Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Анализ и контроль качества радиофармпрепарата "Альбумин, #299м#1 Тс" и реагента для его получения

На правах рукописи

□ОЗОВв12В

ЯНКОВА ВИКТОРИЯ ГЕРМАНОВНА

АНАЛИЗ И КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА РАДИОФАРМПРЕПАРАТА АЛЬБУМИН, 99мТс И РЕАГЕНТА ДЛЯ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

МОСКВА-2007

003068126

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Московская медицинская академия им. И. М. Сеченова Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию

Научные руководители: доктор химических наук, профессор Харитонов Юрий Яковлевич кандидат фармацевтических наук,

доцент Эпштейн Наталья Борисовна

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук,

профессор Карташов Владислав Сергеевич

доктор фармацевтических наук,

профессор Берлянд Александр Семенович

Ведущая организация:

Государственное учреждение Научно-исследовательский институт фармакологии им. В. В. Закусова РАМН

Защита состоится « г. в часов на заседании

Диссертационного совета Д.208.040.09 при Московской медицинской академии им. И. М. Сеченова по адресу: 119019, Москва, Никитский бульвар, д. 13.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ММА им. И. М. Сеченова (117998, Москва, Нахимовский проспект, д. 49)

Автореферат разослан «

к ищг* 200 ~г.

Ученый секретарь Диссертационного совета, доктор фармацевтических наук,

профессор Садчикова Наталья Петровна

Актуальность темы. Хорошо известно, что ранняя диагностика заболевания -это половина успеха при лечении. В комплексе клинико-инструментальных методов исследования одно из ведущих мест занимает радионуклидная (радиоизотопная) диагностика. Она направлена, во-первых, на функциональное исследование органов и систем, и, во-вторых, на анализ их анатомо-морфологических особенностей. Этим она выгодно отличается от рентгенологических и ультразвуковых методов исследования, которые фиксируют только анатомо-морфологические особенности органов и тканей. Возможность выявить функциональные изменения, намного опережающие анатомические, делает радионуклидную диагностику уникальным методом, как в ранней диагностике заболеваний, так и при динамическом наблюдении; при этом разовая лучевая нагрузка на пациента в 10 раз меньше, чем при рентгенологическом обследовании. Радиофармпрепараты (РФП) дают возможность получать информацию о различных сторонах обмена веществ и биохимических процессах в тканях, причем количественную информацию и часто - на клеточном уровне. Удается исследовать функциональное состояние и структуру различных органов и систем человека; можно получить изображения локализаций мест с аномальным метаболизмом, а . это позволяет визуализировать опухоли, воспаления, места тромбоза.

Известны РФП, позволяющие осуществлять диагностику в гемодинамике, например, ТСК-2 (Франция), Но для российских клиник эти препараты малодоступны из-за высокой стоимости. Поэтому разработка и применение новых отечественных РФП, надежных по своим характеристикам, актуальна.

Остро стоит этот вопрос в диагностике кровотечений, особенно скрытых, когда начальные изменения (снижение гемоглобина, числа эритроцитов, гематокрита) наступают не ранее 3-го часа от начала кровопотери; выраженные изменения, адекватные объему кровопотери, определяются к исходу 12-24 часов, а полная картина становится ясной через 3-4 суток. Поэтому ценность информации клинического анализа периферической красной крови и

2 • традиционных методов (осмотра, измерения АД, пульса) в диагностике острой анемии, где счет нередко идет на минуты, невелика. Наиболее достоверным является метод определения объема циркулирующей крови, основанный на использовании радиоактивных изотопов. Эти вещества вводятся в кровь; через некоторое время определяется их удельная радиоактивность в крови. Удельная радиоактивность крови будет тем выше, чем меньше объем циркулирующей крови (ОЦК) и наоборот. Зная первоначальную радиоактивность и объем вводимого РФП «Альбумин,99мТс», нетрудно рассчитать ОЦК.

В ГУ-Медицинский радиологический научный центр РАМН (ГУ-МРНЦ РАМН) (г. Обнинск) разработан новый отечественный препарат для исследования гемодинамики - «Альбумин,99мТс».

В производстве медицинских препаратов важны не только качество сырья и соответствие нормам хорошей технологической практики, но и надежный аналитический контроль, как исходного сырья, так и готового препарата. Химико-фармацевтический и радиохимический анализ должен проводится в полном соответствии с нормативной документацией. На диагностический препарат «Альбумин,99мТс» такая документация отсутствовала, что, в частности, и обусловило проведение данного исследования.

Цель и задачи работы. Данное исследование посвящено разработке способов и методик анализа препарата «Альбумин,99мТс» и реагента для его получения, что позволило бы проводить контроль их качества и создать соответствующую нормативную документацию.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- изучить физико-химические свойства реагента и радиохимические свойства радиофармпрепарата «Альбумин,99мТс»;

- разработать способы и методики качественного и количественного анализа реагента и радиофармпрепарата;

- исследовать стабильность реагента и радиофармпрепарата при хранении;

- разработать проект фармакопейной статьи предприятия.

Научная новизна. Разработаны способы и методики фармацевтического, физико-химического и радиохимического анализа и оценки качества нового отечественного препарата для радионуклидного исследования гемодинамики «Альбумин,99мТс» и реагента для его получения в результате проведенного комплекса исследований физико-химических свойств реагента и радиохимических свойств препарата.

Разработаны две спектрофотометрические методики количественного определения 8п(П) в реагенте: по реакции восстановления оловом(П) рения(УИ) в присутствии тиоцианат-ионов и по реакции восстановления оловом(П) железа(Ш) в присутствии о-фенантролина.

Разработана методика количественного определения олова(П) в виде олова(1У) в реагенте, основанная на разрушении альбумина "мокрым" сжиганием в присутствии окислителя с последующим определением с пирокатехиновым фиолетовым.

Разработана экспресс-методика определения олова(П) в реагенте с помощью метода индикаторных трубок.

Практическая значимость работы. Результаты исследования положены в основу разработки проекта ФСП «Альбумин, 99мТс, реагент для получения». Разработанные методики внедрены в лаборатории экспериментальной ядерной медицины ГУ-МРНЦ РАМН.

Апробация работы. Результаты работы представлены на IX Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2002 г.), на международном конгрессе «Энергетика - 3000» (г. Обнинск, октябрь 2002 г.), на научно-практической конференции «Современные проблемы ядерной медицины и радиофармацевтики» (г. Обнинск, 2002 г.), в школе «Ядерная медицина в XXI веке — клинические и методические аспекты использования РФП и их препаратов на основе Тс-99м» (г. Дубна, 2002 г.), на II Международном симпозиуме «Разделение и концентрирование в аналитической химии и радиохимии» (Краснодар, 2005 г.)

Публикации. Основные результаты работы изложены в 6 публикациях. Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук.

Работа выполнена в рамках плана научных исследований кафедры аналитической, физической, коллоидной химии ММА им. И.М.Сеченова по проблеме «Исследование и получение новых лекарственных форм с магнитными наполнителями. Разработка способов и методик анализа лекарственных средств» (номер гос. регистрации - 01.200.110542) и «Разработка новых радиофармпрепаратов для диагностики и терапии, их физико-химическое и радиобиологическое сопровождение (номер гос. регистрации - 01.9.10008411).

Положения выдвигаемые па защиту.

Разработаны способы полного анализа отечественного препарата для радионуклидного исследования гемодинамики «Альбумин,99мТс» и реагента для его получения.

Разработаны спектрофотометрические методики определения олова(П) в реагенте на основе реакций восстановления рения(УП) оловом(П) в присутствии тиоцианат-ионов и реакции восстановления железа(Ш) оловом(И) в присутствии о-фенантролина.

Разработаны методики определения олова(Н) в реагенте на основе разрушения альбумина «мокрым» сжиганием в присутствии окислителя с последующим определением с пирокатехиновым фиолетовым.

Разработаны экспресс-методики определения олова(Н) в реагенте с помощью индикаторных трубок.

Разработаны методики определения альбумина в реагенте.

Выявлено влияние основных факторов на относительную активность исследованного радиофармпрепарата.

Разработан проект фармакопейной статьи предприятия на исследованный радиофармпрепарат «Альбумин,99мТс».

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 135 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы,

двух глав, отражающих результаты собственных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 137 источников. Работа содержит 27таблиц и 12 рисунков.

Во введении сформулированы актуальность темы, определены цели и задачи исследования, научная новизна и практическая значимость работы.

В первой главе на основе литературных данных рассмотрены методы синтеза отечественного и зарубежного реагента. Рассмотрены и критически оценены методы анализа аналогов реагента и РФП. на основе альбумина. Определена взаимосвязь аналитических показателей качества и клинических требований для РФП.

Вторая глава посвящена изучению физико-химических свойств и разработке аналитических методик контроля качества реагента на основе альбумина.

В третьей главе приведены результаты исследований по разработке анализа РФП «Альбумин,99мТс» и его биологического поведения.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Материалы и методы исследования.

Объектами исследования являлись: реагент на основе альбумина сыворотки человеческой крови и радиофармпрепарат «Альбумин,99мТс».

Реагент был получен в лаборатории экспериментальной ядерной медицины ГУ - Медицинский радиологический научный центр РАМН, г. Обнинск. РФП «Альбумин,99мТс» получали из реагента добавлением к нему элюата технеция-99м из генераторов 99Мо/"мТс производства ГНЦ РФ - ФЭИ и ФГУП «НИФХИ им. Л.Я. Карпова», г. Обнинск.

Препаратами сравнения были «Альбумин,,311» (ФГУП «НИФХИ им. Л.Я. Карпова», Россия, серия 7042) и ТСК-2 (Cis Bio, Франция, серия R001), разрешенные к клиническому применению.

В работе использовали реактивы, которые описаны в ГФ XI, вып. 2, с. 61-133, квалификации х.ч. и о.с.ч. для стандартизации исходных растворов олова(П), для разбавления элюатов технеция 99-м с объемной активностью 200-

1600 Мбк (5-40 мКи/мл) до активности ¡» 40 Мбк (»1 мКи/мл) 0,9 % раствор хлорида натрия.

Для приготовления растворов использовали дистиллированную воду, полученную в системе Milli-IIQ (Япония).

Использовали хроматографическую бумагу FN 17 фирмы «Filtrak» (Германия), Whatman 1, Whatman 31ЕТ (Англия); хроматографические пластинки фирмы "Merck" (Германия) и Sorbfil (Россия).

Растворы олова(П) 10"2-10'3М готовили растворением навески безводного хлорида олова(П) с содержанием олова(П) не менее 95 % в ЗМ растворе соляной кислоты и использовали свежеприготовленными. Их стандартизацию осуществляли йодатометрическим методом.

Растворы олова(П) меньших концентраций готовили разбавлением исходных и использовали свежеприготовленными.

Для определения олова(П) были использованы индикаторные трубки производства ООО «МедЭкоТест» (свидетельство о государственной метрологической аттестации УНИИМ Госстандарта РФ ТС-224.09/009-2004).

Биуретовый реактив готовили по методике, описанной в ГФ Х1(в.2,с. 34).

Взвешивание осуществляли на аналитических весах фирмы «Sartorius» (Германия), модель А 200 S, с точностью ±0,1 мг.

Регистрацию УФ-ВИД спектров поглощения и измерение оптической плотности растворов проводили на спектрофотометрах: СФ-26 (Россия) и «Philips Scientific UV-VIS» модель PU 8745 (Англия).

Значение рН измеряли на иономере «Эксперт-001» по ТУ 4215-001-52722949-00 (Россия) со стеклянным комбинированным электродом «ЭСК-10601/7» ГОСТ 22261 и ТУ 4215-004-35918409-97. Калибровку иономера «Эксперт-001» проводили по оксалатному (рН 1,68) и боратному (рН 9,18) буферным растворам.

Для разложения проб на этапе пробоподготовки использовали электроплитку ЭПШ 1-0,8/220 (ГОСТ 14919-83).

До постоянной массы сушили вещества в сушильном шкафу СЭШ-ЗМ.

Измерение радиоактивности проводили на сцинтилляционном счетчике фирмы «Messelectronic Dresden GMBH» (Германия).

Биопробы органов и тканей радиометрировали в колодезном счетчике с пересчетным устройством NK-350 (Венгрия).

Для определения объема циркулирующей крови (ОЦК) и объема циркулирующей плазмы (ОЦП) использовали метод разведения, при котором известное по объему и радиоактивности количество РФП вводят в кровеносную систему и после полного и равномерного перемешивания препарата в сосудистом русле измеряют его количество, находящееся в известном объеме крови.

Функциональную пригодность РФП «Альбумин,99мТс» изучали на 60 беспородных половозрелых крысах (самцах) массой 180-200 граммов. На крысах изучали распределение РФП по органам и тканям в различные сроки (от 10 мин до 5 ч) после внутривенной инъекции в объёме 0,2 мл (1,5 МБк). Животных забивали декапитацией, брали кровь, органы и ткани, взвешивали и радиометрировали. За 100%-ный эталон принимали тушку животного, накопление радиоактивности в органах и тканях считали по отношению к тушке. Радиометрии подвергали 1 мл крови, печень, почки, желудок, мочевой пузырь, кишечник крыс.

Пирогенность изучали на 5 кроликах породы Шиншилла, массой 2,53,0 кг.

Статистическую обработку проводили по методу Стьюдента.

2. Анализ реагента

Реагент представляет собой стерильный, апирогенный лиофилизат, состоящий из 10 мг альбумина и 15 мкг олова(П), хранящийся в укупоренных и завальцованных флаконах.

На основании ОСТ «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения» № 91500.05.001-00 разработана схема химико-фармацевтического анализа реагента «Альбумин,99мТс», которая включает в себя определение следующих показателей: описание, растворимость,

подлинность, прозрачность и цветность раствора, рН, стерильность, пирогенность, количественное определение олова(И) и альбумина, упаковка, маркировка, транспортирование, хранение, срок годности.

Внешний вид реагента определяли визуально, он представляет собой лиофилизат белого или слегка желтоватого цвета.

Для испытания на растворимость использовали 0,9 % раствор хлорида натрия, поскольку такой же раствор, содержащий технеций-99м без носителя (элюат из генератора 99Мо/99мТс), применяется для приготовления препарата из реагента. Реагент полностью растворим в течение 10-ти секунд в этом растворителе и образует бесцветный или слегка желтоватый прозрачный раствор.

Для установления подлинности реагента были разработаны методики, позволяющие надежно идентифицировать его: подлинность альбумина устанавливали по методу Лоури, основанном на образовании окрашенных продуктов реакции ароматических аминокислот и цистеина (компонентов молекулы белка) с реактивом Фолина (ГФ XI [вып. 2, С. 31]), при этом развивается темно-синяя окраска раствора; наличие двухвалентного олова устанавливали по окрашиванию в светло-желтый цвет раствора комплекса, восстановленного оловом(П), двухвалентного железа с о-фенантролином, приготовленного для количественного определения олова(П).

Для определения величины рН раствора реагента в 5 мл изотонического раствора хлорида натрия использовали потенциометрический метод (ГФ XI [вып.1, с.113]). Величина рН раствора экспериментальных образцов реагента изменялась от 2,5 до 3,5.

Для определения белка обычно используют две известные из литературы методики. Одна из них основана на светопоглощении водных растворов белка в области 260 — 300 нм с максимумом при 278 нм благодаря наличию остатков ароматических аминокислот. Другая методика основана на образовании в щелочной среде окрашенного в фиолетовый цвет комплекса двухвалентной меди с пептидными связями молекулы белка с максимумом поглощения при

540 нм.

Разработку методик определения альбумина в реагенте предварительно проводили на стандартных растворах, на модельных смесях, а затем на экспериментальных сериях реагента.

При определении альбумина по биуретовой реакции было установлено, > что соблюдение закона Бугера-Ламберта-Беера наблюдается для биуретового комплекса щелочного раствора альбумина при содержании от 0,2 до 1,8 мг альбумина в 1 мл измеряемого раствора при 540 нм. Вычислен удельный показатель поглощения 1% щелочного раствора альбумина с биуретовым реактивом, который составил 2,75±0,10 (п=12, Р=0,95) и практически совпадает с удельным показателем, известным из литературы.

Было установлено, что содержание олова(П) в реагенте от 10 до 60 мкг/фл не влияет на определение альбумина с помощью биуретового реактива.

Также для разработки методики количественного определения альбумина в реагенте была использована способность белков к поглощению излучения в УФ-области спектра. Поскольку нашей задачей было разработать методику определения альбумина в реагенте, который кроме 10 мг альбумина содержит 15 мкг олова(И), причем рН раствора реагента около 2,5 - 3,5, то предварительно требовалось установить зависимость спектра поглощения растворов альбумина от рН. Установлено, что изменение рН от 2,12 до 6,15 не влияет на положение максимума в УФ-спектре поглощения водных растворов альбумина (А. макс = 278 ± 2 нм) и на величину оптической плотности при X макс.

Поскольку технология приготовления альбуминового реагента предполагает высушивание раствора реагента в лиофильной сушке, были, проведены эксперименты на модельных смесях с целью выяснения влияния градиента низких температур на последующее определение альбумина. Установлено, что градиент низких температур, используемых при лиофилизации реагента, не влияет на определение альбумина (не изменяет положения максимума в спектре поглощения, он остается при 278±2 нм, и величины оптической плотности).

При определении альбумина по собственному поглощению в УФ-области было установлено, что соблюдение закона Бугера-Ламберта-Беера наблюдается для водного раствора альбумина при содержании от 0,4 до 1,6 мг альбумина в 1 мл измеряемого раствора при 278 нм. Вычислен удельный показатель поглощения 1% водного раствора альбумина в максимуме поглощения при 278 нм, который составил 5,45±0,25 (п=20, Р=0,95). Погрешность спектрофотометрического определения не превышала ±5,0%.

Установлено, что содержание олова(П) в реагенте от 10 до 60 мкг/фл не влияет на определение альбумина по собственному поглощению в УФ-обласги.

Результаты определения альбумина в реагенте с помощью биуретового реактива и по собственному поглощению белка в УФ области представлены в табл. 1.

Таблица 1. Результаты определения альбумина в реагенте с помощью

биуретового реактива и по собственному поглощению белка в УФ области

Найдено альбумина, Найдено альбумина,

мг/фл, мг/фл,

N серии с биуретовым по собственному

реактивом поглощению

23290296 10,5 9,9

10,3 9,9

10,3 9,9

24210498 10,5 10,3

10,3 9,8

10,3 9,9

25190398 10,3 10,9

11,2 10,7

10,3 10,7

27090498 10,2 9,9

9,9 9,7

10,4 9,9

30140598 10,4 11,2

10,3 11,6

10,4 11,0

35211298 10,7 9,9

10,7 10,8

10,4 10,8

36170399 10,5 10,6

10,5 9,9

9,8 10,6

Из таблицы видно, что результаты определения альбумина в реагенте с помощью разработанных спектрофотометрических методик достаточно хорошо согласуются друг с другом и с истинным значением 10 мг (введенным количеством альбумина при изготовлении реагента)

Содержание олова(Н) в реагенте является одним из важнейших показателей качества, которое, в свою очередь, определяет качество радиофармпрепарата «Альбумин,99мТс», а именно: эффективность мечения и, соответственно, относительную активность радиохимической примеси (РХП).

Определение олова(П) в реагенте является сложной задачей, поскольку:

1) содержание 8п(И) в реагенте очень мало (около 15 мкг);

2) олово(П) легко окисляется кислородом воздуха и гидролизуется в присутствии влаги.

Для решения такой сложной задачи наиболее оптимальным, с нашей точки зрения, является спектрофотометрический метод.

Для разработки спектрофотометрической методики определения олова(П) в реагенте использовали реакцию, основанную на измерении светопоглощения окрашенного 11е(1У)-тиоцианатного комплекса при 353 нм, образующегося в результате восстановления рения(УИ) оловом(И) до 11е(1У) с последующим взаимодействием последнего с тиоцианат-ионами с образованием окрашенного комплекса. Работа была проведена предварительно на стандартных растворах олова(П).

Выполнение закона Бугера-Ламберта-Беера наблюдается в интервале концентраций олова(И) от 1,6-6,4 мкг/мл в измеряемом растворе. Предел обнаружения олова(П) по данной методике составляет 0,2 мкг/мл. Относительная ошибка определения составляет ±5,2%. Рассчитанный условный молярный коэффициент погашения (е) для Ке(1У)-тиоцианатного комплекса оказался равным 15731±815 л/моль-см (п=9; Р=0,99).

Разработана методика определения олова(П) на модельных смесях. Установлено, что положение максимума поглощения в спектрах растворов рений(1У)-тиоцианатных комплексов (для стандартных растворов Бп(П) и

модельных смесей) совпадает; молярные коэффициенты погашения составляют: 15731 ± 815 л/моль-см (растворы олова(П)), 15324 ± 636 л/моль-см (модельная смесь).

Графики зависимости оптической плотности от концентрации олова(И) в стандартном растворе (у = 0,12х + 0,01; г = 0,9974) и оптической плотности от концентрации олова(Н) в модельных смесях (у = 0,12х + 0,01; г = 0,9947) с учетом относительных ошибок линейны и накладываются друг на друга.

Присутствие альбумина в количестве 10 мг не влияет на определение олова(П).

Результаты валидации методики представлены в табл. 2.

Таблица 2. Валидация методики определения олова(П)

в модельных смесях

Валидируемые параметры Результаты

Введено олова(Н), мкг Найдено олова(Н), мкг

0,8 0,8 ±0,1

2,0 2,1 ±0,2

Точность 4,1 3,9 ± 0,3

6,1 6,3 ± 0,3

8,1 7,6 ± 0,5

10,0 10,2 ±0,3

20,0 19,9 ±0,2

30,0 29,9 ±0,7

40,0 39,5 ± 0,6

50,0 49,8 ± 0,6

Воспроизводимость Стандартное отклонение s = 0,18 (п = 9; Р = 0,99)

Линейность А = 0,12х + 0,01 (г = 0,9974)

Диапазон линейности 1,6 - 6,4 мкг/мл

Предел обнаружения 0,2 мкг/мл

Полученные данные свидетельствуют о том, что разработанная методика обладает приемлемыми точностью, воспроизводимостью, поэтому мы ее использовали для количественного определения двухвалентного олова в реагенте.

Результаты определения олова(Н) в реагенте представлены в табл. 3.

Таблица 3. Результаты определения содержания 8п(И) в экспериментальных

сериях реагента

N серии Содержание 8п(П), мкг

Введено 8п(П), мкг Найдено 8п(П), мкг

3 10,0 8,6; 9,8; 9,2

4 15,0 15,3; 15,5; 15,6

5 15,0 13,3; 13,6; 15,5

6 20,0 18,8; 19,8; 17,3

7 20,0 20,0; 20,4; 21,5

8 20,0 21,5; 19,8; 20,7

Таким образом, разработана простая, точная и воспроизводимая методика спектрофотометрического определения олова(П) в реагенте для приготовления радиофармпрепарата «Альбумин,99мТс».

Вторая реакция, используемая для количественного определения БпЩ), основана на восстановлении Ре(Ш) стандартным раствором 8п(И) в солянокислом растворе с последующим образованием окрашенного комплекса

Ре(Н) с о-фенантролином. Она легла в основу разработанной нами спектрофотометрической методики определения олова(П) в реагенте Линейная зависимость оптической плотности растворов комплекса Ре(И) с о-фенантроли-ном от концентрации олова(П) наблюдается в интервале 0,5-7,0 мкг/мл в измеряемом растворе.

Рассчитан условный молярный коэффициент погашения, который составляет 19 800+594 л-моль'-см"1 (п=5, Р=0,95). '

Разработана методика определения олова(И) при переводе его в опово(1У), заключающаяся в предварительном «мокром» озолении реагента концентриро-ванной серной кислотой в присутствии хлорной кислоты в качестве окислителя с последующим спектрофотометрическим определением олова с пирокатехи-новым фиолетовым.

Правильность разработанной методики оценивали методом «введено» -«найдено» (табл. 4).

Таблица 4. Результаты определения олова(Н) по олову(1У)

Введено олова(П), мг Найдено олова(1У), мг

10,00 10,22

10,00 9,71

10,00 9,41

10,00 10.19

10,00 9.89

10,00 9,38

10,00 10,65

10,00 10,31

Таким образом, разработана простая, точная и воспроизводимая методика спектрофотометрического определения олова(П) в реагенте для приготовления радиофармпрепарата «Альбумин,99мТс».

Для доказательства правильности разработанных

спектрофотометрических методик определения олова(И) в реагенте мы использовали метод индикаторных трубок (ИТ)*.

В методе индикаторных трубок аналитическим сигналом является длина окрашенной зоны (Ь0, см), возникающая в индикаторной трубке после контакта определяемого вещества с индикаторным порошком и зависящая от концентрации определяемого вещества. Индикаторные трубки представляют собой полые стеклянные трубки различного диаметра (с1, см) и различной длины (Ь, см), заполненные индикаторным порошком.

В качестве индикаторных порошков использовали ксерогели кремниевой кислоты, модифицированные фосфорномолибденовой гетерополикислотой Нз[Р(МозОю)4], ее аммонийной солью (ТЧН^з^МозОю)^ и реактивом Вавеле (смесь фосфорномолибденовых кислот 12 и 18 рядов Н3[РМоп04о] и Нз[РМо]8Обо]- Для выполнения поставленной задачи определяли:

1) оптимальное ГПС в качестве аналитического реагента;

2) условия восстановления ГПС (кислотность среды, количество молибдена(У1) в ксерогеле, наличие катализатора);

3) способ ввода пробы в индикаторную трубку (за счет капиллярных сил или с помощью перистальтического насоса);

4) скорость потока пробы;

5) геометрические размеры индикаторной трубки (диаметр и длину);

6) условия стабилизации олова(П) в измеряемом растворе, учитывая его низкое содержание в реагенте.

Установлено, что для определения олова(П) в реагенте с помощью метода индикаторных трубок следует использовать ксерогель, модифицированный реактивом Вавеле, с содержанием молибдена 60 мг/г.

» Индикаторные порошки разработаны на кафедре аналитической химии МГУ им. М.В.Ломоносова под руководством д.х.н., профессора Е. И. Моросановой.

Оптимальные условия анализа: внутренний диаметр индикаторных трубок -1 мм, длина 10 см, ввод пробы - с помощью перистальтического насоса, скорость ввода пробы не выше 100 мкл/мин в течение 4-5 минут объемом 0,5 мл, в среде IM HCl.

Разработаны методики определения олова(П) в реагенте с помощью индикаторных трубок по градуировочному графику и методу добавок. Результаты представлены в табл. 5.

Таблица 5. Результаты определения олова(П) в реагентах методом ИТ по градуировочному графику

№ серии Введено Sn(II), мкг Найдено Sn(II), мкг sr

4 15,0 14,0 ±3,5 0,09

5 15,0 15,7 ± 4,0 0,10

6 20,0 23,6 ±3,4 0,06

7 20,0 21,6 ±2,7 0,05

8 20,0 21,4 ±2,0 0,04

Данные, полученные методом индикаторных трубок, хорошо согласуются с результатами спектрофотометрических методик тех же серий реагента, что подтверждает правильность и хорошую воспроизводимость разработанной методики (табл. 6).

Определение стерильности и пирогенности реагента проводили в лаборатории медико-биологических испытаний РФП Государственного научного центра РФ «Институт биофизики» в соответствии с Инструкцией по стерилизации и контролю стерильности радиофармацевтических препаратов для инъекций, радиоизотопных генераторов и нерадиоактивных реагентов для получения РФП, утвержденной Минздравом СССР 01.03.90 г. и ГФ XI.

Проведенными исследованиями было установлено, что реагенты являются стерильными и апирогенными в течение всего срока годности.

Установлен срок годности реагента - 12 месяцев.

Таблица 6. Результаты определения 8п(И) в реагенте для приготЬвления РФП «Альбумин,99мТс» различными методами

N серии Введено олова(П) мкг Найдено 5п(П), мкг/фл

ИТ «рениевая» методика «железная» методика в виде вп(1У) спирокатехи- новым фиолетовым

1 2 3 4 5 6

4 15,0 14,8;12,8;17,1 15,1; 15,3; 15,5 12,8;14,9; 17,1 12,8;17,1;16,1

5 15,0 12,8; 14,8; 14,0 13,3; 13,6; 15,5 17,1;13,3; 13,5 14,2;17,1;15,4

6 20,0 17,8;19,0; 21,6 18,8; 19,8; 17,3 20,2;22,7; 21,9 17,6;19,2;21,7

7 20,0 22,8;20,5; 21,5 20,0; 20,4; 21,5 17,б;18,2; 19,3 19,2;21,4;22,0

8 20,0 22,3 ;20,8; 21,2 21,5; 19,8; 20,7 17,6;18,3; 18,6 20,0;1б,9;18,9

Примечание к табл. 6. Каждая цифра в колонках 3, 4, 5, 6 таблицы соответствует результату анализа одного флакона с реагентом.

Изучена стабильность при хранении реагента при температуре +2-8°С. Хранение реагента в течение 12 месяцев при температуре +2-8°С в условиях холодильника не изменяет его свойств.

Изучено хранение реагента в течение 14 суток при комнатной температуре от +18 до +20°С. Установлено, что хранение реагента при указанных условиях не влияет на его свойства.

Характеристики и нормы показателей качества реагента для приготовления препарата «Альбумин,99мТс» представлены в табл. 7.

Таблица 7. Характеристики и нормы показателей качества реагента

Тест Норма по ФСП

Описание Лиофилизат белого или слегка желтоватого цвета

Растворимость Содержимое флакона должно растворяться в 5,0 мл раствора 0,9 % №С1 в течение 10 секунд

РН 2,5-3,5

Подлинность А. Наличие двухвалентного олова устанавливали по окрашиванию в светло-желтый цвет раствора комплекса восстановленного оловом(П) железа(П) с о-фенантролином Б. Наличие альбумина по образованию синего комплекса при взаимодействии реагента с биуретовым реактивом

Содержание альбумина во флаконе, мг 9,0-11,0

Содержание 8п(П) во флаконе, 12,0-18,0

мкг

Стерильность Стерилен

Пирогенность Апирогенен

Хранение В защищенном от света месте при температуре от +2 до +8 °С

Срок годности 1 год

3. Анализ препарата «Альбуми и ,99мТс» и корреляция с данными его биологического изучения

Для приготовления РФП «Альбумин, 99мТс» во флакон с реагентом, содержащим модифицированный двухвалентным оловом альбумин, вводят шприцем 1-5 мл раствора пертехнетата натрия, 99мТс, из генератора путем прокола иглой через резиновую пробку. Флакон с содержимым помещают в евин -

цовый контейнер, перемешивают, не взбалтывая, при комнатной температуре в течение ЗОминут. Препарат готов к применению по истечении указанного времени. Препарат представляет собой прозрачный бесцветный или слегка желтоватый раствор.

При выборе аналитических параметров, которые необходимо контролировать в готовом препарате, мы руководствовались тем, что препарат получают растворением реагента, качество которого определяется требованиями ФСП, в растворе натрия пертехнетата, 99тТс, также удовлетворяющего требованиям ФСП, поэтому отпадает необходимость проведения полного контроля качества препарата, тем более что срок его годности относительно мал (~ 5 часов). По этим причинам при контроле качества целесообразно было определять те параметры, которые могут изменяться при его приготовлении, а именно: рН и РХП — относительную активность технеция-99м, не связанного с альбумином.

В препарате «Альбумин,99мТс» радиохимическими примесями могут быть

растворимые химические соединения технеция-99м, не вступившие во взаимодействие с альбумином — свободный 99мТс04 .

Для разработки методики определения свободного "мТс04~ использовали методы бумажной хроматографии (БХ) и тонкослойной хроматографии (ТСХ). В качестве неподвижных фаз применяли хроматографические пластинки со слоем силикагеля 0,22 мм фирмы "Merck", хроматографическую бумагу FN 17 фирмы "Filtrak", Whatman 1, Whatman 31ЕТ. В качестве подвижных фаз использовали: 85%-ный метанол, метилэтилкетон, ацетон - метанол (1:1), ацетон - вода (95:5), 0,9 % раствор хлорида натрия.

Было установлено, что оптимальной системой для определения свободного 99мТсО.), является система ацетон-вода (95:5). В данной системе пятно свободного 99мТс04 идет с фронтом растворителя компактно, присутствие «хвостов» минимально, в то время как РФП остается на старте. Величина Rf для99мТс04 составляет 0,94±0,07, для РФП 0-0,1.

Относительная активность радиохимической примеси в препарате не превышала 5%. Характеристики и нормы показателей качества препарата представлены в табл. 8.

Таблица 8. Характеристики и нормы показателей качества препарата Альбумин,99мТс

Наименование показателей качества Норма по ФСП

Описание Прозрачный бесцветный раствор

рН 2,5-3,5

Радиохимическая примесь,% Не более 5%

Срок годности 4 часа

Испытание препарата на стерильность и пирогенность проводили в лаборатории медико-биологических испытаний новых РФП Федерального научного центра "Институт биофизики" и испытательном лпбораторном центре ЦНИИ эпидемиологии в соответствии с нормативной документацией.

Одновременно на кроликах оценивали реакцию на внутривенное введение препарата (срок наблюдения 48 часов).

Все серии препарата были стерильны и апирогенны.

Так как препарат «Альбумин,99мТс» предназначен для радионуклидного исследования гемодинамики, то частью работы явилась экспериментальная оценка функциональной пригодности и безвредности препарата, которая была проведена в лаборатории медико-биологических испытаний Государственного научного центра РФ «Институт биофизики». Исследования проводились на крысах и после изучения распределения РФП в организме крыс (кровь, печень, почки, желудок), определения объема циркулирующей крови и плазмы были сделаны следующие выводы:

1. Препарат «Альбумин, 99мТс» достаточное время находится в сосудистом русле в количестве, которое позволяет адекватно оценить объем циркулирующей крови и плазмы.

2. По своим фармакокинетическим характеристикам . препарат «Альбумин, 99мТс» не отличается от других препаратов альбумина, разрешенных к клиническому применению.

3. Препарат рекомендуется хранить не более 4 часов.

4. Изученные серии препарата «Альбумин, 99мТс» стерильны, апирогенны и не вызывают у животных нежелательных реакций при внутривенном введении. Экспериментальное изучение показало безвредность применения данного препарата.

5. Реагент и радиофармпрепарат «Альбумин, 99мТс» могут быть рекомендованы для клинического изучения.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

На основании проведенных исследований, можно сделать следующие выводы.

1. Разработаны схемы полного анализа нового отечественного препарата для радионуклидного исследования гемодинамики «Альбумин,99мТс» и реагента для его получения. Проведено комплексное изучение физико-химических свойств реагента и радиохимических свойств препарата.

2. Разработаны две спектрофотометрические методики количественного определения 8п(П) в реагенте: по реакции восстановления оловом(П) рения(УП) в присутствии роданид-ионов и по реакции восстановления оловом(Н) железа(Ш) в присутствии о-фенантролина.

. 3. Разработана методика количественного определения олова(И) при переводе его в олово(1У) в реагенте, основанная на разрушении альбумина "мокрым" сжиганием в присутствии окислителя с последующим определением с пирокатехиновым фиолетовым.

4. Разработана экспресс-методика определения олова(П) в реагенте с помощью индикаторных трубок.

5. Разработаны методики количественного определения альбумина в реагенте.

6. Изучено влияние следующих факторов на относительную активность РХП - основной показатель качества радиофармпрепарата.

• Объема элюата, применяемого для получения РФП.

• Времени хранения радиофармпрепарата. Установлено, что препарат устойчив в течение 5 часов с момента его приготовления.

7. Установлен срок годности реагента. Он составляет 12 месяцев при температуре +2-10° С в условиях холодильника. Установлен срок годности препарата «Альбумин, МмТс». Он составляет 4 часа с момента его приготовления.

Разработанные методики вошли в проект ФСП «Альбумин, 99мТс,» По полученным данным был составлен проект ФСП на реагент и препарат «Альбумин,99мТс, реагент для получения».

Список опубликованных работ по теме диссертации

1. Эпштейн Н.Б., Янкова В.Г., Скворцов В.Г., Томчани О.В., Харитонов Ю.Я. Контроль качества реагента и РФП «99мТс-альбумин». IX Российский Национальный конгресс «Человек и лекарство». Тез.докл.- М., 2002, С. 728.

2. Эпштейн Н.Б., Янкова В.Г., Моросанова Е.И., Скворцов В.Г., Харитонов Ю.Я., Магомедова З.У. Определение олова(Н) в реагенте для приготовления РФП, применяемого для исследования гемодинамики. Международный конгресс «Энергетика - 3000». Тез. докл.- Обнинск, 2002, С. 128-130.

3. Эпштейн Н.Б., Янкова В.Г., Скворцов В.Г., Харитонов Ю.Я. Анализ реагента и РФП «99мТс-альбумин». Школа - Ядерная медицина в XXI веке: клинические и методические аспекты использования радиофармацевтических препаратов на основе Тс-99м. Тез. докл., Дубна, 2002, С.74.

4. Моросанова Е.И., Эпштейн Н.Б., Янкова В.Г., Магомедова З.У., Харитонов Ю.Я., Скворцов В.Г. Использование индикаторных трубок для определения олова(П) в реагенте, используемом для приготовления радиофармпрепарата «99мТс-альбумин». Научно-практическая конференция «Современные проблемы ядерной медицины и радиофармацевтики».Тез. докл., Обнинск, 2002, С. 100-101.

5. Эпштейн Н.Б., Янкова В.Г., Терехова Т.В., Харитонов Ю,Я., Скворцов В.Г. Определение радиохимических примесей в диагностических препаратах с 99мТс. II международный симпозиум «Разделение и концентрирование в аналитической химии и радиохимии». Тез. докл., Краснодар, 2005, стр. 449.

6. Эпштейн Н.Б., Янкова В.Г., Моросанова Е.И., Магомедова З.У., Терехова Т.В., Харитонов Ю.Я. Определение олова в реагентах для приготовления радиофармацевтических препаратов с Технецием-99м // Фармация. -2007. -№ 1. - С.8-10.

Отпечатано ООО «Реутовская типография», г. Реутов, Моск. обл., ул. Ленина, д. 6. Тел. 528-04-87 з. 232, т. 90

Л ктулл 1.Нас11. -гемм. Хорошо ШИПНО, 'ГТО раним* диагностика заболевания - это половика успеха при лечении Самыми распространенным» методами визуализации патологических процессов в организме человека валяются рентгенологические и ультразвуковые В клинической практике широко используется магм мпю-реишюсим и компьютерная томография В этом рад}' достойное место занимает радиоиуклиднвя (радиоизотоп пая, ядерная) диагностика, дополняя, а нногяа и замен** перечисленные выше методы.

Раянонуклидная диагностика направлена, во-первых, но функциональное исследование органов и систем, и, во-вторых, на анализ их анатомо-морфологнчсских особенностей- Этим она выгодно отлижете* от рапгсшнишкш и ультратиуковых методе» исследования, которые фиксируют только онатомо-морфолоптческне особенности органов и тканей. Возможность выявить функциональные изменения, намного опережающие анатомические, делает радмонукдкдау» диагностику уникальным метолом кож в ранней ли л гностике заболевании, так и при динамическом наблюдении: при этом разовая лучевая нагрузка на пациента в 10 раз меньше, чем при рентгенологическом обследовании. Роли офармпрспл роты дают возможность получать информацию о различных сторонах обмена веществ и биохимических процессах в тканях, причем количественную информацию и часто - на клеточном уровне Удается КССЛСДОМГСЪ функциональное состояние н структуру различных органов и систем человека; можно получить изображения локализации мест с аномальным метаболизмом, а это позволяет визуализировать опухоли, воспаления, места тромбоза [1-3].

В клинической практике доля использования импортны* радио-формпреипрато» достаточно велика. Полому разработка и применение новых отечественных рщиофармпреларато», надежных по своим характеристикам, как никогда, актуальна

Остро стоит этот вопрос п дналюспке кровотечений, особенно скрытых, когда начальные изменения (снижение гемоглобина, 'тела эритроцитов, гематокрнта) наступают не ранее 3-го часа от качала кротопотери; выряженные «степени*, адекватные объему хровопотерн. определяются к исходу 12-24 часов, а полная картина становится ценой через 3-4 суток. Поэтому ценность информации клинического анализа периферической красно« крови и традиционных методов (осмотра, измерения АД, пульса) ■ диошостакс острой анемии, где счет мерел*е идет на минуты, невелика Наиболее достоверным является метол определения объема циркулирующей крови, основанный на использовании радиоактивных изотопов, Эти мшества вводлтея и крога. через некоторое время определяется их удельная радиоактивность в крови Удельная радиоактивность крови будет тем выше, чем меньше объем циркулирующей крови (ОЦК) « наоборот Зипя первоначальную радиоактивность и объем вводимого !'Ф11 * Альбумин,Гс». нетрудно рассчитать О ЦК (4 ].

Диагностическое средство, предназначенное для раднонуклидной диагностики, должно отвечать определенным требованиям 13 ], 1. Критерии выбора радионуклида

- оптимальным нуклидом для РФП является тот, который позволяет получить максимум диагностической информации при минимальной лучевой нагрузке ил больного; по физическим характеристикам он должен обладать коротким периодом полураспада, быстрый распад нуклида также обеспечивает безопасность исследования;

- у нуклида должно бить у-галучение, удобное для наружной регистрации 2 Радиофармпрспарат должен:

- обладать высокой специфичность» к поглощению и фиксации а том или ином органе или системе организма; одержать радионуклид, не связанный с пренпратом, не более $ % -радиохимическая примесь (РХ11);

- подвергаться биологическому разложению и выведению из организма ■ определенном (воспроизводимом! времени. характеризоваться безвредностью. стерильностью, алирогениостью;

- быть недорогам н доступным.

В ГУ-Медицинский ралиологнчсскоийнвучиыЛ центр РАМН (ГУ-МРНЦ РАМН) {г. Обнинск) разработан новый отечественный препарат лдя исследования гемодинамики - «Альбумин, Тс».

В производстве медицинских препаратов нажми не только качество сыры н соответствие нормам хорошей технологической практики, но п надежный аналитический контроль как исходного сыры, так и готового препарата Хнмнко-фармацсвтаческий и радиохимический анализ должен проводится в полном соответствии с нормативной ДОКУМСИТЯШКЯ. На полый диагностический препарат «АльСумнн."*Гс» такая документация отсутствовала, что и обусловило проведение данного исследования

Спить задач исследовании с проблемным планом фармаисвтнчсски* наук,

Работа выполнена в рамках шиша научных исследований кафедры вИйлтнчестА, физической, коллоидной химии ММА им. Н-М.Сечеиова по проблеме «Исследование и получение новых лекарственных форм с магнитными наполнителями Разработка способов и методик анализа лекарственных средств» (номер гос. регистрации - 01,200.110542) н «Разработка новых радиофармнрепаратов дня диагностики и терлпнн. их физико-химическое и радиобиологическое сопровождение (номер гос. регистрации - 01.9.10008411).

Цель н задачи работы. Данное исследование ноемщено разработке способов и методик анализа препарата «Альбумин.***?«» н реагента для его получения, 'гго позволило бы провозить контроль их качества и создать нормативную документацию.

Для достижения поставленной цели необходимо было (МШИТЬ следующие задачи

- изучить фнтко-хнмичсскис свойства реагента н радиохимические евоЛетал радиофармпрепарата «Адьбумии.Те»: разработать способы и методики качественного к количественного анализа реагента н родиофары препарата. ■ исследовать стабильность реагента и раднофармпрсварата при хранении:

- разработать проект фармакопейной статьи предршттия

Научила ници пш. РирзСотаны способы н методики фармацевтической физико-химического к радиохимического анализа и оценки качества нового отечественного препарата лля радиоиукладиого исследования гемодинамики «Альбумин,"Теч н реагента для его получения II результате проявленного коыяяеиеа исследований физнко-химических свойств реагента и радиохимических свойств препарата.

Разработаны две спсктрофотометрнчесим методики количественного определения 5п(Щ о реагенте но реакции воестансюления оловом(И) рения(У[1> в присутствии роданид-ионов и по реакции восстановления оловом* II) жслеза(Ш) в присутствии о-фенактролнна.

Ратриботвиа методика колн'кетвеиного определения олова)!!) в виде олова([У> в реагенте, основами* ил ратруигении альбумина "мокрым" сжиганием в присутствии окислителя с последующим определением с инрокакхииолим фиолетовым.

Рлзроботаи экспресс-методика определения оло«а(Н) в реагенте с помошью метода ннликлторныхтрубо*

Практическая значимость работы. Результаты исследования положены а основу разработки проекта ФСП «Альбумин. Тс, реагент лля пожени*», Разработанные методики внедрены в лаборатории экспериментальной ядериоЛ меляиниы ГУ-МРНЦ РАМН.

Апробации раба I ы. Результаты работы представлены на IX Российском национальном конгрессе ««Человек к лекарство» (Моста, 2002 г.), на международном конгрессе ^Энергетика - 1000ч (г. Обнинск» октябрь 2002 г.)г ко научно-практической конференции «Современные проблемы метлой медицины и радиофармдцепики» (г Обнинск. 2002 г,)» в школе «Ядерная медицина в XX] вехе - клинические и методические аспекты использования РФЛ н их препаратов на основе Тс-99м» (г. Дубна, 2002 г), на II МежцшрЩПМ симпозиуме «Разделение и концентрирование в аналитической химии и радиохимии» (Краснодар, 200} г)

11уГ|.1Икти1ии. Осноише результаты работы наложены > 6 публикациях. Положении выдвигаемые на »шип.

Разработка способов полного анализа отечественного препарата для ралиоиуклндного аеоюкпт гемодинамики «Альбумин,**"!«:» н реагента для его получения.

Разработка спсктрофотометрнческих методик определения олова(Н) в реагенте на основе реакций восстановления реиия(\'|1) одо«ОМ(Т[) • присутствии тнатии Спт-нОНО* к ревКШМ восстановления железа(Ш) оловом(П) в присутствии о-фенаитролнна.

Разработка методики определения о.юва<Щ в реагенте на основе разрушения альбумиив «мокрым» сжиганием п присутствии окислителя с последующим определением с пнрокатсхиновым фиолетовым Разработка экспресс-методики определения олова(11) в реагенте с помощью индикаторных трубок

Разработка методики определения альбумин« в реагенте Выявление влияния основных факторов на относительную активность иселедоваизюго радиофар.и прея арата

Разработка проекта фармакопейной статьи предприятия па исследованный раднофармнреиарат иЛдьбумнн.Тс».

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

На основании пройденных исследований, основные результаты которых отражены в публикация* {132-136 |, можно сделать следующие выводы. Разработаны схемы полного анализа нового отечественного препарата для рвдноиуклишюго исследования гемодинамики «Альбумна.Тс» и реагента для его получения. Проведено комплексное л ¡у чение физико-химических свойств реагент и радиохимических свойств препарата.

2, Разработаны две снектрофотомстрнческис методики количественного определения Si»(l[) в реагенте, по реакции восстановления аюмнЩ) (вш(УН) в присутствии родан^йнюнов и по реакции восстановления ОЛОВОМЩ) жедсзаШГ)в присутствии о-фенатролина,

3, Разработана методика количественного определения оловаШ) в виде uJioBa(IV) в реагенте, основанная на разрушении альбумина "мокрым" сжиганием в присутствии окислителя с последующим определением с пнрокатехиновым фиолетовым

4, Разработана экспресс-методика определен и* опоимЦН) в реагенте с помощью индикаторных трубок, Для этого: было выбрано оптимальное гетсрополнсоединеиие (реактив Вавеле) в качестве аналитического реагента,

• определен способ ввода пробы в индикаторную трубку;

• определена оптимальная скорость поступления анализируемого раствора в индикаторную трубку:

• установлены оптимальные длина и диаметр индикаторной трубки.

• изучены условия стабилизации растворов олова(Н);

• изучено влияние медн(Н) на скорость восстановления иммобилизованного реактива Вавсле оловом(П);

• изучено влияние количества иммобилизованного реагягга на глубину восстановления реактива Вавсле оловом(И)

5 Разработаны методики количественного определения альбумина в реагенте.

6. Изучено влияние следующих факторов на относительную активность РХП - основной показатель качества рплиофармпрепарлтв Объема элюата. применяемого для получения РФП. a тпкже возможного разбавления уже готового радиофармпрепарата 0,9%-ным раствором хлорида натрия.

Установлено, что на содержание РХП практически не оказывает влияния объем здюата, используемый для приготовления препарата в интервале от I до 5 мл, и возможное разбавление готового прспрата 0,9 % раствором нкркя хлорида.

• Времени хранения ралнофармпрепарата. Установлено, что препарат устойчив в течение 5 часов с момента его приготовления

7. Установлен срок годности реагента. Он составляет 12 месяцев при температуре +2-10° С в условиях холодильника. При этом не изменяются радиохимические свойства получаемого in него РФП «Альбумин, ""'le». Изучена стабильность реагента при хранении в течение 14 суток при комнатной температуре. Установлено, что хранение реагента при указанных условиях не изменяет его химических свойств и радиохимических свойств получаемого из него РФП

Установлен срок годности препарата «"Альбумин, Тс» исходя из периода полураспада "Тс, радиохимическою и биологического поведения РФП Он составляет 4 часо с момента его прнютовлення, i. Разработанные методики вошли а проект ФСП "Альбумин. ^Те, реагент дли получения'