Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое изучение артишока колючего ( Cynara scolymus L.) интродуцированного на Кавказских Минеральных Водах

На правах рукописи

ЛУНЕВА ИЛОНА ЛЮДВИГОВНА

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ АРТИШОКА КОЛЮЧЕГО (CYNARA SCOLYMUS L.), ИНТРОДУЦИРОВАННОГО НА КАВКАЗСКИХ МИНЕРАЛЬНЫХ ВОДАХ

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степе* кандидата фармацевтических наук

□Ü3473ÜBH

Пятигорск - 2009

003479062

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическ академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научпый руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор

Челомбитько Вячеслав Александрович

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, профессор

Компанцев Владислав Алексеевич доктор фармацевтических наук, профессор Молчанов Геннадий Иванович

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет Росздрава»

Защита состоится «гМ~>> 2009 года в часов на заседали

Диссертационного совета Д 208.069.01 при ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росздр ва» (357532, Ставропольский край, Пятигорск, пр. Калинина, 11)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Пятигорск ГФА Росздрава».

Автореферат разослан 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, УX

доктор фармацевтических наук, профессор .,'>' '/'/ Е.В. Компанцева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

Рост числа заболеваний печени и желчевыводящих путей представляет одну из важных медицинских проблем. Это связано с тем, что во всем мире ухудшаются экологические условия, увеличивается поступление химических средств в организм человека в виде различных добавок к пище, консервантов, ароматизаторов, красителей и удобрений. Кроме того возрастает потребление лекарственных средств синтетического происхождения и алкогольных напитков. Все это оказывает в первую очередь вредное влияние на функцию печени.

Для лечения заболеваний печени и желчевыводящих путей в настоящее время в мировой практике имеется достаточно большой ассортимент лекарственных средств синтетического и природного происхождения. Однако следует отметить, что при заболеваниях печени необходимо отдавать предпочтение растительным средствам, т.к. синтетические лекарственные средства могут проявлять побочное действие.

Анализируя литературные сведения можно отметить, что число растительных средств, применяемых для лечения указанных заболеваний, сравнительно невелико и на фармацевтическом рынке России представлено преимущественно лекарственными препаратами, полученными из сырья расторопши пятнистой, бессмертника песчаного, тысячелистника обыкновенного, полыни горькой, чистотела большого, мяты перечной, куркумы длинной и др..

Используя опыт народной медицины, за рубежом разработаны и применяются гепатопротекторньте лекарственные фитопрепараты Хофитол» (Франция), «Экстракт артишоков» (Германия), «Гербеон» (Словения), а также биологически активные добавки «Цинарикс», « Гефитол» (Вьетнам).

Большой интерес представляет изучение растительных объектов, которые применяются как пищевые и в то же время могут содержать биологически активные вещества, проявляющие гепатопротекторную и желчегонную активность. К числу таких объектов нужно отнести артишок колючий (Cynara scolymus L.) сем. астровые (Asleraceae). Этот вид применяется как пищевой продукт и лекарственное растение особенно в странах Западной Европы. Его пищевая ценность объясняется наличием

3

таких биологически активных веществ как полифенольные соединения, полисахариды, органические кислоты и др. Однако в России лекарственные препараты артишока не выпускаются. Это связано с отсутствием достаточной сырьевой базы и недостаточным фармакогностическим изучением артишока, культивируемого на территории РФ. Решение вопросов перспективы интродукции артишока колючего, его фотохимической оценки позволит обеспечить фармацевтические производства сырьем и наладить выпуск ценных гепатопротекторных и желчегонных средств.

Поэтому фармакогностическое изучение артишока колючего и возможности его интродукции на Северном Кавказе является актуальной проблемой для фармацевтической науки и практики.

Цель и задачи исследования

Целью работы является фармакогностическое изучение нового для России лекарственного растения артишока колючего, интродуцированного в условиях Кавказ-

г-ь-тIV А^гшопоггг иг т\' Рлп и ллчиитпв ма огл ллттлпв лтлив/^тодиилго гглъ"1»м^г=

1 щи ^УчД ] >1 ни N»1 V* ЧЛ 1 IV» ич^ V I V х ич^нии » и и 1

ВСПКОГО СрСДСТПа, обЛидиЮщСГС Г£ПиТОПрОТСКТОрг5ЫМ Я ЖСЛЧ£ГОК11ЫМ ДСКСТВИСМ.

Для дос тижения поставленной цели решались следующие задачи:

- выявить возможность интродукции артишока колючего в условиях КМВ и разработать элементы технологии возделывания его из семян марокканского зкоти-па;

- провести сравнительный химический анализ сырья артишока колючего, культивируемого в условиях КМВ и марокканского образца;

- выявить характерные анатомо-диагностические признаки вегетативных и генеративных органов, подтверждающие подлинность растительного сырья, и установить основные числовые показатели сырья, определяющие его качество;

- выбрать оптимальную технологию сухого экстракта на основе сырья артишока колючего;

- разработать нормы качества сырья (листьев) артишока колючего и сухого экстракта, полученных из свежих листьев;

- изучить острую токсичность, гепатопротекторную и желчегонную активность, сухого экстракта, полученного из свежих листьев артишока колючего;

- разработать проект ФСП «Артишока колючего листья, свежие».

Научная новизна

На основании изучения биологии развития артишока колючего в условиях Северного Кавказа и сравнительной оценки культуры в условиях Марокко установлена возможность его выращивания в условиях КМВ. Показано, что урожайность артишока колючего в условиях культуры может достигать 400-420 ц/га), которая приближается к урожайности артишока в условиях культуры в Марокко.

В результате фитохимического анализа листьев артишока колючего, выращенного в Марокко и на КМВ, установлена идентичность образцов и наличие:

- флавоноидов, оксикоричных кислот, дубильных веществ, сесквитерпеновых лактонов, кислоты аскорбиновой, алкалоидов, тритерпенов и стеринов, углеводов, белков;

- 15 аминокислот (аспарагиновая кислота, аргинин, серии, глутаминовая кислота, глицин, аланин, изояейцин, треонин, лейцин, тирозин, валин, фенилаланин, гистидин, лизин, и метионин), последние 8 — являются незаменимыми аминокислотами.

- моносахаридного состава полисахаридов (методом ГЖХ): водорастворимые полисахариды (ВРПС-Х) - 5,1% (ксилоза, арабиноза, манноза, глюкоза, галактоза, уроновые кислоты); водорастворимые полисахариды (ВРПС-Г) - 0,78% (рамноза, ксилоза, арабиноза, манноза, глюкоза, галактоза, уроновые кислоты); пектиновые вещества (ПВ) - 2,4% (рамноза, ксилоза, арабиноза, галактоза, уроновые кислоты); гемицеллюлоза (ГМЦ) - 2,63% (рамноза, ксилоза, арабиноза, манноза, глюкоза, галактоза, уроновые кислоты);

- 5 макроэлементов (натрий, калий, кальций, магний, фосфор), и 16 микроэлементов (медь, серебро, молибден, литий, свинец, кобальт, никель, ванадий, хром, железо, бор, алюминий, кремний, марганец);

- 12 фенольных соединений (методом ВЭЖХ): флавоноиды (лютеолин-7-глюкозид, гиперозид, дигидрокверцетин, витексин, рутин, ориентин, гесперидин); ¡сумарины (4-оксикумарин); оксикоричные кислоты (кофейная кислота, хлорогено-вая кислота, неохлорогеновая кислота); фенологликозиды (арбутин).

5

Из свежих и сухих листьев артишока колючего получены сухие экстракты. Методом ВЭЖХ в экстракте из сухих листьев обнаружено 15 веществ, идентифицировано 11 соединений: флавоноиды (лютеолин-7-глюкозид, рутин, гиперозид, апи-генин, робинии); фенолокислоты (галловая кислота, цикориевая кислота); оксико-ричные кислоты (кофейная кислота, хлорогеновая кислота, неохлорогеновая кислота, феруловая кислота). В полученном экстракте из свежих листьев обнаружено 35 веществ, методом ВЭЖХ идентифицировано 11 соединений: флавоноиды (рутин, кверцетин, лютеолин, виценин, апигенин); кумарин ы (умбелиферон, 4-оксикумарин); фенолокислоты (салициловая кислота); оксикоричные кислоты (хлорогеновая кислота, кофейная кислота, неохлорогеновая кислота).

Разработаны нормы подлинности и качества для листьев артишока колючего, методики количественного определения действующих веществ в сухих экстрактах из сухих и свежих листьев артишока колючего.

В опытах in vivo показано, что по гепатопротекторной и желчегонной активности сухие экстракты не уступают препарату сравнения «Хофитол», являются практически нетоксичными веществами.

Практическая значимость

Выявлена возможность выращивания артишока колючего на КМВ (урожайность 420 ц/га) и использования для России нового вида лекарственного сырья - листьев артишока колючего для получения лекарственных средств, обладающих гепатопротекторной и желчегонной активностью.

Разработаны методики качественного и количественного анализа сырья артишока колючего, основанные на обнаружении фенольных соединений, полисахаридов и аминокислот с использованием методов тонкослойной хроматографии (ТСХ), спектрофотометрии, высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) и газожидкостной хроматографии (ГЖХ). Разработаны нормы качества листьев артишока колючего и сухого экстракта из него, с учетом современных требований, предъявляемых к подлинности и качеству лекарственного растительного сырья.

Разработана технология сухого экстракта из листьсв артишока колючего, выращиваемого на КМВ.

Материалы внедрения

Результаты исследований по гепатопротекторной и желчегонной активности сухого экстракта из свежих листьев артишока колючего внедрены в учебный процесс в виде информационного письма на кафедре фармакологии ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росздрава», что подтверждено актом внедрения от 9 апреля 2007 г.

Проект ФСП на лекарственное растительное сырьё «Листья артишока колючего, свежие» передан ЗАО «Вифитех» (Россия) (акт внедрения от 9 апреля 2007 г.).

Апробация и публикация результатов исследования

Фрагменты диссертации докладывались и обсуждались на VIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2001) и четырёх региональных научных конференциях по проблемам фармации, фармакологии и подготовке кадров (Пятигорск, 1999 - 2001, 2003).Основное содержание диссертации опубликовано в 9 научных работах, в том числе в трех журналах, рекомендуемых ВАК.

Связь исследования с проблемным планом фармацевтических наук

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава (№ госрегистрации 01.200.112164).

Положения, выносимые на защиту:

- результаты интродукционных исследований артишока колючего в условиях

КМВ;

- результаты изучения показателей подлинности (морфолого-анатомическая диагностика) и качества листьев артишока колючего (числовые товароведческие показатели, нормирующие качество исследуемого сырья, содержание основных биологически активных соединений в сырье);

- обоснование технологии сухого экстракта из листьев артишока колючего;

- результаты изучения острой токсичности, гепатопротекторной и желчегонной активности сухого экстракга из листьев артишока колючего.

Объём и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 119 страницах, состоит из введения, обзора литературы, шести (2-7) глав экспериментальной части, общих выводов, списка литературы, приложений. Работа иллюстрирована 21 рисунком и 28 таблицами. Библиография включает 166 источников, из которых 80 на иностранных языках.

Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цель и задачи исследования, отмечена новизна и практическая значимость полученных результатов, а также изложены положения, выносимые на защиту.

Глава 1. Содержит обзор отечественной и зарубежной литературы по современному состоянию исследований артишока колючего, в котором обобщены и систематизированы сведения по его химическому составу, использованию артишока, как пищевого и лекарственного растения, фармакологическому спектру активности, применению лекарственных средств из артишока колючего в мировой медицинской практике.

Во второй главе приводятся объекты и методы исследований.

В главе 3 приводятся результаты собственных исследований по введению в культуру артишока колючего на КМВ и выработке рекомендаций, позволяющих получать сырье артишока колючего, соответствующего нормам качества, внесенным в проект ФСП «Артишока колючего листья свежие».

Глава 4 посвящена изложению результатов определения показателей подлинности (морфолого-анатомические диагностические признаки) и качества лекарственного растительного сырья (товароведческие показатели).

В главе 5 изложены результаты по изучению химического состава биологически активных соединений артишока колючего и разработке норм качества его сырья (листья).

В главе 6 приводятся оптимальные условия получения сухого экстракта из листьев артишока колючего и его нормы качества.

Глава 7 представлена результатами фармакологического изучения суммарной фракции (сухого экстракта) на желчегонную и гепатопротекторную активность в эксперименте на животных.

В приложение вынесены материалы по разработке проекта ФСП и акты внедрения на доклиническом этапе исследований сухого экстракта из свежих листьев артишока колючего.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Изучение вопросов интродукции артишока колючего на КМВ

На первоначальном этапе исследования нами изучались особенности произрастания артишока колючего в условиях Марокко. Оптимальными условиями являются: плодородные почвы с преобладанием в них карбонатов щелочных и щелочноземельных металлов, температура воздуха в пределах 20-26 °С, обильный полив. Именно регион Северного Кавказа отвечает данным условиям.

В связи с этим, нами была предпринята попытка культивирования артишока колючего на КМВ. Исходным материалом для интродукционных исследований послужил семенной материал, привезённый из мест культивирования растения (Марокко) от 1993-96 гг. В последующие годы для исследования были использованы семена собственной репродукции, свежие или после 1,2 и 3 лет хранения.

Посев нестратифицированных семян проводили в середине марта в горшки с торфом и овечьим перегноем. В конце апреля рассаду пересаживали на расстоянии 1-1,2 м в холодный парник, покрытый полиэтиленовой пленкой. Почва парника предварительно была заправлена перегноем и дерновой землей в соотношении 1:1 на глубину 30 см. Уход за растениями заключался в рыхлении междурядий, удалении сорняков и обильных поливах в засушливый период.

Таблица 1 - Сроки и продолжительность фенофаз для генеративного побега артишока первого года жизни

Способ посева Дата посева Фаза 1- начало вегетации Фаза 2- отрастание листьев Дата отмирания листьев Продолжительность вегетации, дни

Подфаза 1 Продолжительность фазы, дни Дата развертывания 1-го настоящего листа Дата высаживания рассады Продолжительность фазы, дни

Дата прорастания Продолжительность подфазы, дни

Sub vitro 20.03.02 26.03 7 16 10.04 03.05 193 20.10 208

Sub Coelo 05.05.02 15.05 И 19 02.06 139 23.10 161

Sub vitro 01.04.03 07.04 7 15 21.04 15.05 163 01.11 201

Sub Coelo 10.05.03 17.05 8 21 06.06 167 30.10 136

Sub vitro 05.04.04 09.04 5 18 26.04 20.05

Sub Coelo 03.05.04 17.05 15 23 08.06

Таблица 2 - Сроки и продолжительность фенофаз для генеративного побега артишока второго года жизни

| Фаза стебления Фаза бутонизации Фаза цветения Фаза плодоношения - Фаза обсеменения Отмирание генеративного побега

Год на-блю- дения j Начало Продолжительность, дни Начало Продолжительность, дни Начало Продолжительность, дни Начало Продолжительность, дни Начало Продолжительность, дни

2003 ! 15.04 95 20.05 14 19.07 20 22.07 21 15.08 31. 15.09

2004 j 10.05 82 01.06 17 01.08 23 05.08 23 07.09 25.09

Фенологические наблюдения велись за однолетними растениями в вегетативной фазе роста, двух- и трехлетними растениями в генеративной фазе, а также за се-нильными экземплярами на коллекционном участке в ботаническом саду ПятГФА и в ст. Бекешевской Ставропольского края. Данные наблюдений за 2003-2004 г. приведены в таблицах 1,2.

Были определены 6 участков площадью по 20 м2, на которых артишок колючий выращивался рассадным методом и путём весеннего посева в грунт.

Установлено, что целесообразно проводить посев нестратифицированных семян в грунт в первой половине мая. Наибольшую массу сырт.я растение имеет в первый и второй год культивирования.

Сбор сырья (листья артишока) рекомендуется проводить с растений первого года жизни осенью, а с растений второго и последующих лег жизни - после плодоношения основной массы корзинок. Для сохранения растений первого года необходимо укрытие их розеток в зимний период.

Ориентировочная урожайность зелёной массы сырья (листьев) артишока колючего составила 420 ц/га, а воздушно-сухого сырья - 85 ц/га.

Полученные нами рекомендации, основанные на особенностях биологии развития артишока колючего на КМВ, могут быть использованы для дальнейшей разработки агротехнических приёмов возделывания артишока в промышленных масштабах.

Фитохнмичсскос изучение сырья (листья) артишока колючего

Для качественного анализа сырья были использованы цветные, осадочные реакции, а также методы хроматографии (ТСХ и бумажная). Результаты фитохимиче-ского анализа представлены в таблице 3.

Таблица 3 - Данные качественного анализа листьев артишока колючего

Наименование веществ Методы и условия анализа Аналитический эффект реакции Листья артишока колючего

Марокко КМВ

1 2 3 4 5

Флавоноиды Качественные реакции: - цланидиновая: оранжево-красное окрашивание + +

- с раствором железа окис-ного хлоридом буро-зеленое окрашивание + +

Продолжение таблицы 3

1 2 о 4 5

- с натрия гидроксидом желтое окрашивание + +

- со свинца ацетатом основным Осадок желтого цвета + +

Оксикорич-ные кислоты Метод БХ в системе 2% р-ра уксусной кислоты Голубая флюоресценция пятен в УФ-свете + +

Дубильные вещества Реакция с раствором желе-зоаммоииевых квасцов Темно-зеленое окрашивание + +

Сесквитерпе-новые лакто-ны Метод БХ в системе растворителей: бензол-этилацетат (95:5). Проявители: реактив Шталя, 20 % р-р фосфорномолибденовой кислоты Пятна с Кг=0,72 сине-зеленого и сине-фиолетового цвета + +

Аминокислоты - биуретовая реакция Сине-фиолетовое окрашивание + +

- с нингидрином Сине-фиолетовое окрашивание + +

Кислота аскорбиновая Метод высокоэффективной ТСХ в системе растворителей: этилацетат - ледяная уксусная кислота Проявитель: р-р 2,6-дихлорфенол-индофенолята натрия Пятно белого цвета на розовом фоне + +

Алкалоиды Качественные реакции: - с реактивом Вагнера Кристаллы крестообразной формы бурого цвета + -

- с реактивом Драгендорфа - с реактивом Бушарда - с кислотой пикриновой осадок красного цвета осадок красно-коричневого цвета осадок желтого цвета + + +

- с кремневольфрамовой кислотой осадок белого цвета - -

- с танином осадок белого цвета - -

Тритерпены и стерины Р-ция Либермава-Бурхарда Розовое окрашивание, переходящее в зеленое + +

Углеводы Р-ция с а-нафтолом Красно-фиолетовое окрашивание + +

Р-ция со спиртом 95 % Сгустки, выпадающие в осадок белого цвета при стоянии + +

Примечание: 1. « + » - реакция положительная; 2. « -» - реакция отрицательная.

Методом ВЭЖХ (метод внутренней нормализации) с использованием СО изучен качественный и количественный состав полифенольных соединений в листьях артишока колючего, и листьях артишока колючего идентифицировано 12 феноль-ных соединений.

Результаты определения фенольных соединений в листьях артишока колючего методом ВЭЖХ представлены в таблице 4 (п=6).

Таблица 4 - Фенольные соединения водно-спиртовых извлечений из листьев артишока колючего, идентифицированные методом ВЭЖХ_

Группа БАВ Название вещества Содержание веществ в выделенной смеси, %

Оксикоричные кислоты Кофейная кислота 38,55

Хлорогсновая кислота 0,10

Неохлорогеновая кислота 6,88

Лютеолин-7-гликозид 35,19

Дигидрокверцетин 0,91

Ориентин 0,46

Флавоноиды Рутин 0,08

Гесперидин 2,33

Вигексин 5,31

Гипсрозид 0,01

Фенологликозиды Арбутин 9,31

Кумарины 4-Оксикумарин 0,88

Таким образом, результаты определения фенольных соединений в листьях артишока колючего показали высокое содержание кофейной кислоты, лютеолин-7-гликозида, арбутина, неохлорогеновой кислоты, витексина.

Изучение аминокислотного состава определяли по времени удерживания. В качестве внутреннего стандарта использовали стандартную смесь из 18 аминокислот. Колориметрическое измерение окрашенных комплексов, образующихся в результате реакции с нингидрином, проводили при длине волны 570 нм. Для количественной оценки определяли (автоматически) площади пиков идентифицированных кислот. Обнаружено 15 аминокислот (аспарагиновая кислота 0,52%, аргинин 0,50%, серин 0,6%, глутаминовая кислота 0,95%, глицин 0,42%, аланин 0,55%, изолейцин 0,49%, треонин 0,61 %, лейцин 0,77%, тирозин 0,33%, валин 0,66%, фенилаланин 0,63%, гистидин 0,32%, лизин 0,72%, и метионин 0,01%), последние 8 - являются незаменимыми аминокислотами.

Методом ГЖХ был определен моносахаридный состав полисахаридов: водорастворимые полисахариды (ВРПС-Х) - 5,1 % (ксилоза, арабиноза, манноза, глюкоза,

галактоза, уроновые кислоты); водорастворимые полисахариды (ВРПС-Г) - 0,78% (рамноза, ксилоза, арабиноза, манноза, глюкоза, галактоза, уроновые кислоты); пектиновые вещества (11В) - 2,4% (рамноза, ксилоза, арабиноза, галактоза, уроновые кислоты); гемицеллюлоза (ГМЦ) - 2,63% (рамноза, ксилоза, арабиноза, манноза, глюкоза, галактоза, уроновые кислоты);

Макро- и микроэлементный состав листьев артишока колючего определяли методом полуколичественного спектрального анализа. Результаты анализа показали присутствие 21 элемента в составе листьев артишока колючего: 5 макроэлементов (натрий, калий, кальций, магний, фосфор) и 16 микроэлементов (медь, цинк, серебро, молибден, литий, свинец, кобальт, никель, титан, ванадий, хром, железо, бор, алюминий, кремний, марганец).

Изучение апатомо-диагпостичсских признаков подлинности и товароведческих показателей сырья артишока колючего

Установлены характерные анатомо-диагностические признаки сырья (черешок, лист, листочек обвертки соцветия) артишока колючего, выращиваемого на КМВ, позволяющие идентифицировать подлинность этого вида сырья.

Лист - имеет дорзовентральный тип строения; мезофилл дифференцирован; эпидерма однорядная с тонким слоем кутикулы; покровные клетки верхней эпидермы 4-6-угольной формы крупнее извилистостенных и разнообразных по форме клеток нижней эпидермы; устьица аномоцитного типа; на эпидерме обнаружено 2 типа трихом (волосков) : маленькие головчатые (железистые) волоски и простые кроющие более крупные, многоклеточные волоски (рис. 1).

На эпидерме черешка редко встречаются кроющие простые многоклеточные волоски; в центре черешка расположены тонкостенные прямоугольной формы клетки основной паренхимы, среди которых расположено большое количество открытых коллатеральных пучков; вокруг проводящих пучков располагаются смоляные ходы.

Листочек обвертки соцветия имеет дорзовентральный тип строения. Клетки верхней эпидермы крупные, прямоугольной или квадратной формы; клетки нижней эпидермы мелкие; на нижней эпидерме встречаются только головчатые (железистые) волоски.

1 - кутикула, 2 - клетки эпидермы, 3 - железистый волосок, 4 - кроющий волосок

Рисунок ) - Строение эпидермы листа артишока колючего с волосками

Рисунок 2 - Микрофотография эпидермы листа артишока колючего с

волосками

Сравнительная доброкачественность сырья артишока колючего, культивируемого в Марокко и в природно-климатических условиях КМВ, установлена в результате проведенного нами товароведческого анализа. Полученные результаты (в пересчёте на абсолютно сухое сырьё) статистически достоверны (п=6) и приведены в таблицах 5, 6.

Таблица 5 - Данные товароведческого анализа листьев артишока колючего

Числовые показатели листьев артишока колючего (в пересчёте на абсолютно сухое сырьё) Сырье, заготовленное в Марокко Сырье, заготовленное на КМВ

Свежие листья Высушенные листья

Влажность, % 11,8 ±0,3 е=±2,58 % 78,33 ± 2,46 £=±3,14% 11,3 ±0,4 £=+3,42 %

Зола общая, % 7,4 ±0,3, к=+3,70 % 6,62 ±0,31 е=±4,63% 6,9 ± 0,3 е=±4,72 %

Зола, нерастворимая в кислоте хлористоводородной % 2,1 ±0,1 с=±3,26 % 1,6 ±0,02 е=±2,9 % 1,8 ±0,04 £=±2,33 %

1 аблица 6 - Содержание экстрактивных веществ в листьях артишока колючего

Содержание % Экстрагент

Вода очищенная Спирт этиловый 40% Спирт этиловый 70%

Культивируемое растение (Марокко) 23,2 ± 0,6 £=+2,65 21,4 ±0,6 £=+2,82 % 16,8 ±0,5 £-+3,06 %

Культивируемое растение (КМВ) свежие листья 36,20 + 0,4218 £=+1,17% - -

Культивируемое растение (КМВ) высушенные листья 25,4 ± 0,2 е=±1,08% 22,1 ±0,4 £=±1,60 % 18,3 ± 0,6 Б=±3,16%

Как видно из приведенных данных экстрактивные вещества лучше извлекаются водой очищенной и 40% спиртом этиловым.

В связи с тем, что для получения лекарственного препарата «Хофитол» используют листья, которые составляют максимальную биомассу от всего растения, мы остановили свой выбор на листьях свежих как на основном источнике сырья.

Данные, полученные в результате фитохимического анализа листьев артишока колючего, были включены в проект ФСП «Артишока колючего листья свежие» (таблица 7).

Таблица 7 - Нормы качества сырья «Артишока колючего листья, свежие»

Показатели Методы Нормы

Качественные реакции 1. Цианидиновая реакция в спиртовой среде - 2 мл извлечения, 10-15 мг металлического магния при прибавлении 57 капель кислоты хлористоводородной концентрировшшой Должно образовываться оранжево-красное окрашивание (флавоноиды)

2. В спиртовой среде 1 мл полученного извлечения прибавляли 0,5 мл раствора аммония гидроксида Должно образовываться ярко-желтое окрашивание, при нагревании переходящее в оранжевое (флавоноиды)

3. УФ-спектроскопия Ящш 329±51гм (оксикоричные соединения)

4. БХ в системе 2% раствора уксусной кислоты Голубая флюоресценция пятен в УФ-свете (оксикоричные соединения)

Влажность ГФ XI, вып. 1, с.285 - 286 Не менее 70%

Зола общая ГФ XII, с. IIS ОФС 42-0055-07 Не более 10%

Экстрактивные вещества (растворитель вода очищенная) ГФ XI, вып.1, с.295 Не менее 20%

Органические примеси ГФ XI, выл.1, с.276 Не более 1,0%

Минеральные примеси ГФ XI, вып.1, с.276 Не более 1,0%

Количественное определение суммы фе-нольных соединений в пересчёте на кофейную кислоту Прямая спектрофотометрия Не менее 1,2%

Микробиологическая чистота ГФ XII, с. 160 ОФС 42-0067-07 Категория 4А

Упаковка ГФ XI, вып.2, с.381 В ящики массой нетто 15 кг или насыпью в рефрижераторах

Маркировка ГФ XI, вып.2, с.384 ГОСТ 17768-80

Транспортировка ГФ XI, вып.2, с.385 По ГОСТ 14192-77 и ГОСТ 17768-80

Срок годности 48 часов после сбора

Выбор оптимальных условий получения сухого экстраета из листьев артишока

колючего

В основу предлагаемо?« технологии была положена технология лекарственного препарата «Хофитол». При разработке технологии нами изучены следующие условия: возраст растения, состояние листьев, соотношение сырьё : экстрагент, выбор стабилизатора и его концентрации. Критериями выбора явились технологический выход сухого экстракта (в пересчёте на абсолютно сухое сырьё) и содержание фе-нольных соединений в сырье или экстракте (в пересчёте на кофейную кислоту). Подобранные оптимальные условия позволили предложить технологию экстракта, заключающуюся в экстракции (кипячения) свежесобранных и высушенных листьев артишока колючего второго года жизни водой в массовом соотношении 1:20, в течение 2 часов и последующим выпариванием экстракта до сухого остатка. Выход сухого экстракта составил 19,8% к листьям, содержание фенольных соединений в экстракте в пересчёте на кофейную кислоту составляет 9,4%.

Методом ВЭЖХ в сухих экстрактах, полученных из высушенных и свежих листьев, идентифицировано 11 фенольных соединений (таблица 8).

Таблица 8 — Фенольные соединения сухих экстрактов, полученных из сухих и све-

жих листьев артишока, идентифицированные методом ВЭЖХ

Объект анализа Веществ обнаружено Идентифицировано Содержание в выделенной смеси, % от суммы полифенолов

все го идентифицировано

I 2 о 4 5

Экстракт из листьев артишока колючего сухой (получен из свежих листьев) 35 11 Хлорогеновая кислота 25,01

Салициловая кислота 0,48

Кофейная кислота 38,1

Неохлорогеновая кислота 0,13

Рутин 0,094

4-оксикумарин 0,001

Умбеллиферон 0,05

Вицеиин 0,001

Квсрцетин 0,03

Лютеолин 0,32

Апи гении 0,001

Продолжение таблицы 8

1 2 3 4 5

Экстракт из 15 11 Галловая кислота 23,48

листьев Хлорогеновая кислота 23,79

артишока колючего сухой (получен из высушенных листьев) Кофейная кислота 6,30

Цикорисвая кислота 5,86

Феруловая кислота 5,54

Неохлорогеновая кислота 2,38

Лютеолин-7-гликозид 6,03

Гиперозид 7,47

Рутин 6,33

Робинии 1,27

Апигенин 0,89

Таким образом, методом ВЭЖХ в сухом экстракте из свежих листьев артишока доминирует кофейная кислота; относительно много содержится хлорогеновой кислоты. В сухом экстракте из высушенных листьев артишока идентифицировано 11 полифенольных соединений, среди которых наибольшее содержание составляют хлорогеновая и галловая кислоты; в примерно одинаковых и относительно высоких количествах содержатся гиперозид, кофейная кислота, лютеолин-7-гликозид. цико-риевая и феруловая кислоты, рутин,

В образцах экстракта листьев артишока колючего сухого, полученного соответственно из свежего и высушенного сырья, проводили количественное определение суммы оксикоричных кислот в пересчете на кофейную кислоту методом прямой спектрофотометрии. Параллельно в аналогичных условиях измеряли оптическую плотность раствора СО кофейной кислоты.

Таблица 9 - Результаты количественного определения суммы фенольных соединений в пересчете на кофейную кислоту в экстракте артишока сухого (из свежего сырья) методом спектрофотометрии (ак=0,02395 г, В=3,2%, п=6, а«-0,02180, Аст= 0,594)

Оптическая плотность Найдено суммы оксикоричных кислот, % Метрологические характеристики

0,593 9,39

0,572 9,05 ^=9,27

0,568 8,99 5=0,2323

0,600 9,50 %=0,0948 ДХ-0,2437 63%

0,580 9,18

0,602 9,53

Таблица 10 - Результаты количественного определения суммы фенольных в пересчете на кофейную кислоту в экстракте артишока сухого (из высушенного сырья) методом спектрофотометрии (ах=0,02555 г; В=3,5%, л=6,8^-0,02180, Ас,.- 0,594)

Оптическая плотность Найдено суммы оксикоричных кислот, % Метрологические характеристики

0,517 7,70

0,498 7,41 *=7,61

0,496 7,38 5=0,1959

0,524 7,80 %=0,0800 ДХ=0,2055 е=2,70%

0,506 7,53

0,526 7,83

Результаты, представленные в таблицах 9 и 10, показывают, что содержание суммы фенольных соединений в пересчете на кофейную кислоту составляет в экстракте артишока колючего сухом, полученном соответственно из свежего и высушенного сырья 9,3±0,2% и 7,6±0,2% соответственно.

Фармакологические исследования сухого экстракта, полученного из свежих листьев артишока колючего

Проведенные нами фармакологические исследования ограничились только определением острой токсичности и изучением желчегонного и гепатопротекторно-го действия водного сухого экстракта, полученного из листьев артишока колючего.

При определении острой токсичности гибели животных не наблюдалось. При вскрытии животных через 14 дней после введения исследуемого экстракта, изменений со стороны печени, почек и селезёнки не обнаружено.

В качестве препарата сравнения для изучения желчегонного и гепатозащитно-го действия сухой экстракт из листьев артишока колючего мы использовали «Хофи-тол» (Лаборатории РОЗА-ФИТОФАРМА, Франция). Эксперименты проводили на белых крысах. В качестве контроля использовали физиологический раствор. Изучение гепатопротекторной активности проводили на модели токсического поражения печени тетрахлорметаном. В гомогенате печени крыс определяли содержание гли-

когеиа и триглицеридов. В сыворотке крыс определяли общий билирубин, ТБК-активные продукты, щелочную фосфотазу, (аланинаминотрасферазу).

В ходе проведения эксперимента были получены следующие результаты:

1) Триглицериды. Под влиянием экстракта артишока колючего наблюдали снижение содержания триглицеридов относительно группы контроля. Эффект сопоставим с препаратом сравнения «Хофитолом».

2) Билирубин. Уровень билирубина под влиянием сухого экстракта артишока колючего достиг значений интактных животных, что характеризует нормализацию экскреторной функции печени.

3) ТБК-активные продукты. Под влиянием сухого экстракта снизился уровень 1 БК-активных продуктов, что свидетельствует об уменьшении процессов пере-кисного окисления липидов.

4) Щелочная фосфотаза. Уровень щелочной фосфотазы снизился, что говорит о нормализации холестаза в печени.

5) Гликоген. Под влиянием экстракта артишока наблюдали увеличение гликогена в печени крыс относительно контрольных животных, что говорит о нормализации углеводного и жирового обмена.

6) Аланииаминотрасфераза. Наблюдалось понижение содержания.

При введении сухого экстракта артишока количество желчи увеличивалось, что тоже благоприятно влияет на процесс гепатоза. \

Таким образом, проведенные фармакологические исследования выявили достаточно высокую гепатопротекторную и желчегонную активность сухого экстракта артишока колючего сопоставимую с французским препаратом сравнения «Хофи-тол».

Общие выводы

1. Выявлена возможность интродукции артишока колючего на КМВ. Установлены оптимальные природные агротехнические условия выращивания артишока колючего в культуре. Определена урожайность надземной части растения (до 420 ц/га свежего сырья).

2. Химическими и физико-химическими методами анализа установлено содержание фенольных соединений (флавоноидов, оксикоричных кислот, фенологли-козидов, кумаринов), сесквитерпеновых лактонов, аминокислот, алкалоидов, три-терпенов, стеринов, углеводов в сырье (листьях) артишока колючего. В сумме фенольных соединений идентифицировано 12 веществ.

3. На основании анатомо-диагностических исследований выявлены характерные признаки каждого вида сырья артишока колючего (лист, черешок, листочек обертки соцветия), позволяющие подтвердить подлинность данного вида.

4. Установлена возможность максимального извлечения экстрактивных веществ из листьев артишока колючего при использовании в качестве экстрагента воды. Найдены оптимальные условия получения сухого экстракта из данного вида сырья.

5. Для количественного содержания суммы оксикоричных соединений в пересчёсе на кофейную кислоту в листьях артишока колючего свежих предложена методика спектрофотометрического определения. Методом ВЭЖХ в сухом экстракте из свежих листьев артишока идентифицировано 11 фенольных соединений, среди которых доминируют кофейная и хлорогеновая кислоты.

6. Для сырья (листьев) артишока определены нормы качества, которые вошли в проект ФСП «Артишока колючего листья свежие».

7. Показано, что исследуемый экстракт является нетоксичным, проявляет ге-патопротекторную и желчегонную активность на уровне лекарственного препарата сравнения «Хофитол».

Список опубликованных работ:

1. Биологически активные вещества артишока колючего и стандартизация его сырья и препаратов // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (56; 2001; Пятигорск): материалы... - Пятигорск, 2001. - С. 32-33. (Соавт. Челомби 1ько В.А.)

2. Изучение элементного состава листьев артишока колючего (Cynara scolymus) // Вестн. Воронеж, гос. ун-та. Серия: Химия. Биология. Фармация. - 2006. - № 2. -С. 304-305.

3. Морфолого-анатомическое изучение артишока посевного // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (55; 2000; Пятигорск): материалы... - Пятигорск, 2000. - С. 30-32. (Соавт. Елисеева Л.М., Челомбитько В.Л.)

4. Некоторые итоги культуры артишока колючего на Северном Кавказе // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (54; 1999; Пятигорск): материалы... - Пятигорск, 1999. - С. 23 24. (Соавт. Челомбитько В.А., Фролов П.А.)

5. Фармакологический спектр активности препаратов из артишока колючего (Cynara scoiymus) // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (58; 2003; Пятигорск): материалы... - Пятигорск, 2003, - С. 56-57. (Соавт. Челомбитько В.А., Долганенко Л.Г.)

6. Изучение углеводов Cynara scolymus // Химия природ, соединений. - 2007. - №1. - С. 89-90. (Соавт. Орловская Т.В., Челомбитько В.А.)

7. Химический состав листьев Cynara scolymus // Химия природ, соединений. -2007. - №2. - С. 197-198. (Соавт. Орловская Т.В., Челомбитько В.А.)

8. Артишок как перспективное пищевое и лекарственное растение //Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (54; 1999; Пятигорск): материалы... - Пятигорск, 1999. - С. 38-40. (Соавт. Челомбитько В.А.)

9. Некоторые итоги изучения дикорастущих и культивируемых растений семейств Papaveraceae, Fumaraceae и Asteraceae на Северном Кавказе // Человек и лекарство: тез. докл. 8 Рос. нац. конгр. 2-6 апр. 2001 г. - М., 2001. - С. 634. (Соавт. Челомбитько В.А., Денисенко О.Н., Житарь Б.Н., Коновалов Д.А., Орловская Т.В., Секлецова М.А., Серебряная Ф.К.)

ЛУНЕВА ИЛОНА ЛЮДВИГОВНА

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ АРТИШОКА КОЛЮЧЕГО (CYNARA SCOLYMUS L.), ИНТРОДУЦИРОВАННОГО НА КАВКАЗСКИХ

ПЯЛТСВЛ ITkTJbiV ПЛПЛУ

1 т1111uji l liji I iv w v wv

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата фармацевтических наук

Подписано к печати 24.09.2009 Формат бумаги 60 х 84 1/16 Бумага книжно-журнальная. Печать ротапринтная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 4044

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (357532, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11).

Актуальность темы

Рост числа заболеваний печени и желчевыводящих путей представляет одну из важных медицинских проблем. Это связано с тем, что во всем мире ухудшаются экологические условия, увеличивается поступление химических средств в организм человека в виде различных добавок к пище, консервантов, ароматизаторов, красителей и удобрений. Кроме того возрастает потребление лекарственных средств синтетического происхождения и алкогольных напитков. Все это оказывает в первую очередь вредное влияние на функцию печени.

Для лечения заболеваний печени и желчевыводящих путей в настоящее время в мировой практике имеется достаточно большой ассортимент лекарственных средств синтетического и природного происхождения. Однако следует отметить, что» при заболеваниях печени необходимо отдавать предпочтение растительным средствам, т.к. синтетические лекарственные средства могут проявлять побочное действие.

Анализируя литературные сведения можно отметить, что число растительных средств, применяемых для лечения указанных заболеваний, сравнительно невелико и на фармацевтическом рынке России представлено преимущественно лекарственными препаратами, полученными из сырья расторопши пятнистой, бессмертника песчаного, тысячелистника обыкновенного, полыни горькой, чистотела большого, куркумы длинной и др.

Используя опыт народной медицины, в странах Западной Европы разработаны И' применяются гепатопротекторные лекарственные фитопрепараты * Хофитол» (Франция), «Экстракт артишоков» (Германия), «Гербеон» (Словения), а также биологически активная добавка «Цинарикс», «Гефитол» (Вьетнам).

Большой интерес представляет изучение растительных объектов, которые применяются как пищевые и в то же время^могут содержать биологические активные вещества, проявляющие гепатопротекторную и желчегонную активность. К числу таких объектов нужно отнести артишок колючий (Супага зсо1утиз Ь.) сем. астровые (Аз1егасеае). Этот вид применяется как пищевой продукт и лекарственное растение особенно в странах Западной Европы. Его пищевая ценность объясняется наличием 5 таких биологически активных веществ как полифенольные соединения; полисахариды, органические кислоты и др. Однако в России лекарственные препараты артишока не выпускаются. Это связано с отсутствием достаточной сырьевой базы и недостаточным фармакогностическим изучением артишока, культивируемого на территории РФ. Решение вопросов перспективы интродукции артишока колючего, его фитохимической оценки позволит обеспечить фармацевтические производства сырьем и наладить выпуск;ценных гепатопротекторных и желчегонных средств.

Поэтому фармакогностическое изучение-артишока колючего и возможности его интродукции на Северном Кавказе является актуальной проблемой для; фармацевтической науки и практики. 1 ,

Цель и задачи исследования

Целью работы является фармакогностическое; изучение нового для России лекарственного растения артишока колючего, интродуцированного в условиях Кавказских Минеральных Вод (КМВ) и создание на его основе отечественного лекарственного средства, обладающего по гепатопротекторным и желчегонным действием:

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

- выявить возможность интродукции артишока колючего в условиях КМВ- и разработать элементы технологии возделывания^ его из семян марокканского экоти-па;

- провести сравнительный химический анализ сырья артишока колючего, культивируемого в условиях КМВ и марокканского образца;

- выявить ¡характерные анатомо-диагностические признаки вегетативных и ге-. неративных органов; подтверждающие подлинность растительного сырья, и установить основные числовые показатели сырья, определяющие его'качество; выбрать оптимальную-технологию сухого экстракта на основе сырья артишока колючего; • ■,'

- разработать, нормы; качества сырья (листьев); артишока колючего и сухого экстракта, полученных из свежих листьев;

- изучить острую токсичность, гепатопротекторную и желчегонную активность, сухого;экстракта, полученного из свежих листьев артишока колючего; ' б

- разработать проект ФСГТ «Артишока колючего листья, свежие».

Научная новизна

На основании изучения биологии развития артишока колючего в условиях Северного Кавказа и сравнительной оценки культуры в условиях Марокко установлена возможность его выращивания в условиях КМВ. Показано, что урожайность артишока колючего в условиях культуры может достигать 400-420 ц/га), которая приближается к урожайности артишока в условиях культуры в Марокко.

В результате фитохимического анализа листьев артишока колючего, выращенного в Марокко и на КМВ, установлена идентичность образцов и наличие:

- флавоноидов, оксикоричных кислот, дубильных веществ, сесквитерпеновых лактонов, кислоты аскорбиновой, алкалоидов, тритерпенов и стеринов, углеводов, белков;

- 15 аминокислот (аспарагиновая кислота, аргинин, серин, глутаминовая кислота, глицин, аланин, изолейцин, треонин, лейцин, тирозин, валищ фенилаланин, гистидин, лизин, и метионин), последние 8 - являются незаменимыми.аминокислотами.

- моносахаридного- состава полисахаридов (методом ГЖХ): водорастворимые полисахариды (ВРПС-Х) - 5,1% (ксилоза, арабиноза, манноза, глюкоза, галактоза, уроновые кислоты); водорастворимые полисахариды (ВРПС-Г) - 0,78% (рамноза, ксилоза, арабиноза, манноза, глюкоза, галактоза, уроновые кислоты); пектиновые вещества (ПВ) - 2,4% (рамноза, ксилоза, арабиноза, галактоза, уроновые кислоты); гемицеллюлоза (ГМЦ) - 2,63% (рамноза, ксилоза, арабиноза, манноза, глюкоза, галактоза, уроновые кислоты);

- 5 макроэлементов (натрий, калий, кальций, магний, фосфор), и 16 микроэлементов (медь, серебро, молибден, литий, свинец, кобальт, никель, ванадий, хром, железо, бор, алюминий, кремний, марганец);

- 12 фенольных соединений (методом ВЭЖХ): флавоноиды (лютеолин-7-глюкозид, гиперозид, дигидрокверцетин, витексин, рутин, ориентин, гесперидин); кумарины (4-оксикумарин); оксикоричные кислоты (кофейная кислота, хлорогено-вая кислота, неохлорогеновая кислота); фенологликозиды (арбутин). 7

Из свежих и сухих листьев артишока колючего получены сухие экстракты. Методом ВЭЖХ в экстракте из сухих листьев обнаружено 15 веществ, идентифицировано 11 соединений: флавоноиды (лютеолин-7-глюкозид, рутин, гиперозид, апи-генин, робинин); фенолокислоты (галловая кислота, цикориевая кислота); оксико-ричные кислоты (кофейная кислота, хлорогеновая кислота, неохлорогеновая кислота, феруловая кислота). В полученном экстракте из свежих листьев обнаружено 35 веществ, методом ВЭЖХ идентифицировано 11 соединений: флавоноиды (рутин, кверцетин, лютеолин, виценин, апигенин); кумарины (умбелиферон, 4-оксикумарин); фенолокислоты (салициловая кислота); оксикоричные кислоты (хлорогеновая кислота, кофейная кислота, неохлорогеновая кислота).

Разработаны нормы подлинности и качества для листьев артишока колючего, методики количественного определения действующих веществ в сухих экстрактах из сухих и свежих листьев артишока колючего.

В опытах in vivo показано, что по гепатопротекторной и желчегонной активности сухие экстракты не уступают препарату сравнения «Хофитол», являются практически нетоксичными веществами.

Практическая значимость

Выявлена возможность выращивания артишока колючего на КМВ (урожайность 420 ц/га) и использования для России нового вида лекарственного сырья — листьев артишока колючего для получения лекарственных средств, обладающих гепатопротекторной и желчегонной активностью.

Разработаны методики качественного и количественного анализа сырья,артишока колючего, основанные на обнаружении фенольных соединений, полисахаридов и аминокислот с использованием методов тонкослойной хроматографии (ТСХ), спектрофотометрии, высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) и газожидкостной хроматографии (ГЖХ). Разработаны нормы качества листьев артишока колючего и сухого экстракта из него, с учетом» современных требований, предъявляемых к подлинности и качеству лекарственного растительного сырья.

Разработана технология сухого экстракта из листьев артишока1 колючего, выращиваемого на КМВ.

Материалы внедрения

Результаты исследований по гепатопротекторной и желчегонной активности сухого экстракта из свежих листьев артишока колючего внедрены в учебный процесс в виде информационного письма на кафедре фармакологии ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росздрава», что подтверждено актом внедрения от 9 апреля 2007 г.

Материалы исследований рекомендованы для дальнейшего углубленного фармакологического исследования с целью возможной разработки лекарственных средств.

Подготовлен проект ФСП на лекарственное растительное сырьё « Артишока колючего листья, свежие», внедренный на ЗАО «Вифитех» (Россия)'(акт внедрения от 9 апреля 2007 г.).

Апробация и публикация результатов исследования

Фрагменты диссертации докладывались и обсуждались на VIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2001) и четырёх региональных научных конференциях по проблемам фармации, фармакологии и подготовке кадров (Пятигорск, 1999 - 2001, 2003).Основное содержание диссертации опубликовано в 9 научных работах, в том числе в трех журналах, рекомендуемых ВАК.

Связь исследования с проблемным планом фармацевтических наук

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава (№ госрегистрации 01.200.112164).

Положения, выносимые на защиту:

- результаты интродукционных исследований артишока колючего в условиях

КМВ;

- результаты изучения показателей подлинности (морфолого-анатомическая диагностика) и качества листьев артишока колючего (числовые товароведческие показатели,. нормирующие качество исследуемого сырья, содержание основных биологически активных соединений в сырье);

- обоснование технологии сухого экстракта из листьев артишока колючего;

- результаты изучения; острой токсичности, гепатопротекторной и желчегонной'активности сухого экстракта из листьев артишока колючего.

Объём и структура диссертации

Диссертационная работа; изложена на 119 страницах, состоит из введения^ обзора литературы, шести (2-7) глав экспериментальной части, общих выводов, списка литературы, приложений; Работа иллюстрирована 21 рисунком, и 28 таблицами. Библиография включает 166 источников, из которых 80 на иностранных языках.

Общие выводы

1. Выявлена возможность интродукции артишока колючего на КМВ. Установлены оптимальные природные агротехнические условия выращивания артишока колючего в культуре. Определена урожайность надземной части растения (до 420 ц/га).

2. Химическими и физико-химическими методами анализа установлено содержание фенольных соединений (флавоноидов, оксикоричных кислот, фенологли-козидов, кумэринов), сесквитерпеновых лактонов, аминокислот, алкалоидов, три-терпенов, стеринов, углеводов в сырье (листьях) артишока колючего. В сумме фенольных соединений идентифицировано 12 веществ.

3. На основании анатомо-диагностических исследований выявлены характерные признаки каждого вида сырья артишока колючего (лист, черешок, листочек обертки соцветия), позволяющие подтвердить подлинность данного вида.

4. Установлена возможность максимального извлечения экстрактивных веществ из листьев артишока при использовании в качестве экстрагента воды. Найдены оптимальные условия получения сухого экстракта из данного вида сырья.

5. Для количественного анализа содержания оксикоричных соединений в пересчёте на кофейную кислоту в листьях артишока колючего свежих предложена методика спектрофотометрического определения. Методом ВЭЖХ в сухом экстракте из свежих листьев артишока идентифицировано 11 фенольных соединений, среди которых доминируют кофейная и хлорогеновая кислоты.

6. Для сырья (листьев) артишока определены нормы качества, которые вошли в проект ФСП «Артишока колючего листья, свежие».

7. Показано, что исследуемый экстракт является нетоксичным, проявляет ге-патопротекторную и желчегонную активность на уровне лекарственного препарата сравнения «Хофитол».