Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фармакодинамическая характеристика утеротропной активности производных гамма-аминомаслыной кислоты и бензодиазепина

и <3, о.

ВСЕСОЮЗНЫЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР ПО БЕЗОПАСНОСТИ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ

На правах рукописи

СИЗОВ Павел Иванович

ФАРМА КОД И НАМИ Ч ЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА УТЕРОТРОПНОЙ АКТИВНОСТИ ПРОИЗВОДНЫХ ГАММА-АМИ НОМАСЛЯ НОЙ КИСЛОТЫ И БЕНЗОДИАЗЕПИНА

14.00.25 — фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Купавна — 1992

Работа выполнена в Смоленском государственном медицинском институте.

Научные консультанты:

Академик Российской АМН, лауреат Государственной премии доктор медицинских наук профессор П. В. Сергеев.

• Руководитель лаборатории физиологии НИЦ по охране здоровья матери и ребенка доктор медицинских наук профессор В. Г. Филимонов. .

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук профессор Э. А. Рудзит.

Доктор медицинских наук профессор Б. И. Любимов.

Доктор медицинских наук А. М. Абубакирова.

Ведущая с анизация—Московский медицинский стоматологический институт.

Защита состоится «_»_1992 года в_часов на заседании специализированного Совета Д 098.01.02 при Всесоюзном научном центре по безопасности биологически активных веществ по адресу: 142450, Московская обл., Ногинский р-н, пос. Старая Купавна, ул. Ки|юва, 23.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНЦ БАВ.

Автореферат разослан о^СйгЛрдЯ» 1992 года.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат биологических наук Т. Н. РОБАКИДЗЕ

, \ >;НЗ (

'-Л А*?-Л

SrBiÄ ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Особой проблемой акушерства остается нтенатальная охрана плода при таких осложнениях, как угроза евынашивания беременности. Частота невынашивания колеблется т 10 до 25% и не имеет тенденции к снижению (В, И. Кулаков и эавт., 1990). Недонашивание значительно повышает уровень пери-атальной заболеваемости и смертности, оказывает отрицательное лияние на рождаемость, развитие недоношенных детей и репро-уктивную функцию женщины (Л. Е. Муращко, Н. А. Федоров, 1990; L И. Кулаков, В. М. Сидельникова, 1991). На долю недоношенных етей приходится до 50% случаев мертворождений. В результате едонашивания дети с малой массой погибают в 64,7% случаев Г. М. Савельева и соавт., 1989).

Несмотря на применение в акушерско-гинекологической практике 1армакологических токолитиков, а также использование немедика-ентозных методов (Т. П. Зефирова, 1985; Г. М. Воронцова, 1987; . И. Елесина, 1987; А. Ф. Жаркин, Н. А. Жаркин, 1988), некоторые иды невынашивания и недонашивания беременности трудно подаются лечению. В 80-е годы в отдельных странах отмечен рост исла преждевременных родов (В. М. Сидельникова, Е. А. Чер-уха, 1984).

Несовершенство современных токолитиков можно объяснить сле-ующими обстоятельствами:

1. Применяемые фармакологические токолитики не всегда яв-яются средствами обоснованной этиопатогенетической терапии евынашивания и недонашивания беременности. Нередко поэтому ни оказываются неэффективными.

2. Современные медикаментозные утеролитики небезопасны, [х недостатком являются побочные эффекты, отрицательное дей-гвие на организм матери и плода.

3. Выбор эффективных и безопасных токолитиков ограничен, тому же они закупаются за рубежом.

В связи с изложенным вполне понятна необходимость поиска олее активных и безопасных для матери и плода отечественных проекторов беременности, изыскание средств обоснованной этиопатоге-етической профилактики и лечения недонашивания беременности.

Нами осуществлен поиск утеролитиков среди веществ, активи-ующих ГАМК-ергическую систему. Теоретической предпосылкой ля такого исследования послужили данные литературы о роли змма-аминомасляной кислоты (ГАМК) в центральной регуляции епродуктивной функции (Grandison, 1981; Brown, Martin, 1984; acagni et al, 1986). Кроме того, имеются сообщения о приме-гнии седуксена в акушерской практике (М. А. Петров-Маслаков,

В. В. Абрамченко, 1977; В. В. Абрамченко и соавт., 1984), об изуч( нии его эксперименте (А. Н. Кудрин и соавт., 1978, 1979).

Опираясь на данные литературы об участии ГАМК в центральнс регуляции репродуктивной функции, мы построили рабочую гипот зу, согласно которой одним из факторов риска невынашивания недонашивания беременности является дефицит ГАМК в организм При ГАМК-дефицитных формах невынашивания ГАМК-ергичесю вещества могли бы быть средствами обоснованной этиопатоген тической терапии. Однако доклинические исследования утер« тропных свойств ГАМК-ергических веществ до сих пор не npi ведены. Не изучена роль ГАМК-ергической системы в перифер] ческой регуляции сократительной функции матки. Не исследован ГАМК-рецепторные системы миометрия человека и млекопитаюии и их роль как возможных мишеней селективного Действия ГАМК-е] гических средств на сократительную деятельность матки. В литер; туре мы не встретили сведений о применении ГАМК-ергичесм веществ для профилактики и лечения невынашивания и недон; шивания беременности. Согласно данным исследователей-клин] цистов (Г. С. Минасова, Д. А. Шехонина, 1983; Н. Т. Гудакова соавт., 1984; С. Д. Булиенко, П. И. Фогел, 1985; Г. С. Кулик, 198; В. М. Сидельникова, 1986; В. И. Алипов, 1986; Л. А. Козлов и соавт 1987; В. И. Кулаков и соавт., 1990; Andersson, 1982; Arabi: Ruttgers, 1986; Eggleston, 1986), в комплексной терапии невынаш! вания применяются седативные средства, гормональные препарат! бета-2-адреномиметики, ингибиторы синтеза простагландинов, эт; нол, антагонисты кальция, ингибиторы фосфодиэстеразы.

Приведенные данные показывают, что ГАМК-ергические В' щества в работах авторов не встречаются. До сих пор отсутствуй теоретические и экспериментальные обоснования для клиническг испытаний ГАМК-ергических средств - в качестве потенциальнь протекторов беременнрсти.

Имеются основания предполагать, что выбор направления noncF эффективных и безопасных гравидопротекторов среди ГАМК-ерп ческих веществ является перспективным. Эти предположения баз! руются на следующих аргументах.

1. Известно, что гамма-аминомасляная кислота являемся ochoi ным нейромедиатором торможения в центральной (К. С. Раевски: В. П. Георгиев, 1986; П. В. Сергеев, Н. Л. Шимановский, 198' Fagg, Foster, 1983) и периферической (Jessen et al., 1983; Kerr, On| 1984; Erdö, 1985) нервной системе. На основе ГАМК и модификаци ее молекулы в нашей стране и за рубежом созданы эффективные л< карственные средства, получившие название ГАМК-ергически (К- С. Раевский, 1981, 1984). ГАМК-ергические вещества делят н ГАМК-позитивные (ГАМК-миметики, агонисты ГАМК) и ГАМК-н< гативные или антагонисты ГАМК (Р- У- Островская, 1977; Anderw Johnston, 1979). К ГАМК-положительным веществам по механизм тормозного действия относят также производные бензодиазепин (Г. И. Ковалев, А. Н. Харламов, 1982; И. В. Комиссаров, 1981 П. В. Сергеев, Н. Л. Шимановский, 1986, 1987). Учитывая, чт

'АМК-система на уровне гипоталамуса и гипофиза контролирует екрецию гонадотропных гормонов, можно ожидать, что ГАМК-озитивные вещества могут быть источником для разработки потен-иальных гравидопротекторов.

2. Лекарственные средства, полученные на основе эндогенных иологически активных веществ (БАВ), отличаются малой токсич-остью (М. Д. Машковский, 1982).

3. ГАМК-положительные вещества могут быть средствами обо-нованной патогенетической профилактики и терапии при угрозе евынашивания и недонашивания беременности на почве ГАМК-де-1ицитных состояний.

Цель работы: поиск новой группы утеролитиков среди веществ, ктивирующих ГАМК-ергическую систему; изыскание активных и езопасных потенциальных протекторов беременности ГАМК-ерги-еского механизма действия.

Настоящая работа является плановой. Она входит в план научно-сследовательской работы Смоленского медицинского института (государственный регистрационный № 01.820.070.639). Тема диссер-ации утверждена на Всесоюзной Проблемной комиссии «Фармако-огия обмена веществ» при научном Совете по фармакологии и ^армации АМН СССР 23 сентября 1987 года в г. Душанбе с изме-ением названия.

Основные задачи исследования. В соответствии с поставленной елью предусматривалось решение следующих задач:

1. Совершенствовать методическую систему доклинического нс-гедования утеротропных свойств фармакологических средств.

2. Исследовать новый вид биологической активности — утеро-зопную активность —у ГАМК-ергических веществ, применяемых а практике по разным показаниям.

3. Исследовать периферические ГАМК-бензодиазепиновые ре-зпторные системы миометрия человека и некоторых видов жи-зтных.

4. Изучить молекулярный механизм специфического утеротроп-эго действия наиболее активных производных ГАМК и бензодиазе-1на (БД).

5. Исследовать действие наиболее активных ГАМК-положитель-эгх веществ на возможные утеростимулирующие эффекты эндо-^нных биологически активных веществ: дофамина, серотонина, эрадреналина, ацетилхолина, простагландина F_2c¡, окситоцина.

6. Изучить эмбриотоксические свойства наиболее перспективных юизводных ГАМК и БД в соответствии с требованиями Фармко-чтета СССР от 1986 года.

7. По результатам исследований утеро- и фетотропных свойств (юрмить методические рекомендации для клинических испытаний шболее активных и безопасных препаратов по новым показаниям в 1честве потенциальных гравидопротекторов.

Научная новизна работы. 1. Впервые у представителей ГАМК-по-»жительных веществ выявлен новый вид биологической актив->сти — специфическое утеротропное действие. Установлено, что \МК, фенибут и феназепам оказывают разнонаправленное дозо-

зависимое действие на сократительную активность матки, что сви детельствует о селективном взаимодействии ГАМК-позитивных ве ществ с разными популяциями ГАМК-рецепторов в зависимост от величины концентрации.

2. С помощью радиолигандного метода с применением 14С-ГАМ1 и 3Н-флунитразепама и фармакологического анализа с использс ванием специфических агонистов и антагонистов ГАМК-рецепторо впервые в изолированном миометрии человека, кролика и крыс] идентифицированы ГАМК-БД-рецепторные комплексы (ГАМКд-tof мозные рецепторы), выявлены тормозные ГАМКв-рецепторы и нал!-чие эндогенной ГАМК, представляющие собой совокупную ГАМК ергическую систему миометрия.

3. Впервые установлено, что аффинность ГАМК-рецепторов мис метрия к меченой ГАМК у крыс изменяется в зависимости с периода полового состояния и срока беременности. У животных ранние сроки беременности сродство ГАМК-рецепторов миометрия радиоактивному лиганду ниже, а в поздние сроки беременност выше, чем у небеременных. Это свидетельствует о том, что ГАМК-р< цепторная система миометрия принимает участие в регуляци периферических механизмов сократительной функции матки в прс цессе развития беременности.

4. Впервые показано, что ГАМКа- и ГАМКв-рецепторы миоме' рия являются мишенями для специфического связывания с ГАМЬ ергическими веществами и опосредуют механизм избирательно1 действия ГАМК-ергических веществ на сократительную активное! матки. Фенибут в дозах 50 и 100 мг/кг тормозит изометрическу сократительную активность матки и это действие реализуете через тормозные ГАМКв-гетерорецепторы миометрия. Феназепам дозе 2,5 мг/кг угнетает вызванные сокращения матки через то] мозные ГАМК-БД-рецепторные комплексы миометрия путем усил> ния тормозного действия эндогенной ГАМК.

Фенибут в дозе 25 мг/кг, феназепам в дозе 1 мг/кг активирук сократительную деятельность матки, по-видимому, через пресинапт! ческие ГАМК-БД-рецепторные комплексы (ГАМКа-активирующ! рецепторы) путем стимуляции высвобождения нейромедиаторо

5. Как показали наши эксперименты, ГАМК и фенибут поте цируют специфическое связывание бензодиазепинов плазматич сними мембранами миометрия. Комбинированное применение фен бута с феназепамом усиливает утеролитический эффект вплоть / полного прекращения сокращений миометрия.

6. Впервые экспериментально показана способность ГАМК, ф нибута и феназепама оказывать антагонистическое действие i утеростимулирующие эффекты эндогенных БАВ дофамина, серот нина, норадреналина, ацетилхолина, простагландина F_2a, оке тоцина.

7. Исследования эмбриотоксических свойств фенибута, пров денные впервые, показали, что он в разных дозах (25,50 150 мг/кг) и при разных путях введения в организм беременш животных в плодный период не оказывает отрицательного влияния ;

рост и развитие плода. Феназепам в дозе 3 мг/кг также не обладает повреждающим действием на плод. Седуксен в дозах 5 и 2,5 мг/кг оказывает фетотоксический эффект.

Теоретическая значимость работы. Теоретически и экспериментально обосновано новое перспективное направление поиска эффективных и безопасных потенциальных протекторов беременности в группе ГАМК-ергических веществ. В матке человека и некоторых видов животных выявлено периферическое звено ГАМК-ергической регуляции сократительной функции матки и развития беременности. Это дает возможность наметить новые подходы к пониманию патогенеза повышенной возбудимости и сократительной активности матки и к разработке методов обоснованной патогенетической терапии некоторых форм невынашивания беременности.

Практическая ценность работы. Из девяти исследованных ГАМК-гргических веществ выявлены производное ГАМК фенибут и производное БД феназепам, обладающие выраженными утеродеприми-эующими свойствами. По результатам экспериментальных исследований составлена «Инструкция к применению фенибута и феназе-1ама по новым показаниям в качестве гравидопротекторов», которая представлена в Фармакологический комитет для получения раз-эешения на клинические испытания фенибута и феназепама по ювым показаниям. Фенибут в дозах 0,5—0,75 и феназепам в юзе 0,001 рекомендуется апробировать при угрозе прерывания бе->еменности во II и III триместрах.

В научно-исследовательской практике рекомендуется исполь-ование усовершенствованного метода бароутерографии как модели или изучения действия фармакологических средств на изометри-ескую сократительную активность матки.

В учебном процессе рекомендуется включить в программу лекций : практических занятий по теме «Вещества, регулирующие сокращения матки» данные о ГАМК-ергической регуляции механизмов ократительной функции матки при развитии беременности.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Усовершенствована методическая система доклинического ис-ледования утеротропных свойств фармакологических средств как истема поиска потенциальных протекторов беременности. Пред-агается модифицированный метод бароутерографии как модель для зучения действия лекарственных веществ на изометрическую плодоизгоняющую) сократительную активность матки.

2. Предлагается новое перспективное направление поиска потен-иальных протекторов беременности в группе веществ, избирательно ктивирующих ГАМК-БД-рецепторную систему.

3. Среди девяти ГАМК-позитивных веществ выявлены ГАМК-ми-етик фенибут и агонист БД феназепам, обладающие физиологи-;ским ГАМК-ергическим механизмом торможения сократительной ункции матки. Наиболее выраженное утеролитическое действие 1лоть до полного прекращения сокращений матки наступает при

комбинированном применении агониста ГАМК фенибута и агониста БД феназепама в результате потенцирования фенибутом специфического связывания феназепама и суммации тормозного эффекта препаратов.

4. В миометрии человека, кролика и крысы установлено наличие лигандо-ГАМК-БД-рецепторной системы, играющей роль в периферической регуляции механизмов сократительной функции матки в процессе развития беременности. ГАМКа- и ГАМКб-рецепторы миометрия опосредуют механизм специфического действия ГАМК, фенибута и феназепама на сокращения матки в зависимости от дозы.

5. Установлен функциональный антагонизм ГАМК, фенибута, феназепама при действии на утероиндуцирующие эффекты эндогенных БАВ дофамина, серотонина, норадреналина, ацетилхолина, простагландина Р_2а, окситоцина.

6. Фенибут и феназепам не обладают эмбриотоксическим действием. Седуксен вызывает выраженный утеродепримирующий эффект, однако оказывает отрицательное действие на развитие плода.

7. Отечественные транквилизаторы фенибут и феназепам, обладающие ГАМК-ергическим механизмом торможения сокращений матки, оказывающие антагонистическое влияние на утеростимули-рующие эффекты эндогенных БАВ нейромедиаторов, простагландина Р_2а, окситоцина и не вызывающие фетотоксического действия являются перспективными протекторами беременности.

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались ш заседаниях Смоленского научного общества фармакологов, биоло гов, биохимиков, физиологов, патофизиологов, на ученом совете Смо ленского медицинского института в 1982, 1986, 1988 годах, 4-ол Всесоюзном съезде фармакологов (Ленинград, 1976), на Проблем ной комиссии по экспериментальной фармакологии при ЦМС Мин здрава РСФСР (Москва, 1981), 5-ом Всесоюзном съезде фарма кологов (Ереван, 1982), Всесоюзном симпозиуме «Фармакологи) производных гамма-аминомасляной кислоты» (Тарту, 1983), Все союзной Проблемной комиссии «Фармакология обмена веществ при научном Совете по фармакологии и фармации АМН ССС1 (Душанбе, 1987), 6-ом Всесоюзном съезде фармакологов (Ташкент 1988), на совместном заседании кафедр фармакологии, клиническо фармакологии, общей биологии, медицинской химии, нормально физиологии, патологической физиологии, акушерства и гинекологи Смоленского мединститута (11 октября 1991 года).

Объем и структура работы. Диссертация написана на 336 странь цах машинописного текста и состоит из введения, 8 глав, обсуждени результатов и выводов, включает 30 таблиц, 93 рисунка. Библиогрг фия представлена 246 отечественными и 169 зарубежными работам!

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

• Исследование выполнено на 264 половозрелых небеременных и Т беременных крольчихах массой от 2,5 до 4 кг, 30 небеременных и 17 беременных белых беспородных крысах массой 180—220 г, на >торых произведено 1449 экспериментов и обследовано 1706 плодов.

В работе изучены утеротропные свойства ГАМК, шести ее произ-адных и аналогов: натрия оксибутирата (ГОМК), фенибута, пика-илона, пантогама, пирацетама, натрия вальпроата и двух произ-)дных бензодиазепина: феназепама и седуксена (сибазона), при-еняемых в настоящее время в клинике по разным показаниям.

На первом этапе проводили скрининг утеротропных свойств ^МК-положительных веществ в опытах на изолированных отрезах матки кроликов и крыс по методу Магнус-Керера. Эксперименты -ой серии выполнены на 258 изолированных отрезках рогов матки 3 овариоэктомированных крольчих. Овариоэктомию производили по . М. Кабак (1968) с целью устранить фазы эстрального цикла и чияние половых гормонов яичников. Опыты выполняли также на юлированных отрезках 20 небеременных крольчих и 8 крыс в фазе 1эструса. Фаза диэструса при исследовании утеротропной актив-эсти препаратов предпочтительна как фаза относительного гормо-зльного покоя в половом цикле самок.

После возникновения спонтанных сокращений регистрировали оновую утерограмму. Необходимо отметить,-что при исследовании жратительной деятельности изолированных отрезков матки (в подменном к рычагу Энгельмана положении) регистрируются преимущественно сокращения продольного слоя миометрия, и утеро-1амма в большей степени отражает изотоническую сократительную сгивность рога матки.

Фармакологические препараты использовали в виде свежеприго->вленных растворов или пользовались ампульными растворами зепаратов. Феназепам растворяли в 96% спирте этиловом, так как шпульный 0,1% раствор феназепама на поливинилпирролидоне ока-1лся не пригоден для опытов in vitro. Контролем для спиртового зствора феназепама служил 96% спирт этиловый. Утеротропную сгивность препаратов оценивали путем определения пороговых ?йствующих концентраций веществ (М. Л. Беленький,' 1963). аждую концентрацию препаратов определяли на 6—10 отрезках атки разных животных. В качестве эталона для сравнения утеро-юпной активности использовали седуксен (диазепам) в виде офи--шального 0,5% раствора в ампулах (Гедеон Рихтер, Будапешт).

На 179 изолированных фрагментах 22 овариоэктомированных щ небеременных крольчих и 10 крыс в фазе диэструса изучали акже влияние ГАМК-позитивных веществ на утеростимулирующие

эффекты эндогенных БАВ дофамина, серотонина, норадреналиш ацетилхолина, простагландина F_2a. окситоцина.

На втором этапе осуществляли более подробное доклиническо изучение утеротропного действия наиболее активных препаратов опытах in vivo. Однако методы доклинического изучения поте1 циальных токолитиков на целостном организме разработаны недс статочно. По данным некоторых авторов, исследования в остро опыте под наркозом по методу Николаева — Субботина нарушаю физиологическую функцию матки (Г. П. Жвания, 1971; Т. В. Коту[ баш, 1978). Мы также использовали данную методику и отметил! что она не полностью адекватна задачам доклинического изучени потенциальных протекторов беременности. При подвешивании кул1 ти рога матки к рычагу при этой методике регистрируется преим^ щественно изотоническая сократительная активность рога матю Попытки некоторых авторов использовать методы изучения сократ! тельной деятельности матки на целостном животном в хроническо опыте окончились неудачей. Так, методика кожно-маточного мостик (Б. А. Вартапетов и соавт., 1953), метод маточной фистул (Э. И..Айропетьянц, Л. И. Лебедева, 1960) не нашли широкого npi менения из-за инфицирования и травматичности (Г. М. Пронин; 1968).

Для исследования утеротропных свойств фармакологически средств наиболее пригодны те методы, которые позволяют вест изучение на целостном животном в хроническом опыте без npi менения наркоза. Из таких методов известны электроутерограф) ческий (Г. М. Лисовская, и соавт., 1962; И. Д. Лановой, 1961 Г. П. Жвания, 1971; Г. В. Асмоловский, 1972; Као, Nishiyama, 1964 и метод внутренней баллонной утерографии (Г. М. Пронина, 196! Csapo, 1963). При использовании нами электроутерографическог метода было записано 260 ЭУГ. Кроме того, у 116 крольчих хирурп ческим путем производили комбинированное вживление в рог матк серебряных электродов и резинового баллончика. Синхронну регистрацию электро- и механоутерограммы осуществляли на ра; ных каналах лучевого миографа М4 «Medicor». Было записан 478 комбинированных электромеханоутерограмм. Для преобразовг ния колебаний давления в баллончике в электрические сигнал использовали специально сконструированную по нашему заказу т женером В. Н. Гладышевым приставку-баропреобразователь. Cpai нительная оценка показала ограниченность метода ЭУГ для целе исследований действия фармакологических средств на отдельнь компоненты сократительной активности матки.

По мнению В. Г. Филимонова (1972), совершенствование mi тодов исследования сократительной активности матки должно бьп связано с регистрацией внутриматочного давления. Такое направл* ние представляется более перспективным и для исследования утер* литических свойств фармакологических средств как потенциальнь токолитиков. Исходя из этого, мы усовершенствовали баллоннь метод. Оперативным путем в просвет рога матки крольчих вживляв резиновый баллончик длиной 1,5 см, соединенный с хлорвиниловс

рубкой диаметром просвета 2 мм. Резиновый баллончик вводили в юлость рога не через шейку, а через надсеченное отверстие в его юковой стенке. Это предупреждало «рождение» баллончика. Брюш-1ую полость зашивали. Трубку от баллончика проводили под кожей, юнец ее выводили на дорзальную поверхность животного.

Эксперименты начинали через 10 дней после операции. Во время шыта крольчиху помещали в специальную клетку длиной 35 см и ысотой 20 см, в которой она сидела в естественном состоянии без ;аркоза. Сокращения рога матки, сдавливая баллончик, вызывают инхронные колебания внутриматочного давления (ВМД). Для из-1ерения ВМД в методику мы ввели водный манометр, с помощью :оторого производили калибровку баропреобразователя. На ленте ернильнопишущего прибора производили одновременную запись ократительной активности рога матки и колебания ВМД в мм вод-!01 о столба, т. е. регистрировали бароутерограмму (БУГ). Схема ¡етода показана на рисунке 1. О тонусе миометрия судили по мини-[альному ВМД во время паузы. Силу маточных сокращений оце-ивали по максимальному ВМД на высоте сокращения. Учитывали астоту сокращений. ,

При бароутерографическом методе сократительная активность озникает в ответ на механическое растяжение баллончиком как родольного, так и кольцевого слоев стенки рога матки. Поэтому ароутерограмма отражает вызванную сократительную активность дновременно продольного и кольцевого слоев рога матки. Индуци-

2 3 4 5

I — специальная клетка с животным; 2 — водный манометр; 3 — воздушная капсула; 4 — баро-преобразователь; 5— чернильнолнжущий прибор; а — трубка; б — баллон; в — рог матки

и

рованная баллончиком сократительная активность матки прибли жается к изометрической (силовой) сократительной деятельности в< время родов (В. Г. Филимонов, 1973; Сзаро е1 а1, 1963). Таким обра зом, с помощью метода бароутерографии мы создавали модель дл$ изучения действия ГАМК-ергических веществ на изометрическук (плодоизгоняющую) сократительную активность матки. По нашем] мнению, модель индуцированной изометрической (а не спонтанной) сократительной активности с инородным телом в полости рог; матки в большей мере служит аналогией плодоизгоняющей дея тельности матки по сравнению с электроутерографическим методом Последний отражает спонтанную сократительную активность матки Метод бароутерографии как модель сократительной активности мат ки в изометрическом режиме более отвечает задачам поиска утеро литиков — потенциальных протекторов беременности. С его помощьк возможно получить информацию не только о хронотропном, но и о( инотропном влиянии препарата. БУГ-метод позволяет получить боле< точные данные о действии препарата непосредственно на компоненть сократительной деятельности матки: тоническое напряжение, силу I частоту маточных сокращений, дает возможность производить мате матическую обработку и сравнительный анализ утеротропного эф фекта. Метод бароутерографии позволяет проводить фармакоологи ческие исследования в хронических опытах как на небеременных так и на беременных животных. Наличие баллончика в одном роп не препятствовало наступлению у некоторых крольчих фазы эструса во время которой животных спаривали. Беременность наступал! во втором роге.

На модели изометрической сократительной активности матю на 46 небеременных в фазе диэструса или овариоэктомированны: крольчихах и на 12 крольчихах на 26—30-й день беременности изуча ли утеротропные свойства наиболее активных ГАМК-положительны: веществ фенибута, феназепама, седуксена. Было выполнено 90 экспе риментов. Препараты вводили внутривенно и внутрижелудочно разных экспериментальных дозах, в которых первые авторы изучал! транквилизирующие свойства фенибута и феназепама (Р. А. Хауни на, 1964; Ю. И. Вихляев, Т. А. Воронина, 1978). Мы изучал фенибут в дозах 100 мг/кг, 50 мг/кг и 25 мг/кг, феназепам — в до зах 2,5 мг/кг и 1 мг/кг, седуксен — в дозах 5 мг/кг и 2,5 мг/кг. Каж дую дозу препаратов испытывали на группе животных числеи ностью 6—8 особей. В контрольную группу входило 10—12 кроль чих. Животных контрольной группы подсоединяли к системе при боров, повышали ВМД до 90—100 мм водного столба (у неберемеь ных) или до 130—140 мм (у беременных) и регистрировали исхо,я ную БУГ непрерывно в течение 3-х часов. Подопытных животны подсоединяли к приборам вслед за внутривенным введением ил через 30 минут после внутрижелудочногог введения препаратг Как и в контроле, повышали ВМД и вели непрерывную регистрацш БУГ на протяжении 3-х часов. Полученные результаты обрабатывал с применением стандартной статистической программы на мини-ЭВ^ ДЗ-28.

На модели изометрической сократительной активности матки на 32 овариоэктомированных или небеременных в фазе диэструса крольчихах (73 опыта) было изучено также влияние на сокращения матки дофаминомиметика леводопы и действие на её утеростимулирующий эффект натрия оксибутирата.

На третьем этапе исследования изучали молекулярный механизм утеротропного действия ГАМК, фенибута, феназепама и седуксена с помощью радиолигандного метода. Совместные эксперименты выполнены с кмн А. С. Духаниным на кафедре молекулярной фармакологии и радиобиологии 2-го Московского мединститута под руководством академика АМН СССР, Лауреата Государственной премии профессора П. В. Сергеева. Исследовали специфическое связывание (СС) '^С-ГАМК и 3Н-флунитразепама с плазматическими мембранами (ПМ) гистологически неизменного миометрия небеременных женщин, полученного во время удаления миомы матки. Было выполнено 35 экспериментов. Кроме того, изучали СС 14С-ГАМК и 3Н-флунитразепама с ПМ миометрия небеременных крыс и крыс в первой половине (до 10 дней) и во второй половине (от 10 до 20 дней) беременности. Всего использовано 69 крыс. Для выделения специфического связывания 14С-ГАМК и 3Н-флу-нитразепама проводили инкубацию ПМ с мечеными лигандами в присутствии 200-кратного избытка немеченых ГАМК, бикукуллина и циазепама соответственно. Результаты анализировали по методу Скетчарда.

Наряду с радиолигандным методом, проводили фармакологический анализ рецепторного механизма действия ГАМК, фенибута, феназепама, седуксена с использованием специфического агониста ГАМКа-рецепторов (этилендиамин), специфического агониста ГАМКб-рецепторов (бшуюфен), специфического антагониста ГАМКа-рецепторов (бйкукуллин), блокатора хлорного канала ГАМК-БД-рецепторного комплекса (пикротоксин), ингибитора ферментативного биосинтеза эндогенной ГАМК (тиосемикарбазид), -шгибитора ферментативной деградации ГАМК (аминооксиуксусная <ислота). Анализ рецепторного механизма действия выполняли на изолированном миометрии 12 овариоэктомированных, 8 неберемен-4ых крольчих и 12 крыс в фазе диэструса (80 экспериментов). Исследования в прямых опытах на изолированном миометрии про-зодили с целью исключить центральное звено регуляции моторной функции матки, чтобы исследовать периферические ГАМК-БД-ре-геп горные системы миометрия и их роль в механизме действия ГАМК-положительных веществ.

На следующем (четвертом) этапе исследовали влияние наиболее активных утеролитиков фенибута, седуксена и феназепама на функциональное состояние материнского организма и рост и развитие плодов в соответствии с требованиями «Методических ука-$аний по изучению эмбриотоксического действия фармакологи-1еских веществ и влияния их на репродуктивную функцию», разработанных под руководством А. П. Дыбана и утвержденных Фармакологическим комитетом МЗ СССР 14 марта 1986 года. Совместные

эксперименты проведены с кбн Н. В. Стрельченко и кбн ведущим научным сотрудником Г. А. Шевелевой под руководством доктора меднаук профессора В. Г. Филимонова в лаборатории физиологии НИЦ по охране здоровья матери и ребенка Минздрава РСФСР.

Было проведено три серии экспериментов на белых беспородных беременных крысах массой 180—220 г. Самок-крыс на стадиях про-эструса и эструса подсаживали на ночь к самцам в отношении 2:1. Первый день беременности определяли по наличию сперматозоидов в вагинальных мазках. В развитии беременности у крыс различают: 1) доимплантационный период (1—7-й дни), 2) период органогенеза и плацентации (8—14-й дни) и 3) плодный период (15—19-й дни) — период фетогенеза (Б. И. Любимов и соавт., 1979, 1981; Н. М. Смольникова и соавт., 1982; Г. А. Шевелева и соавт., 1980, 1983).

В первой серии на 70 беременных крысах изучали влияние фени-бута и седуксена на функциональное состояние материнского организма и плодов при введении препаратов крысам в плодный период с 16-го по 20-й день беременности. Фенибут вводили ежедневно внутрибрюшинно в утеродепримирующей дозе 50 мг/кг (первая группа), седуксен — в дозе 5 мг/кг (вторая группа); комбинацию фенибута (50 мг/кг) с седуксеном в дозе 5 мг/кг (третья группа); сочетание фенибута в дозе 25 мг/кг с седуксеном в дозе 2,5 мг/кг (четвертая группа). В каждой подопытной группе находилось 6—7 беременных крыс. Животным контрольной группы внутрибрюшинно один раз в сутки вводили дистиллированную воду.

На 21-й день беременности крыс наркотизировали (3 мл 2,5% раствора тиопентал-натрия внутрибрюшинно). Проводили операцию наложения отводящих электродов на один из плодов для регистрации ЭКГ. У крыс, кроме ЭКГ, записывали дыхание. Регистрацию осуществляли на полиграфе М-150 (Япония). Фармакологический эффект препаратов на функциональное состояние беременных животных и плодов оценивали по изменениям показателей ЭКГ и дыхания до и во время проведения функциональных вентиляционны> проб (задержка дыхания у крыс на 60 секунд или вдыхание угле кислого газа 15 секунд).

Комплекс функциональных проб, разработанный в НИЦ по охране здоровья матери и ребенка МЗ РСФСР (В. Г. Филимонов, 1976 В. Г. Филимонов, В. С. Акиньшина, 1986, 1987), использовали для моделирования острой гипоксии в системе мать — плацента — плод С помощью функциональных проб оценивали влияние фенибута ^ седуксена на сопряженные компенсаторно-защитные реакции мате ринского организма и плода в условиях гипоксии. При анализ« ЭКГ до и при выполнении функциональных проб учитывали изме нения показателей: частоты сердечных сокращений (ЧСС), а такж( латентный период и продолжительность реакции кардиоритма в се кундах. Полученные результаты обрабатывали математически.

Во второй серии экспериментов на 77 беспородных беременны) крысах изучали влияние фенибута и седуксена на матерински организм и развитие плода. Препараты вводили ежедневно внутри брюшинно крысам в период фетогенеза с 16-го по 20-й день беремен ности в тех же дозах и комбинациях, как и в 1-й серии.

14

На 21-й день беременности после эвтаназии животных исследо-али эмбриональный материал. Было получено и обследовано 38 плодов. Определяли число желтых тел, число живых и мертвых лодов, гибель плодов до и после имплантации, общую эмбриональ-ую смертность, массу и размер плодов, плаценты, плацентарный оэффициент. Часть плодов фиксировали в жидкости Буэна и на ерийных макросрезах по методу Вильсона в модификации П. Дыбана и соавт. (1970) под бинокулярным микроскопом \БС-1 проводили определение возможных аномалий развития внут-енних органов. Другую часть плодов фиксировали в 96% этаноле и осле окраски ализарином красным исследовали состояние костной истемы плодов по методу Даусона (1926).

В третьей серии экспериментов изучали влияние фенибута и фена-епана и их комбинаций на материнский организм и рост и раз-итие плода при внутрижелудочном введении препаратов крысам в лодный период с 16-го по 20-й день беременности. Подопытным (ивотным (20 особей в группе) ежедневно в желудок вводили >енибут по 150 мг/кг в 2% крахмальном геле (первая группа) или )еназепам в дозе 3 мг/кг (вторая группа), или комбинацию фени-ута (150 мг/кг) с феназепамом в дозе 3 мг/кг (третья группа). Бе-еменным крысам контрольной группы (20 животных) в желудок дин раз в сутки вводили 2% коллоидный раствор крахмала.

На 21-й день беременности после эвтаназии животных изучали мбриональный материал (868 плодов и плацент), состояние внутрен-их органов по А. П. Дыбану и костной системы по Даусону. Поученные результаты по исследованию эмбрионального материала брабатывали математически с использованием критерия Стьюдента. 'езультаты исследований влияния препаратов на внутренние органы костной системы плодов анализировали в процентах. На заключительном этапе по результатам исследований утеро- и )етотропных свойств ГАМК-положительных веществ предусматри-алось оформить методические рекомендации на получение раз-ешения клинических испытаний наиболее перспективных и безо-асных препаратов по новым показаниям в качестве потенциальных ротекторов беременности.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

На первом этапе исследовали избирательное действие ГАМК-оложительных веществ на сократительную активность изолирован-ых отрезков рогов матки кроликов и крыс. Результаты исследований теротропных свойств препаратов представлены в таблицах 1 и 2.

Результаты опытов in vitro показали, что ГАМК, производные АМК и БД в определенных концентрациях тормозят сокращения золированных отрезков матки животных. Наиболее выраженной тероингибирующей активностью при действии на сокращения золированных отрезков матки кроликов и крыс обладают в порядке бывания седуксен (3,5• 10-5 М), феназепам (Ю-5 М), фенибут

Таблица 1. Пороговые утеротропные концентрации ГАМК, ее производных и аналогов

Препараты Пороговые концентрации

Утеродепримируюише Утеростимулирующие

ГАМК 4 • 10 -2 М 4- 10~3—10~2 М

Натрия оксибутират 1,6-Ю-2 м 8- Ю-4—3,3- Ю-3 М

Фенибут Ю-4—1.8-10-1 М 4,6- I0-4—9,2-Ю-4 М

Пикамилон 1,7• Ю-2 М 8,7- Ю-4—4,3• Ю""1 М

Пантогам 8-Ю-3 М 4-10~4—8- Ю-4 М

Пирацетам 7-Ю-2 М 2,8- 10~J—7- Ю-3 М

Натрия вальпроат 2,4-Ю-2 М 2,4• 10_!—6- 10-J М

Таблица 2. Пороговые утеротропные концентрации производных бензодиазепина

Препараты Пороговые концентрации

Утеродепримирующие Утеростимулирующие

Феназепам, растворенный в 96% спирте этиловом Контроль: спирт этиловый Седуксен 1р-5— 1,2- 10~4М 4—5 мл на 100 мл раствора Рингера — Локка 3,5- Ю-5 — 7- 10~5М 3-Ю-5 — 6-10~5М 2—3 мл на 100 мл раство ра Рингера — Локка • 7-10~°— 1,4- 10-5М

(Ю-4 М), пантогам (8-10~3 М). При снижении концентраци ГАМК — положительные вещества оказывают противоположно^ утеростимулирующее действие.

Таким образом, методика исследования утеротропных свойст фармакологических препаратов в опытах in vitro, при всей свое простоте, позволяет определить прямое избирательное действие в< щества на сократительную активность миометрия. Низкая утере тропная активность ГАМК, по-видимому, объясняется плохой прс ницаемостню через клеточные мембраны. Однако ГАМК, как и вс исследованные ГАМК-позитивные вещества, оказывает дозозавиы мое разнонаправленное действие на сокращения изолированны отрезков матки животных.

Комбинированное воздействие производного ГАМК фенибут совместно с производными БД феназепамом или седуксеном в mi нимальных действующих концентрациях приводит к усилени] утероингибирующего действия до полного прекращения сокращени изолированного миометрия.

На втором этапе препараты с наибольшей утеродепримирующе активностью фенибут и феназепам были более подробно изучены условиях целостного организма в хронических опытах на усовер шенствованной модели изометрической сократительной активност матки небеременных и беременных крольчих. Полученные резул!

таты при внутривенном введении препаратов представлены в таблицах 3 и 4.

Как показали результаты опытов in vivo на небеременных крольчихах, фенибут в дозе 50 мг/кг вызвал достоверное уменьшение силы изометрических сокращений матки через 1 час (Р<0,002), через 2 часа (Р<0,05) и через 3 часа (Р<0,05) после введения. Под влиянием фенибута в этой дозе наступило также урежение сокращений через 2 часа (Р<0,05) и через 3 часа (Р<0,01). В дозе 100 мг/кг фенибут вызывал прекращение сокращений матки. Вместе а этим у крольчих отмечалось расслабление скелетной мускулатуры. Феназепам в дозе 2,5 мг/кг вызвйл снижение тонического

Таблица 3. Влияние фенибута в дозе 50 мг/кг, феназелама в дозе 2,5 мг/кг и седуксена в дозе 5 мг/кг на изометрическую сократительную активность матки небеременных крольчих (М±м)

Время 8 ми - ВМД е мм водного столба

Препараты нутах от момента введения • Минимальное Максимальное Интервалы (частота) сокращений матки в секундах

Фенибут 50 мг/кг 60 120 180 85,0 + 2,35 80,7+2,74 77,8+2,59 102,8 + 3,08* 97,8 + 3,70* 90,7 ±3,98* 65,2 + 3,88 68,5 + 3,27* 67,0±3,10*

Феназепам 2,5 мг/кг 60 120 180 80,7 + 1,40* 76,4+ 1,54 72,1 + 1,09 105,0 + 2,88* 96,4 ±2,55* 91,4 ±2,55* 60.7 + 3,06 68.8 + 2,57* 72,2 + 3,37

Седуксен 5 мг/кг 60 120 180 86,4 + 2,55 82,8 + 4,38 81,4 + 4,36 110,7 + 2,98 103,5 + 3,05 97,8 ±3,08 71,1+2,68* 70,7 + 3,54* 75,5 + 2,89

Контроль 60 120 180 87,0± 1,95 82,0 + 2,38 76,0+2,69 116,0 + 2,04 108,0 ±2,50 101,5 + 3,33 58,5 + 2,04 60,1 +2,24 77,3 + 2,50

Примечание: * — статистически достоверное отличие от контроля.

напряжения миометрия через 1 час (РсО,05), достоверное угнетение силы индуцированных сокращений матки в течение 3-х часов (Р<0,05) и существенное замедление сокращений через 2 часа (Р<0,02) после введения. Седуксен в дозе 5 мг/кг у небеременных крольчих оказал выраженное замедление частоты сокращений рога матки через 1 час (Р<0,002) и через 2 часа (Р<0,02). Полученные данные показали, что в опытах in vivo у небеременных крольчих наиболее выраженное утероингибирующее действие оказал феназепам.

Таблица 4. Действие фенибута в дозе 25 мг/кг, феназепама в дозе 1 мг/кг и седуксена в дозе 2,5 мг/кг на изометрическую сократительную активность матки небеременных крольчих (М±м)

Вре- ВМД в мм водного столба

Препараты минутах от момента введения Минимальное Максимальное Интервалы (частота) сокращений матки в секундах

Фенибут 25 мг/кг 60 120 180 87,5 + 2,48 83,5 + 2,27 82.1 +2,85 112,1 +3,88 107.8 + 4,05 106.4 ±4.67 56,8 ±2,7 58>2 + 2.5 65,1 ±2,17*

Феназепам 1 мг/кг 60 120 180 80,0 + 3,54 87,2 ±3,66 86,0 ±3,88 130,0 + 5,88 121,6 + 7,88 115,2 ±6.90 58,2 ±2,42 60,7 ±3,06 63,4 ±2,49

Седуксен 2,5 мг/кг 60 120 180 86,4 ±1,94 ' 85,0 ±1,66 81,4 ± 1,54 1 i 0,0 ±4,40 107,1 +4,05 !00,0±2,35 52,5±2,42 49,2 + 2,50* 57.1 ±2,31 *

Контроль 60 120 180 87,0+ 1,95 82,0+2,38 76,0 + 2,69 116,0 + 2,04 108,0 + 2,50 101,5 + 3,33 58,5 + 2,04 60,1 +2,24 77,3 ±1,80

Примечание: * — статистически достоверное отличие от контроля.

У беременных на 26—30-й день крольчих фенибут в дозе 50 мг/кг и феназепам в дозе 2,5 мг/кг также оказали угнетающее действие на схваткообразные сокращения матки до их полного прекращения.

В меньших экспериментальных дозах фенибут (25 мг/кг) через 3 часа (Р<0,001), феназепам (1 мг/кг) через 3 часа и седуксен (2,5 мг/кг) через 2 часа (Р<0,01) и через 3 часа (Р<0,001) после внутривенного введения достоверно учащали сокращения матки кроликов.

При комбинированном применении агониста ГАМК фенибута (25 мг/кг) с.агонистом БД феназепамом (1 кг/кг) в опытах на целостном животном наступало усиление утеролитического действия.

Таким образом, результаты экспериментов на модели изометрической сократительной активности матки в хронических опытах на крольчихах подтвердили данные, полученные в опытах на изолированных отрезках матки. ГАМК-положительные вещества как в опытах in vitro, так и in vivo оказывают дозозависимое модулирующее действие на сокращения матки животных: в определенных концентрациях и дозах ГАМК, фенибут, феназепам, седуксен тормозят, а при уменьшении концентраций и доз активируют сокращения матки. Реверсивное утеротропное действие ГАМК-положительных веществ в зависимости от величины концентрации и дозы свидетельствует об их специфическом взаимодействии с разными популяциями периферических ГАМК-БД-рецепторов миометрия. 18

На третьем этапе исследовали молекулярный механизм утеро-ропного действия ГАМК, фенибута, феназепама, седуксена. С этой ,елью изучали периферические ГАМК-БД-рецепторные системы мио-[етрия. С помощью радиолигандного метода исследовали специфи-еское связывание (СС) лиганда ГАМК-рецепторов 14С-ГАМК и ли-анда бензодиазепиновых (БД)-рецепторов 3Н-флунитразепама с [лазматическими мембранами (Г1М) миометрия небеременных жен-цин. Результаты экспериментов представлены в координатах ^кетчарда на рисунках 2 и 3. Равновесная константа диссоциации [иганд-рецепторного связывания (Кд) НС-ГАМК составила 04±12 нМ. Связывающая емкость рецепторов равна 14 фмоль ia 1 мг белка. Конкурентный анализ СС |4СТАМК ПМ миометрия I присутствии немеченой ГАМК и специфического антагониста "АМКа-рецепторов бикукуллина показал, что они в равной степени ¡ытесняют меченую ГАМК из связи с рецептором. Полученные ре-|ультаты свидетельствуют о наличии на ПМ миометрия человека гериферических бикукуллинчувствительных ГАМК-рецепторов.

При изучении СС 3Н-флунитразепама установлено, что Кд равна !2,5±5 нМ. Максимальная концентрация мест связывания мече-юго бензодиазепина (В шах) составила 17 фмоль/мг белка. Кон-сурентный анализ СС Н-флунитразепама в присутствии немеченого шазепама (седуксена) показал, что последний вытесняет меченый зензодиазепин из связи с рецептором. Эти данные свидетельствуют ) присутствии на ПМ миометрия человека также БД-участков СС.

Изучали возможность сопряжения ГАМК- и БД-рецепторов. При :овместном применении мС-ГАМК и 3Н-флунитразепама установлено достоверное уменьшение их констант диссоциации до э0±7 нМ и 11 ±4 нМ соответственно. Полученные данные говорят э сопряжении участков СС ГАМК и бензодиазепинов, свидетельствуют о наличии в миометрии человека сопряженных ГАМК-БД-ре-цепторных комплексов (рис. 2 и 3). В литературе сведений о сопряженных ГАМК-БД-рецепторных комплексов миометрия человека мы не сотретили.

В серии экспериментов на> животнв!х исследовали в сравнительном аспекте СС 14С-ГАМК и Н-флунитразепама с ПМ миометрия у гебеременных крыс в фазе диэструса и у крыс в первой половине (до 10 дней) и во второй половине (от 10 до 20 дней) беременности. Результаты опытов показали, что Кд СС 14С-ГАМК равна у небеременных 83 ±4 нМ, у беременных в первой половине — i 10±9 нМ, у беременных во второй половине — 64±6 нМ. Полученные результаты подтверждают данные авторов (Erdo, 1984; Amenta et al., 1988) о наличии в матке крысы и кролика ГАМК- и мусцимол-связывающих участков. Однако наши исследования решали более широкие задачи. Полученные данные показывают,' что аффинитет ГАМК-рецепторов миометрия у крыс зависит от периода полового состояния и срока беременности. Аффинность ГАМК-рецепторов миометрия у крыс в первой половине ниже, а во второй половине беременности выше, чем у небеременных животных (рис. 4). Это свидетельствует о том, что ГАМК-рецепторная система мио-

РиС. 2. Специфическое связывание Рис. 3. Специфическое связыванш

'■"С-ГАМК плазматическими мембрана- 3Н-флунитразепама плазматически!«

ми миометрия в отсутствие (I) и в при- мембранами миометрия в отсутствт

сутствии (И) флунитразепама. (III) и в присутствии (IV) ГАМК

Па оси абсцисс — количества связанной По оси абсцисс — количество связанного 3Н-флу

ИС-ГАМК фмоль/мг белка нитразепама.

По оси ординат — отношение количества связанной мСТАМК к концентрации свободной мСТАМК фмоль мг белка ~'/нМ

метрия принимает участие в регуляции периферических механизмоЕ сократительной функции матки и развития беременности.

Мы исследовали также БД-рецепторы- миометрия крыс. Константа диссоциации 3Н-флунитразепама у небеременных крыс равна 18±4 нМ, у беременных в первой половине — 22±3 нМ, у беременных во второй половине—-23±4 нМ. Эти данные указывают на существование на ПМ миометрия крыс также участков СС бензо-диазепинов, обладающих высоким аффинитетом. Однако аффинность БД-рецепторов миометрия оказалась примерно одинаковой во все периоды полового состояния и сроки беременности животных. Изучали возможность сопряжения выявленных ГАМК- и БД-рецепторов миометрия крыс. Исследовали СС 3Н-флунитразепама с ПМ миометрия крыс в присутствии и отсутствии ГАМК. Полученные результата,! показали, что в присутствии ГАМК Кд СС ^-флунитразепама с ПМ миометрия уменьшилась примерно в 2 раза у животных во все периоды и сроки беременности. Это указывает на наличие на ПМ крыс сопряженных ГАМК-БД-рецепторных комплексов. 14С-ГАМК повышает степень сопряжения и аффинитет ГАМК-БД-рецепторных комплексов миометрия к ГАМК и бензодиазепину. Характер сродства ГАМК-БД-рецепторных комплексов миометрия к лигандам определяется периодом полового состояния и. сроком беременности (рис. 4). Наибольшей чувствительностью к лигандам обладают ГАМК-БД-рецепторные комплексы миометрия у крыс во второй половине беременности.

0,05

Далее исследовали специфическую тропность фенибута к ГАМК-рецепторам. В серии экспериментов на небеременных и беременных крысах изучали СС'4С-ГАМК ПМ миометрия в отсутствии и присутствии фенибута. Полученные результаты показали, что фенибут дозозависимо вытесняет |4С-ГАМК из связи с рецептором. Концентрация фенибута, при которой наблюдается уменьшение ГАМК. на 50% (1С5о), составила 5-10~6 М. Это свидетельствует о высокой конкурентоспособности фенибута взаимодействовать с ГАМК-рецепторами. Следовательно, ГАМК-рецепторы обладают высоким сродством к фенибуту. Наиболее «чувствительны» к воздействию фенибута ГАМК-рецепторы миометрия крыс во второй половине беременности.

Было изучено влияние фенибута на СС п-флунитразепама ПМ миометрия небеременных и беременных крыс. Полученные результаты представлены в таблице 5. Из таблицы видно, что показатель 1 С50 СС3Н-флунитразе-пама с ПМ миометрия в присутствии фенибута существенно уменьшился у небеременных и беременных крыс. Полученные данные свидетельствуют о том, что фенибут повышает тропность бензодиазе-пина к БД-рецепторам миометрия. Это служит фармакодинамиче-ским обоснованием для рекомендации комбинированного применения фенибута с феназепамом или седуксеном.

Радиолигандные исследования ГАМК-БД-рецепторных систем миометрия и их роли в СС ГАМК, фенибута и бензодиазепинов были дополнены фармакологическим анализом механизма действия ГАМК и ГАМК-положительных веществ на сократительную активность миометрия. Исследования выполнены в прямых опытах на модели сокращений изолированного миометрия небеременных кроликов и крыс в фазе диэструса с использованием фармакологиче-

Рис. 4. Специфическое связывание '""С-ГАМК ПМ миометрия интактных крыс (1), беременных 1-половины (2), 2-половины (3).

По оси абсцисс — количество связанной НС-ГАМК (пмоль/мг белка}

По оси ординат — отношение количества связанной НС-ГАМК к концентрации свободной |4С-ГАМК (пмоль-мг белка_|/нМ)-

Таблица 5. Влияние фенибута на СС ')Н-флунитразепама ПМ миометрия крыс

Группы животных 1 С5». нМ

В отсутствии фенибута В присутствии фенибута

Небеременные кры-

сы 72 60

Беременные в пер-

вой половине 88 68

Беременные во вто-

рой половине 92 53

ских индикаторов. Результаты экспериментов показали, что ГАМК в концентрации 4 -10—й М и агонист ГАМКа -рецепторов мусцимол в концентрации 1,7-Ю-4 М тормозят сокращения изолированных отрезков матки животных. По данным авторов (Drew et al, 1982; Curtis, Malik, 1984), к агонистам ГАМКл-рецепторов относится этилендиамин. В наших экспериментах этилендиамина гидрохлорид оказал утероингибирующий эффект в концентрации 6,6-10~3 М.

Специфический антагонист ГАМКл-рецепторов бикукуллин в диапазоне концентраций 5,4-.10_6—10~5—2,7-10~5—5,4-Ю-5 М стимулирует сокращения изолированного миометрия. Блокатор хлорного канала ГАМК-БД-рецепторного комплекса пикротоксин в спектре разведений 6,6-Ю-5— 1,7-10"5 — 3,5-10~5— 1,4-Ю-4 М также усиливает сокращения изолированных отрезков. Бикукуллин и пикротоксин в равноэффективных концентрациях обращают утеро-депримирующие эффекты ГАМК и этилендиамина. А ГАМК и этилендиамин угнетают утеростимулирующие эффекты бикукуллина и пикротоксина. Таким образом, агонисты и антагонисты ГАМКл-рецепторов проявляют двухсторонний конкурентный антагонизм на сократительную активность изолированного миометрия. Полученные результаты свидетельствуют о том, что угнетающее действие на сократительную активность миометрия ГАМК, этилендиамина реализуется через ГАМКд-тормозные рецепторы.

Специфический агонист ГАМКб-рецепторов баклофен (Bowery et al, 1981, 1985; Hill, Bowery, 1981) в концентрации 2- Ю-3 М тормозит сокращения изолированных отрезков матки животных. ГАМКб-миметик баклофен антагонизирует утеростимулирующему эффекту бикукуллина. Бикукуллин же в равноэффективной концентрации (7-Ю-5 М) не обращает утеродепримирующий эффект баклофена. Односторонний антагонизм говорит о разных точках приложения действия агониста ГАМКб-рецепторов и антагониста ГАМКл-рецепторов. Эти данные свидетельствуют о наличии в мио-метрии кроликов и крыс тормозных ГАМКб-гетерорецепторов.

Для выявления в миометрии эндогенной ГАМК использовали ингибиторы ферментов биосинтеза и деградации ГАМК- Установлено, что тиосемикарбазид (4,4-10~3 М) —ингибитор ключевого фермента биосинтеза ГАМК-глютаматдекарбоксилазы — вызывает медленно нарастающее повышение сократительной активности миометрия. Под действием тиосемикарбазида в миометрии наступает дефицит эндогенной ГАМК. В условиях ГАМК-дефицитного состояния сократительная активность миометрия повышается. Ингибитор ключевого фермента деградации ГАМК-ГАМК-трансаминазы — аминооксиуксусная кислота (АОУК) в концентрации !• 9- Ю-4 М вызывает торможение сокращений изолированных отрезков матки. С бикукуллином АОУК проявляет двухсторонний конкурентный антагонизм при действии на сокращения миометрия. Это свидетельствует о том, что утеродепримирующий эффект АОУК реализуется через ГАМКа-тормозные рецепторы миометрия. Сравнительный анализ пороговых утеродепримирующих концентраций экзогенной ГАМК (4- Ю-2 М) и АОУК (7,9-10~4 М) показывает,

что АОУК (условно эндогенная ГАМК) оказывает в 100 раз более выраженное утероннгибирующее действие. Наши данные подтверждают сообщения авторов о наличии в ткани матки эндогенной ГАМК (Lousan et al, 1986). Полученные нами результаты свидетельствуют э наличии в миометрии кроликов и крыс системы синтеза и метаболизма эндогенной ГАМК- Низкая активность экзогенной ГАМК, по-видимому, объясняется плохой проходимостью через клеточные мембраны в опытах in vitro, подобно тому как ГАМК плохо про-яикает через ГЭБ.

При анализе рецепторного взаимодействия фенибута установлено, что фенибут в концентрации 1,8-Ю-3 М, аналогично бакло-}>ену, тормозит сокращения изолированного миометрия кроликов и <рыс. Фенибут так же, как и баклофен, угнетает утеростимули-эующие эффекты бикукуллина и пикротоксина. Бикукуллин же точти не антагонизирует утеродепримирующему эффекту фенибута. Эдносторонний антагонизм при действии на сокращения миометрия "оворит о разных точках приложения в действии фенибута и зикукуллина. Это свидетельствует о наличии в миометрии ГАМКб -рецепторов и о том, что фенибут угнетает сокращения миометрия треимущественно через тормозные ГАМКб-гетерорецепторы. Наши шнные совпадают с данными авторов (Л. X. Алликмете и соавт., ¡982; Л. К- Ряго и соавт., 1982), согласно которым фенибут являйся агонистом ГАМКб-рецепторов. Однако пикротоксин, в отличие it бикукуллина, частично обращает утероиигибирующий эффект фенибута. Этот факт свидетельствует о том, что фенибут способен кйствовать также и на ГАМКа -тормозные рецепторы. Эти данные югласуются с указанием авторов (Л. X. Алликмете, Л. К- Ряго, 1982) > возможности фенибута в больших дозах действовать на "АМКл-тормозные рецепторы. Наши данные указывают на то, что фенибут обладает более широким спектром тормозного действия по :равнению с зарубежным аналогом баклофеном.

Анализ механизма утеротропного действия бензодиазепинов ползал, что феназепам в концентрации 10~4 М и седуксен в разве-[ении 7-10~5 угнетают сокращения миометрия. Бикукуллин и пик-ютоксин только частично обращают утеродепримирующее действие >ензодиазепинов. Это говорит о взаимодействии бензодиазепинов и [нтагонистов рецепторов с разными субъединицами ГАМК-БД-ре-[епторного комплекса. Следовательно, феназепам и седуксен тор-юзят сокращения миометрия через бензодиазепиновый участок ормозного ГАМК-БД-рецепторного комплекса миометрия.

Таким образом, в результате радиолигандного и фармакологи-еского анализа в миометрии человека, кролика и крысы идентифи-;ированы ГАМК-БД-рецепторные комплексы (ГАМКа-тормозные ецепторы), выявлены тормозные ГАМКб-гетерорецепторы и эндо-енная ГАМК, представляющие собой совокупную ГАМК-ерги-ескую систему миометрия. Периферическую ГАМК-систему мио-[етрия схематично можно представить следующим образом. Аксоны нтрамуральных ГАМК-нейронов миометрия интегрированы с терми-алями адренергических и холинергических нервов и образуют

аксо-аксональные синапсы. Пресинаптические ГАМКа- и ГАМКб-ге терорецепторы моделируют высвобождение дофамина, норадренали на, ацетилхолина, которые в свою очередь оказывают влияние н; сократительную активность миометрия. Кроме того, в ГАМК-ерги ческих синапсах миометрия присутствуют постсинаптически! ГАМКа-тормозные рецепторы. Результаты наших экспериментов по казали, что ГАМК-ергическая система миометрия является перифе рическим звеном ГАМК-ергической регуляции механизмов сокра тительной функции матки в процессе развития беременности.

Радиолигандные исследования показали, что ГАМК-рецептор! обладают высоким сродством к ГАМК и фенибуту, а БД-рецепторы -к бензодиазепинам. Это говорит о том, что ГАМК- и БД-рецепторь миометрия являются молекулярными мишенями, для действи: ГАМК-ергических веществ. ГАМКа- и ГАМКб-рецепторы матю опосредуют механизм специфического утеротропного механизм, действия фенибута и феназепама. Фенибут в определенных кон центрациях (1,8-Ю-3 М) и дозах (50 и 100 мг/кг) тормози сокращения матки и это действие реализуется через тормозны ГАМКб-гетерорецепторы. Феназепам (4-Ю-4 М и 2,5 мг/кг) седуксен (3,5-10~5 М и 5 мг/кг) угнетают сокращения миометри через ГАМК-БД-тормозные рецепторные комплексы.

Результаты наших исследований показали, что фенибут по вышает тропность бензодиазепина 3Н-флунитразепама к БД-рецел торам миометрия. Это является фармакодинамическим обоснование] для рекомендации комбинированного применения фенибута с 6et зодиазепинами феназепамом или седуксеном.

Результаты исследований in vitro и in vivo показали, что ГАМК, также агонисты ГАМК и БД при уменьшении концентраций и до оказывают противоположное, стимулирующее влияние на сокра™ тельную деятельность матки. Из. литературы известно, что, кром постсинаптических ГАМКа -тормозных рецепторов и тормозных пре синаптических ГАМКб-гетерорецепторов, на катехоламинергически и холинергических терминалях локалируются пресинаптически ГАМКа-активирующие гетерорецепторы.' Активация пресинаптич( ских ГАМКа-рецепторов вызывает облегчение выброса дофамин; серотонина, норадреналина, ацетилхолина (И. В. Комиссаров, 198( Fung, Fillenz, 1985; Suzdak, Gianutsos, 1985).

Наши данные дают косвенные основания предполагать, что низких концентрациях и дозах ГАМК (4-10~3 М), агонист ГАМ фенибут (4,6-Ю-4 М и 25 мг/кг), агонисты БД феназепа (3-10~5 М и 1 мг/кг), седуксен (1,4-10~5 М и 2,5 мг/кг) взаим< действуют с пресинаптическими ГАМК-БД-рецепторными компле! сами (ГАМКа-активирующими рецепторами). ГАМК, фенибут и 6ei зодиазепины в низких концентрациях и дозах облегчают пресина] тическое высвобождение дофамина и других нейромедиаторов. Эт нейромедиаторы, как показали наши опыты, вызывают утеросп мулирующее действие. Из этих данных следует практический вывс о том, что ГАМК-миметик фенибут и агонисты БД феназепам седуксен при угрозе прерывания беременности должны применять«

в достаточных дозах. Искусственное снижение доз ГАМК-позитив-ных веществ в силу реверсии эффекта может вызвать усиление сократительной активности матки.

Нами исследовано действие на сократительную активность изолированного миометрия небеременных кроликов и крыс некоторых эндогенных БАВ. Результаты экспериментов показали, что дофамин в концентрации 6,5-10~6 М, серотонин — 6,2-Ю-5 М, норадрена-лин—5^9-10~7М, ацетилхолин — 1,Ы0~6М, простагландин F_2a — 2,1 • Ю-7 М, окситоцин в разведении 1 ЕД на 100 мл питательного раствора Рингера — Локка индуцируют сокращения изолированного миометрия животных. Агонист дофамина апоморфина гидрохлорид оказал утеростимулирующее действие в концентрации 3,Ы0_6 М.

Полученные результаты согласуются с данными литературы о стимулирующем влиянии на сокращения изолированого миометрия животных и человека окситоцина, серотонина, дофамина, проста-гландина F_2a, ацетилхолина, адреналина, гйстамина (В. П. Бор-дуновская и соавт., 1979; Г. С. Короза, Т. В. Герсамия, 1979; А. Н. Кудрин и соавт., 1979; В. И. Циркин и соавт., 1981; Я. Урбан и соавт., 1981).

В хронических опытах in vivo внутрибрюшинное введение дофа-миномиметика леводопы в дозе 100 мг/кг также вызвало резкое повышение изометрической сократительной деятельности матки крольчих. Достоверно возросло тоническое напряжение миометрия, увеличилось ВМД на высоте изометрических сокращений со 147,0±0,5 (в контроле) до 195,0 ±16 мм водного столба (Р<0,01). Повысилась частота сокращений рога матки на 57—62%.

Полученные экспериментальные данные в опытах на изолированном миометрии и в условиях целостного организма служат доказательством того, что дофаминергическая система принимает непо- . средственное участие в развитии гипертонуса матки. Наши данные подтверждают концепцию некоторых авторов' (Н. В. Кобозева, А. В. Рассохин, 1984; Д. Г. Красников и соавт., 1985; Л. К. Ку-рицина, Г. Н. Дмитриева, 1985; В. И. Кулаков и соавт., 1990; Grasso et al, 1983) о том, что гиперпродукция эндогенных БАВ типа дофамина, норадреналина, простагландина F_2c(, окситоцина может служить фактором риска невынашивания и недонашивания беременности.

Было изучено влияние ГАМК и ГАМК-положительных' средств на утеростимулирующие эффекты эндогенных БАВ. Результаты экспериментов показали, что ГАМК в концентрации 4-Ю-2 М, фенибут—1,8-Ю-3 М, феназепам — 2• 10~4 М, седуксен — 3,5-Ю-5 М тормозят утеростимулирующие эффекты нейромедиато-ров, простагландина F_2í(, окситоцина. При комбинированном применении фенибута с феназепамом или седуксеном в утеродепри-мирующих концентрациях наступало усиление утероингибирующего эффекта до полного прекращения индуцированных сокращений изолированного миометрия.

Наши данные показывают, что ГАМК и ГАМК-положительные

вещества фенибут, феназепам и седуксен в утероингибирующих концентрациях действуют как функциональные антагонисты эндогенных БАВ дофамина, серотонина, норадреналина, ацетилхолина, простагландина Р_2о1, океитоцина. Это служит научно-теоретическим обоснованием для рекомендации клинических испытаний фени-бута, феназепама, седуксена при угрозе прерывания беременности на почве повышенной продукции эндогенных БАВ, обладающих утеротоническим действием. При таких клинических ситуациях ГАМК-позитивные вещества будут служить препаратами выбора как средства обоснованной этиопатогенетической терапии при угрозе невынашивания. Ценность патогенетической терапии при угрозе прерывания беременности состоит в том, что медикаментозные средства в оптимальных дозах представляют для плода меньший риск, чем интоксикация и гипоксия при избытке некоторых эндогенных соединений (В. И. Бодяжина, 1983).

Проблема фармакотерапии у беременных делает актуальным поиск не только эффективных, но и безопасных для матери и плода токолитиков. Поэтому четвертым этапом наших исследований было изучение действия фенибута, феназепама и седуксена на организм матери и плода.

В первой серии экспериментов изучали влияние фенибута и седуксена на функциональное состояние беременных животных и плодов. Результаты опытов показали, что седуксен не вызвал существенных изменений сердечной деятельности у животных и плодов при проведении функциональных проб. При задержке дыхания (у беременных крыс) на фоне фенибута у плодов частота сердечных сокращений снизилась в меньшей степени (до 206,4±5,4 ударов в минуту) по сравнению с контрольной группой, в которой у плодов наступила выраженная брадикардия (до 183,9±7,6 ударов в минуту, Р<0,01). Результаты оценки сердечного ритма у плодов в условиях моделирования острой гипоксии в системе мать —плод говорят о том, что фенибут уменьшает брадикардию, снижает неблагоприятное действие на плод острой гипоксии, оказывает защитное влияние на состояние внутриутробного плода. Фетопро-тективный эффект фенибута, по-видимому, реализуется за счет активации компенсаторно-защитных механизмов в системе мать — плод. К таким адаптационным механизмам авторы относят торможение сократительной активности матки и улучшение маточно-плацентар-ного кровообращения (Е. М. Вихляева, 1982; В. Г. Филимонов и соавт., 1982, 1986).

С нашими экспериментальными данными согласуются результаты, полученные при использовании фенибута в акушерской клинике. В нашей стране фенибут впервые применен при лечении гесто-зов (Л. Н. Кузам, 1987). Препарат, назначаемый по 0,5 3 раза в день в течение шести дней женщинам от 28-й до 41-й недели беременности, по данным реографии, улучшал маточный кровоток и состояние внутриутробного плода. Улучшение состояния под действием лечения фенибутом автор объясняет улучшением нарушений гемодинамики.

Другие данные литературы также убеждают в том, что результаты наших экспериментов о фетопротективном действии являются следствием фармакологических свойств фенибута. Фенибут обладает ноотропными свойствами (Ю. А. Лийвамяги, 1987; Г. В. Ковалев, 1990). Одним из свойств ноотропных веществ является способность повышать устойчивость организма к кислородной недостаточности (Р. У. Островская, С. С. Трофимов, 1984; М. Я- Оттер, 1984). Фенибут, диазепам снижают степень нарушения энергетики мозговой ткани и уменьшают отек головного мозга (В. Е. Новиков и соавт., 1983, 1984). Фенибут ослабляет активацию процессов перекисного окисления липидов в ткани головного мозга, збладает антиоксидантными свойствами (А. В. Евсеев, 1990).

Фенибут обладает гипотензивным действием (И. Н. Тюренков и :оавт., 1985, 1986). ГАМК-ергическая система участвует в авторегуляции мозгового кровообращения (М. Д. Гаевый и соавт., 1984; С. А. Мирзоян и соавт., 1985, 1988). ГАМК, мусцимол, феназепам, циазепам обладают свойством расслаблять и расширять мозговые сосуды путем воздействия на ГАМК-рецепторы, улучшать мозговое кровообращение при ишемии мозговой ткани (Т. С. Ганьшина, 1980; В. П. Акопян, J1. С. Балян, 1988).

Во второй серии изучали действие фенибута, феназепама и седуксена на фетогенез. Результаты экспериментов показали, что седуксен при повторном введении крысам в плодный период беременности оказал фетотокснческое действие. У плодов обнаружены кровоизлияния во внутренние органы, увеличение размеров моче-зого пузыря, наличие гидронефрозов. При исследовании костной системы после введения седуксена беременным животным у плодов выявлено замедление процесса оссификации костей пястья и плюсны, грудины, затылочной кости, крестцового отдела позвоночника.

Наши данные об отрицательном действии седуксена на плод согласуются с данными литературы (С. С. Джолохава и соавт., 1983; 1986; Miller, Beacher, 1975; Pokorny et al, 1986) и свидетельствуют об опасности применения седуксена беременным в период фетогенеза во второй половине беременности.

Исследования влияния на плод фенибута и феназепама показали, что эти препараты в отдельности и при комбинированном применении крысам в плодный период беременности не вызвали существенных изменений во внутренних органах и костной системе плодов (табл. 6, 7, 8).

Результаты наших исследований действия фенибута и феназепама на плод совпадают с данными литературы. Феназепам в эксперименте при введении беременным крысам, морским свинкам, собакам и мини-свиньям в дозах от 1 до 50 мг/кг не оказал эмбриотоксического и тератогенного действия (Б. И. Любимов, 1979а, 19796; Н. M. Смольникова, 1980). На основании этих исследований авторы считают феназепам малотоксичным, и безопасным препаратом. Экспериментальных данных о действии фенибута на плод мы не встретили. Однако в литературе имеются результаты клинического изучения действия фенибута на плод. Фени-

to

00

Таблица 6. Результаты исследования эмбрионального материала после внутрижелудочного введения фенибута и феназепана крысам с 16-го по 20-й день беременности (М±т)

Группа Препарат Число беременных крыс Число желтых тел Число живых ПЛОДОВ Гибель (%) оэс (%) Масса плода г Размер плода мм Масса плаценты, г Плацентарный коэффициент

до имп-лант. после плацент.

I Фенибут 20 12,6± 10,7 + 2,7 ± 2,7± 5,45 + 3,85 ± 35,9 ± 0,60 ± 0,16±

150 мг/кг 0,45 0,4 1,5 0,9 1,5 0,03 0,2 0,02 0,005

II Феназепам 20 12,6 + 10,95 ± 5,37 ± 3,01 ± 8,3 ± 3,97 ± 36,9 + 0,67 + 0,17 ±

3 мг/кг 0,4 0,5 2,7 1,4 2,7 0,08 0,33 0,03 0,008

III Фейибут 0,61 ±

150 мг/кг+ 20 12,6 + 11,6± 4,16 + 4,2± 8,2± 4,0 + 36,5 ± 0,61 ±

Феназепам

3 мг/кг 0,26 0,45 1,8 2,6 2,0 0,05 0,32 0,02 0,005

IV Контроль 20 12,85± 11,75 + 4,8 ± 3,7 ± 8,4 + 4,0 + 36,6 ± 0,65 ± 0,16 +

0,23 0,23 0,9 1,0 1,4 0,07 0,3 0,01 0,004

Примечание: Р>0,05

Таблица 7. Результаты исследования внутренних органов плодов после внутрижелудочного введения фенибута и феназепама крысам с 16-го по 20-й день беременности (М±т)

Препарат f Доза мг/кг Обследовано плодов Отек тела {%) Кровоизлияния (%) Гидронефроз (%) Увеличение мочевого пузыря (%) Внешний осмотр плодов

в грудную полость в брюшную полость общее количество плодов плоды с гематомами (%)

Фенибут 150 135 12,6 ±2,9 1,5 ± 1,0 Ю,4±2,6 8,9 ±2,5 8,1 ±2,3 214 24,1+3,0

Феназепам 3 115 16,5±3,5 0,9 ±0,8 8,7±2,6 5,2 ±2,1 7,8 ±2,5 208 13,0±2,3

Фенибут 150 116 9,5 ±2,7 0 11,2 + 2,9 5,2 ±2,0 6,9 ±2,4 208 23,1 ±2,9

Феназепам 3

Контроль 140 11,4 + 2,7 1,4± 1,0 5,7±2,0 5,0 ±1,8 5,0 ±1,8 235 17,9 + 2,5

Примечание: Р>0,05

Таблица Результаты исследования костной системы плодов после внутрижелудочного введения фенибута и феназепама крысам с 16-го по 20-й день беременности (М±т)

Препарат Доза мг/кг Количество ПЛОДОВ Отсутствие V пальца передней конечности Количество центров оссифнкации грудины (%) Зачатки 14-го ребра (%) Количество крестцовых позвонков (%) Отсутствие вентральных центров оссификации крестцового отдела позвоночника (%)

7 8 0 I 2 3

Фенибут 150 97 45,4 ± 5,91 ± 15,5 + 24,7± 70,1 ± 3,1± 45,4 ± 50,5 + 1,03±

* 5,1 0,02 3,7 4,4 4,7 1,8 5,1 5,1 1,0

Феназепам 3 96 36,5-+- 5,97± 10,4 ± 12,5± 68,8-+- 3,1 ± 45,8 ± 42,7 ± 8,3 ±

4,9 0,02 3,1 3,4 4,8 1,8 5,1 5,1 2,8

Фенибут+ 150 91 31,9± 5,95 ± 25,3± 13,2± 72,5-+- 1,1± 54,9 ± 44,0± 0

Феназепам 3 4,9 0,02 4,(3 3,6 4,7 0,9 5,2 5,2

Контроль 78 43,6 + 5,96 ± 15,4± 14,1± 64,1-+- 1.3± 35,9 ± 57,7± 5,1 ±

5,6 0,02 4,1 4,0 5,5 1,1 5,5 5,6 2,5

Примечание: Р>0,05

л

ТЗ со

Б

ге I

2

оз о

3"°

я 2 о

О £ * 2

оз С:

оз —

г х 5

03 о

5 3

ПОЯ X СЛ сг

я ь з г»;

1—1 б> >3-3

м

Ш

Я

л к §

"О я 3-е-о

?50

§1 * 5

№ а 2 -о Е ге 5

я

03 а _ 2 оз д

а м -

я ч

ь Е -

53 5

5 -в- о

4 ге о а

» к

я м 5 .С 2 ге а> я

о

-зЗ1™ ге^ -с ■о

3 * 8-е-

4 ге я я

ШЕЙ.

ГР

4 Е

я —)

Е ж

з я

X 2

5 о

о

ге «

^ о

о о

03 2

05 "

я -а

я ге я= и

э ^

О СГ

я ч

03 03

О И)

2 ге -> я

м

3 2

• 63

Г3 _

о лз

я 2 н

о оз

аз оз

(V ■

С1

ге

3=» '<

X

о ге я

03

-ч^а

Л 35

■с

Я > О

3 со

ге а я я

03 о

й КС ге

а .—. оз _

2 со

03

00

4 У

03 ^ §

СЬ 1

я ТО Я Е •> оз -а го

С, оз ге я

Й « » о>

5 I юн ' с" 2 I . о £э

2

ео-^

К я

2

03

ь о

4

о

X

о я

~ 3—1 ? Е « » ™ а.

| о О яе

-з ео х о

Еа М

а

о

я из а я Ф я 5 тз

03 X я

я Е

2

— гея со а

СТз йз

я

о

Я ° 2 о Ю ъ

Я X

(V

•е-*

2 ы а

-Я- ь -а

ге о 2

43 о

аз

рз • ге

- X»

2

О . Я

О* о

Ь сг

я ге

ш я

*< я

я о\ ге

я ч

оз оз

оз я

ь§

а й

-а

оз -в- 5

2 2 е

— я я

х о» ге

^ о

я ы 2

Я _ 03

оу а

03 Ьа

М О Я £з

4 03

сг •

и> ч о 2

Я

и о ь Ьз ге я 5 ч ^ ге ге чз ч

ч 5=1 ^ о

-в-0 ё ге Я

Я С\ Й

оз ге

оз из 43 ге о оз

я я

03 аз 2 ° ^ В I Е

о

00 03 .

Е

я

ь

03 Я

я Е ге

? 2 2

^ Ч 03 А 03 <<

5

я я ч

'—' я я го

со ге о я

оо ге ге

-VI ш ч с

Е х я

со -¡2 -1

т £а ДО

• «та

К с ^ сг

шоч

ЙГо (

2 Д» :

ж • о :

о -о :

м д о "

^ )э

О М ТЭ оз

о тз о» о» о

2 £

я ^ 5 ге

Й = й е

о

Ьа ОЕ

я я

е>

Пз

я я я » я = я» =

^ а

Яг х оз оз

оз '

а X о

03

я 2

»В?

оз оз я

ч

ге

а ; Е ^

. 2 С

ь О со о- -а

^ оо я о ге о Е ^ я стз я« )я оз \о — ге

"а 5 Оуя « ^

3 ? § з

2

ге со

Я Я»

Й я

Ч -

я

Л Ок ге

я ч я -я а тз

я ч о

03 СП

со -о

ге §

5 ге о хз

3 ?

Яс

ге пз

с (г

я 5

= ь,

_ <т>

я

зывающими антагонистическое действие на утеротонические эффек ты эндогенных БАВ и не вызывающие отрицательного влияния нг организм матери и плода.

Цель и задачи исследования считаем выполненными. Заключительный этап работы — оформление материалов на внедрение результатов исследования в практику здравоохранения. На основании полученных данных составлен «Отчет об изучении новой биологической активности фенибута и феназепама» и подготовлен^ «Инструкция к применению фенибута и феназепама по новым показаниям в качестве гравидопротекторов», «Отчет» и «Инструкциях представлены в Фармакологический комитет для получения разрешения на клинические испытания фенибута и феназепама пру

угрозе прерывания беременности.

* * *

Возникает правомерный вопрос: какие преимущества имеет предлагаемая группа потенциальных токолитиков ГАМК-ергического механизма действия по сравнению с существующими? Ответ на этот вопрос дадут клинические испытания. Однако вполне оправдано привести дополнительные сведения из литературы, на основании которых можно теоретически предполагать наличие некоторых преимуществ у потенциальных протекторов беременности, активирующих ГАМК-ергическую систему.

Фенибут и феназепам как утеролитики и транквилизаторы.

В комплексную терапию при угрозе прерывания беременности исследователи-клиницисты включают седативные средства (Г. С. Ми-насова, Д. А. Шехонина, 1983; В. М. Сидельникова, Е. А. Чернуха, 1984; В. И. Кулаков и соавт., 1990).

Производный ГАМК — фенибут (р-фенил-ГАМК) вошел в медицинскую практику в нашей стране в 70-е годы как препарат, оказывающий мягкое транквилизирующее и седативное действие в дозах 0,25—0,5—0,75 (Р. А. Хаунина, И. П. Лапин, 1976; Р. А. Хауни-на, 1978). В настоящее время в результате уточнения спектра клинического действия фенибут относят к ноотропам со слабым транквилизирующим, седативным и снотворным эффектом (Л. С. Мехи-лане и соавт., 1985, 1990). Ведущим в спектре действия фенибута является не транквилизирующий, а активирующий компонент (Л. С. Мехилане, В. Э. Васар, 1984). Фенибут оказывает слабое влияние при состояниях тревоги и страха. Более эффективное действие он проявляет как ноотропный транксилизатор у больных с астеническим синдромом (В. Э. Васар, Л. С. Мехилане, 1988). На близость фенибута к ноотропным веществам указывают А. М. Жарковский и соавтр. (1984), Р. У. Островская и соавт. (1984), Ю. А. Лийвамяги (1987), Г. В. Ковалев (1990). Некоторые авторы

считают фенибут дневным транквилизатором (Е. И. Волчанский, 1979). Р. А. Хаунина и И. П. Лапин (1989) полагают, что фенибут следует отнести к атипичным транквилизаторам ГАМК-ергического механизма действия с активирующим ноотропным компонентом.

Фенибут обладает снотворным действием. При нарушениях сна фенибут в дозе 0,75 на ночь вызывает нормализацию структуры и продолжительности стадий дельта сна (Н. А. Власов и соавт., 1981; В. П. Данилин и соавт., 1986).

Феназепам—отечественный производный бензодиазепина — в нашей стране используется с начала 80-х годов. По результатам экспериментальных исследований феназепам отнесен к типичным транквилизаторам с ГАМК-ергическим механизмом тормозного действия (Ю. И. Вихляев, Т. А. Воронина, 1978; Т. А. Воронина, 1978, 1982). Клиническое изучение феназепама в дозах 0,5—1 мг 3 раза в сутки подтвердило его высокую эффективность при различных невротических состояниях, сопровождающихся тревогой, страхом, повышенной раздражительностью (Г. М. Руденко и соавт., 1978).

Феназепаму свойственно снотворное действие. В дозе 0,001 (1 мг) перед сном он вызывает ускорение засыпания, увеличивает фазу медленного сна, уменьшает число пробуждений. Препарат оказывает положительное влияние на структуру сна при тревожном и фоби-ческом синдроме (Н. А. Власов и соавт., 1985; М. С. Садигов, 1985).

Сочетание утеролитических и психоседативных свойств у фени-бута и феназепама может служить преимуществом перед другими гоколитиками. Сказанное подтверждено в акушерской клинике. Фенибут в дозе 0,5 через 8 часов был применен с целью воздействия на психоэмоциональное возбуждение у больных с гестозом (Л. Н. Кузам, 1987; А. Е. Волков и соавт., 1989). Авторы показали, что неадекватное психоэмоциональное состояние женщин поддается коррекции транквилизатором — ноотропом фенибутом.

Учитывая утеролитическое и транквилизирующее действие с наличием ноотропного активирующего компонента, фенибут перспективно назначать при астеническом синдроме у беременных с угрозой ее прерывания. Феназепам, наоборот, более адекватно применять при состояниях возбуждения, повышенной раздражительности, беспокойстве и тревоге у беременных с угрозой невынашивания.

Фенибут и феназепам как утеролитики и стресспротекторы.

Из литературы известно, что у приезжих в районы освоения женщин, находящихся в условиях воздействия экстремальных факторов и напряжения адаптационных механизмов, отмечается повышение частоты невынашивания беременности (В. И. Кулаков и соавт., 1990; Stray — Pedersen, 1984; Lapple, 1988; Levin, De Frank, 1988).

Фенибут и феназепам обладают стресс-протективным действием (Б. В. Андреев и соавт., 1981; И. Н. Тюренков и соавт., 1981; Г. В. Ковалев и соавт., 1983, 1987). По данным Б. В. Андреева и

соавт. (1982), Ф. 3. Меерсона (1984, 1989), в формировании стресс-лимитирующих механизмов участвует ГАМК-ергическая система. Защитный эффект ГАМК, мусцимола, баклофена (фенибута), фена-зепама, диазепама при иммобилизационном и болевом стрессе выражается в предотвращении усиленного выброса адренергического медиатора, обусловлен активацией адаптивных свойств системы ГАМК, повышением резистентности организма (Ю. Д. Игнатов и соавт., 1982; Л. А. Маликова и соавт., 1985; Е. П. Макарова и соавт,, 1989). В клинике лучший эффект антистрессорного действия у пациентов получен при назначении феназепама (М. П. Вихриева и соавт., 1982). Эти данные говорят о перспективности применения фенибута и феназепама с целью профилактики невынашивания при стрессорных воздействиях.

Фенибут и феназепам как утеролитики и иммуномодуляторы

Среди причин невынашивания, по данным ВОЗ, около 7% составляют нарушения иммунологических взаимоотношений в системе мать — плод (В. И. Кулаков и соавт., 1990). Угрожающие спонтанные аборты обусловлены иммунологическими причинами в 5—30%, а привычное невынашивание беременности — в 40—50% (О. К- Барсе-гян, Н. Ю. Сотникова, 1989). В связи с этим при угрозе прерывания беременности на почве нарушений иммунных взаимоотношений в комплекс лечебных методов авторы включают фармакологические иммунодепрессанты (С. Д. Булиенко, П. И. Фогел, 1985; В. В. Щербакова, 1985; В. М. Сидельникова, 1986; В. И. Кулаков и соавт., 1990).

Фенибут, феназепам обладают иммунодепрессивным действием (Л. В. Девойно, И. О. Белецкая, 1988). ГАМК-ергическая система участвует в физиологической регуляции иммунного гомеостаза (В. И. Ратников и соавт., 1982; Н. Е. Рябинина, 1989). В эксперименте ГАМК, в зависимости от доз, оказывает иммуномодулирующее действие (Л. А. Франгулян и соавт., 1985; Г. А. Белокрылов, И. В. Молчанова, 1987; И. Е. Ковалев, Н. Е. Рябинина, 1989). Феназепам, диазепам, тазепам в дозе 2 мг/кг вызывали угнетение иммунной реакции (Ю. С. Федорова, 1981; Л. В. Девойно, И. О. Белецкая, 1988). Иммуносупрессивные свойства ГАМК-положитель-ных веществ дают основания предполагать перспективность применения фенибута и феназепама при угрозе прерывания беременности на почве нарушений иммунных взаимоотношений между орга: низмом матери и плода.

Таким образом, результаты наших исследований свидетельствуют о том, что отечественные транквилизаторы фенибут и феназепам являются перспективными протекторами беременности. Они обладают физиологическим ГАМК-ергическим механизмом торможения маточных сокращений, оказывают антагонистическое действие на утероиндуцирующие эффекты дофамина, простагландинаР-2-альфа, окситоцина; не вызывают отрицательного влияния на плод. Кроме того, по данным литературы, препараты улучшают мозговое и пла-

ентарное кровообращение, проявляют ноотропные, антигипоксиче-кие, психоседативные и снотворные свойства, обладают стресе-ротективным и иммуносупрессивным действием.

ВЫВОДЫ

1. В экспериментах на изолированных отрезках матки кроликов и рыс и в условиях целостного организма в хронических опытах с по-ющью усовершенствованного метода бароутерографии проведены сследования утеротропных свойств гм^ма-аминомасляной кислоты ГАМК), ее производных и аналогов: натрия оксибутирата (ГОМК), )енибута, пикамилона, пантогама, натрия вальпроата и производных ензодиазепина (БД) —феназепама и седуксена.

2. У ГАМК-положительных веществ в опытах in vitro и in vivo а модели изометрической (плодоизгоняющей) сократительной дея-ельности матки выявлен новый вид биологической активности — пецифическое утеротропное действие. Степень утеротропного эффек-а ГАМК-позитивных средств зависит от их концентрации и дозы. I определенных экспериментальных дозах ГАМК и ГАМК-положи-ельные вещества тормозят, а в меньших дозах стимулируют сокра-ительную активность матки.

3. Среди девяти ГАМК-положительных веществ имеются произ-¡одное ГАМК фенибут и производные БД феназепам и седуксен, называющие выраженное угнетающее действие на изометрические окращения матки. По утеродепримирующей активности в опытах n vivo препараты в порядке убывания располагаются в следующий 1яд: феназепам — седуксен — фенибут.

4. С помощью радиолигандного метода с применением НС-ГАМК i 3Н-флунитразепама и фармакологического анализа с использо-¡анием агонистов и антагонистов ГАМК-рецепторов, ингибиторов ферментативного биосинтеза и деградации ГАМК в миометрии челочка, кролика и крысы идентифицированы сопряженные ГАМК-БД-)ецепторные комплексы (ГАМКд-тормозные рецепторы), выявлены тормозные ГАМКб-гетерорецепторы и наличие эндогенной ГАМК, 1редставляющие собой совокупную ГАМК-ергическую систему мио-летрия.

ГАМК-ергическая система миометрия принимает участие в регу-1яции периферических механизмов сократительной функции матки в процессе развития беременности.

5. ГАМК-рецепторы миометрия крыс обладают высоким сродством к ГАМК и фенибуту, а БД-рецепторы — к бензодиазепинам. Периферические ГАМКд- и ГАМКб -рецепторы опосредуют молекулярный механизм специфического действия фенибута и феназепама на сократительную функцию матки.

Фенибут в дозах 50 мг/кг и 100 мг/кг тормозит изометрические сокращения матки и это действие реализуется через тормозные ГАМКб -гетерорецепторы миометрия.

Феназепам в дозе 2,5 мг/кг и седуксен в дозе 5 мг/кг угнетают

сокращения матки через ГАМК-БД-тормозные рецепторные коми лексы.

6. ГАМК и фенибут потенцируют специфическое связывание бен зодиазепинов, увеличивают степень сопряжения ГАМК-БД-рецеп торных комплексов миометрия и повышают их аффинитет к лигандам

При комбинированном применении ГАМКв -миметика фенибута агонистом БД феназепамом наступает усиление утеродепримирую щего эффекта вплоть до полного прекращения сокращений.

7. При уменьшении дозы фенибут (25 мг/кг), феназепаи (1 мг/кг), седуксен (2,5 мг/кг) стимулируют сократительную дея тельность матки, по-видимому, через пресинаптические ГАМК-БД рецепторные комплексы (ГАМКа-активирующие рецепторы).

8. Эндогенные биологически активные вещества дофамш (6,5- Ю-6 М), серотонин (6,2-10~5 М), норадреналин (5,9- Ю-7 М) ацетилхолин (1,1-Ю-6 М), простагландин F_2a (2,1-Ю-7 М) окситоцин (1 ЕД на 100 мл) индуцируют сократительную активное™ изолированного миометрия кроликов и крыс.

ГАМК (4-10—2 М), фенибут (1,8-Ю-ь М), феназепам (10~4 М) и седуксен (3,5-10 М) действуют как функциональные антаго нисты утероиндуцирующих эффектов эндогенных БАВ-нейромедиа-торов, простагландина F—2L, окситоцина.

9. Фенибут в дозах 50 мг/кг и 150 мг/кг и феназепам в дозе 3 мг/кг и их комбинации в этих же дозах при повторном введении крысам с 16-го по 20-й день беременности не оказывают отрицательного действия на плод. Седуксен в дозе 5 мг/кг при повторном введении беременным крысам вызывает фетотоксический эффект.

10. Отечественные препараты фенибут и феназепам являются перспективными гравидопротекторами ГАМК-ергического тормозного механизма действия и их можно рекомендовать для клинических испытаний по новым показаниям при угрозе прерывания беременности.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Результаты исследований рекомендуются для внедрения в акушерскую практику. Составлен «Отчет об изучении новой биологической активности фенибута и феназепама» и «Инструкция к применению фенибута и феназепама по новым показаниям в качестве гравидопротекторов». «Отчет» и «Инструкция» представлены в Фармакологический комитет для получения разрешения на клинические испытания фенибута и феназепама при угрозе прерывания беременности.

Показаниями для назначения фенибута и феназепама является повышение возбудимости и сократительной активности матки во II и III триместрах, наличие таких факторов риска невынашивания и недонашивания как ГАМК-дефицитные состояния или гиперпродукция эндогенных БАВ, обладающих утероиндуцирующим действием, стрессорные воздействия, нарушения иммунологических взаимоотношений между матерью и плодом.

Фенибут ориентировочно рекомендуется назначать в первые 2 дня по 0,75 через 8 часов (ударные дозы). На 3-й сутки — по 0,5 через 8 часов в течение еще 3—5-и суток (поддерживающие дозы). После курса лечения рекомендуется перерыв на 3—5—7 дней (по состоянию). При необходимости курс лечения повторяется. Фенибут целесообразно назначать женщинам с преобладанием астенического синдрома.

Более эффективное утеродепримирующее действие фенибут оказывает в комбинации с феназепамом в результате взаимного усиления утеролитического и фетопротективного эффекта. Поэтому в более угрожающих случаях и при состояних возбуждения, повышенной раздражительности, беспокойства и, тревоги рекомендуется применение фенибута по 0,5 совместно с феназепамом по 0,001 (1 мг) 3 раза в сутки в течение 5—8 дней с последующим перерывам на 5—7 дней. При клинической необходимости курс лечения повторяется.

2. Для научно-исследовательских целей предлагается усовершенствованный метод бараутерографии как модель для изучения действия фармакологических препаратов на изометрическую (плодоизгоняющую) сократительную деятельность матки в хроническом опыте.

3. В учебном процессе рекомендуется включить в программу лекций и практических занятий по теме «Лекарственные вещества, регулирующие сокращения матки» данные о центральной и периферической ГАМК-ергической регуляции механизмов сократительной функции матки в процессе развития беременности.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Сизов П. И., Яснецов В. С., Правдивцев В. А. К методике параллельного изучения электрической и мышечной активности матки в хронических опытах // Электрофизиологические исследования при поражениях периферических нервов.— Смоленск, 1975.— Т. 48.— С.. 98—103.

2. Сизов П. И. К методике изучения механизма действия лекарственных веществ на электрическую и сократительную активность матки в хронических опытах // Фармакология — здравоохранению: Тез. докл. 4 Всесоюзного съезда фармакологов.— Л., 1976.— С. 191 — 192.

3. Сизов П. И. Барогистерография в изучении действия на миометрий фармакологических средств // Фармакология и токсикология,—1982,—№ 2,—С. 130—132.

4. Сизов П. И. Влияние ГАМК-ергических веществ и бензо-диазепиновых транквилизаторов на сократительную активность матки // Физиологически активные вещества — медицине: Тез. докл. 5 Всесоюзного съезда фармакологов.— Ереван, 1982.— С. 261.

5. Сизов П. И., Яснецов В. С. Гистероингибирующие свойства ГАМК и ее аналогов // Фармакология производных гамма-амино-масляной кислоты: Тез. докл. Всесоюзного симпозиума.— Тарту,

1983,—С. 132.

6. Сизов П. И., Яснецов В. С. Влияние натрия оксибутирата на развитие гиперактивности матки // Фармакология и токсикология.—

1984.—№ 5.—С. 47—50.

7. Сизов П. И., Яснецов В. С. Экспериментальная модель гиперактивности матки для изучения гравидопротекторов // Рукопись депонирована в ВИНИТИ,— 1985,—№ 4088.—85 Деп.

8. Сизов П. И., Яснецов В. С. Влияние гамма-аминомасляной кислоты, ее агонистов и антагонистов на гладкую мускулатуру матки // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.— 1985.— № 11,—С. 576—578.

9. Сизов П. И., Яснецов В. С. Влияние ■у-аминомасляной кислоты и ее агонистов на сократительную деятельность матки // Фармакология и токсикология.— 1988.— № 4.— С. 62—63.

10. Сизов П. И., Филимонов В. Г., Шевелева Г. А., Стрель-ченко Н. В. Влияние производных гамма-аминомасляной кислоты и бензодиазепина на состояние беременных животных и на эмбриогенез // Фармакология и научно-технический прогресс: Тез. докл. 6 Всесоюзного съезда фармакологов.— Ташкент, 1988.— С. 339.

11. Филимонов В. Г., Шевелева Г. А., Стрельченко Н. В., Сизов П. И., Яснецов В. С. Исследование влияния фенибута и седуксена на развитие плода во второй половине беременности // Фармакология и токсикология.— 1989.— № 4.— С. 37—39.

12. Сергеев П. В., Сизов П. И., Духанин А. С., Минеева Е. Н. Исследование ГАМК-бензодиазепиновых рецепторных систем мио-метрия человека // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.—1990.—№ 10,—С. 382—384.

13. Филимонов В. Г., Стрельченко Н. В., Шевелева Г. А., Сизов П. И., Яснецов В. С. Исследование функционального состояния организма беременных крыс и их плодов при воздействии фени-бутом и седуксеном // Рукопись депонирована в ВИНИТИ.— 1990.— № 3074,—В.

14. Сизов П. И., Яснецов В. С. Участие ГАМКа- и ГАМКв-ре-цепторов в механизме торможения сократительной активности мио-метрия кроликов под влиянием ГАМК, АОУК и фенибута // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.— 1990.— № 11.— С. 503—504.

15. Сизов П. И., Яснецов В. С. Фармакологический анализ ГАМК-рецепторного механизма торможения сократительной активности миометрия под влиянием ГАМК и фенибута // Новые данные по фармакологии медиаторных аминокислот и биологически активных веществ: Труды ВГМИ.— Т. 42, вып. I.— Волгоград, 1990.

16. Шевелева Г. А., Филимонов В. Г., Сизов П. И., Чесно-кова Я. М. Экспериментальное исследование влияния фенибута и седуксена на развитие плода в последней трети беременности // Акушерство и гинекология.— 1991.— № 5.— С. 67—68.

17. Сизов П. И. Опасность применения лекарств во время бере-1енности // Актуальные вопросы педиатрии и детской хирургии: >з. научных докладов.— Смоленск, 1991.— С. 92—93.

* V. *

Выражаю искреннюю благодарность академику АМН, лауреату Ъсударственной премии профессору П. В. Сергееву и доктору ме-;ицинских наук профессору В. Г. Филимонову за постоянную кон-ультативную и творческую помощь при выполнении настоящей аботы. Сердечную благодарность за помощь в работе выражаю актору медицинских наук профессору В. В. Яснецову.