Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Градиентный вариант высокоэффективной жидкостной хроматографии как унифицированный метод определения наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ

Актуальность проблемы. Высокоэффективная жидкостная хроматография в настоящее время стала одним из самых мощных аналитических методов, главным преимуществом которого является, прежде всего, возможность определения максимально широкого диапазона веществ, Потенциальные возможности ВЭЖХ создали в фармацевтической химии реальные предпосылки для широчайшей унификации всего химического анализа путем -замены во многих случаях большого числа других методов и их вариантов,

Определение нарколшсских средств, психотропных и сильнодействующих веществ остается одной из наиболее актуальных проблем современного анализа: за последние 20 лет произошел взрывной рост числа злоупотреблений веществами этих групп, существенно расширился диапазон используемых для этих целей веществ.

При этом списки наркотических средств и психотропных веществ за последнее время претерпели относительно небольшие изменения (последний раз в 1998 году), Однако списки сильнодействующих веществ меняются достаточно регулярно в сторону добавления новых наименований И после каждого такого изменения необходимо создавать и утверждать новые методические рекомендации по качественному и количественному определению вновь добавленных веществ. Принимая во вин манне большую номенклатуру наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ такой подход не всегда является рациональным,

Другой не менее актуальной проблемой является разработка и внедрение скрннннговых методов анализа сложных смесей веществ. Важность этой проблемы связала со значительным увеличением количества фальсифицированной продукции на рынке России, Особенно опасно появление такой продукции в сфере обращения лекарственных средств и продуктов питания {в т.ч. биологически активных добавок).

Биологически активные добавки является отдельной проблемой. За последнее время (начиная с 1998 г.) на российском рынке начали активно регистрироваться и продвигаться Б АД, причем по темпам роста регистрации за последние 2-3 года они уже сравнимы с готовыми лекарственными средствами. Основной причиной такого бурного развития рынка БАД является то, что для БАД по сравнению с лекарственными средствами применяется существенно меньше регуляторных ограничений.

Кроме этого, при определение подлинности БАД к пище химик-аналитик сталкивается с рядом затруднений: если для лекарственных средств состав, действующие вещества и методы их анализа, как правило, хорошо изучены и доступны, то для БАД возможен такой диапазон веществ как природного, так и синтетического происхождения, что ситуация, когда аналитик не может проконтролировать состав БАД полностью не является исключительной Это позволяет недобросовестным производителям официально производить н реализовать населению БАД ненадлежащего качества.

Сейчас основным нормативным документом, регламе»ггнрующим порядок определения состава БАД является «Руководство по методам контроля качества н безопасности биологически активных добавок к пище», P4J .1672-03. Однако предложенные в этом руководстве методики описывают незначительную часть наиболее распространенных БАД. Это требует не только проведения научных изысканий по выявлению индикаторных компонентов БАД, но и новых подходов по качественному н количественному определению БАД.

Учитывая вышесказанное, актуальной является разработка унифицированных подходов к анализу наркотических средств, психотропных н сильнодействующих веществ, а также многокомпонентных лекарственных средств, биологически активных добавок к пнше,

Одним Из таких унифицированных подходов является градиентный вариант ВЭЖХ, так как в условиях этого метода возможен качественный и количественный анализ максимально большого количества всшеств различных классов и групп [] 15,116].

Благодаря таким возможностям метола ВЭЖХ его внедрение в рутинную практику фармацевтического анализа происходит весьма быстро, Еще несколько лег назад в фармакопейных статьях хроматографические методы исследования ограничивались тонкослойной, и даже бумажной хроматографией, значительно реже применяли ВЭЖХ лли качественного н количественного определения как примесей, так и основных веществ, Сегодня большинство фармакопейных статей содержит методики ВЭЖХ В зарубежных фармакопеях (BP, USP) ВЭЖХ стала настолько рутинным общим метолом, что в частных ФС кратко даются лишь самые необходимые сведения для анализа конкретного вещества нлн веществ.

Следует отметить, что до сих нор во многих лабораториях отдается предпочтение пусть менее совершенным, менее производительным и менее достоверным, но более традиционным методам исследования (титрование, качественные реакции, фотозлектроколорнметрня, спектрофотометрия, тонкослойная хроматография и др.). По нашему мнению главными причинами, сдерживающими применение ВЭЖХ на практике, являются: высокая стоимость основного и вспомогательного оборудования, повышенные требования К реактивам и материалам, а также в определенной степени потребность в квалифицированных специалистах в области хроматографии.

Таким образом, градиентный вариант ВЭЖХ как унифицированный метод анализа наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ, а также многокомпонентных лекарственных средств, биологически активных добавок к пнше должен обладать определенным набором свойств |5, 39J:

- быстрой и недорогой подготовкой пробы;

- недорогими реактивами;

- оптимальным сочетанием универсальности н селективности детектирования; • относительной простотой исполнения.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы являлась разработка унифицированных методик анализа наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ, а также многокомпонентных лекарственных средств, содержащих кодеин, и биологически активных добавок к пище.

Задачи исследования: I Разработка методик нробоподготовкн исследуемых вешеств наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ, а также многокомпонентных лекарственных средств, содержащих кодеин, и БЛД к пище.

2. Разработка состава подвижной фазы и условий градиентного элюироааиня.

3. Выбор оптимального подхода к детектированию наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ, а также многокомпонентных лекарственных средств, еодержащик кодеин, и БАЛ к пище.

Расчет и оценка параметров пригодности хроматографнческой системы в выбранных условнях. 5. Использование разработанных методик в анализе наркотических средств, психотропных н сильнодействующих веществ, а также многокомпонентных лекарственных средств, содержащих кодеин, и БАД к пище.

Научная новизна. Впервые разработана методика ВЭЖХ, позволяющая за один анализ выявлять и оценивать содержание некоторых наркотических средств, психотропных и сильнодействующих вешеств (26 веществ), качественно и количественно определять состав ряда многокомпонентных лекарственных средств (20 торговых наименований, содержащих 14 компонентов), определить содержание индикаторных компонентов ряда БАД к пище (более 20 веществ).

Практическая значимость. Предложена и внедрена методика, позволяющая в течение часа определить:

- присутствие или отсутствие в образце ряда наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ, а также их содержание;

- качественный и количественный состав многокомпонентного лекарственного средства содержащего кодеин;

- подтвердить подлинность н оценить качество некоторых БАД к пище посредством определения индикаторных веществ различных компонентов БАД к пище.

Методика внедрена в экс пертно-криминалистическом центре (ЭКЦ) при ГУВД г Москвы и ЭКЦ МВД РФ лля решения тадач по определению наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ и выявлению фальсифнпировалпых лекарственных средств. Разработаны методические рекомендации по определению наркотических средств, сильнодействующих и психотропных веществ ЭКЦ при ОУВД и ЭКЦ при УВД на метрополитене: «Общие рекомендации по использованию системы «Breeze» в ЭКЦ при ОУВД и УВД на Метрополитене».

Также методика была успешно применена в ГУ НИИ питания РАМИ для определения различных веществ в составе БАД к нише: антоцмининов и антоцианндинов, органических кислот, витаминов (Bt, Q:, Br„ РР, Вс (фолневая кислота)), и других веществ (кофеин, теобромин, тсофеллнн. гннгерол, гуп'улостероны Е и 7. бетулин, фидлантин. цитрин и и и охратоксин А и др.).

Положении, выносимыс на защиту,

1. Методика пробонодготовкн наркотических средств, психотропных н сильнодействующих веществ, а также многокомпонентных лекарственных средств, содержащих кодеин, и БЛД к пище.

2. Составы подвижной фазы и условия градиентного элюкрования.

3. Способы детектирования исследуемых веществ.

4. Пригодность предложенных хроматографическнх систем.

5. Возможность использования разработанных методик в анализе наркотических средств* психотропных и сильнодействующих веществ, а также многокомпонентных лекарственных средств, содержащих кодеин» и Б АД к пище.

ВЫВОДЫ

1. При подготовке к анализу наркотических средств, психотропных к сильнодействующих веществ, лекарственных средств и биологически активных добавок к пище рационально использовать такие универсальные растворители как вода, метанол и нх смеси, Выбор растворителя также должен определяться не только растворяющей способностью исследуемых веществ, но и общим составом образца.

2. При создании унифицированных методик ВЭЖХ рационально использовать в качестве подвижной фазы смеси типа ацетоинтрил-водньгй буферный раствор (или подкисленную воду) с рН 3,0-4.0 (как наиболее универсазьный элюэнт); а в качестве неподвижной фазы - сорбенты типа CIS (как наиболее универсальный сорбент). Для совместного определения веществ с сильно различающимся хромато|-рафн чески ы поведением необходимо применение широкого градиента концентрации органической составляющей подвижной фазы: от 5 до 90%.

3. Для надежной идентификации в скрининг оных методах анализа необходимо совпадение с библиотекой двух характеристических параметров: времени удерживания н УФ-спсктра компонента.

4. В разработанных унифицированных хроматографнческнх условиях эффективность колонок составила от 3000 т.т, до 250000 т.т. Относительное стандартное отклонение прн 5 повторных введениях не более 4,]%. Пределы обнаружения исследуемых веществ составили от 0,081 мг/л и до 2,3 мг/л, пределы количественного определения — от 0,5 мг/л и до 6,1 мг/л. Это соответствует современным требованиям к параметрам пригодности хроматографнческой системы.

5. Разработанные методики анализа успешно применены для екрннингового качественного и количественного анализа наркотических средств, психотропных и сильнодействующих веществ, а также для установления подлинности и количественного определения многокомпонентных лекарственных средств, содержащих кодеин, и биологически активных добавок к пнще. Время разделения исследуемых веществ на хроматограмме составило не более 30 минут.