Фармакогностическое изучение крапивы коноплевой (Urtica cannabina L.)

Пецуха, Виктория Сергеевна

Диссертации по фармакологии → Фармацевтическая химия и фармакогнозия

Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое изучение крапивы коноплевой (Urtica cannabina L.)

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Пецуха, Виктория Сергеевна Улан-Удэ 2009 г.

Ученая степень: кандидата фармацевтических наук

ВАК РФ: 15.00.02

Автореферат диссертации по фармакологии на тему Фармакогностическое изучение крапивы коноплевой (Urtica cannabina L.)

На правах рукописи

□034В4763

Пецуха Виктория Сергеевна

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ КРАПИВЫ КОНОПЛЕВОЙ (иПТ1СА CANNABINA Ь.)

15.00.02. - фармацевтическая химия, фармакогнозия

2 6 НОЯ 2009

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Улан-Удэ 2009

Работа выполнена в Государственном .'образовательном учреждении высшего профессионального образования «Иркутский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению

и социальному развитию

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

Доктор фармацевтических наук, профессор

Федосеева Галина Михайловна

Доктор фармацевтических наук, профессор

Николаева Галина Григорьевна

Кандидат фармацевтических наук Гармаева Елена Анатольевна

ГОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию

Защита состоится « 4 » декабря 2009 года в 10 часов на заседании диссертационного совета ДМ 003.028.02 при Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН по адресу: 670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6.

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной библиотеке Бурятского научного центра СО РАН

Автореферат разослан « 3 » ноября 2009г.

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат биологических наук Хобракова В.Б.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

В настоящее время изучение и использование лекарственных растений в практике здравоохранения приобретает все большие масштабы. Это объясняется мягким пролонгированным действием биологически активных веществ растений на организм человека и почти полным отсутствием токсичности. Расширение номенклатуры лекарственных растений и средств растительного происхождения является актуальной задачей фармацевтической и медицинской науки, так как спрос на них удовлетворен менее чем на 40 % [РЛС,2007]. Одним из подходов для внедрения новых лекарственных растений в официнальную медицину является изучение растений, близких к фармакопейным видам, и широко применяемых в народной медицине. Одним из таких растений является крапива коноплевая {Urtica cannabina L.) семейства крапивные (Urticaceae). Из данных литературы известно, что наряду с крапивой двудомной, крапива коноплевая применяется в качестве кровоостанавливающего, поливитаминного и общеукрепляющего средства [Телятьев В.В., 1987; Носов A.M., 1999]. Несмотря на то, что этот вид широко распространен на всей территории Восточной Сибири, данных о его фитохимическом изучении не обнаружено.

Фармакопейным видом является крапива двудомная, у которой в качестве сырья используются листья (ГФ XI, вып. 2, Ст. 25). Следует отметить, что листья крапивы коноплевой считаются примесью и не подлежат заготовке [Инструкция..., 1987]

На основании вышеизложенного, фармакогностическое изучение крапивы коноплевой в качестве нового вида лекарственного растительного сырья является актуальным и позволит расширить сырьевую базу лекарственных растений, обладающих кровоостанавливающим действием.

Цель и задачи исследования

Целью настоящей работы явилось изучение химического состава, определение показателей подлинности и доброкачественности сырья крапивы коноплевой.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- установить химический состав и количественное содержание основных биологически активных веществ в надземной части крапивы коноплевой в сравнении с химическим составом сырья крапивы, двудомной;

- исследовать морфологическое и анатомическое строение надземной

части крапивы коноплевой и выявить основные диагностические признаки сырья;

- разработать методику количественного определения суммарного содержания флавоноидов в листьях крапивы коноплевой и крапивы двудомной;

- установить показатели доброкачественности сырья крапивы коноплевой и разработать нормативную документацию - проект фармакопейной статьи предприятия (ФСП) «Крапивы коноплевой листья».

Научная новизна работы

Изучены биологически активные вещества надземной части крапивы коноплевой. Установлено, что в их состав входят витамины (кислота аскорбиновая, каротиноиды и витамин К); флавоноиды (рутин, кемпферол, изорамнетин и их гликозиды); фенолкарбоновые кислоты (хлорогеновая, цикориевая и феруловая); дубильные вещества конденсированной и гидролизуемой групп; кумарины (умбелиферон). Полисахаридный комплекс представлен водорастворимыми полисахаридами, пектиновыми веществами и гемицеллюлозами. Мономерный состав перечисленных фракций включает в себя нейтральные моносахариды (глюкоза, арабиноза, галактоза и ксилоза) и уроновые кислоты. Изучен макро- и микроэлементный состав надземной части крапивы коноплевой (стеблей и листьев), который представлен 58 элементами, из которых доминирующими являются калий, кальций, магний, железо и цинк. Определен аминокислотный состав, идентифицированы 21 аминокислота, среди которых 8 незаменимых.

Проведены макро- и микроскопические исследования надземной части крапивы коноплевой, выявлены основные диагностические признаки для сырья - листьев крапивы коноплевой.

Разработана методика дифференциального

спектрофотометрического определения содержания суммы флавоноидов в пересчете на кверцетин, изучена динамика накопления этих веществ по фенофазам и в онтогенезе растения.

Осуществлена стандартизация сырья крапивы коноплевой. Разработан проект фармакопейной статьи предприятия (ФСП) «Крапивы коноплевой листья» и инструкция по заготовке и сушке сырья.

Практическая значимость работы

Определены анатомо-диагностические признаки сырья и предложены методики качественного и количественного анализа биологически активных соединений с использованием методов бумажной

и тонкослойной хроматографии, высокоэффективной жидкостной хроматографии и УФ - спектрофотометрии.

Разработаны Инструкция по сбору и сушке лекарственного сырья и проект ФСП на сырье «Крапивы коноплевой листья».

Материалы диссертации используются в учебном процессе кафедры фармакогнозии с курсом ботаники ГОУ ВПО «ИГМУ».

Определены эксплуатационный запас и объем возможных ежегодных заготовок сырья крапивы коноплевой на территории Баяндаевского, Зиминского, Ольхонского, Слюдянского и Усть-Ордынского районов Иркутской области.

Апробация работы и публикации

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на научно-практической конференции «Фармация XXI века: достижения, проблемы и пути их решения» (Санкт-Петербург, 2008); 63-й региональной научно-практической конференции по фармации и фармакологии (Пятигорск, 2008); 64-й региональной научно-практической конференции по фармации и фармакологии (Пятигорск, 2009); международной научно-практической конференции «Фармация Казахстана: интеграция науки, образования и производства», посвященной 30-летию химико-фармацевтического факультета ЮжноКазахстанской государственной медицинской академии (Шымкент, 2009), И-ой итоговой конференции молодых ученых Иркутского государственного медицинского университета (Иркутск, 2009).

По результатам исследований опубликовано 10 работ, из них 1 статья в периодическом издании, рекомендованном ВАК МО- и науки РФ, которые отражают основное содержание диссертационной работы.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ кафедры фармакогнозии с курсом ботаники Иркутского государственного медицинского университета ИГМУ по программе: «Лекарственные растения Сибири и Дальнего Востока», являющейся разделом (6.3) Государственной программы «Сибирь» (номер государственной регистрации 01.2.00304320).

Основные положения, выносимые на защиту

• данные фитохимического исследования надземной части крапивы коноплевой;

' • результаты морфолого-анатомического изучения сырья крапивы коноплевой;

• результаты исследований по установлению критериев подлинности и норм качества содержания биологически активных веществ в сырье крапивы коноплевой.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 145 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов четырех глав экспериментальной части, общих выводов и приложений, 37 таблиц, 16 рисунков, 23 фотографий, списка литературы, включающего 147 источников, из которых 13 иностранных.

Во введении сформулированы актуальность темы, новизна и практическая значимость работы, цель и задачи исследования.

В обзоре литературы (I глава) приводится ботаническая характеристика крапивы коноплевой и крапивы двудомной, их ареал и ресурсы, а также данные литературы по химическому составу и применению их в научной и народной медицине, и сведения о фармакологической активности крапивы коноплевой и крапивы двудомной.

Во второй главе дана характеристика объектов и приведены использованные методы исследования. Приведены методики химического, физического и физико-химического изучения лекарственного растительного сырья.

В третьей главе изложены результаты собственных экспериментальных исследований по фотохимическому изучению основных групп БАВ крапивы коноплевой и крапивы двудомной: витаминов, полифенольных соединений, углеводов, аминокислот и элементного состава. Приведены данные по разработке методики дифференциального УФ-спектрофотометрического определения содержания суммы флавоноидов в пересчете на кверцетин в листьях крапивы коноплевой и крапивы двудомной.

В четвертой главе представлены результаты изучения морфолого-анатомического строения надземной части крапивы коноплевой и установлены анатомо-диагностические признаки листьев.

Пятая глава содержит данные по разработке методов оценки подлинности и доброкачественности сырья, а также методики количественного определения содержания флавоноидов и кислоты аскорбиновой в листьях крапивы коноплевой.

Приложение включает проект фармакопейной статьи предприятия «Крапивы коноплевой листья»; ресурсную справку по заготовке сырья; инструкцию по сбору и сушке сырья крапивы коноплевой; заключение по

результатам исследования коагулирующей активности настоев из листьев крапивы коноплевой и двудомной; акт внедрения результатов морфолого-анатомического • изучения крапивы коноплевой в учебный процесс кафедры фармакогнозии с курсом ботаники ГОУ ВПО «ИГМУ».

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Объекты и методы исследования

В качестве объекта исследования служили образцы надземной части крапивы коноплевой (Urtica cannahina L.) и крапивы двудомной (Urtica dioica L.), собранные в различные фазы вегетации в разных районах Иркутской области. Сбор материала производился в период 2006 - 2008 гг. Отбор проб и анализ ЛРС проводили по общепринятым методикам ГФ XI изд. В работе использованы реактивы и стандарты веществ, отвечающие требованиям соответствующей нормативной документации.

Анатомическое исследование проводили с использованием микроскопа типа МБР-I, согласно статье «Техника микроскопического анализа» ГФ XI изд., вып. 1., с. 277-285. Микрофотографии сделаны камерой «OLYMPUS» с помощью фотонасадки МФН-3.

Исследование качественного состава проводили методами одномерной и двумерной хроматографии на бумаге (БХ) марки FN-12, FN-15, FN-16 «Filtrak», тонкослойной хроматографии (ТСХ) на пластинках «Silufol» марки UV-254 (Чехия), «Армсорб» Россия с использованием следующих растворителей: I - этилацетат- кислота ледяная уксусная (80:20); II - гексан - спирт этиловый (9:1); III - бензол -петролейпый эфир (1:1); IV - н-бутанол - кислота уксусная ледяная - вода (4:1:2); V - кислота уксусная 15%.

Оптическую плотность измеряли на спектрофотометр СФ-26, СФ-46 (JIOMO) с кварцевой кюветой с толщиной 10 мм.

Анализ извлечений методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) проводили в градиентном и изократическом режимах элюирования с использованием колонки (2x75 мм), заполненной сорбентом Nucleosil 100-5 С-18, на приборе марки GILSTON (Франция) с последующей компьютерной обработкой результатов анализа с помощью программы «Мультихром» для «Windows». •

Изучение аминокислотного состава листьев крапивы коноплевой проводили на базе химической лаборатории СИФиБР СО РАН (г. Иркутск) на аминокислотном анализаторе Amino Acid Analyzer AAA 339, производства ЧССР.

Определение элементов проводили на базе лаборатории элементного анализа Лимнологического института СО РАН (г. Иркутск)

масс-спектрометрическим методом на квадрокупольном масс-спектрометре ICP-MS Agilent 7500 се.

Статистическую обработку результатов проводили общепринятыми методами с определением средней арифметической и ошибки средней арифметической. Достоверность результатов оценивали параметрически по t-критерию Стыодента. Статистическую обработку проводили с использованием программы «Slalistica for Windows 7.0».

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. Исследования качественного состава БАВ крапивы коноплсвой

Изучение качественного состава водных и спиртовых извлечений из листьев крапивы коноплевой и крапивы двудомной на содержание основных групп биологически активных веществ (БАВ) проведено в соответствии с методами Государственной Фармакопеи XI изд. Качественными реакциями установлено присутствие: витамина К, флавоноидов, фенолкарбоновых кислот, кумаринов, дубильных веществ (гидролизуемых и конденсированных), полисахаридов и аминокислот. Наличие в сырье каротиноидов и кислоты аскорбиновой устанавливали хроматографическим методом.

Витамины. Учитывая разнообразное строение витаминов и их физико-химические свойства, мы использовали метод ТСХ в разных системах растворителей для их обнаружения и идентификации (таблица ))•

Таблица 1

Хроматографическое исследование витаминов _

Вещество Система Реактив-проявитель Флуоресценция в видимом и УФ свете Значение Rr

Кислота аскорбиновая этилацетат - кислота ледяная уксусная (80:20) водный раствор натрия 1,6-дихлорфенол-индофенолята белые пятна на розовом фоне в видимом свете 0,58

Каротиноиды а-каротин Р-каротин гексан - спирт этиловый (9:1). без проявления хроматограмм оранжевые пятна в видимом и УФ свете 0,06 0,82

Витамин К бензол -петролей-ньш эфир (1:1) кислота серная концентрированная, нагревание при 105° С свечение белого пятна в УФ свете, после проявления пятно приобретает желтую окраску в видимом свете 0,46

Фепольные соединения. Методом двумерной бумажной хроматографии водно-спиртовых извлечений из исследуемых видов крапив в системах растворителей н-бутанол - кислота уксусная - вода (4:1:2) и 15% уксусная кислота выявлены 4 зоны фенольных соединений у крапивы коноплевой и 5 зон - у крапивы двудомной. По характерной окраске зон установлены фенольные соединения: флавоноиды и фенолкарбоновые кислоты. С использованием препаративной БХ выделены соединения фенольной природы. Идентификацию веществ проводили хроматографически с использованием рабочих стандартных образцов веществ свидетелей (СОВС) и методом УФ-спектроскошш с ионизирующими добавками. Выявлено наличие в листьях крапивы коноплевой рутина, 3-рутинозида кемиферола, 3-рутинозида изорамнетина и хлорогеновой кислоты; а в листьях крапивы двудомной -рутина, 3-рутинозида изорамнетина, кофейной, синаповой и феруловой кислот.

Методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) идентифицировано 10 веществ фенольной природы, относящихся к различным классам БАВ (рисунок 1 и таблица 2).

Таблица 2

Фенольные соединения листьев крапивы коноплевой_

№ Время, мин. Высота, mV Концентрация, % Иде нти ф и ц ир о вам 11 ы е вещества

1 2.788 761.73 38.18 Умбелиферон

2 3.147 139.10 3.47 К-та галловая

3 3.381 1107.10 34.73 К-та хлорогеиовая

4 4.084 32.54 2.56 Танин

5 4.738 35.44 3.30 Эпикатехин

6 5.478 24.51 2.66 К-та кофейная

7 6.128 18.05 1.79 К-та цикориевая

8 6.76 18.24 2.30 Неиденгифицировано

9 7.799 49.05 5.20 К-та феруловая

10 9.271 1.66 0.13 Неиденгифицировано

11 11.1 -9.01 0.60 Кумарин

12 13.9 1.21 0.11 Рутин

Рисунок 1 - ВЭЖХ фенольных соединений водно-спиртового извлечения из листьев крапивы коноплевой: 1 - умбелиферон; 2 - галловая кислота; 3 - хлорогеновая кислота; 4 — танин; 5 - эпикатехин; 6 - кофейная кислота; 7 - цикориевая кислота; 8 - феруловая кислота; 9 - рутин.

Полисахаридами комплекс сырья крапивы коноплевой изучали после разделения его на отдельные фракции. 1 фракция водорастворимые углеводы; 2- пектиновые вещества; 3 и 4 -гемицеллюлозы. Количественное определение проведено гравиметрическим методом. Для каждой фракции проведен кислотный гидролиз с целью определения мономерного состава ее компонентов. Идентификация свободных моносахаридов проведена методом бумажной хроматографии с СОВС. Моносахаридный состав полученных фракций представлен как нейтральными моносахаридами (глюкоза, арабиноза, галактоза и ксилоза), так и уроновыми кислотами. Основные количественные характеристики и моносахаридный состав полученных фракций приведен в таблице 3.

Таблица 3

Состав полисахаридного комплекса листьев крапивы коноплевой _и качественный состав фракций_

Тип полисахарида Выход полисахаридов, % от массы абс. сухого сырья Качественный состав моносахаридов

1 2 3

Водорастворимые полисахариды (ВРПС) 6,1 ±0,15 глюкоза, галактоза, арабиноза

Пектиновые вещества (ПВ) 5,44 ±0,23 галактуроновая к-та, арабиноза, галактоза, глюкоза

Гемицеллюлоза А (ГЦ А) 10,43 ±0,51 глюкоза, галактоза, рамноза, арабиноза

Гемицеллюлоза В (ГЦ В) 4,43 ±0,16 глюкоза, галактоза, ксилоза

Аминокислотный состав. Установлено присутствие 21 аминокислоты, из них 8 незаменимых: треонин, изолейцин, метионин, цистеин, аргинин, валин, лейцин, фенилаланин (таблица 4). По количественному содержанию преобладающими являются глютаминовая, аспарагиновая кислоты, фенилаланин, серин, и треонин.

Таблица 4

Аминокислотный состав листьев крапивы коноплевой_

№ Аминокислота кол-во, мг/г № Аминокислота кол-во, мг/г

1 Цистеин* 1,664 12 Цистин 3,256

2 Таурин 3,160 13 Метионин* 1,929

3 Фосфоэтаноламин 0,375 14 Изолейцин* 4,975

4 Аспарагиновая 16,179 15 Лейцин* 7,245

5 Треонин* 8,794 16 Тирозин 4,971

6 Серин 8,438 17 Фенилаланин* 9,036

7 Глютаминовая 17,522 18 у-аминомасляная 2,253

8 Глицин 7,458 19 Орнитин 3,432

9 Алании 7,040 20 3-метилгистидин 9,765

10 Цитруллин 0,940 21 Аргинин*

11 Валин* 8,206

Примечание: - незаменимые аминокислоты

Элементный состав Исследования элементного состава крапивы коноплевой позволяют объективно рассматривать сырье как источник поступления микроэлементов в организм человека. В листьях и стеблях крапивы коноплевой обнаружено 7 макро-, 51 микро- и ультрамикроэлементов. Проведенное количественное определение элементов показало высокое содержание калия, кальция, магния, серы, железа и цинка. Результаты исследования позволили сделать вывод о том, что содержание важнейших макро- и микроэлементов в листьях крапивы коноплевой значительно превосходит их количество в стеблях, в то время как, содержание токсичных и потенциально токсичных элементов в стеблях растения выше, чем в листьях.

2. Количественное определение биологически активных веществ крапивы коноплевой и крапивы двудомной

Определено количественное содержание основных БАВ в надземной части крапивы коноплевой и крапивы двудомной. Установлено, что наибольшее количество действующих веществ содержится в листьях обоих видов. Результаты количественного анализа, проведенные в фазу цветения для двух видов крапив, представлены в таблице 5.

Таблица 5

Количественное содержание основных групп БАВ в листьях крапивы __коноплевой и крапивы двудомной_

БАВ Методы определения Количественное содержание а пересчете на абсолютно сухое сырье (х ± А*,)

К. коноплсвая К. двудомная

Кислота аскорбиновая Титриметрический 274,58±1,05мг% 269,44±1,11мг%

Сумма каротиноидов Фотоколоримстричсский 50,06±0,07мг% 49,98±0,03мг%

Витамин К Хроматоспектрофотометричсский 4,12±0,02мг% 4,12±0,08мг%

Дубильные вещества Перманганатомстричсекий 3,03±0,04 % 5,37±0,04 %

Кумарины Фотоколоримстричсский 1,11 ±0,04% 0,99±0,03 %

Фенолкарбон-Свыс кислоты Спсктрофотомстрический 2,03±0,04 % 1,65±0,04%

Сумма флавоноидов Спсктрофотометричсский 1,38±0,03 % 1,2б±0,02 %

Как видно из таблицы 5, в листьях крапивы коноплевой содержатся: 4,12 мг% витамина К, 50,06 мг% каротиноидов, 274,58 мг% кислоты аскорбиновой, 3,03 % дубильных веществ, 1,11 % кумаринов,

2,03 % фенолкарбоновых кислот и 1,38 % флавоноидов. Полученные данные для листьев крапивы двудомной свидетельствуют, что по количественному содержанию этих веществ два вида крапивы практически идентичны.

Разработка методики количественного определения суммарного содержания флавоноидов в листьях крапивы коноплевой и крапивы двудомной.

Количественное содержание БАВ является важным показателем качества лекарственного растительного сырья. Нами предлагается оценивать сырье крапивы коноплевой по содержанию суммы флавоноидов. В связи с тем, что в нормативной документации для листьев крапивы двудомной отсутствует методика количественной оценки действующих веществ, нами также разработана методика количественного определения флавоноидов для листьев крапивы двудомной.

Для оценки количественного содержания суммы флавоноидов в листьях крапивы коноплевой и крапивы двудомной предложена методика, основанная на методе дифференциальной спектрофотометрии с применением комплексообразующего реагента - алюминия хлорида. В ее основе лежит реакция взаимодействия флавоноидов с алюминия хлоридом в кислой среде. В качестве стандартного образца использовали ГСО кверцетина. Изучение УФ спектров водно-спиртового извлечения сырья после прибавления кислоты хлористоводородной 3 % и раствора стандартного образца ГСО кверцетина в 96% спирте этиловом с добавлением алюминия хлорида выявили, что максимумы спектров совпадают (рисунки 2 и 3). В качестве аналитической была выбрана длина волны 430 нм.

Установлено, что максимальное содержание суммы флавоноидов из растительного сырья извлекается спиртом этиловым 90 % при трехкратной экстракции (30+30+30), степень измельчения растительного сырья до размера частиц 1мм. Температура экстракции - кипящая водяная баня. Устойчивое окрашивание извлечений из растительного сырья наступает через 20 минут и сохраняется в течение 30 минут, что достаточно для проведения анализа.

/ \

/ \ У \

1 \ / 2

/ л / 1 X

i i

V V S \

/ \

К 4

ЖЪ 400 4 » 4» 4«'i IUI 4» Д'«

Рисунок 2. Спектры поглощения ГСО квсрцетина и извлечения из листьев крапивы коноплевой . после прибавления кислоты хлористоводородной с добавкой алюминия хлорида.

1 - спектр ГСО кверцетина

2 - спектр извлечения из листьев крапивы коноплевой

- ft-

л? (

.-N14 400 415 ГГ 41* 4 60 475 49«

Рисунок 3. Спектры поглощения ГСО кверцетина и извлечения из листьев крапивы двудомной после прибавления кислоты хлористоводородной с добавкой алюминия хлорида.

1 - спектр ГСО кверцетина

2 - спектр извлечения из листьев крапивы двудомной

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на кверцетин в листьях крапивы кононлевой и крапивы двудомной представлены в таблице 6.

Таблица 6

Метрологические характеристики количественного определения суммы

флавоноидов в пересчете на кверцетин в листьях

Объект f X S2 S Р,% Ах Е, %

Крапива кононлев. 4 1,38 0,00115 0,03391 1 95 0,04 3,35

Крапива двудомн. 4 1,26 0,00053 0,02291 95 0,03 2,07

Для проверки отсутствия систематической ошибки методики были поставлены эксперименты с добавками кверцетина непосредственно в навеску сырья перед началом экстракции. Полученные результаты приведены в таблице 7.

Таблица 7

Результаты опытов с добавками кверцетина в навеску сырья __крапивы кононлевой_____

Найдено Добавлено Должно Найдено, Относительная

флавоноидов кверцетина, быть, мг мг ошибка, %

в сырье, мг мг

0,138 0,0207 0,1587 0,1606 1,21

0,138 0,0552 0,1932 0,1899 -1,69

0,138 0,1035 0,2415 0,2450 ! ,44

Относительная ошибка результатов опытов с добавками не превышает относительную ошибку единичного определения и имеет отклонения в сторону как положительных, так и отрицательных значений, что свидетельствует об отсутствии систематической ошибки в предлагаемой методике анализа.

Разработанная методика валидирована согласно требованиям ICH по показателям: правильность, прецизионность (сходимость и воспроизводимость), специфичность, линейность и диапазон.

Изучение динамики накопления действующих веществ в сырье в зависимости от фазы вегетации растения.

Для определения оптимальных сроков заготовки сырья изучалась динамика накопления БАВ в листьях крапивы кононлевой.

Образцы, собранные в разные фазы вегетации, анализировались на содержание кислоты аскорбиновой и суммы флавоноидов. Результаты

эксперимента представлены в таблице 8.

Таблица 8

_Динамика накопления БАВ в листьях крапивы коноилевой_

Фаза вегетации Содержание БАВ

кислоты аскорбиновой, мг% флавоноидов, %

Бутонизация 198,26 ±0,80 0,97 ± 0,02

Начало цветения 245,02 ± 0,99 1,33 ±0,03

Массовое цветение 274,58 ± 1,11 1,38 ±0,03

Начало образования плодов 236,31 ± 1,02 1,31 ±0,04

На основании полученных результатов мы рекомендуем проводить заготовку сырья в фазу массового цветения.

3. Морфолого-анатомичсское изучение крапивы коноилевой

На основании изучения морфологических характеристик 10 опытных партий сырья нами составлено описание внешних признаков сырья крапивы коноилевой.

Сырье крапивы коноилевой, заготовленное в июне - сентябре, представляет собой цельные или измельченные листья, простые, черешковые длиной до 13 см и шириной 9 см (у основания) многократно раздельные, с перистозубчатыми долями 2,5 - 11 см длиной и 1 - 3,5 см шириной, на черешках 1,5 - 5,5 см длиной, по обеим сторонам с простыми волосками и жгучими снизу по жилкам; прилистники 0,6 - 1,3 см длиной пленчатые, ланцетовидные, свободные. Листовая пластинка светло-зеленого цвета. Запах слабый. Вкус горьковатый.

При микроскопическом исследовании выявлены анатомо-диагпостические признаки листьев крапивы коноплевой: клетки эпидермиса с обеих сторон листовой пластинки изодиаметрической формы с извилистыми стенками, имеющие значительное количество цистолитов точечной структуры, погруженных в палисадную ткань, с хорошо различимой ножкой. Устьица аномоцитного типа, мелкие, располагаются на уровне клеток эпидермиса, чаще встречаются на нижней стороне листа. Характерно наличие нескольких видов волосков по всей поверхности эпидермиса листа:

• жгучий волосок, расположенный на высоком многоклеточном выросте представляет собой клетку продолговатой формы, расширенной у основания с суженным к верху кончиком в виде легко обламывающегося шаровидного вздутия;

• простой одноклеточный волосок остроконечной формы с расширенным, но слабо погруженным основанием;

• ретортовидный волосок с бородавчатой кутикулой;

• головчатый волоскок с короткой одноклеточной ножкой и 2 -клеточной головкой.

В мезофилле встречаются остроконечные друзы оксалата кальция, ориентированные группами вдоль жилок (фото 1, 2, 3,4, 5, 6).

Фото 3. Фрагмент эпидермиса нижней стороны листа. Устьица, головчатые волоски, ретортовидные волоски с бородавчатой кутикулой.

Анатомо-диагностические признаки листьев крапивы кононлевой с

Фото 1. Фрагмент эпидермиса верхней стороны листа. Жгучий волосок, цистолиты.

Фото 4. Фрагмент эпидермиса нижней стороны листа. Жилка, друзы, цистолиты,

ретортовидные волоски с бор одав ч ато й кутикул о й.

Фото 2. Фрагмент эпидермиса верхней стороны листа. Клетки с извилистыми стенками, места

л: ■ 1- ' • •• '"'4

■

.41

i „ - " •

•к»1 . : ф

Фото 6. Простые волоски.

Характерными анатомо-диагностическими признаками

позволяющими отличить листья крапивы коноплевой от листьев крапивы двудомной являются наличие простых остроконечных волосков и бородавчатая поверхность ретортовидных волосков.

4. Разработка показателей качества листьев крапивы коноплевой

Проведенный качественный и количественный анализ крапивы коноплевой позволил рекомендовать в качестве сырья у исследуемого растения - листья.

Определены морфологические и анатомические особенности листьев крапивы коноплевой, числовые показатели сырья (таблица 9).

Стандартизацию сырья проводили по содержанию суммы флавоноидов и кислоты аскорбиновой, подлинность подтверждали методом тонкослойной хроматографии по обнаружению витамина К и флавоноидов.

Результаты исследований легли в основу разработки нормативной документации на сырье - проекта фармакопейной статьи предприятия (ФСП) «Крапивы коноплевой листья» и инструкции по заготовке и сушке сырья крапивы коноплевой.

* • ... ь ■ ■ .

* ' *

Фото 5. Жгучий волосок

Таблица 9

Показатели качества лекарственного растительного сырья «Крапивы коноплевой листья»

Показатели Нормы

Внешние признаки Цельные или измельченные листья, простые, черешковые длиной до 13 см и шириной 9 см (у основания) многократно раздельные, с перистозубчатыми долями 2,5 - 11 см длиной и 1 - 3,5 см шириной, на черешках 1,5 - 5,5 см длиной, по обеим сторонам с простыми волосками и жгучими снизу по жилкам; прилистники 0,6 - 1,3 см длиной пленчатые, ланцетовидные, свободные. Листовая пластинка светло-зеленого цвета. Запах слабый. Вкус горьковатый.

Микроскопия Изодиаметрические клетки эпидермиса с извилистыми стенками, значительное количество цистолитов точечной структуры, устьица аномоцитного типа, жгучие волоски, простые одноклеточные волоски остроконечной формы, ретортовидные волоски с бородавчатой кутикулой, железистые волоски с одноклеточной ножкой и двухклеточной головкой, остроконечные друзы оксалата кальция в мезофилле листа, ориентированные группами вдоль жилок.

Подлинность: - витамин К - флавоноиды - желтое пятно витамина К - коричневые пятна флавоноидов от 3 до 4

Количественное определение: - кислота аскорбиновая - флавоноиды Не менее 260 мг % Не менее 1,3 %

Влажность Не более 10 %

Золы общей Не более 22%

Золы, нерастворимой в 10 % растворе кислоты хлороводородной Не более 2%

Почерневших и побуревших частей Не более 5 %

Измельченные части, не проходящие сквозь сито с диаметром отверстий 7мм Не более 10%

Органической примеси Не более 2 %

Минеральной примеси Не более 1 %

выводы

1. Установлен качественный состав крапивы коноплевой, обнаружены биологически активные вещества: витамины, флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты, кумарины, дубильные вещества, полисахариды, аминокислоты. В листьях крапивы коноплевой выделены и идентифицированы вещества фенольной природы: рутин, кемпферол-3-рутинозид, изорамнетин-3-рутинозид, хлорогеновая, цикориевая и феруловая кислоты, умбелиферон, кислота галловая, танин, эпикатехин и кумарин. Изучен полисахаридный состав листьев: водорастворимые полисахариды, пектиновые вещества, гемицеллюлозы А и В. Определен состав аминокислот и микроэлементов.

2. Установлено, что по количественному содержанию действующих веществ витаминов (аскорбиновой кислоты, каротиноидов, витамина К,), а также флавоноидов, фенолкарбоновых кислот, кумаринов крапива коноплевая не уступает крапиве двудомной.

3. На основании микроскопических исследований крапивы коноплевой выявлены основные анатомо-диагностические признаки листьев (характер клеток эпидермиса, тип устьичного аппарата, строение волосков и включений оксалата кальция), позволяющие проводить диагностику сырья.

4. Разработана методика количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на кверцетин-стандарт в листьях крапивы коноплевой с использованием метода дифференциальной спектрофотомерии. Методика валидирована по параметрам: правильность, прецизионность, специфичность, линейность и диапазон.

5. Определены показатели подлинности и доброкачественности сырья (листья) крапивы коноплевой: диагностические признаки, количественное содержание кислоты аскорбиновой (не менее 260 мг %), содержание флавоноидов (не менее 1,3 %), товароведческие показатели.

6. Разработан проект ФСП «Крапивы коноплевой листья» и инструкция по заготовке и сушке сырья.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Пецуха B.C. Сравнительное фитохимическое изучение листьев крапивы двудомной (Urtica dioica L.) и крапивы коноплевой (Urtica cannabina L.) /B.C. Пецуха, Г.М. Федосеева // «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции»: Сб. науч. тр. / под ред. М.В. Гаврилина. - Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2008.-С. 81-82.

2. Пецуха B.C. Сравнительное морфолого-анатомическое изучение листьев крапивы двудомной и крапивы коноплевой /B.C. Пецуха,

Г.М. Федосеева, Г.И. Бочарова // «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции»: Сб. науч. тр./под ред. М.В. Гаврилина. - Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2008. - С. 8081.

3. Федосеева Г.М. Количественное определение витаминов в листьях крапивы коноплевой /Г.М. Федосеева, Пецуха B.C. // «Фармация из века в век»: Сб. тр. научно-практической конф. - СПб, 2008.-С. 170-172.

4. Пецуха B.C. Фитохимическое исследование крапивы коноплевой как возможного заменителя крапивы двудомной / B.C. Пецуха, Г.М. Федосеева // «Актуальные вопросы фармакогнозии»: Сб. науч. тр. -Ярославль, 2008. - С. 233-236.

5. Fedoseeva G.M. Results of pfarraacognostic investigation of medicinal herbs of Pribaical folk medicine / Fedoseeva G.M., Mirovich V.M., Gorjachkina E.G., Bocharova G.I., Fedoseev A.P., Kaherskaja J.S., Petsuha V.S. // «Traditional medicine: A current situation and perspectives of development»: Materials of the HI International Scientific Conference, Ulan-Ude: The Publishing House of Health of Buryatia. - 2008. - P. 40-41.

6. Пецуха B.C. Изучение элементного состава крапивы коноплевой / B.C. Пецуха, Е.П. Чебыкин, Г.М. Федосеева // Сибирский медицинский журнал. - 2008. - №6. - С. 88-90.

7. Пецуха B.C. Исследование аминокислотного состава крапивы коноплевой (Urtica cannabina L.) / B.C. Пецуха, A.M. Собенин, Г. М. Федосеева // «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции»: Сб. науч. тр./ под ред. М.В. Гаврилина. - Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2009. - С. 93-94.

8. Пецуха B.C. Изучение полифенольных соединений крапивы коноплевой (Urtica cannabina L.) методом ВЭЖХ / B.C. Пецуха, Г.М. Федосеева // «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции»: Сб. науч. тр./ Под ред. М.В. Гаврилина. - Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2009. - С. 94-95.

9. Пецуха B.C. Изучение полисахаридного комплекса крапивы коноплевой (Urtica cannabina L.) /B.C. Пецуха, Г.М. Федосеева // «Фармация Казахстана: интеграция науки, образования и производства»: Материалы Междунар. конф., посвященной 30-летию химико-фармацевтического факультета. - Шымкент, 2009. - С. 24-56.

10. Пецуха B.C. К вопросу стандартизации сырья крапивы коноплевой / B.C. Пецуха // Материалы 11-ой Итоговой конференции молодых ученых. - Иркутск, 2009. - С. 16-17.

Подписано в печать 2.11.2009г. Формат 60x84 1/ 16. Бумага офсетная. Объем 1,3 печ. л. Тираж 100. Заказ 89.

Отпечатано в типографии ООО «СибПолиграфСервис» 664007 г. Иркутск, ул. Литвинова, д.20

Оглавление диссертации Пецуха, Виктория Сергеевна :: 2009 :: Улан-Удэ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Ботанико-географическая характеристика растений семейства 10 Крапивные (Urticaceae)

1.1.1. Общая характеристика семейства Urticaceae

1.1.2. Характеристика рода крапива Urtica

1.1.3. Морфологические признаки крапивы двудомной

1.1.4. Морфологические признаки крапивы коноплевой

1.1.5. Географическое распространение и места обитания видов крапивы.

1.2. Современное состояние исследования крапивы двудомной и крапивы коноплевой.

1.2.1. Химический состав и применение крапивы двудомной

1.2.2. Химический состав и применение крапивы коноплевой

1.2.3. Растительные лекарственные средства, используемые для лечения и профилактики геморрагических состояний

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Характеристика объектов исследования

2.2. Методики исследования

2.2.1. Методики химического исследования биологически активных веществ крапивы коноплевой.

2.2.2. Хроматографический анализ фенольных соединений

2.2.3. Спектральные методы анализа 47 2.2.4 Методики морфологического и микроскопического исследования 48 2.2.5. Методики товароведческого исследования

2.2.6. Методы статистической обработки результатов исследований

ГЛАВА 3. ХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ КРАПИВЫ

КОНОПЛЕВОЙ И КРАПИВЫ ДВУДОМНОЙ

3.1. Качественное исследование основных групп биологически активных веществ

3.2. Изучение состава флавоноидов и фенолкарбоновых кислот и их идентификация

3.2.1. Препаративное выделение фенольных веществ

3.2.2. Идентификация флавоноидов и фенолкарбоновых кислот с использованием УФ-спектроскопии

3.2.3. Исследование качественного состава фенольных соединений методом ВЭЖХ

3.3. Изучение полисахаридного комплекса крапивы коноплевой

3.4. Определение аминокислотного состава крапивы коноплевой

3.5. Изучение элементного состава крапивы коноплевой

3.6. Количественное определение биологически активных веществ в сырье крапивы коноплевой и крапивы двудомной

3.6.1. Определение количественного содержания кислоты аскорбиновой

3.6.2. Определение количественного содержания суммы каротиноидов

3.6.3. Определение количественного содержания витамина К

3.6.4. Определение количественного содержания суммы дубильных веществ

3.6.5. Определение количественного содержания кумаринов

3.6.6. Определение количественного содержания суммы фенолкарбоновых кислот

3.6.7. Разработка методики количественного определения суммы флавоноидов

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ

ГЛАВА 4. МОРФОЛОГО-АНАТОМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ 98 КРАПИВЫ КОНОПЛЕВОЙ

4.1. Морфологические признаки крапивы коноплевой 98 4.2 Микроскопическое изучение крапивы коноплевой 99 ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ

ГЛАВА 5 .СТАНДАРТИЗАЦИЯ СЫРЬЯ КРАПИВЫ КОНОПЛЕВОЙ 114 5.1 Определение подлинности сырья на основании морфолого-анатомических признаков

5.2. Определение товароведческих показателей доброкачественности сырья

5.3. Методики качественного обнаружения биологически активных веществ

5.4. Методики количественного определения биологически активных веществ

5.5. Определение сроков заготовки сырья

5.6. Установка срока годности сырья крапивы коноплевой 125 ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Пецуха, Виктория Сергеевна, автореферат

Актуальность темы

В настоящее время изучение и использование лекарственных растений в практике здравоохранения приобретает все большие масштабы. Это объясняется мягким пролонгированным действием биологически активных веществ растений на организм человека и почти полным отсутствием токсичности. Расширение номенклатуры лекарственных растений и средств растительного происхождения является актуальной задачей фармацевтической и медицинской науки, так как спрос на них удовлетворен менее чем на 40 % [РЛСД007]. Одним из подходов для внедрения новых лекарственных растений ' в официнальную медицину является изучение растений, близких к фармакопейным видам, и широко применяемых в народной медицине. Одним из таких растений является крапива коноплевая (Urtica cannabina L.) семейства крапивные (Urticaceae). Из данных литературы известно, что наряду с крапивой двудомной, крапива коноплевая применяется в качестве кровоостанавливающего, поливитаминного и общеукрепляющего средства [Телятьев В.В., 1987;. Носов A.M., 1999]. Несмотря на то, что этот вид широко распространен на всей территории Восточной Сибири, данных о его фитохимическом изучении не обнаружено.

Цель и задачи исследования

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- исследовать морфологическое и анатомическое строение надземной части крапивы коноплевой и выявить основные диагностические признаки сырья;

Научная новизна работы

Разработана методика дифференциального спектрофотометрического определения содержания суммы флавоноидов в пересчете на кверцетин, изучена динамика накопления этих веществ по фенофазам и в онтогенезе растения.

Практическая значимость работы

Определены анатомо-диагностические признаки сырья и предложены методики качественного и количественного анализа биологически активных, соединений с использованием методов бумажной и тонкослойной хроматографии, высокоэффективной жидкостной хроматографии и УФ -спектрофотометрии.

Апробация работы и публикации

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на научно-практической конференции «Фармация XXI века: достижения, проблемы и пути их решения» (Санкт-Петербург, 2008); 63-й региональной научно-практической конференции по фармации и фармакологии (Пятигорск, 2008); 64-й региональной научно-практической конференции по фармации и фармакологии (Пятигорск, 2009); международной научно-практической конференции «Фармация Казахстана: интеграция науки, образования и производства», посвященной 30-летию химико-фармацевтического факультета Южно-Казахстанской государственной медицинской академии (Шымкент, 2009), П-ой итоговой конференции молодых ученых Иркутского государственного медицинского университета (Иркутск, 2009).

По результатам исследований опубликовано 10 работ, из них 1 статья в периодическом издании, рекомендованном ВАК МО и науки РФ, которые отражают основное содержание диссертационной работы.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук

Основные положения, выносимые на защиту

• данные фитохимического исследования надземной части крапивы коноплевой; результаты морфолого-анатомического изучения сырья крапивы коноплевой; результаты исследований по установлению критериев подлинности и норм качества содержания биологически активных веществ в сырье крапивы коноплевой.

Заключение диссертационного исследования на тему "Фармакогностическое изучение крапивы коноплевой (Urtica cannabina L.)"

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

2. Установлено, что по количественному содержанию действующих веществ витаминов (аскорбиновой кислоты, каротиноидов, витамина К), а также флавоноидов, фенолкарбоновых кислот, кумаринов крапива коноплевая не уступает крапиве двудомной.

6. Разработан проект ФСП «Крапивы коноплевой листья» и инструкция по заготовке и сушке сырья.

Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2009 года, Пецуха, Виктория Сергеевна

1. Алексеенко, В.А. Химические элементы в окружающей среде и развитии организмов / В.А. Алексеенко // Геохимия биосферы: материалы 2-ого Междунар. совещ. — Новороссийск, 1999. С. 106-111.

2. Андреева, В.Ю. Химическое исследование надземной части манжетки обыкновенной / В.Ю. Андреева, Г.И. Калинкина // Химия растительного сырья. 2000. - № 2. - С. 79-85.

3. Атлас ареалов и ресурсов лекарственных растений / Под ред. П.С. Чикова Москва ГУГК, 1983. - 340с.

4. Баландина, И. А. Совершенствование принципов и методов фармакопейного анализа в системе стандартизации лекарственного растительного сырья и лекарственных средств на его основе: автореф. дис. . д-ра фарм. наук / И.А. Баландина. Москва, 2004. - 38с.

5. Балуда, В.П. Механизмы внутрисосудистого свертывания крови и общие закономерности развития дииеминированного внутрисосудистого свертывания / В.П. Балуда // Тер. арх., 1979. №9. -С. 19-25

6. Бандюкова, В. А. Применение цветных реакций для обнаружения флавоноидов путем хроматографии на бумаге / В. А. Бандюкова//Растит, ресурсы. 1965. - Т. 1., вып. 4. - С.591-596.

7. Бандюкова, В. А. Фенолокислоты растений, их эфиры и гликозиды / В. А. Бандюкова // Химия природных соединений. 1983. - № 3. - С. 263-273.

8. Бандюкова, В.А. Исследование химии флавоноидных соединений и закономерности их распределения в растениях: автореф. дисс. . д-ра биол. наук / В.А. Бандюкова. Ереван. - 1975. - 41с.

9. Бандюкова, В. А. Качественный анализ флавоноидов в растительном материале при помощи хроматографии на бумаге. Методические рекомендации / В. А. Бандюкова, А. А. Шинкаренко. -Пятигорск, 1972.

10. Барабой, В. А. Растительные фенолы и здоровье человека. / В. А.Барабой. М.: Наука, 1984. - 160с.

11. Баранова, М.А. Классификация морфологических типов устьиц / М.А. Баранова //Ботанический журнал. 1985. - Т.20, № 12

12. Баркаган, З.С. Геморрагические заболевания и синдромы. — 2-е изд. перераб. и доп. / З.С. Баркаган // М.: Медицина, 1988. — 528 с.:ил.

13. Барнаулов, О. Д. Введение в фитотерапию / О. Д. Барнаулов. -СПб.: Издательство «Лань», 1999: 160с.

14. Барнаулов, О.Д. Фитотерапия больных легочным туберкулезом / О.Д. Барнаулов. СПб.: ЗАО,«Весь», 1999. - С. 309-313.

15. Беликов, В. В. Унифицированная методика определения флавоноидов для стандартизации фитохимических препаратов / В. В. Беликов // Новые лекарственные препараты из растений Сибири и Дальнего Востока: Тезисы Всесоюзной конференции.- Томск, 1989.- С. 21-22.

16. Беляков, К. В. Количественное определение полисахаридов в листьях мать и мачехи (ТиззПа§о farfara Ь.) / К. В. Беляков, Д. М. Попов // Фармация. 1999. - №1. - С. 23-24.

17. Бондарцев, А. С. Шкала цветов. (Пособие для биологов при научных и научно-прикладных исследованиях). / А. С. Бондарцев. -Издательство Академии Наук СССР, 1954. 28с.

18. Броновицкая З.Г. Аминокислоты, их производные и регуляция метаболизма / З.Г. Броновицкая. Ростов-на-Дону, 1983. - 112с.

19. Варлаков, М.Н. О растительных кровоостанавливающих средствах. / М.Н. Варлаков // Фармация. 1943. - № 1. - С. 31-35.

20. Вайс, Р.Ф. Фитотерапия. Руководство: Пер. с нем. / Р.Ф Вайс., Ф.

21. Финтельманн М.: Медицина, 2004. - 552 е.: ил.

22. Венгеровский, А.И. Лекции по фармакологии для врачей и провизоров / А.И. Венгеровский Томск: 8ТТ, 1998. - 480с.

23. Верещагин, В.И. Полезные растения Западной Сибири / В.И. Верещагин, К.А. Соболевская, А.И. Якубова. -М., 1959. -247с.

24. Вичканова, С. А. Ингибиторы микроорганизмов среди природных веществ растительного происхождения: автореф. дис. д-ра биол. наук / С.А. Вичканова. Москва, 1981. - 48с.

25. Выделение и анализ природных биологически активных веществ / Е.А. Краснов, Т.П. Березовская, Н.В. Алексеюк и др. Томск: изд-во ТГУ, 1987.-184с.

26. Высочина, Г. И. Содержание суммы и некоторых основных флавоноидов в надземной части Polygonum aviculare L., произрастающего в Сибири / Г.И. Высочина // Растительные ресурсы.- 1998.-вып. 4.- С. 4754.

27. Гаммерман, А.Ф. Дикорастущие лекарственные растения СССР / А.Ф. Гаммерман, И.И. Гром // М.: Медицина, 1976. — 62с.

28. Гаммерман, А.Ф. Лекарственные растения (Растения-целители) / А.Ф. Гаммерман, Г.Н. Кадаев, А.А. Хмелевский // Справ, пособие — 3-е изд., перераб. и доп. М.: Высш. шк., 1983 - 400с.

29. Гариков, А.К. Математическая обработка результатов химического анализа. Методы обнаружения и оценки ошибок / А.К.Гариков.—Ленинград: Химия, 1984. 168с.

30. Георгиевский, В. П. Биологически активные веществалекарственных растений / В. П. Георгиевский, Н. Ф. Комисаренко, С. Е. Дмитрук. Новосибирск: Наука, Сиб. отд-ние, 1990. - 333с.

31. Георгиевский, В. П. Физико-химические методы анализа биологически активных веществ растительного происхождения / В. П. Георгиевский, М. О.Казаринов, Н. А., М. О. Каррыев. Ашхабад, 1976.

32. Горохова, В. Г. Высокоэффективная жидкостная хроматография растительных фенольных соединений / В. Г. Горохова, Н. А. Тюкавкина, В; А. Бабкин //Четвертый всесоюзный симпозиум по фенольным соединениям: тез. докл. Ташкент: ФАН, 1982. -21с.

33. Государственная фармакопея СССР. 10-е изд. М., 1968. — 1079с.

34. Государственная фармакопея СССР. Вып. 1. 11-е изд., доп. - М., 1987. -335с.

35. Государственная фармакопея СССР. Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. 11-е изд., доп. -М., 1989.-400с.

36. Государственный реестр лекарственных средств. М., 2003. - 1202 с.

37. Гринкевич, И. Н. Химический анализ лекарственных растений / И. Н.Гринкевич, Л: Н. Сафронович. М.: Высшая школа. - 1983. - 176с.

38. Гуревич, К.Г. Фитопрепараты в урологии // Фарматека, 2003; 15: 71-75.

39. Девятнин, В.А. Методы химического анализа в производстве витаминов / В.А. Девятнин. М., 1964. - 360с.

40. Драницина, В.Б. Микроэлементы химически и фармакологическиактивные ингредиенты лекарственных растений: автореф. дис. канд. биолог, наук /В.Б. Драницина. Ярославль, 1975. - 26с.

41. Дудко, В.В. Разработка методики количественного определения суммы каротиноидов в плодах шиповника/ В.В.Дудко, И.Ф. Гусев, В.В. Смородин // Поиск, разработка и внедрение новых лекарственных средств и организационных форм фармацевтической деятельности.

42. Материалы международной научной конференции. — Томск, 2000. — С. 88-89.

43. Жамгноцев, Г.Г. К вопросу о кровоостанавливающих растениях. / Г.Г. Жамгонцев // Фарм. и токе. 1949. - С. 117-119.

44. Запрометов, М.Н. Основы биохимии фенольных соединений. / М.Н. Запрометов-М.: Высш. шк., 1974.

45. Землинский, С.Е. Лекарственные растения СССР / С.Е. Землинский // М.: Государственное изд-во медицинской литературы, 1985. 553.

46. Кабата-Пендиас, А. Микроэлементы в почвах и растениях / А. Кабата-Пендиас, X. Пендиас. -М., 1989.

47. Клышев, Л.К. Флавоноиды растений (распространение, физико-химические свойства, методы исследования)1 / Л.К. Клышев, В.А. Бандюкова, A.C. Алюкина. Алма-Ата: Наука, 1978. - 220с.

48. Колинин С.К., Файн Э.Е. «Эмиссионный спектральный анализминерального сырья». -М.: Недра, 1969. — 238с.

49. Медведев, П.Ф. Крапивы СССР: видовой состав, распространение и использование / П.Ф. Медведев //Издание Всесоюзного института растениеводства, Ленинград, 1964. 82с.

50. Крылов, А. А. Руководство по фитотерапии / А. А Крылов, В. А. Марченко. -СПб: Издательство «Питер», 2000. 416с. - (Серия «Современная медицина»).

51. Крылова, И.Л. Методические указания по изучению запасов дикорастущих лекарственных растений / И.Л. Крылова, А.И. Шретер -М.: ВИЛР, 1971.-31с.

52. Кудряшов, Б.А-. Биологические проблемы регуляции жидкого состояния, крови и ее свертывания./ Б.А. Кудряшов //М.: Медицина, 1975. 488 с.

53. Кузнецова, Г. А. Природные кумарины и фурокумарины / Г. А. Кузнецова. Издательство «Наука» Ленинградское отделение. Ленинград, 1967.

54. Кузник, Б.И. Форменные элементы крови, сосудистая стенка, гемостаз и тромбоз /Б.И. Кузник, В.П. Скипетров // М. Медицина, 1974. 308с.

55. Лавренов В:К., Лавренова Г.В. Полная энциклопедия лекарственных растений Том 1 / СПб.: «Издательский дом Нева»., М.: «ОЛМА-ПРЕСС», 1995. - С 206-207.

56. Лежнова, Л.П. Изучение возможности применения препарата уртифиллин при лечении язвы желудка // Новые лекарственные препараты из растений Сибири и Дальнего Востока. Томск, 1989. - Т.2-С. 94-95.

57. Лекарственные растения СССР и их применение. — М.: Медицина, 1984. — С.162-163.

58. Лекарственные растения Государственной, фармакопеи. / Под ред. И.А. Самылиной. М.: Анми, 1999. - 487с.

59. Лесиовская, Е. Е. Фармакотерапия с основами фитотерапии: Учебное пособие / Е. Е. Лесиовская, Л. В. Пастушенков. 2-е изд. - М.: ГЭОТАР-МЕД, 2003. - 592с. - (Серия «XXI век»).

60. Лившиц, И.А. Природы мудрые советы./И.А. Лившиц Иркутск: «Приуз», 1993. -523с.

61. Литвиненко, В. И. Природные флавоноиды / В.И. Литвиненко. -Харьков, 1995.-56с.

62. Литвиненко, В.И., Максютина И.П. Спектральные исследования флавоноидов. Обнаружение свободных фенольных оксигрупп в различных положениях// Химия природных соединений. 1969. -№5- С.366-369.

63. Ловкова, М. Я. Почему растения лечат / М. Я. Ловкова, А. М.Рабинович, С. М. Пономарева и др. М.: Наука, 1989. - 256с.

64. Лунин, Ю.А. Хроматографическое разделение каротиноидов растительного происхождения / Ю. Л. Лунин, Е. А. Симонова // Химико-фармацевтический журнал. 1991. - № 9. - С. 75-77.

65. Макаренко, А. Б. Клиническая классификация растительных лекарственных средств / А. Б. Макаренко // Врачебное дело. -Киев: Здоровье, 1994. №3-4. - С. 47-51.

66. Максютина, Н.П. Методы выделения и исследования флавоноидных соединений / Н.П. Максютина, В.И. Литвиненко // Фенольные соединения и их биологические функции М., 1968. - С. 7-26.

67. Мачабели, М.С. Тромбогеморрагический синдром / М.С. Мачабели //Пробл. гематологии. 1981. - №1. - С.48-54.

68. Мачабели, М.С. Тромбогеморрагическая теория общей патологии //Успехи физиол. наук. 1986. - Т.17., №2. - С. 56-82.

69. Машковский, М.Д. Лекарственные средства: В 2 т. / Т.1. / М.Д. Машковский М. 14-е изд., перераб., испр. и доп. - М, 2000. - 540 с.

70. Машковский, М.Д. Лекарственные средства. / М.Д. Машковский М. 15-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: ООО «Издательство "Новая волна"», 2005. - 1200 е.: ил.

71. Медик, В. А. Руководство по статистике в медицине и биологии. В 2-х томах / В. А. Медик, М. С. Токмачев, Б. Б. Фишман; Под ред. проф. Ю.М. Комарова. Т. 1. Теоретическая статистика. М.: Медицина, 2000. - 412с.

72. Меньшикова, Н.Л. Применение крапивы двудомной в комплексном лечении эксудативно-катарального диатеза у детей в период диспансерного наблюдения // Актуальные проблемы аллергии в педиатрии. М., 1687. - 4.2 - С.301.

73. Методические указания по атомно-адсорбционным методам определения токсичных элементов в пищевых продуктах и пищевом сырье. -М.: Государственный комитет сан-эпид. надзора РФ, 1992.

74. Методы анатомо-гистохимического исследования растительных тканей: Метод.пособие / сост : Г.Г. Фурст. М., 1979. - 155с.

75. Методы исследования углеводов / Пер. с англ. В. Н. Несмеянова; Под. ред. А .Я. Харлина. М., 1975. - 445с.

76. Методы химии углеводов / под ред. Р.И. Красновой. М.: Мир, 1967.- 507с.

77. Минаева, В. Г. Лекарственные растения Сибири / В. Г. Минаева -5-е изд., перераб. и доп. Новосибирск: Наука. Сиб. отд-ние, 1991. -431 с.

78. Минина, С. А. Химия и технология фитопрепаратов / С.А. Минина, И. Е. Каухова. М.: ГЭОТАР-МЕД, 204. - 560 е.: ил.

79. Мирошников, В. М., Лекарственные растения и препараты растительного происхождения в урологии: Учебное пособие / В.М. Мирошников. М.: МЕДпресс-информ, 2005. - 240 е., ил.

80. Несмеянова, В.А. Методы исследования углеводов / пер. с англ. В.А. Несмеянова; под ред. А.Я. Хорлина. М., 1975. - 445с.

81. Никитин, А. А. Анатомический атлас полезных и некоторых ядовитых растений / А. А. Никитин, И. А. Панкова. Ленинград: «Наука». - 1982. - 765с.

82. Новые лекарственные препараты из растений Сибири и Дальнего Востока. /Под ред. Гольдберга Е.Д. Том 2. - Томск: АМН СССР, 1989.

83. Носов, А. М. Лекарственные растения. М.: ЭКСМО-Пресс, 1999. -350с.

84. Ожигова, М.Г. Количественное определение суммарного содержания флавоноидов в листьях Urtica dioica спектрофотометрическим методом./ М.Г. Ожигова, М.В. Богма // Растительные ресурсы, вып. 2, том 42, 2006.

85. Определение микроэлементов в лекарственном растительном сырье, заготавливаемом в Московской области / С.Н. Спирова, В.И. Шиянов, С.С. Стуловский и др. // Фармация. М., 1993. - Т. XIII., № 3. -С. 44-48 .

86. Определение суммы фенолкарбоновых кислот в корнях лопуха большого (Arctium lappa) / Д. А. Шматков, Д. М. Попов // Фармация на современном этапе проблемы и достижения. -Научные труды, том XXXIX. - Часть П. - М., 2000. - С. 174-178.

87. Отраслевой стандарт. Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения. 91500.05.001-00. Москва 2000г.

88. Пастушенков, JI. В. Фармакотерапия с основами фитотерапии: Учебник для медицинских и фармацевтических ВУЗов / JI. В

89. Пастушенков, Е. Е. Лесиовская. СПб.: Хим.- фарм. институт, 1995. -Ч1.-159 с.

90. Пашинский, В.Г. Использование лекарственных растений в комплексной терапии заболеваний /АМН СССР, институт фармакологии Томского научного центра. Томск, 1988. - 99с.

91. Пластинина, З.А. Характеристика крапивы коноплевой как биологически активного сырья / З.А. Пластинина, Т.Ф.Чиркина, Д.Б.i

92. Бураева, Ц-М.Д. Гончикова // Тибетская медицина: состояние иf i iперспективы исследований: Сб. научных работ СО РАН. Улан-удэ, 1994.-С. 76-68.

93. Прокопенко, О. П. Колориметрический метод количественного определения кумаринов / О. П. Прокопенко, О. О. Тарасенко // Фармацевтический журнал. 1976. - С. 18-22.

94. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование; семейства Urticaceae . Л.: Наука, 1988.-357с.

95. Регистр лекарственных средств России. РЛС Доктор. Справочное издание для врачей. / Под ред. Г.Л. Вышковского. Выпуск 11., ООО «РЛС-2004».- 2004.

96. Рудич, Д.С. Эпидермальный анализ частиц листьев в судебно-биологической экспертизе / Д.С. Рудич // Методическое пособие для судебных экспертов. К.: РИО МВД УССР, 1981. - 180с.

97. Руженкова, И. В. Основы фитотерапии. Серия «Медицина для вас» / И. В. Руженкова. Ростов-на-Дону: «Феникс», 2005. - 192с.

98. Руководство по гематологии: в 2 т. Т.2. / Под ред. А.И. Воробьева. — 2-е изд. перераб. и доп. -М.: Медицина, 1985. 368 е., ил.

99. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под общей редакцией чл.-корр. РАМН, проф. Р. У. Хабриева. 2-изд. Перераб. И доп. - М.: ОАО «Издательство «Медицина», 2005. - 832 е.: ил.

100. Сальникова, E.H. Совершенствование метода стандартизации плодов рябины обыкновенной / E.H. Сальникова, Г.И. Калинкина, Таий Тахири1.г

101. Хатим // Поиск, разработка и внедрение новых лекарственных средств и организационных форм фармацевтической деятельности. Материалы международной научной конференции. — Томск, 2000. — С. 56-58.

102. Скальный, А. В. Химические элементы в физиологии и экологии человека / А. В. Скальный. М.: Издательский дом «ОНИКС 21 век»: Мир, 2004.-216 е., ил.

103. Соколов, С. Я. Справочник по лекарственным растениям / С. Я. Соколов, И. П. Замотаев. М., 1990. - 464 с.

104. Соколов, С. Я. Фитотерапия и фитофармакология: Руководство для врачей / С. Я. Соколов. М.: Медицинское информационное агентство, 2000. 976с.

105. Справочник по гематологии / Серия «Медицина для Вас». Ростов н/Д.: Феникс, 2000.-384с.

106. Сравнительная оценка методов определения суммы флавоноидов в Р-витаминном комплексе / Г. Н. Земцова, А. Б. Дмитриев // Химико-фармацевтический журнал, 1986. № 6. - С. 754-757.

107. Стыскин, Е.Л. Практическая высокоэффективная жидкостная хроматография / Е.Л. Стыскин, Л.Б. Ициксон, Е.В. Брауде. — М.: Химия, 1986.-288с.

108. Телятьев, В.В. Целебные растения Центральной Сибири. Иркутск: Восточно-Сибирское книжное изд-во, 1987. — 400с.

109. Фитотерапия с основами клинической фармакологии. / Под ред. В.П. Кукеса. М.: Медицина, 1999. - 192с.

110. Флора Сибири. Salicaceae — Amarantaceae /Сост. М.Н. Ломоносова, Н.М. Большаков, И.М: Краснобоков и др. — В 14 т. Новосибирск: Наука Сиб. отд-ние, 1992. - Т.5. - 312 с.

111. Флора Центральной Сибири. Под ред. Л.И. Малышева и Г.А. Пешковой — В 2-х т. — Новосибирск: Наука. Сиб. отд-ние, 1979. — Т.1 536 с.

112. Химический' анализ лекарственных растений: Учебное пособие для фармацевтических вузов / Е.Я. Ладыгина, Л.Н. Сафронич, В.Э. Отряшенкова; под ред. Н.И. Гринкевич, Л.Н. Сафронич. Москва: Высш. школа, 1983.-176с.

113. Хроматография на бумаге. Пер с чешского. / Под ред. И. Mi Хайса; К.Мацека М.: Издательство иностранной литературы, 1962. - 852 е.: ил.

114. Цветной атлас растений. / Под ред. Д. Рандушка, Л. Шомшака, Щ. Габерова. Братислава: Обзор, 1990. -393с.

115. Чазов, Е.И. Антикоагулянты и фибринолитические средства. / Е.И. Чазов, K.M. Лакин М.: Медицина, 1977. - 311с.

116. Чиков, П.С. Лекарственные растения — путь к здоровью./ П.С. Чиков -М.: Медицина, 1997. -489с.

117. Шаршунова, М; Тонкослойная хроматография в фармации и биохимии / М. Шаршунова, В. Шварц, И. Михалец М., 1980. - 260с.

118. Шасс, Е.Ю. Вяжущие и кровоостанавливающие средства растительного происхождения. / Е.Ю. Шасс // Фельд. и акуш. 1971. - № 7. - С 49-54.

119. Шаферштейн, И.Я. К механизму кровоостанавливающего действиякрапивы. / И.Я. Шаферштейн, Т.К. Павленко // Фарм. и токе. — 1945. -№6. С. 29-30.

120. Шинкаренко, А.Л. Методы исследования природных флавоноидов / А.Л. Шинкаренко, В.А. Бандюкова, А.Л. Казаков Пятигорск, 1977. -70с.

121. Шнякина, Г.П. Анализ плодов на содержание каротиноидов / Г.П. Шнякина, Л.А. Холзинева // Успехи в изучении природных и синтетических лекарственных средств Хабаровский медицинский институт, 1999. - 123с.

122. Шултяева, Л.Д. Влияние отваров из листьев манчьжурского ореха и крапивы двудомной на течение аллоксанового диабета у крыс // Докл. 3-й науч. конф. физиол., биохим. и фармакол. Зап.-Сиб. объединения. -Томск, 1965.-С. 341-343.

123. Элленхорн, М. Дж. Медицинская токсикология: Диагностика и лечение отравлений у человека: В 2 томах. Т.2: Пер с англ. М.: Медицина, 2003. - 1044 е.: ил.

124. Энциклопедический словарь лекарственных растений и продуктов животного происхождения: Учебное пособие. / Под ред. Г.П. Яковлева и КФ. Блиновой. — СПб.: Специальная литература, 1999.-407 е.: ил.

125. Banwart, W. L., HPLC separation and wavelength area ratios of more that 50 phenolic acids and flavonoids / W. L. Banwart, P. M. Porter, T. C. Granato, 1.1. Hassett // J. Chem. Ecol. 1985. - Vol. 11, N 3. - P. 383-395.

126. Bate-Smith E.C. The commoner phenolic constituents of plants and systematic distribuitor // Sci. Droc. Poy. Dubbin. Soc. 1956 - Vol. 27, N.6 -P. 165.

127. Bate-Smith E.C. The phenolic constituents of plants and their taxonomic significance. / Dicotyledons // I. Soc. London: Botany / 1962. - Vol. 58 -N. 371. -P.95-175.

128. Bisset, N. Herbal Drugs and Phytopharmaceuticals: A handbook for practice on a Scientific basis / N. Bisset. CRC Press, Boca Raton, 1994. -566 p.

129. Bryant C.T. A note of differentiation between flavonoid glycoside and their aglicones // J. Amer. Assoc. Sci. Ed., 1950. - Vol. 39 N.8 - P.480-489.

130. Direct Inhibition of the Hexose Transporter GLUT1 by Tyrosine Kinase Inhibitors / Juan Carlos Vera, Alejandro M. Reyes, Fernando V. Velasquez, David W. Gold // Biochemistry 2001. - Vol. 40. - No 3. - 777-779.

131. Epshtein, E. Silicon / E. Epshtein // Annu. Rev. Plant Mol. Biol, 1999. Jun. N,50.-P. 641-664.

132. Habrison, K.G., Belli R. T. The biodégradation of hydroquinone / K.G. Habrison, R. T. Belli // Environ Toxicol. Chem, 1982. N 1. - P. 9-15.

133. Handbook on the Toxicology of Metals / L. Fliberg, G. F. Nordberg, V. B. Vouk Amsterdam; New York; Oxford, 1986. - Vol. 11.

134. Harborne, J. B. Comparative biochemistry of the flavonoids / I. Harborne.- London; New York, 1967. 383 p.

135. Harborne, J. B Plant polyphenols.//Characterization of flavonoid glycosides by acidic and enzimic hydrolysis // Phytochemistry. 1965. - Vol.4, N.l. -P.1207-120,

136. Harborne, J. B. The chromatography of the flavonoid pigments // J. Chrom.- 1959/ Vol.2, N.6 - P. 581-604.

137. Suturin A.N., Paradina L.F, Epov V.N., Semenov A.R., Lozhkin V.I., Petrov L.L. Preparation and assessment of a candidate reference sample of Lake Baikal deep water. Spectrochimica Acta Part B, v. 58, 2003, p. 277-288.