Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Определение производных И-пиридина растительного и синтетического происхождения на основе реакции образования полиметиновых красителей

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН АЛ МАТ И НСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ им. С. Д. АСФЕНДИЯРОВА

Р Г Б ОД

На правах рукописи

- 8 ЯНЗ 1395

БОШКАЕВА АСЫЛ КЕНЕСОВНА

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРОИЗВОДНЫХ р-ПИРИДННА РАСТИТЕЛЬНОГО И СИНТЕТИЧЕСКОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ НА ОСНОВЕ РЕАКЦИИ ОБРАЗОВАНИЯ ПОЛИМЕТИНОВЫХ

КРАСИТЕЛЕЙ

15.00.02 фармацевтическая химия и фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

АЛ МАТЫ - 1995

Работа выполнена на кафедре фармацевтической химии Апматинского Государственного медицинского института Министерства Здравоохранения Республики Казахстан.

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор А.С.БЕЙСЕНБЕКОВ.

доктор биологических наук Г. Г. УШ БАЕВ А;

кандидат фармацевтических наук, доцент А.Г.МУХАМЕТГАЛИЕВ.

Ведущая организация:

Ташкентский фармацевтический институт.

ита диссертации состоится

193* г.

часов на заседании специализированного Совета Д 09.01.03 в Алматинском Государственном медицинском институте им. С.Д.Асфендиярова {480012, Алматы, ул. Толеби 88).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке АГМИ по адресу: Алматы, ул. Богенбай батыра, 153.

Автореферат разослан 199^г.

Ученый секретарь специализированного Совета, доктор биологических наук

К.А.АБДУЛЛИН

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. В соответствии с современными потребностями научно-технического прогресса улучшение качества и расширение ассортимента высокоэффективных физиологически активных препаратов требуют от служб аналитического контроля разработки новых методов анализа с повышенной чувствительностью и точностью определения. В фармацевтическом анализе остается актуальной проблема совершенствования контроля качества лекарственных средств с использованием физико-химических методов на основе хромогенных реакций, имеющих научное и практическое значение.

Представленная работа является фрагментом работы кафедры фармацевтической химии Алматинского государственного медицинского

г

института по разработке фотометрического метода анализа с исполь-

I

зованием реакции образования полиметиновых красителей для производных пиридина.

Цель и задачи исследования. Разработать специфичные, 61 iee чувствительные и точные методы идентификации и фотометрического определения (5-замещенных производных пиридина в лекарственных средствах и биологических жидкостях на основе изучения реакции образования полиметиновых красителей.

Для достижения цели исследования поставлены следующие задачи:

1. Разработка фотометрического метода определения анабазина гидрохлорида с соединениями, содержащими активную метиленовую группу и применение их для качественного и количественного определения в различных лекарственных средствах.

2. Изучение возможности применения 1-фенил-З-метилпиразолона-5

для определения никотина в листьях табака, табачных изделиях.

3. Исследование оптимального метода извлечения анабазина и никотина из растительного сырья и хрома гографический анализ С использованием реакции образования полиметиновых красителей.

4. Изучение сравнительной характеристики полиметиновых красителей производных пиридин-3-карбоновых кислот с органическими веществами, содержащими активные метиленовые группы и разработка качественного и количественного определений их с тиобарбитуровой кислотой в анализе различных лекарственных форм.

5. Разработка фотометрического метода определения суммы никотина и его метаболитов в биологических жидкостях.

Научная новизна работы. Впервые предлагается использование 5,5-диметилциклогекеандион-1,3-метона (димедон), 1 -фенил-3-метил-пиразолона-5 (ФМП), тиобарбитуровой кислоты в реакции образования

полиметинового красителя анабазина гидрохлорида, 1-фенил-З-метил-

}

пиразолона-5 в реакции образования полиметинового красителя никотина, тиобарбитуровой кислоты в реакции образования полиметинового красителя никотиновой кислоты, никотинамида, никодина.

Реакции предложены с целью повышения чувствительности и точности определений в лекарственных веществах, лекарственных формах и лекарственном растительном сырье.

На основе этой реакции разработана система методов анализа, включающая хроматографические, спектрофотометрические, фотоколориметрические методы.

Впервые при разработке физико-химического метода количественного определения никотина в растительном сырье, в табачных изделиях пррдлшается использование в качестно рабочею оандартного образца

(PCO) анабазина гидрохлорида, основываясь на том, что эти соединения являются структурными изомерами, имеют идентичный элементный состав и сходные спектральные характеристики в УФ-области спектра. Ранее в Республике Казахстан контроль никотина не проводился. Контроль для всех республик Союза проводился централизовано в Конструкторском бюро табачной промышленности г. Москвы.

Установлена возможность использования реакции образования полиметиновых красителей для определения суммы никотина и его метаболитов в биологических жидкостях.

Практическое значение работы. Разработаны более специфичные, чувствительные и точные методы определения подлинности и количественного определения ß-замещенных производных пиридина в лекарственных средствах никотиновой кислоты, никотинамида, никоди-на, анабазина гидрохлорида и никотина в растительном сырье, табачных изделиях и биологических жидкостях.

Фотоколориметрические методы идентификации и количественного определения анабазина гидрохлорида с 1-фенил-3-метилпира-золоном-5 внедрены в учебный процесс кафедры фармацевтической химии Алматинского государственного медицинского института. Фотометрические методы анализа анабазина гидрохлорида с димедоном внедрены в практику работы ОТК Шымкентского химико-фармацевтического завода.

Изданы методические указания, утвержденные Министерством Здравоохранения Республики Казахстан. Имеются авторское свидетельство и положительное решение на изобретение:

1. A.c. No 1888329 СССР, МКИ G 01 21/78.

Способ количественного определения анабазина гидрохлорида / А.С.Бейсенбеков, Р.А.Жубаева, А.К.Бощкаева (СССР).

2. Положительное решение на изобретение N0 93 11 33. I МКИ в 01 21/78.

Способ количественного определения алкалоидов табака / А.С.Бейсенбеков, Р.А.Жубаева, А.К.Бошкаева (РК)

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

- Хромогенная реакция, основанная на модификации гетероциклического ядра пиридина с применением расщепляющих реагентов (хлорамин Б и роданид аммония) и ранее не использованных реагентов (органических соединений, содержащих активные метиленовые группы) с подбором оптимальных условий Проведения реакции, позволяющих повысить специфичность, чувствительность и точность определений.

- Применение разработанных хромогенных реакций в оценке качества лекарственных веществ, лекарственных форм, лекарственного

растительного сырья и биологических жидкостей.

1

Разработка методик идентификации, хроматографического анализа, количественного определения, выделения и разделения из растительного сырья и биологических жидкостей.

Апробация работы. Работа доложена и обсуждена на научно-практической конференции "Перспективы развития фармацевтической промышленное!и в Республике Казахстан" (Алматы, 1991 г.), заседаниях кафедры фармацевтической химии, межкафедральном заседании фармацевтического факультета Алматинскою медицинского института.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 научных стаюй, методические разработки ''Фотометрическое определение

анабазина гидрохлорида с фенил-метилпиразолоном с помощью реакции образования полиметиновых красителей".

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 169 страницах машинописного текста и состоит из введения, пяти глав, выводов, списка литературы, приложения.

Содержание работы. Первая глава диссертационной работы представлена обзором литературы. Вторая глава посвящена изучению реакции образования полиметиновых красителей в анализе анабазина гидрохлорида в лекарственных формах и растительном сырье. В третьей главе изложено изучение реакции образования полиметиновых красителей никотина с 1-фенил-3-метилпиразолоном-5. В четвертой главе дается сравнительная характеристика полиметиновых красителей производных пиридин-3-карбоновых кислот с органическими веществами, содержащими активные метиленовые группы. В пятой главе описаны методики выделения и определения суммы никотина и его метаболитов в биологических жидкостях. В приложении даны внедрения результатов научно-исследовательских работ в практику. Работа иллюстрирована 33 рисунками, 41 таблицей. Библиографический указатель включает 162 источника.

Материалы и методика исследования. Объектами исследования являются лекарственные вещества и различные лекарственные формы анабазина гидрохлорида, никотиновой кислоты, никотинамида, никоди-на, растительное сырье (трава Ежовника безлистного, листья табака), содержащее анабазин и никотин, а также биологические жидкости (кровь, моча), содержащие никотин. В работе использованы в качестве сочетающих реагентов 1-фенил-3-метилпиразопон-5 (ФМП), 5,5-диме-

тилциклогександион-1,3-метон (димедон), барбитуровая и тиобарбиту-ровая кислоты.

При разработке методик количественного определения измерения проводили на спектрофотометре СФ-46 и фотоколориметре КФК-2МП. Спектры поглощения анализируемых растворов окрашенных соединений измеряли в кюветах с толщиной слоя 1 см. Величина pH контролировалась иономером ( И-130).

Для разделения с целью идентификации лекарственных веществ использовали хроматографию на бумаге марки "быстрая" (Ленинград) и хроматографию в тонком слое сорбента с применением пластинок "Silufol" (Чехословакия). Для хроматографического анализа и количественного определения в лекарственных формах использованы рабочие стандартные образцы (PCO).

Результаты исследований и их обсуждение. Изучены реакции образования полиметиновых красителей анабазина гидрохлорида с использованием в качестве сочетающих реагентов ФМП, димедона, барбитуровой и тиобарбитуровой кислот.

На основе литературных данных и ряда проведенных исследований высказано предположение, что образование полиметинового красителя с органическими соединениями, содержащими активные метиленовые группы, протекает следующим образом (см. схему).

Определи .ы спектральные характеристики красителей в видимой области спектра (рис. 1), а также аналитические показатели чувствительности реакций (таблица 1).

В ходе проведенных исследований выбраны наиболее оптимальные условия проведения реакции: природа растворителя, соотношение

Cx£?¿3 pea.:<uiíti образования пслиметикозого красителя.

ч

H.-J ■

с=о t i

ÇH2 " )

c=a

д ёсрбитуровд* хйспот

у^'^Ч ^ OiCVÍMO"

г Л NH

рН.2.0 - 3.0

M

-А f J

í j ,, . ¡I I

V11

ú

OJ.

MU-!

H:4-

ЬГ(2

1исбарбитур0зая кислота

\ H H \ \/

X У

Л

А

к н

R—С C=R,

H H Пояиметиьссый Z'i t ель

v.sßOM

CHi / 3

1 -фения-З-мотклпяразолсн-5 NH

N-СвНв

расщепляющих реагентов - хлорамина Б и роданида аммония, соотношения анализируемого вещества и сочетающего реагента, устойчивость окрашенных соединений во времени, влияние температурного режима

Рис. 1. Спектры поглощения полиметиновых красителей анабазина гидрохлорида с барбитуровой (1), тиобарбитуровой (2) кислотами, димедоном (3), 1 -фенил-З-метилпиразолоном-5 (4) в водной среде.

на образование окрашенных продуктов реакции, рН среды расщепления и сочетания.

Установлено, что попное расщепление пиридинового цикла происходит при рН 2.0 - 3.0. Методом молярных отношений найденное соотношение 2%-ных растворов роданида аммония и хлорамина Б 1 : 8 создает наиболее высокую оптическую плотность окрашенных растворов.

Реакция сочетания с барбитуровой кислотой проходит при рН 5.0 -5.6, с тиобарбитуровой кислотой - при рН 5.8 - 6.2, с димедоном - при рН 6.0 - 7.0, с ФМГ1 - при рН 7.3 - 8.3.

Изучая влияние температурного режима на образование окрашенных растворов выяснено, что предложенная ранее в фармакопейной статье реакция анабазина гидрохлорида с барбитуровой, а также с

Таблица 1

Аналитические показатели чувствительности реакции анабазина гидрохлорида

Сочетающий реагент Растворитель С, г/мл мах» НМ е 1% £ 1 см

Барбитуровая 1. Водная среда 0.0002 505 475000 2375

кислота 2. Спирто-водная среда 0.0002 510 465000 2325

3. В среде диметил- 0.0002 510 481000 2405

сульфоксида

Тиобарбитуро- 1. Водная среда 0.0002 510 417000 2085

вая кислота 2. Спирто-водная среда 0.0002 515 379000 1895

3. В среде диметил- 0.0002 515 371000 1855

сульфоксида

Димедон 1. Водная среда 0.0002 510 403000 2015

2. Спирто-водная 0.0002 ' 515 423000 2115

среда

3. В среде диметил- 0.0002 : 520 432000 2160

сульфоксида

1 -фенил-3- 1. Водная среда 0.0002 520 194000 970

метилпиразо- 2. Спирто-водная 0.0002 530 296000 1480

лон-5 среда

3. В среде диметил- 0.0002 530 458000 2290

сульфоксида

тиобарбитуровой кислотами протекает только при нагреваний (45 -50°С), а предложенная нами реакция с ФМП протекает при комнатной температуре с образованием устойчивых (до 2 ч. 40 минут) ярко-окрашенных продукта. Это является преимуществом перед ранее использованными реакциями.

Предложена методика наиболее полного окстрагировзния анабазина из растительного сырья. Использована траоа Ежовника безлистного (место сбора: Мангистаускап область, Ералиовский район, п. )1(еты-бай). Сравнительное экстрагирование б виде солей в соллно-кислой среде и хлороформенно-бензольной смесью в о иди оснований показало, что полнота экстракции и чистота экстрактов достигается при водно-кислотном методе извлечения.

Контроль экстракции, качественное обнаружение проводилось хроматографически на бумаге и и тонком слое сорбента. Проявление пятен осуществляли с помощью реакции образования полнгиетинового красителя с использоаанигм димедона, ФМП, барбитуровой и тиобарбитуровой кислот.

Хроматографирование на бумаге проводили в системах:

I. Бутанол, насыщенный водой;

II. Бутанол, насыщенный ацетатным буфером рН 5.6.

В водно-кислотном экстракте обнаруживается одно пятно анабазина, которою соответствует пятну свидетеля (Р!,= 0.31 с тиобарбитуровой кислотой, В, = 0.30 с барбитуровой кислотой, Я,= 0.32 с димедоном, Я, = 0.31 с ФШ1) - о системе I. В системе II с использованием водно-кислотного экстракта обнаруживается одно пятно анабазина (Я, = 0.55 с тиобарбитуровой кислотой, Н, = 0.57 с барбитуровой

кислотой, R,= 0.55 с димедоном, Rt = 0.54 с ФМП). В хлороформенно-бензольном экстракте также определяется один анабазин.

Количественное определение проводили фотометрическим методом с использованием PCO.

Разработаны методы количественного определения анабазина гидрохлорида в таблетках, пленках и лекарственном растительном сырье (таблица 2).

При подборе оптимальных условий проведения реакции образования полиметиновых красителей установлено, что из всех предложенных сочетающих реагентов выбор остается за 1-фенил-З-метил-пиразолоном-5. Протекание реакции при комнатной температуре, стабильность окрашенных соединений, доступность и нетоксичность реагента обосновывают возможность применения его для анализа анабазина и изомера анабазина - никотина.

Изучение реакции образования полиметиновых красителей никотина с применением Т-фенил-З-мотилпиразолона-5 В ходе исследования применения реакции образования полиметиновых красителей определены условия, наиболее оптимальные для проведения реакции. Образование ярко-окрашенных устойчивых соединений красно-фиолетового цвета происходит в нейтральной среде. Реакция проходит при комнатной температуре.

Растворы с различной интенсивностью окраски в присутствии растворителей (вода, спирт, диметилсульфоксид) при одинаковой концентрации исследуемого вещества имеют различные максимумы поглощения (водная среда - 520 нм, спирто-водная среда - 530 нм, в присутствии диметилсульфоксида [ДМСО] - 530 им).

Установлен интервал времени стабильности исследуемых окрашенных растворов по изменению оптической плотности. В водной среде оптическая плотность остается постоянной через 40-45 минут от начала

Таблица 2

Количественное определение анабазина гидрохлорида с 1-фенил-З-метилпиразолоном-5 в таблетках и пленках

Препарат Взято, г (Найдено, г Примечание

В таблетках

Таблетки 0.7893 0.0029 Должно быть от

анабазина 0.7894 0.0029 0.0027 до 0.0033 г

гидрохлорида 0.7901 0.0029

по 0.003 г 0.7899 0.0030

0.7904 0.0031

В пленках

Пленки 0.0015 0.0014 Должно быть от

анабазина 0.0015 0.0013 0.0013 до 0.0016 г

гидрохлорида 0.0015 0.0014

по 0.0015 г 0.0015 0.0014

0.0015 0.0014

реакции и сохраняется до 2 часов 10 минут. В спирто-водной среде - до 19 часов 20 минут. В среде диметилсульфоксида - до 2 часов 55 минут.

Для разделения суммы алкалоидов табака и идентификации никотина использованы хроматографические методы на бумаге и в тонком слое водно-кислотного, хлороформенно-бензольного извлечений из листьев табака и табачных изделий. При этом применили системы для хроматографированин, указанные в широко известной

монографии И.М.Хайса и К.Мацека. Я, рабочего стандартного образца анабазина, использованного нами в качестве свидетеля, соответствует указанному в этой монографии, Я, никотина совпадает с указанным, тогда пятно с И, 0.28 должно соответствовать норникотину.

Хроматографическая характеристика алкалоидов табака при хро-матографировании на бумаге показывает значения Я, в системах: |,_н-Бутанол - вода. Я, никотина в водно-кислотном экстракте - 0.78. В хлороформенно-бензольном экстракте: Я, никотина - 0.78; Я, норникоти-на - 0.28; Я( анабазина - 0.33. В этой системе Я, анабазина в хлороформенно-бензольном экстракте соответствует Я, анабазина гидрохлорида - свидетеля.

Л,_н-Бутанол,_ насыщенный .ацетатным, .буфером. рН_5.6. Я| никотина в водно-кислотном экстракте - 0.77. В хлороформенно-бензольном экстракте: Я, никотина - 0.76; Я, анабазина - 0.57. Я, анабазина в хлорофор-менно-бензольном экстракте идентичен Я, анабазина - свидетеля (Я, = 0.56). Значения Я, никотина соответствуют значениям Я, по литер дурным данным.

Разработаны методы количественного определения никотина в листьях табака (содержание составляет 1.1 %), в табачных изделиях -1.3 % в среднем. В табачном дыме в зависимости от величины объема затяжек содержание никотина колеблется в пределах от 1.27 до 1.78 мг в среднем (таблица 3).

Сравнительная характеристика полиметиновых красителей производных пиридин-3-карбоновых кислот с органическими веществами, содержащими активные метиленовые группы

При сочетании с органическими веществами, содержащими активные метиленовые группы (барбитуровая кислота, ФМП, тиобарбитуровая кислота) большинство окрашенных соединений чувст-

Таблица 3

Количественное определение никотина в табачных изделиях, листьях табака

Объект исследования Взято, г Найдено

мг %

1 2 3 4

Сигареты "Медео", ГОСТ 0.9991 0.059 0.59

3935-81 0.9997 0.060 0.60

0.9985 0.058 0.58

0.9991 0.061 0.61

0.9990 ' 0.060 0.60

Сигареты "Полет" ГОСТ 0.9972 0.106 1.06

3935-81 0.9983 0.104 1.04

1.0070 0.105 1.05

0.9997 0.090 0.90

1.0030 0.103 1.03

Сигареты "Казахстанские" 1.0008 0.095 0.95

ГОСТ 3935-81 1.0013 0.110 1.10

1.0012 0.100 1.00

1.0007 0.100 1.00

0.9998 0.099 0.99

Сигареты "Космос" 1.0041 0.120 1.20

ГОСТ 3935-81 1.0003 0.140 1.40

1.0052 0.130 1.30

Продолжение таблицы 3

1 2 3 4

1.0017 0.150 1.50

1.0055 1 0.150 1.50

Листья табака (ТалгарскиР 1.0032 0.115 1.15

сорт) 1.0007 0.105 1.05

• 0.9997 0.109 1.09

0.9994 0.106 1.06

1.0015 0.117 1.17

вительно к концентрации ионов водорода. При изменении рН раствора происходит изменения кривой светопоглощения. Поэтому образование полиметинового красителя наблюдается при соблюдении определенных интервалов рН. Оптимальным значением рН является с барбитуровой кислотой рН 5.0 - 6.0, с 1-фекил-3-метилпиразолоном-5 рН 7,6 - 8,6, с тиобарбитурооой кислотой рН 7.3 - 8.3.

Исследованы спектральные характеристики полиметиновых красителей никотиновой кислоты, никотинамида, никодина с тиобарбитуровой кислотой и 1-фенил-3-метилпиразолоном-5 (рис. 2, 3).

Для установления стабильности окрашенных растворов наблюдают изменение интенсивности окрашенных растворов во времени. Растворы никотиновой кислоты стабильны в течение 2 часов 50 минут, никотинамида - в течение 2 часов 10 минут, никодина - в течение 1 часа.

На основе разработанных оптимальных условий предлагаемая хромогенная реакция может быть использована для идентификации веществ в различных лекарственных формах заводского и аптечного изготовления. Идентификация препараюв производных никотиновой

кислоты с тиобарбитуровой кислотой дается в сравнении с ФМП (таблица 4). О

Рис. 2. Спектрофотометрическая зависимость максимума поглощения никотиновой кислоты (1), никотинамида (2), никодина (3) от длины волны с 1-фенил-3-метилпиразолоном-5. й

0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0

400 420 440 460 480 600 ' 520 . 530 540 660 Я , НМ

Рис. 3. Спектрофотометрическая зависимость максимума поглощения никотиновой кислоты (1), никотинамида (2), никодина (3) от длины волны с тиобарбитуровой кислотой.

Таблица 4

Идентификация препаратов производных никотиновой кислоты с тиобарбитуровой кислотой в сравнении с 1-фенил-З-метилпиразолоном-5

Препарат Окрашивание с тиобарбитуровой кислотой Чувствительность, мкг/мл Окрашивание с ФМП Чувствительность, мкг/мл

Никотиновая кислота Красно-оранжевое 0.0044 Красно-фиолетовое 0.05

Никотинамид Розово-фиолетовое 0.0052 Розово-фиолетовое 0.02

Никодин Розовое 0.0042 Красно-фиолетовое 0.04

Высокая чувствительность предлагаемой хромогенной реакции с тиобарбитуровой кислотой позволяет использовать ее для количественного фотометрического определения лекарственных препаратов производных пиридин-3-карбоновых кислот. Нами разработаны методы количественного определения никотиновой кислоты в растворах для инъекций, в таблетках ксантинола никотината по 0.15 г, в таблетках нигексина по 0.05 г, в многокомпонентных лекарственных формах аптечного изготовления, никотинамида в поливитаминных препаратах (таблетки "Декамевит", покрытые оболочкой по 0.05 г, таблетки "Пангексавит", покрытые оболочкой по 0.05 г), никодина в таблетках никодина по 0.5 г (таблица 5).

Таблица 5

Количественное определение никотиновой кислоты и ее амида в различных лекарственных формах

Препарат Взято, г Найдено, г Примечание

1 2 3 4

Пропись 1: - 0.С090 Должно быть от

Тиамина бромида - 0.02 г - 0.0100 0.0080 до 0.0120 г

Кислоты никотиновой - 0.01 г - 0.0036 (никотиновой

Натрия хлорида - 0.09 г - 0.0089 кислоты)

Воды для инъекций - до 10 мл - 0.0106

Пропись 2: - 0.0194 Должно быть от

Кальция хлорида - 0.00 г - 0.0205 0.0160 до 0.0240 г

Кислоты глютаминовой - 0.01 г - 0.0218 (никотиновой

Кислоты никотиновой - 0.02 г - 0.0199 кислоты)

Натрия хлорида - 0.09 г - 0.0188

Воды для инъекций - до 10 мл

Таблетки никотинамида 0.8038 0.0050 Должно быть от

по 0.005 г 0.7833 0.0050 0.0045 до 0.0055 г

0.7855 0.0045

0.79£»1 0.0053

0.7902 0.0049

Таблетки "Декамевит", покрытые - 0.0466 Должно быть от

оболочкой (никотинамида - - 0.0588 0.0475 до 0.0525 г

0.05 г) - 0.0469

- 0.0518

• 0.0500

Таблетки "Пангексавит", - 0.0454 Должно быть от

Продолжение таблицы 5

1 2 3 4

покрытые оболочкой - . 0.0479 0.0475 до 0.0525 г

(никотинамида - 0.00 г) - 0.0396

- 0.05-Ю

- 0.0303

Фотометрический м->тод определения суммы никотина и ого мэтзболитея о биологических ягид'состлзс Изпестсо, что в организме человека никотин метаболизируется о результата окисления пирро/шдиносого цикла до основных метаболитов (пикотнп-М-ошзд, котпнпп), сохраниошпх пиридиновый цикл.

Предлагаемый спектрофотометрический метод анализа метаболитов, сохранивших цикл пиридина, позволяет определить содержание их в биологических жидкостях. Способ определения основан на приме- , нении реакции образования полиметиновых красителей с 1-фенил-З-метилпиразолоном-5. •

Объектами исследований явяпются моча и кровь курильщиков -добровольцев з возраста 20 - 26 лет. Систематическая доза составляет 5 мг/сиг. после выкуривания 5 сигарет.

Для определения содержания суммы никотина и его метаболитов в моче при использовании дозы никотина 5 мг/сиг., проводят экстрагирование из мочи различными растворителями. Забор мочи проводят через 2, 4, 6, 12 и 24 часа после выкуривания сигарет "Казахстанские" (ГОСТ 3935-81). . -

Методика экстракции из мочи. Объем биологической жидкости (моча - 20 мл) подкисляют 2 мопь/п раствором соляной кислоты до рН

1.0 - 2.0 и экстрагируют порциями трижды по 100 мл эфиром в делительной воронке, перемешивая слои без энергичного встряхивания. После разделения слоя нижнюю водную часть сливают в другую делительную воронку, содержащую 25 мл эфира. Органическую часть фильтруют через безводный сульфат натрия в сухой стакан. Повторную экстракцию из водного слоя проводят аналогично. Эфирное извлечение фильтруют через безводный сульфат натрия и обе эфирные вытяжки объединяют {экстракт N 1). Водную фазу сохраняют, переносят ее в делительную воронку, доводят до рН 9.0 добавлением раствора аммиака и проводят экстракцию 25 мл смеси хлороформ - н-бутанол (9 : 1) в течение 3-5 минут. Затем нижнюю органическую фазу сливают, фильтруя через безводный сульфат натрия в сухой стакан. Водную фазу повторно экстрагируют 25 мл той же смеси. Органические фазы объединяют (экстракт N 2). Органические растворители из экстрактов N 1 и N 2 отгоняют в выпарительных чашках. Сухие остатки экстракта N 2 (вещества основного характера) растворяют путем добавления 20 мл 0.1 моль/л раствора соляной кислоты.

Далее проводят определение спектрофотометрическим методом. по реакции образования полиметинового красителя с ФМП (наиболее приемлемый из ранее использованных реагентов).

В методе определения содержания суммы никотина и его метаболитов в крови и времени выведения из организма использована доза никотина 5 мг/сиг. Забор крови проводят через 5, 30 минут, 1 и 2 часа. Кровь брали из вены.

Методика экстракции из крови. Объем крови (сыворотки крови после центрифугирования со скоростью 3000 об./мин) 20 мл подкисляют 2 моль/л раствором соляной кислоты до рН 1.0 - 2.0, экс-

трагируя трижды эфиром, смешивая фазы без энергичного встряхивания. Проводят далее переэкстрагирование фракции водой порциями по 10 мл. Далее определение экстрагирования проводят аналогично экстрагированию из мочи.

Полученный экстракт растворяют в 20 мл 0.1 моль/л раствора соляной кислоты.

Определена зависимость концентрации суммы никотина и его метаболитов в крови от времени выведения из организма.

Зависимость концентрации суммы никотина и его метаболитов в крови от времени выведения из организма показывает, что максимальная концентрация их достигается через 5 минут {рис. 4).

С, мг (хЮ 3)

Время, мин

Рис. 4. Концентрация суммы никотина и его метаболитов в крови

Содержание суммы метаболитов находят по калибровочному графику стандартного раствора анабазина гидрохлорида.

По результатам фотометрического метода количественного определения суммы никотина и сто метаболитов 58,32 %. суммы их обнаружиаается о моче.

В ЫВОДЫ

1. Впсрс-ыо предложены реакции образооанпн пзлимотмкоаых прасшо-лей анабезина гидрохлорида с ФМП, тноблрбитуропой кислотой, димедоном; никотина - с ФМП; никошиопо-Л к-.¡слоты, никопшемидг!, пикодмна с тиобарбпп/ропай кислотой, позышающио специфичность, чувстситолыюсть и точность фармацсйтичзского анализа.

Чупстгселыюсть реакции сасгаь/тат: анабзашш гидрохлорида с ФМП - 0.004 ыкг/ыл; анабазина гидрохлорида с димсдсмом - 0.002 м;-.г/мл; анаб-пина гидрохяорида с бероитурооей кислотой - 0.001 I/,кг/мл; анабазина шдрохлорида с тиэбпрбитурегзй кислотой - 0.0015 мкг/мп; пикоыиа с ФМП - 0.000 мкг/мл; ппко прозой "кислоты с тиобарбитуроион кислотой - 0.0044 икг/мл; иишпшамнда с тиабарбн-туроаой кислотой - С.0052 мкг/мл; никодииа с тиобарбигурооой кислотой - 0.0042 мкг/мл.

2. Найдены оптимальные условия реакции образования полимотииэаот

красителя анабазина -падрохлорида, никотина, никотиновой кислогы,

»

никотинамеда, никодииа. с соединениями, содержащими активные метиленооыо группы: рН среды расщеплении' и сочетания, влияние природы растворителя, температурного рохима, стабильность окрашенных растворов, молярное отношение расщепляющих реагентов, молярное соотношение анализируемых веществ и сочетающих реагентов.

3. Даны спектральные характеристики лолиметиновых красителей р-за-мещенных производных пиридина о различных растворителях.

4. Исследована возможность применения реакции образования поли-метиновых красителей для идентификации и количественного определения в лекарственных препаратах, растительном сырье и лекарственных формах.

5. Изучена возможность применения реакции образования полиметино-вых красителей в хроматографическом анализе Ежовника безлистного, табака, поливитаминных препаратов.

6. Исследована фармакокинетика никотина в биологических жидкостях с использованием реакции образования полиметиновых красителей.

7. Предложенные фотометрические методы количественного определения ß-замещенных производных пиридина по реакции образования полиметиновых красителей внедрены на Шымкентском химико-фармацевтическом заводе и в учебный процесс кафедры фармацевтической химии Алматинского государственного медицинского института.

1. Бейсенбеков A.C., Жубаева P.A., Бошкаева А.К. Фотометрическое определение анабазина гидрохлорида с димедоном // Вопросы фармации. - Алматы, 1993. - С. 18-21.

2. Бошкаева А.К. Определение анабазина гидрохлорида с помощью тиобарбитуровой кислоты // Вопросы фармации. - Алматы, 1993. - С. 104 - 105.

3. Бейсенбеков A.C., Жубаева P.A., Бошкаева А.К., Насонова Т. Определение никотина в листьях табака с помощью реакции образования полиметиновых красителей // Перспективы развития фармацевтической промышленности в Казахстане. - Алматы, 1994. - С. 86 - 88.

4. Бейсенбеков A.C., Жубаева P.A., Боижаева A.K. Сравнительная характеристика фотометрического определения анабазина гидрохлорида с некоторыми аминопроизводными // Перспективы развития фармацевтической промышленности в Казахстане. - Алматы, 1994. - С. 82 - 83.

5. Фотометрическое определение анабазина гидрохлорида с фенил-метилпиразолоном с помощью реакции образования полиметиновых красителей: Метод, указания / Алматинсшй государственный мед. ин-т им. С.Д.Асфендиярова; [Сост. A.C.Бейсенбеков, Р.А.Жубаева, А.К.Бош-каева]. - Алматы, 1993. - 12 с.

6. A.c. 1888329 СССР, МКИ G 01 N 21/78. Способ количественного определения анабазина гидрохлорида / A.C.Бейсенбеков, Р.А.Жубаева, А.К.Бошкаева (СССР). - 4 е.: ил.

7. Полож. решение по заявке N 931133.1, МКИ G 01 N 21/78. Способ количественного определения алкалоидов табака / A.C. Бейсенбеков, Р.А.Жубаева, А.К.Бошкаева {Республика Казахстан). - 2 с.

8. Бейсенбеков A.C., Жубаева P.A., Бошкаева А.К. Фотометрическое определение никотина в табачных изделиях // Здравоохранение Казахстана. - 1995. - N 5. - С. 56 - 57.

25

Т ¥ Ж Ы Р Ы М Бошкаева Асыл Кенес кызы Полиметин боягыштгрыныц тузту реакципсы непзшде ос!мд1хтект1 жэне синтетикалык р-пиридин туындыларын аныкггау.

Курамында актисп' метилен топтары бар органикалык заттар, димедон, фенил-метилпиразолон жэне тиобарбитур кышк,ылы бфЫцл рет полиметин боягыштарын тузетш реакцияга колдана отырып, осы реагентер аркылы (З-орынбасылган пиридин туындыларын анык,таура колданылып отыр.

Хромогенд1 реакция р-пиридин карбон кышкылдарынын аныкта-луына бертген полиметин боягыштарыныц тузелу1не непзделген.

Реакциянын мэн! пиридин сакынасы глутакон альдегидже дейЫ ыдырап аяк,талады, содан кей!н молекуласында активл метилен топтары бар органикалык заттармен байланысып боягыш заттарды тузейдК

Осы реакциялар дэрии'к заттардын, дэрш|'к калыптардын, табиги шишат жэне биологиялык; суйыктыктардьщ аныктау сез1мталдыгын, дэлдшНн кушейтуше бертген.

Анабазин гидрохлоридМн, никотин, никотин кышкылыныц, нико-тинамидтын, никодин анализЫдеп полиметин боетыштарын тузейтм реакцияларында органикалык заттардын метилен топтарымен байланысып, ен кажетт! шарттары аныкталган: рН ыдырау ортасы жэне бай-ланысу ортасы, табиги ер|тк:шт1ц эсер ету|', кыздыру уакыты, туст( ерМштерд'щ турактылыгы, ыдыралган реагенттердщ молярлы каты-насы, зерттелелн заттардын жэне байланыекан реагентердИ молярлы кашнасы.

р-Орынбасылган пиридин туындыларыныц полиметин боягыш-тарынын спектральд1 сипаттамасы эртурл1 ер1тюштерде зертелген.

Полиметин боярыштарын тузейтш реакцияларынын колданы-луынын мумюндИ дэршк заттардын, вС1МД1к шишаттардын, дэршж калыптардын сапасына жэне сандык; анализов непзделген.

Полиметин боягыштарын тузейтж реакцияларынын непздпнде анализ адютерЫщ жуйес1 хроматографиялык, спектрофотометриялык, фотоколориметриялык эдютермен аныкталган.

Никотиннщ фармакокинетикасы биологиялык суйыктарда полиметин боягыштарыныц тузшу реакциясын колдану аркылы зертелген.

27

SUMMARY Boshkaeva Asyl Kenesovna Determination of p-pyrldine's of vegetative and die-stuffs synthetic origin on the basi3 of reaction of polymethin formation

New combining reagents use is suggested for the first time dimedon, 1-phenyl-3-methylpyrazalone-5, thiobarbituric acid - organic substances, containing active methylene groups in polymethine dye-stuffs formations reaction p-substituted pyridine derivatives.

The suggested chromogenic reaction for the identification of p-pyridine - carbonic acids is based on the polymethine due-stuffs formation. The essence of the reaction is in pyridine cycle splitting to the glutacon aldehyde with further combination with active methylene groups of organic substances in the coloured compounds.

The reactions suggestion is aimed at the sensitivity increase and exactness of the assessment in medicinal substances, medicinal forms, vegetable raw material, Biological liquids.

Appropreate reaction conditions are found for the formation of polymethine due-stuffs of anabazine hydrochloride, nicotine, nicotine acid, nicotinamide, nicodine with the compounds containing active methylene groups: pH of splitting and combining medium, solvent origin influence, heating time, coloured solutions stability, splitting reagents molar proportion and molar of analysed substances molar correlation and combined reagents were found out.

Spectral characteristics of polymethine due-stuffs p-substituted pyridine derivatives in different solvents have been investigated.

Analysis methods system was developed on the basis of polymethine due-stuffs formation reaction, including chromotographic, spectrophoto-metric methods.

Nicotine pharmacokinetics in the biological liquids has been investigated with the polymethine due-stuffs formation reactions use.