Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Исследования по стандартизации сырья и препаратов алтея

На правах рукописи

2 О АВ Г 2009

ГОЛУБЕВА Ирина Сергеевна

ИССЛЕДОВАНИЯ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ СЫРЬЯ И ПРЕПАРАТОВ АЛТЕЯ 15.00.02. - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

МОСКВА 2009

003475416

Работа выполнена в ГОУ ВПО Московская медицинская академия имени И.М. Сеченова

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук,

профессор Алла Анатольевна Сорокина

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук,

профессор Татьяна Александровна Сокольская

кандидат фармацевтических наук Наталья Кирилловна Горчакова

Ведущая организация:

ГОУ ВПО Ярославская государственная медицинская академия

Защита состоится «*^>>

2009г.

в 14.00 часов на заседании диссерт ционного совета Д.208.040.09 при ГОУ ВПО Московская медицинская академ имени И.М.Сеченова по адресу: 121019, г. Москва, Никитский бульвар, д. 13.

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке ГОУ ВГ Московская медицинская академия имени И.М.Сеченова по адресу: 117998, г. М сква, Нахимовский проспект, д. 49.

Автореферат разослан « 2009 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 208.040.09 доктор фармацевтических наук, профессор

Наталья Петровна Садчиков

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Алтей лекарственный относится к группе лекарственных растений, содержащих полисахариды. Корни алтея применяются в виде настоя в качестве отхаркивающего и противовоспалительного средства. Алтей лекарственный как лекарственное растение известен давно, он входит во многие Фармакопеи мира. Действующая в настоящий момент в России нормативная документация (НД) на корни алтея имеет ряд недостатков, отсутствует показатель, характеризующий содержание действующих веществ, что существенно затрудняет стандартизацию сырья.

Одной из важных задач стандартизации являются разработка и внедрение современных методов количественного определения. В последние годы широкое распространение в анализе лекарственного растительного сырья (ЛРС) получил метод высокоэффективной жидкостной хроматографии, позволяющий с высокой степенью точности определять качественно и количественно отдельные компоненты в суммарных растительных препаратах, а также в исходных видах сырья.

Настой корней алтея - экстемпоральная лекарственная форма, разрешенная для приготовления в домашних условиях. Сырье для его изготовления поступает на фармацевтический рынок России от большого числа производителей. В связи с чем вопрос о стандартности выпускаемой продукции приобретает особую актуальность, так как качество настоя напрямую зависит от качества используемого сырья.

Цель настоящей работы заключается в проведении комплекса исследований по стандартизации корней алтея и его настоев. Задачи исследования:

• Провести микроскопическое исследование корней алтея разных форм переработки с целью изучения вариабельности диагностически значимых признаков при измельчении сырья.

• Провести углубленное сравнительное изучение химического состава биологически активных веществ (БАВ) травы и корней алтея лекарственного с помощью современных физико-химических методов анализа.

• Разработать методики качественной и количественной оценки БАВ корней алтея, отвечающие современным требованиям стандартизации.

• Провести исследования по разработке показателя качества «содержание действующих веществ» лекарственного растительного сырья «Корни алтея».

• Провести анализ водных извлечений корней алтея.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематикой и планом НИР

кафедры фармакогнозии фармацевтического факультета ГОУ ВПО Московская медицинская академия им. И.М.Сеченова по теме: «Разработка новых и совершенствование существующих методов получения, оценки качества и стандартизации лекарственного растительного сырья, лекарственных средств природного, биотехнологического и синтетического происхождения» (регистрационный номер темы 01.200302927).

Научная новизна результатов исследований заключается в получении научно-обоснованных данных при экспериментальном изучении состава биологически активных веществ корней алтея лекарственного: свободных и связанных Сахаров, аминокислот, органических кислот и др. Дана их количественная характеристика с использованием современных физико-химических методов (ВЭЖХ, УФ-спектрофотометрия, РАМАН-спектроскопия). Проведена количественная оценка распределения клеток со слизью по тканям корня алтея. Получен идентификационный КР-спектр крахмала, корней алтея лекарственного (измельченное сырье), настоя корней алтея. Разработана ВЭЖХ-методика для количественного определения связанных Сахаров в корнях и препаратах алтея. Изучено влияние некоторых технологических факторов на качество получаемого настоя корней алтея для установления оптимального режима настаивания и возможности выпуска корней алтея, фасованных в фильтр-пакеты.

Практическая значимость полученных результатов состоит в проведении визуализации анатомических признаков корней алтея различной формы переработки (цельное, измельченное сырье и порошок). Выявлены диагностически значимые признаки при идентификации цельного и измельченного ЛРС: лубяные волокна, клетки со слизью, друзы оксалата кальция. Показано, что способ обработки сырья не оказывает существенного влияния на количество клеток со слизью в корнях алтея.

На основании проведенных исследований по стандартизации лекарственного растительного сырья разработан проект фармакопейной статьи (ФС) «Корни алтея», который включает новые разделы «Микробиологическая чистота» и «Количественное определение». Также в проекте предложено расширить уже существующие разделы «Микроскопия», «Качественные реакции» и «Числовые показатели». В проект пояснительной записки включены фотографии, иллюстрирующие раздел «Микроскопия». Изучено влияние дисперсности сырья на качество настоев корней алтея, установлены оптимальные размеры частиц сырья. Материалы по изучению настоя корня алтея включены в проект ОФС «Настои» для Государственной фармакопеи XII издания. Разработана ВЭЖХ-методика определения связанных Сахаров в корнях алтея. Разработанная методика модифицирована для количественного определения действующих веществ в субстанции препарата «Мукалтин» и настое корней алтея.

Апробация диссертации. Основные положения диссертации доложены на конференции студенческих научных работ «Татьянин день» (М. 200бг), научной конференции кафедры фармакогнозии и межкафедральной конференции кафедр фармацевтической химии и фармакогнозии фармацевтического факультета ГОУ ВПО Московской Медицинской Академии имени И.М. Сеченова (2007-2008г).

Публикации. Материалы диссертационной работы опубликованы в 5 печатных работах.

Основные положения, выносимые на защиту.

• Результаты изучения вариабельности диагностически значимых признаков при измельчении корней алтея лекарственного.

• Результаты углубленного сравнительного изучения качественного состава БАВ сырья (трава, корни) и водных извлечений корней алтея лекарственного.

• Данные по разработке ВЭЖХ-методики количественного определения связанных Сахаров корней алтея.

• Результаты использования РАМАН-спектроскопии в анализе сырья и настоев корней алтея.

• Результаты исследований по стандартизации сырья «Корни алтея».

• Результаты исследований водных извлечений корней алтея.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 159 страницах, введения, обзора литературы, экспериментальной части, включающей 6 глав, выводов, списка литературы, состоящего из 215 источников, из них 35 - на иностранных языках, и приложения. Диссертация содержит 25 таблиц, 32 рисунка, в том числе 9 фотографий.

Во введении раскрыта актуальность темы, определены цель и задачи исследования, сформулирована научная новизна и практическая значимость работы. В первой главе на основании литературных данных обобщены сведения о ботанико-морфологической характеристике видов алтея, химическом составе, методах анализа основных биологически активных веществ в растительном сырье; нормативной документации на сырье алтея; фармакологической активности и использовании сырья алтея в производстве лекарственных препаратов. Вторая глава посвящена описанию объектов и методов исследований, используемых в разработке методик и комплексном изучении химического состава сырья алтея (полисахариды, сахара, аминокислоты, органические кислоты и др.). В третьей главе представлены результаты изучения вариабельности диагностически значимых признаков при измельчении корней алтея лекарственного. В четвертой главе излагаются результаты исследований состава и содержания гидрофильной фракции Б AB алтея лекарственного: полисахаридов, дубильных веществ, органических кислот. Представлены данные изучения состава связанных аминокислот, состава свободных и связанных Сахаров корней и травы алтея лекарственного. В пятой главе приведены результаты изучения образцов крахмала, сырья «Алтея корни» и их настоя методом РАМАН-спектроскопии. Шестая глава посвящена исследованиям по стандартизации сырья «корни алтея» и разработке проекта ФС. Приведены результаты исследования по разработке и применению ВЭЖХ-методики для количественного определения связанных Сахаров в корнях алтея. В седьмой главе обобщены результаты изучения водных извлечений корней алтея: исследования микробиологической чистоты JIPC и водных извлечений, данные по влиянию некоторых технологических факторов на качество полу

б

чаемого настоя корней алтея и результаты анализа сырья «Алтея корни», реализуемого в аптечной сети города Москвы и Московской области. Приложение включает проект ФС «Корни алтея».

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Алтей (Althaea) - род травянистых растений семейства мальвовых (Malvaceae). Около 12 видов алтея произрастают в умеренной зоне Европы и Азии, из них в СНГ - 8 видов. Сырье, получаемое от алтея лекарственного - Althaea officinalis L., используется в медицинской практике. Корни алтея - Radices Althaeae - входили во все издания Государственной Фармакопеи (ГФ) нашей страны, а также включены в фармакопеи: Европейскую, Австрии, Чехии, Германии, Венгрии, Швейцарии, Румынии, Югославии, БТФ. Листья алтея включены в фармакопеи: Европейскую, Австрии, Чехии, Франции, Венгрии, Румынии, Югославии, цветки алтея - в фармакопею Франции. Качество сырья алтея лекарственного по зарубежным фармакопеям оценивается по показателю набухания либо по содержанию экстрактивных веществ, извлекаемых водой (БТФ). Действующая на данный момент в России НД на сырье «Корни алтея» имеет ряд недостатков.

Изучение вариабельности диагностически значимых признаков корней алтея при измельчении

На настоящий момент в РФ на корни алтея существуют два нормативных документа - ст.64 ГФ XI (корни алтея очищенные) и фармакопейная статья ФС 42-812-73 (корни алтея неочищенные). В соответствии с современными требованиями к НД на ЛРС было проведено расширенное изучение анатомического строения корней алтея лекарственного в соответствии с ГФ XI вып.1 стр. 277 «Техника микроскопического исследования» и ст.64 «Корни алтея». Дана микроскопическая характеристика измельченных корней алтея, отсутствующая в действующей НД. Проведено изучение вариабельности диагностически значимых признаков корней алтея при измельчении. Диагностическое значение имеют: механические волокна со слабо утолщенными стенками, обрывки сосудов, обрывки паренхимы с друзами оксалата кальция, участки пробки. Диагностически значимые признаки анатомического строения кор

ня алтея документированы фотографиями микропрепаратов поперечного среза цельного корня алтея, «давленных» препаратов измельченного сырья и порошка корней алтея (рис. 1,2, 3).

Рисунок 1. Поперечный срез корня алтея. Древесина (ув. х 35)

Рисунок 2. Измельченный корень алтея (давленный препарат).

Клетки паренхимы с друзами оксалата кальция. Группы механических волокон (ув. х 90)

Рисунок 3. Порошок корня алтея. Клетки паренхимы с друзами оксалата кальция. Фрагменты сосудов и механических волокон (ув. х 90)

Проведено изучение проявляемости диагностически значимого признака «клетки со слизью» в цельных корнях алтея и дана его количественная оценка. Установлено, что клетки со слизью достаточно равномерно распределены между коровой и древесной частью корня алтея и составляют 55-59 клеток в паренхиме и 65-67 клеток в древесине на 1мм2 корня алтея очищенного, 60-62 клетки в паренхиме и 67-69 клеток в древесине на 1мм2 корня алтея неочищенного. Показано, что обработка сырья (удаление пробки) при получении корней алтея очищенных не оказывает существенного влияния на количество клеток со слизью в сырье.

Изучение качественного состава БАВ сырья алтея лекарственного

Корни алтея применяют в медицине для получения настоя и стандартизованного сухого экстракта, в связи с чем было проведено изучение водорастворимых БАВ корней алтея: экстрактивных веществ, извлекаемых водой, полисахаридов, дубильных веществ, аминокислот, органических кислот, Сахаров.

Количественное определение всей суммы БАВ и отдельных групп проводили в образцах очищенных корней алтея гравиметрическим и титрометрическим методами по фармакопейным методикам. Установлено, что корни алтея содержат экстрактивных веществ, извлекаемых водой 54,04 ± 0,08%, суммы полисахаридов 19,78 ± 0,13%, органических кислот 1,13 ± 0,07%, дубильных веществ 0,020 ± 0,001%.

Методом ВЭЖХ изучен углеводный состав травы и корней алтея лекарственного и получены данные о качественном и количественном содержании свободных и связанных Сахаров в траве и корнях алтея.

Установлено, что корни и трава алтея лекарственного содержат свободные сахара: фруктозу, глюкозу и сахарозу. Вместе с тем качественный состав связанных Сахаров в корнях, в отличие от травы алтея, характеризуется присутствием маннозы. Содержание как свободных, так и связанных Сахаров в корнях алтея лекарственного значительно выше, чем в траве и составляет суммарно 16,57% и 8,63% связанных Сахаров, 6,7% и 2,8% свободных Сахаров соответственно (табл. 1,2 и рис. 4, 5).

ю

Проведено изучение состава связанных аминокислот корней и травы алтея лекарственного (рис. 6). Установлено, что в корнях и траве алтея содержится 19 аминокислот. Для травы алтея характерно высокое содержание в пересчете на 1г сырья аспарагина (27,17мг), глутамина (19,55 мг), пролина (12,42мг), валина (10,47мг), лейцина (14,14мг) и лизина (10,41мг). Остальные аминокислоты содержатся в количестве менее 10мг в 1г сырья. В корнях алтея в наибольшем количестве содержатся аспарагин (8,90 мг), глутамин (4,65мг) и пролин (7,35мг). Суммарное содержание связанных аминокислот в траве и корнях алтея составляет 16,7% и 4,7%. соответственно.

2911К-1 .ебр

К

0.15 "014" ШЭ-0.12" ОТГ 010" ооё" асе"

007"

асе" аоГ аоГ "а®" аса" аоГ

0 2 4 в в 10 12 14 16

N0. №те т Реак Агеа >геа Регсег УУМЬ 1 АтоиШ

д1усего! 5.417 7.637е+2 5.628 0.450 0.5%

2 (гисЮзе 6.833 4.346е+3 32.029 0.600 1 2.3%

3 д1исо&е 7.517 4.1 бОе+3 30 660 0.700 | 2.2%

4 висгевв 8.583 4.22в©+3 31.155 0.687 | 2.2%

Рисунок 4. Хроматограмма свободных Сахаров корней алтея

Таблица 1. Содержание свободных Сахаров в корнях и траве алтея лекарственного

Сахар Содержание свободных Сахаров, %

Корни алтея Трава алтея

Фруктоза 2,3 0,9

Глюкоза 2,2 1,0

Сахароза 2,2 0,9

Суммарное содержание 6,7 2,8

• I ' ' I ' Т ' I ■ ' I ' ' ' I I ' ' ' ........... . I г I II . I I [ I Р I I ) . ' ' ' | I ' ' ' Г ' т ' ' ! 1

10 16 23 25 30 35 <0

Нойгйоп (тп)

N0. Мет в РваК Агев \Гва Рвгсвг Атоип*

1 < (+>-д1иеоват1пв-РМ 20.833 1.678в+5 10.756 0.174 .

2 а-да!асЮвв-РМР 24.684 2.479в+4 1.589 0.224 2.83%

3 ¿-•гаЫповв-РМР 25.017 2.424е+4 1.554 0.224 2.22%

4 д!исовв-РМР 25.617 6.315*44 4.048 0.274 7.00%

6 (3-ху1о»в-РМР 25.800 2.851в^4 1.827 0.224 2.71%

в <а-тапповв-РМР 27.817 1.в4вв+4 1.055 0.274 1.81%

17РИ ту»-3-теСЬуЦ5-ругаг 28.817 1.18Эв+в 75.645 0.398 -

Рисунок 5. Электрофореграмма связанных Сахаров корней алтея после исчерпывающего гидролиза

Таблица 2. Содержание связанных Сахаров в корнях и траве алтея лекарственного

Сахар Содержание связанных Сахаров в сырье, %

Корни алтея Трава алтея

Галактоза 2,83 1,29

Арабиноза 2,22 1,85

Глюкоза 7,00 3,19

Ксилоза 2,71 2,30

Манноза 1,81 -

Суммарное содержание 16,57 8,63

Retention Time (пйгО

Рисунок б. Хроматограмма связанных аминокислот корней алтея

Идентификация сырья и настоев алтея методом Рамановской спектрометрии

Рамановская спектроскопия (РСС) широко используется для анализа неизвестных смесей веществ и их идентификации в фармацевтической практике.

Получены КР-спектры пяти видов крахмала различного происхождения. Установлено, что, независимо от происхождения образцов, все спектры имеют два характерных пика (7321 см'1 и 6504 см"1), что позволяет считать полученный спектр идентификационным для крахмала (рис. 7).

Сравнительный анализ спектров показал, что КР-спектр корней алтея имеет 2 пика (7321 см-1 и 6504 см-1) в той же области, что и КР-спектр крахмала.

Результаты сравнения КР-спектра корней алтея с идентификационным КР-спектром крахмала представлены на рис. 8.

10X0 8930 SCO0 ÜEDO ^вШО*" ' *" '7SX) * ~*7CO) 6SD ** 6Cttf

&И

1 - корни алтея; 2 - крахмал Рисунок 8. Кр-спсктры корней алтея и крахмала

нвгливчрчге

Рисунок 9. Кр-спектры настоев корней алтея, полученных при разных температурных режимах

1- настой корней алтея полученный при 25°С; 2 - настой корней алтея полученный при 100°С

В KP-спектре настоя корней алтея, изготовленном при 25°С, отсутствуют пики при 7321 см"1 и 6504 см"1, характерные для спектра крахмала. В KP-спектре настоя корней алтея, изготовленном при 100°С, отмечено присутствие двух пиков, характерных для спектра крахмала (рис.9). Полученные данные позволяют считать, что в настой корней алтея, полученный при комнатной температуре, крахмал не переходит.

Разработка ВЭЖХ-методики количественного определения действующих веществ корней алтея

В существующей НД на корни алтея отсутствует числовой показатель, характеризующий содержание действующих веществ. Для определения содержания связанных Сахаров в корнях алтея был выбран метод ОФ-ВЭЖХ после исчерпывающего гидролиза.

Пробоподготовка образца сырья состояла в получении гидолизата и его последующей очистке. Были подобраны хроматографические условия разделения: форма градиента, скорость потока, объем вводимой пробы и колонка. На рисунке 10 представлена хроматограмма связанных Сахаров корней алтея. Содержание связанных Сахаров в корнях алтея, определенное разработанной методикой, составило 12,52% (табл. 3).

Достоверность результатов аналитического определения доказывалась установлением пригодности хроматографической системы и установлением критериев специфичности, правильности, точности, линейности диапазона, воспроизводимости количественного определения аналита в соответствии с ОФС «Валидация фармакопейных методов». Статистическую обработку данных проводили в соответствии с требованиями ГФ XI, используя программу Microsoft Excel. Специфичность методики оценивали по совпадению времен удерживания анализируемых компонентов с соответствующими стандартами. Оценка правильности была подтверждена результатами анализа модельных смесей, при этом точность метода описывалась метрологическими характеристиками, в соответствии с рекомендациями ГФ XI.

1б

Результаты воспроизводимости методики оценивались при многократном анализе однородного аутентичного образца. Отнесение полученных пиков проводили по хроматограмме внешнего стандарта. Для подтверждения правильности отнесения проводили анализ смеси одного из образцов с внешним стандартом 1-РЬепу1-3-теЛу1-5-руто1опе (РМР). РМР образует ковалентное соединение с альдозами, которые отличаются по удерживанию в обращенно-фазной хроматографии благодаря различиям в водородных связях между остатками РМР и гидроксильными группами в углеводной части конъюгата. Без РМР сахара на обращенно-фазной колонке не удерживаются.

Retention Time (min)

Name

tR(min)

)-blucosamine-Pls

2.17

>nyl-3-methyl-5-pyr 1.43

□-eirabinose-PMF

7.83

j-galactos&-PMF

J-mannose-PMF glucose-PMP

Peak AreaÄrea Percent

Э. 147e+5

1.016e+5 1.705e+5

■40.3

Рисунок Ю. Хроматограмма связанных Сахаров корней алтея, с=1г/л

Таблица 3. Содержание связанных Сахаров корней алтея

Кате Реак Агеа (У ипкз'тз) Агеа РегсеШ сЫфл С, 8Я. %

1 -РЬепу1-3 -теШу1-5-ругаго1опе 5.55Е+05 24.462

glucosamme-PMP 9.15Е+05 40.348 1.00Е+00

(¡-таппове-РМР 1.02Е+05 4.494 1.11Е-01 6.63Е-02 2.21

£1исозе-РМР 1.71Е+05 7.52 1.86Е-01 1.92Е-01 6.40

с^а1аскке-РМР 5.71Е+04 2.519 6.24Е-02 7.57Е-02 2.52

¿•агаЫгкке-РМР 3.55Е+04 1.566 3.88Е-02 4.18Е-02 1.39

Разработанная методика была использована в анализе 10 образцов сырья «Корни алтея» (табл. 4). Таблица 4. Содержание связанных Сахаров корней алтея в отдельных образцах

Образцы ЛРС 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Содержание Сахаров, % 12,37 12,38 12,42 12,59 12,61 12,65 12,73 12,88 12,93 12,94

Относительная ошибка единичного определения связанных Сахаров полисаха-ридного комплекса корней алтея составляет ± 1,27%, что свидетельствует о воспроизводимости предложенной методики (табл.5).

Таблица 5. Метрологические характеристики ВЭЖХ-методики определения связанных Сахаров корней алтея (Р=95, п=10)

параметры í X в1 Б Р ±дх Е,% Еотносит>%

9 12,65 0,0479 0,2189 95% 2,26 0,495 3,95% 1,27%

Исследования водных извлечений корней алтея

Настои корней алтея получали по методикам ГФ XI, Приказа МЗ № 308, инструкции по применению сырья. На основании сравнительного анализа этих методик при исследовании процесса экстракции в ходе изготовления настоя алтея была разработана экспериментальная методика, заключающаяся в следующем: сырье заливали водой очищенной комнатной температуры, настаивали без нагревания при перемешивании на магнитной мешалке с частотой 5000об/мин в течение ЗОминут. Полученное извлечение центрифугировали с частотой вращения 3000 об/мин в течение 15 минут. Полученное извлечение доводили до метки водой очищенной. Соотношение сырья и экстрагента 1:10, Кр=1,3.

Дана характеристика лекарственной формы «Настой корней алтея» - приведено описание внешних признаков, прозрачность, цветность, установлены рН, вкус.

Изучено влияние дисперсности корней алтея на качество получаемых водных извлечений. С уменьшением размера частиц сырья меняются органолептические характеристики настоя: возрастает мутность настоев, они приобретают вязкую консистенцию из-за более высокого содержания слизей и крахмала, а также замедляется процесс фильтрования. С увеличением дисперсности сырья до размера частиц 2 -1мм содержание суммы полисахаридов и сухого остатка в извлечениях увеличивается, от 0,051 ±0,0002% до 0,1590 ± 0,0008% и от 0,5140 ± 0,0036% до 0,9850 ± 0,0069% соответственно.

Изучение процесса изготовления настоя из фильтр-пакетов корней алтея (размер частиц ЛРС - проходящее сквозь сито с диаметром отверстий 2мм) показало, что фильтрации настоя через бумагу фильтр-пакета практически не происходит (слизь и мелкие частицы сырья забивают поры бумаги). Это позволяет говорить о нецелесообразности использования корней алтея в форме фильтр-пакетов.

Настои корней алтея в настоящее время пациенты готовят в домашних условиях, где фильтрование проводится через несколько слоев марли. Сырье с размером частиц менее 2мм в этих условиях попадает в настой. Полученные данные показывают, что оптимальной для корней алтея, используемых для изготовления настоя в домашних условиях, является фракция с размером частиц от 3 до 2мм, обеспечивающая достаточно полную экстракцию действующих веществ.

Проведена оценка микробиологической чистоты сырья корней алтея очищенных и неочищенных, а также настоев, полученных из этого сырья. Контаминацию настоев определяли в течение 2-х суток, что обусловлено сроком хранения данной лекарственной формы по ГФ XI. Анализировали свежеприготовленный настой, через 6,24 и 48 часов после изготовления в соответствии с методиками ГФ XI. Приготовленные настои хранились в холодильнике.

Все полученные показатели укладывались в пределы допустимых норм. Однако содержание энтеробактерий в неочищенных корнях алтея выше в 8 раз (480 против 60), а содержание аэробных бактерий выше примерно в 1,5 раза, чем в очищенных корнях. В процессе хранения водных извлечений уровень микробной обсеме-ненности возрастал. Хранение настоев в прохладном месте обеспечивало их микробную стабильность в течение 2 суток с момента изготовления.

Анализ фасованной продукции «Алтея корни», реализуемой в аптечной сети города Москвы и Московской области и настоев, полученных из него

«Алтея корни» являются широко реализуемой в настоящее время в аптеках фасованной продукцией. Были изучены 7 промышленных образцов сырья и настои, изготовленные из них. Исследуемые образцы сырья существенно различались по процентному соотношению фракций корней с размером частиц от 7мм до 0,16мм (табл.6). Результаты ситового анализа промышленных образцов корней алтея показали, что сырье, поступающее в аптечную сеть под одним торговым наименованием, существенно отличается по своему качеству (внешние признаки, дисперсность).

Из каждого образца сырья был получен настой и проведен их сравнительный анализ по внешним признакам (прозрачность, цвет, запах, вкус) и содержанию действующих веществ (сухой остаток и сумма полисахаридов). Изготовленные настои корней алтея представляли собой мутные жидкости желтоватого цвета (с различным оттенком), со слабым специфическим запахом и сладковатым вкусом, рН 5,1 (табл. 8).

Таблица 6. Сухой остаток и содержание суммы полисахаридов в настоях корней

алтея различных производителей (п=8, р=95%)

образцы Содержание, %

сухой остаток сумма полисахаридов

1 1,1710 ±0,1424 0,2010 ±0,0030

2 0,7380 ±0,0100 0,1800 ±0,0015

3 0,7430 ± 0,0037 0,2780 ±0,0024

4 0,6460 ±0,0083 0,0900 ±0,0006

5 0,6710 ±0,0064 0,1070 ±0,0018

6 0,5590 ± 0,0079 0,0810 ±0,0004

Таблица 7. Органолептические характеристики настоев корней алтея разных

производителей.

об ра зц ы Органолептические характеристики настоев

Прозрачность Цвет Запах Вкус Специфические особенности

1 мутный светло-желтый слабый специфический сладковатый слабо слизистый

2 мутный желтовато-коричневый сильный своеобразный сладковатый слизистый

3 мутный оранжево-коричневый слабый своеобразный специфический сильно слизистый землистый вкус

4 мутный с легкой опалесцен-цией желто-оранжевый слабый специфический сладковатый слабо слизистый

5 мутный с легкой опалесцен-цией оранжево-коричневый слабый своеобразный сладковатый слизистый

6 мутный светло-оранжевый средний своеобраз- сладковатый слизистый -

ный 1

7 мутный, опа-лесцирующий красновато-розовый средний, неспецифический горьковатый, слизистый неспецифиче- [ ские признаки по причине наличия недопустимой примеси |

Настои, полученные из промышленных образцов сырья, отличались не только по своим органолептическим характеристикам, но и по содержанию действующих веществ. Так величина сухого остатка колебалась от 0,5590 ± 0,0079% до 1,1710 ± 0,1424%, а суммы полисахаридов от 0,0810 ± 0,0004% до 0,2780 ± 0,0024% (табл.7).

Таблица 6. Результаты ситового анализа промышленных образцов фасованной продукции «Алтея корни»

Содержание фракций сырья с размером частиц, %

более 7мм 7-5мм 5-Змм 3-2мм 2-1 мм 1-0,5мм 0,5-0,25мм 0,25-0,16 0,16 и менее

1 - - 51,7175 26,7313 21,5512 - - - -

2 - 18,5080 31,1090 12,8720 11,6770 4,4410 5,5460 8,7470 7,1000

3 10,4137 29,9659 23,3069 9,1386 8,8694 4,6047 3,4571 5,8515 4,3922

4 - 22,5700 49,5600 14,8600 10,3200 1,0200 0,4200 0,5300 0,7200

5 - 3,3233 26,6868 24,1893 25,1158 5,2366 4,5116 7,6536 3,2830

6 - - 1,3742 11,9450 24,4186 7,0825 10,9514 21,2896 22,9387

7 - 0,3217 10,1008 15,9125 20,4800 6,4340 11,7950 24,6622 10,2938

выводы

1. Получены результаты изучения вариабельности диагностически значимых признаков при измельчении корней алтея лекарственного. Диагностическое значение имеют: волокна со слабо утолщенными стенками, обрывки сосудов, обрывки паренхимы с друзами оксалата кальция и клетки со слизью. Проведена визуализация выявленных признаков.

2. Изучена проявляемость диагностически значимого признака «клетки со слизью» в цельных корнях алтея. Установлено, что клетки со слизью равномерно распределены между коровой и древесной частью корня. Обработка сырья с целью получения корней алтея очищенных не оказывает существенного влияния на количество клеток со слизью в сырье.

3. Проведена количественная оценка водорастворимых БАВ корней алтея: полисахаридов, Сахаров, аминокислот, органических кислот, дубильных веществ. Установлено, что корни алтея содержат 54,04 ± 0,08% экстрактивных веществ, извлекаемых водой, 19,78 ± 0,13% суммы полисахаридов, 1,13 ± 0,07 органических кислот, 0,02 ± 0,001% дубильных веществ.

4. Изучен аминокислотный состав корней и травы алтея, который представлен 19 соединениями. Для травы и корней алтея характерно высокое содержание аспарагина и глутамина. Суммарное содержание связанных аминокислот в траве значительно выше, чем в корнях алтея и соответственно составляет 16,7% и 4,7%.

5. Изучен углеводный состав травы и корней алтея лекарственного. Установлено, что корни и трава алтея лекарственного содержат одинаковый набор свободных сахаров (фруктозу, глюкозу и сахарозу). Качественный состав связанных Сахаров в корнях характеризуется присутствием маннозы. Содержание как свободных, так и связанных Сахаров в корнях алтея лекарственного значительно выше, чем в траве и составляет суммарно 16,57% и 8,63% связанных Сахаров, 6,7% и 2,8% свободных Сахаров соответственно.

6. Проведено изучение корней алтея, настоя и крахмала методом РАМАН-спектроскопии. Получены КР-спектры пяти видов крахмала различного происхождения. Спектры всех образцов имеют два характерных пика (7321 см'1 и 6504 см"1). Полученный спектр принят за идентификационный для крахмала. Показано, что в КР-спектре сырья присутствуют пики, характерные для крахмала.

7. Разработана ВЭЖХ-методика качественного и количественного определения связанных Сахаров полисахаридного комплекса корней алтея. Проведены валидационные исследования разработанной методики. Относительная ошибка единичного определения связанных Сахаров составляет ± 1,27%, что свидетельствует о воспроизводимости предложенной методики.

8. Дана характеристика настоя корней алтея, определено содержание суммы полисахаридов и величина сухого остатка. Проведена оценка микробиологической чистоты корней алтея очищенных и неочищенных и настоев.

9. Изучено влияние дисперсности корней алтея на качество получаемых водных извлечений. Полученные данные показывают нецелесообразность использования формы выпуска «фильтр-пакет» для сырья «Алтея корни».

10. Проведена сравнительная оценка качества фасованной продукции «Алтея корни», выпускаемого 7 фирмами-производителями. Показано, что сырье, поступающее в аптечную сеть под одним торговым наименованием, существенно отличается по своему качеству (внешние признаки, дисперсность).

11. Материалы исследований были использованы при разработке проекта ФС «Корни алтея» и проекта ОФС «Настои» для Государственной фармакопеи XII издания.

Основное содержание диссертационной работы отражено в публикациях:

1. Голубева И.С., Сорокина A.A., Самылина И.А. Дисперсность корней алтея лекарственного и качество водных извлечений // XIV Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»: тезисы докладов. - М.

2007. -16-20 апреля 2007 - с.277.

2. Голубева И.С. Изучение углеводов сырья алтея лекарственного. Сборник научных трудов конгресса «Традиционная медицина - 2007». - М. 2007. -1-Змарта 2007 - с.50-51.

3. Голубева И.С., Сорокина A.A. Исследования по стандартизации сырья и водных извлечений алтея // Фармация. 2007, №1, с. 30-33.

4. Голубева И.С., Потанина О.Г., Сорокина A.A. Количественная характеристика анатомо-диагностических признаков корней алтея // Фармация.

2008, №3, с. 25-26.

5. Голубева И.С., Сорокина A.A. Использование Рамановской спектроскопии для идентификации сырья и настоя корней алтея. // Фармация, 2009, №2, с. 10-12.

Принято к исполнению: 01.07.2009 Исполнено: 02.07.2009 Заказ № 523, Тираж: 100 экз. ООО «Типография СТД РФ», г. Москва, ул. Свободы, В/4, тел.: 491-63-11