Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое исследование полыней секции Absinthium флоры Сибири

АВТОРЕФЕРАТ
Фармакогностическое исследование полыней секции Absinthium флоры Сибири - тема автореферата по фармакологии
Сальникова, Екатерина Никифоровна Уфа 1994 г.
Ученая степень
кандидата фармацевтических наук
ВАК РФ
15.00.02
 
 

Автореферат диссертации по фармакологии на тему Фармакогностическое исследование полыней секции Absinthium флоры Сибири

МИ НИ С 1 С. К1 Г»о Ь'Ь П> П »»• ЛКпиГ. V»' Кс-Ги.'п !_ ^ II ^' ^ ^ >■'.

ШЬ'ЙРШР Г О СУДАРСТБЕНННН ЩКЩГпСШ ИНСТ"Т"Т

Г6 ОД

2 ;{ На правах рукописи

САЛЬНИКОВА ЕКАТЕРИНА НИКИФОРОВЙА

УДК 5Г5.741:61Б.322

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПОШЕЙ СЕКЦИИ АВБИПИШН ОПОРЫ СИБИРИ

00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученвй степени кандидата фарнацертических наук

Уфа - 1994

/

/

Работа выполнена в Сибирском иедииикском ¡¿ниверситртг.

Научный руководитель - доктор фармацевтических наук,

профессор С.Е.Днитрук.

Официальные оппоненты - доктор фармацевтических наук, • ( профессор В.А.Куркин,

- кандидат фармацевтических наук Т.И.Никитина.

Ведущее учреждение - Пермский фармацевтический институт.

Защита состоится __1994 года в___часов

на заседании специализированного Совета К 084.35.02 при Банкирском государственном -медицинском институте по адресу: 450025; Уфа. ул. Ленина. 3. '

С диссертацией модно ознакомиться в библиотеке Башкирского государственного медицинского института.

Ученый секретарь специализированного Совета, доктор иедицинских наук

Э.Г.Давлетов

ОБЩнЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РДБОТН"

Актуальность т е.и ы; Освоение и всестороннее изучение "природных растительных ресурсов, мобилизация их на нцеды практического здравоохранение валяется одной из актуальных задач фармацевтической науки. Постепенное истозение запасов лекарственного растительного сырья в местах традиционного сбора, а такяе нарцис-ние межрегиональных хозяйственных связей вызывает необходимость введения в аедицинскуя практику новых видов сырья.

Внедрение близкородсТвенккх видов полыни в медицину значительно расширит сырьевуа базу официального вида и избавит сибирский регион от необходимости завозить сырье полыни горькой из Европейской части, где она в основном заготавливается/ Кроме того, клиническое и Фармакологическое исследование систематически близких видов полыни представляет интерес и с точки зрения расширения спектра их применения, т.к.-по данный народной медицины полыни используются не только при желудочно-кишечных заболеваниях, но и проявляют инсектицидные, фунгицид-ные и другие свойства. Известно, что фармакологические свойства растений рода полынь связывают с содерганием в них эфирных иасел и сесквитерпеновкх лактонов. Однако особый интерес в этом отношении представляют фенолькые соединения и полисахарида, обладание разносторонней биологической активностью. Для природных фенолоЕ характерно выраяенное действие на секреторную и дезинтоксикационнуа функции печени. Полисахариды природного происхождения относятся к биологическим стимуляторам и оказывают обволакиваивее, спазмолитическое действие. Указанные свойства фенольных соединений и полисахаридов являются■вазныыи факторами терапии заболеваний гелудочно-киаечного тракта.

Цель и задачи исследования. Изучить возмозность использования в медицинской практике наряду с :: *иью горькой ■ филогенетически близких видов п.сиверса и

¡.-теку и, а такке расзирение спектра их применения в медицине .

Для достижения намеченной цели поставлены следующие задачи:

- провести поисковые химические и фармакологические исследования основных групп биологически активных веществ;

- провести сравнительное фармакологическое исследование изу-

чаемых видов на секрецию келудочного- сока, келчегоннук и антигрибковую активность:

- установить состав и количественное содержание фекальных соединений в изучаемых объектах;

- выделить индивидуальные Фенольнне соединения (флавоноидк. кумарины, фенолокислотн) и установить их-структуру:

- разработать нормативно-техническую документация на предлагавший вид сырья.

Научная новизна.. Впервые проведено комплексное фитохимическое и фармакологическое исследование полнни якутской, п.сиверса и п.горькой. Изучен химический состав Фенольных .соединений и полисахаридов. Выделено 19 индивидуальных соединений, относящихся к иксикумаринан, флавонолдам и оксико-ричним .кислотам. Впервне установлена структура ? новых веществ для п.горькой, 9 - для п.сияерса, 14 - для п.якутской. Проведена качественная и количественная оценка полисахаридного комплекса. Выявлена зависимость.антигрибковой активности ряда природных комплексов полыней от качественного состава их фенольных соединений и полисахаридов.

Новизна практических исследований в области поиска природных антигрибковых средств защищена патентом на изобретение.

Практическая .значимость р а б о -т к. Показана возможность применения в медицинской практике п.сиверса наравне с п.горькой. На основе двух видов гырья предложен более оптимальный препарат -'40^-ная настойка е качестве велудочного и нелчегонного средства.. Установлено, что п.горькая, п.сиверса и п.якутская являются перспективней источниками растительного сырья для получения препаратов зн-тигрибкового действия. По материалам исследования разработан проект Временной Фармакопейной статьи "Трава полыни скверса" и направлен г. Фармакологический комитет РФ для получения разрешения на использование полыни сиверса в медицинской практике (Регистрационный номер 2271 от 03.12.93). На основании анато-ыо-иорфологического анализа близких видов разработаны нетсди-ческие указания "Диагностические признаки растений- рода полынь" (совместно с Львовским медицинским институтом) и утверждены АПК Совззфирлекрзспрон (РЕГ N 14-4-11). На зациту выносится: - обоснование о возможности использования в медицинской практике наряду с полыньи горькой филогенетически близкого ви-

да п.сиверса:

- результаты химического изучения траВы полупи горькой, п.сиверса и п.Якутской;

- возможность. создания на их основе эффективных лекарственных средств противогрибкового действия.

Апробации работы. Основные положения диссертации доложены и обсуадеНы на.Сибирских конференциях "йкту-альные проблемы фармакологии и поиск новых лекарственных препаратов" (Томск, 1986, 1987), научно-йрактических конференциях "Научно-технический прогресс в медицине и биилогий" (Томск, 1988), "100 лет основания Томского медицинского института" (1988), меакафедральнок заседании Фармацевтического' факультета Сибирского медицинского'университета (1994).

Работа выполнена в соответствии с планок научных исследований кафедры фармакогнозии с курсом ботаники Томского медицинского института й комплексной целевой программы СО ЙМН СССР "Здоровье человека в Сибири" (К Гос. регистрации 01.5".20002489).

Публика ц-и и," Основное содержание диссертации из-лоаено в 12 статьях и тезисах докладов..

О б ъ е и структура диссертационной 'работы. Материалы исследования из'лояены на 136 страницах «авинописногз текста. В тексте приведено ? . рисунков и .19 таблиц. Библиографический указатель Вплючает 215' источников -литературы, из них 32 - зарубежной.

Диссертационная работа состоит из введения, пяти глав, выводов, списка литературы и прилояения.

В первой главе приведены данные литературы по ботанической характеристике, распространению, химическому составу и применений растений секции АЬя^Шип. '

Вторая глава посвящена описанию объектов и методов исследования.

В третьей глазе излокены материалы сравнительного фармакологического и! химического исследования природных комплексов полыни горькой, п.сиверса и -п.якутской.

В четвертой главе приведены результаты изучения химической структуры выделенных веществ с цельи их идентификации.

Пятая глава посвящена поиску группы природных соединений - основного носителя фармакологических эффектов препаратов полыней.

Приложение включает проект ВФС "Трава полыни сиьерса",

методические указания "Диагностические признаки растений рила полынь", а такие представлены'материалы, подтверждающие практическую значимость проведенных исследований.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАШЛИ " » Объекты и методы исследования

Объектани исследования служили надземные части растений полыни сиверса и п.якутской. Основными критериями при отборе объектов для углубленного изучения были:

- достаточные сырьевые ресурсы на территории Сибири:

- близость химического -состава филогенетически .родственных видов;

- преимущество полыни.сиверса и п.якутской по отновенин к официнальнону виду п.горькой в связи с отсутствием токсического компонента эфирного масла туйона;

- применение в народной медицине в качестве желудочного средства.

Для подтверждения медицинской значимости полыни сиверса и п.якутской изучение химического состава .и фармакологических ' -- свойств проводили в сравнении с официнальным видом п.горькой.

Выделение и химическое изучение биологически активных вр-аеств проводили методами хроматографии на колонках силикагеля, полиамида, целлюлозы, хроматографии на бумаге и в тонком ело? сорбента: для исследования структуры выделенных соединении использовали традиционные химические и инструментальные методы анализа.

Изучение влияния природных комплексов исследуемых виде? полыни на секреции желудка проводили на модели перевязки при?-ратника келудка у крыс. Велчеобразовательную и нелчевыдели-тельную функцию печени у крыс оценивали по методике Н.П.Скакуна и А.Н.Олейник. О степени желчегонной активности природных комплексов судили: по скорости секреции велчи, общему количеству и концентрации яелчных кислот, холестерина и билирубина в яелчи. Противогрибковые свойства исследовали в условиях in vitro. Б качестве тест-микроорганизмов использовали возбудпте-■ ли основных грибковых заболеваний Trichophyton rubruta, ■ Trichophyton iaentagrophytes, Microsporum canis,' Aspergillus niger, Candida albicans, выбор которых определялся методом

экспертных оценок специалистов-микологов.

Сравнительное химическое и.фармакологическое изучение природных комплексов полыни горькой, п.сиверса и п.якутской

Общепринятыми реакциями со специфическими реагеьтами на различные группы природных соединений в надземной части исследуемых видов полыни выявлены кумарина (0,99-1,31%), Флавонои-ды (0,44-0,55%), •фенолокислоты (1,70-1,89%), эфирные масла (0,52-1,12%), полисахариды (16,50-17,50%). Качественный состав биологически активных веществ и количественное содержание их в исследуемых видах весьма близки.

Методами тонкослойной хроматографии в различных системах растворителей обнаружено от семи до девяти веществ кумариновой природы, из них пять соединений присутствуют во всех видах. Качественный состаз фенолокислот представлен 5-6 веществами, из них пять являются общими для трех видов. Выявлена существенные различия п.горькой и п.якутской по'химическому составу веществ флавоноидной природы, среди которых установлено наличие метоксилированных соединений. Полученные данные по содержании водорастворимых полисахаридов, пектиновых вецеств и ге-' мицеллшлозы свидетельствуют об-ях близком качественном составе.

На следующем этапе работа проведены фармакологические исследования. Нами исследованы антигрибковые свойства эфирных масел и экстрактов, полученных зкстрагентами различной полярности (гексан, дизтиловый эфир, хлороформ, зтилацетат, этиловый спирт, вода). Исследуемые комплексы проявили избирательную • антигрибковув активность: наиболее чувствительны возбудители, вызывающие оироко распространенные микозы -' трихофитию, микроспорию и малоэффективны в отношении возбудителей кандидоза, аспергиллеза.- Исключением из этого являьтся только эфирное масло (.п.якутской и п.сиверса) и гексановый экстракт п.горькой, подавляющие рост черного аспергилла в весьма широких пределах концентраций (125-1000 мкг/мл). Слабое влияние на рост белой кандиды оказывает только эфирное масло п.якутской.

На антигрибковую активность экстрактов исследуемых полыней существенное влияние оказывает полярность используемого }кстрагента. В этом отношении наиболее выраженным ингибирующим аффектом отличаются экстракты, полученные горячей водой. Именно они в перспективных концентрациях (15.6-31.2 мкг/мл) задер-

- Б -

кивали рост трех возбудителей дерматофитий. Водные -экстракты, учитывая простую технологию их получения, высокий выход конечного продукта, могут быть рекомендованы для более углубленного фармакологического изучения с целью практического использования в качестве противогрибковых средств. >

• Преследуя главную.; цель работы - раснирение сырьевой базы полыни-горькой^нами бьг.ч Изучены желчегонные свойства тс влияние на' секреции нелудочного сока п.сиверса и п;якутской в сравнении с офицнналъныи видом. Биологически активные комплексы из надземной части полыней выделяли с помочьв.воды. -402-ного и- 702-ного этанола, используя общепринятые дкстрагенты различной степени полярности для максинального извлечения биологически активных вецеств:

Результаты выполненных исследований позволили установить, что изучаемые виды обладагт выраяенной аелчегонной активностью. При этом, п.сиверса по действип приблияается к п.горькой. Из трех исследуемых экстрагентов следует- выделить экстракты, полученные с лонощьв воды и 402-ного этанола. При их введении увеличивается скорость секреции яелчи и ее общее -количество. Зто способствует активизации синтезирувцей функции печени и выводу с яелчыо ее основных ингргедиентов, превосходя показатели препаратов сравнения - фланина и настойки п.горькой на ?0Х-ном этаноле.

Изучение влияния экстрактов исследуемых видов полыни на секрецию яелудка позволяет выделить по эффективности полынь сиверса. Введение ее- экстрактов способствует увеличению основных показателей секреции желудочного сока, данные которых превосходят препарат сравнения - настойку п.горькой. Полыни сиверса по этому показателю значительно уступает п.якутская. Ее экстракт на 70^-ном -этаноле увеличивает секреции аелудочного сока по отношению к препарату сравнения на В'/., а экстракт на 402-ном этаноле - на 5%. Наиболее оптимальным экстрагентом для п,горькой и п.сиверса является 40%-ный этанол, т.к. введение его экстрактов усиливает секрецию аелудочного сока в 4,7 раза у п.сиверса и в 2,6 раза - у п.горькой. Для водных экстрактов эти показатели превыиали контрольные соответственно в 3,4 и 2,2 раза.

■ Кроне обцего количества выделенного аелудочного хока для оценки секреторной активности "препаратов имеет значение изменение его кислотности и содержание пепсина. Введение зкстрак-

тов полыней понижает рН желудочного сока в среднем на 15* - с 2,00 до 1,74, что свидетельствует о сдвиге реакции в кислую сторону. Это создает благоприятные условия для проявления активности пепсина (рН 1,50-2,00), т.к. в «елочной среде она падает. Исследование протеолитической активности желудочного сока доказало, что применение экстрактов на 402-ном этаноле в сравнении с контролем повышает выход фермента в среднем на 23У., водных - на 24У., а для настойки п.горькой этот показатель равен контролю.

Выполненные исследования подтвердили обоснованность применения полыни горькой и филогенетически близких видов п.сиверса и п.якутской в народной медицине в качестве желчегонных и яелудочных средств. Кроме того, полученные данные .позволяют рекомендовать использование п.сиверса в медицинской практике наравне с п.горькой. Оптимальным экстрагентом как для п.сиверса, так и для п.'горькой.является 40%-ный этанол, рчто дает основание предложить промывленное- получение официнальной настойки из п.горькой не на 70%-ном этаноле,-а на спирте более низкой концентрации.

Выделение и установление структуры фенольных соединений полыни сиверса,п.якутской и п.горькой

При выделении и разделении суммы фекольных соединений на индивидуальные вещества использовали методы избирательной экстракции, дробной кристаллизации; адсорбционной колоночной хроматографии на полиамидном -сорбенте, силикагеле, целлюлозе, тонкослойнуи и бумажную 'хроматографию. 8'качестве элвентов применяли воду, этанол, этилацетат, хлороформ, гексан, а также их смеси в различных соотноиениях.

В результате, проведенного исследования из надземной части полыней выделено в индивидуальном состоянии 19 соединений. Из них 4 вещества кумариновой природы, 7 веществ относятся к фе-нолокислотам и 8 веществ - к флавоноидам. Некоторые Физико-химические характеристики выделенных .соединений приведены в таблице 1 .•

Исследование выделенных соединений

Установление структуры выделенных веществ проводили с помощью инструментальных Физико-химических (УФ-, ИК-, ПМР-спект-

с

(Ti

»

о e

C5 t-

CT

S ü

H? «

о

jj о

Я R,

» в>

Ч Et

О S

С о

к

XI о

= ж

Я Л

« еъ

о о

С I-

<5 О.

с; С

V- с; О

№ а с.

с*

с

V—

V."

й-

к' С.

CL-

А

»

6'

и

ГО ft'

&

F5 ïS.

+ +

п.

<0

s »

« «U

s

о а со

es

+ + ч-

«э

i i

>

Ci ÎS SS

ч сг CS

SS ч» ч»

ça ъ» M ifl

■«ч

и и; и

^

» Л> S

к (-

t* eî а.5

с «X к: с;

с а." в>

с Ы

M ж ¿n и

и СО

m •if го -J-

со ко es

О

«ч

U

о ж

о (Ч

а?

«

te m с

о rv. o CS e»

CV (%) ru <\) trs CJ es»

1 in t 1 er> s Ю <V

о m to о о

CJ ГМ CM CM t™ rj Í4J

<*> Л'

CS er

с ft' ft

с Ï— к-

С1 с

й>

NC i. г—

M Г!» tí

(.. м î* г:

V-* M

сл ет о «ï

1 С ЯЗ

с s:

О

tr> "Т

eá со

i i

ГО

+ + -t- ■f Л

«

ГЯ o

fr— я

о o

ffi.

и i +■ -r * 1 w ■f 1

1

*■ Wi

•Si 1

<D m» es s

33 * >

& tVJ ' fM S

»»

a *> i

<5

ея pj

i 1 1 1 + 1 1

ta aj

В S

S s

Ft a i et

В «S» C^i tn «4« О PJ «9«

в> en «э £3 И. ш <a ra

л <v (Ni O - m •4 «N

i г 1 1 Sí 1 (

о CJ (S co- O 13 S О to

fe* tn ta es А СЭ вэ

Í4¡ CM CS 4M

ез *

о

хв

зз

о

ft» CS

Í2 es

es

LP

«э

Lui

I

ö

<aQ вО

œ о

a «tj

sa =

О v» о/

Cw CJ

I I

Ю «Г rv. f*¿ «г ta

ID

rj CJ

I

M

f\J CM

о

CJ

Ю О ОЧ (M о

О es es. P4 ' — СЧ S3

Ю fM

1 Í\J ел i о CS

о N cv. tN. N

(О CJ CM

TV <0 <л у i:

CS о о о о

í» es •ч CS

Kl <\г <\í

ss s

чэ

•M <ч

CJ и

X о

о; DÇ X «Я sc 1 et и s

ю <0 <и 1 « wu ч

œ Ш L- CS Ol <D s. « и: H" с 3;

о ts о О m t=! M ■е- il d. S E

С2. га t* в X О. u С 1 « tu U 3» «S

(О <0 it! CD <â <D О •у 9 u M bJ Ж <J S7 Ю

JE а í— a f- U i— =; i: <D a 1 ií « a S u

Э5 Ч •S О с: a О о X M <r¡ к IS О С. мм tï t- «

о t=î з> ' о. ч о о; a. й Гч. и н- сэ Oí a. Sa

1 s ■в-. О a. CJ о о ш из <E Q. « ^ tu ffl «3 J2 H

С sc о s; <D "г* 3= a X 1Л О X ss u

Ü а: О >c •Л <E

OJ CO CNl PO tíS -r

—* CD Œ3 —" — OJ —" * «а • M (Л

1 со 1 аа 1 СО 1 со 1 СО 1 OS I CO 1 ал t ва t as 1 ca i sa вз

- - 10 -

раскопки) и химических (кислотный, ферыентатизньгЛ гидролиз, цвлочнов расчзплчиие) методов, а такие сравнением с достоверными образцами.

К у и '1 р и н ы. На основании хронатографического исследования, даннах и ИК-спектроа вещества 8-2, 3-3, В-4 отнесены к пксипроиззодныа кумарина. 3 ИК-спектрах исходных соединений ябнаруяены характерные для згой группы веществ полосы поглощения при 1725-1707 си"' Скарбонильная группа л-пирона), 1690-1536 са"' {колебания сопряяенных двойных связей), 3340-3224 см"' С свободная оксигруппа). 3 отличие от веществ 3-4, 3-2 эчдество 9-3 имеет дополнительный максимум поглощения о области 2850 сп"1, что указывает на присутствие метоксигруппн. Наличие э ЧФ-спектрах веаестэ максимумов при 256, 255, 238, >25, 340, 355 нн такав указывает на их оксикунариновуя природу. Полеченные результата я. сравнение физико-глнических спойстэ выделенная соединений с достозернани образцами позволили идентифицировать вещества 3-2, 3-3, 3-4 с эскулетинон. скололетннон л -умбеллиферонон соответственно,

Зедестоо 3-1 при Ферментативной гидролиза расзепляетсз из эскулетик и 0-глвкозу. По температуре плавления, пробе смешения, продуктам расдепленнд и параллельного хроматографирозашп с достоверным образцом вещество В-1 идентифицировали с эскули-ном, Обнаруаение эскулетнна з п.снверса, а такзе-скополетина к умбеллиферона з- п.горькой согласуется с литературными данными, Впервые, в исследуемых видах, нами выделены скополетин. умбеллиферон, эскулетин, 1скулин.

О е н о л к а р б о н о э ы е к и с л о т я. На основании качественных цветных реакций, хронатографического исследования, данных ЧФ-спектров вещества В-9 и 3-10 отнесена к изводным бензойной кислоты. При ацетилировании зе^рст-л 3-' получили моноацетат п-оксибензсйной кислоты. Мелочное плаол^-ние вещества В-10 приводит к образования протокатеховой число-гы. 3 !К>-спектрах спиртових растзлроз обнаружены максиму*'« поглпаения з области ниае 300 нм, что характерно длз б.?нз.->йн.п) кислоты.

Зецества В-6, В-?. 3-3, В—11. В-12 по Флиоресцэнции пят^н на хроматограммах В ЧФ-свете, качественными реакциями, данными ЧФ— и ИК-спектров охарактеризованы как производные ч оччной кислот« с максимумами поглощения э области 330-29С нм. Наличм» коричного Фрагмента подтверадаот данные йК-спектрогкопии. -ч

- Ii -

точнее' полосы поглощений при 1640 и 15С5 с*;"' : полосы в области 3460 c»fY характеризует присутствие б исследуемом веществ? фенольных гидроксилов.

.Б продуктах щелочной деструкции веществ В—iI. Б-0, Ь-Ь обнаружены соответственно' 4-оксибензойная, 4-окси-3-.метокси-бензойная и 3,4-диоксибензойная кислоты. Продуктами щелочного гидролиза вецеств В-7 и В—12 ' является кофейная и D-хинная кислоты. С целью определения места присоединения остатка кофейной кислоты к D-хинной -кислоте проводили нагревание исследуемых соединений В-7, В—12 с ледяной уксусной кислотой. При этом образование лактона происходило только в присутствии вещества В—12, вещество В-7 оставалось без изменений. Следовательно, в молекуле вещества В-7 оксигруппа D-хинной кислоты замещена остатком кофейной кислоты в С-5 положении, в веществе В—12 - в полокении С-3.

"Таким образом, исследуемые соединения идентифицированы как: п-оксибензойная (В-3), ванилиновая (В-10), п-кумаровая (В-И), кофейная (В-6), феруловая (ß-8), хлорогеновая (В-7) и неохлорогеновая С В—12) кислоты (табл. 1). Нами впервые выделены и идентифицированы из п.якутской хлорогеновая, "кофейная, Феруловая, п-оксибензойная, ванилиновая, неохлорогеновая кислоты, из п.сиверса - хлорогеновая, феруловая, п-оксибензойнаа, ванилиновая, n-куиаровая, а из п.горькой - феруловая, п-оксибензойная и ванилиновая кислоты.

Флевоноиды. В ИК-спектрах этих соединений име-ктсй характерные для ароматической части флавоноидов полосы поглощения: 3385-2850 сн"/ (фенольные оксигруппы), 1680-1615 с к-у (карбонильная группа-пирона), 1620-1470 см"' (скелетные колебания ароматических колец), а максимумы при 2950-2880" см_/ свидетельствуют о наличии метоксильных групп.

На основании качественных реакций с солями циркония и киглотп лимонкой, а такяе окраски веществ на хроматограммах и ло свечению в УФ-свете определяли .принадлежность выделенных ФЛдьонокдог к флавонам и флавонолам. В веществах В-15, В-22, Ь-1' качественными реакциями не обнарувили свободной оксигруппы h положении С-3, поэтому данные соединения отнесены к флаконам, с вещества Б-16, В-14, В-5 - к гликозидироеанным по GH-группе при С-3 флавонолам. Зеленое окрашивание со спиртовым раствором хлорного 1елеэа, велтое - с хлористии цирконием, не исчезавшее при обработке лимонной кислотой, указывает на нали-

чие свободных оксигрутт в положениях 3 и 5'у вещестз 3-1?" я 3-16, что и позволило отнести эти соединения к флавонэлам.'

Положение свободных оксигрупп определяли УФ-спектроскопи-ей с применением диагностических (ионизирующих и комплексооо-разующих) реагентов (табл. 2).

& продуктах щелочной деструкции вещества 3-16 выявили Флороглюцин и п-оксибензойную кислоту, вещества В—17 - флорог-лицин и ванилиновую кислоту. Результаты изучения- физико-химических свойств, а также сравнение с достоверными образцами позволили идентифицировать Э—16 с кенпферолоа С5",5.?,4*-теrr-.i-оксифлавон), а В—17 с 'изораннетином (3,5,7,4'-тетраокси-3'-метоксифлавон).

. 3 ИК-спектрах веществ В-5, -В-14, В-18. кроме полос поглощения, характеризующих их флавоноидную природу, обнаружены три полосы в области 1100-1010 см"/ , указывающие на наличие з их структуре углеводов в пиранозной форме, полосы поглощения в ' области 896-890 см"' указывают не jS-конфигурацш гликозидной связи между углеводом и агликоном. УФ-спектральный анализ соединений с диагностическими добавками показал наличие egg-боднах оксигрупп в положениях С-5, С-7, С-4', а также замещенной гидроксильной группы при-С-3.

В продуктах кислотного гидролиза обнаружили и идентифиц:'-ровалй с достоверными образцами в веществах: В-5-- яемпферол -. D-глюкозу, В-14 -. изорамнетин и-Ц-галактозу, В-18 - изораине тин и рутинозу (D-гликоза и L-рамноза).

В результате проведенных исследований вещество В-5 охарактеризовано как астрагалйн (кемпферол-3-о-/-П-глнжопирано-зид), В—14 — кактицин (изораынетин-3-о-,»-D-галактопиранозид\ В-18 - нарциссин (изорамнеткн-З-о-^-И-рутинозид).

Зещества В—15, В-13, В-22 при хроматографировании в У®-свете имеют темно-коричневуп Флюоресценцию. В результате кислотного гидролиза углеводные заместители не обнаружены. 3 УФ-спектре имеются максимумы поглощения при 352, 270, 257 на и отмечается почти равная их интенсивность I и II полос, свидетельствующие. что данные соединения относятся к флавонам. С помощью УФ-спектроскопии и реакций с комплексообразующими л ионизирующими реагентами доказано расположение свободных мли замещенных оксигрупп по характерным батохромным' и гип.,эхромняя сдвигам С табл. 2).

ИК-спектры веществ В-15, В-13\ В-22 имеют полосы поглоуя-

«»»п; • р-ич.иып харош ■ )Ип 1 !п.н фр-юикиидии ни лип . ь ^ч-иим».,»

Вецестпп и Полосы "г-Го*-4"" и " Поглощение 2-10"^ М растворов В Э1 аноле, нн

погло- раствор в -»натрия +натрия +натрия +алюминий +ЭЛЮМИНИЙ

ег о шифр щения абсолютном зтилат ацетат ацетат и хлористый хлористый

спирте кислота и кислота

борная соляная

1 т с 3 .4 5 6 7 8

В-16 - 3,5,7,4'-тетра- I 365 310 -55' * 375 10 • 372 7 425 60 425 60

онсифласон (кемпферол) II 267 ' 240 -27 269 2 ■ 267 0 • 270 3 270 3 '

В-17 - 3,5.7,4'- II 372 345 -27 380 8 372 о • ' 428 • 56 " 425 53

тетраокси-З'-метокси- V . 255 270' 15 275 го : ■"255 0 ,264' 9 " 263 8

флав'он (изорамнетин)

В-13 - 5,7,4'-три- 345 410 65 410 65 ' 348 з '' " 361 16- 367 22 ■

гидрокси-З.З'-ди- II 254 ' 268 7 ; 273 12

иётоксифлавон - 261 278 17 261 0 276 15

В-22 - 5,4'-дигидрокси- I 353 412 59 354 1 354 1 '. 367 4 14 368 15

3,6,7,3'-тетраоксифла- 271 260 271 271 278

вон (хриэоспленетин) II 258 2 258 о • 258 266 8 26(1 2 '

В—15 - 5-гидрокси-3,6, I .352 397 45 ■353 1 353 Г • 360 8 . 368 16

?,5',4 -пентаметокси- 270 258 Г

фларон (артемизетин) II 257 271 14 .257 •о 267 10 ■ 265 8

В—18 — изорамнетин- I 360 420 60 ' 373 19 361 1 ' 400 40 361 Г

-3-рамноглвкозид II 256 ' 270 14 270 14 256 0 270 14 265 9

(нарциссин) •

В—14 - изорамнетин-3- I II 358 422 64 372 14 363 5 410 52 357 -1

галактозид (кактицин) 254 272 18 . 272 18 260 6 265 И -

В-5 - кемпферол-3-глю- г 350 407 57 350 0 350 0 392 42 _

козид (астрагалин) II 266 286 20 270 4 270" 4 ' 276 20 "

кия при 3800-3320 см_/ Сгидроксильннэ группы), 1560-13$0 см"* гкэрбонипьные группы/-пирона). 1625-1510 см~у (колебания ароматических колец), 2950-2880 см"' (нетоксильные группы). 3 ПМР-спектрах обнаруаены сигналы протонов ароматической сист?чн и метоксилънмх групп. Так. сигналы протоноз в виде синглегтз при 3,97 м.д., 3,33 м.д. и 3,33 м.д. вызваны метоксильннми группами в веществе 3-15; при 3,99 м.д.. 3,37 м.д., 3,33 м.д., 3,3? м.д. - з веществе 3-22; при 3,72 и.д. и 3,85 м.д. - ~ ее-;цестве 3-13.

На основании данных 9Ф-, ИК-, ГШР-епектроз. .а такяв сравнения физико-химических констант с описаниями э литератур-, зечестзо 3-15 охарактеризовано как артемизетин (5-гизооксп-3,0,7,3' ,4'-пентаметоксифлавон), 3-22 - хрязоспленеглн '5.-?'-дигидрокси-3,3,7,3'-тетраметоксифлавон), 8-13 - 5,7,4'-тркгил-рокси-З,3'-диметоксифлавон.

Впервые выделены и идентифицированы-в полыни якутской хри-зоспленетин, 3.7,4'-тригидрокси-3,3'-диметоксифлавон; кактицин и астрагалин; з полыни сиверса - кемпферол.

Поиск группы природных соединений, как основного носителя Фармакологического эффекта

«

Выполненные исследования сравнительного характера на фоне официнального средства полыни горькой подтверядапт перспективность использования полыни сиверса в качестзе зелчегонного и желудочного средства. При этом установлено, что комплекс биологически активных веществ, влияющих на секреции зелудочноп сока^ целесообразно выделять 40%-ным этанолом.

Лля определения группы природных соединений, являвшихся основным носителем фармакологического эффекта экстракт на 402-ном этаноле подвергали фракционному разделении, руководствуясь тем, что таким образом моано добиться концентрации определенной группы соединений в отдельных фракциях. 3 ое-зультета были получены Фракции полисахаридов и фенпльных соединений (хлороформная, этилацетатная, бутанольная и яодний остаток).

Специфическуи активность Фракций фенольных соединений 1 полисахаридов полыни горькой и п.сиверса изучали на секреторную активность желудка у крыс. Полученные результаты, показывают, что наибольшее влияние на секрецию яелудка оказали *оак-

цик' полисахаридов и бутанольная (флавоноидные гликозиды и фе-нолокислотк). Вероятно это обусловлено тем, что растительным полисахаридам характерно межмолекулярное взаимодействие с фе-нольныыи соединениями и другими биологически активными веществами, которое обеспечивает хороиее структурирование настоев, оказывает стабилизирующее влияние на энергетическое состояние действующих веществ в этих препаратах. Характерным для них является и взаимодействие с макрофагами слизистой оболочки келудочно-кивечного тракта, что приводит к усилению синтеза различных медиаторов иммунного-ответа. Не исключая влияние на секрецию велудка горьких веществ Слактонов), следует отметить минимальный эффект хлороформной Фракции, в составе которой они в основном содержатся. Кроме того, условия эксперимента исключали влияние фракций на вкусовые рецепторы, посколько препараты вводили вивотным с помощью зонда непосредственно в просвет желудка. Применяя внутрь в виде настоя или настойки горькие вещества рефлекторно увеличивают секрецию желудочного сока, а сумма фенолокислот, флавоноидов и полисахаридов, попадая в желудок, увеличивает лротеолитическую активность фермента, что способствует улучюению пищеварения.

Учитывая, что влияние полыни сиверса и п.горькой на секреторную функцию желудка обусловлено суммой биологически активных веществ, следует рекомендовать проведение оценки качества сырья данных видов по экстрактивным веществам, извлекаемых 402-ньш этанолом.

Выявленная в предварительных исследованиях антигрибковая активность водных экстрактов полыней послужили основанием для изучения влияния полисахаридов и некоторых выделенных .индивидуальных Фенольных соединений на патогенные грибы..Поли'сахари-дные комплексы, из указанных видов сырья, проявили разные уровни актигрибковой активности (от 7,8 до 500 мкг/кл). При этом они ингибируют рост только возбудителей дерматофитий к ^активны б отношении черного аспергилла и белой кандиды. Анализируя антигрибковые свойства отдельных фракций полисахаридов необходимо отметить, что наиболее активными из них оказались г-.'ДйрастБоримые полисахариды (7,8-52,5 ыкг/млУ. Причем наи-Оияс/и'ий интерес представляют водорастворимые полисахариды п.сиверса, активность которых составляет 7,8-15,6 мкг/мл.

Исследование антигрибковых свойств индивидуальных фенольных соединений показало, что по уровню активности они в основ-

ном уступали бодня* экстракта*. Среди индивидуальных компонентов наиболее выраженнуа антигрибковув активность- проявила п-кумаровая кислота, которая задерживала рост возбудителей дерматофитий в концентрации 31,2 мкг/мл. Среднзз степень активности в концентрации 125 мкг/чт з отношении возбудителей трихофитии проявили Феруловая и кофейная кислота. Слабую -эн-т игриб к о б уя активность проявили Флавоноиды кемпферал, астрага-дин. рутин и кумарин умбеллиферон.

Таким образок, полисахарида и фенольнке соединения чвлх-.-.сь носителем антифунгальной активности водног о экстрэкт-з представляют интерес для дальнейшего Фармакологического изучения и разработки ка их основе антигрибкового препарата.

-Исследования острой- т о к с и ч н п ст и водного экстракта п.якутской и экстракта на 4С%-ноя этаноле, показали, что согласно классификации' токсических зе-зестэ, сни могут быть отнесены к группе практически нетоксичных соединений.

ВЫВОД Ч

1. Впервые проведено сравнительное-фитсхиническое я фармакологическое исследование систематически близких видов л-секции АЬзхпШиа: п.горький, п.сиверса и

2. В надземной части исследуемых видов 8 сравнении г гф-.г::!-нальннн- видом - п.горькой, определены группы биологически активных веществ: кумарины г0,33-1,31%), феколокислст-} ( 1.70-1,80/:), флавоноиды С0;44-0,:5Х), полисахарид-,-

"С 15,50-1?,10%). эфирные масла (0,52-1,12%).

3. Установлено, что п.горькая, п.сиверса и п.якутская содержа: 7-9 веществ кумариновой'природы,- 5 из них присутствуй зо всех видах; 5-5) Фенолокислот, пять являится обеими для зсех видов; флавоноидный комплекс имеет существенные качественные различия меяду видами и представлен Флазоноламп

и метоксилирозанными флавоноидами; полисах.зриднив лексы по качественному и количественному состав; идентичен

4. Из исследуемых видов выделено в индивидуальном соотаянии фенольных соединений, структура их установлена физическими, хроматографическими и спектральными методами. - из н;гч представлены кумаринами (скоролетин, умбеллиферон, чску-лин, эскулетин), 7-Фенолкарбоновнми кислотам (кофейная, феруловая," п-кумаровая, хлорогеновая, неохлорогеноэая.

п-оксибензойкая и ванилиновая), 8-флавоноидами (артекчзе-тик, хризоспленетин, 5,7,4'-тригидрокси-3,3'-диметоксифла-е>он, изорамнетин, кемпферол, нарциссик, кактицкн, астрага-лин ).

3. Установлено, что п.горькая,., п.сиверса по желчегонной активности и влиянию на секрецию желудочного сока равноценны. Таким образ он,- доказана возможность использования ь медицинской практике травы п,сиверса наравне с официналь-ннк видом п.горькой,-что значительно-расширит сырьевую ба-su лекарственного растительного сырья '. скбирско-дальне-юсточного региона.

■■. Фармакологическими исследованиями установлено, что наиболее оптимальным экстрагектом для получения гелчегонного и " желудочного средства как из п.горькой, так и из п.сиверса является 402-ный этанол. ■

''. Достоверно показано, что эффективность влияния 402-ного ькстьакто п.сиверса на секрецию велудочного сока обусловлена комплексом биологически активных вецеств (фенольние соединения и полисахариды),, на основании чего предложено проводить стандартизацию травы п.сиверса по сумме зкстрактив-. ных веыесть, извлекаемых 40^-ным этанолом. Изучены антигрибковне свойства суммарных комплексов и некоторых индивидуальным: БОВ полыней. Наиболее эффективными оказались водные извлечения исследуемых видов и эфирное к ь с л С1 п.якутской в отношении возбурителей трихофитии и микроспории, ь связи с чек является перспективным их дальнейшее исследование с целью создания противогрибковых '.'редеть.

l-. île основании результатов анатомо-морфслогического, химического и товароведческого анализов разработан проект Временной фармакопейной статьи "Трава полыни сиверса". Необходимая документация находится на рассмотрении в Фармакологическом комитете МЗ РФ,

- 13 -

Основные положения диссертации опубликованы з следующих

работах:

1. П.^т-чт Ч 1755443 на изобретение Способ получения средства, 'j;3.:a»asqern противогрибковым действием / il .г.. Сибаре-эа, С.Е.Даитрук, E.H.Сальникова. <Ц:;?,л. не подлечит).

2. И.-З. . Сальникова с.К. Зозчояности использования парьй лекарственных растений з районах Кемеровской области // Нз-зне лекарственные препараты из растений Сибири я Зального Зостока: Тез. Зсясозз. конф. - Тонек. 1385. - С. ^5-46.

•3. Антигрибковая активность-экстрактна некоторых растений См-бири и Дальнего Ззстзка / С.Е.Днитрук, С.И.Дмитру;;.

Н.Сальникова и др. // Актуальные проблемы фаряаколпгтл :т поиска нобкх лекарственны?; препаратов: Тез. науч.-прах-. <онф. - Томск. 1386. - Т. 2. - С. 52-55:

4. Сальникова E.H., Незувака ft.K.. Исханпва 'i.A. йнгигрибковпе сзойстза эфирных насел рода полыни // Материалы IU Зсесо-зл. съезда фармацевтов. - Казань, 1085. - С. 435.

5. Антигрибковые свойства сумчаонах конплгксов пелшш р.?аа Frigidae / E.H.Сальникова, С.Е.Лаитрук, й.о.Румак и др. /•' Актуальные проблем« фармакологии и поиска нозчх лзклрп-гчч-ных препаратов: Тез. начч.-прлкт. конф. - Томск, ИЯ7. - Т. 3. С. 155-15?.

6. Некоторое итяги изучения лнтигрнбковкх сзойсг? зфирлг^езя'-'-ных расений Сибири / С.Е.Днитрук, E.H.Сальников, С.И.ДмитругС vi др. // Научно-технический прогресс в медицин-; н биологии: Тез. докл. науч.-практ.■конф. - Тояск. 1082. -

' С. 90-31.

7. Сальникова E.H. Роль куаариноз в Фунгистптическом действии полыней ряда Frigudae •'/ Вторая республ. конф. по лед. ботанике:-Тез.'докл. - Киев, 19Я8. - С.

Гусев И.Ф., Сальникова E.H. Изучение баланса рлг:рсяв *чпь* лекарственных растений Кечерпвской области // ле-

карственные препараты из растений Сибири И Дал: чего 3-лст--ха: Тез. Всесояз. конф. - Томск, 1033. - Т. 7.. - С. 50-51.

3. Гусез И.Ф., Сальникова E.H. Специализация районоз Кемеровской области по -заготовка сырья дикорастущих лекарственных растений. - Томск, 1339. - 5 с. - Дел. з ЗПК'ЛТ!! 24.0i.30 Ü Д 19102.

10. Дмитрук С.Е., белоусов Н.В., Сальникова E.H. йнтигрибкезае

•свойства растений в зависимости от филогенетических и экологических факторов // Состояние и перспективы развития фармации в Сибири и на Лальнек Востоке: Тез. докл. Томск, 1391. - Ч. 1. - С. 52-54.

11. Сальникова E.H., Васильев Б.И, Влияние экстрактов полыней ряде. Frigidae на секреции желудочного сока // Состояние и перспективы развития фармации в Сибири и на Дальнем Востоке: Тез. докл. - Томск, 1S91. - Ч. 1. - С.' 91-32.

12. Кумарины полыней ряда Frigidae / Е.Н.Сальнкиова, Н.Ф.Ко-миссарекко, С.Е.дмитрук и др.- // Химия природ, соедин. -1333. - К 1 - С. 136-137. ••

13. Калинкина Г.И.. • Сальникова E.H., -Декбицкий Й.Д. Сравнительный анализ эфирных масел полыни горькой и полыни си-верса // Научная конференция, посвященная ,50-летив кафедры фармацевтической химии СМН: Тез. докл. - Бийсх, 1993. - С.

' 58-59.'