Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Химико-фармацевтическое и фармакокинетическое исследование нового биологически активного психотропного вещества 2,4,6,8-тетраэтил-2,4,6,8-тетраазабицикло(3,3,0)октандиона-3,7(бикарэта)

БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ ШШ и - ДЕТИЯ ВЛКСМ

На правах кукостен

КАЗАЩЕЗА Ольга Николаевна

гаГПЮ-ФАВШЖГИЧНЖОЕ И ШЧШОТШЕТНЕСКОЕ ИССЛЕДОВАВ® КОСОГО 'БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОГО ПСИХОТРОПНОГО ВЕЩЕСТВ* 2,4,в,8-!1ОТА9Тга-3(4,б,8-ТЕ!ТР.4АаШ]Ц11КГО/^,3,0/ ОтНДЙОНА-3,7 /БИКАРЭТА/.

13,00,03 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Уфа - 1992

Ч

О

Работа выполнена в Московском медицинском стоматологическом институте им.Н.А.Сешшко

Научный руководитель - доктор фармацевтических паук,

профессор А.Э.Кикяше

Офпцяальшв ошгоненгн :дохтор фаршщввтичесюа наук,

професоЬр В.П.Вуряк кандидат фармацевтических наук, допепт Г4Ф.Яозовая Ведущая организация - Пятигорски® фарыацевтичесш-й Енстггут

Защита состоится "_" 1992 г. в час.

на 8аоеданш специализированного совета К 084.35,02 при

Башкирском медицинском институте имени ХУ- летня ВЛКШ

/ 450000, Щв, ул.Ленина, 3 /.

С диссертацией иогно ознакомиться в библиотеке Банкирского государственного ыедицинсиого института.

Автореферат разослан " "_1992 г.

Ученый секретарь специализированного совета доктор медицинских наук

Э.Г.Давлетов

I - 3 -

• I ОШЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТУ.

Д^туальнооть. габотц. Применяют психотропных средств в настоящее время является основиш методом лечения психических расстрой»* ста, нрэдсташшпщшс собой одно из наиболее раопрострапеш/х заболеваний человечества, Несмотря ла то, что арсенал лекарственных средств, обладактдая антидеггресстзной активностью, достаточно велик, проблема терапия депрессий остается актуальной, ото связано я с недостаточно вноохой эффективностью дленшхся препаратов, и с наличием у них побочннх эффектов, снияавдлх безопасность их применения. Таким образом практическая психиатрия нуждается в дальнейшем изыскании пода более актташх л бозвредшя лекарственных средств. Создание транквилизаторов, эффективно устраняющих повшзеннуп работоспособность я на пмещпх побочных эффектов, становится потребностью современного общества, Такое положение определяв? необходимость дальнейшего пояска л изучения ноиос антидепрессантов, особенно таких, которые наряду о ацтаоярессяЕрзд, обладали бн в •гранквшиэирущкмя свойствам, 3, 1грсг»э того, позволяли бн проводить лечение аг/булаторио.

В 70-х годах совместными работами сотрудников ГОХ ЛИ СССР а Ка-ганского государственного медицинского института бил выявлен яовий гглаоо психотропных веаеотя - наенценнна конденсированные бисмочев~-!ТЦ, Порви!! представитель этого класса - мобикар, о 1978 года пршо-пязтея з медицинской практике, Один из гомологов мебикарз -алгбикзр наряду со свойствами транквилизатора, обладает а активирующими езой-о^еогля, характерными для антидепрессантов, проявляя таким образом еффект, присущий к гак называемым "антидепрессантам-седатикам". £ар-макологцческоэ исследование друтох'о гомолога мебикара -2,4,6,8- тет-раэтил^2,4,6(8-тетраазабицикло/3,3,0/октандиока-3,7 /бикарэта/ показало, что в нем сочетаются транквилизирующие и антидепрессявше свойства активирующего действия, причем активирующее начало у бикарэта выражено значительно сильнее, чем у альбикара, Биологически активное вещество бикарэт малотоксично, сочетает в себе свойства как транквилизатора, так и антидепрессалта, и, следовательно, является перспективном психотропным средством. В настоящее время завершена локлинические испытания бикарэта,

Для внедрения в медицинскую практику нового лекарственного вещества согласно Приказу МЗ СССР № 1509 от 30 декабря 1903 года "О дальнейших мерах по совершенствованию порядка оформления разрешения к медицинскому применении и передачи для прошшлонного произ-

водства новых лекарственных средств" необходимо исследовать его экспериментальную фармакокинеткку» а такие на стадии доклинических испытаний разработать нормативно-техническую документации па субстанцию втого вещества и на предполагаемую лекарствоийув форму-таблетки,

Фаркакоктютяческие исследования позволяет количественно оценить процессы всасывания, распределения, бкотрансфоркаши} й вывэ-деиия лекарственного вещество» рассчитать биологическу» доступность лекарственных форм препарата при различных путях введения» Такие исследования позволяют предположить механизм фармаколоигческо-го действия препаратов и дать рекомендации по созданию для шя оптимальной лекарственной формы.

Анализ литературы доказывает, что для представителя класса о'и-юштческлх бпемочевжн-бикарэта, обладающего оригинальным спектрсь психофармакологической активности, не разработаны доступные, чувствительные и специфические методики оценки качества субстанции и лекарственной формы, определения его содержания в биологической материале, не изучены закономерности процессов всасывания» распределения, метаболизма и выведения бикарэта вэ организма акспериме-нтальннх животных, связывание бикарэта компонентами крови, на ой-» ределвн наиболее эффективный способ его введения4 Что является необходам?,! условием для внедрения нового лекарственного средства в' медицинскую практику.

Таким образом, проведение исследований по разработке методик анализа нового биологически активного психотропного Ье1цеотва би-карэт в субстанции, лекарственных формах и биоматериале» такае изучение» фармакокияетики етого соединения является актуальным.

Диссертация связала с планом НИР Московского медицинского сто-, патологического института в рамках союзной проблемы 10.06"Фармация" Научного совета Ш"Фэрмэко,аогпя и фармация" АМН СССР, Номер государственной регистрации 01850081607.

Цель..работы. Цель» настоящей работы явилось изучение процессов всасывания, распределения, биотрансфсрмация» выведения бш:а~ рэта из организма экспериментальных -тавотных, исследование биологической доступности бикарэта при различных способах его введения, разработка нормативно-технической документации на субстанции и лекарственную форму ~ таблетки бикарэта, а также определение биодостулности лекарственной формы препарата.

Основные задачи исследования. Для достижения поставленной цели

тродстояло решить следующие основкш задачи: ''

- разработка методик количественного определения субстанции и лекарственной формы бикарэта}

-'разработка проектов В1С на субстанцию и лекарственную форму габлеткя бикарэта;

- разработка высокочувствительной и специфичной методики коли-юстпсшюго определения бикарзга в биообъектах j

изучение взаимодействия бикарэта с биологическим материален;

- исследование экспериментальной фармаконинетики бикарэта а экспериментах на крнеях при Енутрисооуднстом и внесооудизтнх ;пособах введения 5

- изучение скспернменталыгоЯ фарлакокииетшеп бикарэта на крошках при в/в и Ii/o введении;

« изучение ^недоступности таблеток бикарэта;

- изучение метаболизма бикарэта,

Kirwqq, 1ш??иэпяа.раб(уЕК. Впервые разработан гезохрематографн-lecKtrl способ определения итфояолачеств бпкарота т> бполог.псс-*.пх кядкостях, яозволяккшЯ провес?!! ясолецосяния по г.зуштэ З-ар-1?к0кии5гякм препарата у рззлячшг годе» жирошк /ирнси, крол'.-ки/.

Впервые изучено евпзивакио йикарзза белкаии плазмы крови а фитроцитами,

Влервие исследована фармэкокинетика бикарэта в организме эк~ шоркленталышх животных /крнсы, кролики/, проведена оценка <5'л-щогетеской доступности бикарэта при различннх(путях его введения*

Впервые изучен метаболизм бикарэта при и/о ^ведения красам, )днозначно установлена структура одного из маяорннх метаболитов фэпарата,

Впервые установлена биологическая доотуинссть таблеток бикарэта в эксперименте " in vivo » и определена скорость высвобождения [ейотвукщего начала из таблеток в эксперимента "/я уЦхо

Дргщдчеркад .дедноегь рабдтн.Разработаннне способы идептпфзка-даи изучаемого лекарственного вещестга, определения посторонних гримеоей в бикарэте просты в выполнении, специфичны, внеокочув-1твителыш,

Разработаны проекта НЮ на субстанцию и лекарственную форму-'аблетки бикарэта,

РазработашшЙ способ количественного определения бикарэта в лазме крови и моче дает возможность определять микрограммовые оличестги бикарпта в биологических жидкостях, что особенно ва-но для изучения (¡аркакок'.шетики препарата.

Способ*количественного определения бйкарэта в биологических екдкостях основан на иапользоьашпЕ отечественного оборудования, отличается простотой и высоко!! чувствительность», что додаст его доступным для практического использования в условиях клюшчеекпх исследований.

Установленный' факт более высокой биодоетупности бйкарэта при в/ы введении по сравнении о в/о позволит в дальнейшем дать рекомендации о перспективности производства игьокшюшшх растворов б в. эрэта для в/и введения ,

Внедрение результатов эабдтн, Разработанные методики контроля синтеза бйкарэта п проекта ВФО на субстанцию и таблетки бйкарэта внедрены в ИОХ АН СССР п использованы при наработке субстанции и таблеток бйкарэта для доклинических испытаний, В дальнейшем проекты КС могут быть использовали в контрольно-аналитической службс ГАНУ МЗ СССР.

Методика количественного определения бккарэта в биологических аидкостях внедрена и используется в научных исследованиях кафедры общей и биооргакичаской химии ШСИ им.Н.А«Семашко»

Апробация работн. Фрагмент!! работы апробированы на Юбилейной каучкой конференция молода учоных I ШИДЛосква»139Э/$ lia научной конференции "Актуальные проблемы фармации Западной Сибири и Урала"/Тшекь,1589/| на 3-м съезда фармацевтов Туркменской ССР /Ашхабад,IS89/{ üa двух научных конференциях колодах ученых ffiflf1 кы.Н.А.Семашкс Д'осква»I53S/SO/¡ на научной конференции Молодых ученых Дагестанского ыбяшшнекого института /Махачкала,1930/{ н: расширенном заседании квфадры обцей и баооргонэтеской хеши Ш01 км4НеА.Семашко Д'осква,I9S0/c

Пубдгкаил^. По теме диссертации опубдакошно 6 печатных рабо:

Ha saщиту выносятся»

1. Методика определений примесей 1,3-дй9тилмочовины и 1»3~дй-этидгияантотш в бпяарэте с помощью метода тонкослойной хроматографии /тех/.

2. Методика количественного гпзохроматографпческого определения бйкарэта в технических образцах субстанции и таблетках,

3. Способ количественного определения бйкарэта в биологически

ущдкостях.

4» Результаты изучения связывания бйкарэта компонента!!;! кровз

5» Результата исследования экспериментальной фармакоктгатикп в метаболизма бйкарэта.

6, Результате исследований биологической доступности таблеток

- 7 -

бптсарзта з экспериментах на кроликах.

Обгон .ту^ структура, .тгссортяцчи. Диссертациошая работа содержит следуэдие раздол«и введение, обзор литературы, 4 главы с изложением о.обстеснип". исследований, обсуждение научных результатов,вы-JWW, список цитируемой литературы, включавший 206 работ отечест-вошн-'ч и sapyöosimx авторов п прплокепяя* Печатный текст, не считал литературного указателя и приложений составляет 15? страниц. В работе приведены 23 рисунка и 36 таблиц, солгали® РАБОТУ.

I, Физико-химический анализ 2,4,6,8-тетраэтил-2,4,6,8-тбтрзэза-6 ицпкло/3,3,0/октандиона-З,7 /<5икарэта/,

Для контроля качества бикарэта /1/ при синтезе препарата мы применили катод тодкоолойной хроматографии /ТСХ/,

Р08Й05"Ш1ШИ прмдест.ш в целевом продукте I являются исходные ве-¡".оетаа при синтезе препарата - 1,3-дизтилтндантотд /II/ л 1,3-дя-сти.тючеыи'а/ПХ/, Для анализа этих соединений использовали готе» риз хрсттодафатеские пластинки' "Сялуфол" У&-Е6Б, Оптимальной ся-сти.'оЗ растворителей является опстсуа хлороформ-ацетон /2:1/.

Обп*м для обнаружения 1,11,III ятушотся детсктирутошй реактив ТО % сппртовнН раотаор фосфорнсмолибдеповой кислоты /ШК/, пределы рбиорузсряия от:я1 рсактктш соадянонпй III-составляют соот-вчтстэеняо Я мкг, 2 мкг я 5 иа>, Рмсотп с тем более чумтаптялыго-■гл для обнаружения npiaieceit II и ill являлтея, соответственно, сле-гсущие реактивы: 10 *% щелочной раствор нитропруссида натрия я I % раствор диметилглиокеша в 95 % спирте с 0,03 % раствором тиосеми-карбаоида в Ш1развв соотношении Ii5, Однако, эти проявители же-от недостаток, так как не позволяют обнаружить целевой продукт -5икарэт,

.Для определения долевого и пр.'шесиых продуктов в маточнике в качестве свидетелей использовали образцы 1,11,111 синтезированные в ;ЮХ АН СССР. -Хроматографированиэ проводили в системе растворителей хлороформ-ацетон /2\I/ и проявляли хроматографу .10 % спирто-5!5ä раствором <ШК с последующим нагреванием при 140 °С в точение 3 минут,

Экспериментально установлено, что в маточнике из синтеза ноле-зого продукта содержатся примеси II и III и неидентифицированная фимесь,

Для определения в образцах целевого продукта I возможных при-iecoii II и III на хроматографическую пластинку наносили целевой :родукт I /3000 миг/, И /2 мкг/ и III /В мкг/, В качестве прояви-■еля использовали 10 $ спиртовпй раствор сШк, В образце целевого

продукта щшвсей не обнаружено. Учитывая, что предел обкарукепяя денным реактивом 1,3~диэгилыочекпш составляет Б мкг, а 1,3-яиэ-тилгпдонтошт-2 мкг, заключили, что содержание II в целевом продукте I не превышает 0,07 а III - 0,17

Идентификации бикарэта проводили тагесо методами 3!К-,ЯМР13С-, масс-спектроскопиа. Многообразие структурной информации, подученной с помощью спектральных методов, позволяет рекомендовать пх для идентификации бикарэта.

Н' основании изучения физико-химических характеристик /тетера-тура плавления, растворимость,рН водных растворов,цветность,прозрачность, распадаекосгь таблеток и др./ и разработанных кетодкп идентификации и количественного определения составлены проект BSC на субстанцию и таблетка бикарэта,которые внедрены в КОХ АН СССР.

Изучение гидролитической устойчивости бикарэта проводили в сре~ де 25 % серной кислоты при Ю5°С. Изучение кинетики гидролиза показало, что пцролкз бикарэта протекает в соответствии с уравнением I порядка.Константа скорости гидролиза составляет 0,44- 0,01ч"» 2. Разработка методик количественного определения бикарэта. Для количественного определения бикарэта в субстанции и лекарственной Форые-теблетках предложена модификация метода Кьельдаля, исключающая перегонку с водяным парой /в отличие от методики К> I/ Данная модификация позволила упростить аппаратурное оформление, так как исключена стадия перегонки с водят,; паром, и сократить время анализа примерно на 1,5 часа.

Относительная ошибка среднего результата при доверительной вероятности 95 % не превьыает 4 0,42 % для субстанции,± 0,75 % при анализе модельной cwecu таблеток. В связи с низкой .специфичностью матода Кьельдаля нами била изучена возможность применения для анализа бикарэта метода ПХ. Разработана методика газохроматогра-фического количественного определения бикарэта в технических образцах субстанции и таблетках. Дм проведения исследований применен метод капиллярной газожвдкостной хроматографии. Определения проводили на лабораторном хроматографе "Биохрсм I" с кккроде-тектором ионизации в нламени /чувствительность по пропану 2,5*10"® мкг/. Использовали стеклянную капиллярную колонку длиной 25 м,внутренним диаметром 0,26 юл, заполненную НЕФ ХЕ-60. Анализ проводили в изотермическом рента« при температуре колонки 185°С. Тетлпе-ратура испарителя 200 °С, температура микродетектбра ионизации в пламени 220 °С, газ-носитель азот, объемная скорость на выходе из колонки 2 мл/мин, коэффициент деления потока 1/2и. Вспомогатель-

нне гззнгводсрод - 30 ?лл/шт, воздух - 300 т/тт, Измэряктнй иа-р"!;:?гр т хроглатограг/уо ялсп.пдъ птп:я, Ч^.о-ггдтолъ'ггезтг. определенна 1(Г8г.

Д'та распоп хрс'атогрЗ!.'« ¡фплошгг! потел внутренне* о гз:!гпртгг~ зэдги. В качестве стандартного габопего образга при ттр^готовтагп гсзлкЗровочтгг сисссЭ использовали е<5рэзсц б'^ярта дга:;дч псрскрк-стпллгзогзтгй го тлшщототя, а в клчеегго ги/грмтзго ovaimopra кспсггь80сэ.*л сосдявеияз яз класса здевцмвптч й^п.тастачос!г,Е: биепо-icvmi октанового ряда, гс?.'олог daxspora -2, 6-дйъ'отпя~4 ,Б--дтгг>'П!д-2,4,6,С-тзтрзазвйпиянло/Э»3,О/окгзчдпои-З,7 /альбшгар/•

Абсолютное х-ро"Л удертямшя бжярут vt внутреннего стандарта в ухаопичпх ус.;.ог::.ет составляет, соогзе'еетвбтаэ, С'-',ПО ivm п 3!,J5 глтут.

Перед начало экспвр«.мзн?оя оянташ о члетнм й!тгл-

рэтоп я вх,утр<ял!2и стандартом ояр^додяля згтви-до отнесите лмого каляброво'шогэ коэффициента В лпторхзяо соошеуентЯ о":гка«

рзта л стандарта от 1»3 да 3:1 звапон:ю ¡í^/, постоянно, что готцв-толт.ствуе? о дшейяоетя дстолторп в йтс:л дччгшсп« koniv'htr';.:!",.l указяшшх всцсств,

Относительная оштбка сре;кого ряг/льтауз гззох'рспглoi^.-¿з'.чсско-го онредолеши для гохяипвсикх сбрал'.ов субстанции а&юрогз яз яро-глэтяо* - 2,62 а для таблеток - ~ 2,21 %, Получстшо значения отклонения от среднего результата укладнватэгея в допуокяяга яорет по ИТЛ, Метод Ш приемлем для анализе бикарэта в технических образцах субстанции, а такяо для количественного определения препарата в таблетках.

3. ГазохрсглтографическиД истод определения бикарэта в биологических объектах, Изучение фармакокинетики лекарства зобмояно линь при наличии чздекяого и чувствительного метода определения его микрокояцентра-дяй в биоматериало. Разработанная вами методика состоит из двух зеновшх этапов: вндолеиия бикарэта из исследуемой биояидкости путем экстракции и количественного газохремагограйического опреде-хаппя содержания препарата в экстрактах.

Для ввделения бикарэта из биологических проб применялась жвдко-:тио-яидкостчая экстракция, Зкстрагонт, его оптш/алышй объем,рН зодной фазы, кратность и время экстракции найдены на основании изу-гепия коэффициентов распределения между органическими растворите-1ЯШ и иоделъниг.и ряствораги бикарэта в плазме крови и моче. Уста-:овлено, что оптимальными условиями выделения бикарэта из биологи-

- го -

ческих яидкостей является однократная экстракция 20-кратнш объемом хлороформа при перемешивании в течение 15 минут. Значение рН водной фазы не влияет на степень извлечения препарата.

Процент извлечения ».интервале концентраций от 5 ДО 200 мкг/мл из молельных растворов препарата в моче и плазме составляет, соответственно, 97,1 £ 1,8 % И 95,9 £ 5,3 На рис. 1 представлена обиая схема анализа бикарэта в биологических жидкостях.

Цельная кровь , центрифугирование при 3000

1 _.._об/мин в течение 10 минут

плазма крови коча

1 мл оиожидкости <-а4—-— ~

20 т хлороформа встряхивание на шейкере I_________в течение 15 минут

Водная фаШ Хлороформная фаза

I, Упаривание на испарителе до

объема I мл 2* Перенос экстракта в тестовые пробирки

3. Отдувка в токе азота досуха

4, Прибавление внутреннего стандарта

ХРОМАТОГРАФИРОВАЙИЕ Рис.. I. Общая схема анализа бикарэта в биологических гладкостях«

Полученные данные позволили в последуших экспериментах " т. п'го " судить об истинном содержании препарата в биологическом материале.

При газохроматографлческом исследовании экстрактов бисакдкос-тей животных применяли капиллярные колонки с НЕФ ПЗГ-40 М и ХЕ-60, Наиболее эффективное разделение бикарэта» внутреннего стандарта альбикара и метаболитов было достигнуто на колонка с НЖФ ШГ-40 Ы, но данная колонка для анализа бикарэта в бисскидкостях шло пригодна, так как через две недели работы колонка с НЙи? ПЭГ-40 М при оптшалыгах температурах 150-165 °С теряет эффективность и го ки становятся ассиметричшми, поэтому анализ бикарэта в бяожид-костях проводился нити на колоше с НГФ ХЕ-60. Условия хрсмато-графировашя такие яв, как при газохроматографической методике к< -лнчвсТЕекного определения бикарэта в технических образцах субста! цив и таблетках. ,

В указанных условиях время удерживания'бикарэта 20,30 мин,внутреннего стандарта альбиквра 24,15 мин, метаболитов 12,00 н 60,0! мин. Точность методики при анализе модельных образцов плазмы крови к мочп с К01шентрацией бикарэта 10 мкг/мл составляет, соответ

вонно, 1,93 % и 1,07 %„

Относительные огпюЗю! среднего результата в диапазоне определяемых концентраций бикарэта в плазма крови и моче но превышает соответственно 1 2,33 % и - 1,33 %,

Наряду с добавлением внутреннего стандарта к сухому остатку экстракта бкопробы применили и другой прием - непосредственное добавление внутреннего стандарта к биопробе до экстракции. Для молельнях смесей плазма крови в диапазоне определяемых концентраций бикарэта относительная ошибка среднего результата при этом способе добавления внутреннего стандарта не превышает 3,08 %.

Таким образом, оба способа добавления внутреннего стандарта позволяют с достаточно вмеокой точностью определять концентрацию бикарэта в биоштдкостях, - 4. Изучение экспериментальной фармакокинетики и метаболизма бикарэта»

Исследование экспериментальной йпрмакокинетики и метаболизма лекарственных средств позволяет наиболее рационально подойти к их клиническому использованию. Изучение связывания лекарственных препаратов белками плазма крови является одной нз ванных задач при 1)армакокинетических исследованиях, поскольку известно, что связывание лекаретвешшх средств белками я форменными элементами крови, монет окззивать большое влияние на значения фаркакокинежческях параметров изучаемых препаратов.

Связывание бикарэта белками плазма крови изучали методом равновесного диализа. Во внеякюа камеру установки для диализа поме-дали растворн бнкарэта в фосфатном буфере с рН = 7,4 в концентрациях 50,200,300 мкг/мл, а во внутренний - плазму крови. В контро-' яъных опытах во внутреннюю камеру помещали фосфатный буфер. Установки инкубировали в термостате при 87 °С в течение 1,2,3 часов. Зодержанио бикарэта определял!! методом ГИ. В результате исследований установлено, что в данных уолозютх бикарэт не связывается белкам! плазш крови.

При изучении связывания бикарэта эритроцитами, использовали как зельну» кровь, так в эритроциты, взвешенные в-физрастворе.

Лля этого растворы бнкарэта в концентрациях 1,2,3 мг/мл добавляли к цельной крови, взвеси эритроцитов в изотоническом растворе, а также к плазме крови а изотоническому раствору, которые служили контролем. Все растворы инкубвропали в термостате при 37 °С< б течение 1 часа, Содержанке бикарэта определяли методом ИХ» При этом установлено, что от 39,98 до 42,54 % препарата связыЕаетоя

эритроцитами,

Jfcyiíouac QajcaKojoraoTisai йтщпна, то есть оашктрнос?о8 всасывания, распределения к выведения 'препарата, проводили на decno-роддак крксах-сйьгдах, кроликах породи пожгла, Ботдао раствор« бжарота вводами крнсагд п/о,вД;,ь/г. d фар1.*.аг:слог::чсокг£ активких дозах £00 и 500 иг/кг. Кроликам банера? литхз в лозе 100 «г/кг н/о и в/в, а такло в ища таблеток но 0,15 г, Просш крови отбирала в s64sií¡iñ 24 часов /б каждой греиеиноЗ im попользовали 5-6 «рис/, у кроликов /и - 5/ отбарзля 10 проо у каз&лге кзвотиого,

a §зхаш| крио осблри^'Ш ц сбаежгав клопа в точение 24-48 ча-ooji. цсзщ)2фугароЕзли прз 0000 сбДеш в точоьпо 10 кнпус, I ил nxacxi, ыочы вкстрагцроьалп /рис Л/ и определяли сод'^елшгз бикарога в плазмз и кочо иэтедо:,: ТЕХ по ярлиэдеяпой хше вехздя-ие.По^чсшаго пр.: огоа рззулыжги цртсдокы в тзбп.1.

Таблица I,

Дзааякгз конисяграций бдкаргта в платао кровп куда после рязлядих способов его введения в дезе 200 щ/кг.

Сроил шс;.а К 0 И Ц Б II Т Р А Ц !,' Я™ Б П КАР 0 Т А , kkt/i-j.

владения,1: £íIyvpiííJ¿iii¡oo ~ uiiJipiiii^iio-iTiua нероральнои

0,С£3 S2G.S ± 2,1 69,4 ± 0,8 -

0,16? 295,8 i 1,2 . 138гВ i 2,3 -

0,25 Й50(I Í 1,8 161,4 ¿ 0,9 87,5 i 3,1

0,5 252,5 - 6,1 194,9 ¿ 2,7 «5S o i X

0,75 189,5 í 4,2 145,5 ± 2,7 77,6 ± 3,1

1,0 178,1 ¿15,7 130,3 ± 9,6 S3,8 ± 2,9

2,0 137,0 ± 2,0 37,0 Í 0,7 -.70,5 ± 0,3

4,0 80,5 - 3,3 . 66,5 ¿ 1,9 5*5,9 ¿5,0

8,0 j1? ** Х^9 SS,2 i 1,6 29,0 í 2,6

16,0 6,0 Í 1,1 8,2 £ 1,0 6,9 ± 0,2

24,0 - 0,4 i 0,3 1,? ± 0,2

..................................■ ....... ■ — ■ -.....................- ■ ■......■..... ' Еало установлено, что фармакокинетичеокие кривые, полученные

после п/о введения бпнарэта в дозах 200 и 500 мг/нг, обладают свойством сикбатности, а значения фармакокинвтических параметров но зависят от дозк препарата, Это свидетельствует о выполнении основных условий, характерных для кинетики первого порядка и, следовательно, кинетика бякарэта в плазме может описываться с помощью классических линейных моделей.

Анализ полученных экспериментальных данных проведенный на ЭШ РДР 11/04 по програше АС1НЩ /Дорохов В.В., Холодов JI.R., 1985 г/ показал, что динамика концентраций бикарэта в плазг.е крови крнс

1ра в/в введении удовлэгворитольно апроксдашруогоя двухчастевой юдальо, при и/о - едночастотюй иодаят.» с учетом гсзснваппя, а ¡рж в/м - двухчастеьоМ кодедаз с учетом всасшззпия. Лдвгтка сро-:них концентраций в плазгм крови кроликов при в/в и и/о введении

ПОХШОТОРНТЭЛЬНО ОПГСШ.'сГСГСЯ, СООТЕЗТСТЕОПИО, ураЕШШЕЯЛЯ дву::-¡астсвой модели и одночастевой модели с учетом всасывания.

Рассчитанные с помощью эти коделой фармэноклнетичесшге парл-?отры бикарэта у крыс И кроликов ириводеш в табл. 2 и табл. 3.

Таблица 2.

Значения некоторых фаргакошшотическлх параметров бикарэта у крыс.

?армзкокинетические С Я О С О Б И ВВЕДЕНИЯ

[араметрн внутривенное внутримышечное пероральное ~

Гериод полураспреде- .

гения, к 1/2, еС ,ч 0,225 ^ 0,029

[ериод полуабсорб-

(ИИ, ¿1/2, а{3 , ц

¡ериод полуэлпмина-

!онстаита скорости бсорбции,Кох -р! :онсганта скорости -ллулиации, р

!Л/(ЛИН*КГ

•ч 0,227± 0,140 1 0,250 + 0,0X7

3,01 + 0,17 3,90 ± 0,01 "'■4,08 0,01

- 3,06 ± 0,Г2 2,68 + 0,17

0,23 ± 0,01 0,18 ± 0,01 0,17 + 0,01

0,56 + 0,01 0,54 ± 0,03 2,14 + 0,00

3,32 ± 0,05 4,19 + 0,01 6,08 + 0,02

Таблица 3, »

¡пзчеяия некоторых фармакоюшотических параметров бикарэта у кроликов,

>армакокинотические ' СПОСОБЫ ВВЕДЕНИЯ

араметры внутривенное пероральное

;еряод подурзспреде-:ения,-к 1/2 /, ч 0,21 + 0,03 —

¡ериод полуабсорб-1ИИ, Ы/2,а1з , Ч 0,2? + 0,04

¡ериод полуэлимина-;ии, к Г/2, р , ч 4,93 + 0,13 4,28 + 0,27

!онстанта скорости ¡бсорбции.Кдх^! - 2,59 + 0,39

константа скорости» ■лишнации, р , ч 0,14 + 0,01 0,16 + 0,01

'бъем распределения, г 1/Р,л/кг 0,49 + 0,03 1,51 + 0,08

¡бтий клиренс,С! /Р,? ¡лД-ин.кг ' £ 0,03 5,16 + 0,20

- 14 -

Для расчета фармакокинетических параметров паи;: пржленялоя таете метод статистических моментов, Значения фармакокинетических параметров, рассчитанные ада методом, хорош согласуются с данными, полученными с использованием линейных, моделей,

Из данных, представленных в табл.2 и 3 ьддио, что при вдасосу-дкстых' способах- введения бдкарэт быстро всасывается а распределяется по органам и тканям. Максимальная концентрация в крови при п/о введении крысам и кроликам достигается соответственно через 1,1 ч и 1,2? ч после введения препарата, а при в/м введении "рисам через 0,49 ч.

Высокая скорость всасывания бикарэта объясняется его своеобразными физико-химическими свойствами♦ хорошей растворимостью как и водо» так и дипидах, а такке отсутствием ионизации при любых значениях pH, Кажущийся объем распределения блкарата значительно прашлаот объем крови крыс и кроликов, что свидетельствует od Ш1-арвнсшюи захвате препарата тканями, Бикарэ? относительно медлон-но выводится из организма животных, причем при переходе от мелких живоганх к крупным элиминация бикарэта замедляется, Общ® клиренс бикарэта у К£)Ыс /1,21 мл/мин при п/о введении/ Миньке, чем клиренс креатиника /1,6 мл/мая/, что свидетельствует о возможной peaö-сорбции бикарэта в почечных канальцах обратно в крОБЬ,

Абсолютная степень биодоступности бикарэта, рассчитанная по методу Доста без учета различия значении констант элиминации /, для п/о и в /и введения у крыо составляет соответственно 54,9 % и 79,2; а для п/о введения препарата кроликам - 43,0 %,

Более низкая биодоступиоать бикарэта при п/о введении объясняв' ся, очевидно, пресистшьм метаболизмом препарата в печени и кишечной стенке,

Изучение динамики высвобоздения бикарэта из таблеток в воду и 0,1 н НОХ /Г = 37 °0/ показало, что в течение 5-Ю минут наблюдается SO высвобождение действующего начала. Полученные данные .свидетельствуют, что высвобождение бикарэта из таблеток не монет являться лимитирующей стадией в процессе всасывания препарата при введении таблеток. Изучение биодоступности таблеток бикарэта в эк спершентах на кроликах показало, что абсолютная степень биодоо-тупности препарата при введении таблеток составляет 35,4 %, Относ тельно низкая биодоступность бикарэта связана, как упоминалось виай, с пресистемншл метаболизмом препарата.

Изучение экскреции бикарэта из организма крыс свидетельствует о том, что бикарэт выводится ь неизменном виде в ксоолыпих количе ствах /14,9 % от введенной дозн/, о в основном в виде метаболитов

Учитывая, что Оипарэт элпяшпгруот из организма Гчрио в значитоль-юЗ степош по в неизменном виде, представляло интерес установить ос-ювпыо пути бпотраисформации и идентифицировать его мажорные метаболиты.

Изучение метаболизма бшеарэта проводили методом хромато-масс-спо-стрс:.'.отрии. Для этого хлороформшо экстракты мочи вводили в испари-голь громато-масс-сиектрсмотра "Фшпгагап-ЗСОО Г". Хронатографпчеоксо наделений компонентов осуществляла на стеклянной капиллярной колон-to длиной 45 м я внутренним диаметром 0,8 км о понесенной на внутрен-шо стенки 1Ш5Е-52, при скорости газа-носителя /гелия/. 1,5 мл/ши; Гемшратурнкй рэжхзл колошей: 2 шш при 150 °С, с дальнейшим програм-Дфованпем температуры со скорость» 6 градусов в минуту до 2СО °0. la рио.2 представлена яроматограмгла суммы метаболитов при п/о ввадо-

Маос-спектр соединения /17/ с временем удерживания 20,06 мня на хрематограммо идентичен масс-спектру бикарэта. Масс-спектры /У и У35/ снятые на вершило пиков с временами удерживания 19,39 и 29,28 ш принадлежат 0-содер,-кщим метаболитам, являющимися диаотереомераш. Taicie О-содерташим является метаболит /711/ с временем удерживания 19,02 кип. Маяорным метаболитом /71/ является соединение о временем удершгваиия 21,20 ига, имеющее структуру дезэтилыюго производного бикарэтя. Идентификация этого соединения как дезэтильного производного подтверждала встречным синтезом. Текил образом, основным направлением биотрансформаиии бикарэта является //-да з этилироЕанио од-

него из У-этилышх радикалов, Однако, этот метаболит является но

первичным продуктом метабЗшзма, а образуется из диастореомеров /-оксиэтильного производного бикарзта,-

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ,

1. Изучены некоторые физико-химические характеристики /растворимость, рН и др,/ нового оригинального отечественного психотропного средства бикарэт.

2, Разработана методика контроля синтеза бккарэта, позволявшая регламентировать наличие примесей в целевом продукте в процессе получения препарата,

3. Изучена канатика кислотного гидролиза бикарэта, установлено, что гадролиа протекает по'первому порядку /константа скорости гидролиза составляет /4,4 £ 0,1/ 10" Ч*"*/,

4, Едя количественного анализа субстанции к таблеток предложена я апробирована методика с использованием кодифицированного метода Кьелъдаля /относительная скаибка определения составляет £ 0,41. % для субстанции и ~ 0,75 % щш анализе модельной смеол таблзток. Для анализа бикарэта в технических образцах субстанции и таблетках разработана экспрессная, селективная Я чувствительная катода ка количественного газохроматографичеокого определения /относительная ошибка определения составляет для оуботанция £ 2,62 для таблеток - £ 2,14 %,

5; На основе проведенных исододованнй и получецнцх результатов разработана проекта ШО как на оудаштшо бякарзта, так и ка таблетки,

6» Определены оптимальные условия извлечения бш:ара?а из бцолог'дче-ских жидкостей, позволяющие ввдедить из мочи 97,1 е из плазмы крови - 65,9 %, Разработана методика определения микроколичеств бккарэта в биологическом материале методом капиллярной ПК.

7» Изучено взашодеМтвчв бикарзта с компонентами крови, Уотанав-яаио, что препарат не овяэываетоя белками плазмы, но до 44,8 % связывается эритроцитами,

Исследована фармакокинвтшга бикарэта в организме экспериментам-них ШВ0Т1ШХ /крыс,кроликов/ при различных способах введения. Рассчитаны фарг.акокинегичеакле параметры о использованием линейных недолей и метода статистических моментов,

9. Изучена абсолютная биодоступность бикарэта при различию внесо-судиотых способах введения. Установлено, что абсолютная биодоступность при а/о введении препарата крысам /54,88 %/ паче, чем

при в/м введении /75,13 $/» Абсолютная биодоступность таблеток бикарзта у кролтов составляет 35,4 %.

10« Исследование экскреции бикарзта показало» что основным путем выведения препарата в неизменном вида является почечная зкскрецля,

II* Изучен метаболизм бикарзта, Установлено, что основным простом биотраисформацш препарата является'дезэтюгшоэ производное -2,4, 6-триэтйл-2,4,6,8-т0траазаб1щтпзл-о/3,3,о/октаготон-3,7»

ОПИСОК РАБОТ» ОПУБЛИКОВАННЫХ КО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Казанцева 0*Н», Бэрлянд Л,С., Кшишшк А,8, Количествешюе определение бкцякляческлх бисмочевин в плазме крови методом газо-яадкостной хроматографии//8-й съезд фармацевтов Туркменской ССРг Тез. докл»-Аикабад, 198 9 .-£.227-223,

2. Казанцева 0,Н; Идентификация бициклических бисмочевин методом Ш»-Леп».в ШИШИ Д-В 17499,-^Л«-1989с-Ю с.

3. Казанцева 0»Н.Газохроматографкчосяий анализ ТЭЦ с пспользова-нием метода внутреннего о$аШшрга//КШл.ыолоден.конфЛ !Ш: Тез, дом ,-М 1920,-4» 187-188.

■ 4, Каззнцева О.Н,,Берлянд Книжник А.З. Идентификация бицик-

лтпссгсих бисмочеьин и побочных продуктов их синтеза методом тсн-коелойной хро1дато1рафий//Актуаяыше проблем фармации Западной Сибири я Урала,Сб.1шучп.тр4Свйрдловск.-1Ш9.-С»86-88.

5» Казанцева 0,11. Изучение фармякокшегики 13П при пероральном способе введения препорага//Йаута«койф.молод.уче1ас£{Тез.докл;-¡Лахачкала, 1990,-0 »835»

б! Прокопов А,А.,Берлянд А.С,,С.С»Спектор, Казанцева О.Н.» Биодоо-тулность транквилизатора ТЭП в опытах Ден.. в