Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Исследование химического состава некоторых видов тополя (POPULUS L.)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И МЕДИЦИНСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ФАРМАЦИИ

На правах рукописи

БРАСЛАВСКИИ ВАЛЕРИИ БОРИСОВИЧ

ИССЛЕДОВАНИЕ ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА НЕКОТОРЫХ ВИДОВ ТОПОЛЯ (РОРШК Ъ.)

15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Москва - 1994

Диссертация выполнена в Самарском государственном медицинском университете и НПО "Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений" (НПО "ВИЛАР").

Научные руководители: - доктор фармацевтических наук,

профессор В.А. КУРКИН

доктор химических наук, профессор Г.Г. ЗАПЕСОЧНАЯ

Официальные оппоненты: - доктор фармацевтических наук,

ст. научн. сотр. Д.М. Попов

- кандидат химических наук, Е.В. Дегтерев

Ведущая организация: Московская медицинская академия им.

И.М.Сеченова

Защита диссертации состоится " // " 199~^г.

часов на заседании Специализированного Ученого Совета Д.074.28.01 при Научно-исследовательском институте фармации Минзцравмедпром РФ по адресу: П7418, г.Москва, ул.Красикова, д. 3 С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИМ Фармации.

Автореферат разослан ",

Я - -/г 1994 г.

Ученый секретарь Специализированного Совета Д 074.28.01 кандидат фармацевтических наук,

старший научный сотрудник Л.М. БОБРОВА

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность теш. В настоящее время все большую популярность в медицинской практике приобретают лекарственные средства растительного происхождения, обладающие антимикробным, противовоспалительным и ранозаживляющим спектром действия. Это объясняется тем, что по сравнению с химиопрепаратами они обладают меньшей токсичностью, достаточной широтой и мягкостью терапевтического действия, меньшим количеством побочных эффектов.

Одним из перспективных источников таких лекарственных средств являются почки тополя (Gemmae Popull, Populus зр., сем. Ивовые -Salicaceae).

Так, за рубежом на основе почек тополя черного (Populus nigra L.) выпускаются, такие лекарственные формы, как настойка и мазь.

Почки тополя черного включены в Государственный реестр лекарственных средств (1992), разрешенных для применения в медицинской практике (регистрационный номер 74/684/6), однако нормативно-техническая документация (НТД) на данное сырье отсутствует, так как тлеющийся в свое время ОСТ 4286 (1932 г.) на почки тополя черного потерял свою юридическую силу. В настоящее время почки тополя черного продолжают использоваться в пищевой промышленности для производства "Рижского бальзама". Кроме того почки данного растения широко применяются в народной медицине для лечения заболеваний органов дыхания.

В этом отношении интерес представляют и другие вида тополя, химический состав которых изучен в недостаточной степени.

Кроме того, применяемые в настоящее время за рубежом методы стандартизации почек тополя и препаратов на его основе не позволяют на современном уровне объективно оценивать качество продукции.

Учитывая вышеизложенное, представляются актуальными исследования по изучению химического состава почек некоторых

перспективных видов рода Populus L., антимикробной и противогрибковой активности субстанций и основных компонентов растений, а также по разработке методов анализа сырья.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планами научно-исследовательских работ Самарского государственного медицинского университета (СГМУ), НПО "ВИЛАР" и Межведомственного Совета по фармации ¡i 47 АМН РФ (* гос.регистрации 0190.0043486).

Цель работы и основные задачи исследования. Изучение химического состава и разработка методов анализа почек некоторых видов тополя.

С этой целью решались следующие задачи:

- изучение химического состава почек тополя бальзамического (Populus balsamlíera L.), т. канадского (Р. deltoides Marsh.)(выделение и структурный анализ веществ) в сравнении с компонентным составом почек т. черного;

исследование компонентного состава почек тополя бальзамического методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ);

- разработка методик анализа почек тополя (количественное определение суммы флавоноидов и фенилпропаноидов методой спектрофотометрии с использованием Государственного стандартногс образца (ГСО) пиностробина, ВЭЖХ-методика количественного определения пиностробина в почках тополя с использованием ГС( пиностробина);

- сравнительный анализ образцов почек различных видов тополя н; содержание суммы фенилпропаноидов в пересчете на ГСО пиностробина, ; также на содержание пиностробина методом ВЭЖС;

- разработка способа получения и технологической схем] производства ГСО пиностробина;

- ис/тение показателей качества лекарственного растительног сырья "Почки тополя" и ГСО пиностробина;

- разработка нормативно-технической документации на сырье •Почки тополя" и ГСО пиностробина.

Научная новизна. В процессе изучения химического состава почек г. бальзамического и т. канадского метода адсорбционной колоночной фоматографии были выделены и идентифицированы при помощи спектральных методов и химических превращений 7 новых веществ для т. Зальзамического и 10 новых соединений - для т. канадского (флавонои-пы), а флаванон альпинон - новое вещество для растений рода Рори1из I. На основе данных УФ-, ЯМР- и масс-спектров, результатов химических превращений установлено строение нового природного соединения, имеющего структуру 2-метил-З-бутенилкофеат.

При помощи метода ВЭЖХ и на основании физико-химических особенностей веществ разработаны оптимальные условия разделения (обращенная фаза и ступенчатый градиент ацетонитрил-вода, с добавлением уксусной кислоты) и детального изучения компонентного состава почек тополя (на основании индивидуальных времен удерживания и спектральных отношений на 4 длинах волн к опорной 290 нм).

Разработаны новые методические подходы к проблеме стандартизации почек тополя, заключающиеся в том, что оценка качества сырья осуществляется по содержанию суммы флавоноидов и фенилпропаноидов в пересчете на пиностробин, который выбран в качестве государственного стандартного образца (ГСО).

На основании спектральных и физико-химических свойств пиностробина выбрана аналитическая длина волны (290 нм) и определены оптимальные условия отделения пика пиностробина на хроматограмме от других компонентов (изократический режим, система растворителей ацетонигрил-вода-уксусная кислота 50:50:1) и на на этой основе разработана оригинальная ВЗЖХ-методика количественного определения пиностробина в почках тополя с использованием ГСО пиностробина. С использованием разработанных методик во всех образцах почек тополя

из Европейской части России и Сибири выявлено высокое содержание суммы фенилпропаноидов (15 - 32 %), причем, установлено, что содержание пиностробина выше в образцах сырья из Европейского региона, а в Сибирских образцах - доминирование его халконового аналога.

С использованием колоночной хроматографии на невысоком слое силикагеля (3 см), обеспечивающей избирательную десорбцию пиностробина за счет подобранной липофильной системы растворителей (15 % хлороформ в гексане) разработан новый способ получения из почек тополя ГСО пиностробина, обеспечивающий выход 1,0 % от массы воздушно-сухого сырья.

Практическая значимость. На основании проведенных исследований разработано и внедрено:

- методика определения подлинности почек тополя (проект ВФС "Почки тополя" рассмотрен и рекомендован Комиссией по стандартизации НПО "ВШ1АР" для направления в Фармакопейный комитет МЗ РФ, справка Я 395-19 от 16.04.94 г.);

методики качественного и количественного определения флавоноидов и фенилпропаноидов в почках тополя (проект ВФС "Почки тополя", справка № 395-19 от 16.04.94 г., акт внедрения № 2 от 25.10.94 г.);

- способ получения и технологическая схема производства ГСО пиностробина (акт внедрения Л I от 24.10.94 г.);

- показатели качества стандартного образца пиностробина и методы его анализа (проект ВФС "Пиностробин - стандартный образец" рассмотрен и рекомендован комиссией по стандартизации ШО "ВИЛАР" для направления в Фармакопейный комитет МЗ РФ, справка Л 395-19 от 16.04.94 г.);

- химический состав почек тополя бальзамического и т. канадского (Еыделено л идентифицировано при помощи спгктрзльных методов и химических превращений 25 флавоноидов (флаваноны, фдаванонолы,

флавоны, флавонолы, халконы) и фенилпропаноидов (гидроксикоричные кислоты и их производные) (проект ВФС "Почки тополя", справка Л 395-19 от 16.04.94 Г.).

Результаты исследований используются в научных изысканиях и в учебном процессе Самарского государственного медицинского университета (акт внедрения № I от 24.10.94 г.)

Положения, выдвигаемые на защиту:

- результаты химического изучения почек тополя бальзамического и т. канадского;

- способ получения и показатели качества государственного стандартного образца пиностробина;

методики качественного и количественного определения флавоноидов и фенилпропаноидов с использованием ГСО пиностробина;

- ВЗЖХ-методика количественного определения ГСО пиностробина.

Апробация работы и публикации. Материалы диссертации доложены

на Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых (Куйбышев, 1988), IX Конференции молодых ученых НПО "ВИЛР" (Москва, 1989), III Молодежной конференции ботаников г. Ленинграда (Ленинград, 1990), Всесоюзной конференции по хроматографии (Геленджик, 1990), научно-практической конференции по фармации в Сибири и на Дальнем Востоке (Томск, 1991), IV Всесоюзной конференции молодых ученых по хроматографии (Джубга, 1991), областной научно-технической конференции молодых ученых и специалистов(Самара, 1992), VI Всероссийском симпозиуме по молекулярной хроматографии (Москва, 1993), 1-ом Международном научном конгрессе "Традиционная медицина и питание: теоретические и практические аспекты" (Москва, 1994).

Основное содержание диссертации опубликовано в 17 научных работах и 2 проектах временных фармакопейных статей.

ОСьеч а структура работы. Диссертационная работа изложена на ■/53 страницах машинописного текста, содержит^/ таблиц, € рисунков.

1/2 2-3873

Диссертация состоит из введения, 5 глав, выводов, списка литературы и приложения. Список литературы включает 176 наименований, из них 106 зарубежных.

Во введении обосновывается актуальность темы, формулируются цель и задачи исследования, отмечены новизна и практическая значимость полученных результатов, а также изложены основные положения, выносимые на защиту.

Первая глава посвящена обзору литературы современного состояния исследований растений рода Рори1иа 1., в котором обобщены и систематизированы сведения по изучению химического состава, фармакологических свойств и применению растений рода тополь в медицине. Главы 2-5 являются экспериментальными, в них дана характеристика объектов и методов исследования, обсуждаются результаты изучения химического состава почек двух видов тополя, разработки методик стандартизации сырья тополя и способа получения пиностробина.

В приложение вынесены материалы по разработке нормативно-технической документации.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ I. СРАВНИТЕЛЬНОЕ ХИМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ПОЧЕК ТОПОЛЯ

Результаты сравнительного исследования 12 видов тополя методом ТСХ показали, что наиболее близкими к тополю черному, по доминирующим веществам в почках, являются тополь бальзамический и т. канадский, которые широко культивируются в нашей стране.

В химическом отношении почки этих видов изучены недостаточно. Для исследования были использованы свежесобранные почки т. бальзамического и т. канадского, заготовленные в марте 1988, 1990, 1991 гг. в Куйбышевском ботаническом саду. Сырье экстрагировали водным спиртом, полученный экстракт упаривали в вакууме до густого

остатка и последовательно хроматографировали на колонках силикагеля и полиамида, используя в качестве элюента смеси гексан - хлороформ и спирт - хлороформ в различных соотношениях. При этом из почек т. бальзамического были выделены 9 флавоноидов (соединения I, 2, 4-8, 10, 12) (табл.Т), среди которых 7 веществ выделены впервые из данного вида. Из иочок т. канадского было получено 10 флавоноидов (1-9, II), новых для данного вида, а флаванонол алышнон (3) впервые описан для растений рода Populus L. (табл. I)

В ходе исследований были выделены также фенилпропаноиды (13-17), относящиеся к гидроксикоричным кислотам и их производным (табл. I).

Идентификация выделенных соединений проводилась на основе физико-химических констант, данных УФ-, ПМР- и масс-спектров, а также результатов химических превращений.

I.I. Флавоноида

Флаваноновая природа 'соединений I и 2 следует из данных УФ-спектров 289, 320 пл.) и спектров ПМР, где присутствуют

сигналы протона при С-2 в виде двойного дублета с КССВ 4 и 12 Гц (химический сдвиг ~ 5,5 м.д.) и сигналы протонов при G-3 в виде двух двойных дублетов с КССВ 12 и 17 Гц для аксиального протона при 3,2 м.д. и 4 и 17 Гц для экваториального протона при 2,8 м.,д. (рис. I).

Анализ спектральных данных, а также сопоставление физико-химических констант позволило идентифицировать соединения I и 2 как 5-гидрокси-7-метокси- и 5,7-дигидроксифлзванон соответственно.

Соединение 3 является флаваноноловым аналогом пиностробина (I), что следует из данных ПМР-спектра (дейтероацетон), в котором, в частности, присутствуют два дублетных сигнала с КССВ 17 Гц при 3,24 и 2,29 м.д., принадлежащих соответственно протонам Н-2 и Н-3. Флаваноколовая природа соединения 3 подтверждается также данными УФ-спектров (^тах29о), а также характерным пиком иона M-I7 с m/z 269 (68%) в его масс спектре.

3-3873

Таблица I

Физико-химические константы веществ, выделенных из почек тополя бальзамического и тополя канадского

» Вещество Состав М+ Тпл.ОС А. Е*он, нм шах

1 г 3 л 5 б

ФЛАВОНОИДЫ

Ф Л А В А Н 0 Н Ы

I. Пиностробин С1бН1 А 270 96- 98 289, 325 пл

2. Пиноцембрин °15Н12°4 256 193-195 289, 325 пл

. Ф Л А В А нон'олн

3. Альпинон °1бН1 А 286 176-179 290, 325 ПЛ

Ф Л А БОНЫ

4. Хризин С15Н10°4 254 232-285 270, 335

5. Тектохризин С1бН12°Д 268 144-1 47 271, 332

6. Апигенин С15Н10°5 270 341 -343 270, 340

Ф Л А В 0 Н 0 Л Ы

7. Галантин С15Н10°5 270 220-223 267, 360

8. Кемпферол С15Н10°6 286 285-287 267, 360

9. Кверцетин с15ню07 302 302-304 257, 269пл, 37С

10. 7-Метил- 316 248-250 256, 270пл, 37С

кверцетин 16 12 7

II. Изорамнетин С,6Н12°7 316 301-304 256, 270ПЛ, 37С

X А Л КОНЫ

12. 2',6'-Дигидрокси- с16н1д°. 270 149-151 340

- 4'-метоксихалкон

ФЕНИЛПРОПАНОИДЫ

13. п-Кумаровая кислота °9 н8 °3 164 207-209 227, 295ПЛ, 305

14. Кофейная кислота с9 н8 о4 180 218-222 242, 299ПЛ, зге

15. Феруловая кислота сюн10°* 194 168-170 242, 290пл, 33£

16. 3,4,-диметокси- °11н12°4 208 . 142-145 235, 242, 319

ко^тая кислота

17. Изопентенилкофе ат С1Аб°Д 248 117-119 242, 299пл, 321

5-ОН

%-ЯМР-спектр ГСО пиностройина в дейтерохлороформе (200 МГц)

OCHj

J На*

СН,0

SH-Л-г

хл<р

__и

Н-Зах Н-3(

г.у

' ....... I I I |

г рр* о

Рис. I.

Наличие в IMP-спектре соединения 3 синглетного сигнала протона 5-ОН-группы при 11,98 м.д., а также присутствие в масс-спектре' пика иона А1 с m/z 166 (81%) свидетельствуют о метилировании Т-ОН-группы.

Аналогичным образом осуществлялась идентификация флавонов (4-6), флавонолов (7-II) и халкона (12).

1.2. Фенилпропаноиды

1Н-ЯМР-спектры соединений 13-17 содержат сигналы протонов H-ß и Н-а в области ~ 7,5 и 6,3-7,0 м.д. соответственно в виде дублетов с КССВ 16 Гц, что свидетельствует о транс-конфигурации двойной связи в исследуемых гидроксикоричных кислотах.

Строение ароматического кольца соединений 13, 14, 15 и 16, установленное на основании данных ЯМР- и масс-спектров, в совокупности с другими спектральными характеристиками и фюико-химическими константами позволили идентифицировать их как п-

кумаровую, кофейную, феруловую и 3,4-диметоксикоричную кислоты.

1Н-ЯМР-спектр соединения 17 (дейтероацетон) отличается от такового кофейной кислоты (14) наличием дополнительных сигналов изопентинильного остатка (м.д.): 5,60 (уш. т, 8 Гц, СН3-СН=), 4,54 (уш. с -CHg-O-), 1,64 (с,-СН3), 1,60 (д, 6 Гц, СН^=СН-).

Наличие изопентенильного остатка в молекуле подтверждается также данными масс-спектра, в котором присутствует пик молекулярного иона с m/z 248.

Совокупность данных УФ-, 1Н-ЯМР- и масс-спектров, а также анализ литературных данных по структурным исследованиям подобных производных кофейной кислоты позволили предложить для нового природного соединения 17 структуру 2-метил-3-0утенилкофеата (изопентенилкофеат).

Таким образом, в ходе исследования химического состава почек тополя бальзамического и т. канадского выделено 25 соединений, из которых 17 ранее не выделялись из данных видов, одно соединение (флаванонол альпинон)- впервые выделено из растений рода Populus L., а также установлено строение нового природного соединения (2-метил-3-бутенилкофеат).

2. РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ СТАНДАРТИЗАЦИИ ПОЧЕК ТОПОЛЯ

В связи с отсутствием нормативно-технической документации на почки тополя, встала задача разработки методов стандартизации данного сырья.

2.1. Качественный анализ почек тополя

Для проекта ВФС "Почки тополя" предложена качественная реакция, заключающаяся в определении в анализируемом экстракте двух диагностических флавоноидов почек тополя - пиностробина и пиноцембринч. Для этих целей предложено использовать тонкослойную хроматографию (ТСХ) на пластинках "Силуфол УФ-254" или "Сорбфил ПТСХ-П-А-УФ" (система растворителей хлороформ-спирт этиловый, 9:1).

единичного определения, -что свидетельствует об отсутствии систематической ошибки разработанной методики.

С помощью разработанной методики проанализированы образцы сырья, выращенные в Куйбышевском ботаническом саду (табл. 3). При этом наибольшее содержание суммы флавоноидов и фенилпропаноидов обнаружено в экстрактах из почек тополя бальзамического (табл. 3).

Изучение стабильности содержания суммы флавоноидов и фенилпропа ноидов в образцах сырья позволило предложить нижний предел содержания действующих веществ - не менее 15 %.

УФ-спектры спиртовых растворов экстрактов почек тополя и стандартных образцов

1 - экстракт почек тополя бальзамического (1:40000);

2 - экстракт почек тополя бальзамического в присутствии А1С1з;

3 - раствор ГСО пиностробина (0,0005 %);

4 - раствор ГСО пиностробина в присутствии А1с13;

5 - раствор феруловой кислоты (0,00048 %).

Рис. 2.

2.3. Исследования методом ВЭЖХ

Для исследования химического сотава почек т. бальзамического нами впервые был использован метод обращенно-фазовой ВЭЖХ в

градиентном режиме. Детектирование веществ осуществляли в УФ-области при пяти длинах волн одновременно. В качестве реперных веществ для идентификации пиков на хроматограммах исследуемых экстрактов использовали индивидуальные вещества, представленные в табл. 4.

Таблица 4

Величины времени удерживания (1Ц.) индивидуальных веществ и различных пиков на хроматограмме экстракта из почек Р. Ьа1зат1Гега

Индивидуальные вещества Пики на хроматограмме

экстракта

Название Я)., мин Номер пика 1Ц, мин

I 2 3 4

Кофейная кислота (14) 2.-18

п-Кумаровая. кислота (13) 2.61

Феруловая кислота (15) 2.92

Изоферуловай кислота (18) 2.91

3,4-Диме токсикоричная 4.89

кислота (16)

Апигенин (6) 5.94

Кемрферол. (8) 6.48

7-Метйлкверцетин (10) 6.46

Изопеснтенилкофеат (2-метил- 13.15 -3-бутенил-кофеат) (17)

Хризин (4) 13.39

Пиноцембрин (2) I4.32

Галангин (7) 15.72

Неидентифицированное вещество

2',б'-Дигидрокси-4-метокси- 20.81 халкон (12)

Пиностробин (1)

Тектохризин (5)

1

2 3

3

4

5

6 6

7

8 9

10

11

12

2.22 2.70 3.00 3.00 4.58

6:05 6.60 6.60 13.31

13.50 14.27 15.91 16.07 20.12

22.37 13 22.37

23.45 14 22.39

Время удерживания (табл. 4) определяли для каждого вещества в отдельности и б модельных смесях. Использовали также метод добавки

индивидуальных веществ в исследуемые экстракты.

На хроматограммах экстрактов из почек тополя бальзамического (рис. 3) присутствовали пики, соответствующие по времени удерживания соединениям 1, 2, 4-8, 10, 12-18 (табл. I, 4).

Для количественного определения пиностробина в сырье нами разработана ВЭЖХ-методика. Предложено использоеэть метод обращенно-фазовой ВЭЖХ в изократическом режиме на хроматографе "Милихром-4" с УФ-детектором при длине волны 290 нм.

ВЭЖХ-разделение компонентов экстракта из почек Рори1из Ьа1Бат11ега Ь.

Р

время, мин

Обозначения: По оси абцисс - время удерживания, мин;

по оси ординат - оптическая плотность.

Номера пиков соответствуют приведенным в таблице 4.

Рис. 3.

Анализируемый экстракт хроматографируют на колонке КАХ (2 х 64 мм, сталь) то ТУ 25-7405.003-86 с использованием стационарной фазы "Берагоп С 18 (5 мкм) (Теззек, ЧСФР) и подвижной фазы ацетонитрил-вода-уксусная кислота в соотношении 50:50:1. В методике используется ГСО пиностробина.

Метрологические характеристики методики количественного определения пиностробина представлены в табл. 5.

Таблица 5

МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ МЕТОДИКИ

_

Г X Б Р, % 1(РД) X Е, %

10 5,42 0,0994 95 2,23 - 0,221 ± 4,09

Результаты статистической обработки проведенных опытов свидетельствуют о том, что ошибка единичного определения с доверительной вероятностью 95 % составляет 4,09 %.

Наибольшее содержание пиностробина отмечено во всех образцах почек тополя бальзамического (свыше 5,0 %) (табл. 3).

С помощью разработанных методик проведен сравнительный анализ некоторых видов рода, тополь, произрастающих в Европейской части России, а также некоторых видов и гибридных форм тополя,культивируемых е Сибири. Во всех исследованных образцах отмечено достатончо высокое содержание суммы действующих веществ (15-32 %), однако при этом выявлены различия: содержание пиностробина выше в образцах сырья из Европейского региона, а в сибирских образцах доминирует его халконовый аналог.

На основании аналитических и технологических исследований разработаны показатели качества почек тополя, которые включены в проект ВФС "Почки тополя" и использованы для изучения стабильности данного лекарственного растительного сырья.

2.4. Способ получения ГСО пиностробина и проект ВФС "Пйностробин - стандартный образец"

Результаты химических и аналитических исследований нашли использование при разработке технологического способа получения из точек тополя бальзамического ГСО пиностробина, предложенного для зтандартизацуги сырья тополя и прополиса.

Исследования по оптимизации технологического процесса показали, ?то узловыми операциями являются экстракция и хроматографическое разделение. В качестве экстрагента выбран 96 % этанол. Для ¡сроматографического разделения экстрактивных веществ предложено использовать невысокий' слой силикагеля L 40/100 и элюентную смесь, гексан - хлороформ (85:15). Окончательная очистка ГСО пиностробина эсуществляется перекристаллизацией из смеси гексан-хлороформ (2:1). Зыход целевого продукта составляет 1,0 % от массы воздушно-сухого зырья.

На основе изучения стабильности 5 серий ГСО пиностробина изучены токазатели качества в ходе 3 лет хранения и оформлен проект ВФС "Пиностробин - стандартный образец".

Для количественной оценки ГСО пиностробина используется удельный токазатель поглощения 0,0004 % раствора при 289 нм (670-730).

ВЫВОДЫ

1. В результате изучения химического состава почек тополя бальзамического (Populus balBamifera L.) и т. канадского (Р. deltoides íarsh.) выделено 25 соединений, из которых 7 веществ впервые выделены из вида т. бальзамического, 10 соединений - из т. канадского, а Елэезнон альпинон - впервые описан для растений рода Populus L.

2. На основе данных УФ-, ЯМР- и масс-спектров, результатов химических превращений установлено строение нового природного соединения, тлеющего структуру 2-метил-З-бутенилкофеата и идентифици-

рованы 16 выделенных веществ, относящихся к флаванонам , флаваноно-лам, фдавонам, флавонолам, халконам и фенилпропаноидам.

3. Проведено исследование компонентного состава почек тополя методом ВЭЖХ и при этом идентифицировано в почках т. бальзамического 7 флавоноидов и 4 гидроксикоричных кислоты.

4. Научно обоснована целесообразность определения подлинности и качества почек тополя по содержанию флавоноидов и фенилпропаноидов и необходимость использования в методиках анализа ГСО пиностробина.

5. Разработаны реакции подлинности сырья и методика количественного спектрофотометрического определения суммы флавоноидов и фенилпропаноидов в почках тополя с использованием ГСО пиностробина и включены в проект ВФС "Почки тополя".

6. Разработана ВЭЖХ-методика количественного анализа сырья тополя с использованием ГСО пиностробина и включена в проект ВФС "Почки тополя".

7. Разработаны показатели качества сырья тополя, которые включены в проект ВФС на новый вид лекарственного растительного сырья - "Почки тополя".

8. Разработан способ получения и технологическая схема производства ГСО пиностробина. Изучены показатели качества ГСО пинострббина, которые включены в проект ВФС "Пиностробин - стандартный образец".

9. Показана перспективность и целесообразность использования почек тополя из различных регионов России для создания эффективных антимикробных и противогрибковых лекарственных средств.

Основное содержание работы изложено в следующих публикациях:

I. Браславский В.Б. и др. Сравнительное фитохимическое исследование

некоторых видов тополя/Браславский В.В., Гемелюк И.Г., Голубцова

Ю.В., Куркин В.А.//Тезисы докладов Всероссийской научно-

практической конференции молодых ученых, посвященных 70-летию декрета о национализации аптек. - Куйбышев, 1988. - С. 160-162.

2. Браслввский В.В., Дроздовская Г.Г. Флавоноиды почек тополя бальзамического//Труды 9 конференции молодых ученых НПО "ВИЛР": Тезисы докладов научно-практической конференции. - Москва, 1989. - С. 16-21 (Депонировано в ВИНИТИ, № I3I2-B90).

3. Браславский В.Б. и др./Фотохимическое исследование некоторых перспективных лекарственных растений/ Браславский В.Б., Ярцева И.Б., Маевская О.В., Куркин В.А.// Куйбышевскому медицинскому институту им. Д.И.Ульянова - 70: Тезисы докладов юбилейной научной сессии. - Куйбышев. -1989. - С, 33 - 34.

4. Куркин В.А., Запесочная Г.Г., Браславский В.Б. Флавоноиды почек Populus balsamifera//XnMiifl природах соединений. - 1990. - № 2.-С. 272-273.

5. Куркин В.А. и др./Флавоноиды почек Populus deItoides/Куркин В.А., Браславский В.Б., Запесочная Г.Г., Толкачев В.О.// Химия природных соединений. - 1990. - Л 4. - С. 548-550.

6. Браславский В.Б., Куркин В.А., Запесочная Г.Г. Флавоноиды почек некоторых видов тополя//Труда III молодежной конференции ботаников г. Ленинграда: Тезисы докладов научно-практической конференции. - Ленинград, 1990. - С. 60-66 (Депонировано в ВИНИТИ ß 5703-В90).

7. Куркин В.А. и др./К вопросу о стандартизации лекарственного сырья, содержащего флавоноиды и фенилпропаноиды/Куркин В.А., Маевская OiB., Браславский В.Б., Ярцева И.Б.// Применение хроматографии в пищевой, микробиологической и медицинской промышленности: Тезисы докладов- Всесоюзной научно-практической конференции. - Геленджик, 1990. - С. 85-86.

8. Браславский В.Б., Куркин В.А. Сравнительное исследование прополиса и почек тополя//Актуалыш9 вопросы фармацевтической науки и

грактики: Тезисы докладов научно - практической конференции, посвященной 25-летию фармацевтического факультета Курского медицинского института. - Курск, 1991. - Ч. I. - С. 177-178.

9. Куркин В.А., Браславский В.Б., Жданов Й.П. Перспективы создания лекарственных препаратов на основе почек тополя//Реализация научных достижений в практической фармации: Тезисы докладов республиканской научной конференции. - Харьков, 1991.- С. 190.

10.:браславский В.Б., Куркин В.А., Жданов И.П. Антимикробная активность экстрактов и эфирных масел почек некоторых видов Populus L //Растительные ресурсы.- 1991.- Т. 27, вып. 2.- С. 77- 81.

11. Браславский В.Б. и др./Количественное определение суммы флавоно-идов и гидроксикоричных кислот в почках некоторых видов Populus /Браславский В.Б., Куркин В.А., Запесочная Г.Г., Безрукова Н.А.//Растительные ресурсы.- 1991.- Т. 27, вып. 3.- 0. 130- 134.

12. Браславский В.Б., Куркин В.А. ВЭЖХ-анализ почек тополя бальзамического//Научно- техническая конференция молодых ученых и специалистов: Тезисы докладов областной конференции. - Самара, 1992. - С. 19-20.

13. Куркин В.А., Браславский В.В., Запесочная Г.Г. Исследование компонентного состава почек Populus balsamifera L. методом ВЭЖХ //Растительные ресурсы.- 1993.- Т. 29, вып. 3.- С. 85 - 90.

14. Браславский В.Б., Куркин В.А., Бакулин В.Т. Сравнительное химическое исследование некоторых видов и гибридных форм Populus L. культивируемых в Сибири//Растительные ресурсы.- 1993.- Т. 29, вып. 4.- С. 77-81.

15. Куркин В.А., Запесочная Г.Г., Браславский В.Б. Перспективы использования метода ВЭЖХ для стандартизации лекарственного сырья, содержащего фенилпропаноиды и флавоноиды // Самарскому государственному институту-университету - 75: Тезисы докладов научно-практической конференции. - Самара, 1994. - С. 98-99.

IG. Первудпшн C.B. и др. Использование настойки из почек тополя для лечения отрубьевидного лишая/Первушкин C.B., Сохина A.A., Куркин В.А., Браславский В.В., Тутаева 3.А.//Традиционная медицина и питание: теоретические и практические аспекты: материалы Первого Международного научного конгресса. - Москва, 1994. - С. 196.

17. Куркин В.А., Браславский В.Б., Запесочная Г.Г. Почки тополя -перспективный источник антимикробных и противогрибковых лекарственных средств//Традиционная медицина и питание: теоретические и практические аспекты: материалы Первого Международного научного конгресса. - Москва, 1994. - С. 172.

Подписано в печать 28.11.04 г. Формат 60x84 1/16, Оперативная печать. Уч.-изд.л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 3873.

Производственное объединение "СамВен", Самара, уп. Венцека, 60.