Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Значение ассоциаций микроорганизмов в этиологии и профилактике инфекционных болезней конечностей крупного и мелкого рогатого скота

На правах рукописи

I

□030В32Э

ПАНАСЮК СЕРГЕИ ДМИТРИЕВИЧ

Значение ассоциаций микроорганизмов в этиологии и профилактике инфекционных болезней конечностей крупного и мелкого рогатого скота (некробактериоз, копытная гниль)

16 00 03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

г 4 МАЙ 2007

Москва - 2007

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средсгв для животных и кормов» (ФГУ «ВП1КИ») и на ФГУП «Ставропольская биофабрика»

Научный консультант доктор ветеринарных наук, профессор,

Лауреат премии Совета Министров СССР

А Л Сидорчук

Официальные оппоненты:

Доктор ветеринарных наук, профессор Каврук Леонид Сергеевич

Доктор ветеринарных наук, Заслуженный ветеринарный врач РФ,

профессор Мельник Николай Васильевич

Доктор ветеринарных наук Гнездилова Лариса Александровна

Ведущее учреждение: ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский

институт экспериментальной ветеринарии (ВНИИЭВ)им ЯР Коваленко

Защита диссертации состоится "__31__" мая 2007 г в "_10_" часов

"30"минут на заседании Диссертационного совета Д 220 011 01 в Федеральном государственном учреждении Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов (123022, Москва, Звенигородское шоссе, 5, ФГУ ВГНКИ)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ ВГНКИ Автореферат диссертации разослан "2-У "_O li_2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат ветеринарных наук, Заслуженный вет еринарный врач VQyfjf/ '

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Эпизоотологические данные последних лет подтверждают тот факт, что инфекционные болезни конечностей крупного рогатого скота (КРС) и овец занимают одно из ведущих мест в инфекционной патологии этих видов животных в Российской Федерации (РФ), где наибольшее значение имеют некробактериоз и копытная гниль (Архангельский ИИ идр, 1986, Лайшев АХ и др , 1966, Walker Р D et al, 1981) При болезнях конечностей пораженный орган постоянно контактирует с почвой и другими объектами окружающей среды, что приводит к его обильному обсеменению различной бактериальной флорой, к тому же одной из характерных особенностей анаэробных инфекций является одновременное ассоциативное воздействие на организм двух, трех и более видов анаэробных и аэробных микроорганизмов (Балтрашевич А К , 1979, Сидорчук А А и др , 2006, Katie RVet al, 1976)

Многочисленные исследования по изучению этиологии некробакте-риоза КРС, некробакгериоза и копытной гнили овец подтверждают большую роль сопутствующей микрофлоры, которая существенно осложняет течение болезни, что подтверждается данными отечественных и зарубежных исследователей (Самоловов А А , 1988, Сидорчук А А и др , 2004, Banting A de L etal, 1978)

Так, неоднократно было установлено, что помимо основных возбу-¡xmeneiifFusobacterium necrophorum, Dichelobacter (Bacteroules) nodosus) в этнологии некробактериоза КРС, некробактериоза и копытной гнили овец определенную роль играет гнойно-раневая микрофлора Clostridium perjringens тип A, Staphylococcus aureus, Actinomyces (Corynebacterium) pyogenes и другие, которые формируют микробные ассоциации в природе и организме ясивотных, усиливая своими ферментативными системами действие основных возбудителей и тем самым увеличивая вирулентность последних в десятки раз (Сидорчук А А и др , 1996, Gorbach S L , Bartlett J S , 1974, Robeits D S , 1967) Реальным подтверждением указанных фактов явилось создание в ряде зарубежных стран ассоциированных вакцин против инфекционных болезней конечностей сельскохозяйственных животных Pietimam, Pietivac (Франция), Памавак (Югославия) В то же время, в связи с созданием крупных откормочных и моточных комплексов для КРС, закупкой и перемещением по стране большого количества племенного скота проблема некробактериоза встала особенно остро Так, по данным Караваева ЮД (1999 2003), заболеваемость некробактериозом в 1991г составила 13,5% от всех случаев инфекционной патологии у данного вида животных, а в посчедую-щие годы сохранялась устойчивая тенденция к росту заболеваемости КРС некробактериозом Результаты исследования Архангельского ИИ и др (1986), Кононова АН (2001, 2004), Самоловова А А (1993, 1997, 1998), Си-дорчука А А идр (2002, 2003, 2006), Сукеева Ш С идр (1980, 1984) указывают на тот факт, что, несмотря на резкое снижение поголовья овец, некробактериоз и копытная гниль, как и раньше, являются одной из основных проблем в инфекционной патологии данного вида Так, в период с 1986 по 2003

гг ежегодная заболеваемость копытной гнилью и некробактериозом овец составляла до 190 тыс голов

Применение отечественных моновалентных вакцин против некробак-териоза КРС и копытной гнили овец не позволило полностью решить проблемы ликвидации некробактериоза и копытной гнили, хогя их использование позволяет значительно снизить заболеваемость животных В связи с вышеизложенным, конструирование вакцин против инфекционных болезней конечностей КРС (некробактериоз) и овец (некробактериоз и копытная гниль) на основе ассоциации анаэробных микроорганизмов (Fusebacterium necrophorum и Dichelobacter nodosus) и гнойно-раневой микрофлоры позволит более надежно профилактировать указанные болезни

Цель работы. Целью настоящих исследований было выяснение роли и значения ассоциаций анаэробных микроорганизмов F necrophorum и D nodosus и представителей гноино-раневой микрофлоры в этиологии, патогенезе и профилактике инфекционных болезней конечностей КРС и овец, а также обоснование создания нового поколения средств специфической профилактики этих болезней

Задачи исследований.

1 Изучить особенности эпизоотологии некробактериоза крупного рогатого скота, некробактериоза и копытной гнили овец в различных зонах Российской Федерации и Республики Киргизия,

2 Выяснить видовой спектр микроор1 анизмов при болезнях конечностей крупного рогатого скота и овец

3 Изучить биологические свойства изолятогов и провести отбор штаммов для конструирования ассоциированных вакцин,

4 Экспериментальным путем подтвердить значение ассоциаций микроорганизмов в инфекционной патологии конечностей крупного рогатого скота и овец,

5 Изучить иммунный ответ при применении ассоциированных вакцин, определить возможность конкуренции антигенов в организме животных, привитых ассоциированными вакцинами и разработать схемы их применения,

6 Разработать методы контроля и промышленную технологию изготовления ассоциированных вакцин,

7 Испытать эффективность ассоциированных вакцин в лабораторных и производственных условиях

Научная новизна. Установлены особенности эпизоотологии и клинического проявления инфекционных болезней конечностей КРС (некробактериоз) и овец (некробактериоз, копытная гниль) в различных природно-климатических зонах Российской Федерации и в Республике Киргизия Определен видовой спектр микроорганизмов при инфекционных болезнях конечностей КРС и овец Установлена и экспериментально подтверждена роль гнойно-раневой мш< рофлоры в ассоциации с анаэробными микроорганизмами F necrophorum и D nodosus в этиологии и патогенезе инфекционных болезней конечностей

Впервые в Российской Федерации разработаны и испытаны с положительными результатами две инактивированные ассоциированные вакцины против некробактериоза конечностей КРС (запатентованные названия "Неко-вак", "Нековак-стимул", патент N 2098127 от 10 12 1997г) и инактивирован-ная ассоциированная вакцина против инфекционных заболеваний конечностей овец (запатентованное название "Овикон", патент N 2098128 от 10 12 1997г ) Вакцины зарегистрированы Департаментом ветеринарии МСХ и П РФ На препараты получены сертификаты соответствия

Разработаны методы контроля вакцин, промышленная технология их изготовления, методы оценки иммунитета у вакцинированных животных и схемы применения вакцин в неблагополучных хозяйствах, а также система мер по борьбе с некробактериозом и копытной гнилью

Теоретическая и практическая значимость работы. Впервые в Российской Федерации разработаны и внедрены в производство инактивированные ассоциированные вакцины против некробактериоза конечностей КРС - "Нековак" и "Нековак-стимул", и инфекционных заболеваний конечностей овец - "Овикон" Серийный выпуск препаратов с 1995г налажен на Ставропольской биофабрике

Материалы разработки вошли в "Правила по профилактике и ликвидации некробактериоза животных", утвержденные Департаментом ветеринарии МСХ и П РФ 11 07 2000 г №ВП 13 4 1313-00

Материалы диссертации вошли также в рекомендации "Диагностика, профилактика и меры борьбы при некробактериозе крупного рогатого скота" Рекомендации одобрены Департаментом ветеринарии МСХ и П РФ 21 02 2000 г, и в "Методические рекомендации по профилактике и борьбе с копытной гнилью овец", утвержденные РАСХН 22 марта 2004 г

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на заседаниях Ученого совета ВНИИЭВ им Я Р Каваленко (1989-1991), заседаниях Ученого совета ФГУ ВГНКИ в 1992-2003 гг , заседании пленума секции паразито-ценологии АН СССР (г Витебск,1988), на Всесоюзной научной конференции "Совершенствование методов государственного контроля ветеринарных препаратов" (г Москва, 1991) на заседании Государственной межведомственной комиссии по испытанию ветбиопрепаратов при Департаменте ветеринарии МСХ и П РФ в 1993 году, на заседании научно-проблемной методической комиссии по контролю и стандартизации биопрепаратов, применяемых при бактерийных и грибковых болезнях животных (ФГУ ВГНКИ, 1995), на Всероссийской научной конференции, посвященной 70-летию факультета ветеринарной медицины Воронежского государственного аграрного университета им КД Глинки (г Воронеж, 1996), на заседании Ветфармбиокомиссии при Департаменте ветеринарии МСХ и П РФ (1997); на Международной конфереции, посвященной 30-летию Прикаспийского ЗНИВИ (i Махачкала, 1997), на методической и научной конференции МГАВМиБ ( г Москва, 2001), на Международной конференции ветеринарных специалистов по борьбе с инфекционными заболеваниями с/х животных (Республика Болгария, г Апрельцы, 2003)

Основные положения, выносимые на защиту:

- Результаты изучения особенностей эпизоотологии и клинического проявления инфекционных болезней конечностей КРС и овец в различных природно-климатических зонах Российской Федерации и Республики Киргизия

- Результаты изучения видового спектра микроорганизмов при инфекционных болезнях конечностей крупного и мелкого рогатого скота и биологических свойств выделенных изоляюв

- Теоретическое обоснование разработки инактивированных ассоциированных вакцин против некробактериоза крупного рогатого скота "Неко-вак" и "Нековак-стимул" и против инфекционных заболеваний конечностей овец "Овикон"

- Промышленная технология изготовления ассоциированных вакцин "Нековак" и "Овикон"

- Практическая эффективность вакцинации крупного рогатого скота против некробактериоза и овец против инфекционных болезней конечностей при применении ассоциированных вакцин

- Оценка некоторых факторов клеточного и гуморальною иммунитета при применении ассоциированных вакцин

- Система применения ассоциированных вакцин "Нековак" и "Нековак-стимул" и «Овикон» в неблагополучных хозяйствах

Публикации По материалам диссертации опубликовано в печати 48 научных работ в различных изданиях, в которых изложены основные положения и выводы по изученным вопросам, в том числе 2 монографии ,2 патента РФ на изобретения и авторское свидетельство №1835295

Объем и структура диссертации. Диссертация написана на 430 страницах компьютерного текста и состоит из следующих разделов введения, литературного обзора, материалов и методов исследований, результатов исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и содержи! 67 таблиц, 4 графика. 17 фотографий Список литературы включает 517 отечественных и зарубежных источников Приложение к диссертации в объеме 40 страниц содержит документацию, подтверждающую диссертационный материал

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы исследований

Исследования выполнены в 1988-2004 годах в лаборатории по изучению болезней овец ВНИИЭВ, в лаборатории молекулярной биологии и биотехнологии ВНИИЭВ им Я Р Коваленко, на кафедре эпизоотологии МГАВ-МиБ им К И Скрябина, в лаборатории контроля и стандартизации препаратов против анаэробных инфекций ФГУ ВГНКИ, в неблагополучных по нек-робактериозу крупного рогатого скота и инфекционным болезням конечностей овец хозяйствах Российской Федерации и Республики Киргизия, на ФГУП «Курская» и ФГУП «Ставропольская биофабрика» В работе были использованы данные ветеринарной отчетности областных ветеринарных лабо-

раторий, краевого управления ветеринарии МСХ Ставропольского края и Киргизской республиканской ветеринарной лаборатории

При проведении экспериментов были использованы лабораторные животные, овцы и крупный рогатый скот Всего в исследованиях и экспериментах было использовано 1192 белых мыши, 60 морских свинок, 451 кролик, 24174 овцы, 18279 голов крупного рогатого скота

Эпизоотологические исследования по заболеваемости крупного рогатого скота некробактериозом и его клиническому проявлению были проведены в И хозяйствах 5 областей Центральной России на 10082 головах КРС, в 4 хозяйствах 4 районов Ставропольского края на 1481 голове КРС, в 3 хозяйствах 2 районов Республики Киргизия на 2017 коровах Эпизоотологические исследования по заболеваемости овец некробактериозом и копытной гнилью были проведены в 3 хозяйствах 3 областей Центральной России на поголовье 2190 овец, в 7 хозяйствах Ставропольского края на поголовье 10646 овец, в 3 хозяйствах Республики Киргизия на поголовье 3246 овец

В экспериментальных исследованиях было использовано 213 проб патологического материала от крупного рогатого скота и 321 проба патологического материала от овец из указанных регаонов России и Республики Киргизия Выделение и идентификацию микроорганизмов из патологического материала, изучение биологических свойств выделенных и музейных культур проводили на базе лабораторий по изучению болезней овец и микробиологии ВНИИЭВ им Я Р Коваленко, Ставропольской НИВС и КиргНПОЖ, лаборатории контроля и стандартизации препаратов против анаэробных инфекций ФГУ ВГНКИ В исследованиях использовали методики Глотовой ЕВ (1935), Ваксмана ЗА (1942,1947), Каган ФИ (1937, 1938), определителя бакгерий Берги (1974,1981,1986), Лабинской АС (1978), методические рекомендации «Лабораторные методы диагностики иекробактериоза сельскохозяйственных животных» (1987), Архангельского ИИ и др (1976, 1979, 1981, 1982, 1986, 1987, 1991;, Бекгимирова М А (1979, 1981), Сидорчука А А и др (1980, 1987, 1994, 1996, 1998, 2001), Семеновой И Н (1981, 1988) и другие, а также, данные областных ветлаборагорий центральной нечерноземной зоны РФ, Ставропольской краевой ветлаборатории, Киргизской республиканской ветеринарной лаборатории

В работе исследовали к>льтурально-морфологические , биохимические, токсигенные и патогенные свойства культур микроорганизмов В результате были описаны свойства 17 штаммов F necrophorum, 5 штаммов С perfringens т А, 8 штаммов St aureus, 15 штаммов A pyogenes, 7 штаммов D nodosus

Изучение патогенных свойств указанных штаммов проводили на И 92 белых мышах, 60 морских свинках, 451 кролике и 21 овце Для экспериментального подтверждения значения ассоциаций микроорганизмов в этиологии болезней конечностей было использовано 48 кроликов и 18 овец, при этом животных заражали как монокультурами, так и ассоциациями указанных микроорганизмов С целью определения оптимальных соотношений антигенов для конструирования ассоциированных вакцин были приготовлены инак-тивированные формалином антигены F necrophorum, S aureus, A pyogenes,

D nodosus в концентрациях 10, 20 и 40 млрд микробных клеток в мл, которыми иммунизировали 36 овец По уровню гуморальных антител подбирали оптимальные концентрации для составления опытных серий ассоциированных вакцин Изучение конкуренции антигенов проводили на 30 овцах, которых привили моновакцинами из указанных штаммов, а так же из штамма С perfringens т А на ГОА адъюванте и экспериментальной ассоциированной вакциной из тех же штаммов в той же подобранной ранее концентрации на ГОА адъюванте О наличии или отсутствии конкуренции антигенов судили по величине титров специфических агглютининов привитых овец

Постановку РА и учет ее результатов с каждым из антигенов проводили в соответствии с методикой «Определение уровня антител против копытной гнили в сыворотке крови овец с помощью реакции агглютинации», утвержденной ВАСХНИЛ 2 04 1984 г С валентностью С perfringens т А ставили реакцию нейтрализации

Опытные образцы инакт ивированных ассоциированных вакцин против инфекционных заболеваний конечностей овец «Овикон» и некробактериоза конечностей КРС «Нековак» и «Нековак-стимул» готовили в лаборатории контроля и стандартизации анаэробных препаратов ФГУ «ВГНКИ»

Опытные серии инактивированной ассоциированной вакцины «Овикон» были испытаны в 2 овцеводческих хозяйствах Центральной России на 956 овцах Опытные серии ассоциированных «Нековак» и «Нековак-стимул» были испытаны в 3 хозяйствах Центральной России на 1760 головах КРС Об эффективности препаратов судили по снижению заболеваемости животных и величине титров гуморальных антител

Разработка методов контроля была проведена на 80 белых мышах, 72 кроликах, 20 овцах и 20 головах КРС

Основные параметры иммунитета при применении инактивированных ассоциированных вакцин «Нековак», «Нековак-стимул», и «Овикон» изучали на опытно промышленных сериях этих препаратов С этой целью на ФГУП Курская биофабрика после согласования вопросов технологии в 1994-1995 г г было изготовлено по одной опытно-промышленной серии вакцин «Нековак» и «Овикон» общим объемом 45000 доз В период 1994-1996 на ФГУП «Ставропольская биофабрика» было выпущено 3 опытно- промышленных серии вакцины «Нековак», общим объемом 875 литров (175000 доз) и 4 серии вакцины «Овикон» общим объемом 1118,6 литра (223720 доз) Испытание опытно-промышленных серий вакцины «Нековак», «Нековак-стимул» провели в 3 неблагополучных по некробактериозу КРС хозяйствах 2 областей Центральной России на 874 коровах, вакцины «Овикон» в ГПЗ «Котовский» Рязанской области на 1234 овцах Во всех экспериментах определяли динамику заболеваемости инфекционными болезнями конечностей у привитых и контрольных животных Показатели гуморального иммунитета оценивали в_ РА по накоплению специфических агглютининов у привитых животных

Основные показатели клеточного иммунитета оценивали путем определения иммуноглобулинов классов М и G, Т- и В- лимфоцитов и фагоцитарной активности лейкоцитов Уровень иммуноглобулинов классов М и G

определяли по методу Манчини и др (1963,1970) в модификации Фехей и Мак-Келви (1965, 1983) Популяции Т-лимфоцитов определяли в реакции спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана, В-лимфоцитов -комплементарного розетко-образования с эритроцитами, содержащими активированные компоненты комплемента согласно «Методическим рекомендациям по биохимическим и иммунохимическим методам исследования клеток, их компонентов и других биологических субстратов» (1980) Фагоцитарную активность лейкоцитов определяли по общепринятой методике постановкой опсоно-фагоцитарной реакции (ОФР) по следующим показателям фагоцитарная активность (ФА), фагоцитарное число (ФЧ) и фагоцитарный индекс (ФИ) (ФримельХ ,1979)

Испытание промышленных серий инакгивированных ассоциированных вакцин «Нековак», «Нековак-стимул» провели в 4 неблагополучных по некробактериозу КРС хозяйствах 3 областей Центральной России на поголовье 2065 коров Испытание эффективности промышленных серий вакцины «Овикон» провели в 3 овцеводческих хозяйствах Ставропольского края, не-бла1 оиолучных по копытной гнили и некробактериозу на 5845 овцах

У привитых животных оценивали динамику заболеваемости конечностей и уровень гуморальных антител в РА Одновременно в 4 хозяйствах, из 6 указанных, вместе с вакцинацией применили комплекс организационно-хозяйственных и лечебно-профилакшческих мероприятий, направаенных на ночное оздоровление хозяйств от инфекционных болезней конечностей

Результаты экспериментов подтвердили вариационно-статистической обработке по программе Рпте1 оГ Вк^айчПсз (Уешоп 4 03) Результаты исследовании так же были обработаны по методу Ашмарина И11 и Воробьева А А (1962), при этом вычисляли среднеарифметические значения титров агглютининов и процентов заболевших вакцинированных и контрольных животных, достоверную разность Р но к" между заболевшими животными в вакцинированных и контрольной группах, коэффициент корреляции ( г ) между средними титрами агглютининов и процентом заболевших животных, квадратичное отклонение (а) полученных экспериментальных данных

2.2. Результаты исследовании.

2.2. Эпизоотология и клиническое проявление некробактерноза крупного рогатого екота, некробактерноза и копытной I нили овец в различных природно-климатических зонах.

На основании результатов проведенных исследований, была описана клиническая картина болезней конечностей, условия распространения, пути передачи инфекций и влияние предрасполагающих факторов, а также установлены некоторые общие закономерности проявления инфекционных болезней конечностей у КРС и овец в различных природно-климатических зонах Так, значительному распространению этих эпизоотий способствовала продажа племенных животных, среди которых имелись хронически больные животные, которые становились источником распространения инфекции Хотя возбудитель некробактерноза анаэробный нсспорообразующий микроорганизм РичоЬайепиш песгорЬошт является убиквитарным, случаев спошан-

ного возникновения некробактериоза в хозяйствах нами не отмечалось При попадании в животноводческие хозяйсгва, ранее благополучные по некро-бактериозу и копытной гнили, хозяйства становились стационарно-неблагополучными по этим инфекциям, так как основные возбудители инфекций могут годами сохраняться в структурах копытного рога и обеспечивать случаи рецидивов болезни

Инфекционным болезням конечностей были подвержены все половозрастные группы животных, однако наиболее тяжело болели быки и бараны-производители, овцематки старше трех лет, высокоудойные коровы и коровы после отела, что, вероятнее всего связано с нарушением обменных процессов у животных, приводящим к структурным нарушениям копытного рога Это делало животных более чувствительными к воздействию предрасполагающих факторов и приводило к травматизму копыг Молодые животные до 3-4, реже 6-месячного возраста, мало восприимчивы к инфекционным болезням конечностей, что во многом определяется состоянием их копыт

Заболеваемость КРС некробактериозом во всех хозяйствах колебалась в широких пределах Наибольшей она была в хозяйствах Центральной России от 11,6 до 83,0% Наименьшей в хозяйствах Ставропольского края от 1,0 до 17,6% В хозяйствах Республики Киргизия заболеваемость некробактериозом КРС составила 6,5-20,3%

У овец заболеваемость конечностей некробактериозом и копытной гнилыо также варьировала в широких пределах Наибольшей она была в хозяйствах Республики Киргизия от 8,0 до 86,0%, несколько меньшей в хозяйствах Центральной России от 30,0 - 52,0% и Ставрополья - от 3,6 до 38,1 %

Во всех природно-климатических зонах инфекционные болезни конечностей крупного и мелкого рогатого скота имели два сезонных пика распространения зимне-весенний и летне-осенний, что связано с действием предрасполагающих факторов внешней среды

Клиническое проявление инфекционных болезней конечностей у КРС и овец также зависело от условий содержания, кормления и факторов внешней среды и от состава складывающейся патогенетической ассоциации, вызывающей болезни конечностей

Так, заболевание КРС некробактериозом в хозяйствах Центральной России имело подострое и хроническое течение Поражения локализовались, в основном, в области межкопытной щели, при этом отмечали покраснение и отек кожи и окружающих тканей На месте поражения отмечали наличие эрозий и язв с неровными краями в виде валика, покрытых экссудатом Отмечали повышение местной температуры и болезненность конечностей Животные были угнетены, опирались на зацеп больной конечности или держали ее на весу В отдельных случаях отмечали наличие абсцессов в области венчика, некроз связок и сухожилий, наличие свищей Все это вызывало синдром хромоты Реже наблюдали генерализованные формы некробактериоза с поражением связок, костей и наличием абсцессов в области суставов, а также некротических поражений и абсцессов во внутренних органах У некоторых коров в колхозе «им Ленина» Ухоловского района Рязанской области реги-

стрировали некротические поражения на вымени и коже нижней части тела Такие животные не подлежали лечению и выбраковывались

В условиях Ставропольского края заболевание КРС некробактериозом характеризовалось, в основном, поражением конечностей, при этом отмечали наличие язв в области пяточных частей межкопытной щели, реже абсцессы и свищи в области венчика В отдельных случаях отмечали воспаление запястного и заплюсневог о суставов, гнойные тендовашииты и бурситы Пораженные конечности были сильно отечными и болезненными В покос больную конечность животные держали слегка приподнятой При движении больных животных проявлялась прогрессирующая хромота.

Изучение клинического проявления некробактериоза КРС в хозяйствах Республики Киргизия позволило установить тот факт, что первичные поражения локализовались преимущественно на коже и подкожной клетчатке межкопытной щели, а также в области венчика и сгибательной поверхности пута в виде влажной эрозии с небольшим отеком и экссудатом с неприятным запахом В начальной стадии болезни наблюдали эрозии кожи с ворсистой поверхностью в области межкопытной щели, а также гиперплашо тканей в виде валика, копытный рог был разросшимся, изъязвленным, рыхлым

В некоторых случаях отмечали более глубокие поражения в области мягких тканей конечностей с наличием свшцеи и затоков под копытным рогом а также абсцессов в области венчика копыта В этот период животные были угнетены, у них повышалась температура тепа до 40°С и выше, терялся аппетит, резко снижались удои Пораженные конечности были отечными, местная температура повышена, в области поражения наблюдалась сильная болезненность, развивался синдром хромоты

Наблюдали также поражения суставов, гнойные тендовагиниты и бурситы, отслоение копытного рога, то есть под1верждается мнение многих исследователей, что заболевание некробактериозом КРС по клиническим признакам имеет насколько форм (стадий, степеней) проявления

В хозяйствах Республики Киргизия отмечали также отдельные случаи некротических поражений (дифтеришческих воспалении) слизистых оболочек роговой полости телят Заболевание, как правило, было связано с травматизмом слизистых оболочек ротовой полости грубыми кормами, протекало остро и характеризовалось повышением температуры тела до 40°С, и выше, общим угнетением животных и отказом от приема корма, зловонным слюнотечением В ротовой полости на слизистой оболочке, а также на языке и деснах, отмечались серо-белые и с желтым оттенком дифтеретические пленки, после снятия которых наблюдались кровоточащие изъязвления У павших телят отмечали также некротические поражения внутренних органов

При изучении инфекционных болезней конечностей овец в хозяйствах Центральной России у животных отмечалось поражение одной или значительно реже двух конечностей, чаще передних У ягнят возрастом до 6 месяцев практически не наблюдалось клинических проявлений копытной гнили Более выраженное, по сравнению с овцематками, проявление инфекции (чаще с поражением задних конечностей) отмечено у баранов-производителей

Заболевание имело ярко выраженный сезонный характер Клиническая картина болезней конечностей у овец характеризовалась гнойным воспалением кожи свода межкопытной щели Отмечали ее облысение, покраснение, наличие эрозий, покрытых серовато-белым ихорозным экссудатом В отдельных (единичных) случаях отмечали поражение основы кожи пяточных частей внутренних стенок копытец и основы кожи подошвы с отслоением рогового башмака Все это вызывало синдром хромоты

В ГПЗ «Котовский» и совхозе «Мир» отмечали единичные случаи абсцессов в области венчика копыта и воспаление копытцевых и венечных суставов, чаще у баранов, то есть несколько клинических форм болезни

В условиях Ставропольского края по нашим данным, чаще болеют овцы, чем бараны, однако, у баранов-производителей заболевание протекает более тяжело Среди ягнят до 3-4 месячного возраста даже при совместном содержании с больными овцематками копытную гниль регистрировали в единичных случаях По нашему мнению, этот факт связан с эластичностью копытного рога ягнят, отсутствием трещин и заломов копыт и отсюда меньшей подверженностью влияния предрасполагающих факторов внешней среды

В двух маточных отарах ОПХ ВНИИОК «Темнолесский» и одной отаре колхоза «им Войтика», отмечено очень тяжелое клиническое проявление болезней конечностей овец (злокачественная форма), которое характеризовалось поражениями не только в области копытец с отслоением роговою башмака, но и наличием язв и свищей в области венчика, путового сустава, наличием гнойных тендовагинитов и бурситов Конечности животных с такими поражениями были отечными, местная температура повышена, животные на такие конечности не опирались, держали их на весу В этих отарах у новорожденных и ягнят до 3-месячного возраста были отмечены случаи некротических поражений слизистой оболочки ротовой полости Очевидно, в указанных хозяйствах имело место инфекционное заболевание конечностей овец, вызыванное ассоциацией микроорганизмов, что впоследствии подтвердилось микробиологическими исследованиями патматериала и постановкой биопробы на лабораторных животных

В Республике Киргизия среди ягнят до 3-месячного возраста заболеваний конечностей не наблюдалось даже в период массовой заболеваемости маток, несмотря на круглосуточное совместное содержание ягнят с больными матерями Минимальная заболеваемость конечностей наблюдалась у ярок и валухов старше десятимесячного возраста, что вероятнее всего связано с условиями содержания и кормления У животных отмечали поражение одной, реже двух или трех конечностей, как и в хозяйствах Центральной России и Ставрополья, так и в хозяйствах Киргизии у овец чаще поражались передние конечности, а у баранов-производителей - задние Инфекционные болезни конечностей имели хроническое течение, однако начало заболевания всегда было острым, а затем процесс принимал хронический характер

У заболевших животных в Республике Киргизия отмечено несколько клинических форм проявления болезней конечностей В начальной стадии животные беспокоились, поднимали и облизывали больные ноги, при движе-

шш животных отмечалась слабо выраженная хромота При осмотре больных конечностей в области межкопытной щели наблюдали гиперемию кожи свода межкопытной щели, отечность и выпадение волос, повышение местной температуры Это легкая форма проявления заболеваний конечностей

При средней степени поражения конечностей животные были угнетены, выявлялась сильно выраженная хромота при движении, в покое овцы держали пораженные конечности на весу, ползали при поражении обеих передних ног на карпальных суставах или лежали Больные конечносги были отечны и болезненны, повышена местная температура При осмотре в области пораженных конечностей отмечалась резко выраженная гиперемия, наличие эрозий, покрытых серовато-белым гнойным налетом со специфическим, неприятным запахом При наблюдении за больными животными в некоторых случаях отмечался некроз внутренних стенок рогового башмака и подошвы Отмечалось также неправильное разрастание и деформацич копытного рога При тяжепой степени поражения конечностей животные были сильно угне-1ены, чаще лежали, отмечали повышение общей температуры тела При осмотре больных конечностей наблюдали сильную отечность, гиперемию, наличие эрозий и язв с гиперплазиеи тканей в виде валика, покрытым сероватым ихорозным экссудатом Отмечали наличие свищей и язв в области венчика, в особо тяжелых случаях - поражение карпальных и скакательных суставов При этом роговые ткани внутренних стенок копыта и подошвы были некротизированы и расплавлены, вызывали отслоение рогового башмака Такую степень инфекционных поражений конечностей овец наблюдали более чем у 50% заболевших животных в маточных отарах в сезон массового распространения болезней конечностей при наличии предрасполагающих факторов внешней среды после выпаса этих отар на пастбищах, где ранее выпасали стада крупного рогато! о скота, неблагополучные по некробактериозу

В перечисленных хозяйствах Чуйской долины Республики Киргизия среди япшт весной (март-май) и осенью (сентябрь-октябрь) наблюдали две вспышки некробактериоза лицевой части головы, слизистых оболочек губ и ротовой полости Первая (весенняя) вспышка наблюдалась в период окота среди новорожденных ягнят, вторая (осенняя) - после отбивки ягнят при формировании новых отар из приплода текущею года Заболевание ягняг было связано с травматизмом слизистых оболочек и кожных покровов лицевой части головы Клинически заболевание проявлялось появлением на пораженных участках слизисюй губ и рта везикул, наполненных жидкостью, которая выливалась, а затем подсыхала Вокруг рта обраювывалась серая корка, лицевая часть головы и хубы сильно отекали, были очень болезненны, при отпадении корок обнажалась изъязвленная кровоточащая поверхность При поражении слизистых оболочек рта, десен, языка отмечалось наличие серо-желтых бляшек, изо р1а выделялась пенистая тягучая слюна с гнилостным запахом и крошковатыми массами, из носовых отверстий также выделялся зловонный секрет, содержащий грязно-желтые крошковатые массы Животные были сильно угнетены, отставали от отары или лежали, у них повышалась температура тела и при отсутствии лечения наступала гибель У

павших ягнят при вскрытии отмечали некротические поражения гортани, трахеи, а также некротические поражения и абсцессы в легких и печени Весьма примечательным обстоятельством в указанные сезоны года было одновременное появление вспышек у ягнят вирусной эктимы и некробактерио-за, что подтверждалось исследованиями Республиканской ветлаборатории Очевидно, что вирус эктимы «открывал ворота» размножения возбудителя некробактериоза и других секундарных инфекций

Проведенные клинико-эпизоотологические исследования позволили подтвердить общие закономерности развития эпизоотического процесса инфекционных болезней конечностей крупного и мелкого рогатого скота и отметить некоторые особенности его зонального проявления

2.3. Выделение, изучение биологических свойств и идентификация микрофлоры из пораженных конечностей при некробактериозс крупного рогатого скота, некробактериозе н копытной гнили овец.

На втором этапе исследований был проанализирован видовой спектр микроорганизмов, участвующих в развитии патологического процесса инфекционных болезней конечностей КРС и овец Патологический материал для исследований был получен из хозяйств Московской, Рязанской, Тверской, Тульской, Костромской и других областей Российской Федерации, Ставропольского края и Республики Киргизия

Обобщенные результаты исследований всех проб патологического материала иллюстрирую 1 табл 1 и 2, где суммарно, по частоте их выделяемо-С1и, показаны все представители патогенной, условно-патогенной и сапрофитной микрофлоры, которые удалось идентифицировать в патологическом материале в процентном соотношении к общему числу исследованных проб

Сравнительный анализ полученных результатов позволяет констатировать тот факт, что в указанных регионах из пораженных конечностей овец постоянно выделяли несколько групп микроорганизмов В (69-82% случаев) изолировали споровый почвенный микроорганизм С perfringens тип А (присутствующий в инфицированных ранах, один из основных возбудителей газовой гангрены человека и энтеротоксемии животных) и возбудитель копытной гнили овец D nodosus (72-79%) случаев В связи с трудностью его выделения в большинстве случаев для диагностики заболевания и идентификации D nodosus использовали феномен «Бевериджа» В эту группу также включили возбудитель некробактериоза F necrophorum (9-39% случаев)

Вторую большую группу микроорганизмов, постоянно выделяемых при инфекционных болезнях конечностей, составили пиогенные кокки Streptococcus pyogenes (31-43%случаев), Staphylococcus aureus (26-42% случаев), Actinomyces pyogenes (9-12% случаев), а также представители родов Pepto-coccus, Peptostreptococcus, Enterococcus

В третью группу микроорганизмов, постоянно изолируемых из пораженных копыт, вошли условно-патогенные и сапрофитные бактерии, такие как Escherichia coli (28-38% случаев), Proteus vulgaris (20-33% случаев), Prevotella melaninogemcus (1-6% случаев) и микроорганизм Bacteroides fragillis, часто присутствующий в гнойных ранах человека и животных

Остальные микроорганизмы, за исключением Clostridium septicum, выделялись непостоянно, при этом был отмечен тог факт, чю из пораженных конечностей овец в Ставропольском крас и Республике Киргизия чаще выделяли споровые микроорганизмы, чем из пат ма териала от овец Центральной России Поэтому постоянно выделяемый в небольших количествах Clostridium septicum, почвенный споровый микроорганизм, один из возбудителей газовой гангрены, брапзота и злокачественного отека (4—12 % случаев), а также спорадически выделяемые споровые микроорганизмы Clostridium perfrin-gens типов С и D, Clostridium oedematiens и Bacillus cereus были условно отнесены в четвертую группу

Подобный, во многом сопоставимый с результатами исследований патматериала от овец, видовой спектр микроорганизмов наблюдался и при пекробакгериозе КРС Обобщенные результаты исследований пораженных конечностей КРС из тех же трех выше перечисленных регионов представлены в таблице 2

Из данных таблицы 2, следует, что весь спектр микроорганизмов, выделенных из патматериала и идентифицированных при некробактериозе конечностей КРС, можно условно разделить на несколько групп

В первую группу вошли наиболее часто выделяемые микроорганизмы Clostridium perfrmgens т А (68-75% случаев) и возбудитель некробакгериоза КРС Fusobacterium necrophor um (63-71 % случаев)

Во вторую группу, как и при болезнях конечностей овец, вошли наиболее часто выделяемые ниогенные микроорганизмы Streptococcus pyogenes (24-42%случаев), Staphylococcus aureus (18-28% случаев), Actinomyces pyogenes (9-15% случаев), Pseudomonas aeruginosa (3-9% случаев)

Представителями третьей группы гак же, как и при инфекционных заболеваниях конечностей овец, являлись условно-патогенные и сапрофитные микроорганизмы Escherichia сок (36-43% случаев), Protein vulgaris (16-24% случаев) К этой группе моиш быть отнесены непостоянно выделяемые представители родов Propionibacterium, Prevotella, Evbactermm, Flavobacterium, а 1акже Bactet о ides fiagilhs

Четвертую фуппу составили споровые микроорганизмы постоянно выделявшиеся в малых количествах Clostridium septicum (6 — 10 % случаев), непостоянно выделявшиеся Clostridium oedematiens, Bacillus cereus, Bacillus subtihs При эюч споровые микроорганизмы из патматериала от КРС и овец, чаще выделяли в Ставропольском крае и в Республике Киргизия Проведенные исследования позволили констатировать факт наличия широкого спектра видов микроорганизмов, участвующих в патогенезе инфекционных ботезней конечностей овец и КРС, что подтверждает данные многих ученых (Самоловов А А , 1988, Балабанов В А , 1971, Гришаев НЕ , 1971, Сидорчук А А и др 1999, 2006) о важной роли микробных ассоциаций в этиопогии некробак-териоза крупного рогатого скота, некробактериоза и копытной гнили овец Они также позволяют несколько иначе посмотреть на этиологию и патогенез некробактериоза крупного и мелкого рогатого скот и копытной гнити овец

Результаты исследований патологического материала от овец, взятого из хозяйств Центральной России, Ставропольского края и Республики Киргизия

№ п/п Идентифицированные микроорганизмы % от числа исследованных проб

1 Clostridium perfhngens т А 69-82

2 Dichelobacter (Bacteroides) nodosus 72-79

3 Streptococcus pyogenes 17-43

4 Staphylococcus aureus 36-42

5 Escherichia coll 28-38

6 Fusebacterium necrophorum 9-39

7 Proteus vulgaris 20-33

8 Actinomyces (Corynebacterium) pyogenes 10-12

9 Klebsiella pneumoniae 10

10 Treponema spp 9

11 Peptostreptococcus anaerobius 8

12 Enterococcus 7-8

13 Prevotella (Bacteroides) melamnogenicus 1-6

14 Clostridium perfringens т С 2-5

15 Clostridium septicum 4

16 Clostridium oedematiens 3-4

17 Clostridium perfringens т D 3

18 Bacteroides fiagihs 2-3

19 Bacillus cereus 2-3

20 Arachnia propionicus 2

21 Flavobactenum spp 1

22 S arc ma spp 1

Результаты исследовании 213 проб патологического материала от крупного рогатого скота, взятого из хозяйств Центральной России, __Ставропольского края и Республики Киргизия_

№ п/п HqeHTHij)iiUHpoBaHHi>ie MHKpooprainnMM % от числа исследованных проб

1 Clostridium perfringens t A 68- 75

2 Fusebacterium necrophorum 63-74

3 Escherichia coll 17-43

4 Streptococcus pyogenes 36-43

5 Staphylococcus aureus 18-28

6 Proteus vulgaris 16-24

7 Dichelobacter (Bacteroides) nodosus 21

8 Actinomyces (Coiynebacterium) pyogenes 9-15

9 Streptococcus pyogenes 12

10 Peptococcus spp 11

11 Micrococcus luteus 10

12 Prevotella (Bacteroides) melanmogemeus 7-10

13 Clostridium septicum 6- 10

14 Pseudomonas aeruginosa 3-9

15 Bacteroides fragihs 3-8

16 Propionibacterium spp 3-7

17 Enterococcus faecalis 4-6

18 Clostridium oedematiens 4 6

19 Fusebacteiium nucleatum 4

20 Bacillus ceieus 3-4

21 Bifidobacterium bifidum 3

22 Bacillus subtilis 3

23 ~~1 Vcllonella spp 3

24 Eubactenum spp 2

25 Flavobactenum spp 2

26 Pseudomonas putida 1

27 Micrococcus spp 1

Полученные результаты позволили сдетать вывод, что представители гнойно-раневой микрофлоры (С perfringens, S aureus, A pyogenes) в ассоциации с D nodosus и F necrophorum значительно усиливают вирулентность постедних, позволяя им действием своих ферментов значительно быстрее преодолевать защитные барьеры организма животного и вызывать тяжелые поражения конечностей и внутренних органов, часто приводя к летальному исходу

Потому, на другом этапе исследований бычи отобраны следующие микроорганизмы F necrophorum, D nodosus, С perfringens т A, S aureus, А pyogenes для изучения их биологических свойств

При этом учитывались как культурально-морфологические свойства штаммов F neciophorum, D nodosus, С perfringens т A, S aureus, A pyogenes, так и их биохимические показатели, включая протеолитические и гемолитические, токсигенные, вирулентные и антигенные свойства

В результате проведенных исследований были описаны свойства 17 штаммов F necrophorum, в том числе 10 музейных и 7 вновь выделенных, проведена их типизация и отобраны 4 штамма биотипа «А» для дальнейших экспериментов, 5 штаммов С perfringens т А, в том числе 2 музейных и 3 вновь выделенных, из них отобраны 2 штамма, 8 штаммов S aureus, в том числе 3 музейных и 5 вновь выделенных Для последующих исследований отобрали 2 штамма, 15 штаммов A pyogenes, в том числе 5-и музейных и 10-и вновь выделенных Из этого количества отобрали 5 наиболее перспективных для дальнейших исследований штаммов, 7 штаммов D nodosus из которых были отобраны 4 штамма

Изучение биологических свойств и отбор штаммов позволили перейги к экспериментам, подтверждающим значение ассоциаций указанных микроорганизмов в этиологии инфекционных боленей конечностей

2.3.1. Экспериментальное подтверждение значения ассоциаций микроорганизмов в этиологии болезнен конечностей. С этой целью провели подтитровку культур F necroforum A pyogenes, S aureus на кроликах и определили LDS0 для каждой культуры После определения LD50 был поставлен основной опыт по подтверждению значения ассоциаций микроорганизмов на кроликах массой 2,0-2,5 кг, где животных заражали культурами F necrophorum, A pyogenes, S aureus и различными вариантами смеси эгих культур Результаты исследований продемонстрировали, что при одинаковом количестве инфекционного материала, использованного для заражения животных, в дозе 4 LD5o кролики, зараженные ассоциациями микроорганизмов в различных вариациях, погибали значительно быстрее по сравнению с животными, зараженными монокультурами Два кролика, зараженные монокультурами, на период наблюдения остались живыми На вскрытии животных, зараженных ассоциациями, отмечали поражения, характерные для септического процесса множественные кровоизлияния во внутренние органы, очаги некроза и абсцессы Результаты повторно! о эксперимента, полностью совпали с результатами первого опыта

На селективных средах из отдельных органов удалось реизолировать и идентифицировать исходные культуры микроорганизмов F necrophorum, А pyogenes, S aureus Заболевание у кроликов, зараженных ассоциациями, протекало остро, и через 2-3 дня животные погибали На вскрытии отмечали поражения внутренних органов, характерные для сепсиса Выделение и идентификация культур подтверждали чистоту экспериментов

На втором этапе исследований для подтверждения значения ассоциаций микроорганизмов в этиологии заболеваний конечностей был поставлен опыт на овцах результаты которого отображает таблица 3

Степень проявления болезни в зависимости от состава микробной ассоциации

группы Заражающая культура и штамм Кот-во овец Сроки наблюдения и характер поражения конечностей овец

3-е суток 7 суток 11 суток 15 суток

1 D nodosus ПП 82/90 3 - 1/4 1/л 1/л

2 F nacrophorim шт Тулашт Кр-1 3 1/л* 2/л 2/л 2/л

3 A pyogenes шт 4/2334 3 - 1/л 2/л 2/л

4 5 aureus шт 7315 3 - - \h 1/т

5 D nodosus, F necrophoram (2 шт ) j 3 2/л 1/с 3/с 3/с 3/с

6 D nodosus, F necrophorum, j 1 pyogenes j S aureus Cpeifrmgensj A j I I 3/с .. . 1/с 2/т 1/с 2/'т 1/с 2/т

*-числкгечь~ количество заботсвших животных,

знаменатель - тяжесть поражений т - легкая степень поражения копытец,

с - средняя степень поражения копытец т - тяжелая степень поражения копытец

Для постановки опыта использовали 12 овец и 6 баранов 1,5-2 летного возраста Всех животных разделили на 6 групп по 3 овцы в каждой Для заражения использовали 36 часовые культуры F necrophorum, A pyogenes, S aureus в дозах, составляющих 20 LD5o для кроликов массой 2,5 - 3 кг В опыте также использовали 12 часовую культуру С perfringens т А ш гамма 28 в дозе 100 LD50 для морских свинок массой 250 г Культуру D nodosus штамм ПП82/90 использовали в дозе 50 млрд м т

Заражение осуществляли путем втирания инфекционного материала в скарифицированный свод межкопытной щели с последующим наложением тампона, содержащего инфекционный материал и повязки

Все животные на протяжении опыта содержались в клетках с сухими полами За животными установили наблюдение в течение 15 дней Через 3 дня после заражения у всех животных были сняты повязки с инфекционным заражающим материалом и проведен первый осмотр конечностей всех зараженных овец В последующем осмотры провели на 7, 11 и 15 дни после заражения Результаты представлены в габ 4 В опыте отмечали 3 степени поражения и характеризовали их как

JI - легкая степень поражения, общее легкое угнетение, снижение аппетита, животные иногда поднимают больную конечность в покое, при движении - слабо выраженная хромота При осмотре выпадение волос в межкопытной щели, гиперемия и отечность кожи свода межконытной щели, повышение местной температуры,

С — средняя степень поражения, общее легкое угнетение, гиподинамия, снижение аппетита, выраженная хромота при движении, в покое животное держит больную конечность приподнятой При осмотре в области свода межкопытной щели гиперемия, отечность, наличие эрозий и язв, покрытых сероватым э? ссуд атом с ихорозным запахом, повышение местной температуры,

Т - тяжелое поражение, те же клинические признаки поражений, как и при средней тяжести (с), а также поражение основы кожи пяточных частей внутренних стенок копыт и гнойное воспаление основы кожи подошвы, отслоение рогового башмака Из таблицы 4 видно, что заражение овец монокультурами микроорганизмов не всегда вызывало их заболевания или отмечали в основном легкую степень поражения Животные, зараженные ассоциациями микроорганизмов, заболели уже на 3 - е сутки после заражения

В этом случае отмечали среднюю степень поражения у всех зараженных, а у двух баранов отмечена впоследствии тяжелая степень поражения копыт и начато их досрочное лечение Эксперименты, проведенные на кроликах и овцах, позволили сделать вывод о том, что избранная ассоциация микроорганизмов значительно сильнее угнетает защитные системы организма и в короткие сроки вызывает более тяжелые поражения конечностей животных по сравнению с воздействием монокультур тех же организмов, входящих в состав ассоциаций

Эги эксперименты подтвердили правомочность концепции создания ассоциированных вакцин против инфекционных болезней конечностей копытных животных

2.4. Определенно оптимальных соотношений антигенов в ассоциированных вакцинах, изучение конкуренции антигенов в организме животных, привитых ассоциированными вакцинами.

С целью определения оптимальных концентраций антигенов для конструирования ассоциированных вакцин были изготовлены инактивиро-ванные формалином антигены D nodosus, F necrophorum, Сperfringem т А, S aureus, A pyogenes в концентрациях 10, 20, 40 млрд микробных клеток в мл , которыми иммунизировали 36 овец 1,5 — 2 летнего возраста По уровню гуморальных антител в РА подбирали оптимальные концентрации для составления опытных серий ассоциированных вакцин В результате проведенных исследований были установлены следующие концентрации антигенов для составления опытных серий ассоциированных вакцин F пеио-photum и D nodosus 20 млрд м г /мл,S aureus, С perfrmgens г А, 4 pyogenes - 30 - 40 млрд м т /мл Конкуренцию антигенов изучали также на овцах, которых прививали моновакцинами из указанных штаммов на ГОА адъюванте и экспериментальной ассоциированной вакциной с этим же адыовантом Количество каждого антигена в ассоциированной вакцине и моновакцинах было одинаковым О наличии или отсутствии конкуренции антигенов судичи по титру специфических агглютининов и токешшейгра-лпзующих антител Результаты исследований приведены в глоп 4

Исследования позволили установить факт отсутствия конкуренции указанных антигенов в организме привитых овец Уровни ант тел, стимулируемых каждой валентносшо (антигеном) ассоциированной вакцины в сравнении с уровнем антител, стимулируемых моновакципами, были примерно одинаковыми и даже несколько большими у ассоциированной вакцины по некоторым валентностям

Проведенные исследования позволили перейти к из; отоплению опытных серий ассоциированных вакцин против инфекционных болезней конечностей овец и пекробактериоза КРС и их испытаниям в неблагополучных по этим болезням овцеводческих и животноводческих хозяйствах 2 5. Испытания опыты* образцов ассоциированных вакцин против инфекционных болезней конечностей овец и пекробактериоза

КРС. Разработка схемы применения ассоциированных вакцин. Испытание опытной серии инактивированной ассоциированной вакцины против инфекционных заболеваний конечностей овец с масляным адъю-вантом, провели в сравнении с Югославской ассоциированной вакциной «Памавак» и отечественной моновакциной против копытной гнили овец в совхозе «Кузнецовский» Тверской области В свою очередь, в совхозе «Мир» Рузаевского района Республики Мордовия испытывались несколько вариантов инактивированной вакцины против инфекционных заболеваний конечностей овец с различными адыовантами и антигенным составом Аналогично в совхозе «им Кирова» Балашихи*!-

Таблица 4

Результаты сравнительного испытания ассоциированной вакцины и моновакцин

Сроки Средние титры в РА и РН Средние титры в РА и РН

исследовани моновакцины ассоциированная вакцина

й D nodosus F necrophor ит S aureus А pyogenes С perfrmg епчх А D nodosus F Necrophor S aureus A pyogenes С perfrmg ens т A

До 1 60 1.80 1 70 1 50 - 1 80 1 80 1 70 1 50 -

вакцинации, 1-я ±5 ±5 ±5 ±0 ±5 ±5 ±5 ±0

вакцинация

Через 1 мес 1 200 1 480 1 200 1 60 0,24 1 280 1 1920 1 240 1 60 0,88

после 1-й вакцинации, 2-я ±0 ±40 ±0 ±5 ±40 ±200 ±20 ±5

вакцинация

Через 2 1 960 1 1660 1 360 1 160 0 1 1600 1 3840 1 480 1 240 1,72

недели после 2-й ±30 ±0 ±20 ±10 ±0 ±800 ±40 ±10

вакцинации

Через 1 мес 1 480 1 2240 1 400 1 360 0,5 1 1040 1 2240 1 480 1 480 -

после 2-й вакцинации ±40 ±300 ±0 ±20 ±80 ±300 ±4 ±40

Через 2 мес 1 400 1 1920 1 320 1 150 - 1 960 1 1920 1 360 1 200 -

после 2-й вакцинации, ±0 ±180 ±20 ±10 ±30 ±200 ±20 ±0

Через 3 мес 1 150 1 960 1 150 1 50 - 1 720 1 1600 1 280 1 80 -

после 2-й вакцинации ±10 ±30 ±10 ±0 ±20 ±0 ±40 ±5

ского района Московской области были испытаны несколько вариантов инактивированной ассоциированной вакцины против некробактериоза КРС с лечебной и профилактической целями, включая вариант вакцины с им-муномодулятором «Гликопин» (ГМДП), в сравнении с Югославской ассоциированной вакциной «Памавак» на 170 готовах крупного рогатого скота Впоследствии, лучшим вариантом вакцины против некробактериоза КРС было привито все поголовье (И47 коров) этого хозяйства Другой вариант (эмульгированной) опытной серии инактивированной ассоциированной вакцины против некробактериоза КРС был испытан на 381 голове КРС в совхозе «Луховскии» Октябрьского района г Саранска В дальнейшем в совхозе «Барыбино» опьпно-промьшпенной серией инактивированной ассоциированной вакцины против некробактериоза КРС с Г ОА адъювантом, было привито 32 коровы различными дозами этого препарата В этом хозяйстве были исследованы также некоторые параметры иммунитета, стимулируемого ттой вакциной

В результате проведенных исследований было установлено, что вакцинация животных инактивированными ассоциированными вакцинами против инфекционных заболеваний конечностей овец и некробактериоза КРС является эффективным меюдом борьбы с этими болезнями Их эффективность оказалась выше, чем у Югославской ассоциированной вакцины «Памавак» н эмульгированной моновакцины против копытной гнили овец В итоге, в качестве лдыовапта был выбран 3% ГОЛ как менее реак-тотенный по сравнению с масляным и дешевый Наиболее эффективной оказалась двукратная иммунизация животных с интервалом 28 - 30 дней при подкожном введении в области коленной складки для КРС и в области нижней трети шеи для овец в дозах по 5 мл на 1 голову животного

Срок иммунитета, стим>лируемого этими вакцинами не превышач 6 месяцев, поэтом) перспективной являлась однократная реиммуншация через 5-6 месяцев после второй вакцинации для поддержания иммунитет у приви гых. животных

Инактивированная ассоциированная вакцина против инфекционных заболеваний конечностей овец получила название «Овикон», а инактивированная ассоциированная вакцина против некробактериоза конечностей КРС - «Нековак»

2.6. Разработка методов контроля ассоциированных вакцин. За основу пабораторпыч методов контроля вакцин «Овикон» и «Нековак» брали существующие стандартные методики отбор проб по ОСТ 10-07-001-93, определение внешнего вида визуально, определение стерильности согласно ГОСТ 28085-89 - «Препараты биологические Метод бактериологического контроля стерильности» При этом в питательных средах с посевами и пересевами не должно быть визуальных признаков роста микрофлоры Определение безвредности проводили также по стандартной методике, используя 10 белых мышей и двух кроликов, при подкожном введении в соответствующих дозах Вакцины считали безвредными, если животные в течение 10 суток оставались живы и клинически здо-

ровы Допускалось образование в местах введения вакцин припухлостей различной величины Принципиально важным и сложным стал вопрос о разработке методов контроля антигенной и иммуно! с иной активности ассоциированных вакцин «Овикон» и «Нековак» ввиду большого количества антигенов и анатоксинов входящих в их состав Ранее, нами в качестве лабораторного контроля антигенной активности вакцины против копытной гнили овец инактивированной эмульгированной был разработан метод определения антител в РА у вакцинированных кроликов Предварительно нами были изучены вирулентные и иммуногенные свойства D nodosus на лабораторных моделях В результате исследований было установлено, что лабораторные животные (кролики, белые мыши, морские свинки и другие) не чувствительны к D nodosus При различных методах заражения и дозах культуры D nodosus не вызывали заболевания и падежа лабораторных животных (Панасюк С Д , 1982) Однако, нами было экспериментально установлено, что динамика накопления антител в крови вакцинированных кроликов в половинных дозах (от дозы овцы) повторяет динамику накопления агглютининов у привитых овец только на более низком уровне соответственно 1 720-1 880 и 1 2133-1 2533 на пике накопления При этом коэффициент корреляции был в высокой степени положительным (г=+0,83-н 0,99) Это позволило использовать кроликов в качестве лабораторной модели контроля антигенной активности вакцины против копытной гнили овец ВИЭВ инактивированной эмульгированной (Панасюк С Д 1982, 1983) Предложенный метод прошел проверку на Орской и Армавирской биофабриках и надежно обеспечивал качество указанной вакцины до момента снятия ее с производства Учитывая гот факт, что в состав вакцины «Овикон» входит антиген D nodosus, мы использовали указанный метод контроля антигенной активности этой валентности на кроликах в тех же параметрах, как и у вакцины против копытной гнили овец Более того, учитывая потерю вирулентных свойств культур F necrophorum (быструю потерю вирулентных свойств культур при пересевах на жидких питательных средах и возможность образования L-форм) Нами были проведены сравнительные исследования по опреде тению динамики антител у вакцинированных кроликов, овец и КРС Результаты исследований показали, как для валентности D nodosus, так и для валентности F necrophorum имеется возможность использовать кроликов в качестве лабораторной модели для оценки антигенной активности вакцин Корреляция титров агглютининов у вакцинированных кроликов и овец, а также у привитых кроликов и КРС была очень высокой и соответственно составляла г=+0,97 и г=+ 0,99,что показано в таблице 5 Полученные результаты позволили нам расширить эксперимент и продолжить использовать кроликов в качестве лабораторной модели антигенной активности вспомогательных валентностей S aureus, С perfringens т A, A pyogenes ассоциированных вакцин «Овикон» и «Нековак».

Полученные результаты позволили установить тот факт, что привитые вакцинами «Овикон» и «Нековак» кролики могут быть лабораторной

Сравнительное антитслообразованис у вакцинированных (валентность Г.песгоркотт)

кроликов, овец, КРС

¡я ! ^ Сроки исследований Коэффициент корреляции ®

Вакцины, Животные, Дозы, Сроки исследований Двукратная до (мл) СО я. Н ' и ы и В Е Й 11 а § И Средние титры агглютининов в РА

До 1-й вакцинации 1-я вакцинация 1 месяц после 2 педели 1-й вакцинации 1 после 2-й ~ | вакципацип 2-я вакцинация | 1 месяц после 2-й вакципацип 2 месяца после 2-й вакцинации

Вакцина «Овикон», Кролики 4 10 1 70±10 1:560±30 1-1440±40 1 1360±60 1-1200±30

Вакцина «Овикон», Овцы 10 10 1 100±0 | 1:1520±60 1.2560±120 1:2480±80 Г2240±40 +0.97

Вакцина «Нековак» Кролики 4 10 1:95±5 1:960±30 1 1360±90 1:1440±40 1:1280±60

Вакцина «Нековак», КРС ю | 10 ! 1 120±10 1 1'1680±80 1 1-3840±210 1 3840±210 1-3040±180 +0 99

моделью оценки антигенной активности валентностей S aureus, Сperfringens т A, A pyogenes в реакции нейтрализации (РН), о чем убедительно свидетельствовали в высокой степени коэффициенты корреляции (г= +0,97 - +0,99)

Результаты проведенных экспериментов легли в основу создания временной нормативной документации (НД) на инактивированную ассоциированную вакцину против некробактериоза конечностей КРС «Неко-вак» и на инактивированную ассоциированную вакцину против инфекционных заболеваний конечностей овец «Овикон», включающую временное наставление, временную инструкцию по изготовлению и контролю и временные технические условия (ТУ)

2.7. Изучение некоторых параметров иммунитета при применении инактивированных ассоциированных вакцин «Нековак», «Неко-вак-стимул» и «Овикон».

С целью изучения некоторых параметров иммунитета, стимулируемых ассоциированными вакцинами «Овикон» и «Нековак» с руководством и специалистами Курской биофабрики в 1994 году были согласованы вопросы технологии изготовления опытно-промышленной серии вакцин «Овикон» и «Нековак», общим объемом 45000 доз Одновременно, после согласования вопросов технологии изготовления, выпуск опытно-промышленных серий начался на Ставропольской биофабрике В период с 1994 по 1996 годы Ставропольской биофабрикой было выпущено 3 опытно-промышленных серии вакцины «Нековак» общим объемом 850 литров (175000 доз) и 4 серии вакцины «Овикон» объемом 1118,6 л (223720 доз)

Изучение некоторых параметров иммунитета, стимулируемых ассоциированными вакцинами «Нековак», «Нековак-стимул» (вакцина «Нековак» с иммуномодуля тором ГМДП) и «Овикон», провели по составленной программе исследований Она предусматривала испытание вакцины «Нековак-стимул» в двух неблагополучных по некробактериозу КРС хозяйствах Ленинского района Тульской области агрофирмах «Иван-Озеро» и «Саженец» - на всем поголовье КРС (635 голов) этих хозяйств и вакцин «Нековак» и «Нековак-стимул» с СХПК ПЗ «Барыбино» Домодедовского района Московской обл на 221 корове При этом вакциной «Нековак-стимул» привили 20 здоровых коров, для оценки некоторых параметров клеточного иммунитета и его сопоставления с аналогичными показателями иммунитета, стимулируемого вакциной «Нековак»

Комиссионное испытание опытно-промышленной серии вакцины «Овикон» провели на 1234 юловах мелкого рогатого скота в ГПЗ «Котов-ский» Пронского района Рязанской области, неблагополучного по копытной гнили и некробактериозу овец, в наиболее сильно пораженных отарах баранов-производителей и овцематок племъядра, где заболеваемость конечностей соответственно составляла до начала эксперимента 30,0 и 10,3% Обе вакцинированные отары составили примерно половину всего поголовья овец хозяйства

В хозяйствах, где испытывали опытно-промышленные серии вакцин «Овикон» и «Нековак», контрольные и вакцинированные животные содержались в одинаковых условиях Выпасались и выгуливались совместно Результаты представлены в таблицах 6, 7.

Итоги экспериментов по изучению некоторых параметров иммунитета. стимулируемых ассоциированными вакцинами «Нековак», «Нековак-стимул» и «Овикон» показывают, что указанные препараты вызывали в организме привитых животных значительное повышение иммунного статуса, выражающегося выработкой как гуморального, так и клеточного иммунитета Поствакцинальный иммунитет сопровождался значительны ростом титров специфических агглютининов, которые с достоверностью 99% (Р <0,01) в средней и высокой степени находятся в обратной коррелятивной связи с заболеваемостью конечностей у привитых животных Пик выработки специфических гуморальных тел наблюдались через 2-3 недели после второй вакцинации

Так, при применении вакцины «Нековак-стимул» агрофирме «Иван-Озеро», титры специфических агглютининов увеличились с 1 200 в начале испытания, до 1 2240 через 3,5 месяца после второй вакцинации, г е увеличились в 11,2 раза В этот период заболеваемость КРС резко снизилась с 58,4% в начале опыта до 4,4% в конце исследований, т е в 13,3 раза Коэффициент корреляции (г) по результатам опыта составил с достоверной вероятностью 99% (Р <0,01) величину (-0,88) Это указывает на наличие высокой степени обратной коррелятивной связи между величиной титров специфических агглютининов и заболеваемостью конечностей животных

Аналогичные результаты были получены при испытании вакцины «Нековак-стимул» в агрофирме «Саженец», где при увеличении титров гуморальных антител в РА с 1 230 до 1 3680, те в 16 раз, уровень заболеваемости животных некробактериозом снизился с 83% до 0,6% в 138,3 раза, т е хозяйство было практически оздоровлено от этой инфекции Коэффициент корреляции (г) составил (-0,57), что подтверждает наличие обратной корреляционной связи между величиной титров агглютининов и заболеваемостью некробактериозом животных средней степени

В тоже время, в СХПК ПЗ «Барыбино» во время испытания опытно-промышленной серии вакцины «Нековак», при росте титров агглютининов в 10,4 раза (с 1 370 до 1 3840) заболеваемость некробактериозом снизилась с 31,7% до 3,0% те в 10,6 раза, что с достоверной вероятностью 99% подтвердило наличие обратной коррелятивной связи между титрами агглютининов и заболеваемостью животных некробактериозом (г=-0,98) в высокой степени В этом эксперименте, как и в предыдущих опытах, отмечали увеличение всего пула лимфоцитов Несколько большее увеличение Т- и В-лимфоцитов констатировали у коров, привитых вакциной «Нековак-стимул», соответственно на 7,13 и 5,09% по сравнению с первоначальным уровнем У животных, привитых вакциной «Нековак» количество Т- и В-лимфоцитов увеличилось соответственно на 4,7 и 3,83% В контрольной

группе уровень Т- и В- лимфоцитов оставался в пределах физиологической нормы

Результаты опыта, отображенные в табл 7, свидетельствуют о нарастании интенсивности фагоцитоза в группах, где использовались вакцины «Нековак» и «Нековак-стимул», в то время как в контрольной группе этого не произошло

Данные табл 7 свидетельствуют также об увеличении концентрации в крови вакцинированных животных иммуноглобулинов классов в и М Максимальный рост иммуноглобулинов наблюдали через 1 месяц после второй вакцинации В этот период ^ в у привитых вакциной «Нековак-стимул» составили величину 24,06±0,95 мг/мл, что на 10,6% больше первоначальной величины У коров, иммунизированных вакциной «Нековак», иммуноглобулины в увеличивалась на 8,4% и достигли величины 23,68±0,85 мг/мл Анологично увеличивалась концентрация ^ М

Результаты эксперимента убедительно показали, что вакцина «Нековак» стимулировала у привитых животных выработку первичного и вторичного напряженного поствакцинального гуморального и клеточного иммунитета и обладала лечебным действием Применение вакцины «Нековак» в СХПК ПЗ «Барыбино» позволило в 10,6 раза снизить заболеваемость привитых животных некробактериозом и свести ее до единичных случаев

При испытании опытно-промышленной серии инактивированной ассоциированной вакцины «Овикон» в ГПЗ «Котовский» на группе баранов-производителей и овцематок, мы наблюдали теже закономерности, что и при испытании вакцин «Нековак» и «Нековак-стимул» на КРС

1ак, в группе баранов-производителей, привитых вакциной «Овикон», титры гуморальных антител увеличились по валентности О пойоъич с 1 120 до 1 2160, т е в 32,0 раза, а по валентности Р песгоркогит с 1 120 до 1 3760, т е в 37,6 раза через месяц после второй вакцинации В указанные сроки заболеваемость копытной гнилью и некробактериозом в группе баранов-производителей снизилась с 30,5 до 6%, т е в 5 раз

В группе привитых овцематок племъядра титры специфических антител с начала испытания выросли по валентности £) поЖхих с 1 120 до 1 2320, т е в 19,3 раза, а по валентности .Г песгоркогит с 1 110 до 1 3200, т е в 32,0 раза Заболеваемость конечностей у привитых овцематок в те же периоды снизилась с 10,3% до 3,4%, те в 3,0 раза Результаты исследова-

Результаты испытания вакцнны против некробактериоза КРС (Нековак) в СХПК ИЗ «Барыбино»

Домодедовского района, Московской области

Таблица 6 (Продолжение)

Результаты испытания ассоциированной вакцины против некробактериоза КРС (Нековак) в СХПК ПЗ «Барыбппо» Домодедовского района, Московской области

сэ о

Основные параметры иммунного статуса коров, привитых вакцинами против некробактериоза КРС «Нековак» и «Нековак-стимул» в СХПК ПЗ «Барыбино» Домодедовского района Московской области

Количество животных (п)=20, достоверность Р< 0,01

ний подтвердили наличие обратной коррелятивной связи с достоверностью 99% между уровнем титров специфических агглютининов и заболеваемостью копы гной гнилью и некробактериозом в группе баранов-производителей высокой степени по валентности D nodosus (г=-0 82), а по валентности F Necrophorum (г=-0.90)

У привитых овцематок племъядра наблюдалась обратная коррелятивная связь между этими показателями средней степени но валентности D nodosus (г=-0,57), а по валентности F necrophorum коэффициент корреляции г был равен (- 0,66)

При изучении некоторых параметров клеточного иммунитета у животных, привитых указанными препаратами, максимально увеличивалась концентрация иммуноглобулинов классов G и М У привитых животных отмечали увеличение всего пула лимфоцитов, как тимусзависимых, так и бурсазависимых Особенно значительным оно было на 14 - 30 день после второй вакцинации Иммунизация указанными препаратами также стимулировала у вакцинированных животных интенсивность фагоцитоза ней-трофилов Основные показатели фагоцитоза фагоцитарная активность, фагоцитарное число и фагоцитарный индекс - достигли максимума на 14 день после вакцинации На этом фоне все показатели иммунного статуса контрольных животных оставалась в пределах физиологической нормы

Иммунизация вакцинами «Нековак», «Нековак-стимул» и «Овикон» сопровождалась выраженным лечебным эффектом, проявляющимся в легком переболевании привитых животных, их быстром выздоровлении и отсутствии случаев рецидивов заболевания

Доказательство иммуногенности указанных вакцин позволило поставить вопрос об их промышленном выпуске и создании промышленной технологии изготовления

2.8. Промышленная технология изготовления ассоциированных вакцин «Нековак» и «Овикон».

Успешное испытание опытно-промышленных серий вакцин «Нековак», «Нековак-стимул» и «Овикон» в неблагополучных по инфекционным болезням конечностей хозяйствах, позволило перейти на серийное примышленное производство указанных препаратов

Общая схема технологического процесса изготовления указанных вакцин состоит из следующих стадий, представленных втабл 10

Технология, разработанная при создании опытно-промышленных серий вакцин «Нековак» и «Овикон» в 1994-1996 гг, предусматривала культивирование анаэробных штаммов F necrophorum, D nodosus, С perfrin-gens т А на жидких питательных средах из натурального сырья Аэробные культуры S aureus и A pyogenes выращивали на плотных питательных средах — 2,5% агаре Хоттингера в 1,5 л матрасах

Технология изготовления последних двух валентностей вакцин являлась весьма трудоемкой, с высокими материальными затратами и низким выходом бактериальной массы По нормативно-технической документации

Таблица 8

Испытание опытно-промышленной серии ассоциированной вакцины против инфекционных заболеваний конечностей овец «Овикон» в ГПЗ «Котовский» Пронского района Рязанской области

ы

и)

Основные параметры иммунною стлтлса овец, привитых ассоциированной вакциной против инфекционных заболеваний конечностей «Овикон» в ГПЗ «Котовскии» Пронского района Рязанской области

Достоверность Р<0 01

Сроки Вакцина «Овикон » Контрочь (Непривитые)

\ иссчедований Показатели До вакцинации 1 месяц после 1-й вакцинации 2-я вакцинация 1 месяц после 2-й вакцинации До начала опыта 1 месяц посте начала оиыта 1 месяц после начала опыта

Иммуноглобулины 17,2411,15 18 2411,34 19 6312,05 16,9811 05 17 08=1,20 17,0611,05

(мг/мч) 18 М 1,57±0,40 1,98+0,18 2,2710 21 1,52+0 35 1 6110,09 1,6110,46

Популяции Лимфоцитов (%) 23,73=0,96 26,1511,17 28,9311,68 23,8511,17 23,9211,05 23,87+1,05

т- 12,04+0,85 14,58+1,15 17,1212,04 12,3610,75 12,7410,98 12 45+0,95

Фагоцитарная активность ФЛ (%) 26,2211,29 31,44+2,15 32,7512 05 26,43+1,15 26 7210 85 27,1510,98

Фагоцитарное число ФЧ (мт) 4,85+1,75 8710 97 6,14=1,24 4 88+1,05 5,9110,95 5,9211,05

Фагоцитарный индекс ФИ (мт) , 4,38+0,98 5 7311,15 6,5211 05 4,39+0,95 4,5110,85 4,4811,05

СО

Таблица 10

Технологическая схема производства ипактивпровапных ассоциированных вакцин: против некробактериоза конечностей крупного рогатого скота «НЕКОВАК» и против инфекционных заболеваний конечностей овец

«ОВИКОН»

Ампулы с производственными штаммами

F nea ophorum и D nadosus выращивалась на питательной среде, состоящей из смеси печеночного экстракта и одного из переваров мяса (ферментативного или казеинового) в соотношении 1 3 Это очень доро1 остоящая среда

В исследованиях, проведенных сотрудниками ФГУП «Ставропольская биофабрика» вместе с авторами препаратов, модифицировали питательные среды с целью экономии дорогостоящих инградиентов, а гакже получения максимального накопления микробных клеток

Работу провели в двух направлениях разработка промышленных способов культивирования аэробных микроорганизмов Staphylococcus aureus, Actinomyces pyogenes, при этом нами ставилась задача перейти от культивирования этих микроорганизмов на плотных питательных средах к глубинному - в ферментерах на жидких питательных средах С этой целью, в сравнительном аспекте были исследованы следующие питательные среды бульон Хоттингера и сложно-компонентная питательная среда, состоящая из основного перевара Хоттингера, ферментного гидролизата кровяных сгустков (отходов от производства нормальной сыворотки КРС и овец), ферментативного гидролизата казеина и гидролизата печени КРС В испытываемых средах устанавливали рН 7,6-7,8, аминный азот 170-180 мг% Во время культивирования в реакторах кулыур Staphylococcus au?eus гг Actinomyces pyogenes в питательную среду дробно добавляли 40% раствор глюкозы с периодической корректировкой рН до 1,2-1,А Время культивирования 18 часов

Ьылгг получены следующие результаты культивирования по накоплению бактериальной массы на сложно компонентной питательной среде S aureus — 20^ 10s м т /мл , A pyogenes - 9* 10s м г /мл

В тоже время, при культивировании указанных микроорганизмов в матрасах с 2,5% агаром Хоттингера, накопление A pyogenes составило 4 млрд м т в мл Такое кочичество антигенов по старой технологии куиьти-вировании в матрасах с 2,5% агаром Хоттингера мы могли получать с 1000 - 2000 матрасов (5-10 культивирований по 250 матрасов)

На втором этапе при изыскании питательных сред для кутьтивиро-вания анаэробных микроорганизмов F necrophorum и D nodosus, перевар Хоттингера из состава питательной среды был исключен Вместо экстракта печени испотьзовался ее гидролизат Согласно инструкции по изготовлению, ira 100 л экстракта печени необходимо 100 кг печени КРС, а для изготовления 20 л гидролизата печени - всего 15 кг Гидролизах печени добавляли в количестве 2% к основному объему питательной среды В конструировании питательной среды также использовали гидролизаты казеина кислотный и ферментативный, ферментативный гидролизат кровяных сгустков

Готовая питательная среда имела следующие биохимические показатели рН - 7,8 -8,0, аминного азота 150-180 мг%

В результате проведенных исследований сравнительного культивирования анаэробных микроорганизмов на экспериментальной (сложно

компонентной питательной среде) и контрольной среде (среда МППБ на основе перевара Хоттингера), нами было установлено, что накопление бактериальной массы на экспериментальной среде в 1,5 раза превышало этот показатель контрольной среды Замена основного перевара Хоттингера гидролизатом печени в сложно компонентной среде позвонила снизить в 6 раз затраты на производство ростовых сред

Успешное испытание опытно-промышленной серий ассоциированных вакцин «Нековак», «Нековак-стимул» и «Овикон» в неблагополучных по инфекционным болезням конечностей крупного и мелкого рогатого скота животноводческих хозяйствах РФ, а гакже разработка и усовершенствование промышленной технологии изготовления указанных препаратов позволили

1 Оформить патенты на ассоциированную вакцину «Овикон» против инфекционных заболеваний конечностей овец, и на ассоциированную вакцину «Нековак» против некробактериоза КРС,

2 Утвердить постоянную действующую нормативную документацию на указанные препараты,

3 Зарегистрировать в РФ указанные препараты,

4 Продолжить серийное производство указанных вакцин на ФГУП «Ставропольская биофабрика»

5 Сертифицировать выпуск этих препаратов,

6 Провести испытания эффективности промышленных серий ассоциированных вакцин «Нековак», «Нековак-стимул» и «Овикон» в неблагополучных по инфекционным болезням конечностей крупного и мелкого рогатого скота животноводческих хозяйствах РФ

2.9. Испытание эффективности промышленных серий ассоциированных вакцин «Нековак», «Нековак-стимул» «Овикон». Разработка снс1емы мероприятий по борьбе с инфекционными заболеваниями конечностей крупного и мелкого рогатого скота.

Утверждение Нормативной Документации на ассоциированные вакцины «Нековак», «Нековак-стимул» и «Овикон» и начавшееся па ФГУП «Ставропольская биофабрика» промышленное производство указанных препаратов позволили перейти к испытанию эффективности промышленных серий этих вакцин в неблагополучных по некробактериозу и копытной гнили животноводческих и овцеводческих хозяйствах Российской Федерации

Результаты исследований представлены в таблицах 11 и 12 Так, применение промышленной серии вакцины «Нековак» в ГПЗ «Зыбино» Тульской области позволило снизить заболеваемость коров некробакте-риозом с 65,0% до 4,6%, т е в 14,1 раза В этот период титры специфических агглютининов возросли с 1 90 до 1 3840, т е увеличились в 42,7 раза (г=-0,98, Р<0,01), что подтверждает наличие обратной коррелятивной связи высокой степени между величиной титров агглютининов и заболеваемостью некробактериозом В двух хозяйствах Добринского района Липецкой области промышленные серии вакцины «Нековак» испытывали в колхозе

«им Крупской» и в колхозе «им Ильича» Вакцину использовали в соответствии с наставлением, но комплекс организационно-хозяйственных и лечебно-профилактических мероприятий, который применяли вместе с вакцинацией, был в этих хозяйствах различным Так, в колхозе «им Крупской», помимо вакцинации всего поголовья КРС, провели обрезку и расчистку копытец, в рацион животных была введена минерально-витаминная подкормка, в пасгбищный период был проведен ремонт полов и дезинфекция помещений В колхозе «им Ильича», наряду с вакцинацией, всех животных один раз в 5 дней пропускали через ножные дезинфицирующие ванны с 10% раствором медного купороса В рацион животных помимо минерально-витаминной подкормки были введены добавки серы и метио-нина, в пастбищный период бьп проведен ремонт полов в стойлах, дезинфекция животноводческих помещений и выгульных дворов, инвентаря В пастбищныи период все больные животные были отделены от основного стада и подвергнуты лечению антибиотиками широкого спектра

От животных в период наблюдений брали кровь и исследовали сыворотку в РА на наличие специфических агпотининов В этих хозяйствах через два месяца после второй вакцинации отмечался высокий уровень подъема средних титров аплютининов у привитых животных до 1 3200 в кол'хозе «им Крупской» и до I 3680 в колхозе «им Ильича», что соотве]-ственно более первоначального уровня в 32 и 36,2 раза В указанный период отмечали (с достоверной вероятностью 99%) резкии спад уровня габо-леваемости коров некробактериозом соответственно в колхозе «им Крупской» в 36,2 раза, в колхозе «им Ильича» в 21,4 раза, до единичных случаев (0,8% и 0,7%) Через 6 месяцев после второй вакцинации к моменту окончания сроков иммунитета и резкого снижения титров агглютининов заболеваемость животных некробактериозом (с достоверной вероятностью 99%) в колхозе «им Крупской» несколько выросла до 2,6% В колхозе «им Ильича» несмотря на окончание сроков иммунитета больных некробактериозом коров не отмечено, что, вероятно, связано с правильным использованием описанной системы мероприятий по борьбе с этой инфекци-еи Результаты исследований (с достоверной вероятностью 99%) подтверждают наличие обратной коррелятивной связи между титрами агглютининов и заболеваемостью животных некробактериозом В обоих хозяйствах обратная коррелятивная связь между тшрами и заболеваемостью животных была средней степени в колхозе «им Крупской» величина г составила (-0,68), в колхозе «им Ильича» (г=-0,64, Р<0,01)

Аналогичные испытания были ]троведены в АО «Сафоновское» Ра-менского района Московской области, где в двух животноводческих фермах хозяйствах привили коров вакцинами «Нековак» и «Нековак-стимул», где в качестве имуномодулятора использовали препарат «Беталин», представляющий собой очищенный рекомбинантиый лимфотоксин (фактор некроза опухолей бега) человека

Результаты испытании убедительно продемонстрировали тот факт, что применение вакцин «Нековак» и «Нековак-стимул» в системе органи-

зационно-хозяйственных и ветеринарно-санитарных мероприятий позволяет уменьшить заболеваемость привитых животных до единичных случаев и практически оздоровить хозяйство от этой инфекции

Испытание промышленных серий ассоциированной вакцины «Ови-кон» проводили в трех овцеводческих хозяйствах Ставропольского края СХП «Новомарьевское» Шпаковского района, СХП «Каменнобалковское» Благодарненского района, подсобном хозяйстве ФГУП «Ставропольская биофабрика»

Во всех хозяйствах перед вакцинацией проводили расчистку и обрезку копытец, в рацион животных вводили монокальций фосфат для восполнения недостатка кальция и фосфора и добавки серы В пастбищный период проводили дезинфекцию кошар, выгульных базов и инвентаря В СХП «Каменнобалковское и подсобном хозяйстве Ставропольской биофабрики наряду с выше перечисленными организационно-хозяйственными и ветеринарно-санитарными мероприятиями всех животных пропускали один раз в 5-6 дней через ножные ванны с 10% раствором препарата «Цин-косол» По окончании срока иммунитета (5-6 месяцев после второй вакцинации) больным баранам-производителям в этих хозяйствах провели курс лечения антибиотиками широкого срока действия Животные, не поддававшихся лечению, сдавали на убой Вакцину «Овикон» применяли в соответствии с наставлением В результате проведенных исследований были получены следующие резутыаты

1 В СХП «Новомарьевское» применение вакцины «Овикон» на 2406 овцах позволило снизить заболеваемость инфекционными заболеваниями конечностей с 9,1% до 2,0%, т е в 4,55 раза В контрольной непривитой отаре в этот период заболеваемость выросла с 4,55 до 10,3%, т е 2,3 раза

2 В СХП «Каменнобалковское», где применяли систему мероприятий вместе с вакцинацией на 879 овцах пораженность инфекционными заболеваниями конечностей снизилась к концу испытаний с 9,1% до 0,0% В контрольной не привитой отаре заболеваемость выросла в течение наблюдений с 7,8% до 10,4%

3 В подсобном хозяйстве Ставропольской биофабрики промышленные серии вакцины «Овикон» испытывали на поголовье 1720 овец В результате осмотра установили 371 животное с поражениями конечностей (21,6%) Помимо вакцинации в хозяйстве провели весь комплекс организационно-хозяйственных и ветеринарно-санитарных мероприятий по ликвидации инфекционных болезней конечностей, включая расчистку и обрезку копытец, ножные дезинфицирующие ванны с 10% раствором препарата «Цинкосол», введение в рацион минерально-витаминных добавок, лечение антибиотиками широкого спектра действия больных баранов-производителей и других, примененных в СХП «Каменнобалковское

о*

Колхоз «имени Ильича» Колхоз «имени Крупской» \ Сроки иссле \дований и \ показатели Хозяйства \

65 186 Количество больных До вакцинации, 1-я | ! вакцинация Сроки исследований

15 29 %

365 454 Количество здоровых

71 %

430 640 Всего животных

1 100±5 Средние гитры антитле в РА

3 5 Количество больных ю й гъ О Й (И Я О О ^ 0 ю 1 Ж и (О Я я я р а я

0,7 0,8 %

426 620 Количество здоровых

99,3 99,2 Уо

429 625 Всею животных

Р < 0,01 Р < 0,01 Достоверность

1 3680±350 1 3200±260 Средние титр ы антитле в РА

0 17 Количество больных 6 месяцев после 2-й вакцинации |

0 2,6 %

422 637 Количество здоровых

100 97,4 %

591 591 Всего животных

Р <0,01 Р < 0,01 Достоверность

1 420±40 1 3801:30 Средние титр ы днтитле в РА

г - (-0,64) г - (-0 68) Коэффициент корреляции (г)

Л

¡а (Г

н

£9

П Н Я р

¥ 3

Ё я

I »

« а

Я &

° Й"1

1 2

0 к

1 § | §

¡2 К

5 *

2 о

С ы

О *

Я! л

О Я

®» 2

¡а о

а я

О 2

"в а

о

я о

СП

а

я

№2 вакцина «Нековак-Стимул» № 1 вакцина «Нековак» 1 Сроки исследований и показатели препарат

34 28 Количество больных животных До вакцинации, 1-я вакцинация | Сроки исследований |

16,6 15,4 %

170 154 Количество здоровых животных

83,4 84,6 %

204 182 Всего животных

I 130±30 Средние титр ы антитле в РА

12 20 Количество больных животных 1 месяц после вакцинации, 2-я вакцинация 1

6 11,1 >/о

189 159 Количество здоровых животных

94 88,0 %

201 179 Всего животных

Р < 0,01 Р > 0,05 Достоверность (Р)

1 2720±240 1 2400±220 Средние титр ы антитле в РА

0 4 Количество больных животных 1 месяц после 2-й вакцинации

0 2,2 %

200 175 Количество здоровых животных

100 97,8 %

200 179 Всего животных

Р < 0,01 Р < 0,01 Достоверность(Р)

1 4800 1 4160 Средние гитр ы антитле в РА

2 3 Количество больных животных 3 месяца посте 2-й вакцинации

1,1 2,1 %

181 155 Количество здоровых животных

98,9 97,9 %

183 158 Всего животных

Р < 0,01 Р < 0,01 Достоверность (Р)

1 4480±360 1 3680±300 Средние титр ы антитле в РА

(-0,96) (-0,96) Коэффициент корреляции (г)

« л

ВЭ ы

П

65 Е

■а-

2 о

я Е о ч я й

О в

3 Я

* а

3? я

2 я

о Я

0

1 о

■в

»

я

£ £

« Я

»

Кс о 2 в - ьз

о о

я о ся

я

а Я о Я

Кс м о 7

ё Я н 2 я

Н

р

о\

ы

13

а р

До иммунизации средние титры специфических агпотипинов по валентности П1сЬс1оЬас1ег nodosus составили 1 100, по валентности ¡птеЬаЫс-пит песгорИогит -1 95 Через один месяц после второй вакцинации средние титры антител составили по валентности 01сЬе1оЬаМег посЬяиз составили 1 2880, по валентности РтоЪаМепит песгорИогит -1 2720 Через 5,5 месяцев после второй вакцинации к окончанию сроков иммунитета средние титры антител по валентности ЮшЪеЬЬаМег пос1о$и$ находились в пределах 1 260, а по валентности РиюЬас1егшт песгорИогит -1 280 в указанный период бып проведен так же заключительный осмотр всех животных ] 740 овец на наличие клинических признаков инфекционных заболеваний конечностей В результате осмотра было установлено 4 больных овцы (0,23%)

1 аким образом, к концу проведенных испытаний промышленных серий ассоциированной вакцины «Овикон» в системе ор1 анизационно-хозяйственных и ветеринарно-сани гарных мероприятий с достоверной вероятностью 99% (Р<0,01) заболеваемость животных копытной гнитыо и нек-робактериозом снизилась в 94 раза, т е практически хозяйство было оздоровлено

Основываясь на успешных результатах испытаний промышленных серии ассоциированных вакцин «Нековак», «Нековак-стимул» и «Овикон»в неблагополучных хозяйствах, особенно там, где применялась система органи-зационно-хозяиственных и ветеринарно-санитарных мероприятий, нами в соавторстве была предложена система мероприятий по борьбе с инфекционными болезнями конечностей КРС и овец, представленная в рекомендациях «Диагностика, профилактика и меры борьбы при некробактериозе крупною рогатого скота», Москва, 2000 год и «Методических рекомендациях по профилактике и борьбе с копытной гнилью овец», Москва, 2004 I од

Итоговые многолетние результаты испытаний инактивированных ассоциированных вакцин «Нековак», «Нековак-стимул»и «Овикон» в том числе в системе чечебно-оздоровительных мероприятий, показаны в таблице 13 Данные этой таблицы убедительно иллюстрируют тот факт, что использование вакцин «Нековак», «Нековак-стимул» «Овикон» в системе лечебно-оздоровительных мероприятий по борьбе с инфекционными болезнями конечностей позволило оздоровить 5 животноводческих и 2 овцеводческих хозяйства

Это подтверждает ее эффективность и необходимость использования в ликвидации некробактериоза и копытной гнили жвачных, что также иллюст-роирует таблица 14

Таблица 13

Результаты испытаний ассоциированных вакцин «Нековак», «Нековак-Стимул» и «Овикон» и системы мероприятий против некробактсриоза крупного рогатого скота и копытной гнили овец

Хозяйство, область Вакцины Система мероприятий Кол-во вакцинированных животных Пораженность, % снижение заболеваемости, раз

До вакцинации После вакцинации

Крупный рогатый скот вакитаа «Нековак»

Колхоз им Кирова, МО - + 1347 28 Един случаи оздоровлено

ППО «Истра-Сенежское», МО - + 1200 14,1 0,5 оздоровлено

К-з им Ленина, Тульская обл + - 2750 32,5 4,0 8,1

ГПЗ Зыбино, Тульская обл + - 609 65 4,4 14,7

К-з «Иван-озеро», Тульская обл + - 329 58,4 4,4 13,2

Агрофирма «Саженец» Тульская обл - + 324 83 0,6 оздоровлено

АО «Сафоновское» МО - + 386 16 Един случаи оздоровлено

К-з им Крупской, Липецкая обл + - 640 29 1,7 17

К-з им Ильича, Липецкая обл - + 430 15 Един случаи оздоровлено

Мелкий рогатый скот вакцина «Овикон»

ГПЗ Котовский, Рязанская обл + - 567 20,2 4,5 4,5

СПХ Новомарьев-ское, Ставропольский край + 2406 9,1 2,0 4,55

СПХ Каменнобал-ковское, Ставропольский край + 879 9,1 0 оздоровлено

Подхоз Ставропольской биофабрики - + 1720 21,6 0,23 оздоровлено

ВСЕГО

Крупного рогатого скота 8015

Овец 5031

Схема оздоровительных мероприятий при инфекционных болезнях конечностей КРС и овец

ВЫВОДЫ

1 Инфекционные болезни конечностей крупного и мелкого рогатого скота широко распространены в различных природно-климатических зонах Российской Федерации и Республике Киргизия Заболеваемость конечностей КРС некробактериозом варьирует в широких пределах в хозяйствах Центральной России от 11,6 до 83,0%, в хозяйствах Ставропольскою края от 1 до 17,6%, в хозяйствах Республики Киргизия от 6,5 до 20,3% поголовья животных хозяйства Заболеваемость конечностей овец копытной гнилью и некробактериозом так же варьирует в широких пределах в хозяйствах Центральной России от 3,5 до 52%, в хозяйствах Ставропольского края от 3,6 до 38,1%, в хозяйствах Республики Киргизия от 8,0 до 86,0% поголовья животных Уровень заболеваемости также зависит от условий содержания, кормления, внешней среды и складывающейся патогенетической ассоциации микроорганизмов

2 Источником возбудителей инфекционных болезней конечностей КРС и овец являются больные животные Во всех природно-климатических зонах инфекционные болезни конечностей крупного и мелкого рогатого скота имеют два сезонных пика наибольшего распространения зимне-весенний и летне-осенний, что связано с действием предрасполагающих факторов внешней среды

3 Клиническое проявление инфекционных болезней конечностей крупного и мелкого рогатого скота зависит от условий содержания и кормления, а также от факторов внешней среды и состава складывающейся патогенетической ассоциации Наиболее тяжело некробактериоз конечностей КРС проявляется у быков на откорме и высокопродуктивных молочных коров в период непосредственно перед отелом или сразу после него Копытная тиль и некробактериоз (инфекционные болезни конечностей) у овец часто протекают совместно Наиболее тяжело инфекционные болезни конечностей проявляются у баранов-производителей и взрослых овцематок

4 В этиологии и патогенезе инфекционных болезней конечностей крупного рогатого скота (некробактериоз) и овец (некробактериоз и копытная гниль) помимо основных возбудителей этих болезней F nectophorum и D nodosus важную роль играют представители сапрофитной, условно-патогенной и патогенной микрофлоры, формирующие экопаразитарные патогенетические ассоциации синергетического типа

5 Гнойно-раневая микрофлора С perfringens т A, A pyogenes и S aureus в ассоциации с D nodosus и F necrophorum усиливает вирулентность последних, позволяя действием своих ферментов значительно быстрее преодолевать защитные барьеры организма животного и вызывать тяжелые поражения конечностей и внутренних органов, часто приводя к летальному исходу

6 Подобран видовой состав микрофлоры для создания ассоциированных вакцин против инфекционных болезней конечнестей КРС и овец Определены оптимальные концентрации антигенов D nodosus, F necrophorum, С perfringens г A, A pyogenes, S aureus в составе ассоциированных вакцин, не вызывающие их конкуренции в организме привитых животных и стимулирующие иммунологическую перестройку организма

7 Поствакцинальный иммунитет, стимулируемый инактивированными ассоциированными вакцинами «Нековак», «Нековак-стимул» и «Овикон», сопровождается существенным ростом титров специфических агглютининов (в 10-100 раз), которые с достоверной вероятностью 99% находятся в обратной коррелятивной связи в средней и высокой степени с заболеваемостью конечностей привитых животных Пик выработки специфических гуморальных антител наблюдается через 2-4 недели после 2-й вакцинации Заболеваемость конечностей у привитых животных на пике иммунитета была минимальной и снижалась в десятки раз Через 2-4 недели после 2-й иммунизации у вакцинированных животных максимально увеличиваются показатели клеточного иммунитета значительно возрастает концентрация иммуноглобули-

нов классов в и М и происходит увеличение всего пула (Т-) и (В-), лимфоцитов, одновременно возрастает интенсивность фагоцитоза нейтрофилов

8 Разработаны методы контроля инактивированных ассоциированных вакцин «Нековак» и «Овикон» Кролики массой 2,5-3 кг привитые в дозе 2,5 мл могут быть лабораторной моделью оценки антигенной активности указанных препаратов Титры специфических агглютининов и токсин-нсйтрализующих антител у привитых овец, КРС и кроликов с достоверной вероятностью 99% коррелируют между собой в высокой степени (г=+0,97-+0,99)

9 Вакцинация животных инактивированными ассоциированными вакцинами против некробактериоза КРС ( «Нековак» и «Нековак-стимул»), против некобактериоза и копытной гнили овец («Овикон») является эффективным средством в борьбе с указанными болезнями Оптимальной является двукратная подкожная иммунизация животных указанными препаратами в дозах 5 мл с интервалом 28-30 дней за 2 недели перед ожидаемым пиком подъема заболеваемости Длительность иммунитета, стимулируемого этими вакцинами, составляет 6 месяцев Для поддержания активного иммунитета у привитых животных перспективной является однократная ревакцинация в дозе 5 мл за 1 месяц до окончания срока иммунитета

10 Использование инактивированных ассоциированных вакцин «Нековак», «Нековак-стимул» и «Овикон» в системе организационно-хозяйственных и лечебно-профилактических мероприятий против инфекционных болезней конечностей КРС и овец позволяет существенно снизить или полностью ликвидировать указанные инфекции в животноводческих и овцеводческих хозяйствах

5 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1 Разработаны и зарегистрированы в РФ инактивированные ассоциированные вакцины против некробактериоза крупного рогатого скота «Нековак» и «Нековак-стимул» Промышленное производство указанных препаратов освоено и сертифицировано на ФГУП «Ставропольская биофабрика» согласно нормативной документации, утвержденной Департаментом ветеринарии МСХ и П РФ Препараты применяются в неблагополучных по некробак-териозу кре хозяйствах в соответствии с наставлением по их применению

2 Разработана и зарегистрирована в Российской Федерации инактиви-рованная ассоциированная вакцина против инфекционных болезней конечностей овец (копытная гниль и некробактериоз) «Овикон» Промышленное производство вакцины освоено и сертифицировано на ФГУП «Ставропольская биофабрика» согласно нормативной документации, утвержденной Департаментом ветеринарии МСХ и П РФ Препарат применяются в неблагополучных по некробавтериозу и копытной шили овец хозяйствах в соответствии с наставлением по применению

3 Разработана и внедрена в ветеринарную практику система организационно-хозяйственных и лечебно-профилактических мероприятий по борьбе с некробактериозом КРС и инфекционными болезнями конечностей овец.

вошедшая в «Инструкцию о мероприятиях по профилактике и борьбе с нек-робактериозом животных», утвержденную Департаментом ветеринарии МСХ и П РФ в 2000 г , а также изложенная в рекомендациях «Диагностика, профилактика и меры борьбы при некробактериозе крупного рогатого скота», одобренных Департаментом ветеринарии МСХ и П РФ в 2000 г и в «Методических рекомендациях по профилактике и борьбе с копытной гнилью овец», утвержденных РАСХН в 2004 г

Список научных рабо1, опубликованных по теме диссертации:

1 Панасюк С Д Иммунологическая оценка антигена В пойозиэ, применяемого с различными адъюван гами / Панасюк С Д // Бюллетень ВИЭВ -1982-Вып 48, С 29-32

2 Панасюк С Д Изучение вирулентных и иммуногенных свойств Вас-1.сго1с1ек поскээиз на лабораторных моделях / Панасюк С Д // Тр ВИЭВ — 1983 -т 57, С 69-73

3 Архангельский И И "Некоторые вопросы иммунитета при копытной гнили овец" / Архангельский И И , Караваев Ю Д , Сидорчук А А , Семенова И Н, Панасюк С Д // Тр ВИЭВ - 1983 - г 57 - С 81-86

4 Лртюшина И А Выделение гена пилина - основного белка пилей В посбив " / Артюшина И А , Панасюк С Д, Артюшин С К // "Новые направления биотехнологии" Тез докл конф -ПущиноМоск обл - 1986- 1315 октября - С 48

5 Панасюк Д И Гельминты как резервуарные хозяева и инокуляторы возбудителей инфекционных и инвазионных заболеваний человека и животных / Панасюк Д И , Панасюк С Д // Тр лаборатории гельминтоло1 ии АН СССР - 1986 - №36 - С 212-221

6 Панасюк С Д Эффективность ассоциированных вакцин против копытной гнили овец / Панасюк С Д, Сидорчук А А , Караваев Ю Д // Мат пленума секции паразитоценологии АН СССР - Витебск, 1988 - С 19-21

7 Сидорчук А А Роль ассоциаций анаэробных бактерий в патологии с с/х животных / Сидорчук А А , Панасюк С Д // Мат пленума секции паразитоценологии АН СССР - Витебск, 1988 - С 21-24

8 Сидорчук А А Оценка иммунологической эффективности различных адъювантов при изготовлении бактериальных вакцин / Сидорчук А А Панасюк С Д Федоров Ю Н / Тр ВИЭВ - 1989 - т 67.С 3-10

9 Панасюк С Д Значение ассоциаций микроорганизмов в этиологии болезней конечностей овец и КРС / Панасюк С Д , Сидорчук А А ,Караваев Ю Д, и др // Совершенствование методов государственного контроля ветеринарных препаратов -Тез докл Всесоюзной научной конференции Совершенствование методов государственного контроля ветеринарных препаратов -М, 1991 - С 179-180

10 Караваев Ю Д Специфическая профилактика копытной гнили овец / Караваев Ю Д, Панасюк С Д .Сидорчук А А и др // Тр ВИ-ЭВ - т 69 - стр 33-43

11 Авторское свидетельство № 1835295 - Вакцина для профилактики некробактериоза крупного рогатою / Коромыслов Г Ф , Панасюк С Д, Сидорчук А А и др Гос реестр изобретений СССР - 13 10 1992

12 СндорчукАА Система мероприятий по борьбе с некробактериозом КРС / Сидорчук А А , Панасюк С Д, Устинова Г И // Ветеринария - 1994 -№ 1 - С 12-14

13 Панасюк С Д Некоторые аспекты иммунопрофилактики некробактериоза конечностей КРС с использованием ассоциированной вакцины "Не-ковак" / Панасюк С Д , Кружнов H H , Сидорчук А А , Устинова Г И // Вопросы ветеринарной микробиологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Сб науч тр Ульяновского СХИ - Ульяновск - 1995 - Часть 2 - 1995 - С 42-46

14 Гельминты и простейшие, резервуарные хозяева и возбудители ги-перпаразитаных сочетанных инфекционных и инвазионных болезней / Панасюк Д И , Панасюк С Д, Ятусевич А И, Ерхан Д К - Кишинев - "Штиинца", 1995 - 335 с

15 Сидорчук А А Некоторые аспекты иммунопрофилактики некробактериоза конечностей КРС с использованием ассоциированной вакцины "Не-ковак" / Сидорчук А А , Панасюк С Д , Устинова Г И и др // Актуальные вопросы инфекционных и инвазионных болезней животных - Сб науч тр МГАВМиБ - 1995 - С 142-146

16 Панасюк С Д Специфическая профилактика инфекционных болезней конечностей крупного рогатого скота и овец / Панасюк С Д, Кружнов H H , Кирилчов Л В и др // Сб науч тр ВГНКИ - 1996 - Т 59 - С 76 - 82

17 Панасюк С Д Перспективы специфической профилактики инфекционных болезнен конечностей Научные аспекты профилактики и терапии болезнен сельскохозяйственных животных Мат науч конф Воронежского гос аграрного университета им К Д Глинки - Воронеж, 1996 - Часть 1 -

С 192-103

18 Панасюк С Д Новые препараты для профилактики конечностей у крупного и мелкого рогатого скота / Панасюк С Д, Кружнов H H , Кириллов Л В и др // Диагностика, лечение и профилактика заболеваний с/х животных Сб науч тр Ставропольской гос с/х академии - Ставрополь, 1996 -С 24-26

19 Проблемы симбиоценологии / Д И Панасюк, Панасюк С Д, Макси-наТП и др - Нальчик, изд Кабардино-Балкарской гос с/х академии, 1997 -304 с

20 Патент №2098127 Ассоциированная вакцина "Нековак" против некробактериоза крупного рогатого скота / Сидорчук А А, Панасюк С Д, Устинова Г И , Кружнов H H , Коромыслов Г Ф - Гос Реестр изобретений Российской Федерации - 10 декабря 1997

21 Патент № 2098128 Ассоциированная вакцина "Овикон" против инфекционных заболеваний конечностей овец / Панасюк С Д, Кириллов Л В , Кружнов H H и др - Гос Реестр изобретений Российской Федерации - 10 декабря, 1997

22 Сидорчук А А Перспективы применения цинко-содержащих препаратов при инфекционных болезнях конечностей жвачных / Сидорчук А А, Панасюк С Д, Кононов АН// Вестник ветеринарии - Ставрополь, 1997 - №5 -тЗ-С 78-81

23 Панасюк С Д Иммунопрофилактика и терапия некробактериоза крупного рогатого скота и копытной гнили овец с использованием ассоциированных вакцин "Нековак" и "Овикон" / Панасюк С Д , Кружнов H H, Кириллов Л В , Сидорчук А А и др // Современное состояние и перспективы интеграции ветеринарной науки и практики в условиях реформирования сельскохозяйственного производства Тез докл международной конф Прикаспийского ЗНИВИ - Махачкала, 1997г, С 77-79

24 Геладзе В Ш Усовершенствование технологии изготовления ассоциированных вакцин против инфекционных заболеваний конечностей крупного рогатого скота "Нековак" и "Овикон" / Геладзе В Ш , Панасюк С Д, Сидорчук А А и др // Диагностика, лечение и профилактика заболеваний с/х животных Сб научных трудов Ставропольской гос с/х академии - Ставрополь, 1998-С 25-26

25 Сидорчук А А Состояние изученности и проблемы борьбы с некро-бактериозом КРС / Сидорчук А А , Панасюк С Д, Кружнов H H, Устинова Г И // Мат международного симпозиума зав кафедрами эпизоотологией и инфекционных болезней - Кишинев, 1998 - С 70-73

26 Коромыслов Г Ф Применение ликопида в качестве адыованта при конструировании вакцин для профилактики инфекций / Коромыслов Г Ф, Устинова Г И , Панасюк С Д и др // Современная вакцинология Тез докл 2-й международной конференции, посвященной 100-летию Пермского НПО "Биомед" 1998 -С 45

27 Сидорчук А А Пекробактериоз КРС применение вакцины "Нековак" в системе мероприятий по профилактике и борьбе с болезнью / Сидорчук А А , Панасюк С Д, Кружнов HII и др // Тр ВИЭВ - 1998 - т 78 - С 3338

28 Сидорчук А А Система мероприятий по борьбе с некробактериозом КРС и копытной гнилью овец / Сидорчук А А , Панасюк С Д , Кружнов H H и др // Ветеринария - 1999 - №6 - С 23-27

29 Панасюк С Д Значение ассоциаций анаэробных микроорганизмов в норме и патологии с/х животных / Панасюк С Д // Сб науч тр ВГНКИ -1999-т 61 - С 64-73

30 Диагностика, профилактика и меры борьбы при некробакгериозе КРС Рекомендации Изд 1-е/А А Сидорчук, ДП Аголори, Панасюк С Д и др -М 2000- 14с

31 Сидорчук А А Специфическая профилактика копытной гнили овец / Сидорчук А А , Кононов А H , Панасюк С // Диагностика, лечение и профилактика заболеваний с/х животных Сб науч тр Ставропольской гос с/х академии - Ставрополь, 2001 - С 34-36

32 Сидорчук А А Применение вакцины "Нековак" в системе мероприятий по профилактике и борьбе с некробактериозом крупного рогатого

скота / Сидорчук А А , Панасюк С Д , Кружнов Н Н и др // Сб науч тр ВГНКИ - 2001 -т 62-С 108-113

33 Кононов АН Эпизоотология и специфическая профилактика копытной гнили овец в Ставропольском крае / Кононов А Н, Панасюк С Д, Кружнов Н Н и др // Сб науч тр ВГНКИ - 2001 - т 62, стр 113-117

34 Геладзе В III Совершенствование промышленной технологии изготовления ассоциированных вакцин "Овикон" и "Нековак" / Геладзе В Ш, Сидорчук А А , Панасюк С Д и др // Совершенствование методов контроля, стандартизации ветеринарных препаратов Тез докл Всероссийской науч конф -М,2001 -С 64-66

35 Сидорчук А А Некробактериоз КРС эффективность альтернативных методов лечения / Сидорчук А А , Панасюк С Д. Кружнов Н Н и др // Новые фармакологические средства для животноводства и ветеринарии Материалы научно-практической конф посвященной 55-летию ГУ Краснодарской НИВС - Краснодар, 2001-т И-С 213-214

36 Сидорчук А А Состояние и перспективы профилактики и ликвидации некробактериоза в России / Сидорчук А А , Панасюк С Д, Зубкова А Ю , АголориДП //Мат методической и науч конф Сб науч тр - М, 2001 - С 135-136

37 Правила по профилактике и ликвидации некробактериоза животных / Сидорчук А А , Караваев Ю Д , Кириллоа JIВ , Соломаха О И , Панасюк СД, Семенова ИН — МСХ и П России, Департамент ветеринарии №13 41313-00 от 11 07 2000г -М , 2001 - 9 с

38 Диапюстика, профилактика и меры борьбы при некробактериозе КРС Рекомендации Изд 2-е / Сидорчук А А, Аголори Д П, Панасюк СД и др -М , -2001 - 14 с

39 Сидорчук А А Некробактериоз прошлое, настоящее и будующее / Сидорчук А А , Панасюк С Д, Устинова Г И // Ветеринарная медицина - М -2002 С 3-4

40 Диагностика, профилактика и меры борьбы при некробактериозе КРС Рекомендации Изд 3-е / Сидорчук А А , Аголори Д П, Панасюк С Д, и др -М.-2003 -14 с

41 Сидорчук А А Некробактериоз КРС применение вакцины «Нековак» в системе мероприятий по профилактике и борьбе с ним / Сидорчук А А , Панасюк С Д, Устинова Г И и др // Инфекционные и прогозойпые болезни с/х животных рыб и пчел - Тр ВИЭВ -2003 - Т 73 - С 187-192

42 Панасюк С Д Специфична профилактика на инфекциозните копит-ни заболявания при едрия рогат добитьк и при овцете в Руската Федерация / Панасюк С Д // Ветеринаро-медицински новини - София, 2003 - №6 - С 1013

43 Методические рекомендации по профилактике и борьбе с копытной гнилью овец / Кононов А Н, Дмитриев А Ф , Заерко В И , Сидорчук А А , Панасюк С Д и др - М , -2004 - 19 С

44 Сидорчук А А Проблемы борьбы с некробактериозом КРС в России / Сидорчук А А, Панасюк С Д // Актуальные проблемы ветеринарной хирургии - Троицк, 2004 - С 149-150

45 Панасюк С Д Экспериментальное подтверждение значения ассоциаций микроорганизмов в этиологии инфекционных заболеваний конечностей с/х животных / Панасюк С Д, Сидорчук А А , Баусина В Л, Устинова Г И //Сб науч тр ВГНКИ - 2005 -Т 65 - С 205-212

46 Сидорчук А А Специфическая профилактика инфекционных заболеваний конечностей крупного рогатого скота и овец в Российской Федерации / Сидорчук А А , Панасюк С Д , Устинова Г И и др // Ветертнарная служба Ставрополья - 2005 - №3 -С 5-10

47 ПанасюкС Д Специфическая профилактика инфекционных заболеваний конечностей КРС и овец в Российской Федерации / Панасюк С Д, Кириллов Л В ,Сидорчук А А и др //Сб науч тр ВГНКИ - 2005 - Т 66 - С 265279

48 Сидорчук А А Проблемы борьбы с некробактериозом заблуждения и реальность / Сидорчук А , Кириллов Л В , Панасюк С Д и др // Ветеринария - 2006 -№2-С 5-6

ГНУ ВНИИВСГЭ

Москва, Звенигородское ш , 5

Заказ /¿Г. Тираж 120 экз

Актуальность проблемы

Эпизоотологические данные последних лет подтверждают тот факт, что инфекционные болезни конечностей крупного рогатого скота (КРС) и овец занимают одно из ведущих мест в инфекционной патологии этих видов животных в РФ, где наибольшее значение имеют некробактериоз и копытная гниль (3; 15; 18; 20; 119; 133; 164; 203; 229; 254; 497; 502; 513). При болезнях конечностей пораженный орган постоянно контактирует с почвой и другими предметами окружающей среды, что приводит к его обильному обсеменению различной бактериальной флорой, к тому же одной из характерных особенностей анаэробных инфекций является одновременное ассоциативное воздействие на организм двух, трех и более видов анаэробов и аэробов (26; 38; 120; 123; 125; 127; 130-132; 153; 221; 225; 238; 244; 251; 260; 265; 276; 292; 293; 322; 342; 347; 386; 391; 414; 501).

Многочисленные исследования по изучению этиологии некробакте-риоза КРС, некробактериоза и копытной гнили овец подтверждают большую роль сопутствующей микрофлоры, которая существенно осложняет течение болезни, что подтверждается данными отечественных и зарубежных исследователей (289;315; 317; 324; 325; 335; 343-345; 405; 410; 411; 461; 477).

Нашими исследованиями установлено, что помимо основных возбудителей в этиологии некробактериоза КРС, некробактериоза и копытной гнили овец (Fusobacterium necrophorum, Dichelobacter (Bacteroides) nodosus) определенную роль играет гнойно-раневая микрофлора: Clostridium perfringens тип A, Staphylococcus aureus, Actinomyces (Corynebacterium) pyogenes и другие, которые формируют микробные ассоциации в природе и организме животных, усиливая своими ферментативными системами действие основных возбудителей и тем самым увеличивая вирулентность последних в десятки раз (203; 357; 397; 466; 467). Реальным подтверждением указанных фактов явилось создание в ряде зарубежных стран ассоциированных вакцин против инфекционных болезней конечностей сельскохозяйственных животных: Pietimam, Pietivac (Франция), Памавак (Югославия). В то же время, в связи с созданием крупных откормочных и молочных комплексов для КРС и перемещением по стране большого количества племенного скота проблема некробактериоза встала особенно остро. Так, по данным Ю.Д.Караваева (107-110), заболеваемость некробактериозом в 1991 г. составила 13,5% от всех случаев инфекционной патологии у данного вида животных, а в последующие годы сохранялась устойчивая тенденция к росту заболеваемости КРС некробактериозом. Результаты исследования И.И.Архангельского и др.(18), А.Н.Кононова (119; 120; 122; 125), А.А.Сидорчука (274; 276), Ш.С.Сукеева (288; 289; 291; 292) указывают на тот факт, что, несмотря на резкое снижение поголовья овец, некробактериоз и копытная гниль, как и раньше, являются одной из основных проблем в инфекционной патологии данного вида. Так, в период 1986-2003 гг. ежегодная заболеваемость копытной гнилью и некробактериозом овец составляла до 190 тысяч голов.

Применение отечественных моновалентных вакцин против некробактериоза КРС и копытной гнили овец не позволило полностью решить проблемы ликвидации некробактериоза и копытной гнили, хотя их использование позволило значительно снизить заболеваемость животных. В связи с вышеизложенным, конструирование вакцин против инфекционных бо-лезний конечностей КРС (некробактериоз) и овец (некробактериоз и копытная гниль) на основе ассоциации анаэробных микроорганизиов {Fusebacterium necrophorum и Dichelobacter nodosus) и гнойно-раневой микрофлоры позволит более надежно профилактировать указанные болезни.

Цель работы

Целью настоящих исследований было выяснение роли и значения ассоциаций анаэробных микроорганизмов Р. песго/огит и й. пойоьт и представителей гнойно-раневой микрофлоры в этиологии, патогенезе и профилактике инфекционных болезней конечностей КРС и овец и обоснование создания нового поколения средств специфической профилактики этих заболеваний.

Задачи исследований

1. Изучить особенности эпизоотологии некробактериоза крупного рогатого скота, некробактериоза и копытной гнили овец в различных зонах Российской Федерации и Республики Киргизия;

2. Выяснить видовой спектр микроорганизмов при болезнях конечностей крупного рогатого скота и овец;

3. Изучить биологические свойства изолятов и провести отбор штаммов для конструирования ассоциированных вакцин;

4. Экспериментальным путем подтвердить значение ассоциаций микроорганизмов в инфекционной патологии конечностей крупного рогатого скота и овец;

5. Изучить иммунный ответ при применении ассоциированных вакцин, определить возможность конкуренции антигенов в организме животных, привитых ассоциированными вакцинами и разработать схемы их применения;

6. Разработать методы контроля и промышленную технологию изготовления ассоциированных вакцин;

7. Испытать эффективность ассоциированных вакцин в лабораторных и производственных условиях.

Научная новизна

Установлены особенности эпизоотологии и клинического проявления инфекционных болезней конечностей КРС (некробактериоз) и овец (некробактериоз, копытная гниль) в различных природно-климатических зонах Российской Федерации и в Республике Киргизия. Определен видовой спектр микроорганизмов при инфекционных болезнях конечностей КРС и овец. Установлена и экспериментально подтверждена роль гнойно-раневой микрофлоры в ассоциации с анаэробными микроорганизмами # песгорЬогит и В. поскзяш в этиологии и патогенезе инфекционных болезней конечностей.

Впервые в Российской Федерации разработаны и испытаны с положительными результатами инактивированные ассоциированные вакцины против некробактериоза конечностей КРС "Нековак", "Нековак-стимул" и инфекционных заболеваний конечностей овец "Овикон".

Препараты защищены патентами: патент N 2098127 от 10.12.1997г. "Ассоциированная вакцина "Нековак" и "Нековак-стимул" против некробактериоза КРС"; патент N 2098128 от 10.12.1997г. "Ассоциированная вакцина "Овикон" против инфекционных заболеваний конечностей овец". Вакцины зарегистрированы Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ. На препараты получены сертификаты соответствия.

Разработаны методы контроля вакцин, промышленная технология их изготовления, методы оценки иммунитета у вакцинированных животных и схемы применения вакцин в неблагополучных хозяйствах, а также система мер по борьбе с некробактериозом и копытной гнилью.

Практическая ценность

Впервые в Российской Федерации разработаны и внедрены в производство инактивированные ассоциированные вакцины: против некробактериоза конечностей КРС - "Нековак" и "Нековак-стимул"; и инфекционных заболеваний конечностей овец - "Овикон". Серийный выпуск препаратов с 1995г. налажен на Ставропольской биофабрике.

Материалы разработки вошли в "Правила по профилактике и ликвидации некробактериоза животных", утвержденные Департаментом ветеринарии МСХ и П РФ 11.07.2000 г. №ВП 13.4.1313-00.

Материалы диссертации вошли также в рекомендации "Диагностика, профилактика и меры борьбы при некробактериозе крупного рогатого скота". Рекомендации одобрены Департаментом ветеринарии МСХ и П РФ 21.02.2000 г., и в "Методические рекомендации по профилактике и борьбе с копытной гнилью овец", утвержденные РАСХН 22 марта 2004 г.

Основные положения, выносимые на защиту

Результаты изучения особенностей эпизоотологии и клинического проявления инфекционных болезней конечностей КРС и овец в различных природно-климатических зонах Российской Федерации и Республики Киргизия.

Результаты изучения видового спектра микроорганизмов при инфекционных болезнях конечностей крупного и мелкого рогатого скота и биологических свойств выделенных изолятов.

Теоретическое обоснование разработки инактивированных ассоциированных вакцин против некробактериоза крупного рогатого скота "Нековак" и "Нековак-стимул" и против инфекционных заболеваний конечностей овец "Овикон".

Промышленная технология изготовления ассоциированных вакцин "Нековак" и "Овикон".

Практическая эффективность вакцинации крупного рогатого скота против некробактериоза и овец против инфекционных болезней конечностей при применении ассоциированных вакцин.

Оценка некоторых факторов клеточного и гуморального иммунитета при применении ассоциированных вакцин.

- Система применения ассоциированных вакцин "Нековак" и "Неко-вак-стимул" в неблагополучных хозяйствах.

Апробация работы.

Материалы диссертации доложены на заседаниях: Ученого совета ВНИИЭВ им. Я.Р. Каваленко (1989-1991); заседаниях Ученого совета ВГНКИ в 1992-2003 гг.; заседании пленума секции паразитоценологии АН СССР (г. Витебск, 1988); на Всесоюзной научной конференции "Совершенствование методов государственного контроля ветеринарных препаратов" (г.Москва, 1991); на заседании Государственной межведомственной комиссии по испытанию ветбиопрепаратов при Департаменте ветеринарии МСХ и П РФ в 1993 году; на заседании научно-проблемной методической комиссии по контролю и стандартизации биопрепаратов, применяемых при бактерийных и грибковых болезнях животных ( ФГУ ВГНКИ, 1995); на Всероссийской научной конференции, посвященной 70-летию факультета ветеринарной медицины Воронежского государственного аграрного университета им. К.Д. Глинки (г.Воронеж, 1996); на заседании Ветфармбио-комиссии при Департаменте ветеринарии МСХ и П РФ (1997); на Международной конфереции, посвященной 30-летию Прикаспийского ЗНИВИ (г.Махачкала, 1997), на методической и научной конференции МГАВМиБ ( г.Москва, 2001), на Международной конференции ветеринарных специалистов по борьбе с инфекционными заболеваниями с/х животных (Республика Болгария, г.Апрельцы, 2003).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано в печати 48 научных работ в различных изданиях, в которых изложены основные положения и выводы по изученным вопросам, в том числе 2 монографии и 2 патента РФ на изобретения и авторское свидетельство №1835295.

Объем и структура диссертации

Диссертация написана на 430 страницах компьютерного текста, состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и содержит 67 таблиц, 4 графика, 29 фотографий. Список литературы включает 517 отечественных и зарубежных источников. Приложение к диссертации в объеме 40 страниц содержит документацию, подтверждающую диссертационный материал.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

4. ВЫВОДЫ

1. Инфекционные заболевания конечностей крупного и мелкого рогатого скота широко распространены в различных природно-климатических зонах Российской Федерации и республике Киргизия. Заболеваемость конечностей КРС некробактериозом варьирует в широких пределах в хозяйствах Центральной России от 11,6 до 83,0%, в хозяйствах Ставропольского края от 1 до 17,6%, в хозяйствах республики Киргизия от 6,5 до 20,3% всего поголовья животных хозяйства. Заболеваемость конечностей овец копытной гнилью и некробактериозом так же варьирует в широких пределах в хозяйствах Центральной России от 3,5 до 52%, в хозяйствах Ставропольского края от 3,6 до 38,1%, в хозяйствах Республики Киргизия от 8,0 до 86,0% всего поголовья животных хозяйства. Уровень заболеваемости также зависит от условий содержания, кормления, внешней среды и искладывающейся патогенетической ассоциациимикроорганиз-мов.

2. Источником возбудителей инфекционных болезней конечностей крс и овец являются больные животные. Во всех природно-климатических зонах инфекционные болезни конечностей крупного и мелкого рогатого скота имеют два сезонных пика наибольшего распространения: зимне-весенний и летне-осенний, что связано с действием предрасполагающих факторов внешней среды.

3. Клиническое проявление инфекционных болезней конечностей крупного и мелкого рогатого скота зависит от условий содержания и кормления, а также от факторов внешней среды и состава складывающейся патогенетической ассоциации.Наиболее тяжело некробактериоз конечностей КРС проявляется у быков на откорме и высокопродуктивных молочных коров в период непосредственно перед отёлом или сразу после него. Копытная гниль и некробактериоз (инфекционные болезни конечностей) у овец часто протекают совместно. Наиболее тяжело инфекционные болезни конечностей проявляются у баранов-производителей и взрослых овцематок.

4. В этиологии и патогенезе инфекционных болезней конечностей крупного рогатого скота (некробактериоз) и овец (некробактериоз и копытная гниль), помимо основных возбудителей этих болезней F. necropho-гит и D. nodosus ,важную роль играют представители сапрофитной, условно-патогенной и патогенной микрофлоры, формирующие экопарази-тарные патогенетические ассоциации синергетического типа.

5. Гнойно-раневая микрофлора: С. perfringens т. A, A. pyogenes и S. aureus в ассоциации с Д nodosus и F. necrophorum усиливает вирулентность последних, позволяя действием своих ферментов значительно быстрее преодолевать защитные барьеры организма животного и вызывать тяжелые поражения конечностей и внутренних органов, часто приводя к летальному исходу.

6. Подобран видовой состав микрофлоры для составления ассоциированных вакцин против инфекционных болезней конечностей КРС и овец. Определены оптимальные концентрации антигенов Д nodosus, F. necrophorum, С. perfringens т. A, A. pyogenes, S. aureus в составе ассоциированных вакцин, не вызывающие их конкуренции в организме привитых животных и стимулирующие иммунологическую перестройку организма.

7. Поствакцинальный иммунитет, стимулируемый инактивирован-ными ассоциированными вакцинами «Нековак», «Нековак-стимул» и «Овикон», сопровождается значительным ростом титров специфических агглютининов (в 10-100 раз), которые с достоверной вероятностью 99% в средней и высокой степени находятся в обратной коррелятивной связи с заболеваемостью конечностей привитых животных. Пик выработки специфических гуморальных антител наблюдается через 2-4 недели после 2-й вакцинации. Заболеваемость конечностей у привитых животных на пике иммунитета была минимальной и снижалась в десятки раз. Через 2-4 недели после 2-й иммунизации у вакцинированных животных максимально увеличиваются показатели клеточного иммунитета: значительно возрастает концентрация иммуноглобулинов классов G и М и происходит увеличение всего пула (Т-) и (В-) лимфоцитов, одновременно возрастает интенсивность фагоцитоза нейтрофилов.

8. Разработаны методы контроля инактивированных ассоциированных «Нековак» и «Овикон». Кролики массой 2,5-3 кг., привитые в дозе 2,5 см3 инактивированными ассоциированными вакцинами «Нековак» и «Овикон», могут быть лабораторной моделью оценки антигенной активности указанных препаратов. Титры специфических агглютининов и токсин-нейтрализующих антител у привитых овец, КРС и кроликов с достоверной вероятностью 99% коррелируют между собой в высокой степени (г=+0,97-+0,99).

9. Вакцинация животных инактивированными ассоциированными вакцинами против некробактериоза КРС ( «Нековак» и «Нековак-стимул»), против некробактериоза и копытной гнили овец «Овикон» является эффективным средством в борьбе с указанными болезнями. Оптимальной является двукратная подкожная иммунизация животных указанными препаратами в дозах 5 мл с интервалом 28-30 дней за 2 недели перед ожидаемым пиком подъема заболеваемости. Длительность иммунитета, стимулируемого этими вакцинами, составляет 6 месяцев. Для поддержания иммунного статуса у привитых животных перспективной является однократная ревакцинация в дозе 5 мл за 1 месяц до окончания срока иммунитета.

10. Использование инактивированных ассоциированных вакцин «Нековак», «Нековак-стимул» и «Овикон» в системе организационно-хозяйственных и лечебно-профилактических мероприятий против инфекционных болезней конечностей КРС и овец позволяет полностью ликвидировать указанные инфекции в животноводческих и овцеводческих хозяйствах.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Разработаны и зарегистрированы в Российской Федерации инактивированные ассоциированные вакцины против некробактериоза крупного рогатого скота «Нековак» и «Нековак-стимул». Промышленное производство указанных препаратов освоено и сертифицировано на ФГУП «Ставропольская биофабрика» согласно нормативной документации, утвержденной Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ. Препараты применяются в неблагополучных по некробактериозу КРС хозяйствах в соответствии с наставлением по их применению.

2. Разработана и зарегистрирована в Российской Федерации инактивированная ассоциированная вакцина против инфекционных болезней конечностей овец (копытная гниль и некробактериоз) «Овикон». Промышленное производство вакцины освоено и сертифицировано на ФГУП «Ставропольская биофабрика» согласно нормативной документации, утвержденной Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ. Препарат применяется в неблагополучных по некробактериозу и копытной гнили овец хозяйствах в соответствии с наставлением по применению.

3. Разработана и внедрена в ветеринарную практику система организационно-хозяйственных и лечебно-профилактических мероприятий по борьбе с некробактериозом КРС и инфекционными болезнями конечностей овец, вошедшая в «Инструкцию о мероприятиях по профилактике и борьбе с некробактериозом животных», утвержденную Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ в 2000 г., а также изложенная в рекомендациях «Диагностика, профилактика и меры борьбы при некробактериозе крупного рогатого скота», одобренных Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ в 2000 г. и в «Методических рекомендациях по профилактике и борьбе с копытной гнилью овец», утвержденных РАСХН в 2004 г.