Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.01) на тему:Новая технология антигипоксического препарата антизола и его лекарственной формы

о*

МАРШЕЕА СЕРА ВАСИЛЬЕВНА

новая технология ад'шгптож^еского препарата легпео/д

II ЕГО ЛЕКЛРСТВЭИЮЙ сока

15.00.01 - технология лекарств и организация фармацевтического дела

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтически паук

На правах рукописи

Санкт-Петербург 1398

Длсоертщюкнап работа выполнена в Воешго-^дкц'к'.сдач академии на кафедре фармакологии. •

Научккг? р>у.оводагел1:: - член-кэрростндент МЛН ЕШ,

доктор фармацевтических наук, профессор Б.ЛЛзкчир .

доктор кед;адааски:-;.наук, профессор а.З.Смирнов

" С^ициагла». сяповсгаи: ■ доктор фармацевтических наук, профессор С. Д. Минина доктор фармацевтических кзук, профессор С.З.Уиаров

йедавдя орггшггсцда - Науадо-ксслодсвагсльсккй •ктут яоеккой иедищкы (г.Санкт-Петербург)

Защита диссертации состоится 1698 г. -Л!

чассз аа заседании Дкосертсциошюго сов-зта Д C84.63.0i по еащитаы диссертаций при Санкт-Петербургской государственно»"; хга.око-фармацевтической академик по адресу: 197376, Санкт-Петербург, ул. Проф. Попова, 1-4.

С диссертацией модно ознакомиться в библиотека СПХ'ЗА по адресу: Санкт-Петербург, ул. Проф. Попова, д. 4/6.

Автореферат разослан

1998 г.

Ученый секретарь специализированного совета

кандидат фармацевтических наук/ доцент М. В;Рыжкова

СБ^АЯ ХЛРМСГЕРйСГПйа РЛБОПЗ

¿изуглэдость таза. Амтигал - оригинальный отечественный препарат с выраженным антигкпотеическим действием. Препарат разработал кг кафедре фармакологии Боенно-ыедицккской академии, Скл разрешен ©аркакмоппеским комитетом дга 5«»шичзского' изучения и имеет следувдие показания к щодевэяяю:

-ожоговый, травматический, геморрагический вок» механическая травма, 'крогэпотеря-,

-ииемпчеетжй инсульт,- преходящие расстройства шагового кровообращения, черегсю-ыозговаа травма;

-уцфаркт миокарда, кземэтеская болезни сердца, операция на "сухом сердце";

-острая п подострая дыхательная недостаточность различного про-ксхсядезия, в тем числе в онкологической и реаниматологической ярактлкз;

-реализация после клинической смерти;

-прочие заболевания и оперативные змегательства, сопровождавшиеся выражештой острой и подострой гипс-колей.

Лекарственные средства, имеящив вышеперечисленные показания К-врамеиеаи», зераине необходимы для проведения мероприятий аеот-яоккой терапии, оказания медицинской пшизи и лечения пострадавших при авариях, гатастрсфах и з военных конфликт ах.

Ранее била разработана технология субстанции,' осковгннач на использовании токсичного сероводорода, однако для вяедрения препарата в промышленное'производство нуяяа экологичная технология, пяювдзувдая- отечественное сырье. Для амтизела неоднократно делали попытки создания'инъекционной лекарственной форт, однако термическая неустойчивость препарата и нестабильность растворов при хранении сделачи невозможным внедрение лекарственной фермы в производством

Для внедрения аативола в производство представляется весьма актуальным и перспективны).! совершенствование технологии его субстанции из доступного в настоящих условиях сырья и разработка новой лекарственной формы препарата.

Цшг> н задачи ксслэдозашга. Основная цель исследования заключалась в совершенствовании технологии субстанции амтизола и разработке новой лекарственной формы.

В соответствии с поставленной цель© необходимо было решить следующие задачи:

- подобрать способ получения К-диахсшоыегилвде^дюмсгаевявы, полупродукта анизола, без использования б качестве исходного сырья токсичного газообразного сероводорода и без снижения выхода основного продукта;

- получить Н-диешшадетшздентшмочевиЕу из сырья, выпускаемого на дапыый ыомент в России;

- увеличить содержание основного вещества на стадии получе-тж к'-диа\5кк0>,'.ет11гиденти01,!0т:евикы и упростить процесс очистки;

- разработать лабораторный регламент получения субстанции "амтизсла; . ;

- разработать проект временной фармакопейной статьи на субстанция аатизола;

- определить состав и разработать технологию лекарственной формы амтизола - лисфилизщюванЕого порошка для инъекций;

- разработать проект временной фзрыакопейкоЗ статьи-на лекарственную форму;

- провести сравнительные фармакологические.- исследования новой я старо,"; лекарственных форм.

Научная когдааа. Теоретически и экспериментально обослована новая аехнология субстанции ямтизода с исключением использования токсичного сероводорода и повыпениеы выхода основного проду'ста. Детально изучена реакция•получения Н-диаминоиетшшдеитиоиочевины из сырья различного качества при разнообразных параметрах процесса. Впервые исследован процесс с применением простого и дешевого катализатора (элементной серы), что позволило получить практический эффект. Закономерности процесса получения К-диашшо«ет,иден-тиоуочсбиик описаны уравнениями регрессии, необходимым!; для его оптимизации.

Разработаны и экспериментально обоснованы методы идентификации и количественного определения субстанции амтизола.

Впервые определены состав и технология новой лекарственной фориы аитизола - лиофилизированного порошка для инъекций. Проведены исследования по солзэбилизации раствора амтизола, обоснован оптимальный состав лекарственной формы с применением фармакологических исследований. Разработаны новые методы идентификации и количественного определения лиофшшэированного порошка для инъек-

- з -

цт¿i. Установлены его стабильности л <$аруакояогическая активность.

Ка способ получения Н-диаминомвгилидеитао«оввзяны, а также на состав к метод получения лаофавизирозан'юГо порошка ачтизола для инъекций получены патенты PSJ.

Практическая заачзиссз*. Разрзоота-: малоотходный метод получения гмтйзола доступного отечественного сарья. применение катализатора на первой стадии синтеза позволило' упростить технило-гиэ ка всех стадиях' процесса , 'улучшить качество продукта и увеличить его зыход даже кри использовании сырья худшего качества. Прэддскектал метод позволил также упростить обезвреживание маточных растворов.

Ча основании разработанной технологии осуществлена наработка субстанции гытизола нескольких серий яа опытно-промышленной пилоткой установке, з стандартных реакторах промызгеаного типа вместимостью 5 -25 л. Показана зоотрокзгодкмостъ vexaoEoriai при ааса-тгбировании процесса.

Разработаны простые а надеаные методы контроля технологического процесса, аетоду анализа промежуточных продуктов к готовой субстанции. Разработаны временная фариагажейная статья ría субстанции амтнзоза и лабораторный регламент ее получения.

Разработаны состав, кетодкхк получения и анализа лекарственной фор&г аутизола - лнофилизированкого порезка для инъекций. Па-' работало' несколько партий продукта для- яакхиницесквх испытаний. Разработана врзыеннга фармакопейная статья на указанную лекарственную форму.

"cnssno проведена' сравнительные фармакологические испытания лнофклнзированного порошка для .инъекций и ранее предложенного 2-7, раствора амтизола' гидрохлорида.

Апробзция ^а&зга. .

Материалы диссертации доложены и обсуждега на Российской научной конференции "Антигипоксанты к гктопротектсри: гп'сгн я перспективы". (СПб., 1994), Всероссийской научной конференции "Гипоксия. Механизмы, адаптация, коррекция" (Москва, 1997), Всероссийской научно-практической конференции " От materia ¡redica к современный медицински» технологиям" (СПб., 1998).

Пу&скгвкя. По теме диссертации опубликованы 15 печатных работ, вклвч&ч два патента PS.

Css3o задач яссладозанкя с ярсбдэкпщ! ялгиом. Диссертация

выполнена в соответствии с проблемным планом научно-исследовательских работ Военко- медицинской академии (тема N -148-94-П12) и связана с тгалаением государственной программы' "Медицина катастроф".

Объем V, структура диссертации. Диссертационная. работа состоит из введения, обзора литературы. 4 глав экспериментальных -исследований, выводов, списка литературы и приложении, содержащих

таблицу изучения стабильности субстанции л лекарственной формы, проекты временных фармакопейных статей на субстанцию и лекарственную форму, лабораторный регламент получения амтизола. Она наложена на страницах машинописного текста, содергаге^^'таблиц, ЛЛр:!сункоБ и одну схему. Библиографический указатель включает 196 источников литературы, из hie; 78 на иностранных языках. На гацчгу вносятся:

результаты теоретических и оксперкментальных исследований но созданию новой технологии субстанции амтизола;

результаты экспериментальных исследований по. обоснования состава и технологии новой лекарственной формы - лкофилизировзн-ного порошка для инъекций;

теоретический и методические разработки по идентификации и количественному определению субстанции и лекарственной формы;

результаты сравнительных фармакологических исследований лио-фкдизкрованкого порошка амтизола для инъекций и 2Z раствора амтизола гидрохлоркда;

выполненные на основе проведенных исследований лабораторный регламент получения субстанции, проекты BSC на субстанцию и лекарственную форму амтизола.

МАТЕРИАЛЫ К МЕТОД Ы ИССЛЕДОВАНИЙ Объектами исследования являлись исходное сырье, полупродукты и субстанция лекарственного антигилоксическего препарата амтизола, а также его новая лекарственная форма - лмофилизированньш по-, ■роаок для инъекций.

При изучении характеристик продуктов использовали хромато-графические пластинки Sllufol UV-25i с ультрафиолетовойдетекцией, прибор для 'определения температуры плавления ПТП, рН-метром 121. ВЖХ выполняли на хроматографе. Perkin-Elmer 601-с ультрафиолетовым детектором LC-55. Ультрафиолетовые спектры снимали на

спектрофотометре СФ-20, длг. сшалитЕческих целей использовали СЭ-8. . Масс-спекггра сшшахк кг. масс-спектрометре Hevflelt-Packarcl, мод ель 8580А. Инфракрасные сгектры сягелалп на ккс-;9, Spekord М-80. ILiP-спектры сняты ка спектрометре Tssla ВЗ-497.

Мадзтабироваяяэ .технологического процесса осущестзлглк аа окагко-проьшлеаяой лилотяой установкой СКТБ "Технолог", для по-лучзпкя лхофидкзарогвншго пороша длг ;5нъекц5»й ясполх-зовали ус-тановгсу сувки итальянской Фярш "Врэз::о-Базп",

Специфическую активность лекарственной форш ка модели ги-яог«сич.еской ггаоясз-п, ■ острую токсичность я кзсшюраздравзюзее д^йсгвке определяет а соответствии с методическими рекомендациями йармнголсгкческого комитетам (Шскза,- iS85, 1900).

Фармаколсткские эксперименты выполнен яа 285 яелт.чемнух 5елых крьгеях,. сакцзх и садках, нассой 1Б0-220 г п 5 крол-нсах-сом-aat массой i,S-l,7 rav

Разработаны простое и кгдемнне .метода контроля тогкологмчгс-;:о?е процесса, прпводгш оптлмазькые методжс: пояучзнкк веек про-чезеуточккх прсяу^яоз, субстанции и лекарственной фор:-.щ.

Результаты 200Х зкзперх^ечтоз сЗрзботань; статистически з со-огоетстзик с Г<й XI, а тана» методе;«' варкацшншй' статист^кл о щтгьшещ«« пакета прякт-аЕКьи пр&гргаи "Sfcstijrep'niKs" ка персональном кс.чпъхтере IBM PS/AT.

Составление проекте:? BSC к лабораторного регламента пренззе-йево в соответствии с требования;.::: созтветстьуапзк ГОСТов к ОСТоз.

РВЗЯЬТДЮ ЯКШЯЗЕМЕКЗ 11 JSS СЕСЭ1*ЛШП2

пж&еса гшяучгша cygcrasnsr-s анхизояа Для внедрения препарата в ядомыздешхестЬ' требовалось подобрать технологии,. удовлетворяющую эколопгсеским требованиям, оско-заниую на доступном дешево« отечественном'сырье и не уступающую по выходам технологии, бавирупдейсл на кепешьгеваяии сероводорода. Процесс получения:субстанц .. ангизола 'состоит из трех химических стадий - получения полупродукта - Ы-диа\шнометилидентиомо-чевкна (h'-ДАМТМ) , ее окисления и выделения аатизола основа»».

Получения ^^¡ттшвазтщеятшекевит. Технология полупродукта базируется ка способе, разработанном ранее на кафедре фармакология Военко-^едкцачсксй академии и основанном на действий ssAiCRHs гвдросульфидэ на двдшдиаид (ЛОЛА) . Ашокий гидросуль-

-

фад получали непосредственно в реакционной среде, действуя на аммоний сульфид 55-652 раствором кислоты серной: 2 (№¡4)25 + НгБО* —— ггОДБ + (КНА)2504

к2н-с(ш)-ш-с»м + ш4нз ——» Н2М-С(НН)-Ш-С(БИ!Н2 + Щз Дициандиашед ' ^ к-диаминоМетилвдентиоыочевина

Выход составлял 24-367., содержаще основного вещества -57-70%, то есть до 40? пршеси. Обращает на себя внимание невысокий выход и низкое содержание основного вещества> М-диа\оп:ометл-дцдеитиомочевины, (»тетку которой осуществляли химическим путем через иерастворю&ш оксалаг. Подобная процедура Еесьма трудоемка и удорожает производство.

Для оптимизации вроцесса получения полупродукта бил проведен ряд исследований. Изучение процесса взаимодействия ДЦДЛ о аммонием гпдросульфвдом в Зодком , растворе показало, что оптшалькая тяература составляет но менее 55 °С, величина' рН. в. процессе, опыта увеличивается на ОД единицу/а процесс подчиняется уравнению необратимой реа!<цш первого порядка. Сдвиг рН в процессе реакции можно объясзигь'-згей, чао обрадугодаяся Н-дшшоыетидидентк-оючевина более осиоапа, чем исходный ДЦДА,' а тайка вйделгпием свободного аашкада.

Исследовали влюше ' огабзнжаацки рн в гечгкие опызл. путем добавления порщш / рзеязои-' кислоты 'серной на выкод к содержание основного вещтнзгаа'-в К-д1шшо«етщедентиьг<очевина (рко. 1 и 2 соответственно)а также' влияние' вродолжнгедьносги вэдзра-ки. Провали две серии опытов, 'в. ютор!с:: кислоту' серну»' добавляй! в течение первых 6 (кршыз 1) или' 12 часов (кривые 2) процесса.

Рис.1. Зависимость выхода н-диаыиноыетилидентиошчевины от продолжительности выдержки.

Дополнительное добавление кислоты серной в процессе выдержки

приводило к существенному повышению выхода, достигающему 42%. При этом содержание основного вещесвва е полупродукте увеличивалось, Содержание ■■•.-.■_ _

основного

вещества, «

: | 5 ; .. : - -•-' "Г

; !

................

! - \ 1 > ЪУ ; ; ;

. | . | "

•с.ч.

•.а » и 15 15 17 1*

Рис. Зависимость содержания И-диалшсмеиэдек^йомочеЕины з, полупродукте от продсдактелъности выдержки.

особенно зо второй'серии ошдоз возрастало до 75Х-'(в опьяах без добавления кислоты' серной выход составлял 30%, . содержа»» основного, зещесгва- 61%). Оптимальное-время процесса составапо 17 ча-соь.

■ Согласно датам лигерагура, в процессе получения й-дааькяо-. .ИЭт;21эдеЕ?£зз«очез12Ш другими оносоСами применяется катализатора» пазркаер, яайюульфяда различного строения, сера или сеедкнзжк, сбрз^щке серу процессе реанцки о сероводородом.

•' результаты проведенного нами исследования влияния раалтьо: лобовск на процесс. получения. Н-дааьоаюмег таяентломочезпны аредс-г*штвы. за 'рисугке 3. Содержание 'основного зе^есзвгД

' !

Ч с

• •

*

Выход,'

Рис.З. Влияние различных добавок на выход и спдер-г-алие Ы-дпзмл-поуетнявдентиоыочевины з полупродукте: холостые опыты; добавка элементной серы; добазка тиосульфата натрия; *- добавка насыщенного, раствора КШОд.

видно на рпс.З, . применение аороака элементной серы увеличивало хыход . полупродукта и, что очень важно, при псаучеаин субстанции лекарственного вещества, на 1С Т. повышало содержанке з нем основного зещэстаа (96% и 97% вместо соответственно 85% и 87% в холостых опытах).

Повышение содерзкания основного вещества в Н-диаадшшетаи-деитиошчеване дам? возможность исясаьзовагь такой ■ полупродукт без очистки в дальнейшем синтезе.

Далее-- ш изучали зависимость канализируемого серой процесса (с добавлением в течение 12 часов дополнительных количеств кисто-ты серной) от температуры реакции (ркс.4), первоначального значения рК реакционной среда (рис.5),, концентраций' каслохы серной, канмества катализатора, .длите;шносЕ1. реакция. (раз.в);

Выход,

■ ■ | : ». 1 ! !

' — \ .

!\ !

/ • \

..... А /......■- - ■■■ ■ ! х

/ I ■ 1 1 -1 1 \

е 1 1.4 .

Ь. сС

Рис. 4. Зазисшося» выхода Н-диалшкомекшщектиомочевинй с? температуры процесса.

Выход,/

■ 0..' ----------

т ^

V

/ - у.

/ • 1

рН

Рис.5. Зависимость выхода .' К-диаминокетилидентиомочевикы от первоначального значения рН реакционной среда.

Как видно- на рис. 4-6, при проведении реакции в интервале первоначального рН среды 7,8-10,0, при'температуре от 35 до 80 °С и добавлении элементной серы выход ^диамккометилиденткомочезины

составляет . 33-53" при содержании основного вещества в сыроы полупродукте: 87-100%. выход,?, кз.4г-

г:

(14!----

5>Н

—н

Р;:с.6. Зависимость выхода м-диаышометилвденткоыочевины от продолжительности выдержки.

Мы исследовали процесс получения М-даашнок5т:шаде;га?оьючо-еийы на основе шогофакторкого регрессионного анализа. Составлена матрица данных (табл. 1), вкшчзощзя в себя независимые перемен-

• Таблица 1.

Матрица данных для ыкогофакторкого регрессионного анализа . процесса получения №*диами:.тс>.:ет1шжентиа/.счев;кш.

!ш XI 1 Х2 Хз и ! "' • У2 NN XI Х2 | Хз | * У2

9,6 53,4 8,44 1 100,2 49,5 15 3.0 63,0 8,41 95.8 '43,0

о Л. 9,6 53,4 8,44 90,5 51,5 16 9,0 0 8,41 97, 4 42,5

3 3-,5 58,4 8,44 98,3 50,6 17 8.9 0 8?, 4 40,0

4 9,6 58,4 8,44 100,0 53,2 18 9.0 69,0 0 97,4 42,8

5 .9,6 53,4 65,23 98,0 44,0 19 9/0 69,0 0 91,9 25.6

6 9,3 53,4 8; 44. 94.3 45,7 20 9,0 69,0 0 . 93,6 38,1

7 9,8 58,4 8,44 25,2 42,7 21 9,0 69,0 0 . 94,а 39,9

8 9,6 58,4 8,44 93,4 50,5 22 8,9 69,0 о 34,3 40,1

9 9,6 0 8,44 98,9 38,7 23 3,2 69,0 0 94,2 38.2

10 10,2 64,3 8,44 94,С 16,3 24 9,1 69,0 0 85,5 35,0

11 10,0 58,4 0,44 97,0 40,4 25 8,9 69,0 0 85,6 34,2

12 7,6 101,: 8,44 73,0 13,2 £6 9,1 69,0 0 90,2 40,0

13 .9.0 64,3 0 78,4 34.1 27 9,0 69,0 0 89,3 45,3

14. 9,0 63,0 0 85,7 38.3

ныо: Хх - начальное знамение рН, при котором начинается реакция-Хг - количество серкой кислоты, добавленной в процессе' реакции; Хз - количество добавленной серы; зависимые перзыеккие (критерии оптимизации): У1 содержание основного вещества з полупродукте; Уг ~ выход полупродукта.

Получены следующие уравнения регрессии:

У2 - 140,19 - /10,81X1 + 1,03Х2 - 0.02Х22

К1=0,533; Р-11,1?4 , р < 0,0001. Приведенные значения свидетельствуют -о том, что построенная регрессия значима.

Уг = 33,78 + 6,21X1 + 0,52Хэ

Ш » 0,562; Г = 9,84.5 , р < 0,00023. Представленные значения 'указывают на то, что построенная регрессия значима. .

Таким образом, Уг, или выход полупродукта, зависит от начальных значений рН, при которых начинается реакция, и от количества добавленной в процессе реакции кислоты серной; У1( или содержание основного вещества в полупродукте; зависит от Первоначальной величины рН и от добавки катализатора.

Найдена следующее оптимальные условия проведения реакции: рН первоначального реакционного раствора - 9,6, температура реакционной смеси 50-65 °0, продолхительнссть синтеза - 17 ч, содержание серы - 8,4-1 г/моль ДЦДА, дополнительное количество 60% серной кислоты за 12 часов синтеза - 58,4 .мл/моль ДЦДА. При эти условиях обеспечивается получение Ы-диайшюметилидентиомочевины с выходом 50-53% я содержанием основного вещества 68~100Х..

Таким обрааой, мы получили полупродукт с выходом не Нике, чем при использовании токсичного сероводорода, но гораздо лучшего качества. В этом случае отсутствует необходимость сложной очистки полученной К-диатюыетидвдентиомочевйны, что, в конечном итоге, дает выигрыш в выходе в ЮХ.

При анализе маточных растворов, полученных после отделения технической Н~диааинометилидент::омочевины, установлено, что в них находился в основном аммония сульфат, аммония роданид и тисмоче-вина. то есть вещества не обладающие токсическим действием. Поэтому маточные растворы не требовали специального обезвре.тавания; Таким образом, ЛЦДА в течение процесса получения М-диашнометили-дентиомочевины подвергался рааложению с последующа» образованием тиомочевины и аммония роданида. С увеличением первоначальных значений рН реакционной среды > 10 этот процесс преобладает.

(Hoi'OgOii-o;; — дициандиамид H2N-C=N + KH^HS ачмснж гидро-

ци&намид, сульфид

ъ

тиомочевина

HsM-C-?JH2 + NH3

2 H2N-CMJ

цианамид

аммиак

HsM-ON + NH4HS

KH4SON + NH3

аммония гэдро-

цианачид сульфид

аммония роданид

аммиак

Окисление А-дцгшномвтихиденшишочевиаы. Следующая стадия технологического процесса - это окисление N-дишиксметилидептио-мочевины до 3,5-дкачино-1,2,4-ткадиа£ола гадрохлоркда (амтивола гидрохлорида). -

H2N-O(NH)-NH-C(S)-NH2> Н2О2 + KCl —:--» C2H4N4S-I:CI + Н20

.И-дкакинсметилидентиомо- Перекись Амтизола

чевина водорода гкдрохлорид

Методика окисления основана па работах Ф.Курцера. Уссоюш проведений реакции исследовали путем варьирования концентрации перекиси водорода, продолжительности и температуры реакции. Указанные условия были изучена и при масштабировании.

Рекомендуемое в работах Ф.Курцера добавление этилового спирта оказалось нецелесообразны;,!. Окисление проводилось з водном .растворе кислоты'хлористоводородной путем постепенного добавления при 20 °С 15% раствора перекиси водорода. Охлаждение смеси приводило к выпадению в виде осадка амткзола гидрохлорида.

При получении технического аыгтзола гидрохдорида выход составлял от 63 до 95>£, содержание основного вещества - 91-97% при Р<0,05. У Ф.Курцера выход составлял/73-802.. .Теки» образом, на« удалось повысить выход на ~ 15%.-

Получекие ггекпического аитзола основания. Для выделения ам-тизола основания из гидрохлорида мы изучали ряд щелочных агентов: раствор натрия гидроксида, натрия бикарбонат, водный аммиак. Два первых агента оказались нетехнологичными.

Аытизола гидрохлорид обрабатывали в водной суспензии водный раствором аммиака при температуре 30 °С до pH 7,0±0,4.

30 °с

Сг1ЦГ-!43- KCl т ЫН4ОН —-----—• CgHiNitS + NH4CI + HsÖ

Оыход продукта - 90,7-95,3%, Р=0,05. Содержание; основного вещества - 33%. По данным ТСХ на скдуфолс, технический амтизол не содержал .примесей. ДЦЦА и М-диалшометклздентиошчззины. Йаоштвби-'• рованне процесса не приводило к снижению -выхода•продукта. Методика технологична и может быть внедрена б производство.

Получение фармакопзйкого амкизаа. Нами разработан метод очистки амтизола до фармакопейных требований.- Необходимую степень-чистоты достигали двукратной'кристаллизацией амтизола из воды с активированным углем. Изучали влияние количества растворителя и времени кристаллизации на выход и качество продукта. •.-..

При первой кристаллизации-использовали растворитель в количестве 3 л/кг, время вздержки при'охлаждении - ö часов, а результате получали кристаллизованный амтизол с температурой плавления 164-166 °С, .содержанием основного вещества 97-982, не .содержа®»*' органических примесей по даяныы ТСХ. Ежсзд составлял 75,3- 88,8л., Р<0,05. "'■'"'.'

При повторной кристаллизации оптимальное-'количество растворителя составило 2,5 л/кг, длительность■охлаждения - 5-6 . часоз-. Фармакопейный аытизел имел температуру-плавления; 166-169содержание основного вещества - Ö9-1CG 7,, не содержал примесей по данным ТСХ. Выход составлял 81,5-84,1%, Р<0,05. ; .

.Таким.обравси, общий выход.по стадия« окаслеиия. Н-ДАМТМ, выделения амтизола основания и его очистки/составлял до 62,7%. Ранее предложенная технология этих процессов имела болям1 • технологических стадий из-за худшего -качества полупродуктов и, . как следствие, выходамтизола до 36,5Х. В результате срвершенсгвова-; иия и оптимизации методик мы смогли увелю.'ить выход аатесола ка этих стадиях на 20-26%. ;.

С -целью ускорения внедрения амтизола-в.-';' промышленное'"/ производство синтей проводили не только е стеклаяной ^абораторкой по-, суде, ' ко и на пилотной установке в стандартных реакторах.промыв—' ленного типа вместимостью 5-25 л (стадия получения К-дизминомати-'. -дид|?нт1!смочевины в эмалированном реакторе, а стадия получения, из-нее амтизола - в стеклянном;реакторе). ..результаты этих эксперт мектои указывают на стабильность воспроизведения .процессов' fe .воз-ысаность их внедрения в промышленное производство.

Сгеия I.

ЖШОДОПМЕСКАЯ СХЕМА ПРОИЗВОДСТВА АШИЗСЯА.

BP. Пркготовсаше €0% <r- BP.Î Приготовление

] U раствора кислота КгКх реакционного

сяжой раствора

ЗР. 1.2

Приготовление реак-ционноро раствора {

ТП. Синтез i

} 2.1 N-ДАМТМ !

{ТП. Фильтрация серы

1 i _Í

Ш.

2.3

Обработка реакци- U-егшого расгаора гкг. } угаем и фнлуграция \

ТП.21 Получение j r-> j П&терк в |

Кг 1С i N-ДАМТМ »

1

fïïî.l Кримапяувяцяя jj-<J I 2.4 .N-ДАМТМ I 1 и фильтрация

SHI. Окисление ч-

¡3.1 . : N-ДАМТМ .

v_____ "il" ''

Lm3tü4-

+[""Потери ! J msxSHK- ; t^nCEKHQ^J

ÜTÍT.3 - ; ПКгК, Окисление N-ДАМТМ

|тп. 3.2 Фильтрация аытиэо- j<-¡ ла гидрохлорвда I

► j Потери б I f маточ- J нмке í

-vi Потери !

Продопжжкесхеа! I.

¡ТП. | Выделение гиггизола 1<-| 4.1 I ОСКОВОЕИЯ | ; ! ; 1 р>| Псхсри а | ! кагоч- I 1 " 1П-ПСС; |

Гга.4 г Выделение амтязо ли оснований »

1 4.2 (¿>1ж>тс^цкя ашкзоаа 1 ЦГ~ПЬтго\' | | межаякч.'.«

|И1. 1 5,5 Обработка раствора аткзеяа акт. угзтем { и фипьр-аддз ! >

5.2 КрлстЕыгиа.'^-!': ан- <— тимола !ТП.5 1 Кг Кристалла: а-1—Потеря | ция аьт.золл | | цехами-!. 1

* Г| - 1."............. ■

та 5.3 Фхшырозгнио а^ти-зола и прошлвка |

ТП. | Обработка раствора 6.1 алггизолаакг. упхеии-I фальтоация !

ТП. 6.2

Крястглаизацщ аыхизола

ТП. 6.3

Фильровакие аш-зода и проыывка

ТП.

6.4

Сушка фармакопейного аытизола

Маточшшс, псаопизу-с.мыс. р'ггеперашж

•Ш.6, Кг К»

Получение

фармакопейного акхкзопа

Г

Влага

Потери ыеханш.

На стад

Таким образом, выход амтизола по всем стадам, в пересчете на ДЦДА, составлял до 31,2Х.

Для увеличения выхода проводили переработку отходов, что дает эффект и повышает обдай выход готового продукта до 35,0%.

На основе проведенных выше исследований по технологии Ы-диа-минометшшдентиомочевикы и ачтизола нами был разработав лабораторий: й регламент получения субстанции ачтизола.

Разработка Лекарственной аизизала

Н5 основании клинического изучения установили, что препарат предназначен к применению при неотло:шых, экстремальных состояниях, требующих ларентерааного введения, Инъекционную лекарственную форму разрабатывали неоднократно. Были предложены 1,5% раствор ачтизола, 2% раствор амтизола гидрохлорида, 3 и 6% растворы сукциката ачтизола в смешанных'органических растворителях. Однако термическая неустойчивость ачтизола, выявившаяся в конечном счете нестабильность растворов при хранении, не позволили довести до внедрения ни один из указанных препаратов.

Для решения проблемы, нестабильности ампульных растворов нами была предложена новая лекарственная форма - лиэфилизированиый порошок для инъекций.

Разработка этой лекарственной формы потребовала дополнительных исследований. ' Первоначально изучали'растворимость ачтизола в Еод'.ох растворах при различных температурах и значениях рн. необходимая' концентрация раствора для производства лекарственной формы составила СО мг/мя, а растворимость-амтизола в физиологически приемлемом интервале рн не превышала 43 мг/мл.

Для увеличения растворимостА ачтизола потребовалось- введение дополнительных ингредиентов - си<ергистов растворимости и солюби-лизаторов. При этом изучали влияние на растворимость субстанции таких факторов, как температура процесса, продолжительность нагревания, состав и количество ингредиентов. В качестве солюбилиза-торов изучали в различных сочетаниях следующие вещества: . кислоту янтарную, трис-буфер, метилглюкачин, трилон Б, натрия гидроксид, псливинилпирродидон, рибоксин, натрия девоксихолат, натрия сали-цилат, политлюкин (всего 36 комбгааций).

' Критерием сценки стабильности испытуемых опытных образцов лекарственной формы ачтизола считали отсутствие осадка или признаков появления осадка (змейка, опалесценция) в течение ?А часов.

Этот интервал времени обусловлен продолжительностью процессов при. фильтрации и розливе во флаконы растворов, их замораживания. Наи- ■ белое устойчивые комбинации и условия приготовления- приведены в табл. 2. .

Таблица 2.

Устойчивость опытных партий 6% растворов амтизола для инъекций, ч

Наименование ингредиента •кассовая доля Температура процесса, °С Продолжительность . процесса, мин Свойства 6% раствора

РН Время выпадения осадка, ч

1 Амтизол, 1,00 65-70 30 .7,1 • СО 1

пелиглюкин 1,00 ■

2 Амтизол, 1,00 70 30 7,6

рибоксин 0,03

3 Амтизол, 1,00 65-70. 30 7,2 24 . ."'

полигурокин. 1,00

янтарная 0,50

кислота, ■

натрия гид-

роокись до

рН 6,5-7,5

Стеридизагтао инъекционного раствора осуществляли филь'традеей через мембранные фильтры "Миллипор", "Владипор" с размером пор 0,2 ш в асептических условиях. Розлив стерильных растворов амтизола осуществляли в стерильном Ооксе в стерильные флаконы вместимостью 20ил по 5 мл раствора. Датее их подвергали предварительному замораживанию.

Для определения -режима лиофильной сушки провели изучение точки эвтектики лекарственной формы состава: ау/гизол-полидлнжин-кислота янтарная 1:1:0,5. Метод основан на выявлении температуры поглощения материалом удельной теплоты плавления при нагревании от низких температур в зависимости от времени нагрева (рис. 7).

Из графика определена эвтектическая точ1са, которая составила

Рас. 7. иоакгезш

пзрзауру гокс^твенпсп «Зорка es

■шнус S3±2 °C, TsisspETypa пр&днзгктолзногс чжоргг&.гзигл

эв«:сг:и.зскйй -soa«-;, соэтсму растворы míécpss&ssji* -

' Следующая'отгдащ са-смчаг?^ в су&оийщш ггда к удалили пероз.- При со&даязоц низком давлении соиро^зсеже окру^сак-уй среда становится • аеэпа'пгсагьяьг-г, крЕС^&згичэокал реяескь льда легко распадастся и иереходкг в пар, .гангуя «5дкую стзд:а\ Суб._?-мгцдакная. камера. (-4С.сС) соединена с кгмзрой ксндоксац«"., •?е;.:аз-ратура стенок которой па 20-33 ° нш:з температуры стено:-: оу&сап-гора, Первичное вксугзшанлг прозодиди 1"-!'.'=. часов при йсггтспНйь; давлении 0,2 rila. Далее постепенно з течение 12-14 часов, .-е допуская .подтаивания препарата, яереводкш: пешм на нзтргз до установления температура в препарата 20-20 °С и зндвркквгак при зтсЛ гешоравура 3-4. часа. Сушт/ прозодгаа л степягъкьх пагсяэяию:. Укупорку ¿лаксноз с высуженным препаратом произведши в асептическом боксе стерильными пробками с сойгидениеч сразил асептика.

Из. трех лучякх вариантов сосгаза лекарственной форму гатиго-ла для- яаьекв&й ЁеоЗходииз'.балс выбрать наиболее. предпочггитеа»-нкй. Для этого исйсльзозалк тестирована* полученных препаратов до аятгачшокгаг-геской активности.

Исслелоаёте .smjsaiúxtcvKeckoá sznjsaaanl 'ргзлм'шз: зариг&юв ■zcs^pcmeimaü ^apítbi г^ство^з.

. Исследования проводили на модели острой гипоясическок г;:по;с" . сии (пшобарическая гипоганя}1 на белых крысах- кассой 150-160 г по £0. ливотньк. на каздьи-препарат и контрой!, моделирование острой . гипоксии осуществляли''"а 7'щхжтад'. барокамере . aya температура внешней среды 20-22' Upenapai1 вводили внутрибршшззэ в доге 25 иг/яг. (во.аетизолу), в:контроле крысам'ззедииг зна^-геитныв ofc-еиы растворителя. ;2ивсгякх поднимала:. на/ "высоту" ; 1ECCU ц, скс-

Е, с! »1

-20

-40

Г /

•¡о го so -¡а т, «и.н

Таблица 3.

Антигипоксическая активность предлагаемых вариантов инъекционных растворов на основе яиофилчзированнкх порошков на Еысоте 12.000 м

Партии препарата Количество животных Продолжительность жизни животных, мин. Летальность, %

1 20 8,0 ±1,2 95.

2 20 4,4 ± 1,1 / 95

о £0 12,1 ± 1,5 70

кснтооль 2С 4,3 ± '1,0 100 ■

Р < 0,05

рость подъема 50 м/сек с 2-х минуткой площадкой на "высоте" 5000 м. Антигипскскческую активность препаратов оценивали по длительности жизни животных на "высоте" 12000 м и летальности.

Как видно кз табл.3,, результаты ксследовааия'выявили."лучший вариант состава препарата: амтизоя 1 часть, полиглэкин.--'- 1 часть, кислота янтарная - 0,5 части, натри.« гидроксид до рН 6,5-7,5. Средняя продолжительность низки животных на "высоте" при взедгккк третьего состава - 12±1,5'кауяг, ' количество выживших «ивотных,- 6 особей (контроль соответственно 4,3±1,0 минута и все гагаотные погибли^. Вторая партия препарата, содержащая амтизсл и рибоксин, по активности практически-не отличается от контроля, следовательно рибоксин блокирует актагкпоксчиеское"действие -шха-еола. • .."■"■■ -•

Выход готовой лекарственной форыы при наработке 5 партий составлял 84,93±1,09%. \

Разработка ыэгодоз анализа рубстанцш; и. дыарсгвенкой £срна Разработка методоз анализа субстанции &\згизола. До настоящего времени не были разработаны современные: ".фармакопейные методы качественного .и количественного анализа ".субстанции амтизола. В данной работе амтизол исследован неш с помощью современных физико-химических методов: ШР-, УФ-, ИК-, масс-спектроскопия, тонкослойная' и жидкостная хроматографии, потендиометрическое титрование, элементный анализ. В результате полученный фармакопейный образец, амтизола надежно идентифицирован, доказана его однород-

ность.

я—с—NH2

¡j4 3¡ Амтизол (3,5-диамино-1,2,4-

H2N—Os 2¡l тиадиааол)

\а/

S

Масс-спектр. Прибор Heviett-Packard, модель 8590А, температуря ионного источника - 200 °С, энергия ионизирующих электронов - 70 eY, продолжительность измерения 3-5 мин., т/е 116 -100%, п/е 74 - 56,62. гУе 46 - 32,6?.. Обнаруживается пик молекулярного иона 116,0, вычисленная молекулярная масса 116,1, а также интекстный пик нона С З-ССКНгЗ-НЗ"4". Таким'образом," масс-спектр согласуется со строение!.!. '

ШР-спектр в ЖСО-de. и, м.Д.: 6.26 (H2N-C3); 7.88 (H2N-C5).

Спектр приведен на рис. 3. Как видно на рисунке, характер спектра псшостьэ соответствует строения амтизола. Протоки амгногрупгл, находящейся у С5, расположены в более слабом поле. Это вызвано близким соседством атома серы з 1,2,4-тиадиазольном цикле. Отсутствие посторонних пиков убывает на чистоту препарата.

.....__ 1J_

13 12 Л 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1

5" . м.д.

■ Pîic.8. ПМР-сйектр амтизола. , ЙК-спектр (в вазелиновом масле), v, см-1: 34.13 'WH). 3383 (VasMH), 3289 (vsNH), 3205ЙЛ.(vsNH), 3188, 3101 (vC). 2965, 2S37, 1625 (vO"), 1542 (5NH), 1520 (vC»), 1412 (vON. , 1378, 1301 (5 C-IO. 1125 (5 C-N), 1103 (5 C-î)), 1014 (5 0-N), 833 (5HH), 734 (БШ), 539 (5 C-S). Положение и характер полос в спектре соответствуют строении'амтизола.

УС>-спектр 0,001% раствора амтизола в воде в области от 220 до 400 нм имеет один максимум поглощения при 254±2 нм (рис.9).

Найден оптимальные условия высокоэффективной жидкостной Хроматографии амтизола. Колонка Ultrapak TSK ODScie. гранулы 5 mil, размеры 4,6x250 ш. Вариант хроматографии - обраденнофааный

яо -

P.-.3.S. S'-S-ccsrep С.С012 Pkg.íO. БЗ^-хромагограаз аякзолз.. призера гетхБола з ic?ß.

с nsissii-roí: Sasoí* Cíq - ок^гдецдазшгчш) - Coceas раогво-, s v" _ ^ ~ - Psxrs.: изокрагитак:":, скоросю

-y Pv. " ^ ка рис. - iO.' Вреыя удерки-

гьнк.- препарата :з,2 жн, прзлара? h¿ содержи яршес-ей ко.дгзшш 8с£Х. 1'згсд псзьоляс-':- быстро качественно к колкчеегьеняэ

сагккзгзь содзрагнпе препарага, счеж удоЗоа в производственны;:

уС~." -'М.

Дакгве вхкггкеного анализа. Найдено %: С 20.22, 20.25; й 3.02, г. 1С; К -¿е.оО, 48.79; 3 27.86, 27. *5, C^kKíS. Вьйнсленэ %: С B0.es-, Н 3.47; N ¿S.24; S 27.Si.

По гиду все образцы гшизоха, полученные при собла-

дажа резраЗотанвого лабораторного регламента, : бкли бглкни кряс-таглхес^ки порошками и не 1&:еля запаха. ' Поэтому ыежко охг?с.'.:те-ркЕозагь препарат как "белый.кристаллический пороаск без запаха".

Насггнга масса препарата 0,89*0,02 т/сы3..

Методы анализа субстанции амтизола разработаны на 5 лабораторных партиях и 5 полупроазводотзенкых партиях. В.качество фар-' макояейяого аепктаниа'. на поддшшосп наан предложены Уй-спекхр 0,0-31% раствора ааизожа в воде и две характерные качественные реакции.

а) Щелочной гидролиз 3,5--диаминс-1,2,4-тиадиазола при нагревании привода? к расцеплен® цикла. Кокечныыи продуктами гидро-лизног-о раст,еш:гш;2 яблзэтся обычно ккз, ks.s и s, о чем свиде-

" Ci -

тельетвует выделение коллоидной серы, а также запах сероводорода и почернение индикаторной бумаги основного ацетата свинца.

б) Образование осадка трудясрастворивдЛ соли амтигола нитрата под действием азотной кислоты.

Такик образом, приведенные качественные реакции позволяют судить о наличии cep'j в цикле молекулы амтизола; о характерном поведении 1,2,4-тиадиазолов при кислотно-щелочном гидролизе; о наличии в молекуле заместителей. обладающих основным харастером (аминогруппы). Щ счита м, что Уф-спектр и обе качественные реакции надежно подтверждают подлинность препарата.

Поскольку амтизол является слабым основанием, при титровании его кислотой в водном растворе скачок потенциала отсутствует. Однако при титровании с неводных средах картина зачастую деяяется. Нами разработан метод неводного титрозаяия ачтизола хлорной кислотой в безводной уксусной кислоте. 1 ил 0,1 к. раствора .хлорной ш'слоти соответствует.0,01162 г C2H4N4S. Количественное определение содержания амтиэола в 5 полупроизводственных партиях дает доверительный интервал 99,52±0,1б2, Р<0,05. Нами предложено установить содеряание ачтизола в пересчете на сухое зещестао 100.0±1,СХ.

Установлена стабильность субстанции на протяжении 2,5 лет.

'Разработка методов анализа лекарственной формы зюизола. Для юэличественного . определения амтизола в ле!сарственной ферме -лшл предложен спектрофотоы&тричесгага метод. При этом измеряют величину оптической плотности 0,0010-0,0015% (по амтизолу) водных растворов в максимуме поглощения при 254±2 км с использованием раствора стандартного образца амтизола.

Кдект15фикация лекарственной формы на подлинность аналогична идентификации субстанции амтизола.

Разработана методика ТСХ, на пластинках Sllufol UV 254 для обнаружения примесей в лекарственной форме.

Определение рН проводили потекцисметрически в 1,5% водном растворе.в соответствии с ГФ XI. Значения находятся в нейтральной области от б до 8 (табл. 4).

"По. внешнему виду лиофилизирсвакнвд порошок амтизола для инъекций представлял собой порнстуя массу белого или слегка ле.-тсчи»-того цвета.

Установлена стабильность лекарственна"! форыы при хранении ь

холод;,при температуре 1С °С в течение- полугода (срои наб-.""Сснил). С учзтсм какспмальпых отклонений рассчитан- срок гсдксс-17 масгдоз к рекомендован срок хранения 1 год. На ccrosai:.::: проведанных исследований в соответствии с тре-с ГО XI разработаны проекты fií-0 ка субстанцию я ле;сарс-

Таблица

дгализ стандартных партий лекарственной формы змтизоаа для-

и:гьекций.

к;: рН 1,5% Потеря в wací- Содер.глпие

партий ЕОДИСТО ce при высу- амтизола во

препарата растоора •-лзакии, % флаконе, г

010292 7,10 2,1 0,305±0,006

040292 7,50 2,3 0,292.¿Q,003

С20292 6,60 1,3 0,S03±0,003

050292 е-,80 0,9 0,2S6±0,C03

СЙ0292 6,75 2,6 ■ 0,289Ю.005

0302Q2 7,30 1,7 0,310±0,007

С разительные фарыакатгихескае исследования . лекарепшяной фор,я. Новую лекарственную форау исследовали за оструа токсичность на оеслородннх белых крысах в сравнении с 2% водным раствором а^тизола гидрохлорида, предложенным ранее. Изучаемая лекарственная форма по острой токскчеости не' и.:еет существенных отличий от 2% раствора аытизола гидрохлорэда (ЛД50 соответственно, 216*28 и 176±39 для сагйцоз; 177±9 и 183±2б для самок). •

Местнораздражающее д-зйствие новой лекарственной форма и 22 водного раствора амтизола гидрохлерэда исследовали на кроликах-самцах. Оба препарата не имеют раздражающего действия.

Дополнительные исследования специфической антигипоксичес„ой активности препаратов ка модели острой гипоксической гипоксии показали, что раствор лиофилизированкого порозка амтизола увеличивал. продолжительность акзни кивотеых до 15,2±2,02 ыин и воловина зиготных выжила; 2£ раствор амтизола гидрохлорида - соответствен-

по до 12,7±1,50 мин, 43% вьксззпих особей (контроль - о,$¿1,73 •шк., 10% такнвпих особей). Отлпчяе показателей средней прэдагсс-тельнссти жизни и летальности животных от аналогичных данное из табл. 3 объясняются, по-зидимему, различием в неходком физиологическом состоянии животных, что подтверждается соответствуете: показателями в контрольных грушах. По результата;.; истахдезаяпя можно сделать вывод, что нова?, лекарственная ферма увеличивает количество выживши особей и имеет тенденция к увел;яекип средней продолжительности жизни экспериментальных ."ашотних по сравнен« с 22 раствором а!,¡тизола гвдрохлоряда.

Таким образом, новая лекарственная форма амткзола не уступает ранее предложенной по рлду требований и-имечт тенденцию к увеличению антигипоксической актизности.

ЕыЗОДЫ

1. Новая технология полупродукта амтизола - Н-диа&спгометали-дентиоыочеЕИКы - базируется на дешевом отечественном сырье и позволяет получить ее с большим вы.*.одом (на 10%), чем при использовании токсичного сероводорода.

2. Элементная сера, впервые примененная з предлагаемом способе получения М-диазашометилидентиомочевины з качестве катализа-

.тора, увеличивает выход и значительно повышает качество полупродукта (содержание основного вещества 37-100%), который может применяться в дальнейшем синтезе без предварительной очистки.

3. УсовервенствозанЕя методик получения амтизола гидрохлорп-да, выделения к очистки его основания и переработка отходов производства увеличивают выход амтизола на 20-26%.

4. Разработанная технология существенно упрощает обезвреживание глаточных раствороз, не дает токсичных Еыбросов в атмосферу, а также уменьшает отходы производства; она воспроизводима при наептабировании на опытне-промышленной установке.

5. С помощью исследований по »мобилизации раствора ачтизола и фармакологического тестирования выбран состаз новой лекарственной формы для инъекций: 1 часть амтизола, 1 часть полипжг/на, 0,5 части янтарной кислоты и натрет гидрсксид до рМ 6,5-7.

6. На основании определения эвтектической точки продукта подобраны условия и длительность лкофилькой суски,которые погвегяот

получить продукт с остаточной влажностью 1,24-2,292 и стабильные растворы в Физиологическом диапазоне pH. •

7. Новая лекарственная ферма не уступает по терапевтической эффективности ране? предложенному 2Z раствору гидрехлорида амти-золь и не имеет отличий по острой токсичности и местнораздратаэ-щему действию.

8. По проведении.! исследованиям разработана лабораторный регламент получения субстанции амтигола и проекты BSC па субстанцию и лекарственную форму.

Саксон «убйикацкй по гзке j&cc&pzwfsi

1. Производные ткомочевпкы и тпосемикзрбазкда в качестве ан-типаюксаитов к а-стсаротекторов //Анттшоксанты и актопротекто-ры: итоги и перспективы / Материалы Российской научной Конференции".-- Яlo., 193-1.- Вып.2.- С.99. (Соавт.: Гомчин A.B.) -

2. Фармакологическая 'коррекция нарушений энергетического обмена в миокарде при острой гипоксии к ишемии // Гипоксия. Механизмы, . адаптация, коррекция У Материалы Всероссийской научной конференции.- Москва, ÍS97.- С.' 112. (Соавт-'.; Смирнов А.Е., Кри-воручко Б.Iii , Зарубина И.В., Калина Е.А., •. Миронова О.П., Луге« W.B.)

3. Способ получения 2-амидинотиоыочевины,// Патент ; РФ Н 2088572.- Бюлл.лзс-бр. N 24, с. 308, 1997. (Соавт.:' Томчин A.B. , Легостаева Е.К., Гордецов A.C.)

4. Антигилоксическоз средство л способ его получении.// Патент РФ Ы 2096043.- Вюлл.изобр. К 32, с. 162, 1997. (Соавт.: Том-чик А.Б,,-Этингова Н.И..-, Смирнов/А'.В." и др. 5 ;

5. Лиофщшзированная Лекарственная форма аытизола и ее акти-гипокскческая активность // Сб. изобретений и рац. предложений ВМедА.- Шб. 1998.- Вып. 29.- С. 20-21. (Соавт.: Криворучко Ъ.Й., Лебедева Е.А.) -

6. Регенерация серы при производстве препарата амтиэола // Сб. изобретений и рац. предложений ШедА.- СПб. 1998,- Вып. 29.-С. 23-24.

7.Получение гутимина из аммония сернистого технического без ущерба качества продукта // Сб. Изобретений и рац. предложений ШедА." СПб. 1998.- Выл. 29.- С. 23.

8. Способ гегенерацц*« ьаточ:"« ргетзоров о? кркстадзшгциа •эмткзола // Об. изобретений я рац. предлсжзнп:" Г-МедА.- СИ. 1S98.- вып. 29.- С. 24.

G. Способ определения примесей в дивдаадкг\ЯЕО // CS. изобретений и ргц. предложений К'гдА.- СПб. 19S3.- Вып. 29.- С. 30-40. (Соавт.: Токчия А.Б»>

*10. Способ выделения оснований яатизола из г»:дрочдэряда // Сб. изобретений и рац. предлохеки;": 5/едА.- СПб. 1533.- Зьтл. 29.-С. ¿0. • (Соавт.: Томчин A.B.)

11. Разработка технс£ог:г-1 субстанции ачтипшокснческого препарата актиаола // Ст materia nsdica к созремрака кедкцшяси технс>.эг«им / Материалу Всероссийской научной конференция.- СПб., 1993,- С.105.

12. Разработка иетодоз анализа антигипоксанта амткзола // ■От materia medica к современным медицинским технологиям / Материалы Всероссийской научной кокференцк:.- СПб., 19SS.- С. 106.

.13. Статистическое исследование реакции получения г-амтзди-ноткойочезшш // От materia medica к современным медицински»,i технологиям / Материалы Всероссийской. научной иовферепции.- СПб., 1998.- С.107.(Соазт. : Okobhtlh c.b., Смирноз В.а.)

14. Доклияичёсгзое исследование новей лекарственной фор!.-, антигипоксанто. амткзола // От materia medica к современным медицинским технологиям ' Материала Всероссийской научной конференции.- СПб. , 1998.- С. 160. (Соавт.: Ожрнов A.B., Криворучко Б.И., Шустов Е.Б.)

15. Разработка новой лекарственной формы антиппгаксического препарата ачтизола // От materíá ir.edica к современным медицинским технологиям / Материалы Всероссийской научной конференции.- СПб., 1998.- С.198, (Соавт.: Этингоза H.H., Мунжукова UJÍ., Смирнов A.B. '-.и др.)

Быраг^о глубокую признательность коллективам лаборатории готовых лекарственных средств НИТИАО, СКТБ "Технолог", а также мою.! коллегам и друзьям, оказаваим огромную поддержу.