Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое изучение некоторых северо-кавказских видов аконита (А. восточного, А. скученноцветкового, А. носатого) и перспектива их использования

А

■ МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ПЯТИГОРСКИЙ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи МАНУКОВ Андрей Николаевич

УДК 615.322.07:582.675.1:547.94]:581.4»6].002.3/043.3]

ФАРМАКОгаОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ НЕКОТОРЫХ СЕВЕРО-КАВКАЗСКИХ ВИДОВ АКШИТА (А.ВОСТОЧНОГО, А.СКУЧЕШОЦВЕТКОВОГО, А.НОСА-ТОГО) И ПЕРСПЕКТИВА ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ

15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации иа соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Пятигорск - 1994

Работа выполнена в Пятигорском фармацевтическом институте

Научный руководитель

Научный консультант

Официальные оппоненты:

Ведущая организация -

- доктор фармацевтических наук профессор В.А.ЧЕЛОМБИТЬКО

- доктор химических наук И.А.БЕССОНОВА

доктор фармацевтических наук, В.А.КОМПАЩЕВ

доктор фармацевтических наук, профессор,академик Инженерной Академии Украины В.П. ГЕОРГИЕВСКИЙ

Санкт-Петербургский химико-фармацевтический институт

Защита состоится 1994 г. в 9 часов

на заседании специализированного совета Д 084.45.01 по зшци-там диссертаций при Пятигорском фармацевтическом институте ( 357533, г.Пятигорск, пр-кт Калинина, II ).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пятигорского фармацевтического института.

Автореферат разослан п-УО " ¿•^¿^¿г,- ¿- С 1994 г.

Ученый секретарь специализированного совета, доктор фармацевтических наук Е.В.Компанцева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Перед фармацевтической наукой и здравоохранением России поставлена задача полного обеспечения населения лекарственный« средствами. Создание новых и совершенствование существующих фитохимичееких препаратов, организация их проншлен-ного производства и обеспечение их выпуска стабильной сырьевой базой яздявтся одной из валнейших проблем отечественной фарнаии и медицины.

Среди огромного разнообразия лекарственных растений особое место принадлежит растениям, содержащий в качестве биологически активных соединений алкалоиды. Структурные особенности и широкий спектр фармакологического действия этого важнейшего класса при -родных соединений позволили создать на их основе.иного эффектив -них лечебных средств. Среди громадного разнообразия этого природного класса соединений особое место занимают отечественные растения рода Аконит и Живокость, содержащие дитерпэновые алкалоиды.

Дитерпеновыв алкалоиды давно привлекают исследователей бла -годаря особенностям своих фармакологических свойств н оирокому спектру действия: нейгротокеичееким, местноанейтезирующим, ган -глиоблокирущим, курареподобным и стимулирующим ЦНС. Некоторые алкалоиды является уникальными биораактивами, но особую значимость приобрели антиаритмические свойства некоторых этих алка -лоидов. На основе одного из дитерпеновых алкалоидов - лаппако -нитина предложен новый отечественный препарат аллапинин» не имеющий себе аналогов. Аллапинин оказался особенно эффективным при различных формах желудочковой аритмии. Препарат не обладает отрицательным анотропным действием на ткань миокарда, чем выгодно отличается от всех применяемых в настоящее время противоарат-ыичесних средств. Основным растительным источником для получения этого препарата является среднеазиатский вид аконита - а. бело -устый.

Б связи с этим поиск новых растительных источников и расширение сырьевой базы за счет выявления новых перспективных растений других видов аконита является весьма актуальным.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось изучение химии алкалоидов трех малоизученных северо-кавказских

видов рода Aconitiu» - а. восточного (Aconitua orientale Mill.), а. скученноцветкового (A.eonfertiflorum DC.Gayer) и а. носато -го (A.oasutun ?iech. ex Eetohenb.) исследование ресурсных прог -нозов а. восточного для выявления возможности использования его как нового дополнительного источника препарата аллалинина.

Для реализации целей исследования были определены следующие задачи:

изучить алкалоидный состав малоизученных трех представителей рода Aconltun во флоре Северного Кавказа - A. orientale, A. confertifloruB, A. nasutum;

- выделить и идентифицировать основные дитерпеновые алкалоиды из изучаемых видов;

- провести сравнительную оценку алкалоидного состава из различных образцов а. восточного, собранных в различных местах произрастания на Северном Кавказе;

- определить природные ресурсы а. восточного в основных районах его произрастания на Северном Кавказе;

- установить основные анатоыо-диагностические признаки сырья изучаемых видов аконита;

- составить ВФС на надземную часть а. восточного;

. - разработать новую методику количественного определения алка -лоида мппаконитина в сырье (трава и корневище с корнями) а. восточного.

Научная новизна. Впервые изучен алкалоидный состав трех видов аконита флоры Северного Кавказа (а. восточного, а; екучен-ноцэеткового, а. носатого) и их популяции из 18 новых районов произрастания. Выявлено существование новых хеморас для а. вое -точного и показана целесообразность дальнейших исследований дн -терпеновых алкалоидов ранее изучаемых видов из новых мест произрастания.

Выделены и идентифицированы 9 дитерпеновых алкалоидов: лап-паконитин, я -дезацетиллаппаконитин, гигантин, гаппаконин,ликоя-тонин, аконосин, аконитин, 14-дцетилаконосин,, эльделин (дель -тамин) и один изохинолиновый- алкалоид - коридшг.. Впервые

для трех изучаемых видов аконита были выделены лаппаконин, аконитин, 14-аце тилаконосин, эльдалин и коридин. Впервые начато изучение алкалоидного состава а. скученноцветкового. Установлена возможность использовать а. восточный в качестве дополнительного промышленного источника для получения препарата аллапинина. Проведенный прогноз природных ресурсов а. восточного на Северном Кавказе и оценка его алкалоидного состава из разных мест произ -растания показали, что общая площадь его зарослей обставляет около 1200 га,,биологический запас сырья надземной части - 204 т, эксплуатационный - 163,5 т. Установлено, что ежегодно без ущер -ба для восстановления популяций а. восточного во всех обследованных районах Северного Кавказа (Карачаево-Черкессия, Кабардино-Балкария, Чечня, Ингушетия) можно заготовить около 50 т воздушно-сухой надземной массы.

Впервые выявлены анатомо-морфологические признаки как рекомендуемого наш для промышленного использования а. восточного, так и других изучаемых видов, что позволит подойти к оценке ис -пользуемого сырья а. восточного со стандартным общепринятым подходом.

Впервые разработан проект временной фармакопейной статьи (ВФС) на надземную часть а. восточного.

Практическая значимость работы. Выявлен новый дополнитель -ный источник препарата аллапинина - аконит восточный. Установлены основные районы его произрастания на Северном Кавказе. Уста -новлены площади зарослей и запасы надземной части а. восточного в четырех основных республиках Северного Кавказа - Карачаево - ■ Черкессии, Кабардино-Балкарии, Чечне и Ингушетии. Выявленные за- 1 пасы а. восточного на Северном Кавказе дают возможность без ущерба его природным популяциям еяегодно дополнительно заготавливать до 50 т.сырья надземной части а. восточного, что позволит./.-увеличить выпуск препарата на 15-20 кг.

Выявлены новые данные по составу дитерпеновых алкалоидов для малоизученных видов а, восточного, а. носатого и а. скучен-, ноцветкового. Показана перспективность дальнейшего изучения некоторых этих видов и введения их в культуру.

Внедрение в практику. Разработан проект В5С на траву ако -

нита восточного, который прошел рецензию в НПО "ВИМР". В прое: те обоснована возможность использования нового промышленного в; да сырья для получения препарата аллапинина.

Из института химии растительных веществ АН Республики Уэб кис тан, являющегося автором препарата аллапинин,получено под тверждение, что проведенные настоящие исследования епосебствов ли расяиреюш сырьевой базы дляпрамводетва эффективного^ ле карствешогс ерадетва аллапиллна а имеют значение для медицинской продавленное ти обеих республик.

В материалах диссертации имеется ресурсная справка, вод твередакцая проведенные на территории Северного Кавказа исслед вания, позволившие установить, что ориентировочная площадь за рослей аконита восточного в обследованных районах составляет 1200 га, а объем возможных заготовок в обследованных районах с тавляет около 50 тонн.

Основные положения, выносимые на защиту»

I. Результаты экспериментального изучения химии дитерпеновых а калоидов трех малоисследованных видов аконита - а. восточно го, а, носатого и а. скученноцветкового.

,2. Обоснование целесообразности использования в качестве допол нительного сырьевого источника:для получения препарата алла пинина - надземной части а. восточного, произрастающего на Северном Кавказе. ■

3. Результаты определения природных ресурсов а. восточного на Северном Кавказе, установленные во время экспедиционных ра бот за период с 1988 по 1992 гг.

Апробация работы. Материалы и фрагменты диссертации долоа ны и обсуждены на Всесоюзном совещании "Состояние и перспектив научных исследований по интродукции лекарственных растений" (Москва, 1990); научно-практической конференции "Флора Нижнего Дона и Северного Кавказа : Структура, динамика, охрана, пробле мы использования" (Ростов-на-Дону, 1991); научно-практической конференции, посвященной 25-летию фармацевтического факультет« Курского медицинского института "Актуальные вопросы фармацевт ческой науки и практики" (Курск, 1991).

Публикации. По материалам диссертации имеются 5 публика -ций и Я работы направлены в печать.

Личный"'вклад автора. Диссертация представляет собой самостоятельный научный труд и включает исследования автора за период с 1988 по 1992 гг. В диссертации использованы фрагменты исследований, выполненных совместно с сотрудниками лаборатории химии алкалоидов института химии растительных, веществ АН Республики Узбекистан, сотрудниками БИНа АН РФ им. В.Л.Комарова (Опорный пункт в г. Пятигорске), кафедр, фармакогнозии, фармацевтиче-! ской'химии, ботаники Пятигорского фармацевтического института. Во всех работах, выполненных в соавторстве, вклад автора выра -жается личным участием в постановке и выполнении .экспериментальных исследований и обобщении полученных результатов.

Работа выполнена на кафедрзх ботаники и фармакогнозии Пятигорского фармацевтического института в соответствии с планом научно-исследовательских работ института (номер гос. регистра -ции 01910008620) в рамках проблемы 4801 "Изучение лекарственной флоры" РАМН.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 141 странице машинописного текста и состоит из введения, 5 глав, выводов и списка цитируемой литературы, включающего 245 источников, из которых 44 иностранных автора, и приложения; иллюстрирована I схемой, 27 рисунками и 6 таблицами.

Первая глава посвящена состоянию исследований видов рода Аконит в области ботаники, химии и фармакологии дитерпеновых алкалоидов (обзор литературы).

Во второй главе обосновывается выбор объектов исследования, результаты экспедиционных обследований основных регионов Северного Кавказа и сбор образцов сырья, приводятся методики исследований.

Третья глава посвящена изучению дитерпеновых алкалоидов аконита восточного, а. носатого и а. скученноцветкового и разработке метода количественного определения аллапинина в сырье (надземная и подземная части) а. восточного.

В четвертой главе приведены материалы экспедиционных об -следований основных регионов Северного Кавказа по прогнозу природных ресурсов а.восточного и оценке алкалоидного состава его

образцов.

В пятой главе представлены результаты исследований по мор -фолого-анатомическим особенностям изучаемых видов аконита.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОЮ

Для сбора материала нами на протяжении 5 лет (с 1987 по 1992 гг.) были проведены экспедиции в следующие регионы Северного Кавказа: Ставропольский край, Карачаево-Черкессию, Кабардино-Балкарию, Северную Осетию, Чечню, Ингушетию, Дагестан, где были собраны для исследования более 30 образцов трех видов аконита -а. восточного (21 образец), а. носатого (5 оборазцов) и а. ску-ченноцветкового (5 образцов).

Изучение алкалоидного состава исследуемых видов рода

Аконит

Для получения суммы алкалоидов, ее фракционирования, последующего разделений и выделения алкалоидов была разработана схе -ма, основанная на использовании хлороформа и этанола в качестве основных экстрагентов и получеша фракций при различных значениях pH (Aj, Ag и Ад), разделения полученных фракций с помощью препаративной хроматографии на силикагеле или оксиде алюминия на индивидуальные соединения . . .

Исследования физико-химических свойств выделенных соединений (т.пл., , величина af , УФ-, ИК-, масс- и ШР-спектры) были выполнены в лаборатории химии алкалоидов ИХРВ АН Республики Узбекистан.

Аконит восточный ( Aconitum orientale Mill.)

А. восточный является единственным представителем секции Lycoctonum DC. рода Aconitum i. на Кавказе. Анализ литературных данных и хемотаксономичесний прогноз позволили заключить, что представляющий интерес для практического использования ал--калоид лаппаконитин содержится только в видах этой секции.

Учитывая, что а. восточный на Северном Кавказе имеет доволь' но значительные природные ресурсы (табл. 3 ), мы исследовали алкалоидный состав этого вида.

Из надземной части а. восточного (12 кг сырья), заготовленной в период цветения в Даутском ущелье,были получены фракции А}- - 42,173 г; А^ - 0,98 г; Ад - 1,35 г. Сумма третичных оснований составила 0,375? от массы сухого сырья.

По приведенной схеме были выделены и идентифицированы 5 ди-терпеновых алкалоидов: лаппаконитин (I), 5-дезацетиллаппакони -тин (П), лаппаконин (Ш), ликоктонин, гигактонин и один изохино -линовый алкалоид корвдин (1У).

В исследуемом образце а. восточного алкалоиды лаппаконин и коридин были выделены впервые. В образце а. восточного из Даут-ского ущелья содержание основного алкалоида лаппаконитина сос -тавило 0,16%. В другом образце (Архыз) содержание лаппаконитина составило 0,12-0,15^. В отличий от ранее исследованного образца а. восточного из Грузии (Бешиташвили и др., 1989, 1990) нам не удалось обнаружить каммаконина, ранаконина, кобузина и оргетина.

Аконит носатый ( А.пааиЪш Р1всЬ ех Не1сЬепЪ.)

А. носатый - типичный представитель секции АсоиЗ/Ьшп Ь. (= ИареИлиз 1X3. ) рода Асоп1£ит Б. В отличие от а. восточного, этот вид не образует массивных зарослей, в связи с чем запасы

ШОСОСН5

его сырья на Северном Кавказе довольно ограничены.

Учитывая, что этот вид ранее был изучен недостаточно, мы предприняли попытку более подробно исследовать алкалоидный состав этого вида. Образцы сырья а. носатого были нами собраны в Карачаево-Черкессии и Кабардино-Балкарии.

Из надземной части а. носатого (5,6 кг), образцы сырья которого были заготовлены в 1990 г. в Даутском ущелье Карачаево -Черкессии в период бутонизации,были получены фракции: А^-0,46г; к^ - 0,07 г и А^ - 0,5 г. Сумма третичных оснований составила 0,235£ в пересчете на воздушно-сухое сырье. Используя ранее приведенную методису,бш1и выделены и идентифицированы аконосин (У), 14-ацетилаконосин (У1) и аконитин (УП).

0СН3

Н

У

У1

н

он

ОСНз

УП

Из суммы алкалоидов корней а. носатого (0,8%) также были выделены аконосин, 14-ацетилаконосин и аконитин.

В отличие от исследуемого образца а.носатого, произрас -тающего в Грузии (Бешиташвили и др.,1988),нами впервые из этого вида были ввделены аконитин и 14-ацегилаконосин. За исключением аконосина, который в обоих образцах оказался главным алкалоидом, нам не удалось обнаружить минорные основания-талатизамин, изо -талатизамин, караколин, каымахонин и колуыбианин.

А. скученноцветковый (A.conf«Ttiflor\im (DC.) Gayer)

А. скученноцветковый является эндемом Кавказа и одним из немногих представителей секции Anthora DC. рода Aconitum L. Этот вид также как и а. носатый не образует зарослей. Во время экспедиционных обследований Северного Кавказа его образцы собраны в Кабардино-Балкарии, Карачаево-Черкессии, Дагестане и Став -ропольском крае, Ранее алкалоидный состав этого вида не изучался.

Из надземной части а.скученноцветкового'(1,7 кг) ,' заготов -ленного в 1991 и 1992 гг. в Кабардино-Балкарии, Безенгийском ущелье в период начало цветения,были получены фракции Aj-I2,4r; Ag-0,7 г; Ag-Ojöl г. Сумма третичный оснований в пересчете на абсолютно-сухое сырье составила 0,7£$. Используя ранее предложенную методику, впервые из этого вида был выделен эльделин (дельта-мин) СУШ). В роду Aconitum эльделин нами найден впервые, т.к. ранее он бьш обнаружен только в некоторых видах Delphinium.

Разработка метода количественного определения аллапинина в аконите восточном

Антиаритиический препарат аллапинин состоит из бромисгово-дородных солей алкалоида лаппаконитина и я-дезацетиллаппакони-

тина, где содержание последнего не более 10%.

Для оценки возможности использования сырья а. восточного в качестве нового дополнительного промышленного сырья для получения аллапинина нами был разработан новый спектрофотометрический метод количественного определения препарата в траве и подземных органах этого вида. Для анализа были использованы 6 образцов а. восточного, заготовленные в наиболее перспективных районах для промышленной заготовки (табл. I ).

Таблица I

Характеристика образцов а. восточного, используемых для количественного определения аллапинина

Кол-во Шроисхожде-Ш&веска, I Масса суммы I Содержание суммы образцов !ние образца! г !алкалоидов, г(алкалоидов в сы-_ 1 1 _I_1 рье, %_

Образец I Ущелье реки

(трава) Даут, Кара- 20,0 0,0624 0,31

чаево-Чер -кессия

Образец 2 нями)

Образец 3 Перевал Гум-

(трава) баши.Кара - 20,0 0,0593 0,29

чаево-Чер-кессия

Образец 4 (корневище с корнями) 20,0 1,1962 2,99

Образец 5 Долина Нар -

(ТраВа) бедиАоЭа^ 20'° °'1234 °'30

кария

Образец 6

(корневи- -'V 20,0 0,8204. 2,05

ще с корнями)

В отличие от ранее разработанных методов (Макхамова и др., 1989; Вешиташвили и др., 1990), определение содержания лаппакони-тина с примесью сопутствующих алкалоидов проводили в очищенной сумме алкалоидов образцов а. восточного без предварительного хроматографического разделения, т.к. нами экспериментально было установлено, что оптическая плотность остальных алкалоидов а.

восточного, не входящих в состав аллапинина, при 310 нм равна нулю.

В качестве стандарта при количественном определении аллапинина в исследуемых образцах сырья испытывали аллапинин, отвечающий требованиям ВФС, любезно предоставленный нам ИХРВ АН Республики Узбекистан. '

Содержание аллапинина в надземных и подземных ор-

ганах а. восточного в пересчете на воздушно-сухое и абсолютно-сухое сырье рассчитывали по формулам (А) и (В).

А*п *с '0,89 Д = V о Ч> (А)

сг

А *и * 100*0,89'С = -Х—2-!-о в)

Асг.т (ЮО-?)

АСТ - оптическая плотность раствора-стандарта аллапинина; А^ - оптическая плотность исследуемого раствора; в0 - навеска аллапинина, г; ш - масса сырья, г;

С0 - содержание аллапинина в стандартном образце, %\ V - потеря в массе при высушивании;

0,89 - коэффициент пересчета, равный отношению молекулярных масс лаппанонитина и лаппаконитина гидробромида.

Результаты количественного определения аллапинина в 6 образцах сырья а. восточного (А= 310 нм, Асг = 0,160) приведе -ны в табл. 2.

Таблица 2

Количественное определение аллапинина в сырье а. восточного

Навеска травы, г; (№ образца) ! ! ^ ! ! Найдено аллапинина, %

{воздушно-сухое сырье абсолютно-сухое сырье

I I 2 1 3 4

20 г (образец I) 0,176 0,2362 0,2624

20 г (образец 2) 1,402 1,8814 2,0905

1 I 2 Г

20 г (образец 3) 0,192 0,2577 0,2863

20 г (образец 4) 1,485 1,9928 . 2,2142

20 г (образец 5) 0,180 0,2416 0,2683

20 г (образец 6) 1,506 2,0210 2,2455

Таким образом, было установлено, что в исследуемых образцах в траве содержание аллаганина колеблется^от 0,23$ до 0,25% в воздушном сырье и от 0,26% до 0,28$ в абсолютно-сухом сырье; в корнях от 1,8856 до 2,02$ в воздушно-сухом сырье и от 2,09% до 2,24% в абсолютно-сухом сырье.

Прогноз природных ресурсов а. восточного на Северном Кавказе и оценка его алкалоидного состава

Учитывая, что запасы а. восточного на Северном Кавказе никем не-изучались, как не изучался его алкалоидный состав, мы предприняли попытку прогнозировать ресурсы этого вида и произ -вести оценку его алкалоидного состава. *

Расширение сырьевой базы за счет выявления растительных ресурсов а. восточного на Северном Кавказе для обеспечения потребности в препарате аллапинин даст возможность увеличить объем его производства и более рационально подойти к охране растите -льных ресурсов, служащих его источником.

Фитоценозы с участием а. восточного занимают довольно значительные территории на Северном Кавказе (табл. 3). Неэначите -льные территории а. восточный занимает в Ставропольском крае, особенно на Кавказских Минеральных Водах (район горы Бештау, ж/д станции Подкумок, северные отроги Дкинальского хребта, окрестности г. Кисловодска, гора Кабан).

Для определения запасов сырья мы устанавливали численность растений нй единицу площади, продукцию сырья (среднюю сырьевую продуктивность одного экземпляра) и площадь, на которую экстраполируются данные, полученные на учетных площадях.. Определение урожайности и запасов надземной части а. восточного проводили в 1987-1992 гг. по общепринятой методике (Борисова, 1961; Кры -лова, Шретер, 1971). Все массивы зарослей а. восточного были

Таблица 3.

Площади зарослей и запасы надземной части а. восточного в обследованных

районах Северного Кавказа

Географические пункты

(Категория! Общая I зарослей¡площадь,

1 Запас воздушно-сухого сырья."т" [биологический |эксплуатационный

1 Объем возможной 1 ежегодной заго-I товки, т

Карачаево-Черкессия

Бассейн реки Кубани 5,0+0,3

Учкулан I 48 6,20+0,4 1,2+0,2

Ущелье реки Даут I 101 13,2*0,8 11,6+0,4 . - 2,8+0,4

Эпчикский перевал Ш 45 5,8+0,7 5,0+0,2 1,3+0,7

Архыз п 182 36,0+0,3 32,0+0,8 8,6+0,5

Верховье реки Теберды ш 106 18,0+0,1 15,0+0,3 3,5+0,8

Хузрук I 76 13,0+0,4 12,0+0,2 3,6+0,3

Гумбалш I 38 6,3 +0,4 5,8+0,1 1,3+0,2

Кабардино-Балкария

Долина Нарзанов п 166 30,0+0,7 28,0+0,7 7,6+0,4

Ущелье реки Рцывашки ш 69 12,0+0,1 10,0+0,8 3,0+0,1

Ущелье реки Черек п 146 28,0+0,3 26,0+0,2 6,3+0,4

Р-он ледника Безенги ш 79 12,0+0,6 11,0+0,1. 2,4+0,3

Чечено-Ингушетия •

Кезеной Ам п 23 6,0+0,1 5,8+0,2 1,4+0,2

Итумкале I 86 14,0+0,6 13,0+0,8 3,3+0,3

Северная Осетия

Долина реки Цеи п 32 4,10+0,1 3,3+0,4 0,9+0,2

1197 204,6 163,5 47,2

разделены на Ш категории по степени их удаленности от населенных пунктов, состоянию дорог, возможности транспортирования сырья и сырьевой продуктивности. Результаты определения площа -дей зарослей и запасов надземной части а. восточного приведены в табл. 3.

Оценка алкалоидного состава а. восточного

Наши исследования по изучению содержания алкалоидов в различные фазы вегетации показали, что наибольшее содержание алкалоидов в надземной массе достигает в период бутонизации в различных образцах 0,33-0,41% от массы воздушно-сухого сырья; наименьшее в период плодоношения 0,23-0,31%; в корневищах с корнями, наоборот, наибольшее содержание алкалоидов отмечено в период плодоношения. Оно достигает в различных образцах 1,66-3,04$ от массы воздушно-сухого сырья. Максимальное содержание лаппа-конитина отмечено: в надземной части в период бутонизации 0,180,23%, наименьшее в период увядания растения - 0,062%. В., подземных органах а. восточного динамика накопления основного состава иная, чем в подземных органах.Максимум содержания лаппако-нитина в корневищах с корнями наблюдается в период плодоношения 1,83-2,24%. Причем содержание лаппаконитина было в отдельных образцах в 6-12 раз выше, чем в надземной части. Наименьшее его содержание наблюдалось в фазу бутонизации.

Учитывая, что в период бутонизации масса надземной части в 3-4 раза меньше массы растения в период цветения-плодоношения,а сумма алкалоидов не во много раз превышает сумму алкалоидов в период цветения-плодоношения, мы считаем наиболее оптимальным сроком проведения заготовки сырья надземной части в исследуемых районах период цветения-начало плодоношения. Эти сроки нами рекомендованы для всех обследованных массивов на Северном Кавказе.

Морфолого-анатомические особенности изучаемых растений

Дано полное морфологическое описание а. восточного, а. носатого и а. скученноцветкового, позволяющее выделить их наиболее характерные признаки. При изучении анатомических особенностей установлено, что общим характерным признаком для трех видов является наличие простых и изогнутых волосков, расширенных у оснований и с заостренным кончиком и наличие устьиц только на

нижней стороне листа.

Отличительным признаком является: а. восточного - простые гладкие волоски, извилистостенный эпидермис с обеих сторон листа, наличие крупных межклетников в губчатой паренхиме; а. носатого - слабое опушение листовой пластинки, глубокоизвилистостен-ный эпидермис на нижней стороне листа; а. скученноцветкового -сильное опушение нижней стороны листа, толстый слой складчатой кутикулы, прямостенный эпидермис.

ВЫВОДЫ

1. Изучен алкалоидный состав трех северо-кавказских видов рода Аконит: а. восточного, а. носатого и а. скученноцветкового, представленных образцами более чем 30 популяций,собранных в основных районах произрастания на Северном Кавказе: Карачаево-Черкессии, Кабардино-Балкарии, Чечне, Ингушетии, Северной Осетии, Дагестане и Ставропольском крае.

2. Из изучаемых видов аконита выделены и идентифицированы на основании физико-химических методов: а. восточный - дитерпено -вые алкалоиды лаппаконитин, гт-дезацетиллаппаконитин, гиган -тин, лаппаконин, ликоктонин и изохинолиновый алкалоид кори -дин; лаппаконин и коридин из а. восточного выделены впервые; а. носатый - дитерпеновые алкалоиды аконосин, 14-ацетилаконо-син и аконитин; 14-ацетилаконосин и аконитин выделены впервые; а. скученноцветковый - дитерпеновый алкалоид эльделин (дель -тамин), который ранее из этого вида не выделялся.

3. Разработан новый спектрофотометрический метод количественно -го определения аллапинина в сырье аконита восточного. Уста -новлено, что в образцах сырья, собранных в основных районах, рекомендуемых для промышленной заготовки, содержание аллапи -нина колеблется: в траве 0,26-0,28%; в корневищах с корнями-2,0Э-2,24<£.

4. На основании экспедиционных обследований осуществлен прогноз природных ресурсов а. восточного на Северном Кавказе. Уста -новлена общая площадь зарослей а. восточного (ориентировоч -но составляет 1200 га), биологический запас надземной части составляет 204 т, а эксплуатационный - 163,5 т. Определено, что наиболее рациональным сроком заготовки сырья а. восточ -

ного является период цветения-плодоношения, с обязательным четырехлетним перерывом между заготовками. Установлено, что ежегодно без ущерба для восстановления популяций можно за -гатавливать около 50 т сухой надземной массы а. восточного.

5. Выявлены основные анатомо-морфологические признаки изучае -мых видов аконита, позволяющие отличать указанные виды по выявленным морфологическим и анатомическим признакам..

6. Составлен проект ВФС на надземную часть аконита восточного, в которой обоснована возможность использования этого вида сырья как дополнительного источника аллапинина.

Основные положения диссертации изложены в публикациях:

1. Челомбитько В.А., Елисеева Л.М., Назарова .Л,Е., Денисенко О.Н., Мануков А.Н. Итоги интродукции на Северном Кавказе , ' некоторых перспективных растений семейств Маковые, Дымян -ковые и Лютиковые : Тез. докл. и сообщ. Всесоюз. конф. 28 октября-I ноября. - М., 1990. - С. 69-70.

2. Мануков А.Н., Денисенко О.Н., Челомбитько В.А. Оценка алкалоидного состава и ресурсов аконита восточного, произрастающего на Северном Кавказе // Флора Нижнего Дона и Северного Кавказа : Структура, динамика, охрана, проблемы использования : Науч.-практ. конф. : Тез. докл. - Ростов-на-Дону, 1991. - С. 66-67.

3. Мануков А.Н., Денисенко Q.H., Челомбитько В.А. Аконит вое -точный - дополнительный источник аллапинина // Актуальные вопросы фармацевтической науки и практики : Тез. докл. науч.-практ. конф., Курск, 1991. - Ч. I. - С. 197-198.

4. Мануков А.Н., Вайсов З.М., Денисенко О.Н., Челомбитько В.А. Алкалоиды Aconitxm cri«ntale // Химия природ, соединений.-1991. - » 6. - С. 864-865.

5. Мануков А.Н., Бессонова И.А., Челомбитько В.А. Алкалоиды Aconitum nasutum // Химия природ, соединений. - 1993. -» 5. - С. 770.