Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Живые слабоагглютиногенные вакцины в системе противобруцеллезных мероприятий

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК Сибирское отделение АЛТАЙСКАЯ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ ВЕТЕРИНАРНАЯ СТАНЦИЯ

Р Г 5 О Д На правах рукописи

удк 619:616.981.42-082-47

1 3 МАЙ 1335

НИКИФОРОВ Иван Порфирьевич

ЖИВЫЕ СЛАБОАГГЛЮТИНОГЕННЫЕ ВАКЦИНЫ В СИСТЕМЕ ПРОТИВОБРУЦЕЛЛЕЗНЫХ МЕРОПРИЯТИИ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

ДИССЕРТАЦИЯ

в виде научного доклада на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Барнаул • 1996

Официальные оппоненты: Доктор ветеринарных наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ САЛМАКОВ Константин Михайлович

Доктор ветеринарных наук, профессор ОЩЕПКОВ Владимир Григорьевич

Доктор ветеринарных наук ЛУНИЦИН Василий Герасимович

Научные консультанты: Доктор ветеринарных наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ КОСИЛОВ Игорь Андреевич

Доктор ветеринарных наук ДИМОВ Сергей Константинович

Ведущая организация - Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко.

Защита состоится '¿$6 (ЛЛуСНу^-Н^— 1996 г. в_час на

заседании диссертационного совета Д.020.23.01 в Институте экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО РАСХН (633128, Новосибирская область, п. Краснообск, ИЭВСиДВ, конфе-ренцзал).

С диссертацией в виде научного доклада можно ознакомиться в

ЦНСХБ СО РАСХН.

Диссертация в виде научного доклада разослана " " 1996 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор ветеринарных наук А.А.САМОЛОВОВ

© Издательство «5С», 1996

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ 1.1. Актуальность проблемы

Важная роль в успешной борьбе с бруцеллезом животных нри-[адлежит средствам специфической профилактики.

Исходя из теории и практики управления эпизсютическим процессом указанной болезни, они, являясь максимально безопасны -1И, должны обеспечить н популяциях животных неблагополучных i угрожаемых зон за счет рациональных схем многократного ис-юльзопания принцип создания и поддержания перманентного им-1унитста. Однако, с другой стороны, важно обеспечить и принцип ехнологичности: создать максимальную возможность беспрепятственного проведения комплексной диагностики бруцеллеза в це-1ях оздоровления ферм и объективности эпизоотической оценки >лагополучных и оздоровленных стад (A.A. Новицкий, 1989; В.Г. Зщепков, 1990; И.А. Косилов, 1992; С.К. Димов, 1993).

Существуют различные типы противобруцеллезных вакцин. Их »ценке в экспериментальных и производственных условиях посвя-цено большое количество парных работ крупных исследователей П.Ф. Здродовский, П.А. Вершилова, Х.С. Котлярова, М.К. Осковец, П.Н. Жованик, П.А. Триленко, Е.С. Орлов, П.С. ^ласевич, И.А. Косилов, К.В. Шумилов, K.M. Салмаков, Н.П. Иванов и др.).

Наибольший практический интерес вызвали живые агглюти-югенные вакцины. Но, обладая высокой иммуногенностью и про-"ивоэпизоотической эффективностью, они не удовлетворяют в домной мере требованиям технологичности.

Этим требованиям в большей степени соответствуют живые лабоагглютиногенные вакцины. Типичным представителем препа->атов такого типа является вакцина из слабоагглютиногенного штамма 3.abortus 82 (K.M. Салмаков), нашедшая в настоящее время в гашей стране широкое применение на крупном рогатом скоте.

Однако, к моменту начала наших исследований реально су-цествовала проблема ее рационального использования.

Кроме того, исходя из современных требований, предъявляв мых к средствам специфической профилактики, очевидной остав, лась и необходимость поиска новых, более совершенных н(х)Тиво( руцеллезных вакцин.

1.2. Цель и задачи исследований

Цель исследований - повысить эффективность комплекса ир< тивобруцеллеэпых мероприятий и условиях хозяйств Алтайско1 края и республики Алтай за счет рационального использоваш живой вакцины из слабоаплютииогенного штамма B.abortus 82 изыскать новую вакцину аналогичного типа, по наиболее шш отвечающую современным требованиям технологичности.

Задачи исследовании:

— осуществить ретроспективную оценку эффективности ¡и: личных нариантон оздоровительных мероприятий при бруцеллез крупного рогатого скота в условиях Алтайского к|жя и республик Алтай;

— изучить в производственных условиях на крупном рогато скоте и яках биологические свойства вакцинного штамма B.aborti 82 и на основе полученных, результатов {>аз(>аботать комплекс д* агностических исследований по эпизоотической оценке стад Kpyi ною рогатого скота, привитого указанной вакциной, и ycoBcpniei ствовать системы протинобрупеллезных мероприятий в скотоводстве и яководстве в масштабах А\тайского К()ан и республики А' тай;

— изыскать из числа слабоагглютипогсниых штаммов 6pj целл наиболее полно отвечающий требованиям, предъявляемым вакцинным штаммам, и изучить его в сравнении со штаммом B.aboi tus 82 в экспериментальных и производственных условиях.

1.3. Научная новизна

Выявлен ряд особенностей проявления биологических свойст накпишюго штамма B.aborïus 82 в производственных условиях i крупном рогатом скоте.

С учетом полученных результатов раз[)аботан и широко апро-гроиан с высоким противоэпизоотичсским и экономическим эф-iktom комплекс диагностических исследований по эпизоотичес->й оценке стад крупного рогатого скота, принятого вакциной из гамма В. abortus 82.

Усовершенствованы применительно к конкретным условиям Ал-йского края и республики Алтай системы нротивобруцеллезных зроприятий в скотоводстве и яководстве с использованием вакци->i из слабоагглютипогенного штамма B.abortus 82. На большом 1ктическ0м материале доказана их значительная противоэпизоо-гческая и профилактическая эффективность.

Селекционирован и комплексно изучен в экспериментальных и эоизводственных условиях новый вакцинныи слабоагглютиноген-эш штамм B.abortus 75/79-А, убедительно доказан ряд его су-ественных преимуществ перед вакцинным штаммом B.abortus 82.

1.4. Теоретическая и практическая значимость

Результаты научно-исследовательских работ дополняют новы-и фактами результаты изучения биологических свойств слабоаг-иотшюгеиных вакцинных штаммов 82 и 75/79-А, доказывают реимущества последнего и могут быть использованы в дальней-[их научных исследованиях в направлении поиска новых вакцин, а шже в учебном процессе. На штамм 75/79-А получено авторс-эе свидетельство на изобретение № 1701743 от 1.09.1991 г.

Внедрена в масштабах Алтайского края и республики Алтай с ысоким противоэпизоотическим и профилактическим эффектом истема противобруцеллезных мероприятий, включающая рацио-альные схемы использования вакцины из слабоагглютиногенного 1тамма B.abortus 82 и комплекс диагностических исследований по пизоотической оценке стад крупного рогатого скота, привитого казанной вакциной.

Предложена для широкого производственного испытания в целях овышения эффективности существующей системы противобруцел-езных мероприятий новая вакцина из слабоагглютиногенного штамма $.abortus 75/79-А. ~ э

1.5. Апробация работы

Материалы диссертационной работы были доложены на зас( даииях ученого сонета Алтайской научно-исследовательской ветс ринарной станции (Барнаул, 1981-1995), Всесоюзных, Вссроссш ских и региональных совещаниях-семинарах исполнителей НИ1 но проблеме бруцеллеза (Москиа, 1980, 1981, 1983, 1984, 198^ 1986; Омск, 1986, 1987, 1994, 1995; Кустанай, 1988; Ноносн бирск, 1980, 1981, 1984, 1985, 1986, 1987, 1989, 1993), Всссс юзной научной конференции "Состояние и перснектины научны исследований но диагностике, профилактике бруцеллеза и туберку леза и ме(>ам борьбы с этими болезнями сельскохозяйственны животных (Омск, 1980), Всесоюзной конференции "Актуальны вопросы профилактики бруцеллеза и организации медицински помощи больным" (Новосибирск, 1989), Республиканском сове щаиии ветсиециалистов (Челябинск, 1989), научно-практическо конференции "Основные научные исследования по проблеме ту беркулеза и бруцеллеза сельскохозяйственных животных, проф илактика и организация мероприятий но ликвидации болезней регионе Сибири (Новосибирск, 1995).

1.6. Публикация результатов исследований

По теме диссертации опубликовано 27 работ в материала: Всесоюзных научных конференций, сборниках трудов ИЭВСиДЕ СО РАСХН, СИБНИВИ, журнале "Ветеринария" и других на учных и научно-производственных изданиях.

1.7. Внедрение результатов исследований

Оптимизирована и внедрена в хозяйствах Алтайского кра! система нротивобруцеллезпых мероприятий, включающая рацио нальные схемы использования вакцины из слабоагглютиногснноп штамма В.а1юг1ия 82 и {>азработанный комплекс диагностически) исследований но эпизоотической оценке стад крупного |х)гатогс скота, привитого указанной вакциной. Последний внедрен и ш других территориях Сибири и Дальнего Востока.

Предложена и утперждена Департаментом ветеринарии СХиП РФ для широкого производственного испытания новая шина из штамма B.abortus 75/79-А.

Результаты исследований учтены при разработке норматив -[X документов, утвержденных на союзном и российском уровне, ■акже методических рекомендаций и планов по профилактике и квидации бруцеллеза крупного рогатого скота в Алтайском крае геспублике Алтай.

1.8. Основные положения, выносимые на защиту

Результаты изучения биологических свойств вакцины из сла-1гглютиногенного штамма B.abortus 82, разработки рациональ-х схем ее использования на крупном рогатом скоте и яках в ювиях Алтайского края и республики Алтай, комплекса диаг-:тических исследований по эпизоотической оценке стад крупнорогатого скота, привитого указанной вакциной.

Результаты изучения новой вакцины из слабоагглютиногенно-штамма B.abortus 75/79-А.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследований

Работа выполнялась в течение 1977 - 1995 гг. в Алтайской 4ВС, хозяйствах и госветучреждениях Алтайского края и рес->лики Алтай.

Ретроспективный анализ эпизоотической ситуации бруцеллеза озяйствах Алтайского края и республики Алтай проводили на ове статистических материалов ветеринарных учреждений, а также [ных собственных исследований за 1936-1995 гг.

Подробно проанализированы материалы по 439 фермам 209 яйств 18-ти районов.

Непосредственному обследованию с целью изучения противо-[зоотической эффективности вакцины из штамма B.abortus 82 ;вергнуто 95 ферм 74-х хозяйств 17-ти районов.

Экспериментальное изучение реактогенности и эпизоотичес-

кой безопасности вакцины из слабоагглютиногенного штамма В .abc tus 82 осуществлено в производственных условиях на 47 коровах 49 телках.

Разработанный комплекс диагностических исследований но эи зоотической опенке стад крупного рогатого скота, привитого ва циной из штамма B.abortus 82, аиробирован и внедрен с 1976 i 1994 гг. в 165 хозяйствах.

Комплексному исследованию на бруцеллез подвергнуто 59Î пробы сывороток крови (РА, РСК с S- и R-антигенами, РБГ пластинчатая РА с антигеном для КР с молоком) и 10810 ир< молока в КР, из них 433 - в модификации П.Н.Жованика В.В.Литвиненко (1964).

По результатам комплексных исследований с диагностическс пелыо убито 382 головы крупного рогатого скота; биоматери, кусочки внутренних органов и лимфоузлов (всего по 20 объект« от каждого животного) исследован бактериологически и биолоп чески но общепринятым методикам (использовано 673 морею свинки).

Изучено по общепринятым методикам 444 культуры бруцел выделенных но результатам бактериологических исслсдошний, пр< веденных в Алтайской НИВС и ветлабораториях.

При изучении основных биологических свойств нового ва1 цинного штамма использовали 386 морских свинок и 358 нш крупного рогатого скота.

Иммунизацию, зажжение животных в целях проверки имм; нитета, отбор биоматериала для бактериологического исследов, ния, посевы на питательные среды, типизацию выделенных кул] тур проводили по общепринятым методикам. Для заражения npi меняли вирулентные штаммы 54 и 54М (ВГНКИ).

Методики отдельных экспериментов, научно-производстве! ных опытов и наблюдений изложены в соответствующих раздел; диссертации.

Отдельные исследовании и раз|>аботки выполнены cobmccti с сотрудниками ВГНКИ (К.В. Шумилов, Н.А. Михайлов, А.Р 6

лиманов, В.З. Бондаренко, В.В. Калмыков, Л.П. Мелышчен-)), ИЭВСиДВ (H.A. Косилов, Л.В. Дсгтяренко, С.К. Димов, .Г. Хлыстунов, Г.С. Корж), Алтайской НИВС (В.Н. Морков-ша, E.H. Солнцева, В.В. Разумовская, В.А. Степнов, Т.В. Боша) и другими научными сотрудниками и ветспециалистами. [ифровой материал обрабатывали по методике, описанной Г.Ф. акиным (1980).

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Ретроспективный анализ эпизоотической ситуации бруцеллеза крупного рогатого скота в Алтайском крае до применения вакцины из слабоагглютиноген-ного штамма B.abortus 82

Бруцеллез крупного рогатого скота в Алтайском крае впервые э1л зарегистрирован в 1930 году.

Как удалось выяснить из архивных документов, с 1936 по МО гг. число неблагополучных пунктов возросло с 339 до 848, эличество заболевших в течение года животных - с 3116 до 18544.

К 1940 г. из выявляемых с помощью серологических исследо-ший реагирующих животных и клинически больных было созда-э 227 бруцеллезных изоляторов. К 1955 г. их стало уже 496. исло неблагополучных пунктов на данную дату составляло 1151.

С 1955 по 1974 гг. в хозяйствах края в комплексе противобру-гллезных мероприятий наряду с диагностическими исследования-и (РА и РСК) стали применять вакцину из штамма B.abortus 19 iK на молодняке, так и на взрослом скоте, в том числе многократ-

К 1974 г. за счет широкого применения вакцины из штамма ) удалось резко уменьшить число неблагополучных пунктов (с 151 до 102 - более, чем в 11 раз).

Из 496 бруцеллезных изоляторов, имевшихся к 1955 г., за 4 >да с начала использования вакцины из штамма 19 было "оздо-эвлено" 319, в том числе путем убоя всех больных коров -

1.66.

[х полная ликвидация в крае была завершена в 1966 г.

Заболеваемость к 1974 г. удалось снизить но сравнению 1955 г. в 4,2 раза (с 2,1 до 0,5 %).

Однако нельзя не допускать, что в числе положительно реаг ровавших на бруцеллез животных значительная часть имела ва цинную природу реакций. Надежных же способов их дифференц ации не было.

Именно но этой причине в ветеринарную практику была пре, ложена вакцина из слабоагглютиногенного штамма B.abortus ( (K.M. Салмаков).

2,2.2. Противоэпизоопшческая эффективность вакцины из штампа 82 при бруце.иезе крупного рогатого скота и яков и совершенствование схем ее использования в системе пропшвобруце.глезных мероприятий

Вакцину из слабоагглютиногенного штамма B.abortus 82 ста; применять в крае с августа 1974 г. для прививки телок в 4-' месячном возрасте и перед осеменением, а также коров (в неблаг< иолучных и угрожаемых хозяйствах).

Реиммунизации коров за весь период с 1975 по 1995 гг. пр< вели 2-3 раза с интервалом 2 года, в отдельных районах - до 5 более раз.

Количество неблагополучных пунктов за 9 лет (1975-1983гг. уменьшилось в 20,5 раз (с 82 до 4).

Следует отмстить, что в 1976 г. количество неблагополучны пунктов но сравнению с предыдущим 1975 г. возросло (с 82 д 91), а затем стало резко уменьшаться. Это можно объяснить з счет возможности использовать провоцирующие свойства вакциш из штамма 82, осуществляя поствакцинальные диагностически исследования. За первые 7 лет в крас всего было привито вакци ной из штамма 82 первично 1 933 214 голов крупного рогатом скота, в том числе по фону штамма 19 - 201 362; по неиммунном; фону - 1 731 852 головы.

Оценку эффективности различных способов и методов оздо ровленин неблагополучных ферм от бруцеллеза крупного рогатом

;ота проводили на 95 фермах 74 хозяйств в составе 17 районов »я.

Оздоровление неблагополучных пунктов осуществляли двумя гтодами:

— полная замена скота здоровыми привитыми вакциной из тамма 82 телками и нетелями;

— систематическое исследование и выделение реагирующих ивотных; применение вакцины из штамма 82, в том числе на (рослом поголовье;

Результаты приведены в таблице 1, из которой видно, что из ) ферм оздоровление оказалось эффективным на 69 (72,6%).

Из них в 17 (18%) оно достигнуто путем полной замены >головья дважды вакцинированными телками из благополучных ерм без последующих прививок коров. В 52 (54,6%) случаях -ггем систематического исследования маточного поголовья и ис->льзования в комплексе противобруцеллезных мер вакцины из тамма 82 как на молодняке (двухкратно: первый раз в 4-5-ме-[чном возрасте, повторно - за 2-3 месяца до осеменения), так и I коровах.

На 26 фермах из 95 (27,4%) оздоровление методом система-иеского исследования в сочетании с применением вакцины из тамма 82 оказалось неэффективным. Из-за непрекращения вы-мения положительно реагирующих (за весь период оздоровления лявлялось от 29 до 38% из числа имевшихся) была осуществле-I замена оставшегося поголовья здоровыми привитыми вакциной ) штамма 82 телками и нетелями.

Анализ также показал, что эффективность оздоровления и даль-:йшее благополучие оздоровленных ферм зависят не только от лбора способа, но и многих факторов, которые в какой-то мере сазывают свое влияние как на сроки оздоровления, так и на даль-:йшее благополучие: недостаточные уровень и полнота проведе-ш организационно-хозяйственных, специальных ветеринарно-са-ггарных мер при оздоровлении, в частности, использование телок : больных коров для воспроизводства стада, некачественные са-

9

Таблица 1

Результаты оценки эффективности различных способов оздоровления хозяйств Алтайского края

от бруцеллеза крупного рогатого скота

Район

Количество

хозяйств/ ферм

Метод оздоровления Эффективно оздоровлено

полная замена скота путем систематических исследований с применением вакцины шт 82 в том числе полной заменой скота путем систематических исследований с применением вакцины шт. 82

по фону шт. 19 без фона

Нет эффективности при систематических исследованиях с применением вакцины шт. 82

Баевский 3/9 1 8 7 1 1 6 2

Благовещенский 3/3 - 3 2 1 - 1 2

Завьяловский 3/3 - 3 3 - - 2 1

Каменский 7/9 - 9 9 - - 6 3

Краснощековский 5/7 1 6 4 2 1 5 1

Крутихинский 5/6 3 3 3 - 3 3 -

Павловский 6/7 2 5 5 - 2 5 -

Панкрушихинский 4/7 - 7 7 - - 2 -

Первомайский 6/7 1 6 5 1 1 3 3

Ребрихинский 6/6 1 5 - 5 1 3 2

Смоленский 3/4 1 3 3 - 1 2 1

Солтонский 3/6 5 1 1 - 5 1 -

Тальменский 5/5 - 5 4 1 - 5 -

Тюменцевский 4/4 - 4 2 2 - - 4

Хабарский 3/3 - 3 2 1 - 2 1

Шипуновский 4/4 1 3 .1 2 1 2 1

Чарышский 4/5 1 4 2 2 1 4 -

ИТОГО 74/95 17 78 60 18 17 52 26

/400/\ 1С Л \ /Л-» лл/\

« о . и

итарныи ремонт и санация территории ферм, неполный охват ди-ностическими исследованиями скота общественного и ипдивиду-кыюю пользования и др.

За весь период оздоровления края от бруцеллеза в одном нун-ге вновь возникало неблагополучие 4 раза, в двух - но три раза, четырех - но два раза. Причиной рецидивов явились прежде :его оставшиеся для воспроизводства телки, родившиеся от боль-ых матерей. Вот типичный убедительный пример на этот счет. В жхозе "Чуманский" (Верх-Чуманское отделение) нетель № 3339, вдившаяся от больной коровы № 301, реагировавшей на бруцел-гз в РА - 400 МЕ, и в РСК - 1:10, абортировала через два года осле оздоровления фермы. Бруцеллезная этиология аборта была одтверждена бактериологически. Данная нетель отрицательно ре-гировала перед первой вакцинацией в 4-5-месячном возрасте и еред ревакцинацией за два месяца до случки. Аналогичные факты аблюдали в ряде других хозяйств.

Причиной возникновения новых неблагополучных пунктов на юне полного оздоровления хозяйств края от бруцеллеза явились онтакт на выпасах с неблагополучным поголовьем соседнего регина, завоз возбудителя бруцеллеза с больными животными инди-идуального пользования из соседней республики (Казахстан).

При этом следует отметить, что в угрожаемых и оздоровлен-ых стадах далеко не всегда соблюдался принцип перманентного ммунитета, который, по данным И.А. Косилова, С.К. Димова и ругих исследователей, обеспечивает гарантию недопущения эндо-ли экзоинфекции.

Так, в случае соблюдения интервала между реиммунизациями оров в 1-2 года в 20 неблагополучных хозяйствах четырех рай-нов края (24,1 тыс. коров) оздоровление достигнуто в сроки от дного года до трех лет. При этом количество реагирукяцих за счет еиммунизаций сократилось за этот период в среднем в 50 раз (с 0,0 до 0,2%). Рецидивов инфекции не наблюдали.

При бессистемных прививках коров (интервал между реимму-(изациями достигал три года и более) на семи оздоровленных фер-

мах наблюдали неоднократные рецидивы, а на одной - вспыш болезни, связанную с заносом возбудителя извне.

В последующем в крае сложилась определенная схема прим нения вакцины из штамма 82 на крупном рогатом скоте. Основ» этой схемы было создание единого иммунного фона у всего моло няка, а затем поддержание его на оптимальном уровне у коров неблагополучных и угрожаемых зонах за счет реиммунизаций интервалом два года.

С начала применения вакцины из штамма 82 и целом но к(>а количество положительно реагирующих на бруцеллез снизилось

13 раз.

Достижению положительных результатов но оздоровлению и благополучных хозяйств края от бруцеллеза способствовали:

— ежегодное уточнение эпизоотической ситуации хозийс края по бруцеллезу - конкретно но каждому хозяйству, отделенш ферме, путем проведения комплексных исследований;

— запрещение организации изоляторов и пунктов иередерж! больных животных, сдача их на убой не позже 15-20 дней нос. выявления;

— содержание неблагополучных 1уртов скота в строго изол: рованных условиях на стойловом содержании, в летних лагеря или на ограниченных участках пастбищ до их полного оздоровл» ния или замены путем сдачи на мясокомбинат;

— изолированное вьцищиванис молодняка и сдача на уб( телок, родившихся от больных бруцеллезом коров;

— замена неблагополучных стад но бруцеллезу телками w нетелями из благополучных хозяйств, привитыми дважды вакш ной из штамма 82;

— создание единого иммунного (pona но бруцеллезу на все поголовье крупного рогатого скота края путем применения вакш ны из штамма 82;

— надежное обеззараживание молока и молочных иродукто выходящих из неблагополучных пунктов;

— проведение комплекса мер по санации территорий фер!

шитарного ремонта и многократной дезинфекции, дератизации, 1зинсекпии животноводческих помещений в летний период;

Также результативно завершилась работа по оздоровлению от эупеллеза яков девяти хозяйств Кош-Агачского района Респуб-*ки Алтай с использованием вакцины из штамма 82.

За 2 года до начала прививок указанной вакцины среди взросло поголовья яков было выделено от 4,2 до 5,1% реагирующих ивотных и 2% среди молодняка текущего года. Наблюдали и юрты бруцеллезного происхождения. Следует отметить, что ра-;е яков прививали вакциной из штамма 19 (ежегодно до 1976 г. ммунизировали нараждающийся молодняк). После сдачи на убой эложительно реагирующих на бруцеллез животных по результа-1м двух последних исследований все поголовье яков было привито шинной из штамма 82 в той же дозе, что и крупный рогатый ют (100 млрд м.к.) одномоментно в июле 1976 г. Прививали не элько общественное поголовье, но и скот частного сектора.

Нарождающийся молодняк ежегодно исследовали на бруцел-гз в РА и РСК и отрицательно реагирующих прививали вакци-эй из штамма 82.

Число реагирующих животных при исследовании на бруцеллез течение одного года после первой вакцинации заметно возросло з 19,3%, что объясняется, видимо, наличием в стадах бруцелло-эсителей, выявлению которых способствовало введение вакцины з штамма 82 (провокация). У некоторых реагирующих животных

и Т

огла иметь место серопозитивность вакциннои природы. 1 ак, при актериологических исследованиях биоматериала от убитой с диаг-остической целью матки, реагировавшей через год после вакцина-ии в РСК 1:10, включая биопробу на морских свинках, культуры руцелл выделить не удалось.

Подтверждением иоствакцинального характера реакций у яков ожет служить также выделенная культура В.аЬогШ-ч вакцинного гтамма 82 из органов реагировавшей положительно матки (№ 542) из контрольной группы колхоза "1 (м. Калинина" через два >да после прививки. Перед убоем у данного животного РА была

13

отрицательной, РСК со стандартным антигеном - 1:5 (++++), R-16/4-антигеном ИЭВСиДВ - 1:10 (++ + + ).

Таким образом, двукратная иммунизация яков вакциной i штамма 82 с вынужденной целью но фону штамма 19 с интерв лом между прививками 2 года и ежегодная вакцинация нарождав щегося молодняка способствовали улучшению эпизоотической с: туации бруцеллеза и обеспечили практическое оздоровление небл гополучных стад яков восьми хозяйств в течение четырех л (19771980 гг.). Об этом свидетельствуют материалы таблицы Результаты последующих наблюдений подтвердили их благопол; чие.

Особого внимания заслуживает проблема энизоотическ( оценки стад крупного рогатого скота, привитого вакциной из штам! 82 на благополучных и оздоровленных фермах, где имеет мес выявление небольшого количества положительно реагирующих ] бруцеллез животных. Результаты ее изучения изложены в соо ветствующем разделе диссертации.

2.2.3. Эпизоотическая оценка по бруце.иезу стад крупного рогатого скота, привитого вакциной из слабоаг-глюпшногенного штамма В.abort us 82

В процессе применения вакцины из штамма 82 в различна но эпизоотической ситуации хозяйствах наблюдали аборты как бр; целлезной, так и вакцинной этиологии, иоствакцинальныс серол( гические реакции, в том числе и в отдаленные сроки после нрим! нения вакцины из штамма 82.

В связи с этим возникла необходимость изучения отдельна свойств вакцины в производственном опыте в благополучных i бруцеллезу хозяйствах.

Был поставлен производственный опыт на 47 коронах и А головах молодняка 10-12-месячного возраста в двух хозяйства где ранее животных никакой противобруцеллезной вакциной ] прививали. Непривитое поголовье, контактирующее в 1уртах с npi витыми, осталось конт(м>льным.

Таблица 2

Результаты

Серологических исследований сывороток крови яков неблагополучных по бруцеллезу хозяйств Кош-Агачского района Республики Алтай до и после прививок вакцины из штамма 82

Наименовие Исследовано Исследовано Исследовано

хозяйства перед вакцинациеи после вакцина- после ревакцинациеи

ции

1975 1976 1977 1979 1980

всего реаг-ло всего реаг-ло всего реаг-ло всего реаг-ло всего реаг-ло

Им. Калинина 1139 8 1327 48 1681 380 796 3 1155 1

Путь к коммунизму 230 - 799 34 444 11 1005 14 594 -

Им. Чапаева 109 7 565 9 1059 76 578 2 552 -

Кызыл-Чолмон - - 1101 76 1165 152 539 1 612 1

Кызыл-Маапы 1032 51 2267 137 1042 229 633 2 1112 -

XXI Партсъезда 230 9 658 15 704 72 717 4 1076 1

50-летия СССР 994 12 2379 76 1403 234 786 - 999 -

Им. Ленина 233 6 610 46 112 - 768 1 763 —

ИТОГО по району

3967 140 3,5%

9706 441 4,5%

7610 1154 15,1%

5822

26

6863

0,4%

0,04%

Примечание: вакцинация была проведена в 1976 году, ревакцинация — в 1978 году.

Серологические исследования сывороток крови у молодняка коров проводили через 15, 30 дней и 3, 6, 9 месяцев. За группам коров наблюдения продолжили до 24 месяцев со дня их вакниш ции в РА, РБП, РСК с S- и с R-антигенами, исследуя через 1Í

14, 15, 18, 21 и 24 месяца.

Результаты серологических исследований показаны в таблиг 3, из которой видно, что у молодняка поствакцинальные реакци отмечали только в группе опытных телок при исследовании чере

15, 30 дней после иммунизации, а при исследовании с 3-х до 9-т месяцев (срок наблюдений) реагирующие животные не регистру ровались. У телок контрольной группы ни в одни сроки исследова ния реагирующих выделено не было.

В группе подопытных коров реакции проявились с 15 до 3 дней, а при исследовании через 3 и до 12 месяцев реагирующих и выделено. Начиная с 14 месяцев после вакцинации появились pea гирующие животные как в опытной, так и в контрольной группе. 1 опытной группе из 47 исследованных выделено реагирующих (19,1%), а в контрольной из 1148 исследованных реагировало 6 (5,6%).

При диагностическом убое, бактериологическом исследовани и биопробе из материала двух животных в опытной и четырех -контрольной группе культуру бруцслл выделить не удалось. Таки] образом, наличие миграции вакцинного штамма 82 от привиты животных к интактным можно обосновывать по нашим материала! лишь возникшими положительными серологическими реакциями последних.

В производственных условиях наблюдали приживаемость вак цинного штамма 82 у коров после вакцинации и ревакцинации в I1 случаях - от 2 до 12 месяцев, в 5 случаях - через 23-25 месяцев в 2 случаях - через 36 и 57 месяцев. При этом в 15 случаях из 1 вакцинный штамм сохранил свои основные свойства.

Нами в течение 1981-1986 гг. проведен комплексный анали эпизоотического состоянии но бруцеллезу 246 хозяйств (438 ферм в 18 районах края. 16

гаолица з

Динамика серологических реакций у опытных и контрольных животных хозяйств Табунского района

Сроки Результаты исследования Результаты исследования коров

исследований 10-12-месячных телок

опытная группа контрольная группа опытная группа контрольная группа

РА РСК РДСК РБ T РА РСК РДСК PBT РА РСК РДСК РБТ РА PCK РДСК РБТ

РСК-82 РСК-82 РСК-82 РСК-82

До вакцинации 49/- 49/- 49/- - 48/- 48/- 48/- - 47/- 47/- 47/- - 47/- 47/- 47/-

Через 15 дней 49/26 49/6 40/- 40/- - 47/12 47/- - - 43/- 43/- - -

30 дней 49/2 49/8 - - 44/- 44/- - 46/1 46/1 - - 46/- 46/- - -

3 месяца 49/- 49/- - 40/- 40/- - 43/- 43/- - - 38/- 38/- - -

6 месяцев 49/- 49/- - 41/- 41/- - 40/- 40/- - - 37/- 37/- - -

9 месяцев 49/- 49/- - 42/- 42/- - 40/- 40/- - - 36/- 36/- - -

12 месяцев опыт прекращен 32/- 32/- - - 27/- 28/- - -

14 месяцев 22/- 22/1 2212 221- 35/- 35/1 35/- 35/1

15 месяцев 16/- 16/- 16/2 16/- 26/- 26/1 26/2 26/1

18 месяцев 26/1 26/1 26/- 26/4 77/- 77/- 77/1 77/4

21 месяц 25/- 25/2 25/2 25/1 688/- 688/2 495/24 25/1

24 месяцев 19/- 19/1 19/3 19/- 322/- 322/1 322/22 120/3

ИТОГО 294/28 294/14 49/- - 255/- 255/ - 48/- - 403/14 403/6 155/9 108/5 1422/- 1422/5 1002/49 283/10

Примечание: числитель — количество исследованных животных, знаменатель — количество реагировавших животных.

В результате оказалось, что неблагополучными за этот нерио официально являлись 10 ферм (6 - с выделением реагирующих о 10 до 30%, 4 - свыше 30%).

23 фермы на момент обследования были отнесены к разряд оздоровленных от бруцеллеза с помощью вакцины из штамма 81 При этом на 20 из них отметили в последующем выделение пол ожительно реагирующих в количестве до 5% из числа исследован ных в течение года, а на трех - свыше 5%. При этом из них на с 1987 но 1995 гг. наблюдали от одного до трех рецидивов болез ни.

Из остальных 405 благополучных цо бруцеллезу ферм на 16 ферме вакцина из штамма 82 применялась только на молодняке однако на 82 из них у выращенных из этого молодняка коро появились единичные положительно реагирующие (до 0,08%) .

Из 244 благополучных по бруцеллезу ферм, где на корова применялась вакцина из штамма 82, на 82 фермах реагирующих и выявлено, а па остальных 162 - отмечали выделение реагирующи (на 136 фермах - до 5% и на 26 - более 5%).

Таким образом, в самых различных по эпизоотической ситуа ции категориях хозяйств как на молодняке крупного рогатого ско та, так и на поголовье коров неблагополучных и угрожаемых н бруцеллезу ферм нами отмечено, что, оказывая положительны эффект при оздоровлении неблагополучных но бруцеллезу ста/, ирофилактируя заболевание в угрожаемых зонах, вакцина из штамм 82 может вызывать и некоторые отрицательные последствия, св>: занные прежде всего с абортами (после применения вакцины н неиммунном фоне у животных наблюдали от 2 до 12% абортов) возможностью длительной приживаемости штамма в организм коров, нестабильностью его свойств, в частности, способность! трансформации антигенной структуры (RS-S). Эти обстоятельств значительно осложняют диагностику, особенно в благополучных i оздоровленных стадах.

В связи с этим с целью выяснения причин серологически реакций на бруцеллез у животных в благополучных и оздоровлен 18

>1Х стадах (фермах) после применения вакцины из штамма 82 1ми (совместно с сотрудниками ИЭВСиДВ) в 1981 г. разработан >мплекс диагностических исследований, позволяющий более объ-стивпо дать эпизоотическую оценку как отдельным животным, 1К и стадам, в которых выделяются реагирующие животные. Пос-мьку проблема дифференциальной оценки положительных серо-жических реакций на бруцеллез существовала весьма широко, <азанный комплекс был нами совместно с сотрудниками ИЭВ-иДВ и ВНИИБТЖ доработан и предложен для эпизоотической ¿енки по бруцеллезу стад крупного рогатого скота, привитого вак-дной из штамма 82, на территории РФ.

Схема комплексной дифференциальной диагностики включала:

1. Эпизоотологическое обследование ферм, хозяйства. Уточнял эпизоотическую ситуацию фермы по бруцеллезу до применения 1кцины, возможность заноса инфекции извне путем ввода живот-мх или же контакта с неблагополучным поголовьем, сроки появ-;ния реагирующих животных, выраженность серологических ре-<ций (титры РА и РСК), их количественные соотношения и ди-шику проявления; аборты, результаты бактериологического ис-\едования плодов, серологического исследования поголовья дру-IX ферм и личных подсобных хозяйств. Выясняли сроки и крат-ость вакцинации животных разных возрастных групп.

2. Серологические исследования. Для эпизоотической оценки гад сыворотки крови и молоко от реагирующих коров исследовали овторно с использованием стандартных (РА и РСК с единым руцеллезным антигеном) и дополнительных тестов: РСК с И-тгигеном ИЭВСиДВ, 1М096 ВНИВИ (г. Казань), а также сследование молока по кольцевой реакции. Сыворотки крови со семи диагностикумами исследовали до предельного титра. По результатам комплексных исследований для диагностического убоя гбирали животных, давших положительную реакцию в РА и РСК Б-антигенами в более высоких титрах, чем с И.-антигеном. При аличии положительной кольцевой реакции с молоком все живот-ые подлежали обязательному убою независимо от показаний дру-

19

гих реакций.

3. Бактериологическое исследование (биоматериал: лимфат* ческие узлы головы, надвымянные, предлонаточные, паховые, тг зовые; кусочки печени, почек, селезенки; изолированный участс беременной матки), включая и биопробу.

4. Дифференциация выделенных культур и оценка энизскт ческой ситуации. Стадо признавали неблагополучным по бруцеллс зу:

— в случае выделения культуры с одним из признаков по; евого штамма: рост в анаэробных условиях, появление роста г ранее чем через 8-10 суток, отрицательная проба с трипофлавино? пластинчатая РА с R-бруцеллезной сывороткой;

— при отрицательном результате бактериологического иссл< дования: но наличию титра РА с S-антигеном 40 ME и выик отсутствии R-агглютининов у зараженных морских свинок; пр наличии у коров положительной кольцевой реакции с молоком (1:1 и выше).

На такое стадо накладывали ограничения но бруцеллезу и мс роприятия в нем проводили в соответствии с действующей иг струкцией.

При отсутствии показателей, подтверждающих наличие бр> целлеза в стаде, дальнейшую работу проводили в следующем пс рядке: ежемесячно исследовали молоко в кольцевой реакции, ежек вартально проводили исследование сывороток крови в PA, РС1 до получения двукратного отрицательного результата.

В дальнейшем контроль благополучия стада осуществляли п> тем ежеквартального исследования молока кольцевой реакцией двукратного исследования (весной и осенью) сывороток крови РА и РСК.

За период работы с 1976 по 1994 гг. нами в целях изучени причин серологических реакций и эпизоотической опенки ферм и бруцеллезу комплекс диагностических исследований внедрен в 16 хозяйствах края. Проведено комплексное исследование 5 962 про сывороток крови и 10 810 проб молока от положительно реагир) 20

щих на бруцеллез животных, из них 433 - в модификации.

По результатам проведенных комплексных исследований уби-) с диагностической целью 382 головы крупного рогатого скота, i которых у 126 (33%) выделены при бактериологическом иссле-эвании и биопробе культуры бруцелл.

Идентифицировано 444 культуры, в том числе 318 выделен-íix и присланных для исследования районными ветеринарными Мораториями. По результатам идентификации 168 культур отне-;ны к полевому штамму B.abortus (37,8%), 143 - к вакцинному тамму 82 (32,2%), к диссоциантам - 21 (4,8%). Следует отме-1ть, что вакцинный штамм 82 выделяли у животных в сроки от 2 э 57 месяцев после прививки.

112 культур (25,2%) были небруцеллезными или не иденти-ицированы в связи с недостаточностью бакмассы или загрязне-

Из 60 районов края с 1975 по 1995 гг. в 15 районах реагиро-шие на бруцеллез среди крупного рогатого скота не наблюдали, [з 45 районов, где отмечено выделение реагирующих, в 12 рай-гах реакции наблюдали на одной ферме, в 10 районах - на двух, в ести - на трех, в одном - на четырех, в трех - на пяти, в двух -

1 шести, в пяти - на семи, в трех - на восьми, в одном - на :вяти, в одном - на десяти и в одном - на двенадцати фермах.

Общее количество положительно реагирующего на бруцеллез >упного рогатого скота по краю снизилось с 1975 по 1995 гг. в 10 13 (с 0,7 до 0,07%).

В 1995 г. в целом по краю положительно реагировало на бру-;ллез 1006 проб сывороток крови привитого вакциной из штамма

2 крупного рогатого скота, в том числе в РА 200 МЕ и выше и СК 1:20 и выше - 139 или 13,8%, абсолютное большинство из >торых (116 или 83,5%) выявлено в неблагополучных хозяйстве, а также среди скота индивидуального пользования в оздоров-:иных районах.

На начало 1996 г. в крае официально зарегистрировано 3 не-\агополучных по бруцеллезу пункта, в марте зарегистрирована

21

еще одна нснышка среди скота индивидуального пользования.

В настоящее время для экспресс-опенки эпизоотической сиг ации бруцеллеза в крае начали использовать РИД с О-ПС-апту геном ИЭВСиДВ (В.М. Чекишев).

Использование разработанного комплекса в масштабах крг дало возможность, с одной стороны, принять оперативные меры проведению в таком стаде необходимых противобруцеллезных мс роприятий в случае подтверждения наличия бруцеллеза.

С другой стороны, в случае выделения культур бруцелл с прг знаками вакцинного штамма или получения отрицательных резул* татов бактериологического исследования, включая биопробу, г допускалось необоснованное объявление неблагополучными таки стад, а, значит, П[)ед отвращался зшчитсльный экономический ущер< Рассуждая о причинах возникновения у животных в благош лучных по бруцеллезу стадах положительных серологических рсак ций, имеющих, по результатам наших исследований, вакцинну! природу, следует отмстить основные из них: отсутствие должног учета проводимых прививок, неполный охват ими стада, бескои трольное перемещение привитого в разные сроки скота, несоблю деиие оптимальных интервалов между вакцинацией и рсвакциш цией, исследование на бруцеллез в период глубокой стсльност животных и нарушение оптимальных с^хжов исследований живот ных после вакцинации.

По нашим наблюдениям, се(х »логические реакции у привиты животных многих ферм проявляются в основном в РСК в невысо ких титрах (1:5, 1:10), которые, как правило, при повторных иссле довапиях у животных или снижаются или же полностью выпадают В этих хозяйствах в довольно короткие сроки достигают двух от рицательных результатов исследований по стаду (ферме).

2.2.4. Результаты изучения новой вакцины из с.шбоагглю-тиногенного штамма ВмЬоМю 75/79-А в жеперимен-тальных и производственных условиях В благополучном по бруцеллезу .молочном комплексе совхоз «Сашшковский» Первомайского (>айона Алтайского края при пла 22

>вых серологических исследованиях коров в отдаленные сроки >сле иммунизации вакциной из штамма 82 были выделены два ивотных, реагирующих на бруцеллез в диагностических титрах со андартными антигенами в РА и РСК.

Одна из них - корова по кличке "Нежная" (№ 07378), 1972 да рождения, была привита первый раз вакциной из штамма 82 ).12.1974 г., ревакцинирована 16.06.1976 г. Другая корова "Бы-ша" (№ 06724), 1971 года рождения, была привита первый раз 1КЦИН0Й из штамма 82 20.01.1975г., но ревакцинации в последу-щем не подвергалась.

С целью дальнейшего наблюдения за характером реакций у •их животных в динамике с разрешения отдела ветеринарии края i оставили в хозяйстве.

Реакция агглютинации (РА) у коровы "Нежная" в течение :тырех исследований при первом была в титре 50 МЕ, при вто-)м отрицательной, при третьем и четвертом - в титре 100 МЕ. У >ровы "Былина" из пяти исследований первый раз РА была в 1тре 50 МЕ, второй - отрицательная, третий -200 МЕ, четвер->ш - 100 МЕ, пятый - опять 200 МЕ.

Реакция связывания комплемента (РСК) со стандартным S-иигеном у коровы "Нежная" в первые три исследования была в 1тре 1:10 и при четвертом исследовании - 1:20. У коровы "Были-Г она в динамике оказалась в более высоких титрах - от 1:10 до 1280.

РСК с R-антигеном у коровы "Нежная" была в динамике в гграх от 1:5 до 1:160, а у коровы "Былина" - от 1:10 до1:1280.

Коров убили и провели бактериологическое исследование био-атериала (лимфоузлы и внутренние органы), при этом у обоих ивотных из надывмянных лимфоузлов на седьмые сутки без до-тупа воздуха выделена культура B.abortus, а у коровы "Нежная" ^льтура выросла и в пробирке с агаром с доступом воздуха.

Результаты изучения культуральных и биохимических свойств грвичных культур выделенных штаммов и их пассажей через моржих свинок показали, что они, как исходная, так и полученная из

23

органов и лимфоузлов пассажированной морской свинки, но ос новным свойствам были однородны.

Однако для дальнейшей работы была оставлена культура игга\ ма 75/79-А от коровы "Нежная", как наиболее стабильная.

Предварительно нами была изучена на 8 беременных здорс вых морских свинках безвредность штамма путем введения суспег зии двухсуточной культуры в возрастающих дозах (1 млрд, 2 млр; 7,5 млрд и 10 млрд м.к.). Исследования подопытных животных и бруцеллез проводили через 15, 30, 60 суток после их иммуниза ции.

За период наблюдения ни в одном случае абортов у беремен ных морских свинок не наблюдали, а при убое извлечено 26 виол не созревших плодов.

Сравнительные данные патоморфологических изменений орга нов и лимфоузлов у морских свинок, привитых вакцинами из штам мов 75/79-А и 82, в сравнении с зараженными вирулентным штам мом В.abortus 54, свидетельствуют о том, что как штамм 75/79 А, так и штамм 82 не вызывают характерных патологических из менений в органах. У животных, зараженных штаммом 54, ныра женные изменения, свойственные бруцеллезу, отмечены в печени у двух и селезенке - у трех животных из 10.

Изменения в лимфатических узлах (незначительное увеличе ние и покраснение) штамм 75/79-А вызвал у двух животных и шести (33,3%), из 72 объектов изменения поствакциналыюго ха рактера обнаружены в трех (4,7%). Из восьми животных, имму визированных вакциной из шт. 82, поствакцинальные изменена отмечены у пяти (62%), а из 96 объектов обнаружены изменение в девяти (9,3%). У зараженных штаммом 54 изменения, свой ственные бруцеллезу, отмечены у всех 10 морских свинок (100%) а из 120 объектов изменения обнаружены в 31 (25,8%).

Результаты сравнительной патоморфологической оценки орга нов привитых животных показывают, что у шт. 75/79-А в 2 раз ниже реактогенность, чем у шт. 82.

После изучения безвредности и остаточной вирулентности i

лабораторных условиях но разрешению краевых органов сельского хозяйства и ветеринарии на 19 нетелях 2-3 месячной стельности проведено испытание штамма 75/79-А в сравнении с вакциной из шт. 82 на абортогенность в откормочном колхозе «Им. Калинина» Рубцовского района, благополучном по бруцеллезу, где не приме-¡шлась ранее никакая противобруцеллезная вакцина. После предварительного исследования на бруцеллез девяти нетелям ввели вакцину из шт. 75/79-А (натив1ия) в той же дозе (100 млрд м.к.), что и штамм 82 - 10 нетелям в объеме 5 мл стерильного физраствора. Наблюдения за животными вели до отела.

В результате наблюдений установили, что все 9 нетелей, иммунизированные вакциной из штамма 75/75-А, растелились благополучно, а из 10 нетелей, иммунизированных вакциной из штамма 82, одна (№ 1843) абортировала через 2 месяца после иммунизации, одна (№ 1862) сдана стельной на мясокомбинат по причине заболетния актиномикозом, остальные 8 отелились благополучно.

Работа но дальнейшему комплексному изучению штамма 75 / 79-А проводилась комиссионно с участием сотрудников ВГНКИ, Алтайской НИВС, ВНИИБТЖ, ИЭВСиДВ и УзНИВИ.

Результаты изучения культурально-морфологических, тинкториальных, биохимических, агглютинабельных свойств штамма В.аЬогШ 75/79-А

Исследование проводили в два этапа. Вначале для изучения мазанных свойств были взяты две культуры штамма 75/79-А ¿сходная и полученная после пятого пассажа через организм морс-<их свинок. Свойства этих культур изучали в сравнении с эталонами сериями штаммов В.аЬог1и.ч 19 и В.аЬогШя 82, а также с шрулентным штаммом В.аЬогШэ 54. Во втором этапе опытов было «учено 7 культур штамма 75/79-А, в том числе: исходная, 5-го тссажа через организм морских свинок, а также культуры 1-го, 2-о, 3-го, 4-го и 5-го пассажей через организм телок. В качестве шнтроля использовали эталонные культуры штаммов В.аЬогШй 19,

82 и В.теШегшв И.Е\М.

В результате проведенных исследований было установлено, что исходная культура штамма В.аЬогШв 75/79-А, культура пятою пассажа через организм морских свинок и культуры пяти последовательных пассажей через организм крупного рогатого скота по морфологии и форме расположения в мазках, окрашенных по Грамму и Козловскому, не отличаются между собой.

Штамм хорошо растет на среде с тионином и фуксином (1:50 тыс.), не чувствителен к эритритолу (1 мг/мл) и пенициллину (10 Ед/мл среды), продуцирует сероводород (2,5 - 4 мм). Агглютинируется с Б- и И-бруцеллезными сыворотками. Дает положительные реакции в пробе с акрифлавином. Положительную реакцию термоагглютинации отмечали у культур "исходная", пятого пассажа через организм морских свинок и четвертого через организм крупного рогатого скота.

У культур бруцелл первого второго, третьего и пятого пассажей через организм телок реакция термоагглютинации была отрицательной.

При окраске колоний изучаемых культур по методу Уайт -Вилсона было установлено, что штамм 75/79-А является диссо-циантом, популяция представлена в основном БИ,- и частично Реформами, не образует колоний в чистой Б- или Я-форме. Следует отметить, что культуры первого и второго пассажей через организм крупного рогатого скота по сравнению с другими культурами содержали большее количество ЯБ-форм (65,9 и 68,2%), что свидетельствует о некотором изменении морфологических свойств первых пассажей штамма через организм крупного рогатого скота. Культуры последующих пассажей (3, 4 и 5) по этому показателю соответствуют исходной культуре изучаемого штамма. Эталонные культуры штаммов В.аЬоЛив 19 и B.melitensis ЯЕУ-1 в обоих опытах находились в стабильной 3-форме, а эталонная культура штамма В.аЬогШз 82 в первом опыте, помимо Б И,- и КБ-, содержала колонии в Б- и Я-формах, во втором опыте - только БИ- и И.Б-формы, что является подтверждением его нестабильности на пита-26

ельной среде.

Вирулентные, антигенные (агглюпшногепные) свойства штакна 75/79-А в опытах на морских свинках

Изучение указанных свойств штамма проводили в сравнении о штаммом В.аЬогШя 82 и вирулентным штаммом В.аЬогШя 54.

90 морских свинок иммунизировали взвесью 2-х суточной ага-ювой культуры 75/79-А 5-го пассажа через организм морских пинок в лозах 10, 100, 1000, 10000, 1 млрд м.к. Через 20 и 40 [ней после иммунизации животных убивали для бактериологически) исследования биоматериала на бруцеллез.

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, [то штамм 75/79-А обладает низкими вирулентными свойствами, ак как приживается у морских свинок в дозе 1000 м.к. и выше, пироко {»сселяется в организме только у животных, привитых в [озе 1 млрд м.к. Штамм 82 у отдельных животных приживается в [озе от 10 и выше м.к. На месте введения культур указашшгх нтаммов бруцелл, в лимфатических узлах и внутренних органах фивитых морских свинок видимых патологоанатомических изме-гепий, характерных для бруцеллезной инфекции, не установлено. Индекс селезенки у животных опытных групп оказался практически одинаковым в оба срока исследований (для штамма 75/79-А -,85 и 1,75, а для штамма 82 - 1,99 и 1,83), у животных, заражен-1ых культурой вирулеитиого штамма - значительно выше (2,22 и

К34).

Штамм 75/79-А в опытах на морских свинках оказался неаг-лютиногенным в се{юлогических реакциях с антигенами биофаб->ичного производства. У иммунизированных животных выявились штитела лишь в РСК с И-бруцеллезным антигеном.

В группах морских свинок, иммунизированных культурой штампа 82, часть животных положительно реагировала в РА среди фивитых в дозах от 10 м.к. и выше (в оба срока исследований 1С()ез 20 и 40 дней), другие морские свинки положительно реаги-ювали и в реакциях с Б-бруцеллезными антигенами, и РСК с И-

бруцеллезным антигеном.

Причем, две из трех морских свинок, привитых в дозе 100( м.к., положительно реагировали в РБП, РА (20 и 40 МЕ) и I РСК (1:5 и 1:40) с биофабричным антигеном при отрицательно! РСК с И. - бруцеллезным антигеном.

В контрольной группе все морские свинки, зараженные вирулентной культурой, положительно реагировали в РА только с биофабричным Б-антигеном.

Приживаемость, расселяемость и возможность миграции штдмма 75/79-А

Опыты проведены на 50 морских свинках и 12 телках.

25 из 50 морских свинок были иммунизированы агаровой культурой 5-го пассажа штамма 75/79-А через организм морской свинки в дозе 1 млрд м.к. и содержались вместе с непривитыми (контрольными) 25 морскими свинками в течение четырех месяцев. Животных убивали через 15, 30, 60, 90 и 120 дней после иммунизации, при этом проводили бактериологические и серологические исследования на бруцеллез. В указанные сроки убивали по 5 морских свинок из опытной и контрольной групп.

В опыте на крупном рогатом скоте изучали приживаемость, расселяемость и реактогенность штамма 75/79-А.

15 телок иммунизировали взвесью двухсуточной агаровой культуры штамма 75/79-А (пятый пассаж через организм морской свинки) в физиологическом растворе в дозе 100 млрд м.к. по оптическому стандарту мутности ГНИИСК им. Л.А.Тарасевича. Взвесь бруцелл вводили подкожно в объеме 5 мл в области средней трети шеи.

Через 15, 30, 60, 90 дней после предварительного взятия крови для серологического исследования на бруцеллез животных убивали по 3 головы для проведения бактериологического исследования с целью установления приживаемости, расселяемосги бруцелл и изменений во внутренних органах и лимфатических узлах привитых животных.

Сыворотки крови, взятые перед убоем животных в эти сро$и,

[сследонали на бруцеллез в РБП, РА, РСК с 8-антигенами (ан-иген бруцеллезный единый для РА, РСК, РДСК, антиген бруцеллезный для РБП) и РСК с И-бруцеллезными антигенами.

Бактериологические посевы из биоматериала проводили из 30 |бъектов от каждого животного на питательную среду (по одной [робирке МППГГБ и но две пробирки МППГГА). Посевы ин-:убировали при температуре 37-38 °С в течение 15 дней, во время :оторых дважды орошали агар посевным материалом и 3 раза учи-ывали результаты бактериологических исследований.

Было, в частности, установлено, что штамм 75/79-А расселятся в организме морских свинок в генерализованной форме в те-[ение 60 дней. В более отдаленные сроки культуру штамма выделить не удалось, что свидетельствует об ее элиминации из орга-1изма привитых животных. Возможность миграции штамма не усыновлена. У всех животных контрольной группы были получены ггрицательные результаты при серологическом и бактериологичес-сом исследовании на бруцеллез.

Серологические реакции у крупного рогатого скота, иммуни-шрованного культурой 5-го пассажа через организм морской свин-си штамма 75/79-А, были положительными в течение 60 дней.

При бактериологическом исследовании биоматериала от иммунизированных телок культура штамма 75/79-А была выделеда 1 течение 30-ти дней из лимфоузлов головы, предлопаточного, па-сового и портального. В последующие сроки культуру бруцелл у фивитых животных выделить не удавалось. Серопозитивность в хиагностических титрах сохранялась у привитых телочек в течение 50 дней.

Изучение антигенных и иммуногенных свойств вакцинных штаммов В.аЬогШ$ 57/79-А, 82 и адьювант-вакцины из штампа В.теШепт Н-13

Опыт на морских свинках.

Изучение иммуногенных свойств штамма 75/79-А (исходной культуры и 5-го пассажа через организм морской свинки) прово-

дили на 94 морских свинках в сравнении с культурами вакцинны: штаммов В.аЬогШв 19 и 82 (таблица 4). В каждой опытной групп было по 20 животных, а в контрольной - 14. Морских евино! иммунизировали взвесью двухсуточных агаровых культур в физи ологическом растворю в дозах 1 млрд м.к. для штаммов 75/79-/ исходный и 19, и 2 млрд м.к. для штамма 82 и культуры 5-г< пассажа через организм морской свинки штамма 75/79-А. Чере: 4,5 месяца после иммунизации морских свинок заражали культу рой вирулентного штамма В.аЬоЛив 54 в дозе 100 м.к. Убой жи вотных для бактериологического исследования на бруцеллез прово дили через 35-37 дней после заражения. Инкубировали посевы I термостате при температуре 37-38 °С в течение 20 дней. Диффе ренциацию единичных культур бруцелл, выделенных от животньк опытных групп, от вирулентного штамма проводили на питательной среде в чашках Петри с содержанием 0,5, 5 и 50 ЕД/м> среды натриевой соли бензилпенициллина для штамма 19 и путе\ определения агглютинабельных свойств пластинчатой РА с Б- I И,-бруцеллезными сыворотками для штаммов 75/79-А и 82.

Иммуногенные свойства штамма В.аЬогШэ 75/79-А (культуры 5-го пассажа) оказались более выраженными: 88,8% привиты) морских свинок противостояли заражению вирулентной культурой штамма В.аЬогШв 54.

Иммуногенностъ штамма 82 составила 65% , штамма 19 84,2% а штамма 75/79-А (исходная) - 44,4%. Низкая иммуногенноеп культуры штамма 75/79-А исходного по сравнению с культуро£ 5-го пассажа штамма 75/79-А и штаммом 82 обусловлена, по-видимому, недостаточной дозой вакцины.

Опыт на крупном рогатом скоте.

Опыт проведен на Кара-Кольском отделении совхоза «Мира-билитский» Кулундинского района на 4-х группах телок 15-18-лесячного возраста по 12 голов в каждой (3 - опытные, 1 - кон-

\ Ч/ А ч о и

трольная). /шшотных 1-ои и 3-еи групп иммунизировали взвесыс 2-х суточной агаровой культурой штамма 75/79-А (пятый пассаж

Результаты изучения иммуногенных свойств штаммов бруцелл абортус 75/79-А (исх.), 75/79-А (5-й пассаж), 32, 19 на морских свинках

Таблица 4

Наименование штаммов Доза вакцинации, млрд. м.к. Доза заражения шт. 54, м.к. Количество морских свинок % иммунных Высеяно объектов Выделено культур Индекс инфицирован-ности

в опыте заразилось

всего из них генерал.

75/79-А (исх) 1 80 10 10 4 44.4 180 37 20,5

75/79-А (5 п.) 2 80 2 2 2 ее,8 180 15 8,3

82 2 80 7 3 3 65,0 200 41 20,0

19 1 80 3 2 2 84,2 190 22 11,5

Контроль - 80 14 12 11 - 140 103 73,5

через организм морской свинки) и штамма 82 (эталон КВР 11.08.1983г.) в дозе 100 млрд м.к. в 5 мл физиологического рас твора, 2-ой группы - адъювант-вакциной из штамма "Невский 13", изготовленной 05.1991 г., в дозе 3 мл. Живые вакцины вводи ли подкожно с правой стороны средней трети шеи, а убитую - i область подгрудка. Живыми вакцинами животных иммунизирова ли однократно, адъювант-вакциной двукратно с интервалом 30 дней Животных контрольной группы не иммунизировали. Животньи опытных и контрольных групп содержались в общем гурте. 3« период проведения опыта с 24 июня 1991 по 16 июля 1992 г. п< разным причинам сохранить всех иммунизированных и контроль' ных животных не удалось (часть телок перевели в стадо Kopoi после отела, вынужденно убили при трудных родах, сдали на мясо, комбинат из-за заболевания некробактериозом, некоторые утрат ли инвентарные номера). Поэтому результаты серологических исследований в динамике через 30, 60, 90, 180, 270 дней посл< иммунизации получены по 12-ти телкам в каждой группе, а результаты исследования на бруцеллез сывороток крови перед заражением, через 7, 15 дней после заражения и перед убоем у оставшихся каждых семи животных в опытных и пяти в контрольно! группах.

Результаты серологических исследований опытных и контрольных животных показывают, что все телки, иммунизированные вакциной из штамма 75/79-А, реагировали положительно в РБП i течении 2-х месяцев, в РА через месяц положительные реакцт появились у девяти из 12-ти (средний титр 116 ME), в РСК ( обоими антигенами у 6. Через 2 месяца положительная РА сохранилась только у двух телок, одна из которых реагировала в РСК с S- и R-антигенами и при исследовании через 3 месяца. Пере/ заражением через 350 дней после иммунизации все животные это* группы реагировали отрицательно по всем реакциям.

Mi и от

яшвотные, иммунизированные вакцинои из штамма oZ, реагировали в основном через месяц после вакцинации: в РБП - 1С телок, в РА - 11 (средний титр 75 ME), в РСК с единым антиге-32

юм - 5 в РСК с И-бруцеллезным антигеном - 9. Через 2 месяца юложительпая РБП была у половины животных, в то время как в ЭА и РСК с бруцеллезным антигеном были получены отрицатель-1ые результаты. К 9-му месяцу после вакцинации появилась одна )еагирующая в РСК 1:20. Положительная реакция с Я-антигеном :охранилась при исследовании через 3, 6, 9 и 11 месяцев соответ-:твенно у 3, 6, 3 и 3-х животных.

Все животные, иммунизированные адъютант-вакциной из штампа «Невский-13», через 1 месяц отрицательно реагировали по всем «акциям. Через 1 месяц после ревакцинации все животные пол-)жительно реагировали в РБП, 4 телки - в РА (средний титр 54 ИЕ) и в РСК с бруцеллезным антигеном. Через 6 месяцев 5 елок продолжали реагировать в РБП, 5 - в РА (средний титр (■5,8 МЕ), 7 - в РСК с единым антигеном и все 12 положительно >сагировали в РСК с Я-бруцеллезным антигеном в высоких тит->ах (средний титр 1:34,5). Через 9 месяцев положительная РБП и ЭА (средний титр 54,5 МЕ) сохранились у 4-х животных, РСК с 5-антигеном у 2-х и с Я-антигеном - у 10 (средний титр 1:40).

Перед заражением во всех трех реакциях с Б-антигенами реа-ировала одна корова из семи оставшихся в данной группе (положительная РБП, РА средний титр 22 МЕ, РСК - 1:20). РСК с ^-антигеном у данного животного была положительной в титре :80. Кроме этой коровы, в последней реакции положительно реа-ировали от 1:5 до 1:40 еще 4 животных.

Заражение животных проводили через 350 дней после имму-[изации путем нанесения на конъюнктиву обоих глаз но 0,1 мл 1звсси стандартной культуры контрольного вирулентного штамма Ыюги« 54М ВГНКИ в дозе 15 млн м.к.

Животные контрольной группы отрицательно реагировали пе-

и ^ II

сд постановкой опыта, перед заражением и через / дней после аражения. С 15-го дня появились животные, положительно реаги-ующие в РБП, РА и РСК с единым бруцеллезным антигеном. У ,вух животных реакции появились только перед убоем. С Я-бру-¡еллезным антигеном в РСК животные контрольной группы не

33

реагировали ни в один из сроков исследовании.

Убой и бактериологическое исследование биоматериала из лимфатических узлов и органов от животных опытных и контрольной групп проводили через 39 дней после заражения по общепринятой методике. Результаты опыта приведены в таблице 5.

Из таблицы 5 видно, что вакцина из штамма 75/79-А создала у привитых животных слабый иммунитет (28,6%), такой же процент иммунных наблюдали в группе животных, привитых вакциной из штамма В.abort us 82. Однако индекс инфицированности у коров, иммунизированных вакциной из штамма 75/79-А, был в 2 с лишним раза ниже, чем в группе животных, привитых штаммом 82 (6,1 и 14,3 соответственно).

Что касается иммуногенных свойств инактивированной адъютант-вакцины, то она была несколько иммуногенней, чем предыдущие две вакцины: иммунными оказались 42,8% привитых животных.

Следует также отметить, что в группе животных, иммунизированных вакциной из штамма 75/79-А, у двух коров из пяти

Таблица 5

Результаты изучения иммуногенных свойств противобруцеллезных вакцин в опыте на крупном рогатом скоте через 350 дней после иммунизации

№№ пп Наименование вакцины Количество животных Выделено культур Индекс инфицированности

в опыте иммунных заразилось

кол-во % кол-во %

1. Из шт.75/79-А B.abortus

(5-й пассаж через

морскую свинку) 7 2 28,6 5 71,4 12 6,1

2. Адъювант-вакцина

из шт. B.melitensis

«Невский-13» 7 3 42,8 4 57,2 18 9,2

3. Из штамма

B.abortus 82 7 2 28,6 5 71,4 28 14,3

4. Контроль 5 - - 5 100,0 39 27,8

заразившихся но 2 культуры выделены только из парных лимфоузлов головы (околоушного и подчелюстного - регионарных месту заражения). Еще от трех коров культуры выделены также только из лимфоузлов, но отдаленных от места введения вирулентного штамма, что свидетельствует о генерализованной форме инфекции у этих животных.

В группе коров, привитых вакциной из штамма B.abortus 82, культура вирулентного штамма выделена от пяти из семи, причем у всех заразившихся животных установлена генерализованная форма инфекции. Такая же форма инфекции была установлена и у заразившихся корон, иммунизированных инактшшрованной адъювант-вакшшой.

Изучение оптимальной иммунизирующей дозы штамма B.abortus 75/79-А

Опыт поставили в благополучном но бруцеллезу крупного рогатого скота ОПХ «Им. В.В. Докучаева» и в условиях Алтайской НИВС. Сформировали 4 группы телок (3 подопытные - по 10 животных и контрольная группа - 5 тележ).

После серологического исследования на бруцеллез с отрицательным результатом животных первой группы иммунизировали иатинной вакциной (суспензия двухсуточной агаровой культуры из штамма 75/79-А) в дозе 50 млрд м.к. по стандарту мутности ГНИИСК им. Тарасевича, второй - 100 млрд м.к., третьей - 200 млрд м.к. Животных контрольной группы не иммунизировали.

По истечении 50 суток после заражения 29 подопытных и 5 контрольных (1 голова № 6151 из третьей группы пала по болезни № убоя, бактериологаческий высев не проведен) подвергнуты убою, изято от каждого животного но 21 объекту биоматериала для бак-гсрилогического исследования и посев из каждого объекта произ-неден на одну пробирку бульона (МППГГБ) и две пробирки агара (МППГГА).

Через 4-10 дней после посева проведено два учета роста и прошения агара посевным материалом, через 15 дней проведены

заключительная оценка роста и дифференциация выросших культур с S- и R-бруцеллезными сыворотками. В таблице 6 приведень: результаты проверки иммунитета во всех группах подопытньи животных.

Из органов всех контрольных телок выделены культуры В.abortus 54-М.

Таблица £

Результаты проверки иммунитета у телок 4-месячного возраста, привитых разными дозами (50 млрд, 100 млрд, 200 млрд м.к.) вакцины из штамма В.аЬоКив 75/79-А (5-ый пассаж м.св.) при заражении через 6 месяцев после их иммунизации

№№ пп Доза, млрд. м.к. Количество животных Индекс инфицирован-ности

в опыте иммунных

голов %

1 50 10 9 90 0,48

2 100 10 10 100 -

3 200 9 8 88,8 1,05

4 контроль 5 - - 16,2

По результатам опыта оптимальной для вакцины из штамме 75/79-А можно считать иммунизирующую дозу 100 млрд м.к. обеспечившую 100% иммунитет у крупного рогатого скота пр* искусственном заражении вирулентными бруцеллами через 6 месяцев после их иммунизации.

Изучение реактогекных и абортогенных свойств штамма 75/79-А

Предварительно исследование было проведено на 11 нетелш со сроком стельности 3-4 месяца. Исследовав на бруцеллез серо-магическими методами с отрицательным результатом, их иммунизировали культурой штамма 75/79-А в дозе 100 млрд м.к. в объеме 5 мл подкожно в области средней трети шеи. В период наблю-

дения за животными в течение трех месяцев отмечен аборт у одной нетели через 5 дней после иммунизации. При исследовании сыворотки крови и абортплода бруцеллез был исключен. По-видимому, аборт имел травматическое происхождение.

Дальнейшее изучение абортогенности нового вакцинного штамма осуществляли комиссионно в АО "Притаежное" Тогульского района Алтайского края.

Была изготовлена опытная серия № 1 нативной вакцины из штамма В.аЬоПия 75/79-А. После изучения на безвредность на 10 белых мышах и 5 морских свинках, изучения чистоты (стерильности) вакцины на питательных средах согласно методике ВГНКИ (ФАО/ВОЗ) вакцина признана пригодной для применения на животных.

Для изучения абортогенности вакцины в производственных условиях после ректального исследования на стельность нетелей и коров, была произведена иммунизация коров и нетелей 2-6 месячной стельности вакциной из штамма 75/79-А в 2 срока: первую ¡иртию (123 коровы и 34 нетели) привили 29 апреля 1994 г. и вторую партию (72 коровы и 30 нетелей) - 4-5 июля 1994 г. Вакцину вводили в среднюю треть шеи подкожно в дозе 100 млрд к. Ранее данных животных никакой противобруцеллезной вакци-юй не прививали.

В первые часы и дни после иммунизации с целью определения >сактогенпости вакцины у привитых животных вели наблюдения за <линическим состоянием в сравнении с контрольными (непривиты-лм животными), обращая внимание на температуру тела у пяти фивитых и пяти контрольных животных в группе одной и той же доярки перед вакцинацией и через 6, 12, 24 часа после иммуниза-ши, прощупывали кожу на месте введения вакцины на предмет ¡аличия опухоли, следили за сохранением аппетита, вели учет мо-юка, надоенного в целом по ферме за день раньше, в день вакци-гании и через сутки после иммунизации.

Результаты наблюдений показали, что заметных изменений в слинике, поведении, аппетите, температуре тела, молочной продук-

37

тшшости (количество суточных удоев) у привитых животных н< отмечалось. Температура тела как у контрольных, так и у нриви тых пяти голов при четырехкратном измерении в среднем не пре вынтала нормы 39,5 °С. Лишь у одной коровы из числа привиты: при первых двух сроках измерений температура тела колебалась I пределах 39,7-39,6 °С, а затем пришла в норму.

Результаты наблюдения за всеми привитыми животными, I учетом данных журнала осеменения и отела животных, показали что со дня прививок с 29 апреля 1994 г. (первая партия) и 5 июл: 1994 г. (вторая партия) по 5.05.1995 г. из привитых в оба срок; 195 коров и 64 нетелей отелилось благополучно 189 коров и 6; нетели. Одна телка (№ 3239) убита 5.12.1994 г. из-за многократ ной случки с быками без плодотворного оплодотворения (при пос леубойном осмотре был установлен хронический эндометрит види мо, по этой причине из-за увеличенной воспаленной матки телк, была признана ошибочно при ректальном исследовании стельной)

За весь период учета абортировало 6 коров.

Первый случай аборта произошел 24.06.1994 г. через 55 су ток после вакцинации (возраст плода 5 месяцев) у коровы "Брош ка" (№ 4876) доярки Шаминой, в этот же день в этом же гурт абортировала корова другой доярки из числа непривитых вакцино) коров. По результатам исследований сыворотки крови через 1! суток после аборта в РА корова не реагировала, в РСК с Б антигеном реагировала в титре 1:10 (++), тогда как за 22 дня д аборта поствакцинальные реакции были немного сильнее выраже ны в РА в титре 50 (++), РСК - 1:20 (++).

Второй случай аборта произошел у коровы "Голубка" доярк Мосиной 17.07.1994 г., через 80 дней после иммунизации в воз расте плода 5 месяцев. При плановых серологических исследовани ях и через 8 суток после аборта реакции в РБП, РА, РСК с Б антигенами были отрицательными, поэтому причиной этого аборт не явилась вакцина.

Третий случай аборта зарегистрирован у коровы "Беляш" такж 17.07.1994 г., у этой же доярки через 12 суток после вакцинащ! 38

животное прилито но второй партии 5.07.1994г.). Дли развития [борта даже у зараженного вирулентным штаммом животного ие-»бходимо минимум 3-4 педели. По этой причине и но причине »трицательпых результатов серологических исследований через 8 :уток после аборта па все антигены данный аборт нельзя отнести к юствакциналыюму.

Абортировавшие по истечении 5 месяцев после вакцинации ;оровы по кличке "Клюква" (№ 3862) и Весна" (№ 3805) из руппы доярки Золотаревой перед абортом и в течение двух месяцев после аборта давали отрицательный результат исследования на >руцеллез на все антигены. Также были отрицательными результаты серологических исследований через 17 дней после аборта у псстой коровы но кличке "I"усинка" (№ 1107) доярки Каравае-юй, что подтверждает о происхождении абортов у этих животных [с от вакцины, а от других причин.

Подводя итоги результате»» испытания на абортогенность в фоизводствснных условиях вакцины из штамма В.аЬогШ.ч 75/ ?9-А Алтайской НИВС па 195 коровах и 64 нетелях 2-6 мссяч-юй стельности можно сделать вывод, что она псабортогенна. В нести случаях аборты могли быть вызваны другими причинами, [то объясняется особыми условиями летней пастьбы в тайге и от-»ицательпыми результатами серологических исследований аборти-ювавших корон до аборта и у отдельных из них после аборта, (роме того, есть случай аборта на 12-е сутки. В один и тот же [ень произошел аборт привитой и иепривитой коров из одного и 'ого же 1урта.

4ВЫВОДЫ

1. Без использования с(х?дств специфической профилактики на (олыиой территории с широким распространением бруцеллеза поучить стабильные [результаты оздоровления неблагополучных стад [рактически невозможно. Так, в Алтайском крас с 1936 по 1955 г. (период, когда никакие протинобруцеллеэпые вакцины на животных не использовали) количество неблагополучных по бруцел-

лезу крупного рогатого скота-пунктов возросло в 3,4 раза, а заболеваемость - в 4,9 раза.

2. С помощью вакцины из агглютиногенного штамма В. abortus 19 при условии соблюдения в оздоравливаемых стадах принципа перманентного иммунитета, реализуемого за счет реиммуниза-ций, удалось в масштабах края с 1955 по 1974 гг. купировать бруцеллезную инфекцию (снизив количество неблагополучных пунктов в И раз, заболеваемость в 4,2 раза) и создать благоприятный

о

эпизоотическии фон.

Однако вакцина такого типа не обеспечивала возможность беспрепятственной поствакцинальной диагностики бруцеллеза у многократно привитого скота, тем самым не позволяла добиться должного противоэпизоотического эффекта и объективной эпизоотической оценки стад.

3. Применение в комплексе противобруцеллезных мероприятий вакцины из слабоагглютиногенного штамма В.abortus 82 в значительной степени способствовало ускорению процесса оздоровления неблагополучных стад крупного рогатого скота и яков на фоне предыдущих прививок вакцины из агглютиногенного штамма B.abor-tus 19, в том числе за счет рациональной поствакцинальной диагностики, обеспечивающей провокацию скрытого бруцеллоноситель-ства. За 9 лет (с 1975 по 1983 гг.) количество неблагополучны* пунктов уменьшилось в 20,5 раз, заболеваемость снизилась в 13 раз.

4. Эффективность оздоровления неблагополучных стад с использованием вакцины из штамма 82 во многом зависила от эпизоотического фона: поголовье скота 48% неблагополучных пунктов из числа оздоровленных (111 из 231) было полностью заменено здоровыми привитыми животными в связи с ежегодным выявлением при поствакцинальных серологических исследованиях более 10% положительно реагирующих.

5. Возникновению экзо- и эндоинфекции в угрожаемых и оздоровленных стадах способствовало наряду с невыполнением комплекса организационо-хозяйственных, зоотехнических и общих ве-40

еринарно-санитарпых мероприятии отсутствие перманентного им-{упитста.

6. В процессе использования вакцины из штамма 82 устано-или ряд ее недостатков и прежде всего абортогенность, длительно приживаемость, нестабильность ряда биологических (в том исле антигенных) свойств. Миграцию вакцинного штамма на не-ривитых животных можно предполагать по результатам произ-одственного опыта лишь на основании появления у последних оложительных серологических реакций в диагностических титрах ак с S-, так и с R-антигеном.

7. У большинства здоровых животных, привитых вакциной из лабоагглютиногенного штамма B.abortus 82, поствакцинальные се-ологические реакции в диагностических титрах сохраняются, как ранило, непродолжительное время (от 2 до 6 месяцев), однако в олее отдаленные сроки после гакцинации (но нашим наблюдени-м, от 14 до 24 месяцев) они могут появляться у незначительного исла животных, эпизоотическая опасность которых не доказана. 1о при этом возникает проблема объективной оценки благополу-ия таких стад но бруцеллезу.

8. Разработанный совместно с ИЭВСиДВ и ВНИИБТЖ [шплекс диагностических исследований по эпизоотической оценке гад крупного рогатого скота, привитого вакциной из слабоагглю-июгенного штамма B.abortus 82, основанный на эиизоотологи-jckom, серологическом (РА и РСК с S- и R- антигенами, КР и э.) и бактериологическом (включая биопробу) методах, позволил эъективно оценивать ситуацию в благополучных и угрожаемых )зяйствах, тем самым в части из них обеспечил оперативность в эинятии нротивоэпизоотических мер, а в остальных предотвратил ^обоснованное объявление неблагополучными.

9. Селекционирован новый слабоагглютиногенный вакцинный тамм B.abortus 75/79-А, аналогичный но ряду свойств (культурные, морфологические, биохимические, агглютинабельные) вак--шиому штамму B.abortus 82, но выгодно отличающийся но таким жнципиальным свойствам, как реактогенность, абортогенность,

41

остаточная вирулентность, стабильность, приживаемость, антиген ность.

10. Штамм 75/79-А обладает иммуногенностью, в эксперт менте на крупном рогатом скоте равной вакцинному штамму 82, на морских свинках на 23% выше.

И. Штамм 75/79-А не обладал в эксперименте на морски свинках и крупном рогатом скоте, а также в контролируемом про изводственном опыте абортогенными свойствами.

12. На основании проведенных исследований очевидна необ ходимость широкого производственного испытания вакцины и штамма 75/79-А в целях повышения эффективности противобру целлезных мероприятий.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Опыт оздоровления хозяйств Сибири от бруцеллеза круп ного скота и его научное обеспечение (одобрен Научно-техничес ким советом Госагропрома СССР 06.07.88г.).

2. Инструкция о мероприятиях по профилактике и ликвидаци] бруцеллеза (утверждены 30.12.82г. и 10.11.88г.).

3. Наставление по диагностике бруцеллеза животных (утвер ждено 30.12.82г.).

4. Наставление по применению сухой живой вакцины из штамм 82 бруцелла абортус против бруцеллеза крупного рогатого скот; (утверждены 17.10.85г. и 10.12.88г.).

5. План специальных ветеринарных мероприятий по профилак тике и ликвидации бруцеллеза и туберкулеза среди сельскохозяй ственных животных в областях, краях и автономных республика: РФ на 1989-1993 гг.

6. Временная "Инструкция по изготовлению и контролю вак пины против бруцеллеза из слабоагглютиногенного штамма В.аЬогШ 75/79-А живой сухой" (утверждена 1996 г.).

7. Наставление по применению сухой живой вакцины из ела боагглютиногенного штамма В.аЬогШБ 75/79-А против бруцеллез« крупного рогатого скота (утверждено 1996 г.).

6. СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ

1. Никифоров И.П., Морковкина В.Н. Причины серологи-сских реакций у крупного рогатого скота в отдаленные сроки пос-е прививки вакцины из штамма 82 //Науч.-техн. бюлл. /ВАС-(НИЛ. Сиб. отд-ние. — Новосибирск, 1980. - Выи. 19. — С. -8.

2. Никифоров И.П., Бердников Л.Г., Морковкина В.Н. Ре-ктогенность и эпизоотическая безопасность иротивобруцеллезной акаины из штамма 82 //Сб. науч. тр. СибНИВИ. — Омск, 980. Выи. 37. — С.37—40.

3. Никифоров И.П., Бердников Л.Г., Морковкина В.Н. Вы-елсние и изучение свойств культур бруцелл, изолированных от юагирующих животных и из абортированных плодов 1$ хозяйствах Алтайского края //(там же). — С. 41—44.

4. Никифоров И.П. Причины серологических реакций у круп-юго рогатого скота в отдаленные сроки после прививки вакцины [з штамма Бр. абортус 82 //Мат. Всесоюз. науч. конф. (20-23 1ая 1980). — Омск. — С.250—252.

5. Комплекс диагностических исследований при изучении при-[ин серологических [эеакций у животных в отдаленные сроки после [римснения вакцины из штамма 82 /Никифоров И.П., Колесни-[снко И Д., Субботин С.И., Морковкина В.Н., Дегтярсико Л.В. '/Рекомендации. — Барнаул, 1981. — 5 с.

6. Никифоров И.П., Безруков В.А., Морковкина В.Н. Ком-[лекс диагностических исследований при изучении причин сероло-ических {хакций у животных в отдаленные сроки после примсне-1ия вакцины из штамма 82 /Хронические инфекции животных. Гб.науч.тр. /ВАСХНИЛ. Сиб. отд-ние. — Новосибирск, 1981. - С.24-27.

7. Никифоров И.П., Морковкина В.Н. Изучение причин се-юлогических (х?акпий в отдаленные сроки после применения вак-шны из штамма 82 //Информационный листок Алтайской ЦНТИ

№ 311-81. 4 с.

8. Никифоров И.П., Субботин С.И., Клонов М.И. Приме нение противобруцеллезной вакцины из штамма 82 в комплекс« противобруцеллезных мероприятий в хозяйствах Алтайского крш /В кн.: Профилактика и терапия болезней животных Алтая с учетом изменения морфологии. — Барнаул, 1981. — С. 86—89.

9. Никифоров И.П., Морковкина В.Н. Выделение и изучение свойств культур бруцелл, изолированных от реагирующих животных и абортированных плодов //Информационный листок Алтайской ЦНТИ № 913-81. 4 с.

10. Никифоров И.П., Субботин С И., Клопов М.И. Применение противобруцеллезной вакцины из штамма 82 в комплексе противобруцеллезных мероприятий //Информационный листок Алтайской ЦНТИ № 544-81. 4 с.

11. Никифоров И.П., Морковкина В.Н. Реактогенность и эпизоотическая безопасность вакцины из штамма 82 //Информационный листок Алтайской ЦНТИ № 550—81. 4 с.

12. Никифоров И.П., Морковкина В.Н. Изучение И-антигена ИЭВСиДВ в производственных условиях //Науч.-техн. бюлл.: Инфекционные болезни сельскохозяйственных животных в Сибири и на Дальнем Востоке. /ВАСХНИЛ. Сиб. отд-ние. — Новосибирск, 1982. — Вып. 10. — С.26-28.

13. Вакцина из штамма 82 при бруцеллезе яков /Никифоров И.П., Субботин С.И., Клопов М.И., Актанов М.Д. //Науч.-техн. бюлл.: Туберкулез и бруцеллез сельскохозяйственных животных. /ВАСХНИЛ. Сиб. отд-ние. — Новосибирск, 1984. — Вып. 30. — С. 37-41.

14. Эпизоотическая оценка стад крупного рогатого скота по бруцеллезу после применения вакцины из штамма 82 /Никифоров И.П., Косилов И .А., Димов С.К., Константинов А.П., Дегтярен-ко Л.В. //НТБ.: Эпизоотология и меры борьбы с туберкулезом и бруцеллезом сельскохозяйственных животных /ВАСХНИЛ. Сиб. отд-ние. — Новосибирск, 1985. — Вып. 32. — С. 48—51.

15. Никифоров И.П. Дифференциация серологических реак-

ий на бруцеллез у животных благополучных и оздоровленных от рупеллеза ферм //Информационный листок Алтайской ЦНТИ fa 85-85. 4с.

16. Комплекс диагностических исслсдо1$аний для эпизоотичес-ой оценки по бруцеллезу стад крупного рогатою скота, привитого акцииой из штамма 82 /Косилон И.А., Димов С.К. Де[Тяренко lB., Падалица А.Г., Новицкий A.A., Никифоров И.П. //Реко-ендапии: Профилактика и ликвидация бруцеллеза крупного рога-)Го скота. ВАСХНИЛ, Сиб отд-пие. ИЭВСиДВ. — Новоси-ирск, 1986. — С.7—9.

17. Никифоров И.П., Кучукова Т.В. Меры борьбы и проф-лактики бруцеллеза крупного рогатого скота //Плакат. — Бар-

аул РИО, 1987.

18. Никифоров И.П., Субботин С.И. Опыт оздоровления хо~ шетв от хронических инфекпий //Ветеринария. — 1987. — № I. — С.12—13.

19. Никифоров И.П., Косилов И.А. Профилактика и оздо-жленис животных от бруцеллеза и туберкулеза //Сб. науч. тр. [ЭВСиДВ. — Новосибирск, 1988. — С.50-53.

20. Никифоров И.П. Эпизоотическая оценка результатов ди-иостических исследований па бруцеллез крупного {югатого скота, зивитого вакциной из штамма 82 //Актуальные вопросы пр<х{з-\дктики бруце.\леза и организации медицинской помощи боль->im: Тез. докл. Всесоюз. науч. конф. — М., 1989. — С. 123— !5.

21. Никифоров И.П. Штамм бактерий B.abortus 75/79-А, :пользуемый для приготовления вакцины против бруцеллеза крупно (югатого скота //Авторское свидетельство № 1701743, заре-;стрированного в Государственном реестре изобретений СССР

Э9.91г.

22. Изучение приживаем(х:ти, вирулентости и возможности «рации штамма B.abortus .75/79-А на .лабораторных животных Никифоров И.П., Шумилов К * В. / Клима! юв А. И., Шихалеев ).Н., Калмыков В.В., Солнцева E.H. //Сб.пауч.тр.: Эншкюто-

45

логия, профилактика и меры борьбы с инфекционными болезням* животных. СО РАСХН. ИЭВСиДВ. — Новосибирск, 1993. -С.66-73.

23. Изучение морфологических, тинкториальиых, культураль-но-биохимических, агглютинабельных и иммуногенных свойст1 штамма В.аЬоПия 75/79-А /Никифоров И.П., Шумилов К.В. Климанов А.И., Шихалеев Ю.Н., Калмыков В.В., Солнцева Е.Н //(там же). — С.74-78.

24. РИД с ОПС-антигеном у экспериментально зараженные бруцеллезом животных /Файзрахманов Ш.Р., Киселев Е.А. Хлыстунов А.Г., Якимов В.В., Корж Г.С., Циммерман В.А. Попова Т.Г., Никифоров И.П., Чекишев В.М. //Сб.науч.тр. СС РАСХН. ИЭВСиДВ. — Новосибирск, 1993. — С.119-123.

25. Никифоров И.П. Результаты апробации штамма бруцелл-абортус 75/79-А Алтайской НИВС в качестве вакцинного цм иммунизации крупного рогатого скота //Основные научные ис следования по проблеме туберкулеза и бруцеллеза сельскохозяй ственных животных, профилактика и организация мероприятий т ликвидации болезней в регионе Сибири: Тез. докл. науч.-практ конф. — Новосибирск, 1995. — С. 95—97.

26. Апробация вакцины из штамма 75/79-А В.аЬогШв н крупном рогатом скоте /Никифоров И.П., Разумовская В.В Шумилов К.В., Димов С.К., Хлыстунов А.Г. и др. //Ветерина рия. — 1995. № 8. — С. 20-23.

27. Изучение иммуногенных свойств и оптимальной иммуни зирующей дозы экспериментальной вакцины из штамма 75/79-У

B.аЬогШэ /Никифоров И.П., Разумовская В.В., Бокова Т.В Степнов В.А., Корж Г.С. //Ветеринария. — 1995. - № 12. —

C.29-32.