Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Анализ и стандартизация лекарственных средств, содержащих апилак (маточное молочко пчел)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ". НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ОАРМАЦИИ

. : На правах рукопкси

' СИМАКОВА Валентина Михайловна

^ АНАЛИЗ И СТАНДАРТИЗАЦИЯ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ■:•". СРЕДСТВ, СОДЕРЖАЩИХ АПИЛАК {маточное молочко пчел)

15.00.02 ^ фармацевтическая химнл и фармакогнозия .

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Москва - 1994

Работа выполнена в Государственном научно-исследс тельском институте по стандартизации и контролю лека! венных средств МЗ РФ. -

Научный руководитель - доктор фармацевтических н;

' И. 3. ЯСАЕ1

Официальные оппоненты: .

Доктор фармацевтических наук, профессор А. 3. КНИЖНИК Кандидат фармацевтических наук Е. Б. НЕЧАЕВА

Ведущая организация - Московская медицинская а демия им. И. М. Сеченова

Защита состоится „ 6 » СсП^ЫМЯ- 1994 г. в

______ г . .

часов на заседании Специализированного Учаного Сов< Д 074.28.01 при Научно-исследовательском институте, фар цпи (117418, г. Москва, ул. Красикова, 34).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Н фармации. . У \

Автореферат разослан „ ЬСЗ " фС(-/и1МЛ^ 1994 г,

Ученый секретарь ;.-л ;•-'

Специализированного совета 1' ... '" V- •

кандидат фармацевтических наук ' . . ■ ' , 1

старший научный сотрудник Л. М. БОБРО.

ОБЩ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТ!?.

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕНИ. В настозцзэ время особо остро .стс::т дроблена обеспеченна населения эф$ективнвяи рысскскачестзен-ШН лекарственный« средствами, Среди большой ноиерклатуры лекарственных средств (ЛС) вакное кесто занимают препараты, получаемые кз аивотного сырья, потребность в которых за пос-де^нне годы значительно увеличилась.

Повивзниз эффективности ЛС находится, как* известно, в щзздой зависимости от состояния уровня требований и иетодов оценки ик качества, вклэченных в Нормативные документы (НД).

Лекарственные препарат« из продуктов жизнедеятельности ЯЧ<зл икезт ванное значение в медицинской практике, поскольку ббладавт пирокин спектррц действия. ;

3 отечественной аедицине пржаияатсй прзпаратн, содераа-цие ваточное ыолпчко (КМ): апилак, апилак лиссшпзированный, порозок апилака, таблетки, ьезь и свечи с апияакоа. ММ аироко используется за рубеэои, однако препараты Ей в зарубёзкых фармакопеях не описаны. .

ИМ является прирадно-коаплексным соединением, активность и вирокий спектр действия которого обусловлена слоаныы хкни-ческкз составов и наличием з нен биологически активных ве-дестз: дипидоз, Сахаров, хпкрозлементоз.ййнасыдэнинх вирных пасло?, аивнок&слот. виташснов, нуклеиновых кислот и других кокпонзягсз. .

. 8а.основания критического анализа уровня требований и аетодмк анализа, вкязчекних а отечественные НД и внесшихся в

зарубеяной литературе, установлено,. что действующие НТД на препараты апилака недостаточно совершенна и не позволяет объективно оценить их качество. Например, контроль ёН осуществляется по следуащим показателям: подлинность (качественные реакции на белок и биоптерин), растворимость, /испытание на специфические примеси (воск), рН, сухой остаток. Количественное определение "дного из фармакологически акпшшх конпонен-тов НИ, .не содераащегося в других продуктах ЕНзнедеятелъности пчел, проводится неспецифическим методом. ■ .

Таким образок, в НД практически отсутствует физико-химические характеристики, ртракащие многокомпонентный состав НИ, которые позволили бц с требуемой достоверностью определить качество ЛС и провести их стандарт 15зацив. Выделение хе индивидуальных компонентов из ММ затруднено одновреыеннвн присутствием в нем комплекса биологически зктизнах вецеств."

В связи с л-тим повышение эффективности контроля качества и стандартизация Л С из. КН, ..включающее. разработку новых более совершенных методов анализа (НА), являетс-я'актуальной проблемой. " ; , .■•''■'.■'• ' ' ■■ .'■'.

ШЬ. И'ЗйДАЧЙ ИССЛЕДОВАНИЯ.' ЦельЕз'настоящей работы явилась разработка селективных и высокочувствительных ие'тодов контроля качества и стандартизации ЛС из !>!Н на основе использования современник физико-хкмических методов анализа: хроматография в тонком слое сорбента (ТСХ), высокоэффективная гид-костная хроматография (ВЗП К ЙФ-спактрохетрия, атомно-абсор-бци&нная .спектрометрия С О А С > и др.'

Для достикения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:

1.,Провести критический анализ литературы по составу ИИ, ссдерваниа основных компонентов и иетодам, испольэуемиа для !« определения; ¡забрать подход к оценке качества и стандартизации природно комплексного препарата.

2. Разработать методики определения основных компонентов Заточного тлочиа. ' - ,

.3, Изучить в сравнительной аспекте с применением разработанных методик' состав-отечественных образцов ИИ,- собранных с разных пасек.

■4, Установить, уровень Требований, показатели качества и составить проекты ИД-на "Апилак" и "Йпилак липфклизированнаЯ".

НАУЧНАЯ НОРЛША, На основании, исследования физико-химических свойств Оглковой, липидной, углеводной сракций пчелиного маточного ыблсчка, а такие его минерального состава, разработан- методический подход к анализу и стандартизации получаемых из него препаратов, заключающийся в определении основных биологически активных компонентов С зфирорастворииых липидов, белка, анинокислот, нуклеиновых кислот, Сахаров, макро- и микроэлементов и Ю-гидрокси-2-деценовой кислоты) с покоцьв комплекса ивтодов (УО-спектрофотометрии, ТСХ, Г2Х. ВЭ§Х,-химических медсдов) и разработанных висскочувстзитель-них. селективных и экспрессных методик.

В процессе исследования ИМ определено содерзание "esporo протеина" по . общему азоту.;игтодои/ Кгольдаля, содерзани?-"истинного белка" по-сукне.: аминокислот и установлено, что.Г большую часть* обдего азота составляет азот белкового про-исховдения, содержание которого позволяет определять качёгдш*' *; и осуществлять стандартизация НН и его.препаратов,,- 'т

Основываясь на восстановительной способности : Сахаров разработана методика определения общего и свободного сахаре"в? углеводной фракции ЯМ, .выявлено,, .что сахара присутствуют в свободной легко »свояеиой форма и сосгааляат около 702 от общего сахара, . '/л'",,-.'■■ ...-■■... ........ .....

В результате изучения лнпкцной фракции маточного Волочка методом Фолча и Сокслета установлено," :.что эфирораствортаые' ;липидн авлявтея основной частью липидов,. определяющей .специфическую активность паточного полочка. Это полонено в основу .методики качественного к количественного определения КМ и .его препаратов'; -Методов ТСХ подобракк условия: С подвижная (jasa .; гиксан -.диэтиловий эфир -"'ледяная уксусная кислота, 73:25:2; ссрйент -Силуфол йФ-254) разделения зфирорастворимой фракции'. липидов'МИ,. определено, что оснсвиим'компонентом-. эфирораство-рааых липидов .ЙМ является гликолипиды. '•: . ' ',''■' .'• -

Методом' ГШХ било достигнуто разделение. Еирннх кислог ;- НК-и. установлено, ..что..основн«м.'и;.характернкн 'компонентон' -яв л$Р; е.тся. специфическая 10.-гидроксн-2-деценовая ' кислйта.'. 'Наличие 10-ГДК в НН ; послулило основанием для разработки методик'ае ' количественного . определена; методом B3SX, :которую ' íiosho

' '- .'••'• • '-'•''' ' - .""■. "■■" "= , -i"':" '*'-' ' -v':

■'■."■' - 5 - .

использовать для идентификации и определенна качества ЧН п ого препаратов.

' ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ 'работы. На основании проведениях исследований разработана и внедрена: .

- методики определения.подлинности препарата "Апилак" на йелок, деценоЕие кислоты; сахара, количественного определения сульфатной золы, общего азота, экспресс-нетодика определения сухого остатка и количественное определение зфирораствориных липидоз (Проект ФС на препарат "Апилак" согла$ованный с.Таллинских ХФЗ, письно К 8/025 от 9.04.91г,; Одесским производственным химико-фармацевтическим объединением "Биостимулятор", письмо К- 35-3329 от 3.10,87г.; Кра'снсдарским комбинатом биохимических и витаминных препаратов ил. К.Маркса, письно К 5,1,20-1043 от 31.07,35г.: рассмотрен Фармакопейный комитетом и.рекопендозан к утперяденил. протокол заседания комиссии по ферментный и гормональным'препаратам !! 10 от 9 декабря 1993г. утверждена НЗ"Р| ?С 42-3025-94;. \

'-'■'. - методики определения подлинности препарата "Апилак ли-офнлизироваш'.ай" на белок, доценовые .кислоты, сахар, количественного определения сульфатной золы, общего азота, зфиро-рзстворимых лилидов ( проект ФС на препарат "Апилак лиофиг.!-зиросашшй" согласован с Таллинским ХФЗ, письмо к 8/625 от 9.04,91г.; Краснодарских комбинатом биохимических и ватаиин- «

пых препаратов им, К.Маркса, письно 'Я 5.1,20-1043 от 31.07.91г.; рассмотрен Фараакопейным конитетом и рекомендован к утверпденин, протокол заседания комиссии по ферментным и

гормокалыгаы препаратам й 10 от 3 декабря 1993г.): ?С 42 3026-5

- «отсдвк«1 оценки качества препарата "йазь'апилака 32' по показатели "Подлинность" на иеяов, деценоене кзсдоты.'са-нар (Проект ОС на препарат чКазь апилака 3%" согласован I Та&аинскЕн Ш. письао й 6/525 от 3,04.31г.: расширен Фар «акопейниа конитетои к рекомендован к а^верЕДениа, протоке, заседания коат-снк ко $грментнт! к гормональный препаратаа I 10 ст 9 дтбрз *983г» 3;зтверждена ?С 42-3027-94!

- кстсд'^е количественного определении 10-ГДК в препарате ггшилак-¿¡айфалязнрованкай" иетедеш ГВХ ( Якт от.

. Таялимскай ХФЗ);. ". V

г аетрдика количественного определенна Ю-ГДН в превара те - "Йтшлгк лиоф ллизироаанный" йот одой ВЗЕХ (Акт 212Ц ац7/иЛ Т«яяинскк$ ХФЗ). : •":■ -'V-V. '

ШСЕйЦИЯ Рй50ТЬ\ Основные положения диссертации долов® на ка исн^орекции ыолодах ученах ТосНйШШС НЗ Российской'€в дерац'ии -Сйемгеа - 1383,1863,1$3?.1953,1583 гг), на Всесовзвс конференции -"Про&юиа стаадартазацни к ксатрояа кэкарствекш средств* (декабрь 1931 .г»- ЙоекваЗи «а Учексысовете ГНЩР

(декабрь 1832 г), — • • -V ---г.....-.'V . /'..г',;/

ПУБЛИКАЦИИ. По'теме лиссецтащ! «*зЗ*шгоБаав 16 работ

связь задач исследования с нродошз шш

ЧЕСКОИ НАУКИ. Исследования выполнены э соответствии с те

мой-заданиен "Разработка новык, совераенстповакне к дншркка

• ■■'• ч

ция сувествуЕЕИх катодов исследований аекгрг.тздкных веществ"

;• - ? -

маноа научно-исследовательской работы ГНКЙСКЛС Минздрава РФ $ госрегистрации Oí.050.0013773), соответствует текгтияо намного исследования Нежведонствзнногэ научного совета "'Фараа-

N 47 Российской Федерации.

НА ЗпЙИТа ВЙН0СЗТС5Гслэд^ацие основные подояенка: ■

- научно обоснованней. подход к оценке качества и стан-.артизации природно комплексного препарата ИМ, основанный на шреде.чечвч и нормировании основных компонентов: эфирораство-гимах- липчдов, белков, аминокислот, нуклеиновых кислот, саха-юз, минеральных воцеств;

- результаты сравнительного изучения состаза.оточаствен-юго НН, собранного'с пасек Краснодарского края:.

-результат?! изучзния хро^атографичесиоЛ подтшюсти зфн-юрастворшгнх лнпндо? ДН;

' - методика опроделгшш количественного содерзаниа Ю-гм-1роксп-2-дсценовой каслоти /Ш нетодсз ВЭНХ.,

ОБЪЕМ Я структура ДИССЕРТАЦИИ. Работа кзлокена на 143 :траницв маэинописного текста, содергат 25 таблиц и б.рисдн-ш, Рабата состоит из введения, обзора литературы, двух зкс-гарикеяталънах глаз, обцих выводов, списка литература 1S9 наименований,. из них Зо на иностранных азыках, и приложения.

Во введении раскрнта актуальность тема,' определены цели задачи исследования.'сфорауяирозайн научная новизна и практическая значйаость работа.

Б первая главе,, на основания анализа данных литературы, рассмотрена особенности состава КМ, исподьзуеинэ кетог,и коли-чэствешзого опрэделениз его осковнвх компонентов и специфи-

- 8 - ■ ■ " . , -.;. ческой активности ПК, особенности еариакологкческого действия его препаратов. - ......

Вторая глава посвяцена ■ изучении состава отечественного КК и разработке методик количественного определения его основных компонентов. .

В третьей главе излозена результата исследований по раз- . работке нових и соверпенствовакия .суцествувцих ыетодов оценки качества и стандартизации препаратов "Апилак" и "Апилак лио-Сшлизированкий" с применением разработанных методик.

СОДЕРВАНИЕ РАВОТН.

Обобщение данных литература по изучение состаза пчелиного МИ показало, что 1Ш инеет слоений состав, в нем содержится • много биологически активных вецеств;, липиды, белки, сахара^ иикрозлеиенты, ненасыщенные мирные кислоти, акинокнелоты, витамины, нуклеиновое кислоти. Кавдый из. перечисленных виза би-отропних факторов обладает направленный фаркакологнчешш действием, и поэтоиу изучение, количественного соотнесения, компонентов, входящих в его состав, ииеет определенное значение для результатов биологического действия к терапевтического зфф.екта. '

1. Изучение состава каточкого нолочка, разработка цето-' ' дик анализа. ' ...... . •; у.«---.-'-

Объектами исследования были образцы «НН с десяти пасек ( 1,9,20,28,30,31,33,34,35,37 ) Краснодарского края, которые используятся при изготовлении препаратов "Апилак" к "Апилак лиофилизированнай".

I *

Одниы из показателей качества Ни, определяй« его биологические активность, является уровень содергакия белка. Для

его количественного определения применяется классический метод, основанный на определении общего азота по Кгельдаля с последувцик дкноаением' на. коэффициент '6,25. Коэффициент рассчитан для чистого препарата белка, свободного от азотсо-зериащих примесей. Определенный таким способом белок в НИ получил название "сырой протеин", так как по данным литературы значительна часть общего азота (до'102) составляет азот небелкового происхогдения.

"Истинный белок" Нй могет быть рассчитан путем вычитания 513 "сырого протеина" содьрхания нуклеиновых кислот, а такяе по'сукне аминокислот после гидролиза КМ в оптимальных услови-

и• • . -. . ■

'.'< . На основании предварительных экспериментальных исследований, а такзе изучения.данных литературы, установлено; что-эффективным игтодо» количественного определения содержания куклоиногж кислот в "исследуемой лекарственном веществе является определение их по фосфору после процесса минерализации, полученный ортофосфат определяли фотометрическим методом, оснсвакнш; на образовании синего "фосфорномолибденового комплекса". Предварительно были установлены оптимальные условия образования комплекса. В "качестве буфера для создания оптимальной величина рН раствора использовали насыщенный раствор натрия ацетата (рН = 4.0). :

, ; Расчет количественного содерзания фосфора з препарате проводили с использованием раствора стандартного образца кв-яия фосфата однозахеценного, содермзого 5 нкг/ыл фосфора. Относительная осиСка определения не'греввгазт ¿3,2а. у. Экнояая найденное количество фосфора на коэффициент 10,3

¡-и- ' . \ ..; ■■ .

- ю - ;

(100:9,8; где 9,8 - средио о" содержание фосфора в чистой нук леиновой кислоте) определяли сукиарное количество нуклаипсвы; кислот в препарате.

Анализ анинокислотного состава НИ проводили на аминокислотном анализаторе "Ид^ссЬ" фирм« ЧаЬаЬгоп", ФРГ. Предварительно били подобрали оптимальные условия гидролиз; исследованных образцов препарата в 6 н соляной кислоте, Такн-ии условиями явились: гидролиз в течение 24 часов при температуре 110°С. Относительная оиибка количественного определения аминокислот на превиваот ¿55!.

Результат« количественного содерканик "сирого прптеина" и "истинного белка", определенного двукя способаии. приведены в табл.1.

Таблица I,

Результаты количественного определения "сирого протеина" и "истинного белка" в маточном ыолочке (в пересчете на сухув аассу) ( п = 5, Р = 35/£

Пасека Сырой протеин, У. Истинный белок, 7. По сунив Скрой протеин аминокислот нукдшшане пислота

35 45,14 33,9? 37,62

31 44,38 33,04 37.38

33 45,06 33,06 37.64

37 ' 45,31 34,17 37.79 . .;,

30 44,30 • # ЗЗ.Б4 35.35

- ii-

йз таблицн видно, что содеряанио "сирого протеина" некду ¡■бразцаыи Ий с разных пасок отличается . незначительно и юстаэляет 44-457. з пересчете на сухую массу; оодеряагае истинного белка", рассчитанного путем вычитания из "сырого ¡ротс-ина" содержания нукленнопйх кислот, колеблется от 30.4 .о 37.8/'^ а рассчитанное по анинокнелотам - от 33.0 до 34.27.. рдераап:!е "истинного белка"» определенное эыпеуказаннкм не-рдааи, п средней па 10% яеньие "сирого протеина". Однако, ри зтон четко прослезиеаетсд взаимосвязь кегду содерваниеи сирого протеина" и "истинного белка", что позволяет исполъ-озать "cupofl протяни" з качестве показателя содержания белка Ш, таи как в определенной степени отражает его содержание, оррелкрцет с данннин литератур«, а такяе слуниг удобннм кра-ериеа стандартизации МИ.

Полцчгннкс экспериментальные данные по аминокислотному octgs'j itсзядетельстзцат, чте ;эсе еС-разци НК содержат дин и тот т.2 набор из 20 анинокислот, среди которнх 10 нзза-ениэшх. Содержание иезакенииих анинокислот состазляет 1,0-57,32 зт общего количества анинокислот. что указывает'на исокуя Сиологическуа активность йй.

В ксслЕдуеких-айрезцах препарата содеряание нуклеиновых исяот, явлрп^ихса одним из биологически активных компонентов рпроднз-;:п5'.плекс}">гп препарата НН. варьирует иекду пасекааи т 7,СО до 3,007..

На другие сопутствуваие азотисодераащке компонента пря-однтез от 1,1 до 4,5а в пересчете на ецхуа касса. 11

. Таблица 2.

Анинокислотннй состав ваточного Волочка

(су&ша свойодних и связашшх аминокислот

после гидролиза в пересчете на сухуя массу, в t ).

Пасеки

Аминокислоты — 35 31 33 37 30

Триптофан 0,42 0,48 0.41 0,37 0.49

Лизин 2,44 2,71 2,49 2.52 2.54

Гнстидин 0,82 0.95 • 1,01 0,93 0,80

Аргинин 1.85 1,89 ... 2,10 1.19 2.33

Фосфосерин 0,38 " 0,34 0.34 0.43 0.21

Таурин 0,29 0,22 о.'гз . 0.19 0,20

Пспаргинопая к-та 0.69 7,60 7,01 6,4?. 6,4?

Треонин 2,30 1,68 1.86 : 2,61 1.49 ;

Нории 4,00 2,18 ; 2,34 . 3.05 У 2,02

Глутлииновая к-та 4,94 3.45 3,63 4.75 3,27 v

Пролин 1,05 ' 1,94 2.00 . 2,36 : 2.21

Глицин 1.10 1,43 У 1.47 1.33 1,51

Алании .1,13 1,33 1,12 1,18 ; 1,41

Цистин 0,64 t .01 , 0.02 0,64 у 1.15

Балин • 2,33 1,81 2,31 2.41 г.са

Н9т::сшш 1.03 - 0.0? . 0,92 0.U7. 1.04

ИзолеАцин t.41 1.97 1,45 2,11 2, 3Ü '

Лейцин 2,42 , 2,88 3,20 , 2,82 2,99

Тирозин 1.55 1.76 1,82 1,80 1.82

Фенилаланин 1 »62 - 1.78 1.75 1,76 1,88

Сумка аминокислот 59.35 .38,28 38,30 39,73 38.^7

Сумка незашиших ПКИНОКИСЛОТ 16.16 16,95 : 17.оз 17.31 ' 18,43

- I •">• -

IV

Определенна содержания оосстгнапливсшцих ca^.ipor) п Мй ¡роппдияи с псиоцьз рзактиза Салинга посла проподе!п:я глдроли-sa н без гидролиза. Предвсритзльяи осуществляла удаление белка.

Цстаиопло:«}, что э тучаемнх образцах КМ содерглние ¡осстанаолизавпих Сатаров после гидролиза (ооций сахар) но-:еЗлется от 23,0 до 20,П а пересчете па сухув массу (табл.4).

Определено, что углезодн в препарате находятся □ основой в легко усвояемой Форме, так как восстанавливающие саха-з, опрпдзлепнно без гидролиза, составляет около 707. от обце-о сахара.

Фармакологическое действнз !.!Н обусловлено наличием в его оставе не только белка, Сахаров, но и минеральных вецеств. ,о наших исследований сведения о аморальном составе оточест-енногв ММ, используемого о приготовлении /1С, отсутствовали.

Анализ минеральных зецеств а предварительно лио?илнзиро-анпол !.!!! проводили методом 1ПС. Использовался пламешшА ва-ипнт истода (плаия воздух-ацетилен), спектрофотометр оирмт Hitaciil", Япония. иэдель 100 00 и стапдартннс"аналитические рогрлнкн ?',фми Ппза/Хееяап atonic ahsorbtlon spectrophoto-etry, Зарап.

Рсзультатн исследования иинералыюго состава прздетапле-iH в таблице 3. •

Остановлено, что образцы НН исследованных пасек содержат ! процентном отношении от ctjimu зсех элементов: ::ллня в2-Э0Х;

10,3-11.27.', натрия 3,2-3,72; кальция 1,0-1.87.; цинка 1,3-С,7;<; аелеза 0.2-0,3%: ■ нарганц.Т 0,01-0,04*; иеди М5-0.Ш; кобальта 0.0003K; никеля 0,00032; хроиа /.0018-0.03SZ.

- 14 -- ••... •'.

Таблица 3.

Результаты определения основных минеральных компонентов в маточном молочке (в мг/кг в пересчете на сухув кассу).

Элементы Пасеки ;

35 30 31 . 33

Натрий 435,000 379,000 . 430.000 . 433,000

Калий 9510,000 9710,000 9630,000 10700,000

Кагний 1250.000 1320,000 1230,000 1200,000

Кальций " 206,000 .199,000 219,000 194,000

Эолезо 28,400 35,100 32,300 37,500

Цинк /2,500 . вмоо 73,300 77,700

1!едь 18,400 19,300 18.000 13,800

Карганец 1,510 1,790 ч,?ю 1,520

Кобальт 0.00? ; 0,029 0,035 ..'.; 0,010

Никель 0,094 . 0,100 0,105 . 0.010

Хром . 0,217 0,414 0,250 0,425

Как известно, нарувение процесса кроветворения связано с недостаточным поступлением в организм одного ' из'следивших элементов: железа, кобальта, циниа, меди, марганца, никеля. Поступление этих элементов с Ий способствует ликвидации анемии. Биологическая ценность многих микроэлементов связана с. их сиособностыэ вступать во взаимодействие о ферментами к витаминами. Таким образом, исследование минерального состава КМ' методом ЙПС показало наличие в его составе очень ваяиых для

здоровья человека иикрозлекеитов, что необходимо учитывать

• ч

при определении качества препаратов КН. :

- 15 -

С 1940 гада напбользий интерес для исследователей прэдстаэляет эфнрорастворииая фракция липидов УН, так ¡:ак именно она определяат спецнфнческуи активность ММ. "Ло наших исследований ны не располагали данными о содеряании эфиро-растворг'аых липидов в отечественной НН.

Определение содержания эоирорастворнмой фракции НИ проводили двуия нетодаии: на приборе "ЗохЬес" фирма "ТекаЬог", Пзеция., работящего по принципу Сокслета, и по разработанной пани экспресс-методике. Эта методика инеет рял; преимуществ перед нетодоз Сокслета:' выделение липидов производится при лозиатнсй тскпературе, что позволяет избегать их гидролитического расцепления и окисления, Оастрота, проста в нсполне-мпи, на требует дорогостоящего оборудования и безопасна. . 0т— »♦.осатедьиая озибка определения по разработанной астодике ' 0,917., а по методу Ссхслзта ¿7,5^. Результаты количгстзсн.чо-го определения з^чрорастсорнйнх липидов представлены г тл7л.4.

Установлено, что содерзание липидов в пересчете на сухуо кассу варьирзвт з образцах различии» пасек от 7.1 до 13,ОХ, что согласуется с даннини литератдрн.

В связи с высокой себестоикостьв НН возкозна его фальсификация путеа добавления водз, воска и т.п.'Позтону возникла необходимость разработки экспресс-метода определения води в 82. В результате исследования были разработана два зкспресс-нетсда определенна сухого остатка в НН, с поиоаьо которих было остановлено, что содержание его в исследованиях образцах препарата колеблется от 30 до'34,52. Полученнне результата представлена в сводной таблице 4.

: " Л '.;/; - ' ; ' л/ ' ■ • ■ •. . ''

Таблица 4.

Результат определения основных компонентов

Пасека Сухой Найдено, '/. ь пересчете на сухуш иассу

остаток Сырей Зфирораст- Обций Восстанав- Сульфат-

протеин Борикыс сахар ливающие пая зола

дпяадц сахара

| 30.5 '14,33 ?,13 17,20 3,2? ■

31,1 44,30 Б.С5 ; 22,04 12,62 3,04

; 32,о 45,00 7,57 22,82 18,33 3,15

| 33,3 45,24 . 12,33 28.46 17,90 .3,19 ;

' 32,3 45.31 10,70 22,06 . 17,80 3,13

Таким сбразо; с принскепией раэработашшх котодин изу

• кон состав основных коипонсптос «качественного'Ш н ,'«станов-лево, что колебания в оОразц&х с. разных пасе;: незначительна в содержании протеина, сбисго сахара, сульфатной золе, сухого остатка, однако содержание Ефирорзствориксх лишщов варьирует от 7,0 до 13.СХ.

1.2. Песнедавание ескрораствориллой фракции НИ . уетодок ■

хговатографик в тонкой'слое-сорбента,■ По дакигаг литература известно, что гипь-Д'-: 21* гл^л^члг;? несколько классов соеди»сикй:фосфсл;шида, гликолкииди, коко-, ' ди- и тркгдицеридк, стероли и стгридЕ, кирнве кислоты,

С цальи сыбора ошкиальнах условий разделения екзеи дк-пидов афарнай фраицяк*кссявдованних образцеа 6ада изучено хрокатогра$аческое пзоог^ние иг. на раэяичктг сорбентах с кспользоеаннеы различна* пздвкенй£

- Í7 -

Проведгииае исследования показали,' что разделение снеси липидоз зфиряоА фракции НИ достигается с noueras аатода хро-катогра}шг s тонко*'! слое сор.банта на пластинках "Силуфол HO-SO!" а систокз расгрпритзлеп г«ксан - яизткжтй *$ир -ясдянзя аксзснаа кислота t73:23:2), Иидшпдолъкость xpoaa-тогра^ичаских зал дойт? авали с поаозъп стандартная образцов (холестерин, олеиигааз тслатг),. с такас crtcquîr.tecaux реакций ка отдельннз 7-*кцш<аяы?2з rpsnns,

Зстаповлзпо. чгв see исрдзддкпша овргзцк содержат ндаатичнЕй состав яипидез зфкряой еракциа срксД>,

Эе8

3,3

M ïtQ

Распрздьлэнио с-о и абсорбции ззкроргстоориаих якл::Яоз хаточвегв галечка ка хронатогранна. .

— •• —i- »,

*

гз

с:

' у,

Î ГДНКОДИПИ.'Ш

2 - иоиоглкцариди

3 - дкгляцернйа - холестерин

3,0 - «$ирв

холестерина ? - ггирнйс ;:ис.*от:» ff - ст«р«км и к я

а - холестерин; ö - з$п9врае?есвгпэ гппэй*; э-кмгегзодл

PuC.l, ■ '

Лле всех образцов характерно наличие наиболее интенсивно окраввиного м поглочасцего з УФ свете нятиа, которое идентифицировано как глихолипиа. что согласуется с данными литературы.

Эоирорастеор'киав фракций ОД содереит карбоксильные кислота, осноешши компонентам: потери» ябляэтся иенасыкеннно вирные кислоты. определение содорвания ивнасвяонинх янринк кислот проводили по йиднока числу по кото/иш ГФ X изд., йодное число варьирует в образцах с разных пасен от ?,00 до 10,00. что согласуется г- дашиш литература.

Анализ данных литературы 'показал,., что D болънии количество по сравнении с другнин кскась'цвшшии кислотами s äü содерсится 10-гидрокси-2-йецснэвая кислота (Ю-ГДК), которая присутствует. только в 1Ш, Определенна количественного содор-кания 10-ГДК используется в Зн.ении, для определенна качества у йдентификацш? JÍH is ere tipanspsTöE, • - i.3, PaspaöoTHä «етодш ввсои.оэФфектквнЬй хроматограф;1,;! цяг йсяачес^еенногй-опрвдвявйпя З^-гидрЬксн-З-доц^ : • новей кнеяэти, '

йегичис lö-ГДН еирейвйяст актишшробнва активности ПК, полознтельное йойствио с тгерапин злокачестрешшк onyxesofi g лейкеккг., Разделенно впркаг. кислот VM проронил« с обрласн» но-фазевои pcsiiae ua «»дкостнок хроматографе 'SP 3100 Spectra Physics", ten, ееиаавннои Ь'Ф-дстекторои, настроешш на 205иы, SpectrofU« ü?S Krütos Division. СЕЙ (чувствительность 0,09 aufs) н йшгратороа SF 4200 (Spcctra-PhvsUs, Ш). Получение« p8*ysbtaiH показали, чте опткаашш дшдшниз янрнык кисло! ИМ доаигаетса при использовании ■: стальной колонки

1 ■■ - г- ', '

'■' , •'.,:.- . - гз - ■ ;>, •

ЧУШ.!} и::, рлкоэакио.1 Сорбектоя "5ирз1саг;й 1С 10,5 ш;м". радлнкгшй флзн ссстгэз: йетанол - вода (55:45). дапедешюй до ¡'¡1*2,2 с помоцья I И НС1. Хрокатогр-зана аирннх кислят каточ-Ьаго колочка прадстаслнга. ка рис.г. \ !

Идонти^ниачаЭ'10-ГДК (рис.2а пкнЦ) проводили, сопостап-Лнниэн временя здсрзнзатшз зиргш кислот препарата с вроаснан '¿ЛСРЯИВЗКйЯ стзядсртиого' образца Ю-ГДК. синтозсрооакидго и Любезно приясстзвявияого !?истпгдто» яки:::: Банкирского филиала ЙЯ СССР (oae.mil.

Хрсяатюржяп япр- ' ОгавдартаиЯ сйразсд Зирнгя асзлоти И4 о Я1К кисло? матв*гп~

го 1хяогла. - ■

хо-щ:

""I''

ЯоЗстлоЗ Епутропиого стандарта субериновой

о 2 6 з « . оГ77~Го о г -I Г

м пм

Г - оксвдоканозад йполота

II-.Ш Д.

6

I - ПК Рнс.2

• I - суйчри'г-тя 31- сксздгглгювзя зг-тя

■ иг -

- ?а -

Количественное содержание 10-ГДК в образцах ПН с разних пасек определяли натодоы внутреннего "стандарта, с качсстие Которого использовали суйсрииооув кислоту (рис.2d).

Относительная овибка единичного определения но разработанной ыетодикс но превышает ±2.7D/í. Результаты ноличестиен-ного определения 10-ГДК в ilk' разных пасек ыстодоа ВЗЕХ показали, что содераание ее колеблется от Г>,2 до 7.0Z в пересчете на сухув кассу. 1

Ао навнх исследований wu не располагали точниви данники но содержании 10-ГДК в итечсствшшх образцах НИ.

Йетодика 8Э2Х, разработанная в процессе исследования, повет бить применена для оценки качества содержания 10-ГДК в сырье, на отдельных стадиях технологического процесса, а также е лекарстрсшшх форнах апилака.

Нроведеинне исследования позволили выработать нетоди • чоскиП подход к стандартизации и контроле качества'природ-но-конплсшюго препарата, базирующийся на использовании висок оч у вс три т ельних, селективных и .зксирессишшх методик определений его осноышх компонентов Трис.3)7 '

Оармаг.опейнис препараты "Апилак" и "Пиилаи лиофилизиро-ванний" лрсдстаояявт собой гнесь КИ исгяедовлшшх насек краснодарского край н игпользувтея длл изготовления' следуоцих лекарственных фор«: "Пороаок апилака", "Таблотки апилака", "Мазь апилака 32" н "Свеча апилака 0,005 и 0.01 г", Все препарат является 'оригинлЛпнни и не описаны в заруйоышх «ар-какинеях.С прикепенисн разработанных иотодик. не предусвот-решши йвЛствувчин ¡1TA. проведено сравнительное изучение качества препаратов "Апилак С'натнвиос паточное иоло'г.о)" и

" V . - 21 ~ . -

"йнилак лиофилизированннй"'пронивлзнНого изготоолёнияи.» стадии Государственного контроля (табл.5 и табл.5),

Схеиа исследования состава природно-коааяексного препарата неточного нолочка. ..

2, Контроль качества и стандартизация преиарагов

• "Апилак" и "Ппилак лг.офнлизированннй". .

. Установлено, что содержание "счрого .протс-кн-У' я пйрл-иих • апилака'лиофилизиропзнного зарьирцвт от 43,05 до 4П.ЗВ2. <» апилаке от 34,31 до 45,88И. Количеств« судьба п^Я эияч >млк,-лется в апилаке лиофилизирооашкж от 2,80 до 3,032. е аггвмки

от 1,С до 2,92. Содервднне общего сахара к зфнрарастворимы* липидов в апилаке лнофилнзированиои и апилаке находится в одних пределах от 21,34 до 27.ООН н от 7,5 до 12,592 соответственно.

СодррЕание 10-ГДК, определенное методой ВЗВХ. в обрззцах

$

апилака лиофилизнрозанного колеСлетсс от 5.26 до 7.732. 1

Основываясь на зкспсриаенталышк данных, излояенных пы-ео, считаен, что основныки путдои пспиаеаия эффективности контроля качества препаратов "Опклак" и "Апилак лиофилкзиро-02!пшП" являятся:

13 сссдеиис ь де£ствузЕ!1е 11ТД определения содереанкя основннх компонентов идентнфннзШШ првпаратоо ИН нетодок ТСХ; количественное определение |О-ГйИ ветодои ВЭЕХ; ¿5 разработка ГС(?-|!9 ''ЙПРЛак". "Ппйдз!? яисфилизироеашшр" п 10-ГЛК. :

Пз ^с^ульт^тёй 5!5СПв1!НУентаяы'щ исследований определенн показ^ТР^Я У ¥ото?.ц й-г.5 оценки качества препаратов арняз:?!» рсзр^итенг; про^кти ФС~кз "Апилак" "Апилак-дцовшшзг.рр9аи--_: няй",. .

В В В О Д и

1. Проведен критический анализ-данных по составу кгточт асго езвочка, сод«р53нив осиооинх компонентов у цето^м, ис-полм-исгглм йлз иг. ©преяеяеиия. п вкОран $1ето£орпп5есщ5?, поц-яоа и оценке качества я стаи&гртезацй;- пр^РОДю-ОДЩексцого препарате.

2. На «тар? Гчс^гарс-йыпшго крнтреде прорелен ерзвни-ййадйЗ «ДОЮ П»в&№И!В& 5 ззтрдок анализа, вивчея-'"

ад* Б Ш № 9 адо^шзкровашшй. ■ с «четок

ДоМйЗвйИЛ Наук»! и Области нк анализа к стандартизэтт. Нпиа-за!й( нйсЗходчность нпвывсния эффективности контроля клчастсл и стандартизации отпускаемых отечественной пронналсннисты» препаратов апилака.

Разработаны матодкки анализа основных чоанонент'.-с и.1-?о<Ш1-о йолочкл с исиользоеашши Физико-жкмичсских погодив 31Ш1Ш а их ко«плексй. , ^

4. Ил основе результатов изучения хроаатографнческих э'фирорастворкаай фракции ИК разработана тсх-ичтодикл

и'дёитЛфикацкн ЙЙ.

5. Подобрана »слизяя и разработана аетодика кодиче:таенного определения 1С-ГЯК з каточпоз колечко зотода» ЦЭЗХ.

0. Изучен состйй аминокислот с лоаоаьо аннлокнелотного анализатора. Зстапсплспо палнчнэ 20 ашшокпелот, среди като-рич 50 ноэакешшх. .

7. С помочьп ААС г.ссяодсвпи чшзраяьннЛ ссетаз-й". ¡{оказано наляч«з в его состгзе очень оазних для здпроокп/челинчка йккроэленентов. что псаОходкко учитывать при определении ка, честйа препаратов йН. .. . . ' •

8.-Вперяиз ь ерзвнптэлыгои аспсктс" по 'разработанный но -тпджай изучен состав отечественных пбразцоа Ш{ нндирндчаль-нях пасок о об-ьенс пеоЭ.чогжо.ч для эффективного контроля качества его препаратов. Показано. что а его состлив ордер-лиса: около 33.3л балкоз, 24 И 52 Сахаров. 9,352 эфирорлстро-шкик пипидоб и 3,162 нинеральных вс^сств в иере<мчт<» сч-сде' пассу.

9. На оенпоашш пройденных исслеячпаний ¡>а?1пй<1гами на-

. :'л Л;Л;: л' - ■

уч1со-оОоскоаш«ше ветодикн контроля и установлен!* рарацетрв качества 88, которые'половени в осноРу проектов ФС на препа- , рати "Ппкллк" й "йпилак лнофияизирппаннчй".

- 25 ~

По теме диссертации опубликованы следующие работы: . [.Симакова В.М. .Алексеева В.А.,Исаева И.В. Лпстзяь А.П.Исследовапие состава лскарстЕенннх препаратов, содержащих апилак.//В кп."Тезисы' докладов 1У Всесоюзного съезда ?ар.;сцевтов'"'»-Казань,-1936. -С.570. ;.Спмачовз В.М,.Алексеева В.А.,Исаева Е.В.Е'гзрзботка методов коптро-_ ля качества яаткзшго маточного когоочггэ. -1937. -Раз-

дел XXII.-.'? 5.-Публ.919. ..Скиакова В Л. „Дяеясаэва В.Л.гКЬаоЕа 1Г.В««Е102Сяь ЛЛЛсолвдоваяие : состава иагочнога истчка. //йарггрцпя,21-2?-. .СкмакоЕз З.Д.Пк,л"дотяиэ- «»держали? лладсп п Сахаров в препарате "Апилак//Актуальные проблемы фаркетояогпп, йаруацяя а фарглксоте-ралии.й. -1988.-С. 5С-54.

.Сшакова В.М. ,Ештяа Г.И.»Исаева £.В.Разработка экспресс-метода определения лппгооа катив кого маточного колочха»//^РЕ-Рйзд.ХХП.--й I.-Публ.104.

.Сшакова В.М.,Исаева И.В,,Елькипа Г,КЛчэлгаое ваточное полого (литературный обзор).//Фаркация--1990.-5 6.-0^67-72. •Сшмю В.М.,Исаеза Й.В.,Елькша Г. И. Исследование минерального сс-стат-л апилака лиофж!изировтшого.//^арлац;ш.-1391.-С.35-с8.. .Симакова В.М. Совершенствование методов контроля качества п стандартизации препаратов маточного молочка.//Тез. докл.Всесого.нонЗ.ЧЗрз* ' блемы стандартизации п контроля лекарственных средств и средств медицинского мпкрош1алпза.М.-1991.-С.110-1П.

.Сшакова В.М.Анализ и стандартизация препаратов апилака./Доз.доел. Научно-практ.конф. Тазервы совэрпзанствованнл лекарственного сбеепз-. ченил РСФСР I! пленума Всероссийского научного общества фармацевтов? Вдадимир. -1591.-0.7-1-75. '

).СнмакоЕЭ В.М.,Исаева й.В.,Елькнпа 1\,И.,Рибчун В.ЛЛ!ссяедоваино ш-нокпелотного состава апилака лио$илязпроваш10Г0.//#а1Х!ация.-1992.-» I.-С.28-М. З^с^р