Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.07) на тему:Значение микроструктуры цервикальной слизи коров как фактора готовности матки к осеменению и защитного биологического барьера

ВСЕСОЮЗНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ВВТЕРИНАРШЙ ИНСТИТУТ ПАТ0Л01Щ, ФАРМАКОЛОШИ И ТЕРАПИИ

КАРТАШОВА Галина Николаевна

ЗНАЧЕНИЕ МИКРОСТРУКТУРЫ ЦЕРВИКАЛЬНОЙ СЛИЗИ КОРОВ КАК ФАКТОРА ГОТОВНОСТИ МАТКИ К ОСЕМЕНЕНИЮ И ЗАЩИТНОГО БИОЛОГИЧЕСКОГО БАРЬЕРА

16.00.07-Лкушерство и искусственное осеменение сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

На правах рукопт

Воронеж 1952.

'гтгЕШ*

ГСКА !

ВСЕСОЮЗНЫЙ НАУЧЮ-ИССЛЕДОВАТЕЛЪСКИЙ

ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ ПАТОЛОШИ, ФАРМАКОЛОГИИ

КАРТАШОМ Галина Николаевна

ЗНАЧЕНИЕ МИКРОСТРУКТУРЫ ЦЕРШКАЛЬНОЙ СЛИ31 КОРОВ КАК ФАКТОРА ГОТОВНОСТИ МАТКИ К ОСЕМЕНЕНИЮ И ЗАЩИТНОГО БИОЛОГИЧЕСКОГО БАРЬЕРА

Г6.00.07-Акушерство и искусственное осеменение сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

И ТЕРАПИИ

На правах рукописи

Вороне* Г992

Работа выполнена во Всесоюзном ордена Знак Лочёта сельскохозяйственном институте заочного образования

Научный руководитель кандидат с.-х.наук, доцент Казеев Г.В.

Официальные оппоненты: Доктор ветеринарных наук, профессор Нежданов А.Г. Доктор ветеринарных наук Мисайлов В.Д.

Ведущая организация - Казанский ветеринарный институт

Защита диссертации состоится "'" ^ г1 11 Л ^ЭЭ :/г. в /С часов на заседании специализированного совета Д 020.65.01 во Всесоюзном научно-исследовательском ветеринарном институте патологии, фармакологии и терапии (394087, г.Воронеж, ул.Ломоносова, 114-6)

С диссертацией можно ознакомиться з библиотеке Всесоюзного научно-исследовательского ветеринарного института патологии, фармакологии и терапии

Автореферат разослан "" ' " ''"Г'1' 199/г.

Учёный секретарь специализированного совета

Слобоцяник В.И.

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. В условиях современной индустриализации животноводства, когда зачастую недооцениваются особенности концентрации поголовья методов крупно-группового содержания и кормления исключена возможность индивидуального подхода к животным, актуальность приобретают мероприятия, направленные на профилактику бесплодия. Статистика показывает, что экономический ущерб от бесплодия превышает потери, наносимые животноводству всеми заразными и незаразными болезнями.

Одним из условий высокой оплодотворяемоети животных является правильный выбор времени осеменения в стадию возбуждения полового цикла. Исследования ряда авторов (А.П.Сгуденцов, 1953; В.С.Шишлов, 1966; А.К.Сеглинь, 1969; Г.В.Зверева, 1975; В.А.Павлов, 1976; Г.В.Казеев, 1977) показали, что для выбора оптимального времени осеменения необходимо точное определение половой охоты у самки.

Однако практическое отсутствие широкого распространения биологической пробы и ориентация в выборе времени осеменения на "рефлекс неподвижности", который не отражает в полном объеме состояние половой охоты, является одной из главных причин низкой ошгодотворяемости коров.

Считается общепризнанным, что механизм продвижения спермиев зависит от моторики половых путей, реотаксиса спермиев, динамики полового акта (В.С.Шипилов, 1962; В.А.Павлов, 1976; Г.В.Казеев, 1977 а др.). Извостно также, что продвижению спермиев во время эксгруса способствует цервикальная слизь {¿. СОМа^- , 1968;

Я-Си?^ , 1969; В.Г.Бирюков, Д.Д.Логвинов, 1973; В.А.Павлов, 1976; , и др.).

Однако взаимосвязь условий транспорта спермы в половых ду-

гях самки о выбором оптимального времени осеменения изучена не-досгагочно, хотя известно, что в медицине показатель оплодотворяющей способности спермиев по времени их переживаемости в цер-викальной слизи имеет решающее значение при многих формах бесплодия (М.А.Кунин, 1962; СоЛо , 1983; У , 1986;

У.РоыЦа, 1986; У 1986).

Наряду с указанными свойствами цервикальная слизь играет роль барьера, предохраняющего матку от инфекции (%>£ , 1940; Н.И.Полянцев, А.Н.Синявин, 1985; Д.Д.Логвинов, В.Г.Бирюков, 1988). Многие авторы бактерицидность цервикальной слизи связывают по времени с проявлением феноменов стадии возбуждения полового цикла (С.В.Денисова, 1961; В.С.Кувшинова, 1985; А.И.Варганов, 1988).

Несмотря на важную роль цервикальной слизи и входящих в ее состав полисахаридных соединений, взаимосвязь между микроструктурой слизи в период половой охоты, ролью ее в миграции спермиев и в защитном барьере половой сферы коров еще недостаточно изучены.

В связи с этим в настоящей работе были поставлены следующие задачи:

1. Изучить в динамике мукополисахаридную структуру цервикальной слизи в период проявления различных феноменов стадии возбуждения полового цикла.

2. Установить взаимосвязь между формированием структуры слизи и состоянием отхоты.

3. Изучить реакцию между спермой и цервикальной слизью в период половой охоты в зависимости от структуры слизи.

4. Выполнить сравнительные исследования пегефационной пробы как способа диагностики проводящих половых путей к приему спермы с феноменом "лист папоротника".

5. Определить роль мукопэлисахаридной структуры цервикаль-поп слизи в механизма защитного барьера половой сферы.

1. Предложена методика изучения микроструктуры цервикаль-ной слизи под световым микроскопом.

2. Изучено к доказано, что необходимым условием для проникновения саерияев в слизь является наличие сформировавшейся структуры. Бесструг;турная слизь на может содействовать миграции спер-миев в слизь и транспортировке их по проводящим половым путям к месту депонирования.

3. Описан и предложен новый тест для определения оптимального времени осеменения - петефационная проба, которая уточняет состояние половой охоты и готовность проводящих половых путей к приему спермы.

4. Изучен и доказан один из механизмов заидегното барьера половой с^вры, который зависит от наличия сформировавшейся микроструктуры в период половой охоты.

Практическая ценность. Апробирован ноеый тест (итерационная проба) для оценки состояния проводящих по.-овых путей к приему спермы и уточнения состояния половой охоты.

Предложена методика изучения структуры цервикальной слизи под световым микроскопом.

Внедрение результатов исследования. Результаты исследования внедрены на молочном комплексе совхоза им. 60-летия СССР, Якутской-Саха-ССР. Они используются в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий на кафедрах генетики и разведения сельскохозяйственных животных ВСХИЗО и внутренних незаразных болезней ЯСХИ.

Апробдпия работы. Основные материалы диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на научных конференциях ЗСХИЗО

(Балашиха, 1989, 1990), ШК (Дубровшш, 1990).

Публикация вазулм.аж.р.в ДСДД9ДРДанИ&.. Основное содержание диссертации опубликовано в грех статьях.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 95 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материала и методов исследования, результатов исследования, обсуждения, выводов, практических предложений и списка литературы. Работа включает 4 таблицы, 14 рисунков. Список литературы включает 120 источников, из них 29 зарубежных авторов.

На защиту выносятся следующие положения;

1. Необходимым условием для проникновения спермиев в слизь является наличие сформировавшейся мукополисахаридной структуры. Бесструктурная слизь не может содействовать миграции спермиев по половым путям к месту депонирования.

2. Петефационная проба позволяет уточнить состояние половой охоты и готовность проводящих половых путей к приему спермы.

3. Сформировавшаяся структура цервикальной слизи в период половой охоты является одним из механизмов защитного барьера поло вой сферы.

4. Между показателем петефационной пробы, с одной стороны и сформировавшейся структурой цервикальной слизи с другой, существу ет положительная коррелятивная связь, указывающая на взаимозависимость физиологических процессов и состоянием половой охоты.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материал и методика исследования

Исследования выполнены в 1988-1990 гг. в совхозе им. I Мая Балашихинского района Московской области на учебно-производственном участке Калужского зооветтехникума, в лаборатории электронно! микроскопии ВНИВС, на кафедре генетики и разведения сельскохо-

зяйственных животных ВСХИЗО.

Во всэх случаях для опыта отбирали кляняческл здоровых коров, без послеродовых осложнений.

В связи с тем, чго работа состояла аз нескольких- этапов, считаем необходимым и методику исследования описывать в соответствии с разработанными этапами.

2.1.1. Обработка методики и изучение микроструктуры цервикальной слизи коров

Как указывалось вше,& ^ (1940), В.Г.Бирюков (1973) в результата гистохимических анализов указали на наличие в цервикальной слизи кислых мукополисахаридов. У (1976) отметил свойство их формировать специфическую структуру в зависимости от стадий полового цикла. Однако методика изучения микроструктуры цервикальной слизи авторами детально не описана. Поэтому мы вынуждены были выполнить1 ряд поисковых опытов, взяв за основу общепринятые методики гистологических исследований органов и тканей в биологии.

Для отработки методики использовали пробы цервикальной слизи коров, находящихся в стадии возбуждения полового цикла. Для электронной микроскопии использовали 15 проб слизи ог 5 коров, для световой - 66 проб от 20 коров.

Получение слизи осуществляли следующим образом: после ректального массана матки, выделившуюся из наружных половых органов слизь помещали в бюксы с притертой крышкой, нумеровали и хранили в термосах со льдом и холодильнике до 4 часов при температуре 4 0

2.1.1.1. Электронно-сканирующая микроскопия

Обработку нагивной слизи перед электронной микроскопией проводили по методу (1976).

В основе методики изучёния .мукополисахаридов, использовали

принцип выявления их в модификаций Люфта (1961).

Отобранные пробы слизи контрастировали» и фиксировались в растворе глнтаральдегида и рутениевого красного,

Уплотнение, быстрая отмквка и обвзвоЕИвание фиксированных проб проводилось в спиртах по восходящей концентрации, повторная фиксация - 3 $-нкь: раствором уранилацетата на 30 %-тп этаноле. Дальнейшее уплотнение и обезвоживание выполняли спиртами высокой концентрации и ацетоном, а заливка - в зпокаидные смолы.

Резка блоков осуществлялась на ультрамикротоме КВ-3 (Швеция). С каждого блока получали по 10 ультратонкях толщиной о

500 А, срезов. Просмотр и фотографирование проводили под электронным микроскопом производства Япония, марки ¿-ЕОЬ-ЮО С.

Учитывая то, что подготовка препаратов для электрошок микроскопии процесс слокныИ, длительный по времен;;, требуется уникальная аппаратура и реактивы, и:: обратились к методике светового макрос копирг.ния. Тем более, что в биологии известны работы по определению полисахаридов в секрете половых органов на основе хромогекных реакций. Не также как и для электронной микроскопии методики по изучению микроструктуры цорвикальной слизи под световым микроскопом в доступной нам литературе найти не удалось.

2.1.1.2. Световая микроскопия

За основу способа подготовки цервикальной слизи перед сватово;: микроскопией взяли общепринятую методику подготовки тканей и органов для гистологически исследований. Учитывая то, что цорвикальная слизь по плотности отличается от тканей, условия обезвогивашш проб в спиртах и хлороформе поддерживали до тех пэр, пока проба слизи первоначальный объемом 10 мл не уменьшится до размеров горошины, то есть плотности ткани. Обезвоженные и ипксированные кусочки заливали в парафин через хло-

роформ на ночь (О.В.Волкова, Ю.К.Елецкий, 1971).

Гистологические срезы получали на санном микротоме МС-2. С каждого блока готовили по 40 серийных срезов. В общей сложности исследованию подлежало 264 гистологических среза.

Микроскопические особенности структуры мукополисахаридных соединений цервикальной слизи нами изучались на препаратах окрашенных по методу Мингер (1961), р. Р4и&ренг (1966). Окрашенные и заключенные в бальзам срезы изучали под микроскопом МБИ-15. Микрофотографирование осуществляли с помощью микрофотонасадки Ш1-1 (Л.А.Федин, И.Я.Барский, 1971).

2.1.2. Изучение структуры цервикальной слизи в период проявления феноменов стадии возбуждения полового

цикла

В задачу данного раздела входило изучение проб цервикальной слизи, полученных у коров на сгадйи возбуждения полового цикла. При отборе проб слизи предусматривали определение половой охоты у коров быком-пробником, а также визуальное наблюдение за поведением коров в стаде. Для электронной микроскопии была получена -21 проба цервикальной слизи от 7 коров в стадии половой охоты. Исследованию подлежало 210 гистологических срезов по вышеописанной методике. Кроме того, отбор коров перед искусственным осеменением выполняли в соответствии с требованиями "Инструкции по искусственному осеменению коров и тёлок" (1988). Пробы слизи для световой микроскопия получали от коров при проявлении течки, во время признаков "рефлекса неподвижности" и после его прекращения, в среднем через 6 часов. Всего получено 60 проб от 20 коров и подлежало исследованию 240 гистологических срезов.

2.1.3. Изучение реакций взаимодействия цервикальной

слизи со спермиями

Объектом исследования служили пробы слизи, которые получаля

и исследовали на предыдущем этапе. Опыт проводили непосредственно на ферме, перед осеменением на пункте искусственного осеменения. Кроме ранее отобранных 20 коров, под наблюдением находилось еще 78 коров.

Определение реакций взаимодействия цервикальной слизи со спермиями проводили по методу Курцрока-Мяллера (М.А.Кунин, 1951), в нашей модификации. Пробу осуществляли следующим образом: цер-викальную слизь наносили в виде капли на подогретое предаетное стекло. На расстоянии от него помещали каплю спермы с таким расчетом, чтобы при прикрытии покровным стеклом границы капель соединились, но не сливались воедино. Затем препарат помещали на столик Пакенаса и под микроскопом вели наблюдение за поведением спермиев. Оценку взаимодействия цервикальной слизи и спермиев проводили не по времени переживания спермиев, а по характеру взаимодействия со слизью.

В качестве контроля рассматривали феномен кристаллизации слизи. Из всех известных способов, где используется цервикальная слизь и ее свойства, мы отобрали этот, гак как он отражает структурное состояние слизи.

Мазки-отпечатки с цервикальной слизи готовили по методу описанному В.В.Кленовым, Н.А.Сивожелезовой (1971). Отпечатки готовили с проб слизи этих же животных перед постановкой реакции сперма+слизь. Всего было приготовлено и подлежало исследованию 476 мазков-отпечатков.

Производственную проверку опыта провели в комплексе "Дяглов-ский" Балашихинского района Московской области - 120 коров, совхозе им. 60-летия СССР, Якутской-Саха-ССР - 50 коров.

Данные результатов опыта сопоставляли с данными ректального исследования коров. Оценку опыта проводили по количеству оплодотворившихся коров, анализу результатов осеменения и их взаимо-

связь с реакциями пегефационной пробы и феноменом "кристаллизации"

Материалы исследования записывали в протоколы. Просмотр и фотографирование препаратов проводили но методу фазового контраста в темном поле под микроскопом МЕИ-15, фотонасадкой акМ-1, увеличение 320 (ок. 8, об.40).

2.1.4. Изучение защитных свойств цервикальной слизи с учетом состояния ее микроструктуры

Для определения свойств защитного барьера цервикальной слизи с учетом ее структуры использовали методику ¿Г /ссст<х-Ъ-{1986), в нашей модификации. Для опыта отобрали 20 проб. Пробы слизи получали в момент проявления "рефлекса неподвижности" и через 6 часов после его прекращения. Всего обследованию подлежало 40 проб цервикальной слизи. Последовательность выполнения опыта отражена на схеме.

Схема выполнения опыта

Пегефационная проба Проба на проницаемость цервикальной слизи Посев на питательные ср>еды

Церви-кальная слизь + Сперма "прони-^ кнове- ние" —"приближение" 44 "нейтральная" Сперма капилляр \ ТТДрПИКЯ7ТТ.НЯЯ / плстаъ тест-культура: протай кишечная палочка синегнойная палочка Среда Эндо Мясо-пепгонный агар

Температура 38 °с 24 часа

Для обеспечения стерильности, цервикальную слизь в данном случае получали из шейки матки шприцом Жанэ.

В каждой пробе слизи определяли характер взаимодействия цервикальной слизи и спермиев и время прохождения спермиев через слизь в капилляре, длиной 5 см, диаметром - 4 мм.

Опыт по определению проницаемости слизи для условно-патогенной микрофлоры проводили в бактериологической камере УНБК.

1С

В качестве тесг-кулыур условно-патогенной микрофлоры использовали штаммы культур кишечной палочки, протея, синегнойной палочки бактериологической лаборатории ШЭВ.

Определив характер взаимодействия цервикальной слизи со спермиями, мы приступали к исследованию степени ее проницаемости для условно-патогенной микрофлоры. Для этого в капилляр со слизью со стороны незапаянного конца вводили взвесь спермы с одним из видов микроба и го же запаивали парафином. По истечении времени с противоположного от места введения микроба конца пипетки делали посев на питательные среда и оставляли в термостате на сутки при температуре 37°.

Всего обследовано 20 проб слизи при четырехкратной повтор-ности с тремя видами микробов.

Оценку результатов опыта проводили по наличию роста культур микробов на питательных средах.

Определение защитных свойств цервикальной слизи провели в производственных условиях. Для опыта отобрали 18 голов, клинически здоровых коров, но выбракованных по показания.) крови на лейкоз. В стадии возбуждения полового цикла, перед искусственным осеменением определяли реакцию взаимодействия слизи со спермиями. Осеменяли по три коровы при трех разных реакциях по характеру взаимодействия слизи со спермиями, с одним из трех видов культур микробов.

Оценку опыта проводили по проявлению клинических признаков воспаления половых органов и проявлении повторной половой охоты.

Цифровой материал обрабатывали методом вариационной статистики по Г.В.Лакину (1990), на ЭВМ "Нащж-2". Критерием достоверности разности в показателях считалась величина Р (Р£ 0,05).

Экономическую эффективность предлагаемых мероприятий опре-

делили в соответствии с "Методическими рекомендациями для определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий" (М.Х.Шайхаманов, 1982) и нормативными показателями, приведенными в книге "Организация и экономика ветеринарного дела" (И.Н.Никитин и др., 1987).

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Взаимосвязь структуры цервикальной слизи с

феноменами стадии возбуждения полового цикла

Данные результатов исследования считаем удобным изложить з порядке выполнения опытов.

Применение электронной микроскопии (увел. 3.000) дало нам мозможность увидеть темные полосы в гистологическом срезе, свидетельствующие о наличии специфических соединений в цэрникальной слизи. Этими образованиями являются мукополисахаридные соединения. Наши убеждения основываются на гистохимической методике выявления мукополисахаридов. Введение в исследуемый материал специфического красителя рутениевого красного сопровождается интенсивным окрашиванием полисахаридов в красный цвет.

В ходе дальнейших исследований (увел. 10.000) выявили, что ультраструктура цервикальной слизи представлена сложным переплетением поперечных и продольных нитей мукополисахаридных волоокон. Они образуют сплетение, оформленное в виде ячеистого комплекса.

Сканирующее устройство электронного микроскопа позволило нам изучить мукополисахаридные волокна в объемном их изображении. В данном случае \;укополисахаридные нити ориентированы в продольном расположении параллельно относительно друг друга.

Следует отметить, что в изучаемых объектах мы отмечали и изменения в сформировавшейся структуре цервикальной слизи в сторону разрушения. Происходило нарушение ячеистой структуры и лишь по бывшей основе угадывалось ее строение.

В наших гистологических исследованиях материала под электронным микроскопом подтвердилось наличие определенной специфической структурности цервикальной слизи. Однако эти исследования сопровождались значительными трудностями.

Чтобы обнаружить структуру слизи необходимо выполнить большое количество исследований. Методика подготовки проб, дефицит качественных реактивов делают процесс трудоемким и дорогостоящим.

Методические разработки использования световой микроскопии, по сравнению с электронной, оказались наиболее доступными.

В процессе исследования методом светового микроскэпирования получен материал, также подтверждающий наличие соответствующей микроструктуры слизи. Она представлена мукополисахаридными волокнами. Гистологическое строение которых характеризуется оформленной структурностью, а не бесформенным, беспорядочным "мице-лиальным" видом.

Со сменой феноменов стадии возбуждения полового цикла в микроструктуре цервикальной слизи отвечали процессы разрушения, распада решетчатого каркаса, ячеистого строения.

Нами установлено, что процесс (формирования ультраструктуры слизи существенно менялся в зависимости от феноменов стадии возбуждения полового цикла. При половой охоте, которую определял бык-пробник .завершается процесс оформления структуры мукополиса-харидных соединений в цервикальной слизи в виде фибринозных нитей. Происходит их распределение в продольном расположении. Уль-грасгрукгура приобретает оформленный вид. Ячеистое переплетение мукополисахаридных нитей создает устойчивость структуры слизи.

В состоянии половой охоты сформировавшаяся ультрасгруктура слизи способствует беспрепятственному проникновению в нее спер-ыаев.

В гистологическом материале проб слизи, полученных после по-

IS

ловой охоты, очертания мукополисахаридных нитей становились трудноразличимыми. Начинался процесс разрушения улътраетруктуры. Структурность слизи становилась менее выраженной, что коррелирует со сменой феномена стадии зозбужденкя полозого цикла-пре-крадением половой охоты у коров.

Поскольку сформировавшаяся структура цервикальной слизи наблюдается в состояния половой охоты, то следует считать, что ее отсутствие свидетельствует о том, что корова не находится в состоянии половой охоты.

Появление признаков "рефлекса неподвижно:,;-и" сопровождалось ¿армирование.-.', мукополясахаридной структуры иорЕлкальной плизи на у есох исследованных нами животных (40 %). Процесс разрушения структуры слизи наблюдали как при ярко выраженном "рзфлекса неподвижности", так и при его отсутствия. Это дзет нам основание предполагать, что "рефлекс неподвижности" совпадает с состоянием половой охоты частично, а иногда не совпадает совсем. Это предположение мы связываем с тем, что при электронной микроскопии четко доказана связь оформления структуры слизи с состоянием половой охоты.

Таким образом, сравнивая данные электронного и светового мк-кроскопированпя можно отметить, что цервикальная слизь имев! вполне определенную и выракенную структуру. Но эта структура но является постоянной морфологической единицей. Она все время находится в состоянии перестройки, особенно в связи с циклическими изменениями в организме самки.

2.2.2. Результаты изучения реакций взаимодействия цервикальной слизи со спермиямя с учетом микроструктуры слизи

Изучение реакции сп.ерма+слизь с учетом микроструктур:: птзго-лилэ егябить BLipa;:;e;i:iy!3 зависимость в поведении спэрмиэп от сос-

тояния микроструктуры слизи.

При изучении пробы наблюдали разные по характеру взаимодей-

Реакция "проникновение" характеризовалась активным' проникновением спермяев в каплю слизи. Реакция "приближение" отличается от первой тем, что спермин подходили к границе слияния капель. Когда в пробе присутствие церзикалъной слизи не вызывало никаких изменений в поведения спермиев, я они свободно двигались в своей среде, не реагируя на слизь, реакцию назвали "нейтральная".

Пробу назвали петефационной от способности мукополисахари-дов цервикальной слизи формировать структуру и допускать проникновение спермиев в свою среду О - допускать проникновение).

Существует зависимость между реакциями петефационной пробы, сформировавшейся микроструктурой слизи и результатами осеменения коров (табл. I).

Таблица I

Сравнительная оценка между показаниями петефационной пробы, структурой слизи и результатами осеменения

Петефационная проба

Микроструктура сля,зи

сформировавшаяся

разрушенная

Рдзульдагы дсвманевдя

малыша

1-я

охота

2-я охота

бесплодные

"Проникновение"-"Приближение"

14

II

II

"Нейтральная"

Способность цервикальной слизи допускать проникновение спермиев зависит от ее микроструктуры, которая выражение коррелирует с показаниями петефационной пробы. Так, при показаниях петефационной пробы "проникновение"-"приближение" микроструктура слизи имела ячеистое строение в 86 % случаев. За счет этого обеспечивалось быстрое и беспрепятственное проникновение спермиев в слизь.

Осеменение коров дало высокий показатель по оплодотворяемости.

При "нейтральной" реакции пробы, микроструктура слизи была разрушена. В этом случае спермии не реагировали на цервякалъную слизь и не приближались к гра;:ице слияния капель.

Следовательно, необходимым условием для проникновения спер-мпез в слизь является соответствующая ее структура. То есть бесструктурная слизь не мокет содестзовать проникновению спермиев и транспорту их по проводящим половил путям коровы. Поэгоглу ;кибст-¡ше остались бесплодными.

Результаты производственной проверки пвте&эционной пробы в наибольшей степени показали необходимость ее выполнения перед искусственным осеменением коров (табл. 2).

Таблица 2

Результаты искусственного осеменения коров по показателям петешэционной пробы

Реакции петефа-ционная проба Осеменено Процент оплодотворяем. Доля оплодотворившихся Р-р Ошибка разности Критерий Щ

всего из них оплод.

"Проникновение" 38 33 87 0,86 0,04 0,030 1,33

"Приближение" 21 18 84 0,85 0,05 0,046 1,08

"Нейтральная" 19 2 10,5 0,10 0,8 0,19 4,52

(Р< 0,001).

Наиболее результативным искусственное осеменение оказалось при реакции петефационной пробы "проникновение" и"приближение" (87-84 ]',).

Значительно ниже этот показатель (10,5 %) был после осеменения коров при реакции пробы "нейтральная". Коровы (инв. >Ь 821, 1044, 572, 1081, 838, 1167, 617, 1067) проявляли признаки половой о;;эты через 30-60-00 дней после первого осеменения. Повторное осеменение при реакции пробы "приближение" оказалось результативным.

Таким образом, сравнивая результаты осеменения по реакциям

пробы "пронгкнов81шв"-"пр!1бл!иение" можно отметить, что они имеют практически одинаковую значимость и отражают готовность проводящих половых путей к приему, продвижению и сохранению спер-миев.

Реакция пробы "нейтральная" является показателем неподготовленности проводящих половых путей, то есть после неоднократного осеменения коров при такой реакции результат осеменения оказался низким. Значит осеменение было проведано до или после половой охоты. Разница между группами статистически достоверна (Р< 0,001).

В динамике изменений структурности "листа папоротника" и реакций пегефационной пробы существует некоторая закономерность.

При реакции пробы "цроникновенив"-"приближение" наблюдали характерный рисунок "листа папоротника". Но исчезновение кристаллизации в мазках цервикальной слизи не дает возможности судить о прекращении половой охоты, гак как процесс разрушения происходят медленно. При признаках разрушения кристаллизации в петефацаон-ноЕ пробе наблюдали еще реакцию "приближение".

Почти на всем протяжении проявления "рефлекса неподвижности" в мазках-отпечатках преобладали хорошо выраженные кристаллы в виде "листа папоротника". Но дальнейший переход "листа папоротника" в древовидный, при котором рекомендуется осеменение, трудно уловим.

При "нейтральной" реакции пегефационной пробы, в период течки, до проявления "рефлекса неподвижности", в поле зрения микроскопа отмечали начало кристаллизации, образование четырехугольников. Отчетливо виден почги прямой осевой стержень в виде креста, с отходящими от него боковыми ответвлениями. Позже осевой стержень становился удлиненным и появлялась характерная для феномена "листа папоротника" перистость. В то же время резких изменений в поведении спэомиев в цервикальной слизи по реакции сперма-«слизь -

на было.

В соответствии с данными опыта следует отметить, что мы не установили прямой зависимости феномена кристаллизации в ».'ззке цервикальной слизи и сменой ее структуры с сосгоэнием половой охоты.

2.2.3. Микроструктура цервикальной слизи и ее значение как защитного барьера матки на примере проныхае-мости условно-патогенной микрофлоры

йаявлена зависимость между показаниями пегефацяонной пробы и степенью проницаемости условно-патогенной микрофлоры через цер-викальную слизь.

Наличие сформировавшейся микроструктуры цервикальной слизи обеспечивало не только проникновение, продвижение спермиев в слизи, но и важную роль как защитного биологического барьера половой сферы.

В наших опытах было установлено, что при наличии реакции пе-гефационной пробы "проникновение"-"приближение" спермин преодолевают расстояние 5 см через слизь в среднем за 7-8 мин., максимум - за 10. При "нейтральной" реакции, отсутствие ячеистой структуры не способствовало продвижению спермиев через слизь.

Другие факторы установлены при смешивании капли слизи спермы с условно-патогенной микрофлорой. Интенсивность проникновения микробов через цервикальную слизь при различных показаниях пете-фашюнной пробы оказалась неодинаковой (табл. 3).

В большинстве случаев при реакции проба "пронякновение"-"при-ближение" кишечная палочка не способна преодолеть барьер цервикальной слизи (30 %). Проникновение протея также зависит от наличия структуры слизи. При наличии ячеистой структуры слизи (реакция пробы "проникнове1ше"-"прпбля;:;ение" микроб проникает в 20 случаев. При отсо тств.ы структуры реакция пробы "нейтральная",

Та б л.таз 3

Проницаемость царвикальной слизи для условно-патогенно!: ми-;;рофлори в зависимости от показаний петефационной пробы

Показания пете-фационной пробы Кишэч ка шя палоч- Протей Сянегноштя палочка

п ростД п ростД п ростД

"Пронякновение"-"приближение" . 20 6/30 20 4/20 20 _

"Нейтральная" 20 14/70 20 16/80 20 2/10

.препятствие для его прохождения через цервикальный барьер практически не существуют (80 %). Наиболее полно выражена защитная реакция слизи против сяпегнойной палочки. Возможность ее проникновения отмечена нами только в 10 % случаев (Р < 0,001).

Интенсивность проникновения микробов в цервикальную слизь и результаты осеменения связаны с разрушением ее микроструктуры слизи (рис. I).

100 90 80 Й 70

О

§ 60

со «

& 50 м

8 40

и

§ 30 ° 20 10

л

Петофадионная проба "нейтральная" "приближение"

"проникновение

э п ;:о до т воряе но ст ь

- проникновоннз условно— патогенной микрофлору черэз цедвякальпуэ слизь, 'р

Рис. I. Заытсгаосгь мол,ру показания.".«! вэгсчацдопной пробы, проницаемостью цершкалыюГ. слизи для кякро-бов а оп.'.одотворпемостью г.оров

В производственном опыте зависимость результатов искусственного осеменения коров спермой контаминированной условно-патогенной микрофлорой при разных показаниях пегефационной пробы оказалась существенной (табл. 4).

Таблица 4

Зависимость результатов искусственного осеменения коров от микробной контаминации спермы и показаний петефационной пробы

Реакция петефа-ционная проба Кишечная палочка Протей Синегнойная палочка

п из них п из них п

резуль-131 • « осем.Д не результат. 0С|М./ резулъ- тат- ш осем./% не pq зуль-таг. осем. % / резуль- гат • ш эсем./% не результат. осем./ %

"Проникновение"-"приближение" 3 2/67 1/33 3 1/33 2/61 3 3/100 —

"Нейтральная" 3 — 3 3 ■ 3 К — 3

Производственный опыт показал, что при осеменении коров контаминированной спермой: кишечной палочкой, протеем, синегнойной

палочкой при реакции пробы "проникновение"-:приближение" результативность осеменения коров оказалась соответственно 67, 33 и 100 %. Осеменение коров контаминированной спермой при реакции пробы "нейтральная" не только не было результативным, но у коров (инв. № 870, 1377, 986, 4) отмечали признаки воспаления половых органов.

Следовательно, чем точнее выбор срока осеменения коров, тем вы-ие результативность осеменения и нихе вероятность проникновения микрофлоры сквозь защитный биологический барьер.

ВЫВОДЫ

I. Выявлена корреляционная зависимость между состоянием половой охоты и формированием мукополисахаридной структуры дервикаль-нэй слизи коров. В период половой охоты цервикальная слизь характеризуется сформировавшейся структурой и является физиологическим показател&м готовности проводящих половых путей к приему сперму.

2. Ячеистое строение мукополисахаридных образовании слизи обеспечивает проникновение в нее сперииев.

3. Доказана возможность изучения микроструктуры цервикальной слизи методом светового микроскопирования. В сравнении с электронной микроскопией он является наиболее доступным, не требует особого режима подготовки препаратов, специальной аппаратуры, дефицитных красителей.

4. Предлохсен новый тест для определения сроков осеменения -петефационная проба. Метод основан на способности цервикалыюй слизи допускать проникновение спермиев в свою среду.

5. Взаимодействие спермиев с цервикальной слизью характеризуется реакциями: "проникновение" - спермин активно проходят границу слияния капель, насыщают слизь. Реакция "прнблш.тение" - движение спермиев ориентировано на слизь и они накапливаются на граница со слизью. Реакция "нейтральная" - спермин свободно двигаются

в своей среде, не реагируя на цервикальную слизь.

6. Результаты искусственного осеменения при реакзшх пробы "проникновение" и "приближение" соответственно составляют 87 % и 84 %. Микроструктура цервикальной слизи в этом случае сформировавшаяся и отражает состояние половой охпты.

Осеменение по показаниям реакции "нейтральная" результативно у 10,5 % самок. Микроструктура слизи не сформирована. Такое состояние регистрируется при отсутствии половой охоты.

7. Одаим из механизмов защитного барьера половой сферы, про-•пятствупций проникновению условно-патогенной микрофлоры, является сформировавшаяся структура мукополисахаридных соединений цервикальной слизи.

8.'При искусственном осеменении в период половой охоты (реакция пробы "проникновение"-"приближение") спермой, конгаминиро-ванной условно-патогенной микрофлорой, ячеистая структура церви-

кальной слизи препятствует проникновению кишечной палочки на 67 %, протея - на 33 %, синегнойной палочки - на 100 %.

9. При отсутствии сформировавшейся структуры цервикальной слизи (реакция петефационной пробы "нейтральная") через слизь проникает кишечная палочка в 70 %, протей - 80 %, синегнойная палочка - 10 % случаев.

10. При искусственном осеменении нельзя допускать введение спермы в тело и рога матки, минуя цервикальный защитны® барьер.

11. Осеменение торов по петефационной пробе сокращает расход спермы, что позволяет сэкономить спермодозы на сумиу II руб. 28 коп. в расчете на I голову маточного поголовья.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для уточнения сроков осеменения при визуальном способе выбора коров по "рефлексу неподвижности" в практике искусственного осеменения рекомендуем выполнять петефационную пробу. Осеменение проводить при наличии реакций пробы "проникновение" и "приближение".

2. Наши данные о значении структуры мукополисахаридных соединений слизи для определения оптимальных сроков осеменения коров могут быть включены в учебный материал по курсу акушерства, гинекологии и искусственного осеменения сельскохозяйственных животных для студентов сельскохозяйственных вузов, факультетов и курсов усовершенствования ветеринарных врачей и зооинженеров.

3. Для изучения микроструктуры цервикальной слизи в научных целях возможно использование методов световой микроскопии.

СПИСОК РАБОТ. ОПУБЛИКОВАННЫХ 110 ТИЛЕ ДИССЕРТАЦИИ:

I. Каргашова Г.Н. Определение ультраструкгуры цервикальной слизи методом светового микроскопирования // Информ.листок № 155-90, Мособл ЦНТИ-1990.

2. Карташова Г.Н. Патефацяонная проба - объективный метод выбора оптимального времени осеменения и оценки состояния проводящих половых путей коров и гелок // Вузовская наука - сельскохозяйственному производству. - Якутск, 1991. - С. 8-9.

3. Способ определения оптимального времени осеменения коров /Г.В.Казеев, А.В.Сгарченкова, Г.Н.Карташова (СССР) № 4705100/15 (81294); Приоритет 14.06.89; Признано предложенное техническое решение изобретением 29.11.90.

Подписано в печать 6.03.92 г. Т. - 100 экз. Формат 60x84/16. Печать офсетная. Усл.печ.л. 1,39. Уч.-изд.л. 1,19. Заказ * 65.

Типография ВШИЛО МВД И. 143900, г.Балашиха-6