Автореферат диссертации по фармакологии на тему Фармакогностическое исследование полыней секции Absinthium флоры Сибири
МИ НИ С 1 С. К1 Г»о Ь'Ь П> П »»• ЛКпиГ. V»' Кс-Ги.'п !_ ^ II ^' ^ ^ >■'.
ШЬ'ЙРШР Г О СУДАРСТБЕНННН ЩКЩГпСШ ИНСТ"Т"Т
Г6 ОД
2 ;{ На правах рукописи
САЛЬНИКОВА ЕКАТЕРИНА НИКИФОРОВЙА
УДК 5Г5.741:61Б.322
ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПОШЕЙ СЕКЦИИ АВБИПИШН ОПОРЫ СИБИРИ
00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученвй степени кандидата фарнацертических наук
Уфа - 1994
/
/
Работа выполнена в Сибирском иедииикском ¡¿ниверситртг.
Научный руководитель - доктор фармацевтических наук,
профессор С.Е.Днитрук.
Официальные оппоненты - доктор фармацевтических наук, • ( профессор В.А.Куркин,
- кандидат фармацевтических наук Т.И.Никитина.
Ведущее учреждение - Пермский фармацевтический институт.
Защита состоится __1994 года в___часов
на заседании специализированного Совета К 084.35.02 при Банкирском государственном -медицинском институте по адресу: 450025; Уфа. ул. Ленина. 3. '
С диссертацией модно ознакомиться в библиотеке Башкирского государственного медицинского института.
Ученый секретарь специализированного Совета, доктор иедицинских наук
Э.Г.Давлетов
ОБЩнЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РДБОТН"
Актуальность т е.и ы; Освоение и всестороннее изучение "природных растительных ресурсов, мобилизация их на нцеды практического здравоохранение валяется одной из актуальных задач фармацевтической науки. Постепенное истозение запасов лекарственного растительного сырья в местах традиционного сбора, а такяе нарцис-ние межрегиональных хозяйственных связей вызывает необходимость введения в аедицинскуя практику новых видов сырья.
Внедрение близкородсТвенккх видов полыни в медицину значительно расширит сырьевуа базу официального вида и избавит сибирский регион от необходимости завозить сырье полыни горькой из Европейской части, где она в основном заготавливается/ Кроме того, клиническое и Фармакологическое исследование систематически близких видов полыни представляет интерес и с точки зрения расширения спектра их применения, т.к.-по данный народной медицины полыни используются не только при желудочно-кишечных заболеваниях, но и проявляют инсектицидные, фунгицид-ные и другие свойства. Известно, что фармакологические свойства растений рода полынь связывают с содерганием в них эфирных иасел и сесквитерпеновкх лактонов. Однако особый интерес в этом отношении представляют фенолькые соединения и полисахарида, обладание разносторонней биологической активностью. Для природных фенолоЕ характерно выраяенное действие на секреторную и дезинтоксикационнуа функции печени. Полисахариды природного происхождения относятся к биологическим стимуляторам и оказывают обволакиваивее, спазмолитическое действие. Указанные свойства фенольных соединений и полисахаридов являются■вазныыи факторами терапии заболеваний гелудочно-киаечного тракта.
Цель и задачи исследования. Изучить возмозность использования в медицинской практике наряду с :: *иью горькой ■ филогенетически близких видов п.сиверса и
¡.-теку и, а такке расзирение спектра их применения в медицине .
Для достижения намеченной цели поставлены следующие задачи:
- провести поисковые химические и фармакологические исследования основных групп биологически активных веществ;
- провести сравнительное фармакологическое исследование изу-
чаемых видов на секрецию келудочного- сока, келчегоннук и антигрибковую активность:
- установить состав и количественное содержание фекальных соединений в изучаемых объектах;
- выделить индивидуальные Фенольнне соединения (флавоноидк. кумарины, фенолокислотн) и установить их-структуру:
- разработать нормативно-техническую документация на предлагавший вид сырья.
Научная новизна.. Впервые проведено комплексное фитохимическое и фармакологическое исследование полнни якутской, п.сиверса и п.горькой. Изучен химический состав Фенольных .соединений и полисахаридов. Выделено 19 индивидуальных соединений, относящихся к иксикумаринан, флавонолдам и оксико-ричним .кислотам. Впервне установлена структура ? новых веществ для п.горькой, 9 - для п.сияерса, 14 - для п.якутской. Проведена качественная и количественная оценка полисахаридного комплекса. Выявлена зависимость.антигрибковой активности ряда природных комплексов полыней от качественного состава их фенольных соединений и полисахаридов.
Новизна практических исследований в области поиска природных антигрибковых средств защищена патентом на изобретение.
Практическая .значимость р а б о -т к. Показана возможность применения в медицинской практике п.сиверса наравне с п.горькой. На основе двух видов гырья предложен более оптимальный препарат -'40^-ная настойка е качестве велудочного и нелчегонного средства.. Установлено, что п.горькая, п.сиверса и п.якутская являются перспективней источниками растительного сырья для получения препаратов зн-тигрибкового действия. По материалам исследования разработан проект Временной Фармакопейной статьи "Трава полыни скверса" и направлен г. Фармакологический комитет РФ для получения разрешения на использование полыни сиверса в медицинской практике (Регистрационный номер 2271 от 03.12.93). На основании анато-ыо-иорфологического анализа близких видов разработаны нетсди-ческие указания "Диагностические признаки растений- рода полынь" (совместно с Львовским медицинским институтом) и утверждены АПК Совззфирлекрзспрон (РЕГ N 14-4-11). На зациту выносится: - обоснование о возможности использования в медицинской практике наряду с полыньи горькой филогенетически близкого ви-
да п.сиверса:
- результаты химического изучения траВы полупи горькой, п.сиверса и п.Якутской;
- возможность. создания на их основе эффективных лекарственных средств противогрибкового действия.
Апробации работы. Основные положения диссертации доложены и обсуадеНы на.Сибирских конференциях "йкту-альные проблемы фармакологии и поиск новых лекарственных препаратов" (Томск, 1986, 1987), научно-йрактических конференциях "Научно-технический прогресс в медицине и биилогий" (Томск, 1988), "100 лет основания Томского медицинского института" (1988), меакафедральнок заседании Фармацевтического' факультета Сибирского медицинского'университета (1994).
Работа выполнена в соответствии с планок научных исследований кафедры фармакогнозии с курсом ботаники Томского медицинского института й комплексной целевой программы СО ЙМН СССР "Здоровье человека в Сибири" (К Гос. регистрации 01.5".20002489).
Публика ц-и и," Основное содержание диссертации из-лоаено в 12 статьях и тезисах докладов..
О б ъ е и структура диссертационной 'работы. Материалы исследования из'лояены на 136 страницах «авинописногз текста. В тексте приведено ? . рисунков и .19 таблиц. Библиографический указатель Вплючает 215' источников -литературы, из них 32 - зарубежной.
Диссертационная работа состоит из введения, пяти глав, выводов, списка литературы и прилояения.
В первой главе приведены данные литературы по ботанической характеристике, распространению, химическому составу и применений растений секции АЬя^Шип. '
Вторая глава посвящена описанию объектов и методов исследования.
В третьей глазе излокены материалы сравнительного фармакологического и! химического исследования природных комплексов полыни горькой, п.сиверса и -п.якутской.
В четвертой главе приведены результаты изучения химической структуры выделенных веществ с цельи их идентификации.
Пятая глава посвящена поиску группы природных соединений - основного носителя фармакологических эффектов препаратов полыней.
Приложение включает проект ВФС "Трава полыни сиьерса",
методические указания "Диагностические признаки растений рила полынь", а такие представлены'материалы, подтверждающие практическую значимость проведенных исследований.
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАШЛИ " » Объекты и методы исследования
Объектани исследования служили надземные части растений полыни сиверса и п.якутской. Основными критериями при отборе объектов для углубленного изучения были:
- достаточные сырьевые ресурсы на территории Сибири:
- близость химического -состава филогенетически .родственных видов;
- преимущество полыни.сиверса и п.якутской по отновенин к официнальнону виду п.горькой в связи с отсутствием токсического компонента эфирного масла туйона;
- применение в народной медицине в качестве желудочного средства.
Для подтверждения медицинской значимости полыни сиверса и п.якутской изучение химического состава .и фармакологических ' -- свойств проводили в сравнении с официнальным видом п.горькой.
Выделение и химическое изучение биологически активных вр-аеств проводили методами хроматографии на колонках силикагеля, полиамида, целлюлозы, хроматографии на бумаге и в тонком ело? сорбента: для исследования структуры выделенных соединении использовали традиционные химические и инструментальные методы анализа.
Изучение влияния природных комплексов исследуемых виде? полыни на секреции желудка проводили на модели перевязки при?-ратника келудка у крыс. Велчеобразовательную и нелчевыдели-тельную функцию печени у крыс оценивали по методике Н.П.Скакуна и А.Н.Олейник. О степени желчегонной активности природных комплексов судили: по скорости секреции велчи, общему количеству и концентрации яелчных кислот, холестерина и билирубина в яелчи. Противогрибковые свойства исследовали в условиях in vitro. Б качестве тест-микроорганизмов использовали возбудпте-■ ли основных грибковых заболеваний Trichophyton rubruta, ■ Trichophyton iaentagrophytes, Microsporum canis,' Aspergillus niger, Candida albicans, выбор которых определялся методом
экспертных оценок специалистов-микологов.
Сравнительное химическое и.фармакологическое изучение природных комплексов полыни горькой, п.сиверса и п.якутской
Общепринятыми реакциями со специфическими реагеьтами на различные группы природных соединений в надземной части исследуемых видов полыни выявлены кумарина (0,99-1,31%), Флавонои-ды (0,44-0,55%), •фенолокислоты (1,70-1,89%), эфирные масла (0,52-1,12%), полисахариды (16,50-17,50%). Качественный состав биологически активных веществ и количественное содержание их в исследуемых видах весьма близки.
Методами тонкослойной хроматографии в различных системах растворителей обнаружено от семи до девяти веществ кумариновой природы, из них пять соединений присутствуют во всех видах. Качественный состаз фенолокислот представлен 5-6 веществами, из них пять являются общими для трех видов. Выявлена существенные различия п.горькой и п.якутской по'химическому составу веществ флавоноидной природы, среди которых установлено наличие метоксилированных соединений. Полученные данные по содержании водорастворимых полисахаридов, пектиновых вецеств и ге-' мицеллшлозы свидетельствуют об-ях близком качественном составе.
На следующем этапе работа проведены фармакологические исследования. Нами исследованы антигрибковые свойства эфирных масел и экстрактов, полученных зкстрагентами различной полярности (гексан, дизтиловый эфир, хлороформ, зтилацетат, этиловый спирт, вода). Исследуемые комплексы проявили избирательную • антигрибковув активность: наиболее чувствительны возбудители, вызывающие оироко распространенные микозы -' трихофитию, микроспорию и малоэффективны в отношении возбудителей кандидоза, аспергиллеза.- Исключением из этого являьтся только эфирное масло (.п.якутской и п.сиверса) и гексановый экстракт п.горькой, подавляющие рост черного аспергилла в весьма широких пределах концентраций (125-1000 мкг/мл). Слабое влияние на рост белой кандиды оказывает только эфирное масло п.якутской.
На антигрибковую активность экстрактов исследуемых полыней существенное влияние оказывает полярность используемого }кстрагента. В этом отношении наиболее выраженным ингибирующим аффектом отличаются экстракты, полученные горячей водой. Именно они в перспективных концентрациях (15.6-31.2 мкг/мл) задер-
- Б -
кивали рост трех возбудителей дерматофитий. Водные -экстракты, учитывая простую технологию их получения, высокий выход конечного продукта, могут быть рекомендованы для более углубленного фармакологического изучения с целью практического использования в качестве противогрибковых средств. >
• Преследуя главную.; цель работы - раснирение сырьевой базы полыни-горькой^нами бьг.ч Изучены желчегонные свойства тс влияние на' секреции нелудочного сока п.сиверса и п;якутской в сравнении с офицнналъныи видом. Биологически активные комплексы из надземной части полыней выделяли с помочьв.воды. -402-ного и- 702-ного этанола, используя общепринятые дкстрагенты различной степени полярности для максинального извлечения биологически активных вецеств:
Результаты выполненных исследований позволили установить, что изучаемые виды обладагт выраяенной аелчегонной активностью. При этом, п.сиверса по действип приблияается к п.горькой. Из трех исследуемых экстрагентов следует- выделить экстракты, полученные с лонощьв воды и 402-ного этанола. При их введении увеличивается скорость секреции яелчи и ее общее -количество. Зто способствует активизации синтезирувцей функции печени и выводу с яелчыо ее основных ингргедиентов, превосходя показатели препаратов сравнения - фланина и настойки п.горькой на ?0Х-ном этаноле.
Изучение влияния экстрактов исследуемых видов полыни на секрецию яелудка позволяет выделить по эффективности полынь сиверса. Введение ее- экстрактов способствует увеличению основных показателей секреции желудочного сока, данные которых превосходят препарат сравнения - настойку п.горькой. Полыни сиверса по этому показателю значительно уступает п.якутская. Ее экстракт на 70^-ном -этаноле увеличивает секреции аелудочного сока по отношению к препарату сравнения на В'/., а экстракт на 402-ном этаноле - на 5%. Наиболее оптимальным экстрагентом для п,горькой и п.сиверса является 40%-ный этанол, т.к. введение его экстрактов усиливает секрецию аелудочного сока в 4,7 раза у п.сиверса и в 2,6 раза - у п.горькой. Для водных экстрактов эти показатели превыиали контрольные соответственно в 3,4 и 2,2 раза.
■ Кроне обцего количества выделенного аелудочного хока для оценки секреторной активности "препаратов имеет значение изменение его кислотности и содержание пепсина. Введение зкстрак-
тов полыней понижает рН желудочного сока в среднем на 15* - с 2,00 до 1,74, что свидетельствует о сдвиге реакции в кислую сторону. Это создает благоприятные условия для проявления активности пепсина (рН 1,50-2,00), т.к. в «елочной среде она падает. Исследование протеолитической активности желудочного сока доказало, что применение экстрактов на 402-ном этаноле в сравнении с контролем повышает выход фермента в среднем на 23У., водных - на 24У., а для настойки п.горькой этот показатель равен контролю.
Выполненные исследования подтвердили обоснованность применения полыни горькой и филогенетически близких видов п.сиверса и п.якутской в народной медицине в качестве желчегонных и яелудочных средств. Кроме того, полученные данные .позволяют рекомендовать использование п.сиверса в медицинской практике наравне с п.горькой. Оптимальным экстрагентом как для п.сиверса, так и для п.'горькой.является 40%-ный этанол, рчто дает основание предложить промывленное- получение официнальной настойки из п.горькой не на 70%-ном этаноле,-а на спирте более низкой концентрации.
Выделение и установление структуры фенольных соединений полыни сиверса,п.якутской и п.горькой
При выделении и разделении суммы фекольных соединений на индивидуальные вещества использовали методы избирательной экстракции, дробной кристаллизации; адсорбционной колоночной хроматографии на полиамидном -сорбенте, силикагеле, целлюлозе, тонкослойнуи и бумажную 'хроматографию. 8'качестве элвентов применяли воду, этанол, этилацетат, хлороформ, гексан, а также их смеси в различных соотноиениях.
В результате, проведенного исследования из надземной части полыней выделено в индивидуальном состоянии 19 соединений. Из них 4 вещества кумариновой природы, 7 веществ относятся к фе-нолокислотам и 8 веществ - к флавоноидам. Некоторые Физико-химические характеристики выделенных .соединений приведены в таблице 1 .•
Исследование выделенных соединений
Установление структуры выделенных веществ проводили с помощью инструментальных Физико-химических (УФ-, ИК-, ПМР-спект-
с
(Ti
»
о e
C5 t-
CT
S ü
H? «
о
jj о
Я R,
» в>
Ч Et
О S
С о
к
XI о
= ж
Я Л
« еъ
о о
С I-
<5 О.
с; С
V- с; О
№ а с.
с*
с
V—
V."
й-
к' С.
CL-
А
»
6'
и
ГО ft'
&
F5 ïS.
+ +
п.
<0
s »
« «U
s
о а со
es
+ + ч-
«э
i i
>
Ci ÎS SS
ч сг CS
SS ч» ч»
ça ъ» M ifl
■«ч
и и; и
^
» Л> S
S»
к (-
t* eî а.5
с «X к: с;
с а." в>
с Ы
M ж ¿n и
и СО
m •if го -J-
со ко es
О
«ч
U
о ж
о (Ч
а?
«
te m с
о rv. o CS e»
CV (%) ru <\) trs CJ es»
1 in t 1 er> s Ю <V
о m to о о
CJ ГМ CM CM t™ rj Í4J
<*> Л'
CS er
с ft' ft
с Ï— к-
С1 с
й>
NC i. г—
M Г!» tí
(.. м î* г:
V-* M
сл ет о «ï
1 С ЯЗ
с s:
О
tr> "Т
eá со
i i
ГО
+ + -t- ■f Л
«
ГЯ o
fr— я
о o
ffi.
и i +■ -r * 1 w ■f 1
1
*■ Wi
•Si 1
<D m» es s
33 * >
& tVJ ' fM S
»»
a *> i
<5
ея pj
i 1 1 1 + 1 1
ta aj
В S
S s
Ft a i et
В «S» C^i tn «4« О PJ «9«
в> en «э £3 И. ш <a ra
л <v (Ni O - m •4 «N
i г 1 1 Sí 1 (
о CJ (S co- O 13 S О to
fe* tn ta es А СЭ вэ
Í4¡ CM CS 4M
ез *
о
хв
зз
о
ft» CS
Í2 es
es
LP
«э
Lui
I
ö
<aQ вО
œ о
a «tj
sa =
О v» о/
Cw CJ
I I
Ю «Г rv. f*¿ «г ta
ID
rj CJ
I
M
f\J CM
о
CJ
Ю О ОЧ (M о
О es es. P4 ' — СЧ S3
Ю fM
1 Í\J ел i о CS
о N cv. tN. N
(О CJ CM
TV <0 <л у i:
CS о о о о
í» es •ч CS
Kl <\г <\í
ss s
чэ
•M <ч
CJ и
X о
о; DÇ X «Я sc 1 et и s
ю <0 <и 1 « wu ч
œ Ш L- CS Ol <D s. « и: H" с 3;
о ts о О m t=! M ■е- il d. S E
С2. га t* в X О. u С 1 « tu U 3» «S
(О <0 it! CD <â <D О •у 9 u M bJ Ж <J S7 Ю
JE а í— a f- U i— =; i: <D a 1 ií « a S u
Э5 Ч •S О с: a О о X M <r¡ к IS О С. мм tï t- «
о t=î з> ' о. ч о о; a. й Гч. и н- сэ Oí a. Sa
1 s ■в-. О a. CJ о о ш из <E Q. « ^ tu ffl «3 J2 H
С sc о s; <D "г* 3= a X 1Л О X ss u
Ü а: О >c •Л <E
OJ CO CNl PO tíS -r
—* CD Œ3 —" — OJ —" * «а • M (Л
1 со 1 аа 1 СО 1 со 1 СО 1 OS I CO 1 ал t ва t as 1 ca i sa вз
- - 10 -
раскопки) и химических (кислотный, ферыентатизньгЛ гидролиз, цвлочнов расчзплчиие) методов, а такие сравнением с достоверными образцами.
К у и '1 р и н ы. На основании хронатографического исследования, даннах и ИК-спектроа вещества 8-2, 3-3, В-4 отнесены к пксипроиззодныа кумарина. 3 ИК-спектрах исходных соединений ябнаруяены характерные для згой группы веществ полосы поглощения при 1725-1707 си"' Скарбонильная группа л-пирона), 1690-1536 са"' {колебания сопряяенных двойных связей), 3340-3224 см"' С свободная оксигруппа). 3 отличие от веществ 3-4, 3-2 эчдество 9-3 имеет дополнительный максимум поглощения о области 2850 сп"1, что указывает на присутствие метоксигруппн. Наличие э ЧФ-спектрах веаестэ максимумов при 256, 255, 238, >25, 340, 355 нн такав указывает на их оксикунариновуя природу. Полеченные результата я. сравнение физико-глнических спойстэ выделенная соединений с достозернани образцами позволили идентифицировать вещества 3-2, 3-3, 3-4 с эскулетинон. скололетннон л -умбеллиферонон соответственно,
Зедестоо 3-1 при Ферментативной гидролиза расзепляетсз из эскулетик и 0-глвкозу. По температуре плавления, пробе смешения, продуктам расдепленнд и параллельного хроматографирозашп с достоверным образцом вещество В-1 идентифицировали с эскули-ном, Обнаруаение эскулетнна з п.снверса, а такзе-скополетина к умбеллиферона з- п.горькой согласуется с литературными данными, Впервые, в исследуемых видах, нами выделены скополетин. умбеллиферон, эскулетин, 1скулин.
О е н о л к а р б о н о э ы е к и с л о т я. На основании качественных цветных реакций, хронатографического исследования, данных ЧФ-спектров вещества В-9 и 3-10 отнесена к изводным бензойной кислоты. При ацетилировании зе^рст-л 3-' получили моноацетат п-оксибензсйной кислоты. Мелочное плаол^-ние вещества В-10 приводит к образования протокатеховой число-гы. 3 !К>-спектрах спиртових растзлроз обнаружены максиму*'« поглпаения з области ниае 300 нм, что характерно длз б.?нз.->йн.п) кислоты.
Зецества В-6, В-?. 3-3, В—11. В-12 по Флиоресцэнции пят^н на хроматограммах В ЧФ-свете, качественными реакциями, данными ЧФ— и ИК-спектров охарактеризованы как производные ч оччной кислот« с максимумами поглощения э области 330-29С нм. Наличм» коричного Фрагмента подтверадаот данные йК-спектрогкопии. -ч
- Ii -
точнее' полосы поглощений при 1640 и 15С5 с*;"' : полосы в области 3460 c»fY характеризует присутствие б исследуемом веществ? фенольных гидроксилов.
.Б продуктах щелочной деструкции веществ В—iI. Б-0, Ь-Ь обнаружены соответственно' 4-оксибензойная, 4-окси-3-.метокси-бензойная и 3,4-диоксибензойная кислоты. Продуктами щелочного гидролиза вецеств В-7 и В—12 ' является кофейная и D-хинная кислоты. С целью определения места присоединения остатка кофейной кислоты к D-хинной -кислоте проводили нагревание исследуемых соединений В-7, В—12 с ледяной уксусной кислотой. При этом образование лактона происходило только в присутствии вещества В—12, вещество В-7 оставалось без изменений. Следовательно, в молекуле вещества В-7 оксигруппа D-хинной кислоты замещена остатком кофейной кислоты в С-5 положении, в веществе В—12 - в полокении С-3.
"Таким образом, исследуемые соединения идентифицированы как: п-оксибензойная (В-3), ванилиновая (В-10), п-кумаровая (В-И), кофейная (В-6), феруловая (ß-8), хлорогеновая (В-7) и неохлорогеновая С В—12) кислоты (табл. 1). Нами впервые выделены и идентифицированы из п.якутской хлорогеновая, "кофейная, Феруловая, п-оксибензойная, ванилиновая, неохлорогеновая кислоты, из п.сиверса - хлорогеновая, феруловая, п-оксибензойнаа, ванилиновая, n-куиаровая, а из п.горькой - феруловая, п-оксибензойная и ванилиновая кислоты.
Флевоноиды. В ИК-спектрах этих соединений име-ктсй характерные для ароматической части флавоноидов полосы поглощения: 3385-2850 сн"/ (фенольные оксигруппы), 1680-1615 с к-у (карбонильная группа-пирона), 1620-1470 см"' (скелетные колебания ароматических колец), а максимумы при 2950-2880" см_/ свидетельствуют о наличии метоксильных групп.
На основании качественных реакций с солями циркония и киглотп лимонкой, а такяе окраски веществ на хроматограммах и ло свечению в УФ-свете определяли .принадлежность выделенных ФЛдьонокдог к флавонам и флавонолам. В веществах В-15, В-22, Ь-1' качественными реакциями не обнарувили свободной оксигруппы h положении С-3, поэтому данные соединения отнесены к флаконам, с вещества Б-16, В-14, В-5 - к гликозидироеанным по GH-группе при С-3 флавонолам. Зеленое окрашивание со спиртовым раствором хлорного 1елеэа, велтое - с хлористии цирконием, не исчезавшее при обработке лимонной кислотой, указывает на нали-
чие свободных оксигрутт в положениях 3 и 5'у вещестз 3-1?" я 3-16, что и позволило отнести эти соединения к флавонэлам.'
Положение свободных оксигрупп определяли УФ-спектроскопи-ей с применением диагностических (ионизирующих и комплексооо-разующих) реагентов (табл. 2).
& продуктах щелочной деструкции вещества 3-16 выявили Флороглюцин и п-оксибензойную кислоту, вещества В—17 - флорог-лицин и ванилиновую кислоту. Результаты изучения- физико-химических свойств, а также сравнение с достоверными образцами позволили идентифицировать Э—16 с кенпферолоа С5",5.?,4*-теrr-.i-оксифлавон), а В—17 с 'изораннетином (3,5,7,4'-тетраокси-3'-метоксифлавон).
. 3 ИК-спектрах веществ В-5, -В-14, В-18. кроме полос поглощения, характеризующих их флавоноидную природу, обнаружены три полосы в области 1100-1010 см"/ , указывающие на наличие з их структуре углеводов в пиранозной форме, полосы поглощения в ' области 896-890 см"' указывают не jS-конфигурацш гликозидной связи между углеводом и агликоном. УФ-спектральный анализ соединений с диагностическими добавками показал наличие egg-боднах оксигрупп в положениях С-5, С-7, С-4', а также замещенной гидроксильной группы при-С-3.
В продуктах кислотного гидролиза обнаружили и идентифиц:'-ровалй с достоверными образцами в веществах: В-5-- яемпферол -. D-глюкозу, В-14 -. изорамнетин и-Ц-галактозу, В-18 - изораине тин и рутинозу (D-гликоза и L-рамноза).
В результате проведенных исследований вещество В-5 охарактеризовано как астрагалйн (кемпферол-3-о-/-П-глнжопирано-зид), В—14 — кактицин (изораынетин-3-о-,»-D-галактопиранозид\ В-18 - нарциссин (изорамнеткн-З-о-^-И-рутинозид).
Зещества В—15, В-13, В-22 при хроматографировании в У®-свете имеют темно-коричневуп Флюоресценцию. В результате кислотного гидролиза углеводные заместители не обнаружены. 3 УФ-спектре имеются максимумы поглощения при 352, 270, 257 на и отмечается почти равная их интенсивность I и II полос, свидетельствующие. что данные соединения относятся к флавонам. С помощью УФ-спектроскопии и реакций с комплексообразующими л ионизирующими реагентами доказано расположение свободных мли замещенных оксигрупп по характерным батохромным' и гип.,эхромняя сдвигам С табл. 2).
ИК-спектры веществ В-15, В-13\ В-22 имеют полосы поглоуя-
«»»п; • р-ич.иып харош ■ )Ип 1 !п.н фр-юикиидии ни лип . ь ^ч-иим».,»
Вецестпп и Полосы "г-Го*-4"" и " Поглощение 2-10"^ М растворов В Э1 аноле, нн
погло- раствор в -»натрия +натрия +натрия +алюминий +ЭЛЮМИНИЙ
ег о шифр щения абсолютном зтилат ацетат ацетат и хлористый хлористый
спирте кислота и кислота
борная соляная
1 т с 3 .4 5 6 7 8
В-16 - 3,5,7,4'-тетра- I 365 310 -55' * 375 10 • 372 7 425 60 425 60
онсифласон (кемпферол) II 267 ' 240 -27 269 2 ■ 267 0 • 270 3 270 3 '
В-17 - 3,5.7,4'- II 372 345 -27 380 8 372 о • ' 428 • 56 " 425 53
тетраокси-З'-метокси- V . 255 270' 15 275 го : ■"255 0 ,264' 9 " 263 8
флав'он (изорамнетин)
В-13 - 5,7,4'-три- 345 410 65 410 65 ' 348 з '' " 361 16- 367 22 ■
гидрокси-З.З'-ди- II 254 ' 268 7 ; 273 12
иётоксифлавон - 261 278 17 261 0 276 15
В-22 - 5,4'-дигидрокси- I 353 412 59 354 1 354 1 '. 367 4 14 368 15
3,6,7,3'-тетраоксифла- 271 260 271 271 278
вон (хриэоспленетин) II 258 2 258 о • 258 266 8 26(1 2 '
В—15 - 5-гидрокси-3,6, I .352 397 45 ■353 1 353 Г • 360 8 . 368 16
?,5',4 -пентаметокси- 270 258 Г
фларон (артемизетин) II 257 271 14 .257 •о 267 10 ■ 265 8
В—18 — изорамнетин- I 360 420 60 ' 373 19 361 1 ' 400 40 361 Г
-3-рамноглвкозид II 256 ' 270 14 270 14 256 0 270 14 265 9
(нарциссин) •
В—14 - изорамнетин-3- I II 358 422 64 372 14 363 5 410 52 357 -1
галактозид (кактицин) 254 272 18 . 272 18 260 6 265 И -
В-5 - кемпферол-3-глю- г 350 407 57 350 0 350 0 392 42 _
козид (астрагалин) II 266 286 20 270 4 270" 4 ' 276 20 "
кия при 3800-3320 см_/ Сгидроксильннэ группы), 1560-13$0 см"* гкэрбонипьные группы/-пирона). 1625-1510 см~у (колебания ароматических колец), 2950-2880 см"' (нетоксильные группы). 3 ПМР-спектрах обнаруаены сигналы протонов ароматической сист?чн и метоксилънмх групп. Так. сигналы протоноз в виде синглегтз при 3,97 м.д., 3,33 м.д. и 3,33 м.д. вызваны метоксильннми группами в веществе 3-15; при 3,99 м.д.. 3,37 м.д., 3,33 м.д., 3,3? м.д. - з веществе 3-22; при 3,72 и.д. и 3,85 м.д. - ~ ее-;цестве 3-13.
На основании данных 9Ф-, ИК-, ГШР-епектроз. .а такяв сравнения физико-химических констант с описаниями э литератур-, зечестзо 3-15 охарактеризовано как артемизетин (5-гизооксп-3,0,7,3' ,4'-пентаметоксифлавон), 3-22 - хрязоспленеглн '5.-?'-дигидрокси-3,3,7,3'-тетраметоксифлавон), 8-13 - 5,7,4'-тркгил-рокси-З,3'-диметоксифлавон.
Впервые выделены и идентифицированы-в полыни якутской хри-зоспленетин, 3.7,4'-тригидрокси-3,3'-диметоксифлавон; кактицин и астрагалин; з полыни сиверса - кемпферол.
Поиск группы природных соединений, как основного носителя Фармакологического эффекта
«
Выполненные исследования сравнительного характера на фоне официнального средства полыни горькой подтверядапт перспективность использования полыни сиверса в качестзе зелчегонного и желудочного средства. При этом установлено, что комплекс биологически активных веществ, влияющих на секреции зелудочноп сока^ целесообразно выделять 40%-ным этанолом.
Лля определения группы природных соединений, являвшихся основным носителем фармакологического эффекта экстракт на 402-ном этаноле подвергали фракционному разделении, руководствуясь тем, что таким образом моано добиться концентрации определенной группы соединений в отдельных фракциях. 3 ое-зультета были получены Фракции полисахаридов и фенпльных соединений (хлороформная, этилацетатная, бутанольная и яодний остаток).
Специфическуи активность Фракций фенольных соединений 1 полисахаридов полыни горькой и п.сиверса изучали на секреторную активность желудка у крыс. Полученные результаты, показывают, что наибольшее влияние на секрецию яелудка оказали *оак-
цик' полисахаридов и бутанольная (флавоноидные гликозиды и фе-нолокислотк). Вероятно это обусловлено тем, что растительным полисахаридам характерно межмолекулярное взаимодействие с фе-нольныыи соединениями и другими биологически активными веществами, которое обеспечивает хороиее структурирование настоев, оказывает стабилизирующее влияние на энергетическое состояние действующих веществ в этих препаратах. Характерным для них является и взаимодействие с макрофагами слизистой оболочки келудочно-кивечного тракта, что приводит к усилению синтеза различных медиаторов иммунного-ответа. Не исключая влияние на секрецию велудка горьких веществ Слактонов), следует отметить минимальный эффект хлороформной Фракции, в составе которой они в основном содержатся. Кроме того, условия эксперимента исключали влияние фракций на вкусовые рецепторы, посколько препараты вводили вивотным с помощью зонда непосредственно в просвет желудка. Применяя внутрь в виде настоя или настойки горькие вещества рефлекторно увеличивают секрецию желудочного сока, а сумма фенолокислот, флавоноидов и полисахаридов, попадая в желудок, увеличивает лротеолитическую активность фермента, что способствует улучюению пищеварения.
Учитывая, что влияние полыни сиверса и п.горькой на секреторную функцию желудка обусловлено суммой биологически активных веществ, следует рекомендовать проведение оценки качества сырья данных видов по экстрактивным веществам, извлекаемых 402-ньш этанолом.
Выявленная в предварительных исследованиях антигрибковая активность водных экстрактов полыней послужили основанием для изучения влияния полисахаридов и некоторых выделенных .индивидуальных Фенольных соединений на патогенные грибы..Поли'сахари-дные комплексы, из указанных видов сырья, проявили разные уровни актигрибковой активности (от 7,8 до 500 мкг/кл). При этом они ингибируют рост только возбудителей дерматофитий к ^активны б отношении черного аспергилла и белой кандиды. Анализируя антигрибковые свойства отдельных фракций полисахаридов необходимо отметить, что наиболее активными из них оказались г-.'ДйрастБоримые полисахариды (7,8-52,5 ыкг/млУ. Причем наи-Оияс/и'ий интерес представляют водорастворимые полисахариды п.сиверса, активность которых составляет 7,8-15,6 мкг/мл.
Исследование антигрибковых свойств индивидуальных фенольных соединений показало, что по уровню активности они в основ-
ном уступали бодня* экстракта*. Среди индивидуальных компонентов наиболее выраженнуа антигрибковув активность- проявила п-кумаровая кислота, которая задерживала рост возбудителей дерматофитий в концентрации 31,2 мкг/мл. Среднзз степень активности в концентрации 125 мкг/чт з отношении возбудителей трихофитии проявили Феруловая и кофейная кислота. Слабую -эн-т игриб к о б уя активность проявили Флавоноиды кемпферал, астрага-дин. рутин и кумарин умбеллиферон.
Таким образок, полисахарида и фенольнке соединения чвлх-.-.сь носителем антифунгальной активности водног о экстрэкт-з представляют интерес для дальнейшего Фармакологического изучения и разработки ка их основе антигрибкового препарата.
-Исследования острой- т о к с и ч н п ст и водного экстракта п.якутской и экстракта на 4С%-ноя этаноле, показали, что согласно классификации' токсических зе-зестэ, сни могут быть отнесены к группе практически нетоксичных соединений.
ВЫВОД Ч
1. Впервые проведено сравнительное-фитсхиническое я фармакологическое исследование систематически близких видов л-секции АЬзхпШиа: п.горький, п.сиверса и
2. В надземной части исследуемых видов 8 сравнении г гф-.г::!-нальннн- видом - п.горькой, определены группы биологически активных веществ: кумарины г0,33-1,31%), феколокислст-} ( 1.70-1,80/:), флавоноиды С0;44-0,:5Х), полисахарид-,-
"С 15,50-1?,10%). эфирные масла (0,52-1,12%).
3. Установлено, что п.горькая, п.сиверса и п.якутская содержа: 7-9 веществ кумариновой'природы,- 5 из них присутствуй зо всех видах; 5-5) Фенолокислот, пять являится обеими для зсех видов; флавоноидный комплекс имеет существенные качественные различия меяду видами и представлен Флазоноламп
и метоксилирозанными флавоноидами; полисах.зриднив лексы по качественному и количественному состав; идентичен
4. Из исследуемых видов выделено в индивидуальном соотаянии фенольных соединений, структура их установлена физическими, хроматографическими и спектральными методами. - из н;гч представлены кумаринами (скоролетин, умбеллиферон, чску-лин, эскулетин), 7-Фенолкарбоновнми кислотам (кофейная, феруловая," п-кумаровая, хлорогеновая, неохлорогеноэая.
п-оксибензойкая и ванилиновая), 8-флавоноидами (артекчзе-тик, хризоспленетин, 5,7,4'-тригидрокси-3,3'-диметоксифла-е>он, изорамнетин, кемпферол, нарциссик, кактицкн, астрага-лин ).
3. Установлено, что п.горькая,., п.сиверса по желчегонной активности и влиянию на секрецию желудочного сока равноценны. Таким образ он,- доказана возможность использования ь медицинской практике травы п,сиверса наравне с официналь-ннк видом п.горькой,-что значительно-расширит сырьевую ба-su лекарственного растительного сырья '. скбирско-дальне-юсточного региона.
■■. Фармакологическими исследованиями установлено, что наиболее оптимальным экстрагектом для получения гелчегонного и " желудочного средства как из п.горькой, так и из п.сиверса является 402-ный этанол. ■
''. Достоверно показано, что эффективность влияния 402-ного ькстьакто п.сиверса на секрецию велудочного сока обусловлена комплексом биологически активных вецеств (фенольние соединения и полисахариды),, на основании чего предложено проводить стандартизацию травы п.сиверса по сумме зкстрактив-. ных веыесть, извлекаемых 40^-ным этанолом. Изучены антигрибковне свойства суммарных комплексов и некоторых индивидуальным: БОВ полыней. Наиболее эффективными оказались водные извлечения исследуемых видов и эфирное к ь с л С1 п.якутской в отношении возбурителей трихофитии и микроспории, ь связи с чек является перспективным их дальнейшее исследование с целью создания противогрибковых '.'редеть.
l-. île основании результатов анатомо-морфслогического, химического и товароведческого анализов разработан проект Временной фармакопейной статьи "Трава полыни сиверса". Необходимая документация находится на рассмотрении в Фармакологическом комитете МЗ РФ,
- 13 -
Основные положения диссертации опубликованы з следующих
работах:
1. П.^т-чт Ч 1755443 на изобретение Способ получения средства, 'j;3.:a»asqern противогрибковым действием / il .г.. Сибаре-эа, С.Е.Даитрук, E.H.Сальникова. <Ц:;?,л. не подлечит).
2. И.-З. . Сальникова с.К. Зозчояности использования парьй лекарственных растений з районах Кемеровской области // Нз-зне лекарственные препараты из растений Сибири я Зального Зостока: Тез. Зсясозз. конф. - Тонек. 1385. - С. ^5-46.
•3. Антигрибковая активность-экстрактна некоторых растений См-бири и Дальнего Ззстзка / С.Е.Днитрук, С.И.Дмитру;;.
Н.Сальникова и др. // Актуальные проблемы фаряаколпгтл :т поиска нобкх лекарственны?; препаратов: Тез. науч.-прах-. <онф. - Томск. 1386. - Т. 2. - С. 52-55:
4. Сальникова E.H., Незувака ft.K.. Исханпва 'i.A. йнгигрибковпе сзойстза эфирных насел рода полыни // Материалы IU Зсесо-зл. съезда фармацевтов. - Казань, 1085. - С. 435.
5. Антигрибковые свойства сумчаонах конплгксов пелшш р.?аа Frigidae / E.H.Сальникова, С.Е.Лаитрук, й.о.Румак и др. /•' Актуальные проблем« фармакологии и поиска нозчх лзклрп-гчч-ных препаратов: Тез. начч.-прлкт. конф. - Томск, ИЯ7. - Т. 3. С. 155-15?.
6. Некоторое итяги изучения лнтигрнбковкх сзойсг? зфирлг^езя'-'-ных расений Сибири / С.Е.Днитрук, E.H.Сальников, С.И.ДмитругС vi др. // Научно-технический прогресс в медицин-; н биологии: Тез. докл. науч.-практ.■конф. - Тояск. 1082. -
' С. 90-31.
7. Сальникова E.H. Роль куаариноз в Фунгистптическом действии полыней ряда Frigudae •'/ Вторая республ. конф. по лед. ботанике:-Тез.'докл. - Киев, 19Я8. - С.
Гусев И.Ф., Сальникова E.H. Изучение баланса рлг:рсяв *чпь* лекарственных растений Кечерпвской области // ле-
карственные препараты из растений Сибири И Дал: чего 3-лст--ха: Тез. Всесояз. конф. - Томск, 1033. - Т. 7.. - С. 50-51.
3. Гусез И.Ф., Сальникова E.H. Специализация районоз Кемеровской области по -заготовка сырья дикорастущих лекарственных растений. - Томск, 1339. - 5 с. - Дел. з ЗПК'ЛТ!! 24.0i.30 Ü Д 19102.
10. Дмитрук С.Е., белоусов Н.В., Сальникова E.H. йнтигрибкезае
•свойства растений в зависимости от филогенетических и экологических факторов // Состояние и перспективы развития фармации в Сибири и на Лальнек Востоке: Тез. докл. Томск, 1391. - Ч. 1. - С. 52-54.
11. Сальникова E.H., Васильев Б.И, Влияние экстрактов полыней ряде. Frigidae на секреции желудочного сока // Состояние и перспективы развития фармации в Сибири и на Дальнем Востоке: Тез. докл. - Томск, 1S91. - Ч. 1. - С.' 91-32.
12. Кумарины полыней ряда Frigidae / Е.Н.Сальнкиова, Н.Ф.Ко-миссарекко, С.Е.дмитрук и др.- // Химия природ, соедин. -1333. - К 1 - С. 136-137. ••
13. Калинкина Г.И.. • Сальникова E.H., -Декбицкий Й.Д. Сравнительный анализ эфирных масел полыни горькой и полыни си-верса // Научная конференция, посвященная ,50-летив кафедры фармацевтической химии СМН: Тез. докл. - Бийсх, 1993. - С.
' 58-59.'