Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Взаимосвязь аллергии и иммунитета, усовершенствование диагностики и специфической профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота

(«. '/"С ^ г-! -Г

КАЗАНСКИЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ имени Н.Э.БАУМАНА

На правах рукописи

ШФШИН МИШАЖГ ХАЙРУЛЛОВИЧ

взаимосвязь аллерш и иммунитета, усовершенствование диагностики и специфической просилактики бруцеллеза крупного рогатого скота

16.03.03.- ветеринарная гшсройиолоим,вирусология, элизоогология,микология и иммунология

Авгорефераг диссертации на соискание ученой степени доктора' вегерияаряих наук

Казань - 1992

V' А у

Работа выполнена в лаборатории -бактерийных инфекции гЮвроссийского научно-исследовательского I леринарного института (г.Казань).

Научные консультанты: Заслуженный ветеринарный врач РСФСР,доктор ветеринарных наук профессор К.М.Сашаков.

Заслуженный деятель науки ТССР,доктор ветеринарных наук, профессор,академик АНТ Г.З.Идрпсов.

Официальные оппоненты:

1.Доктор ветеринарных наук,профессор Р.Г.Госманов.

2.Доктор ветеринарных наук,профессор,член-коррвопокденг Рос-сельхозакадемии,заслуженный ветврач Р1Ж)Р ¿.¿.Сочнев.

3.Доктор ветеринарных наук,профессор,член-корреспондент Каз АСХН Н.П.Иванов.

¿едущее учреждение- Российский научно-исследовательский инс титуг бруцеллеза и туберкулеза животных. (РНИИБЦ).

Защита состоится М?Н11992 г.в часов на заседа-

нии специализированного совета Д 120.22.01 при Казанском ордена Ленина ветеринарном институте имени Н.Э.Баумана по адресу: 4200г, Казань,74; ¿¿етинотитут.

С диссертацией мсокно ознокомитьоя в библиотеке Казалокого ордена Ленина ветеринарного института.

2£ ■ л/ п

Автореферат разослан 2!_I *"" • _ 1992 года

Ученый секретарь специализированного сове та,доцент

■ J

общая характеристика работы

'"АЧЗчД !

"Чйггтальность проблемы.Перед агропромышленным комплексом страны посгавлэяы задачи обеспечения в возможно короткие сроки устойчивого снабжения населения всеми видами продовольствия, включая и продукты живодноводства.

Важное значанио в выполнении этой задачи играет обеспечение эпизоотического благополучия поголовья скота по инфекционным бо-лезням,в частности,по бруцеллезу.Встречающаяся низкая эффактив-носгь противобруцеллезных мероприятии свидетельствует о неполной изученности некоторых вопросов,в том число касающихся аллергии и иммунитета при бруцеллезе.

Известно,что реактогенность вакцинных препаратов зачастую определяется их аллергенными свойства:«, а проявление этих качеств находится л определенной зависимости от метода введения вакцины в организм животного пли человека ( Г.П.руднвв, 1955;А.Н.Гор-!Щенко,1961;К.В.Бунин,К. Г.Гм очко, 1970;П. А.Ззрииоза и др. ,1974;

г.К с/- 1982; ?■>'<■<-<■ 1933; С.СЙ и^к с1

1398).Поэтому при разработке различных,а те;.; более новых средств ,1 методов икмунизации,необходимо дать им предварительно сравня-гельную оценку с точки зрения аллвргизкрув^ей способности.

С 1974 года в качестве специфического препарата против бруцеллеза на крупно;/, рогатом скоте в С союзных республиках применяют вакцину из штамма 82.Однако,не чотря на значительнее достигшие успехи в проблема иммунопрофилактики бруцеллеза, ряд Еопро-;ов,связанных с разработкой более рациональных способов иммуяи-¡ации,требует своего решения.

Возникновение гилерчувствигельности замедленного типа (ГЗТ)-сарактерная особенность бактериальных инфекций <А.Д.Адо,1973; 1.Л.Бе1аемшпев,Г.С.Суходое1]а,1979;Н.П.Кв^10з, 1934).Особое значо-ше ГЗТ приобретает при бруцеллезе (П.Ф.Здродовскип,19оЗ;Н.Л.Бек-1емишев,19о8;Ф.П.Локтева,П.А.Малышева,1972,П.А.Верл:!лоэа и др., [974;К.П.Студенцов,1975;А.А.Новицкий,1989).Из методов выявления ГЗТ наиболее распространенным и доступным является кохяс-^ьнаргп-1еская проба со специфическим аллергеном.Для диагностики бруцел-18за в течение ряда лег предлагалось много различных аллергенов Й.З.А^итеагров,П.А.0скпоз,1936,Д.А.Цуверкалоз,1940;В.С.0рлоз, ин.Касьянов, 1968;А.Н.Касьянов, 1974;Н.П.Иванов и др., 1991).Однако в настоящее время аллергический метод диаг эстики бруцеллеза 10 получил широкого распространения в ветеринарной практике из-

за несовершенства как применяемых I епаратов.так и самого метода.

Особую актуальность приобретаю! также поиск и разработка дополнительных методов' аллергодиагь ютики, исключающих введение аллергена в организм.

Паль и задачи исследований.Цель исследований-усгановать взаимосвязь аллергии и иммунитета,усовершенствовать аллергическую диагностику и специфическую профилактику бруцеллеза крупного рох'атого скота.

Исходя из этого,били поставлены следующие задачи:

-изучить иммуноаллергическую перестройку организма животных, привитых различными вакцинами против бруцеллеза;

-установить взаимосвязь между аллергией и иммунитетом у привитых противобруцеллезными вакцинами животных при различных способах их введения в организм;

-испытать ноЕые способы ревакцинации крупного рогатого скоп вакциной из штамма 82 в производственных условиях;

-усовершенствовать существующие,разработать новые средства и методы аллергической диагностики бруцеллеза;

-разработать практические предложения по использованию новых методов диагностики и специфической профилактики бруцеллеза круоного рогатого скота.

Ка защиту выносятся:

1.Показатели иммуноаллергической перестройки организма животных, привитых вакцинами из бруцелл в.У-,.УК-иЯ-форыах.а также факторы,влияющие на проявление адлергизации организма.

2.Результаты изучения взаимосвязи мевду кожной аллергической реакцией организма и напряженностью иммунитета,серологически показателями,количеством иммунекомпетентных клеток и их функциональной активность®,иммуноморфологическими изменениями,показател ьа неспецифяческой резистентности у животных,привитых противо-бруцеллезными вакцинами.

3.Данные изучения закономерностей развития аллергии и иммунитета у хивогных при различных способах введения противобруцел-лазных вакцин.

4.Результаты испытания новых способов ревакцинации крупногс рогатого окота вакциной из штамма 82 в производственных условия:

¿.Материалы по разработке новых средств и методов аллергической диагностики бруцеллеза.

Научная новизна.Получен новый бруцеллезный аллерген "УЗД" из штамма 82,обладающий высокой специфичностью и активностью.

Лыявлены особенности аллергической перестройки организма животных.иммунизированных вакцинами из-У-.Х/^- п 2-форм бруцелл, и факторы,влияющие на аллерглзацюэ организма.

Теоретически обосновано и экспериментально подаерждгно наличке взаимосвязи между кояной аллергической реакцией и напряженностью иммунитета,серологическими показателями, аутоантитело-збразувщиш клетками,количеством иммунокомпетентних клеток и юг функциональной активноегью.иммуяоморфологическими изменениями в зрганах и тканях,показателями несазцкфической резистентности при )дно- и многократно!.! подкорнал применении протавобруцаляезных ¡акцин.а также других способах введения их л организм .тавотных.

Разработаны рациональные способы иммунизации шщотннх про-■ивобруцеллезной вакциной из штамма 82,дах,дпе возмохноегь повы-игь эффективность специфической! профилактика бруцеллеза.

Разработаны новые методы аллергической диагностики бруцел-еза,об„адапщиа специфичностью,информативности и высоко! чувст-ительностьо,использование которых повышает эффективность противо-руцеллезных мероприятий,

Пракгичеокая ценность работы.разработаны п внедрены в вете-инарную практику новые метода аллергической диагностики и сде-ифической профилактики бруцеллеза.

Данные,полученные при изучении идауноаллергкческой парестрой-J организма животных,иммунизированных прогивобруцеллез "или пактами bS-,S& и 2-формах»а также при изучении взаимосвязи аялер-щ и икмуните га,явились научной основой и методическим подходам щ разработке рациональных схем иммунизации кивотных.

Практическое использование разработок в народаом хозяйстве [редалено следующими нормативно-техническими документами:

1.Методическими указаниями по вовыиеяию чувствительности алогического метода диагностики бруцеллеза крупного рогатого ско-.-Утв.Ш Госагропрома СССР 28 декабря 1990 г.

2.Методическими указаниями по применению реакции лизиса тка-вых базофилов (РЛТБ) для дифференциации йожшивльных сс ологк-ских реакции при исследовании сыь.роток крови крупного рогатого ота на бруцеллез.-Уга.Г/3 Минсельхозпрода СССР 9 сентября 1391г,

3.Методнческши указаниями по применения аллергического меда для контроля иммуяоаллергического состояния крупного рога-го скота,привитого вакциной из шг.Бр.аборту^ 82,-Утв.ГУВ Мин-льхозпрода СССР 13 ноября 1991 Г.

4.Методическими рекомендациями "Усовершенствование методики

опрзделения количества Т- и В-лимфог<тов в крови крупного рогатого скота".-Утв.1УБ Минсельхозпрода CJGP 22 августа 1991 г.

5.Планом мероприятий по профилактике и ликвидации туберкулез! и бруцеллеза крупного рогатого скота а колхозах и совхозах Калмыцкой ССР на 1989-1990 гг.-Утв.заместителем председателя Совета Министров Калмыцкой СС? 27 декабря 1989 г.

6.Планом работ эпизоотического отряда ветеринарного отдела Оренбургской области на 1991 г.-Утв.начальником ветеринарного отдела 23 декабря 1990 г» ■

7.Временяой инструкцией по изготовлению и контролю бруцеллез лого аллергена "УЗЛ".-Утв.директором ВЖШ 02.07.1990 г.

8.Техническими условиями "Аллерген бруцеллезный для диагностики бруцеллеза и контроля кммуасаллергнческоЯ реактивности у крупного рогатого скота, привитого прогивобруцеллезной вакциной и: шгамиа 82".-Угз.директором ВИРЫ! 02.07.1990 г.

9.Рекомендациями по усовершенствованию ревакцинации крупног рогатого скота прогивобруцеллезной вакциной из штамма 82.-Утв.да ректором ВНИБИ 06.06.1981 г.

Результаты каких исследований вошли также в :

10.Наставление по применению сухой айвой вакцшш из штамма 82 б гуцолла абортус против бруцеллеза крупного рогатого скота.-Утв.ГУВ Госагроьрома СССР 10 ноября 1988 г.

Апробаикя работы.Основные результаты исследовшшй доложены

на :

Всесоюзной научно-производственной конференции по борьбе с бруцеллезом крупного рогатого скота с применением кнвой вакцины из штамма 82 (Казань,1979),Всесоюзной конференции по бруцеллезу и туберкулезу' (Омск,1980),заседаниях Ученых Советов КВЛ и ¿¡ШШ (IS76-I989 гг.),Республиканской научно-технической конференции лодых ученых (Казань, 1984),совещании-семинаре практических и на уг:нух вегспециалистов Российской федерации на тему "Повшааш'.с р ли и ответственности специалистов сельского хозяйства в вопросе профилактики и ликвидации туберкулеза и бруцеллеза среда сельс! хозяйственных кшзоышх" (Новосибирск, 1987),семинара- совевдши "Поаьаавнпе вф^екгнвиссти ветеринарных 'шроприятий по црофнлак» п ликвидации ш^екдаошаас болезней животных"'(Челябинск,IS89),. орданациоиноы совещании об итогах выполнения заданий ЫТП 0.51. и О.сх.61 за 1988 г.и ходз реализации постановления ЦК КПСС и вата Цишстров СССР Я 889 от 10.09.81 "О дополнительных мерах борьбе с заболеваниями с ель скох озяй с гв ошшх. лшвогных бруцеллез

и туберкулезом" (Омск,1989),научной конференции: "Профилактика, диагностика и мары борьбы с инфекционными,инвазионными и незаразными заболеваниями сельскохозяйственных яилогных.пгиц.пчел и рыб при интенсивном ведении хозяйства" (Баку,1989),Всесоюзной научно-технической конференции "Современные проблемы иммунологии, биотехнологии,генной и клеточной инженерии в ветеринарной меди- . вине" (Москва,1990),Республиканской научно-производственной конференции (Казачь,1990,1991),четвертой Всесоюзной конференции: "Научные основы технологии промышленного производства ветеринараиг. биологических препаратов" (Моокаг.1391).

Публикация.По материалам диссертации опубликованы 58 научных трудов,а том числе 22 отчета,26 научных с. _гай,3 методических указаний,2 рекомендации,! техническое условие,I инструкция по изготовлению и контролю бруцеллезного аллергена "УЗЛ",1 положительное решение на выдачу патента и 2 удостоверения на рационализаторские предлаяения.

' Объем и структура работы.Диссертация состоит из введения, трех глав обзора литературы,7 глав собственных исследований.выводов, предложений .списка использованной литературы (всего 511 источник, в том числе 103 иностранных) и прилохений.Работа изложена на 426 страницах машинописного текста и икзе? 102 таблиц,30 рисунков.В приложении представлено I?документов,лодгверкд^ющих результаты отдельных этапов работы,'« научную и практическую ценность.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и метода исследований

Работа выполнена в соответствии о планом КИР в период с 19751992 гг.в лаборатории бактерийных инфекции Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института (г.Казань),хозяйствах Оренбургской,Куйбышевской областей,Калмыцкой и Татарской ССР. В опытах находилось 100 белых ¡¿¡шей,50 белых крыс, 1988 корень сванок, 172 кролика,22065 голов крупного рогатого скота.

Первый этап работы включал получеши нового бруцеллезного аллергена.В этих целях были взяты штаммы Мг. ч1сг1ил 19,82,5-1036 и й-82.При изыскании оптимальной технологии получения аллергенен применяли различные методы воздействия на бактериальную клетку и их комбинации :физнч еский (нагревание, гамма-облучениа, у ль г ьазвук), механический,химический (щелочной гидролиз).

Какдый из 20 полученных аллзргь .ов проверяли на стерильность путем посева на МПА и ЩБ в обкчных условиях и МППБ под вазелиновое масло и безвредность путем содкояного введения препарата в дозе 0,5 мл пяти белым мышам,за которыми вели наблюдение в течение 10 дней.

Антигенные и сенсибилизирующие свойотва изготовленных препаратов устанавливали на 12 кроликах путем трехкратного внутри-кожного введения с интервалом 22-30 дней.

Специфичность аллергена определяли в опытах на 30 морских свинках,привитых лисгериозной вакциной из штамма АУФ.20 коровах, положительно реагирующих на туберкулин,к 1280 телках 4-12-месячного возраста,непривитых прогивобруцаллезными вакцинами,а благополучных по бруцеллезу хозяйствах.

Аллергенную активность получешшх препаратов испытывали на 75 морских свинках и 29 телках,искуственно зараженных культурой В*.а$ог^и*54 соответственно в дозах 2 тыс.и 250 тыс.-1 млрд.м.к., а таете на 100 больных бруцеллезом коровах.Морским свинкам и кроликам аллергены вводили внутрикожно в область брюшка в объеме 0,1 ш,а крупному рогатому скоту в подхвостовую складку или я обдас з! иеи 0,2 мл,а также пальпебрально- I мл.

В качества контрольного аллергена применяли бруцеллизат и йруцеллин £ИЭЗ.

Аллергены из штаммов 19,82,£-82 и £-1096,полученные методом ультразвукового разрушения,подвергали частичному биохимическому анализу (содержание белка,его фракции,нуклеиновых кислот и реду-цируодих'вещаитв).

Изучение иммунологической перестройки организма животных, привитых различными бруцеллезными вакцинами,проводили на 221 морских овшоах.в том числе 158 из них иммунизированы культурами штаммов 82,19 и £-1096 (в дозе 1,6 млрд.м.к.),а 63 реиммунизированы вакциной из штамма 62. '

Яяутрикажиув аллергическую пробу с бруцеллиаом Ш<ЗВ и аллергеном "Узд" ставили через 3, 4, 6, 15 суток и I, 2, 3, 4, и 6 месяцев после введения культур бруцелл.Посла читки реакции сыворотку крови животных исследовали в РА и РиК,а патологический мате- . риал-бактвриологически........

Кроликов прививали вакцинами из штаммов 82,19, Б-1096 в дозе 5 млрд.м.к.,а также заражали культурой вирулентного штамма 54 в дозе 10 млн.м.к. (во 12 кроликов на калдый штамм).0б аллергической перестройке судили по кожной реакции,показателю повреждения

нейтрофилов (ШН),реакции лизиса лейкоцитоз (Рм),количеству лейкоцитов и'зозинофилов.

ШН определяли по В.Ф.Фрадкину (1962),в некоторой модификации И.А.Касаткиной (1967).

РЛЛ ставили по М.И.Чернышевой,А.А.Строганову (1970),реакцию непрямого лейкоцитолиза-по М.М.Еелудкову.М.ИЛершшзвой (1985).

Количество лейкоцитов подсчитывали по общепринятой методике, эозинофштов-по методике С.М.Бакыаяа (1958).

Особенности проявления аллергических и серологических показателей у животных при повторных введениях вакцины из штамма 82 изучали на 28 кроликах,которых иммунизировали 2-х суточной культурой бруцелл в дозе 3 млрд.м.кЛерез 15, 30, 50, 90, Г"0 к 180 дней поело прививки их исследовали аллергически и одновременно брали кровь для постановки РА.РСК и реакции Кумбса.

Изучали также аллергическую перестройку организма крупного рогатого скота.В этих целях 70 телок 5-7-месячного возраста и 80 коров иммунизировали вакциной из штамма 82 в дозе 100 млрд,м.к. Сыворотку крови исследовали в РА и РСК перед прививкой а через 10, 20, 40, 70, 150, 240 и 360. суток после иммунизация..3 эти га сроки ставили кожную аллергическую пробу,а гакжа определяли ШШ.

Параллельно поставили опыт на 90 телках н 80 коровах,которых ревакцшшровали соответственно одно- л двукратно вакциной из штамма 82.2ИВОГЯЫХ исследовали в те же .роки,что и посла вакцинации, а также' через 450 и 720 дней после ревакцинации.

Изучали влияние физиологического состояния,упиваннооти,прошедшего времени после отела,иммунологического фона перед реимму-низацией и других факторов на проявление аллзргизации организма.

Проводили работу в направлении изучения взаимосвязи кожной аллергической реакции с напряженностью иммунитета,серологическими показателями,количеством иммунокошетентных плеток и их функциональной активностью,с иммуноморфологическиыи изменениями в орга- . нах и тканях,а также с показателями неспецкфической резистентности, В этих целях использовали 662 морские свинки,58 кроликов а 481 голову крупного рогатого скота.

Т-лш.фоциты определяли методом спонтанного розегкообразова-ния с эритроцитами барана аР. (1972). В- лкмфэцнты-

реакцией комдлеыея гарного розаткообразовашш яо Б.Ф.Чэраушенко, Л.С.йогосовой (1981).

Лимфоциты'для постановки реакции бласттрансформации (РБТл) получали по методике,предложенной М.А.Сафшшм и М.З.Харптбдовим

а980).

РБТя ставили по мзгодике,ormcai. дой М.М.Авербахом и соавг. (1974).

Аутоантителообразующие клетки с тределяли методом Иеряе в модификации Н.Н.Клемпарской (1972).

Активность лизоцима выявляли нефелометрически по В.Г.Дорофзй-чуку (1258).

Урозекь комплемента в сыворотке определяли по 100% - гемолизу.

Иьшунофврментный анализ Ой А) ставили по общепринятой методике.

Иммуяоморфолоинескос изучение органов и тканей животных проводили совместно с сотрудниками кафедры патологической анатомии Казанского ветеринарного института (Г.З.Идрисов,Э.Алиев),лаборатории пагоморфологии и спецштаммов (Л.!Н.Шарипов,Н.А.Лутфул-лина) с использованием общепринятых методов.

Изучали закономерности развития иммунитета и аллергии при иммунизации и ревакцинации животных прогивобр/целлезшми вакцинами подкогным|внугрикозным,коньвнктивалышм и пероральньш метода-ма.В опытах использовали 688 морских свинок,30 кроликов и 461 го. лову крупного рогатого скота.

Испытание новых способов ревакцинации крупного рогатого скота вакциной из шта'ша 82 (раиммукизация с предварительной постановкой аллергической пробы и метод внутрикожного введения вакцины) проводили в течение I985-I99I годов в 24 благополучных и неблагополуч ннх до бруцеллезу хозяйствах Калмыцкой ССР и Оренбургской области на 13642 головах крупного рогатого скота.

Проводили также работу по усовершенствовании аллергической диагностики бруцеллеза In. vivo на основе использования бруцеллина ЗИЭЗ и кипой бруцеллезной вакцины из штамма 82.

Кроме того,разрабатывали новые методы аллергической диагностики бруцеллеза in vib о (реакция лизиса тканевых базофилов и ШТ-

ïool).

Статистическую обработку цифровых данных проводили с заданной надегноегьв (достоверностью) Р> 95% шш уровнем значимости ч = 0,05 на ЭЯЛ "Электроника МК-56" по разработанным программам (Р.Х. Тукааитов, H. X. Нягаагуллин, 1988 ).

ЙШНОАЛЛЕРШЧВСКАЯ ПЕРЕСТРОЙКА ОРГАНИЗМА ЖИ-ЕОТШХ.ПЙШТЫХ РАЗЛИЧНЫМИ БРУЦШЮНШИ ВАКЦИНАМИ

Исследовашш по разработке технологии получения нового бруцеллезного аллергена

Получено 20 серий бруцеллезных аллергеяоз.л том числе из штаммов 19-3,82-7,5-82-6 и 5-1096-4.

Посевы аллергенов при инкубировании в течение 10 дней а термостате оставались итерильнымл.

Подкожное введение белым мышам показало безвредность этих препаратов.

При внутрикожном введении здоровым морским свинкам она яз вызывали мастной реакции,лишь корпускулярные аллергены образовывали нобольшуп протухлость.

У .сенсибилизированных яшзопшх аллергики с одинаковым количеством балка,полученные из разних кгаммов различными мзгодами, вызывали разнообразна ко.тлуэ аллергическую реакцию.

Активность аллергенов из штамма 19 была достаточно высокой; Утолщение ко;-:;ной складки у животных они вызывали в 1,60-1,66 раза. При этом существенных различий в активности аллергенов,изготовленных разными методами,не отмечалось.

¿ыралсепяость ксянои реакции при введении аллергенов,изготовленных из штамма Е-М96 вышеуказанными методами,была слабее.

Активность аллергенов из штамма 82 и 3.-32 зависела от метода получения.Наиболее активными оказались аллергены из ;Тих птам-мов,полученные с помочью ультразвука.

Биохимические исследования показали,что меюд ультразвукового разрушения обеспечивает получение аллергеноз с лреимувдстзенгс;;*! содержанием белка (70,1-84,0%) и незначительным:! примесями других комлонентоа: редуцирующих веществ (1,96-2,35.?) и нуклеиновых кислот (3,8-3-5,71.?). Электрофорезом в полиакриламидном геле выявили в аллергенах из штаммов 82-7 белковых фракции,Е-1026-5, Е-82-4 и й 19-3.В основном молекулярная касса фракций била мзнес 66 тыс.Лишь по одной фракции а аллергенах из атаммоз 82,2-1096 и 19 имели молекулярную млссу более 66 тыс.

Количество белка в аллергенах,приготовленных из агглвтинабель-ных (1-) и неагглютинабелышх (2-) штаммов бруцелл.было неодинаково.В частности,в аллергене из штамма 19,приготовленного ультразвуковым разрушением,оно было более высоким,чем в препаратах из штаммов 2-82 и £-1036 (соответственно на 7,1 и 13,6?).

При сравнительном изучении активности аллергенов из штаммов 82 и 5-82,полученных методом ультразвукового разрушения,установи-

7111,4го препарат из штата 82 (аяларг. I "УЗЛ") оказался более акцизным.Он на вызывал образование антител,улавливаемых в РА и РСК единым бруцеллезным антигеном.

При титрации оптимальной дозы агяергена "УЗЛ" установили,что для диагностического теота следует использовать этот препарат о содержанием белка в среднем 25-30 мкг в 0,1 мл препарата.

Б опыте на телках,искусственно зараженных культурой вирулентное штаммаб*- 54,на аллерген "УЗЛ" реагировало на 44,9-? больше животных,чем при пальпебральном и на 30,2^ больше в сравнении с внугрикоглым введением бруцеллпна ВИЭЗ.

Выраженность аллергической реакции зависела от дозы заражения: чем выле была доза,тем сильнее отмечалась реакция.Такая же закономерность обнаруживалась и у животных,иммунизированных вакциной из штамма 82.

При сопоставлении результатов аллергических и серологических исследовании у телок,искусственно зараженных вирулентной культурой бруцелл,установлена высокая диагностическая эффективность кожной пробы с аллергеном "УЗЛ" по сравнению с РА,РСК и РБП.Причем аналогичные данные были получены и при исследовании нвпривитого ыолог-лхг крушюго рогатого скота из хозяйств,неблагополучных по бруц! ллезу.В последнем случае при отрицательных результатах серологических исследовании аллергически выявлялось до 12% больных бруцеллезом животных.

При испытании аллергена "УЗЛ" на животных,положительно реагирующих на туберкулин,иммунизированных листериозной вакциной из штамма АУФ,а также непривитых против бруцеллеза,установлено отсутствие реакции на аллерген,что свидетельствует о специфичности . препарата.

Результаты исследований показали,что из 20 полученных биопрепаратов аллерген "УЗЛ",приготовленный методом ультразвукового р.'-зруаещщ из бруцелл вакцинного штамма 82,оказался безвредным, специфичным и активным препаратом,не обладающим антигенными и сенсибилизирующими свойствами.

Важное значение имеет положение о том,что диагностика бруцеллеза должна основываться на учете всех форм иммунной реактивности-гу(.¡оральной и клеточной.Серологические методы не позволяв! выявлять всех инфицированных животных.

На основании результатов исследований составлены временная инструкция по изготовлении и контролю бруцеллезного аллергена "УЗЛ",временные шгодические указания по применению,технические

условил.

Полученные данные учтены при составлении и вопли в наставление по применения сухой вакцины из итамма 82.

Иммунологическая перестройка организма морских свинок»привитых однократно и ревакциниро-ванних различными вакцинами против бруцеллеза

При изучении иммуноаллергической перестройки организма у яи-вотных посла введения бруцеллезных вакцин установили,что морские свинки, привитые вакцинами из итаммов 82 и 19,ла аллерген "73.1" реагирозали положительно в течение 5-180 суток (срок наблюдения). Максимальное число реагирующие было выявлено яа'60-з сутки и составляло при птамме 82-83,при штамма 19-100?,на 180-е сутки количество реагирующих снизилось и разнялось 33,2^ и 50« соответственно. При иммунизации культурой из штамма В-1096 положительно реагирующие гшвотные выявлены в течение 15-90 суток,с максимальным числом реагирующих на 15 сутки.

Кояная реакция на бруцеллин у животных,привитых вакциной из штамма 82,проявлялась на 8-120-е,из штамма 19-яа 8-180 и из штамма 2-1С96-на 15-60-с су тки.Максимальное число реагирующие составляло соответственно 33,2^,50,0% и 33,2£.

При серологическом исследовании морских свинок,пригитых вакциной из атамма 82,агглютинины и комплекеигевязываодио антитела обнаруживали только на 30-й день посла иммунизации.У животных,иммунизированных вакциной из штамма 19,эти антитела выявляли,начиная с 8 дня, в течение всего периода наблюдения (180 дней).Культура из штамма В-1096 не вызывала образования антител,улавливаемых ■игандартным антигеном.

Таким образом,у морских свинок,привитых вакцинами из итачмоа 82 и 19,различий в появлении и продолжительности сохранения положительной ко.тлой аллергической реакции практически не наблюдалось. Однако штамм 19 вызывал более выраженную серологическую пе,зстройку и в отдельные сроки количество :*иво:.шх,реагирующие аллергически было больше ,чем при иммунизации другими штаммами.Закцина из штамма £-1096 обладала меньшими аллергенными свойствами.

Кожная реакция на введение бруцеллияа у вакцинированных ки-логных выражена слабее,чем на аллерген "УЗЛ".

Необходимо подчеркнуть,что бруцеллы вакцинного атамма 32 по сравнен:® оо штаммами 19 и 2-1096 вызывали большую сбсемеяенлость органов морских свинок.

При изучении особенноегей иммунологической перестройки у морских свинок при повторных введения', противобруцеллезных вакцин установили, что у животных, ревакцшш. ованяых вакциной из штамма 82 о интервалом в I месяц, аллергизац;-я организма и антителообразо-вание усиливаются с увеличением кратности ревакцинации.Повторше прививки не сопровождаются повышенным заселением организма вакцинной г/льгурой,Наоборот, через I месяц после 2-ой и 3-ей ревакцинации огмечается наименьшее выделение вакцинной культуры из органов и лимфатических узлов привитых животных.У морских свинок,ре -вакцинированных вакциной из штамма 82 с интервалом в 3 месяца,ал-лергизация организма происходила более интенсивно, чем при ревакцинация с интервалом в I и 6 месяцев.С увеличением интервала между ревакцинациями отмечалась тенденция к повышению заселения организма бруцаллами и снижению количества антител, выяляемых в РА и РСК о единым бруцеллезным антигеном.

Аллергкзацкя организма и серологические показатели у кроликов после введения бруцеллезных вакцин

У кроликов, иммунизированных вакциной из штамма 82, на введе-ше бруцеллина в течение 30-120 суток отмечалась слабая аллерги -ческая реакция.Площадь припухлости на превышала 0,45 см2.При ио -пользовании аллергена "УЗЛ" реакция была более интенсивной и наб-.издалась в течение 15-120 суток.Увеличение площади воспаления на , месте введения аллергена было статистически достоверным.

У животных, привитых вакциной из штамма 19, аллергическая реакция была отчетливой на бруцеллин и аллерген "УЗЛ".У них также от-* мечалось достоверное повышение ШШ на аллерген "УЗЛ" на ? и 15 сутки.

Культура из штамма K-IQ26 вызывала менее выраженную аллерги-зацию организма.

Иш^унизацад кроликов вакцинами из штаммов 82,19 и 2-1096 сопровождалась незначительным повышением количества лейкоцитов на 7-е сутки (соответственно 10,1,10,4 и 9,5 тыс.в I мм3 против 6,0 тыс. у кеправитых ) и эозинофалов на 7-е сутки (соответственно 248, 215 и 240 в I t.i.i3 против 130 в контроле), à такка на 15-е сутки (соответственно 215, 282 и 210 в I мм3 против 171 в контрле ). Однако следует отметить, что у животных с положительной кожной реакцией количество лойкогитрв и зозиновилОв было несколько выше,

чем у кроликов с отрицательной пробой.

При изучении аллергизации организма у кроликов,привитых противобруцаллезными вакцинами,наиболее убедительные результат получены при постановке кожной пробы,а также теста ШН с аллергеном "УЗЛ" и определении количества эозинофилов.

Несмотря на то,что доза заражения кроликов культурой вирулентного штамма 54 была в 500 раз лете,чем количество введенной вакцинной культуры,все показатели аллергической перестройки организма в первом случае были значительно более выражены.3 течение 15-120 суток у животных этой группы отмечали достоверное повышение ППН с бруцелллном и аллергеном "УЗЛ",показателя специфического лизиса лейкоцитов на 60-е сутки,количества лейкоцитоз и эозино-филоа на 7-120-е сутки.

Изучая особенности проявления аллергических и серологических показателей у кроликов после повторных введений вакцины из птамма 82,установили,что первая ревакцинация способствует некоторое повышению аллергизации организма и кратковременному повышению титров комплементсвязывающих антител.Посла второй ревакцинации аллергическая перестройка усиливается,агглютинины и коуплементспя-зывающие антитела выявляются з больших титрах и более длительно, чем у животных,привитых одно- и двукратно.

Следовательно,аллергизация организма и алтитслообразовакне у кроликов .привитых вакциной из шта '.а 82,усиливаются с увеличением кратности прививок.

Аллергическая перестройка организма крупного рогатого скота,привитого вакциной из штамма 82

У молодняка крупного рогатого скота,привитого вакциной из штамма 82,на аллерген "УЗЛ" реакция обнаруживалась на 40-300-й день.Наибольшее количество положительно реагирующих (60а) уста-навиливалось на 70-е су тки.Через 360 дней после иммунизации кожная реакция у животных была отрицательной.На бруцеллин положительная аллергическая реакция отмечалась только на 40-ой и 70-ыИ дни,количество реагирующих не превышало

Взрослые животные на аллерген "УЗЛ" реагировали уже на 20-е сутки после прививки вакцины из штамма 82.На 40-й день кожная реакция была положительной у 60,на 70-е сутки у 70£ короа.У 20* животных реакция сохранялась до 360 суток.

-Ib-

На бруцеллил положительно рогкруюдае животные выявлялись на 20-й день после иммунизации (10Г}.Ка"большев число реагирующих было установлено на 70-е сутки (5СЙ).Через 360 дней реакция оставалась положительной у IQt животных.

Таким образом.резуль'таты исслед! ваний показывают,что сенсибилизация организма коров после имму^зации вакциной из штамма 82 выражается более интенсивно,чем у молодняка.Она характеризуется увел'яением числа положительно реагирующих животных и более ранним появлением реакции на введение аллергена "УЗЛ" и бруцеллпна.

После реикмунизации вакциной из штамма 82 у 40fS молодняка крупного рогатого скота положительная реакция на гомологичный аллерген отмечалась на 20-е суш:.На 150-й день устанавливалось дальнейшее нарастание сенсибилизации (до ЭОЛ.На 360-е сутки кожная аллергическая реакция сохранялась у 70,на 450-й- у 60 и 720-й день у 4СЙ жлвотных.На бруцеллкн через 20 суток положительно реагировали спустя 150 дней-20/ь животных.Через 360 суток реа-гируоцих но было.Однако на 450-й день у 20% вновь появилась аллергическая реакция.

У коров,дважды ревакцинированных вакциной из штамма 82,аллер-гизация организма была выражена сильнее,чем у однократно ревак-цинироваяяых телок.Ка внугрикожноо введение бруцеллпна количество . .ологигельно реагирующих доходило до 5С$,на аллерген "УЗЛ" до - I03/S,а индекс аллергии-соответстзенно 2,0 и 4,3.

Следовательно,ренммункзация повышает аллергизацию организма, выявляемую кожной пробой с аллергеном "УЗЛ".В аллергической перестройке, характер которой определялся внутрикожной пробой при вве-• дании бруцеллпна,у однократно ревакцинированных животных не отмечалось существенных разлэдии.а у двукратно раиммунизированных сенсибилизация также повышалась.

Возрастная аллергическая реактивность,а такяе иммуноадлергк-ческая реактивность в зависимости от кратности прививки нашла сгсз отражение и в различтх значениях ППП.Так,достоверное повышение этого показателя у молодняка,вакцинированного однократно, происходило в период с 70-го по 240-2,а у взрослого с 40-го по 240-й,у животных,роптунизированнах однократно,на 240 и'300 сутки, а у коров,двукратно ревакцинированных,с 40-го по 240-й день.Кож-пг.-ч чуг.скигелыюсть (.положительные и сомнительные реакции),выявляем аллергеном "УЗЛ",сохранялась соответственно в течение 20-300,10-3o0,a raise 20-720 суток.

Следовательно,аллергизадия организма крупного рогатого око-

та,иммунизированного вакциной из штамма 82,при постановка яог-ной пробы со специфическим аллергеном,по сравнению о 1ШН,выявляется в более ранние сроки и сохраняется значнтвльяо более длительный период.

В начале развития первичного им.муиного отлета после введения вакцины из л гадал 82 положительная кожная аллергичесхая реакция у крупного рогатого скота отмечалась в болеэ лоздниз сроки (на 20-40 сутки),чем положительная РА и РСК со стандартным антигеном и антигеном из штамма 82 (на 10-20 сутки).У животных,рзикмуни-зирозанных этой вакциной,сроки появления положитояьнцх показателей кожной реакции,?А и РСК совпадали.Поло:пительная аллергическая реакция и комплементсвязыващие аятитеча с антигено-* из штата 82 у некоторых животных сохранялись в отдаленный период после иммунизации и ревакцинации.

Изучая а1лергический фон, создаваемый вакциной из штамма 82, устачозили.что у животных плохой упитанности кожная реакция бывает менее выраженной или совершенно отсутствует.

Показатели ачлергической реакции зависели в иззестной с13-пени от физиологического состояния яивогных.У крупного рогатого скота,привитого вакциной из штамма 82 з состоянии стельности, кожная реакция была более выражена,чем у нествльннх.Степень выраженности аллергической реакции определялась физиологическим состоящем не только при иммунизации,н и состоянием в мо:..ли постановки внутрикожной пробы.При аллергическом исследовании коров,-находящихся а состоянии глубокой стельности и которым вакцина, из штамма 82 была взедена в нестельном состоянии,количество положительно реагирую-до на аллерген "УЗД" было больше на 8.4:2,а число животных с резко положительными реакциями на 29,3? по сравнении с нес тельными. Иммунизация коров вакциной из штамма 82 з первую неделю после отела не вызывала аллергкзацга организма,выявляемую кожной пробон.В течение 8-20 дней ока была слабо зараженной. 3 последующие сроки атлергическая перестройка незначительно усиливалась и доотигата. максимального знач ения при прививке спу?;.. 15 дней после отела.

При изучении влияния физиологического состояния / лоров,ре-вакцшшроваяных вакциной из штамма 82,на серологические показатели нами установлено,что 81,2;? животных,положительно реагируц-цих на бруцеллез в РА титре не более 1:103 МЗ или в РСК тигре не выше 1:10,являются глубокоетельными или'недавно отеливпимися,которые при повторном исследовании через 2 и более месяцев после

огела,ш правило,серонегативны, а при бактериологическом исследовании у них культура бруцелл не вы еляется.

Таким образом,физиологическое состояние является фактором, влияющим на иммунологические показах ¡ли,и это следует учитывать при оценке эпизоотического состояния стада.

Иащунологический фон перед реиммушзацией крупного рогатого скота вакциной из штамма 82 также оказывал влияние на аллергические и серологические показатели.Установили.что аллергизация организма у телок.ревакцинированных 'указанной вакциной на фоне .штамма 19, была выражена сильнее,чем при реиммунизации на фоне шталмов 82 и R-I0SS.

Серологические показатели у телок,ренакцинированных вакциной из штамма 82,такл;е зависели от антигенной структуры вакцин, использованных первично.Реиммунизация телок вакциной из штамма 82 по фону агглютиногенной вакцины из штамма 19 вызывала образование антител в большем количестве и более длительно,чем у телок, ревакцинированных по гомологичному фону.При этом вторичный иммунный ответ был выражен слабее,чем первич^шй.Серологические показатели у телок,рзвакцинированных вакциной из штамма 82 по фону вакцияы из штамма 2-IQ9S, су с,астааано но отличались от таковых,привита4- однократно.

ВЗАИМОСВЯЗЬ АЛЛВР1ИИ И ИШУШТЕТА У ЖИВОТНЫХ ПОСЛЕ ПРИВИШ 2ИШХ ВАКЦИН ПРОТИВ БРУЦЕЛЛЕЗА

Опыты проводили на 282 морских свинках (2 серии),из которых были привиты культурами из штамма 82-134,штамма 19-125 и штамма E-I095-I23.B качестве вакцины применяли живую суспензию из смыва 2-сугочао2 агаровой культуры бруцадд,которые вводили подкожно в паховую область в дозе 1,6 мирд.м.к.(по оптическому бактерийному стандарту мутности) в объеме I мл.Через 3 месяца после вакцинации ; -¡ах животных исследовали аллергичеоки.а также серологически и й- основании результатов аллергического исследования реиммунизи-роЕалп вакцинами из штаммов 82,19 и £-1096 по гомологичному фону. Часть животных из каждой группы (положительно и отрицательно реагирующих на аллорген ревакцинации не подвергади.Спустя 3 месяца посла повторной прививки животных вновь исследовали аллергически и проводили вторув ранакцанациа.Чарез 3 месяца после первичной и вторичной ревакцинации,а также привитых однократно и непривитых животных заражали культурой вирулентного штамма 54 в дозе ICO м.к. соответственно,По истечении 35-40 дней после заражения животных

убивали и исследовали бактериологически.

Анализ результатов исследований показал,что морские свинки, положительно реагирующие на аллерген "УЗЯ" после однократного введения живых противобруцеллезшх вакцин из штаммов 82,19 и й-1096, обладают по сравнению с отрицательно реагируищиг/л болэа высокой напряженностью иммунитета.У животных,привитых вакциной из пгамиа 82,положительно реагирующих на аллзргея,иммунитет через 6 месяцев после вакцинации составлял 53,3*4,1%,при штамма 19-4?,5^2,9%,при штамме Н-1093-20,б72,9^,а у животных с отрицательной аллергической реакцией соответственно 26,1^4,7, 35,374,3 и 4,275,1$.

Аналогичную закономерность установили гакжз на 34 кроликах (одна серия опыта) и 211 головах крупного "огатого скот:, разного возраста (7 опытов),привитых вакцинами из штаммов 82,19 п 82-1Н, и зараженных в различные срока после иммунизации.

Ре?"льтаты этих исслздовачий нашла подтверждение з производственных условиях.Среди корив,привитых вакциной из штамма 82,по-' ложительно и сомнительно реагирующих на аллерген "УЗД",в течение 5 месяцев не установили закономерного увеличения количества серо-позитивных в РА и РСН яивогннх.^ группа коров с отрицательно;! аллергической реакцией отмечали повышение числа реагирующих в РА и' РСК (33,87$),что,видимо,связано с отсутствием у них иммунитета.

'Результаты наших исследований по изучении взаимосвязи между кожной аллергической реакцией л имму-лгетом у морских евклоя и крупного рогатого скота при повторных введениях протизобруцеллззьих вакцин показали,что эффективность ревакцинации животных зависит от аллергического фона перед взедением вакцины.Первичная и вторичная реиммунизацля вакцинами пз агглюгалогенных,слабо- и жагглатп-ногешшх штаммов бруцелл по отрицательному аллергическому фону повышала напряженность иммунитета у животных на 10,8-52,0^.Прп первичной ревакцинации животных по положительному фону культурой из штамма В-1Ш6 иммунитет повышался на II,а»,из шт&чыз 82-яо претерпевал существенных изменений (+ 2,$>),'из штамма 19-сшис на 8,9,1.Вторичная реиммунизация всеми --"кланами способствов- ■ .ниже нко иммунитета на 10-173,особенно у животных, привит .ульту-раг.ш штаммов 19 и 82.

С практической точки зрения представлял интерес изучение вопроса о том,имеется ли взаимосвязь медду кожной аллергической реакцией и титрами антител,улавливаемых в серологических реакциях, которые приняты в ветеринарной практике.Изучение этого вопроса позволило бы вскрыть причины появления реакции и предложить более

рациональ.чые схемы иммунизации живота '(.

Для выяснения данного вопроса провели 2 серии опытов.В первом опыте использовали 24 кролика,коп рых иммунизировали вакциной из штамма 82 в дозе 3,2 млрд.м.кЛере: 15, 30, и 60 дней посла прививки 12 голов животных исследовали аллергически и серологически^ остальных через 4 месяца посла иммунизации,предварительно определив аллергический фои.реиммукизировали указанной вакциной. До и «раз II, 15, 30, 60 и 90 дней посла прививки их исследовали серологически.Второй опыт проводили на 221 коровах,которые ранее были рекккунизированы прогивобруцеллезной вакциной из штамма 82.2изотных исследовали до ревакцинации и а разные сроки после прививки через 7, 15, 30, 60, 90, 180 и 240 дней.

Результаты наших исследований показали,что у животных,привитых однократно,положительно реагирующих на аллерген,а также у реиммунизированных по положительному аллергическому фону,титры антител бывают вше и они удерживаются более длительно,чем у не-реагируюцих по кожной пробе.Так,через 15 дней после прививки вакциной из штамма 82 у кроликов с положительной кожной реакцией (1-ая группа) тигр антител в РА составлял 231 МЕ,в реакции Кумбса 1:338 и в РДСК-2:22,2,а у животных с отрицательной реакцией (2-ая группа) соответственно 53,3 МЕ,1:133 и 1:11,7.У кроликов,ревакци-нированных вакциной из штамма 82 по 'отрицательному аллергическому фону,тигры агглютининов на II сутки после прививки были ниже в 1,63,на 15-в 1,5,на 30-1,7 раза по сравнению с животными, ревакщши-рованныш по положительному фону.Аналогичные данные получили в опытах на крупном рогатом скоте.

При изучении взаимосвязи между кожной аллергической реакцией и количеством кшунохомпетентных клеток,в опыте использовали 180 морских свинок,которые были разделены на 3 группы по 60 голов в каждой.Первую грушу животных иммунизировали вакциной из штамма 82-тиорув-из штамма 19 и третью -из штамма В-1096.Через 90 дней после иммунизации морских свинок исследовали аллергически л с учетом их результатов ревакцинировали животных противобруцеллез-нкми вакцинами по гомологичному фону.Одновременно иммунизировали 60 морских свинок культурами из штаммов 82,19 и Е.-1096 соответственно по 20 голов на каждый штаммЛерез 15, 30, 60 и 90 дней после вакцинации и ревакцинации животных исследовали аллергически и брали кровь для определения количества лейкоцитов,лимфоцитов и Т-лимфоци-тов,а также аутоангителообразующих клеток в крови и паренхиматозных органах.

Результаты проведенных исследований показали,что реиммуни-1ация морских свинок вакцинами из штаммов 82,19 и £-1096,имеющих положительный аллергически фон,вызывает повышение аллергиза- • дай организма и уменьшение количества Т-лимфоцитов при всех штампах.Но при этом степень изменения этих показателей зависит от эеиммунизируемого шта'/ма. Вакцина из штамма 19 вызывает более сильную аллергизаци» организма и угнетающее действие на Т-систему иммунитету 1ем культуры из штаммов 82 и Е-10Э6.У животных,реиммунизирован-

вакцинами из штаммов 82,19 И К-1096 на фоне отрицательной аллергической реакции, происходило преимущественно стимулирование образования Т-лкгл$оцитов,а кожная реакция была выражена значитель-!ю слабее.

Во втором опыте,который проводили на 221 головах крупного рогатого скота,нами были подверэдены данные,полученные на морских свинках,и,кроме того,установлено угнетающее действие ревакцинации коров вакциной из штамма 82 на фоне положительной аллергической реакции на 3-систему иммунитета,а также явление сяижшшя функциональной активности Т-лимфоцигов.

Следовательно,дефицит Т- и В-лим$оцитов в крови находится в прямой зависимости от степени развития пшерчувствительности замедленного типа к бруцеллезному антигену.

При введении любого чужеродного антигена в организме,помимо специфических антител, лимфощцшма клетками синтезируются и ауто-антитела.Для выявления побочного действия вакцины из штамма 82 при двукратном применении одновременно с определением количества Т-лимфоцигов проводили изучение аутоангителообразующих клеток в крови и паренхиматозных органах.

Исследования показали,чго у животных,ревакцинированяых яро-гивобруцеллезной вакциной из штамма 82,уровень аутоантителообра-зующих клеток в крови и органах был выше и она удерживались длительнее,чем у однократно привитых,причем на продолжительность их сохранения оказывал влияние аллергический фон перед повторным введением вакцины.У животных,рзвакцинированных по положительному аллергическому фену,клетки выявлялись длительнее,чем у равакцини-ровашшх на отрицательном фоне.

При изучении взаимосвязи мзжду пммуноморфологичеснима изменениями и кожно-аллергичесиой реакцией у одно- и двукратно привитого прогивобруцеллезицми вакцинами крупного рогатого окота в опыте использовали 40 животных,разделенных на следующие группы: I) 4 телки,зараженные вирулентной культурой бруцелл через 6 ме-

сяцев посла вакцинации штаммом бруцелл 82-ПЧ;2) 5 гелок.ревак-цшшровашшх через 3 месяца после первичной иммунизации и зара-

• данных через 3 месяца после ревакцинации вакциной из штамма 82-ЕЧ;3) 6 телок,зараженных через 6 месяцев посла вакцинации шгаммоМ бруцелл 19;4) 6 телок,зараженных через 6 месяцев после вакцинации штаммом 82;5) 4 телки,реаакцинированные через 3 месяцс посла пераичн:* иммунизации штаммом бруцелл 82 и зараженные чере-3 месяца после ревакцинации;6) 6 телок,реиммунизированных через

3 месяца после первичной прививки вакциной из штамма бруцелл 82 и зараженные через 7 месяцев после ревакцинации;7) 4 телки,равак-цшшрованныа через 10 месяцев после первичного введения вакцины из штамма 82 и зараженные спустя 10 месяцев после ревакцинации; 8) 5 животных.заражзннцх вирулентной культурой бруцелл 54 без предварительной иммунизации.

Доза вакцины при иммунизации и ревакцинации составляла для штаммов бруцелл 82 и 82-114 100 млрд.м.к.,для штамма 19- 80 млрд. м.к.Доза заражения культуры вирулентного штамма 54 для животных 6,7 и 8 групп составляла 250 млн.м.к.,а для остальных групп 1млрд м.к.

Аллергизацию организма определяли дугам постановки внугрикож ной пробы с аллергеном "УЗЯ" до и через 30 дней после заражения. Убой животных проводили через 35 дней посла заражения и при этом брали патматериал для гистологического исследования.

Установлено,что при однократном введении прогивобруцеллезных вакцин из штаммов 19,82 и 82-ПЧ аллергизация организма была выражена сильнее в первых двух случаях,при повторном введении-в группе телок,реиммунизированных вакциной из штамма 82 через 3 месяца после первичной иммунизацаи.Аналогичная закономерность выявлялась у этих животных и после заражения.У телок,зараженных вирулентной культурой бруцелл баз предварительной иммунизации,аллергическая реакция проявлялась интенсивнее,чем во виех остальных группах.

При иммуноморфологическом изучении органов и тканей телок,

• зараженных вирулентной культурой бруцелл после иммунизации и ревакцинации разными штаммами,установили лим$оидно-гиперпластическу1 ыакрофагальную и плазмокле точную реакцию как в лимфоидных, гак и

в паренхиматозных органах.Особенно ярко выраженные изменения отмечались у животных,зараженных после двукратной иммунизации. У этих галок в отличие ог животных,привитых однократно, обнаруживались сильно вырагенше аллергические изменения, которые проявлялись в вида цукоздвого и фдбрзяоадкого набухания итенок сосудов,

:ека и разрыхления периваскулярной ткани трабекул,очаговым юплением лимфоидно-гистиоцигарних клеток в паренхиматозных ?гаяах,а также усилением склеротических изменений.

В наших исследованиях наиболее сильно выраженные аллерги-зские изменения отмечались у животных,ревакцинироваяных через месяца после первичной иммунизации вакциной из штамма бруцелл I.Кроме того,в селезенке этих животных обнаруживались явления нелоидной метаплазии,что свидетельствует о сильном антигенном аздражении лшлфоидной системы.Это,по-видимому,было связано с тем, то ревакцинация совпадала с периодом,когда вакцинный штамм полостью не элиминирован из организма и,следовательно,аллергичес-ие процессы,развившиеся при первичной антигенной стимуляции,не ретерпевали обратного развития Долгому повторное попадание ан-игена в этот период вызывало сильно выраженную реакцию ГЗТ,в го ремя как у телок,ревакцинировшшых через 10 месяцев после пер-ичной иммунизации,вакцинный процесс протекал сравнительно добро-ачесгванно,Иммунные комплексы з стенках сосудов лимфоузлов и се-езенки,а также базальной мембрана'капилляров почечных клубочков ивотных,ревакцинировшшых через 3 месяца после первичной иммуид-ации,давали специфическое свечение сильнее,чем у животных,реимму-изированных в более отдаленные сроки (10 месяцев).В органах жи-отных,реиммувизированных штаммом 82-ПЧ через 3 месяца после пер-ичной иммунизации,хотя явления миелоидной метаплазии на развива-:ись,но морфологические проявления аллергической реакции отмечаясь в такой же степени,как у телок,вакцинированная шт.бруцелл 82.

й лимфоузлах и селезенке животных,вакцинированных штаммами ¡руцелл 19,82 и 82-ПЧ,заражение вирулентной культурой бруцелл вызвало образование эпиплиоидно-клеточных гранулем,подвергающих-:я фибротизации.

У животных,зараженных вирулентной культурой бруцелл,без пред-шрительной шпунизацин,лшл|юидно-гаперш1асгпческая,макрофагальная i плазмоклеточная реакции проявлялись сравнительно сильнее с образованием специфических эпителиоидно-клаточных гранулем о гигант-жими клетками и нередко с очаг'чи некроза в центре.

Таким образом,исследования показывают,что у животных,привитых однократно и ревачцишровашшх прогивсбруцддлазшяш вакцинами, i также зараженных вирулентной культурой бруцелл результаты пробы Зорно соо летствупт интенсивности патологических измопений. Чем зыраяеннае колная аллергическая реактив, гем сильнее выражены ал-leprinecrfi'e ч спедефэтзсяпа изкэяения п органах и тканях у кругчо-

го рогатого скота.

Показатели внутрикожной пробы и неспецифической резистентности организма у привитых прогивобруцеллезными вакШшами животных изучали в опыте на 40 морских свинках,которые были разделены на 2 группы по 20 голов в каждой.Первую группу морских свинок иммунизировали вакциной из штамма 19,вюрую-из штамма 82.Через 90 дней после им.'... низании животных исследовали аллергически и с учетом результатов исследований реиммунизировали вакцинами из штаммов 82 и 19 по гомологичному фону.Одновременно этими же вакцина-' № иммунизировали 20 морских свинок.Через 7, 15, 30 и во дней после вакцинации и ревакцинации у животных брали кровь и в сыворотка крови определяли количество общего белка,белковые фракции,комплемента и лизоцима..

Проведенные исследования показали,что иммунизация сопровождается- закономерными качественным и количественным изменениями белков крови,кратковременным снижением содержания лизоцима (при штамма 19 на 7 сутки,при штамме 82-на 30-й день),повышением'тигра комплемента (в течение 7-60 суток при штамме 19 и 7-15 суток при штамме 82). ' *

Нами установлена зависимость показателей неспецифической резистентности у животных после повторного введения противобруцел-лезных вакцин от аллергического фона перед ревакцинацией.Так,ревакцинация морских свинок вакциной из шгамма 82 по отрицательному аллергическому фону (1-ая группа) способствовала повышению количества общего белка в'течение 7-30 суток,а у ревакцинированных по положительному фону в течение 7-60 суток (срок наблюдения). В последнем случае уровень гамма-глобулинов в отдельные сроки был значительно ниже,чем у животных первой группы.

Содержание лизоцима и комплемента также зависело от степени аллергизации организма.Положительный аллергический фон перед ревакцинацией способствовал преимущественно снижению уровня лизоцима и более интенсивному и длительному повышению титра комплемента в течение срока наблюдения (90 дней),чем у животных,ревакцинированных по отрицательному фону;

Таким образом,данные по изучению взаимосвязи аллергии и иммунитета у животных,привитых прогивобруцеллезными вакцинами,пока-зали,что у морских свийок,кроликов и крупного рогатого скота,привитого однократно,аллергизация организма является фактором полез-ныы.но к сожалению,аллергическая перестройка организма при повторных введениях бруцелл,особенно когда животные не утратили пост-

эакцинальную аллергическую реакцию,переходит по вторую,очевидно, вредную для организма фазу-фазу неадекватных реакции со стороны клеток и тканей.

Приведенные данные заставляют со всей осторожность» относиться к проведению ревакцинации в стадах крупного рогатого скота, ранее фивитого противобруцеллезными вакцинами, и строго придерживаться при этом принципа целесообразности и необходимости прививки в каждом конкретном случав во избежание чрезмерной сенсибилизации организма.

Данные,полученные при изучении иммуноаллерг .леской перестройки организма животных,привитых различными бруцеллезными вакцинами, а также взаимосвязи аллергии и иммунитета вошли в разргботаюшз методические указания по применечкю аллергического метода для контроля иммуноаллергического состояния у крупного рогатого скота, привитого вакциной из штамма 82.

Результаты проведенных исследований указывают также на необходимость изыскания методов и средств специфической профилактики бруцеллеза,способствующих снижению аллергического потенциала при повторных введениях вакцин.Поэтов следующим этапом яаних исследований было изучение взаимосвязи аллергии и иммунитета при различных способа:: зведения пропшобруцеллезшас закцил.

ИЗУЧЕНИЕ ЗАКОНОМЕРНОСТЕЙ РАЗВИТИЯ АЛЛЕ?ГШ И КШУШТЕТА У ЕИЗОТНЫХ ПРИ РАЗШЕД СПОСОБАХ ВВЕДЕНИЯ ГСЛ ПРОТИВОБЩШЕЗШХ ВАКцин

Для решения поставленной задачи провел:! 7 иерий опытов,в том числе -I опыта-па кроликах и морских свинках,3 опыта-на крупном рогатом скота.В первом опыте использовали 18'кроликов,которых иммунизировали вакциной из штамма 82 подкожно,внутракожяо и коныэнк-тивально в дозе 3,2 млрд.м.к.Через 15, 30, 60 и 90 дней посла им-гу.тзацип живот;щх исследовали аллергически,а также однолремзшю брали кровь для постановки ?А,ГС1С и РБП.Ло агорой опыте использовали 321 морскуо евплку,разделенные на 4 груплл.Перзуо группу жп.-еотяцх в колдчесгва 143 головы Л'.-.',',уп::зпро:,а:л из птамма

02,л тсч тгелз 37 ::з'п±с поя''.сг:ю,4СЬзпу2р:цх:;::о1СЗ-ко:г;!о;и'^ЛЕаль-йо,го-псЕогсл'=цб а оЗьс«ах соогвотс^взгло 1,0, 0,15, 0,05 (доза 1е6 'глрд. мл:.) а 1,0 ел (доза 3 нлрд.м.к,).2юро:: груац'э свалок в количество £6 годез вводили глкцдяу из ::га-,.'/а 19 подкожно,пнугри-ксжно.доцьЕнтпвальло и nopopau.no сооглзтсгзешо по 25, 22, 13 ч

-2621 голов.Животных третьей грушш в количестве 24 головы иммунизировали культурой из штамма K-I096 подкожно,24-внутрикожно,22-коньюнктивально и 22-перорально.Через 3 и 6 месяцев после вакцинации всех животных исследовали аллергически,затем заражали кулыуро! вирулентного штаммаВ*. atcxiuflA в дозе 50 м.к.До заражения (через 7» 15, 30, 60, 90 и 180 дней после вакцинации) по 3-6 голов»свинок исследовали бактериологически на приживаемость культуры.

Исследования показали,что прогизобруцеллезные вакцины из штаммов 82,19 и E-I096,введенные морским свинкам и кроликам подкожным методом,приживаются в организма более длительно,аллергизация организма при этом бывает сильнее,а иммунитет более напряженнее, чем у животных,иммунизированных пероральным.внугрикожным и конью-нктивальным методами.В последних 2-х случаях животные серологически также реагируют менее длительно,а тигры антител в сыворотке крови у них бывают в меньшем количестве.

Следовательно,для создания более напряженного иммунитета первичную иммунизацию следует проводить методами,вызывающими выраженную аллергизации■организма.

В третьем опыте использовали 12 кроликов,которых иммунизировали вакциной из штамма 82 подкожно в дозе 3,2 млрд.м.к.После иммунизации у животных брали кровь для постановки РА.РСК и РБП,а также исследовали аллергически.Через 3 месяца после иммунизации их исследовали серологически и аллергически,затем разделили на 3 группы (по. 4 головы в каждой).Первую группу животных реиммунизиро-вали вакциной из штамма 82 подкожно,а торую-внугрикожно,грегыо-коньюнктивально в объемах соответственно 2,0, 0,1 мл и 0,05 мл (доза 3,2 млрд.м.к.).После реиммунизации кроликов исследовали аллергически спустя 1,3 и 7 месяцев,а серологически через 7, 15, 30, 70, 103, 120 и 150 дней.

' Проведенные исследования показали,что при ре иммунизации кроликов вакциной из штамма 82 разными методами аллоргизация организма и антителообразование зависят от способа введения вакцины. Установлена возможность снижения иммунологических реакций путем ревакцинации животных внутрикожным и коньюнктивальным методами.

Полученные данные были подверждены в опыте на 192 телках прадслучного возраста.

В следующем опыта была поставлена задача-определигь напряженность иммунитета у морских свинок,ревакцинированных протиаобруцел-лезными вакцинами разными методами.

Использовали 357 морских свинок, которые были разделены на 3

•руппы.Животных первой и второй групп в количестве 124 и 122 •оловы иммунизировали соответственно вакцинами из штаммов 82 и ;9,третью (III голов)-из штамма R-I096 (доза 1,6 млрд.м.к.),Спустя ) месяца после прививки,животные каждой'группы после серологи-!еского и аллергического исследований были реиммунизированы по го-/юлогичному фону подкожно,вяутрикожно,конъюнктивально и перораль-ш в объемах соответственно 1,0, 0,1, 0,05 (доза 1,6 млрд.м.к.) 1 1,0 мл (доза 3 млрд.м.к.)-,Через '7,15,30,60,90 и 180 дней после ревакцинации животных исследовали серологически и бактериологи-1вски.Спустя 90 и 180 дней морских свинок исследовали аллергически, ¡атем"заражали культурой вирулентного штамма 54 в дозе 50 м.к.

Исследования показали,что общее количество животных,реагирующих аллергически при внутрикожном,коньюнктивальном и парораль-^ом методах введения противобру'целлезных вакцин из штаммов 82, [9 и R-I096,существенно не отличается от таковых,ревакцинирован-иых подкожно,но степень выраженности реакции в последнем случае 5ываег сильнее,а иммунитет менее напряженный.

Аналогичные данные были получены на 16 головах крупного рогатого скота в экспериментальных условиях.

8 следующем опыте была поставлена задача-изучить влияние аллергического фона перед реиммунизацией крупного рогатого скота вакциной из штамма 82 разными методами на аллергические и серологические гесты,а также Т- и В-систему иммунитета.

Исследования проводили в колхозе "Родина" Целинного района Калмыцкой АССР на 183 коровах,ранее трижды привитых вакциной из штамма 82 согласно наставлению по применению вакцины.Перед очередной ревакцинацией животных исследовали аллергически и брали кровь для исследования в РА.РСК и РБП.а также для идентификации Т- и В-лимфоцитов.Затем по принципу аналогов,с учетом результатов аллергических исследований,животных реиммунизировали вакциной из штамма 82 подкожно.внутрикожно и коньвнктивально в объемах соответст- . венно 3,5, 0,2 и 0,1 мл (доза 70 млрд.м.к.).После ревакцинации животных исследовали через'7, 15, '30, 60, 90, 120 и 180 суток.

В результате проведенных исследований установили,что рэим-мунизация животных указанной вакциной коныонктивалышм и внутрикож-ным мэгодачи на фоне положительной аллергической реакции вызывает менее выраженную аллергизацюэ организма,образовшша агглютининов и комплементсвяэывающих антител и кратковременное угнетение Т-системы иммунитета,чем при подкожном применении вакцины,,

Закономерность проявления серологических и аллергических п«-

казагелей у животных,ревакцинировашшх по отрицательному аллергическому фону,была аналогичной вышеописанной группе.Отличие заключалось в том,что в последнем случае происходило усиление проли-фератиных процессов в системе Т-клеток независимо от способа ревакцинации.

Данные,пс.г;: ;енные при изу ении закономерностей развития аллергии и иммун^зта у животных при различных способах введения им протшзобруцеллезных ва" пин,явились основой для разработки "Рекомендации по усовершенствованию ревакцинации крупного рогатого скота вакциной из штамма 82",а также методических рекомендаций "Усовершенствование методики определения количества Т- и В-лимфоци-тов в крови крупного рогатого скота".

ИСПЫТАНИЕ НОВЫХ СПОСОБОВ РЕВАКЦИНАЦИИ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА ВАКЦИНОЙ ИЗ ШТАММА 82 В ПРОИЗВОДСТВЕННЫХ УСЛОВИЯХ

На основании результатов проведенных исследовании нами разработаны две новые схемы иммунизации крупного рогатого скота. Сущность первого из них (метод дифференцированного подхода) заключалась в следующем.В благополучных и неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах крупный рогатый скот,ранее однократно ревакцширо-ваняый прогивобруцеллезшми вакцинами,перзд очередной прививкой исследовали серологически на бруцеллез (РА,РСК).Реагирующих (РА в титре 100 МЕ и выше или положительная'РСК) животных удаляли из стада,а остальных исследовали дополнительно аллергически.В качестве аллергена использовали бруцеллин ВИЭВ или бруцеллезный аллерген "УЗЛ".Положительно реагирующих на аллерген животных ревакцина- ■ ции не подвергали,а остальных прививали вакциной из шташа 82, после чего всех животных формировали в одну группу.

Вторая схема основана на том,что в благополучных и неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах иш^унизацию молодняка крупного рогатого скота противобруцеллвзными вакцинами из штаммов 82 и 19 проводили согласно наставлении по их применению (подкожно),а ревак-цинировали внутриксжяо вакциной из штамма 82 в дозе 70 млрд.м.к.

Испытание новых схем ревакцинации в 24 благополучных и неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах Калмыцкой ССР и Оренбургской области на 13542 головах крупного рогатого скота показало их преимущество посравненив с существующей мегодикой.Использоваяие первой схемы давало возможность проводить ревакцинацию телок и коров в более ближние сроки,чем предусмотрено наставлением по применению

цины из штамма 82,значительно ускоряло сроки оздоровления на-гополучных по бруцеллезу гуртов,способствовало созданию стабиль-'о и достаточно напряженного иммунного фона за счет снижения ла высокосенсибилизированянх (менее устойчивых к заболеваний) ютных.

Крупшй рогатый скот.реиммунизировашшх вакциной из штамма по второй схеме,серологически в отдаленные сроки после прививки ^тировал в 1,8-2,8 раза меньше,чем животные.ровакцинирозашшэ гласно наставлению по применению вакцины.

Таким образом,применение вакцины из штамма 62 по разработан-t. новым схемам способствовало повышению эффективности спецификой профилактики бруцеллеза.

разработка и СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ аллергической диагностики бруцеллеза

Нами проводились также исследования в направлении изыскания особа повышения диагностической эффективности аллергического года с использованием бруцеллина В1Ш.

Для разработки метода использовали 132 морских свинок и 547 лов крупного рогатого скота.

Предлагаемый способ основан на том,что вначале у животных ■вытают сенсибилизацию организма за счет введения вакцины и,до ■явления посгавкцинальной аллергической реакции, ставя г кожную юбу.У животных,зараженных культурой вирулентного штамма 54,пос-| введения противобруцаллезных вакцин из штаммов 82 и 19 аллерги-юкан реакция проявлялась на 3-й,а у здоровых-на 5-дань.Исполь-»вание нового метода диагностики бруцеллеза (положительное реше-ie ВНИИЛЗ на выдачу патента от 12 ноября 1991 г.) давало воз-жность выявить дополнительное количество больных бруцеллезом шотных,которые нз реагировали при исследовании существующим алогическим методом.Специфичносгь аллергической пробы о бруцеллп-)м ДИЗЗ был подтвержден путем патоморфологического изучения ма-зриала от забитых гелок.

На основании полученных данчых составлены методические указа-ая по повышешю чувствительности аллергического метода диагнос-яки бруцеллеза животных.

В задачу наших исследований входило'также усовершенствование ялергической диагностики бруцеллеза in vUzo путам разработка ио-щс клеточных реакций.

3 основу одной из разрабатываемых реакции была положена регч-

ция лизиса лейкоцитов в непрямом варианте,а в качестве клеток-мишаней использовали тканевиа базофшш крысы.Для разработки и испытания новой реакции использовали сыворотки крови 10 морских свинок и 219 голов крупного рогатого скота.Инкубирование сыворотки крови больных бруцеллезом животных,бруцеллина ШЗВ и взвеси ш ритонеалькых тневях базофилов вызывает лизис последних,а степе4 их лизиса заь.'"пт от выраженности аллергизации организма.Реакция лизиса тканевых 'базофичов (РД1Б) является простой и доступной методикой,позволяющей объективно определять состояние инфицировав ности организма.Среди телок,зараженных культурой вирулентного штамма в разных дозах,аллергическое состояние было выявлено на II,5-66,&%.больше,чем в реакции лизиса лейкоцитов.В благополучных по бруцеллезу хозяйствах у крупного рогатого скота,реиммунизиро-вашого вакциной из штамма 82 при исследовании сывороток кроьи в сроки,предусмотренные наставлением по её применению,показатель специфического лизиса базофилов был неспецифическим (меньше 10%). Исследование в РЯТБ сывороток крови от животных,реагирующих положительно в РА и РСК,давало возможность выявить,в зависимости от эпизоотической ситуации,от 18,8$ до 98.СЙ крупного рогатого скота больного бруцеллезом.

Результаты проведенных исследовании вошли в методические указания по применению реакции лизиса тканевых базофилов для дифференциации положительных серологических реакции при исследования сывороток крови крупного рогатого скота на бруцеллез.

Представлял интерес использование реакции восстановления нит-росинего татразолия в нерастворимый диформазан (НСТ-гест) для аллергической диагностики бруцеллеза ¡.и у^ю.йра разработке этой реакции использовали 10 морских свинок и 29 голов крупного рогатого скота.Нами в качестве стимулятора НСТ-теста для диагностики специфической аллергии предложено использовать живую вакцину из штамма 82.

Результаты исследований свидетельствуют о том,что индекс аллергической реактивности найтрофилов (ИРАН) у нормальных корских свинок при использовании как живой бруцеллезной культуры из штамма 82, так и бруцеллина ВИЭЗ,туберкулина,а также иерсениозного антигена был в пределах 0,03-0,07.Аналогичные результаты получили и у морских свинок,зараженных культурой бруцелл вирулентного штамма, при инкубировании с гегерологичными антигенами и с бруцеллином ВИЭЗ,в го время как ИРАН с живой культурой бруцелл из штамма 82 был в пределах 0,12-0,28.Повышение аллергической реактивности вы- -

яалось в увеличении относительного количества диформазал-поло-[телышх иейтро^иов в 2 и более раза в активированном варианте ;Т-теста по сравнению со спонтанным вариантом.

При сопоставлении НСТ-теста с результатами клеточных тестов, которых для выявления аллергического состояния была использо-ша кровь зараженного крупного рогатого скота,установили,что гот показатель дает более стабильные результаты а отличается вы-экой чувствительностью,

Известно,что противобруцеллезнна вакцины используются как репараты для специфической профилактики бруцеллеза.Наш уста-овлена возможность использования зшвоЗ вакцины в целях аллерги-еской диагностики бруцеллеза.Прэтом в опыте использовали 80 орских свинок,разделенных на 3 1'рупа.Нарву»,эторуз н треть») руппы животных заражали культурой вирулентного штамма 54 в до-ах 50,100 и 203 микробных клеток соответственно,"орских свинок , 5, 6 и 7-ой групп иммунизировали культурами бруцелл вакцинах штаммов 82,19,£-1096 и £-82 соответственно а доза 1,6 млрд. I.к.8-ая группа животных служила контролем.Через 30 даой посла аражения.а такжа 30 и 60 дней посла иммунизации животным anyipuacs-ю в область брюшка вводили вакцину из штамма 82 в объеме ОД lui [ доза 1,6 млрд.м.к.Перед введением препарата у морских свинОк ¡роли кровь для серологических исследований..!} гочениз 18-96 часов шела иммунизации изучали реакцию на место виедошш вакцины.Чероз 36 часов посла иммунизации животных убивали и подвергали бак-гериологическим исследованиям.

3 результате проведенных исследований установили,что реакция fia месте внутрикохного введения вакцины из штамма 82 у животных, ' ранее зараженных культурой вирулентного штамма и иммунизированных противобруцеллезными вакцинами,имеег отличительные признаки.Слабо выраженный отек,четко ограниченный ге;.шо- или сзатло-краслый участок в течение 18-24 часов после введения вакцины из штамма 82 является характерным признаком только для животных,болышх бруцеллезом.При бактериологическом исследовании морских свинок о наличием вышеперечисленных признаков во всех случачх выделяли куль гуру вирулентного штамма.Дашшо,получашшз па морсшйс свинках,были подтверждены на 728 головах,рапов типизированного вакциной из игамма 82 крупном рогатом скоте.

ВЫВОДЫ

I.Методом ультразвукового разрушения бруцзлл вакцинного

штамма 82 получен новый аллерген "УЗД",который обладает высокой специфичностью и активностью.В неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах дополнительно к реагирующим в РА и РСК выявляется до 12% крупного рогатого скота,дающего положительные показатели на введение аллергена.

2.У морских свинок и кроликов,привитых живыми бруцеллезными вакцинами из лммов 82 и 19, различий в появлении и продолжительности сохранения положительной кожной аллергической реакции практически не наблюдавтся.Дишь в отдельные сроки после прививки вакциной из штамма 19 животные на аллерген реагируют в большей сте-пени.чем иммунизированные культурами бруцелл штаммов 82 и й-1096<

Показатель повреждения нейтрофилов с использованием аллергена "УЗД" и кожная реакция на бруцеллин у кроликов и гелок,прилип вакциной из штамма 19,отличаются большей интенсивностью,чем у иммунизированных культурами штаммов 82 и Е-1096.

При инфекционном процессе показатели аллергических реакций отличаются большей выраженностью,чем у иммунизированных прогиво-бруцеллезными вакцинами.

3.Степень аллергической реакции организма животных на введен бруцеллезной вакцины зависит от их возраста,упитанности,физиологического состояния в период иммунизации и аллергического исследования, прошедшего времени после отела,кратности и интервалов введения антигена,а также иммунологического фона перед реиммуниза цией.

У молодняка,вакцинированного в 5-7-месячном возрасте,реакция протекает менее интенсивно,чем у взрослых особей.При низкой упитанности животных кожная реакция проявляется менее выраженно. У кивотных,привитых вакциной из штамма 82 в состоянии стельности, аллергическая реакция более выражена,чем у нестелышх.С увеличением кратности прививок аллергическая перестройка организма возрастав т.При многократном введении противобруцеллезной вакцины из шгамма 82 о интервалом в 1,3 и 6 месяцев у животных повышенное заселение организма вакцинной культурой не происходит,а аллергиза-ция организма и антителообразование при этом усиливаются.С увели-чешем интервала между ревакцинациями отмечается тенденция к повышению заселения организма бруцеллами и снижение количества ан-тигел,выявляемых в РА и РСК.

4.Реакция на введение аллергена "УЗл" по сравнению с ШШ иммунизированного вакциной из штамма 82 крупного рогатого скота выявляется в более ранние сроки и регистрируется в течение более

игельного периода. ШШ, несмотря на свою специфичность,на мояот ужить объективным методом определения степени аллергической па-стройки организма ввиду низкой чувствительности.

5.У животных,иммунизированных противобруцеллезкыми вакцинами, шествует взаимосвязь между показателями кожной пробы на аллер-н "УЗд" и напряженностью иммунитата.Положительно и сомнительно 1агирующие на аллерген "УЗд" животные после однократного введения I культур из штаммов 82,82-134,19 и К-1096 обладают более высокой шряженностью иммунитета,чем отрицательно реагирующие на этот ал-¡рген.

6.Эффективность ревакцинации морских свинок и крупного рогатого юта зависят от аллергического С она перед введением вакцины. Пар-1чная и вторичная реиммунизация вакцинами из агглвгиногенянх.слабо-инагглютиногенных штаммов бруцелл по отрицательному аллергичес-зму фону повышала напряженность иммунитета у животных на 10,8-2,а'«5.при первичной ревакцинации животных по положительному фону лльтурой из штамма Е-1096 иммунитет повышался на 11,3^,из штамма 2-не претерпевал существенных изменений (+ 2,4%),из штамма 19-яижался на 8,9£.Вторичная реиммунизация всеми вакцинами способ-твовала снижению иммунитета на 10-17^,особенно у животных,привитых ульгурами штаммов 19 и 82.

7.Между кожной аллергической реакцией и титрами антител у роликов и крупного рогатого окота,привитых однократно и ревакци-ированных противобруцеллезной вакциной из штамма 82,имеется пря-ая связь.

У животных,привитых однократно и положительно реагирующих а аллерген,а также реиммунизированных подкожно по положительному ллергическому фону отмечаются высокие тигры антител и они удерживаются более длительное время,чам у реиммунизированных внутрп-лжным и коньюнктивалышм методами на фона положительной и отра-[ательной аллергической реакции. . .

8,Содвржаниа Т- и 3-яимфоцитов в крови у животных,кммунизи-юванных противобруцеллезными вакцинама.эависнт от иммунологического фона парад ревакцинацией,О" штамма в способа введения аяти-. •она в организм.У привитых подкожно животных после ревакцинации 1нутрикожяым,конызнкгивальаа1 а подкожным методами по положитель-юму аллеггическому фопу откзчазтоя снижение количества Т- и в-химфоцитов я их функциональной активноети.Вакцина из штамма 19 жазываат при этом более сильное угнет^щзе действие на Т-сио<е-лу иммунитета,чем-из штаммов 82 я &-1096.У живопшх.ревакцинирг-занных по отрицательному аллергическому фону,независимо от маю-

да введения вакцины и шгамма происходит преимущественно- стимулиро вание образования этих клеток и повышешш их функциональной активности.

9.У морских свинок,ревакцшшрованных противобруцеллезной вакциной из штамма 82,отмечается повышение и более длительное сох ранение уровне аутоантителообгазующих клеток в крови и органах.

На продси-.^.тельность сохранения антителообразующих клеток оказывает влияние аллергической фон перед повторным введением вакцины.

У животных,ревакцшшрованных по положительному аллергическому фону.бляшкообразующие клетки выявлялись более продолжительное время,чем у привитых на отрицательном фоне.

10.У крупного рогатого скота,привитого и ревакцичированного протпВобруцеллезными вакцинами из штаммов 82,19 и 82-114,а также зараженных культурой вирулентного штамма бруцелл имеется взаимосвязь между гиперчувствительноетью замедленного тша в "кожной пробе" с имчуноморфологичесними изменениями.Чем больше индекс аллергии, тем сильнее выражены специфические изменения,а также изменения характерные для аллергического состояния в.органах и тканях у крупного рогатого скота.

II.Отмечается влияние аллергического фона перед реиммунизаци животных прогивобруцеллезными вакцинами на показатели иеспецифк-ческой резистентности.Реиммунизация морских свинок вакциной из шгамма 82 по .положительному фону вызывает более продолжительное повышение содержания общего белка,титра комплемента,интенсивное и длительное снижение уровня гамма-глобулинов,лизоцима,чем при ре-пммунизации по отрицательному фону.

12.У животных,иммунизированных прогивобруцеллезными вакцинам подкожным методом,аллергизация организма, антителообразовачие и напряженность иммунитета выражаются сильнее,чем у привитых внугри-кожным.коныэнктивальным и пероральным методами.

Мореше свинки,кролики п крупный рогатый скот,привитые про-тивобруцеллезиыми вакцинами подкожно,после ровакцияации внутрикон-ным и коньонкшвалышм методаг.ш аллергически и серологически реагируют слабее,а иммунитет при этом создается более напряженный,

13.Репммуш1зация крупного рогатого скота против бруцеллеза вакциной из шгамма 82 методом индивидуального подхода,а также путем впутрикожного введения способствует созданию более стабильного и достаточно напряженного иммунного фона в с гадах,снижению числа гиперсепсибилизированяых и положительно реагирующих на

бруцоллез животных.

14.Разработай новый способ аллергической диагностики бруцеллеза, основанный на постановке внутрикожной пробы с бруцеллином ВИЭЗ через 2-3 дня после иммунизации противобруцеллезшми вакцинами,который дает возможность повысить диагностическую эффективность метода в 2 и более раза.

15.Выпялены отличительные признаки на месте внутрикожного введения живой вакцины из штамма 82 у больных животных и привитых живыми вакцинами К-форм бруцелл,что может быть использовано для дифференциальной диагностики бруцелле. д в стадах ранее вакцинированного крупного рогатого скота.

16.Рекомендован высокоспециф:-1чннй,информативный и высокочувствительной гест ддч аллергической диагностики бруцеллеза 1л-иЬс-реакция лизиса тканевчх баз офитов, который у ревакцшшрован-ного штаммом 82 крупного рогатого скота и здорового имеет отрицательные, а у естественно больных и экспериментально зараженных бруцеллезом животных высокие значения (более 10,1).

17.Установлена возможность использования НСТ-теста в целях аллергической диагностики бруцеллеза 1и ^¿т:', который обладает высокой чувствительностью и специфичностью.У морских свинок и крупного рогатого скота,зараженных вирулентной культурой бруцелл,значение индекса аллергической реактивности нейтрофилоа резко повышена (0,1670,02 - 0,25*0,04),в го время как у здоровых этот показатель не превышает 0,10.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЗЕНИЯ

1.Предложены новые средства и методы аллергической диагностики бруцеллеза,а также рациональные способы иммунизации крупного рогатого скота противобруцеллезшми вакцинами.

13 связи с этим разработаны: I. Методические указания по повышению чувствительности аллергического метода диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота.-Утв.ГУ 13 Госагрспропа СССР 28 декабря 1930 г.

2.Методические указания по применению реакции лизиса тканевых базофилоп (РДТБ) п*<< ""^¡«решдацш! положительных серологических реакции при исследовании сывороток крови крупного рогатого скога на бруцзлл^-Уга<,т :.!п::ссльхозпрода СССР Э сентября 1331 г.

ЗЛ'атодпчоскиз указали по прлмзнению аллергического мзхода для контроля ".м.мупоа'шерггпеского состояния крупного рогатого скога,привитого вакцгаоЯ из шт.Ер.абортус 82.-Утв.ГУЗ 'Азшссльхоч-

прода СССР 13 ноября 1991 г.

4.Методические рекомендации "Усовершенствование методики о ределения количества Т- и В-лимфоцитов в крови крупного рогатог окога".-Утв. 1УВ Минсельхозпрода СССР 22 августа 1991 г.

5.План мероприятий по профилактике и ликвидации туберкулез и бруцеллеза крупного рогагого скота в колхозах и совхозах Калмыцкой ССР 1989-1990 гг.-Угв.заместителем председателя Совет Шшисгров Калмыцкой ССР 27 декабря 1989 г.

6.План работы эпизоотического отряда ветеринарного отдела Оренбургской области на 1991 г.-Уив.начальником ветеринарного о дела 28 декабря 1990 г.

7.Временная инструкция по изготовлению и контролю бруцелле ного аллергена "УЗЛ".-Утв,директором ВНИВИ 02.07.1990 г.

8.Технические условия на аллерген бруцеллезный для диагнос гики бруцеллеза и контроля иммуноаллергической реактивности у крупного рогатого скота,привитого нротивобруцеллезной вакциной из штамма 82.-Угв.директором ВНИВИ 02.07.1990 г.

9.Рекомендации по усовершенствованию ревакцинации крупногс рогагого скота противобруцеллезной вакциной из штамма 82.-Утв.д ректором ВНИВИ 06.06.1991 г.

П.Полученный данные вошли:в "Наставление по применению ч хой живой вакцины из штамма 82 бруцелла аборгус против бруцелле за крупного рогагого скота".-Утв.1УВ Госагропрома СССР 10 нояб] 1988 г.

СПИСОК РАБОТ,ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1.Лутфуллин М.Х.Аллергическая перестройка организма круши рогагого скога.привитого вакциной из штамма 82 // Республиканс] научно-гехническая конференция по проблемам вегеринаршкТез.до] -Казань,1978.- С.75-76.

2.Лугфуллин М.Х.Получение и изучение новых бруцеллезных а лергенов // Уч.зап.Казанского вег.ин-та.- I978.-T.I29.- и.52-5!

3.Лугфуллин Ы.Х.Аллергизация организма крупного рогагого скога.'привигого вакциной из штамма 82 // Научные тру, Казаяокого ввг.ин-га.-1979.-Т.132.- и.47-52.

4.Лугфуллия М.Х.Изучение аллергической реакции у коров,пр вигах вакциной из штамма 82 // Республиканская научно-техничес конференция, по проблемам ветеринарии и зоотехнии:Тез.докл.- Ка зань,1980.- С.72-74.

б.Лугфуллин М.Х.,Киршин Б.А.Аллергия и иммунитет у крупно

рогагого скога,привитого вакциной из штамма 82 //'Научные груды Казанского вет.ин-га.-1980.-ТЛЗЗ.- С.48-50.

6.Лугфуллин м.Х.Гиперчувитв'игельнооть замедленного типа у морских св1шок и кроликов,привитых живыми вакцинами против бруцеллеза // Научные труды Казанского вег.ил-га.-1980.-Т.135.- С. 123-127.

7.Салмакои K.M.,Алехин P.M..Плотников Э,С..Абузаров Ю.Ш., Киршин Б.А..Белозерова Г.А.,Хамзин К.А..Лутфуллин М.Х. и др.Ма-гериалы изучения живой вакцины против бруцеллеза крупного рогатого скота из штамма 82 // Состояние и перспективы научных исследований по диагностике,профилактике туберкулеза и бруцеллеза и мори борьбы с этими болезнями с/х ливотных:Тез.докл.Науч.конф.-dmck.I980.- С.84-85.

8.Лутфуллин М.Х.Алларгическая диагностика бруцеллеза крупного рогатого скота // Актуальные вопросы эпизоотологии.-Казань,1983,-3.69.

9.Лутфуллин М.Х..Белозерова Г.А.Диагностическая эффективность аллергена 1ЫИ // Республиканская ндучно-техяич.конф.молодых уче-шх:Тез.докл.-Казань, 1984,- С.14.

Ю.Лу'гфуллин М.Х. .Лутфуллина H.A.Клеточные факторы иммунитета у крупного рогатого скота,привитого вакциной из штамма 82 // 1р&£илактика,диагностика и меры борьбы с инфекционными,инвазион-шми и незаразными заболеваниями сельскохозяйственных животных, ниц,пчел и рыб при интенсивном ведения хозяйства:Тез.докл.науч. *онф,-Баку,1989.- С.42-43.

11.Лутфуллин М.Х..Сашаков К.М.,Гагия М.Ш.,Лутфуллина H.A. Пдриц для вну гриколного введения :11яформ. л. № 433-89 Татарский ШТИ,1989, 2 С.

12.Лутфуллин М.Х. .Сашаков K.M..Лугфуллина Н.А.УсовершенствО-эанная технология консервирования крова:Илфор.м.лЛЗ 414-89 Тагар-

5кий ЦНТИ.1989, 2 С.

13.Лутфуллин М.Х..Салманов К.М.,Пау и.М.,Василевич В.М.Спо-юб ревакцинации крупного рогатого скота противобруцеллззной вакциной из штамма 82:Информ.л. й "32-89 Татарский ЦНТИ.1989, 3 С.

14.Лутфуллин М.Х.Иммуноаллер'гическая перестройка организма соров.рэиммунизироваяных вакциной из пгалела 82 разными способами // Республиканская научн.-производств.конф.:Тез.докл.-Казань, :990.~ С.38.

15.Лутфуллин М.Х.Ревакцинация крутого рогатого скота ароти-юбруцеллезной вакциной из штамма 82 методом дифференцированного

подхода // Современные проблемы иммунологии,биотехнологии, генной и клеточной инженерш в ветеринарной медицине:Тез.докл.Вса-союз.науч.-технич.конф.-М.,1990.- С.81-82.

16.Лугфуллин М.Х..Лутфуллина Н.А.Иммуноаллергичеокая переотройка организма животных при различных способах введения живой противобруцелл-?ной вакцины из штамма 82 // Современные проблемы иммунологии,с г..технологии,генной и клеточной инженерии в ветеринарной медицине:Тез.докл.Всесоюз.науч.-технич.конф.-М.,1990. -С.198-199.

Г7.Лугфуллин М.Х.,Салмаков К.М.,Лугфуллина H.A.Зажим для бир кования животных: Информ.л.Л 324-90.Татарский ЦНТИ,1990, 2 С.

18.Лутфуллин М.Х.,Салмаков K.M..Лутфудлина H.A.Иммунологическая реактивность у крупного рогатого скота после реиммунизации живой вакциной из штамма бруцелл 32 // Межвузовский сборник научных трудов (Разработка эффективных методов диагностики особо опасных инфекционных болезней животных.-Казань,1990.- С.45-49.

19.Лугфуллин М.Х..Алиев ¿.И..Лугфуллина Н.А.Дакзкн К.А.Ал-лергизация организма и иммунокорфологическио изменения в органах и тканях крупного рогатого скота,иммунизированного противобруцел-лезной вакциной из штамма 82 // Межвузовский сборник научных трудов (Разработка эффективных методов диагностики особо опасных инфекционных болезней животных,-Казань,1990.- С.50-53.

20.Лутфуллин М.Х.Влияние иммунологического фона перед реим-мунизацией крупного рогатого скога вакциной из штамма 82 на аллергические и серологические показатели // Республиканская научн. производств.конф.: Тез.докл.-Казань,1991.- С.28.

21. Лутфу ллин М. X., Лугфуллина H.A.Влияние многократной ревакцинации против бруцеллеза на показатели иммунологической перестро 1Ш организма // Республиканская научн.-производств.конф.:Тез.докл Казань,1991,- С.27.

22.Лугфуллин Ы.Х.,лугфуллина Н.А.Прогивобруцеллезная вакцина ция морских свинок с положительными и отрицательными иммунологиче кими реакциями // Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов: Тез.докл.4 Все-союз.конф.-М.,1991.- С.98-100.

23.Лугфуллил 1«1.Х.Гиперчувствительность замедленного типа и иммунитет прошв бруцеллеза у морских свинок,реиммунизированных живой вакциной из штамма 82 // Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов: Тез. докл.4 Всесовз.конф.-М.,1991.- C.IOO-IOI.