 %) Статистическая достоверность различий между содержанием фексофенадина в плазме до и после приема верапамила была подтверждена результатами проведенного 1-теста для средних (р < 0,05)

Результаты исследования указывают на значительное увеличение уровня препарата в плазме крови после приема верапамила и выраженное сокращение времени, необходимого для достижения максимальной концентрации в плазме крови (в среднем на 2 часа) Влияние верапамила на фармакокинетику фексофенадина представлено на рисунке 7

Время после приема фексофенадина ч

Рисунок 7. Фармакокинетические кривые фексофенадина у кроликов до и после приема верапамила (п = б).

В таблице 3 приведены фармакокинетические параметры фексофенадина у кроликов до и после приема верапамила Необходимо отметить значительное увеличение биодоступности препарата после приема верапамила ЛиС0 24, исходно составлявший 1375 + 254 (СУ = 23 %), после приема верапамила увеличился до 3222 + 1014 (СУ = 39 %), средняя Стм находившаяся до приема верапамила в пределах 240,4 + 14,5 нг/мл (СУ = 8 %) после его приема достоверно увеличилась до 483,7 4_ 167,8 нг/мл (СУ = 43 %) Ттах в плазме крови кроликов статистически достоверно сократилось с 4,0 ч (СУ = 0) до 2,0 + 1,34 ч (СУ = 84%)

Изменение параметров Т1/2 и МЯТ после 10-дневного приема верапамила статистически не достоверно

В исследовании фексофенадина у добровольцев было также установлено статистически достоверное увеличение биодоступности фексофенадина после приема верапамила На рисунках 8 и 9 представлены фармакокинетические кривые фексофенадина у испытуемых до и после приема верапамила соответственно

Таблица 3

Фармакокинетические параметры фексофенадина у кроликов до и после приема верапамила (п = 6)

Фармакокинетические параметры Статистическая обработка результатов

X 52 Дх СУ, % Хщт Хщач

АиСп .4, нг/л ч 1375 318 254 23 1012 1856

п г: АиСо., нг/л ч 2449 1610 1288 66 1452 5511

га Т™„ч 4,0 0 0 0 40 4,0

сз о. С™,, НГ/МЛ 240,4 18,2 145 8 210,7 260 9

со « г а> С1, л/ч 10 1 18,1 14,5 179 44 51,2

К„, Ч 1 0,07 0 11 0 09 148 0,04 0,31

о. МЯТ, ч 14,4 9,6 76 67 5,0 24,7

о Т, 2, ч 94 7,0 5,6 75 23 18,7

У^Л 136,8 31,0 24,8 23 97,0 178,0

я АиСо 24, нг/л ч 3222 1267 1014 39 1972 5308

Е г АиСо,, нг/л ч 3800 1267 1014 33 2578 5885

с Тт.4,4 2,0" 1,7 1,3 84 1,0 50

о. и С,™,, нг/мл 483,7" 209,7 167,8 43 118,0 715,4

И г С1, л/ч 4,0 2,3 1,9 59 24 86

и К«, ч' 0,06 0 02 0,02 36 0 04 0 10

С МЯТ, ч 100 4,4 3,5 44 4,3 16,3

^ О Т,7, Ч 10 9 4,5 3,6 41 6,9 19,2

С 62,9" 22 4 17,9 36 33,9 91,3

- достоверность различий фармакокинетических параметров фексофенадина в плазме крови кроликов до и после курса приема верапамила (* - р<0,05, " - р<0,01)

Рисунок 8 Динамика содержания фексофенадина в плазме крови добровочьцев до приема верапамила (п = 7)

Рисунок 9 Динамика содержания фексофенадина в плате крови добровочъцев после приема верапамила (п = 7)

Следует отметить, что межиндивидуальные различия фармакокинетики фексофенадина у добровольцев менее выражены по сравнению с кроликами, как до, так и после приема верапамила Коэффициент вариации СУ составил для С1ШХ 18 % и 12 %, для АиС0 м 35 % и 26 % до приема и после приема верапамила соответственно

Фармакокмнетические кривые, построенные по усредненным данным содержания феь софенадина до и после приема верапамила добровольцами, приведены на рисунке 10

700 -§ 600

I -100 ' \ ^ 1

£ 300 г1

О 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24

Время пекле приема фексофенадина ч

Рисунок 10. Фармакокипетические кривые фексофенадина у добровольцев до и после приема верапамила (п = 7).

У добровольцев наблюдалось статистически достоверное увеличение биодоступности фексофенадина после десятидневного приема верапамила Среднее значение максимальной концентрации с 310,2 + 44,1 нг/мл (СУ = 18 %) до приема верапамила статистически достоверно возросло до 571,8 + 53,4 нг/мл (СУ = 12 %) после его приема Площадь под фармакокинетической кривой, составлявшая в среднем 1929 + 547 (СУ = 35 %) до приема верапамила, достоверно увеличилась до 4036 + 834 (СУ = 26 %) после приема верапамила. Снижение Т1/2 препарата с 13,0 + 4,6 ч (СУ = 44 %) до 11,3 + 1,7 ч (СУ = 19 %)

--до приема

верапамила " " " после приема верапамила

после приема верапамила было статистически недостоверным Основные фармакокинетические параметры фексофенадина у пациентов до и после приема верапамила приведены в таблице 4

После приема верапамила как у пациентов, так и у кроликов можно отметить статистически достоверное увеличение площади под фармакокинетической кривой АиС0.24 (соответственно в 2,7 и 2,4 раза), увеличение Стах в 2,1 раза в обеих группах, а также сокращение времени ее достижения, соответственно, в 3,0 и 1,6 раза Т|/2 фексофенадина не отличалась достоверно от исходных значений как у пациентов, так и у кроликов

Таблица 4

Фармакокинетические параметры фексофенадина у добровольцев до и после приема верапамила (п = 7)

Фармакокинетические параметры Статистическая обработка результатов

X 82 Ах СУ, % хт,„ Хтах

до приема верапамила АиСо 24, нг/л ч 1929 684 547 35 1198 3012

АиС(>„, нг/л ч 4284 3506 2806 82 1237 10332

Тпм* ч 2,3 1 0 08 42 1 0 30

Стах иг/мл 310,2 55,1 44,1 18 204,7 358,3

С1, л/ч 5,9 3,6 2,9 61 2,1 11,9

К„, ч1 0 05 0,02 0,02 46 0 03 0,09

МПТ, ч 15 4 69 5,5 45 74 27 4

Т,2 ч 13,0 5,7 4,6 44 80 20,0

V,, л 1109 34 8 27,9 31 59 8 150,3

после приема верапамила АиСп 24, нг/л ч 4036" 1043 834 26 2616 5306

АиСо „ нг/л ч 5442 2891 2313 53 2784 11297

Т„„ ч 14 0,6 04 39 1,0 2,0

Стах нг/мл 571 8'" 66,7 53,4 12 454 0 612,9

С1, л/ч 3,1' 1,8 1,4 58 1 8 6,3

К„, ч' 0,06 0,02 0,01 28 0 05 0,09

МЯТ.ч 13 6 44 3,6 33 80 22 3

Т12.Ч 11,3 2,1 1,7 19 7,6 13,2

У„ л 49,9" 16,6 13 3 33 33,9 68,8

- достоверность различий фармакокинетических параметров фексофенадина у добровольцев до и после приема верапамила ( -р<0,05, -р<0,01, - р <0,001)

На рисунке 11 представлены фармакокинетические кривые фексофенадина у кроликов до приема негрустина, а на рисунке 12 - после него

В обоих случаях можно отметить значительный разброс концентраций препарата в плазме у разных кроликов, однако, ни в том, ни в другом случае, по итогам дисперсионного анализа не выявлено достоверности межиндивидуальных различий Согласно результатам выполненного 1-теста для средних, различия содержания фексофенадина до и после приема негрустина были достоверными у 5 из 6 испытуемых животных (р < 0,05)

Наглядно снижение биодоступности фексофенадина у кроликов в целом представлено на графиках содержания фексофенадина у кроликов до и после приема негрустнна, построенных по усредненным данным (рисунок 13)

J б 8 1« I! 14 16 I» 20 2 14

Время гослс приема фексофенадина ч

Время пост; приема фексофенадина ч

Рисунок 11 Динамика содержания фексофенадина в плазме крови крочиков до приема негрустина (п = 6)

Рисунок 12 Динамика содержания фексофенадина в плазме крови кроликов после приема негрустина (п = 6)

Фармакокинетические параметры фексофенадина в плазме крови кроликов до и после приема негрустина представлены в таблице 5 Проведенный однофакторный дисперсионный анализ данных не выявил достоверности межиндивидуальных различий фармакокинетических параметров фексофенадина у кроликов до и после прием негрустина

700 600

До приема

негрустина

ю *00 - " " После приема

а. * негрустина

400

я

^ 300 /\

200 / \

X / 4—\

* 100 1 » * —

ч

и

0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24

Время после приема фексофенадина ч

Рисунок 13. Фармакокинетические кривые фексофенадина у кроликов до и после приема пегрустина (п = 6)

Стах с 385,2 + 131,9 нг/мл (СУ = 43 %) после 14-дневного курса приема негрустина статистически достоверно снизилась до 158,8 + 34,1 нг/мл (СУ = 27 %) В то же время наблюдавшееся увеличение Аис0« с 3110 + 1153 (СУ = 46 %) до 4175 + 2134 (СУ = 64 %) и Ттах - с 2,3 ± 0,5 ч (СУ = 22 %) до 3,0 + 1,1 ч (СУ =47 %) не было статистически достоверным Статистически достоверно увеличилось МЯТ с 6,30 ± 1,2 ч (СУ = 23 %) до 25,7 + 10,0 ч (СУ = 48 %)

Таблица 5

Фармакокинетические параметры фексофенадина у кроликов до и после приема негрустина (п = 6)

Фармакокинетические Статистическая обработка результатов

параметры X 52 Дх СУ, % хтт Хта\

ез з: АиС1Ш, нг/л ч 2257 662 530 29 1723 3428

АиСп г нг/л ч 3110 1441 1153 46 1886 5428

н и Ттах, Ч 2,3 0,5 0,5 22 20 3,0

а. и Спшч» нг/мл 385 2 164,8 131 9 43 205,4 690,3

X « С1,л/ч 5,78 7,5 6,0 129 24 20 3

г и Ке1, ч' 0 07 0,07 0 05 99 0 05 0,20

О. МЯТ, ч 6,3 1,5 1,2 23 4,3 8,5

О Т,2 Ч 102 5,0 40 49 3,4 15,3

84,8 21 0 16,8 25 52,5 104,5

АиСо и нг/л ч 2538 1658 1326 65 1012 5465

н и АиС„ „ нг/1 ч 4175 2667 2134 64 1606 8715

О. Ття\ Ч 3,00 1,41 1,13 47 1,00 5,00

1» X С™ч, иг/мл 158 9" 42,6 34 1 27 93 5 205 4

з С1,л'ч 37 2,9 2,3 78 1,7 92

= Кн ч1 0 04 001 0,03 103 0 02 0 12

с: МИ\ч 25,7 12,4 100 48 9,9 40,8

г; и Т,2,Ч 183 9,? 7,8 53 5,6 29,1

с V,, л 96 8 53 4 42 7 55 32,9 177,8

- достоверность различий фарчакокинетических параметров фексофенадина в плазме крови кроликов до и после курса приема негрустина ( - р£0,05)

На рисунках 14 и 15 представлены фармакокинетические кривые фексофенадина у добровольцев до и после приема негрустина соответственно

Время посте приема фскеофенаднна ч

4 4 » 10 и 14 и 1Я 20 II 24

Время поете приема фсксофснадина ч

Рисунок 14 Динамика содержания Рисунок 15 Динамика содержания фексофенадина в плазме крови добровольнее фексофенадина в плазме крови добровольцев до приема негрустина (п = 7) после приема негрустина (п = 7)

Результаты проведенного парного двухвыборочного 1-теста для средних позволяют считать статистически достоверным отличие фармакокинетики фексофенадина после приема негрустина от исходных данных у 5 из 7 испытуемых Усредненные фармакокинетические кривые содержания фексофенадина у добровольцев до и после курсового приема негрустина представлены на рисунке 16

Время после приема фексофенадина ч

Рисунок 16 Фаршкокинетичвские кривые фексофенадина у добровольцев до и после приема негрустина (п = 7).

Основные фармакокинетические параметры фексофенадина у добровольцев до и после приема негрустина представлены в таблице 6

Таблица 6

Фармакокинетические параметры фексофенадина добровольцев до и после приема негрустина (п = 7)

Фармакокинетические Статистическая обра ботка результатов

параметры X s2 Ах CV, % Х|ТНП Хщах

AUCo 24, иг/л ч 2079 736 589 35 1053 3035

X К AUCo „ нг/л ч 2511 1121 897 45 1076 3840

о Т„,„, ч 2,3 0 5 04 23 1,0 2,0

D. U Спич нг/мл 310,2 53,0 42,4 17 329,4 459,3

X С1, л/ч 63 4,4 3,5 70 32 14 5

Е Ке, Ч1 0,06 0,02 0 01 28 0,05 0,09

X о. MRT, ч 13 2 4,4 35 33 7,7 20,7

о Т|2, ч 11,2 2,9 23 26 7,8 15,2

102 0 41,6 33 3 41 59,3 170 9

я X AUCo 24 нг/л ч 1156" 385 308 33 697 1772

н AUCo.,, нг/л ч 1367' 488 391 36 731 1859

£• Тт„ ч 3,2" 1,5 1 2 46 1,0 5,0

V X Ст«\, нг/мл 161,4"' 47 1 37,7 29 93 5 205,4

м С1 л/ч 16,7" 10,1 8 1 61 9,0 33,7

/и К Ке, ч' 0 10' 0,04 0,03 37 0 05 0,14

X MRT, ч 10,5 2,8 2,3 27 72 15,5

Т,2,Ч 8,0 2,7 22 34 5,0 12 7

о X 169 6" 63 5 50,8 37 101,6 258 4

- достоверность различий фармакокинетических параметров фексофенадина у добровольцев до и после курсаприеманегрустина("-р<0,05," -р<0,01, *"*-р <0,001)

Изменение фармакокинетических параметров фексофенадина после приема негрустина было статистически достоверно Средняя АиСо--я с 2511 + 897 (СУ = 45 %) сократилась до 1367 + 391 (СУ = 36 %), а максимальная концентрация в плазме крови с 310,2 + 42,4 нг/мл (СУ = 17 %) - до 161,4 + 37,7 нг/мл (СУ = 29 %) Ттах, напротив статистически значимо увеличилось с 2,3 + 0,4 ч (СУ = 23 %) до 3,2 ±1,2 ч (СУ = 46 %), что свидетельствует о замедлении всасывания препарата У добровольцев после приема негрустина наблюдалось статистически достоверное увеличение почечного клиренса в 2,9 раза, константы элиминации в 1,5, объема распределения в 1,7 раза

Необходимо отметить значительно более выраженное влияние негрустина на фармакокинетику фексофенадина у пациентов по сравнению с кроликами У пациентов после приема негрустина статистически достоверным было уменьшение площади под фармакокинетической кривой АиС0 24 в 1,5 раза, в то время как у кроликов не наблюдалось достоверного изменения этого параметра Достоверное снижение Стач наблюдалось как у пациентов, так и у кроликов (соответственно в 2,2 и 2,4 раза) Изменение среднего Ттах (увеличение в 2,1 раза) было статистически достоверным только у пациентов

ВЫВОДЫ

1 Разработана высокочувствительная, хорошо воспроизводимая и экономически доступная методика ВЭЖХ для определения фексофенадина в плазме крови Хроматографирование проводится в изократическом режиме, детектирование - при длине волны спектрофотометрического детектора 220 нм Относительная величина систематической ошибки не превышала 7 %, предел обнаружения составил 8,4 нг/мл

2 Для изолирования фексофенадина из плазмы крови предложена жидкость-жидкостная экстракция смесью дихлорметана, этилацетата и диэтилового эфира (1 1 1) Эффективность экстракции составила 91 %

3 Определено содержание фексофенадина в плазме крови добровольцев и лабораторных животных до и после курсового приема верапамила После 10-дневного приема верапамила АиС0 24 статистически достоверно увеличилась у кроликов в 2,4 раза (р < 0,05), у пациентов - в 2,7 раза (р < 0,01) Стах статистически достоверно (р < 0,05) увеличилась в 2,1 раза в обеих группах испытуемых Ттах у кроликов достоверно (р < 0,05) сократилось в 2 раза

4 Получено значительное увеличение межиндивидуальных различий фармакокинетических параметров у кроликов после приема верапамила (коэффициент вариации Стах препарата до приема верапамила составлявший 8 %, увеличился до 43 %, коэффициент вариации Ттах увеличился с 0 до 84 %)

5 Определено содержание фексофенадина в плазме крови добровольцев и лабораторных животных до и после курсового приема экстракта зверобоя Отмечено статистически достоверное снижение максимальной концентрации фексофенадина после приема экстракта зверобоя в 2,4 раза (р < 0,05) и в 2,2 раза (р < 0,001) у кроликов и у пациентов соответственно У пациентов наблюдалось статистически достоверное уменьшение АиС0 24 фексофенадина в 1,5 раза (р < 0,01) и двукратное увеличение времени Ттм (р <0,01)

6 Проведен сравнительный анализ фармакокинетики фексофенадина у добровольцев и лабораторных животных до и после приема верапамила, а также до и после приема экстракта зверобоя Как у пациентов так и у лабораторных животных отмечено статистически достоверное увеличение биодоступности фексофенадина на фоне приема верапамила и достоверное снижение ее на фоне приема экстракта зверобоя В данном исследовании верапамил и экстракт зверобоя не влияли на скорость выведения фексофенадина из организма человека и лабораторных животных

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 Для измерения содержания фексофенадина в плазме крови при изучении фармакокинетики фексофенадина рекомендуется использовать

разработанную методику обращенно-фазной ВЭЖХ со спектрофотомегрическим детектором Данная методика отличается легкостью исполнения, хорошей воспроизводимостью и экономической доступностью

2 При одновременном приеме фексофенадина с верапамилом или экстрактом зверобоя рекомендуется проводить периодический контроль концентрации фексофенадина в плазме крови с целью коррекции режима дозирования для повышения эффективности и безопасности фармакотерапии

ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Раменс кая Г В , Скуридина Е А , Сычев Д А , Кукес В Г Оценка функциональной активности Р-гликопротеина путем измерения фармакокинетических параметров его субстрата фексофенадина // Клиническая фармакокинетика -2005 -№2(3) - С 18-23

2 Рамене кая Г В , Скуридина Е А , Красных Л М Разработка методики количественного определения маркера активности Р-гликопротеина фексофенадина в плазме крови // Химико-фармацевтический журнал - 2006 -№ 12 -С 47-50

3 Раменская Г В , Скуридина Е А , Сычев Д А , Кукес В Г Изучение влияния экстракта зверобоя на функциональную активность Р-гликопротеина // Материалы X Международного съезда «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения» - Фитофарм, 2006 -СПб -С 271 -277

4 Скуридина Е А , Раменск.ш Г В , Сычев Д А Изучение взаимодействия лекарственных препаратов на уровне гликопротеина Р // XIII Российский Национальный Конгресс «Человек и лекарство», 2006 -С 286

5 Скуридина Е А , Красных Л М , Василенко Г Ф Разработка методики количественного определения фексофенадина в плазме крови // XIII Российский Национальный Конгресс «Человек и лекарство», 2006 - 455

Формат 60x84 1/16, Уел Печ Лист 1,5 Подписано в печать 17 04 2007 г Тираж 100 экз Заказ № 1239 Отпечатано в типографии «АллА Принт» Тел (495) 621-86-07, факс (495) 621-70-09 www allaprrat ru

Современная медицина широко использует накопленные данные по фармакокинетике лекарственных средств. Фармакотерапия проводится с учетом особенностей всасывания, распределения и метаболизма лекарственных препаратов. Особенное внимание уделяется вопросам взаимодействия лекарственных средств между собой.

Фексофенадин, производное гидроксиметилпиперидина и бензолуксусной кислоты, широко используется в последние годы для устранения симптомов сезонного аллергического ринита, симптомов хронической идиопатической крапивницы. Являясь в основном «сезонным» препаратом, фексофенадин часто применяется на фоне терапии основного заболевания.

Известно, что фармакологический эффект зависит от концентрации препарата в зоне рецептора, которая, в свою очередь, коррелирует с концентрацией в плазме крови. В то же время на концентрацию оказывает влияние ряд факторов, таких, как состояние органов и систем, пища, возраст, генетические факторы и другие. Одним из основных факторов является взаимодействие лекарственных средств при их совместном приеме [9, 97, 124].

Среди видов лекарственного взаимодействия (фармацевтическое, фармакокинетическое и фармакодинамическое) именно вследствие фармакокинетического взаимодействия возникает наибольшее число побочных эффектов при совместном применении лекарственных средств.

Для изучения фармакокинетического взаимодействия, прежде всего, необходим аналитический метод, позволяющий уверенно следить за концентрацией лекарственного средства не менее 3-4 периодов полувыведения [8].

В настоящее время наиболее перспективным и широко использующимся для этих целей является метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с различными типами детекции. Метод обладает высокой точностью, хорошей воспроизводимостью, а требуемая селективность может быть достигнута при изменении условий хроматографирования. В связи с тем, что в отечественной литературе отсутствуют методики определения фексофенадина в плазме крови, а методики зарубежных авторов трудоемки, экономически недоступны или обладают недостаточными точностью и селективностью, актуальной является разработка высокочувствительной и экономически доступной методики определения фексофенадина в плазме крови, в том числе в присутствии других ксенобиотиков. Все вышеизложенное определило цели и задачи исследования.

Цель исследования: изучить особенности фармакокинетики фексофенадина при совместном применении верапамила и негрустина.

Задачи исследования:

1. Изучить хроматографические характеристики фексофенадина и разработать методику ВЭЖХ для его обнаружения в плазме крови.

2. Подобрать условия экстракции и количественного определения фексофенадина в плазме крови методом ВЭЖХ.

3. Изучить динамику концентрации фексофенадина в плазме крови человека и лабораторных животных до и после курсового приема верапамила.

4. Рассчитать фармакокинетические параметры фексофенадина после его однократного перорального приема на фоне верапамила у людей и животных.

5. Изучить динамику концентрации фексофенадина в плазме крови человека и лабораторных животных до и после курсового приема негрустина.

6. Рассчитать фармакокинетические параметры фексофенадина после его однократного перорального приема на фоне негрустина у людей и животных.

7. Оценить влияние верапамила и негрустина на фармакокинетику фексофенадина.

Научная новизна:

Впервые разработана методика определения фексофенадина в плазме крови методом ВЭЖХ с использованием спектрофотометрического детектора и изократического режима элюирования.

Впервые изучены фармакокинетические параметры фексофенадина после совместного приема с верапамилом и с экстрактом зверобоя у человека и лабораторных животных.

Показана способность верапамила повышать, а экстракта зверобоя понижать содержание фексофенадина в плазме крови человека и лабораторных животных.

Практическая значимость работы:

Разработанная методика определения фексофенадина в плазме крови методом ВЭЖХ внедрена и применяется в Филиале «Клиническая фармакология» НЦ БМТ РАМН при проведении фармакокинетических исследований.

Полученные результаты изменения фармакокинетики фексофенадина при совместном применении верапамила и негрустина были использованы при подготовке учебного пособия «Нежелательные эффекты лекарственных средств» (М.: Издательский дом «Русский врач», 2006).

Личный вклад соискателя:

Автором лично разработана методика количественного определения фексофенадина в плазме крови методом ВЭЖХ; измерена динамика концентраций фексофенадина в плазме пациентов и лабораторных животных до и после приема верапамила и негрустина; изучена фармакокинетика фексофенадина и рассчитаны его фармакокинетические параметры; выполнена статистическая обработка и анализ полученных результатов.

Апробация работы:

Апробация работы проведена на кафедре фармацевтической химии с курсом токсикологической химии 12 марта 2007 года.

Основные результаты работы доложены на XII-м и XIII-м Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2005 и 2006 гг.), Пятой международной конференции «Клинические исследования лекарственных средств» (Москва, 2005 г.), Х-м международном съезде «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения» (Санкт-Петербург, 2006 г.).

Связь задач исследования с проблемным планом:

Диссертационная работа выполнена на кафедре фармацевтической химии с курсом токсикологической химии ММА им. И.М.Сеченова в соответствии с плановой темой «Совершенствование контроля качества лекарственных средств» (номер государственной регистрации

01.200.110545). Исследование выполнено на базе кафедры фармацевтической химии с курсом токсикологической химии и кафедры клинической фармакологии и пропедевтики внутренних болезней.

Публикации по работе:

По результатам выполненной работы опубликовано 5 печатных работ.

Общие выводы

1. Разработана высокочувствительная, хорошо воспроизводимая и экономически доступная методика ВЭЖХ для определения фексофенадина в плазме крови. Хроматографирование проводится в изократическом режиме, детектирование - при длине волны спектрофотометрического детектора 220 нм. Относительная величина систематической ошибки не превышала 7 %, предел обнаружения составил 8,4 нг/мл.

2. Для изолирования фексофенадина из плазмы крови предложена жидкость-жидкостная экстракция смесью дихлорметана, этилацетата и диэтилового эфира (1:1:1) из кислой среды. Эффективность экстракции составила 91 %.

3. Определено содержание фексофенадина в плазме крови добровольцев и лабораторных животных до и после курсового приема верапамила. После 10-дневного приема верапамила площадь под фармакокинетической кривой статистически достоверно увеличилась у кроликов в 2,4 раза (р < 0,05), у пациентов - в 2,7 раза (р < 0,01). Максимальная концентрация статистически достоверно (р < 0,05) увеличилась в 2,1 раза в обеих группах испытуемых. Ттах у кроликов статистически достоверно (р < 0,05) сократилось в 2 раза.

4. Получено значительное увеличение межиндивидуальных различий фармакокинетических параметров у кроликов после приема верапамила (коэффициент вариации Стах фексофенадина до приема верапамила составлявший 7,6 %, увеличился до 43,4 %, коэффициент вариации Ттах увеличился с 0 до 83,7 %).

5. Определено содержание фексофенадина в плазме крови добровольцев и лабораторных животных до и после курсового приема экстракта зверобоя. Отмечено статистически достоверное снижение максимальной концентрации фексофенадина после приема экстракта зверобоя в 2,4 раза (р < 0,05) и в 2,2 раза (р < 0,001) у кроликов и у пациентов соответственно. У пациентов наблюдалось статистически достоверное уменьшение площади под фармакокинетической кривой фексофенадина в 1,5 раза (р < 0,01) и двукратное увеличение времени достижения его максимальной концентрации (р < 0,01).

6. Проведен сравнительный анализ фармакокинетики фексофенадина у добровольцев и лабораторных животных до и после приема верапамила, а также до и после приема экстракта зверобоя. Как у пациентов так и у лабораторных животных отмечено статистически достоверное увеличение биодоступности фексофенадина на фоне приема верапамила и достоверное снижение ее на фоне приема экстракта зверобоя. В данном исследовании верапамил и экстракт зверобоя не влияли на скорость выведения фексофенадина из организма человека и лабораторных животных.

Практические рекомендации

1. Для измерения содержания фексофенадина в плазме крови при изучении фармакокинетики фексофенадина рекомендуется использовать разработанную методику обращенно-фазной ВЭЖХ со спектрофотометрическим детектором. Данная методика отличается легкостью исполнения, хорошей воспроизводимостью и экономической доступностью.

2. При одновременном приеме фексофенадина с верапамилом или экстрактом зверобоя рекомендуется проводить периодический контроль за концентрацией фексофенадина в плазме крови с целью коррекции режима дозирования для повышения эффективности и безопасности фармакотерапии.