Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Выживаемость C. Pseudotuberculosis в почве, в ризосфере растений

ОД

1 / АВГ Ш

На правах рукоппси

РАЗСОХИН ВИТАЛИЙ ВИКТОРОВИЧ

ВЫЖИВАЕМОСТЬ С. PSEUDOTUBERCULOSIS В ПОЧВЕ, В РИЗОСФЕРЕ РАСТЕНИЙ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

ОМСК - 2000

Работа выполнена на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии института ветеринарной медицины Омского государственного аграрного университета и лаборатории группы микробиологии и биохимии почвы СибНИИСХоза.

Ведущая организация: Казанская государственная академия

ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана.

Защита диссертации состоится "29 " июня 2000 г. в 12 часов на •заседании диссертационного совета Д. 120. 48. 01 при институте ветеринарной медицины Омского государственного аграрного университета.

Адрес института: 644007, г. Омск, Октябрьская, 92. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института. Автореферат разослан ьЛ/^Я1_2000 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат ветеринарных

Научный руководитель:

кандидат ветеринарных наук, доцент Сухотина В.П.

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор Ощепков В.Г., доктор ветеринарных наук, профессор Кнсленко В.Н.

наук, доцент

Н.П. Жабпн

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Одной из основных природных экологических систем, является почвенная экосистема, входящая в агробиогеоценоз.

Академик ВАСХНИЛ А.А. Поляков (1980), считает, что почва, как фактор передачи патогенных микроорганизмов занимает одно из первых мест среди других компонентов окружающей среды.

Одной из болезней, в эпизоотологическом процессе которой почва играет немаловажную роль, является казеозный лимфаденит овец. Возбудитель этой болезни Corynebacterium pseudotuberculosis, по данным D.C. Blood, J.A. Henderson (1975), обсеменяя почву пастбищ и загонов, обуславливает стационарность инфекции. Это находит своё подтверждение в исследованиях многих учёных (L. Bull, С. Dickinson, 1934, 1935; K.V.F. Jabb, Р.С. Kennedy, 1970; С.С. Brown, H.J. Olander, 1987; A.B. За-болотных, 1993; И.Г. Трофимов, 1994; В.П. Сухотина, 1998), касательно выживаемости С. pseudotuberculosis в почве. По их сведениям С. pseudotuberculosis может не только выживать в почве от нескольких месяцев до 450 дней и более, но и размножаться и накапливаться в ней в течение нескольких месяцев.

.Однако, до настоящего времени не проводилось исследований влияния биотических и абиотических факторов на выживаемость возбудителя казеозного лимфаденита в почве, а так же поисков способов уничтожения этого микроорганизма в почвенной экосистеме. Актуальность проблемы обуславливается, наличием возбудителя казеозного лимфаденита в почве пастбищ и необходимостью их обеззараживания, а так же экологической стороной проблемы.

Антропогенные воздействия могут привести к нарушению нормальных, эволгационно сложившихся взаимоотношений животных, растений и почвенных микроорганизмов. Последние, являются антагонистами для патогенной микрофлоры, попадающей в почву.

В связи с этим, есть необходимость поисков способов обеззараживания почвы от С. pseudotuberculosis. Одним из таких способов является биологический способ, основанный на многогранном воздействии ризосферы растений на биологические процессы, протекающие в почве.

Тема диссертационной работы вошла самостоятельным разделом в комплексную тему Института ветеринарной медицины ОмГАУ "Разработка методов и средств диагностики, профилактики, меры борьбы с коринебактериозами сельскохозяйственных животных" и имеет номер государственной регистрации 01.9.90.000.196.

Цель работы. Изыскание растений, способных обеззараживать почву от С. pseudotuberculosis в течение своего вегетационного периода. Задачи исследования:

1. Изучить сроки выживания и сохранения вирулентных свойств С. pseudotuberculosis в почве, в ризосфере некоторых растений.

2. Изучить бактерицидное действие фитонцидов изучаемых растений на С. pseudotuberculosis.

3. Изучить действие ризосферой микрофлоры на возбудителя казеозного лимфаденита.

4. Изучить влияние ризосферы на динамику нормальной микрофлоры почвы, её ферментативную активность и химические свойства.

5. Изучить степень обсеменённости пастбищ и прифермских участков некоторых овцеводческих хозяйств Омской области С. pseudotuberculosis.

6. Предложить высшие растения, посев которых на пастбищах овцеводческих хозяйств, способен очистить почву от С. pseudotuberculosis.

Научная новизна работы:

- Определены сроки выживания и сохранения, вирулентных свойств возбудителя казеозного лимфаденита овец в почве и в ризосфере растений.

- Определены факторы, влияющие на выживаемость С. pseudotuberculosis в почве.

Теоретическая и практическая значимость.

Выявлена способность возбудителя казеозного лимфаденита овец, длительное время выживать в условиях лугово-черноземной и луговой почвы. Так же было установлено, что С. pseudotuberculosis находится в почве овцеводческих хозяйств Омской области, как в вирулентном, так и в авирулентном состоянии.

Определены растения, способные в течение своего вегетационного периода обеззараживать почву от С. pseudotuberculosis.

Установлен ряд биотических и абиотических факторов, непосредственно влияющих на выживаемость возбудителя казеозного лимфаденита в почве.

Апробацпя работы. Материалы диссертации доложены на заседании научной конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов ИВМ ОмГАУ (1998); на научно-практической выставке "Роль инноваций в развитии регионов" (Омск, 1999).

Публикации. По теме диссертации опубликовано четыре научные работы.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 174 страницах машинописного текста и состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материалов

собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Диссертация иллюстрирована 15 таблицами, 36 рисунками. Список литературы включает 199 источников, из них 65 зарубежных авторов.

Оснопныс положения, выносимые на защиту:

1. Сроки выживания и сохранения вирулентных свойств С. pseudotuberculosis в почве и ризосфере растений.

2. Факторы, влияющие на жизнеспособность С. pseudotuberculosis в почве и ризосфере растений

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы исследовании

Работа выполнялась с 1996 по 1999, в соответствии с утвержденными планами научно-исследовательских работ ИВМ ОмГАУ. Было проведено 2 серии опытов по:

1. Изучению выживаемости С. pseudotuberculosis в ризосфере растений в двух видах почвы;

2. Изучению выживаемости С. pseudotuberculosis в двух видах почвы (контроль).

В качестве объекта изучения в опыт были взяты 2 штамма С. pseudotuberculosis №70-R и №146-S, депонированные в ВГНКИ И.Г. Трофимовым, М.В. Заболотных, Н.М. Колычевым в 1991 году, и любезно предоставленные нам авторами.

В качестве среды выживания использовали 2 вида почвы: лугово-чернозёмная среднесуглинистая песчано-иловатая; луговая тяжелосуглинистая иловато-крупнопылеватая. Опыт был поставлен в вегетационных сосудах, высотой 30 см, в течение 2-х вегетационных периодов 1998 и 1999 гг.

Подготовку, тарирование сосудов проводили по методике, описанной

3. И. Журбицким (1968).

В основе опыта лежало бактериологическое исследование зараженных тестов, которыми служили кусочки капроновой ткани 3x3 см, пропитанные взвесью С. pseudotuberculosis (2 млрд. м.т./1 мл физиологического раствора натрия хлорида). В ходе тарирования сосудов почвой до одной массы, производили закладку зараженных тестов (по 3 на уровень) на следующих глубинах: поверхность, 5, 10, 15, 20 и 25 см. При закладке поверхностных тестов производили посев семян изучаемых растений: пшеница, рожь, овёс, ячмень, костёр безостый, мятлик луговой, рапс, сурепица, викоовсяная смесь, горох, полынь, донник и люцерна.

Вегетационные сосуды устанавливали на открытой площадке. В процессе опыта в почве поддерживали постоянную влажность - 30%. что

достигалось путем взвешивания и полива. При этом сосуды меняли местами для выравнивания условий вегетации.

За растениями вели фенотипические наблюдения с целью определения фазы вегетации: всходы, кущение, колошение, цветение, созревание (молочная и восковая спелость). Фазы вегетации у разных растений имели отличия.

Одновременно ставили контроль (закладка зараженных тестов без посева семян растений). Тесты извлекали последовательно (с поверхности до глубины 25 см), в соответствии с фазами развития растений.

Тесты очищали от корней растений и помещали в пробирки с 10 мл стерильного физиологического раствора хлорида натрия. Полученную суспензию подвергали шутелированию в течение 10 минут. После трехминутного отстаивания производили посев на сывороточно-теллуритовый агар (СТА) в чашки Петри в количестве 0,1 мл. Чашки с посевами инкубировали в термостате при 37 °С до 5 суток. Через 24-48 часов после посева просматривали на нашгаие характерных для С. pseudotuberculosis колоний. При наличии таковых, делали мазки, окрашивали их по Граму. Затем пересевали на скошенный мясопептонный агар в пробирки.

Изучали морфологические, культуральные, вирулентные и биохимические (контроль) свойства выделенных культур. Биохимические свойства изучали посевом на углеводные и белковые питательные среды. Биологическую пробу ставили на белых мышах, введением им ранее оттитрованной дозы С. pseudotuberculosis (LD50) - 2 млрд. м.т. / 1 мл внутрибрюшинно. За лабораторными животными устанавливали 30-ти дневный срок наблюдення. Павших в этот период животных вскрывали, делали мазки отпечатки из внутренних органов и производили посев на СТА. Мышей, оставшихся в живых по истечении 30 дней умерщвляли и производили тс же манипуляции, что и у павших животных.

Определение бактерицидной активности фитонцидов проводили но общепринятым методикам: З.А. Ваксман, 1947; Б.П. Токин, 1951, 1967; В.Г. Граминицкая, 1952; А.Ф. Гаммерман, 1959. При этом использовали методы: стекающей капли, колодца, опарсния, серийных разведений.

Определение антагонистической активности почвенных микроорганизмов проводили с использованием методов: внесения предполагаемого микроба-антагониста на газонную культур) коринебактерий на МПА; совместного внесеюи коринебакгерий и предполагаемого микроба-антагониста в стерильную луговую почву.

Определение динамики нормальной микрофлоры почвы и актив ности почвенных ферментов проводили в лаборатории группы микро-

биологии и биохимии почвы СибНИИСХоза. Количество и состав микроорганизмов различных групп определяли путём посева почвенной суспензии на твёрдые питательные среды. Для определения общего микробного числа использовали мясопептонный агар (МПА); грибов — подкислённую среду Чапека; олигонитрофилов - среду Мишустиной; нитрификаторов - водный выщелоченный агар с добавлением двойной аммонийно-магниевой соли фосфорной кислоты (1-кратное разведение); микроорганизмов, мобилизирующих минеральные фосфаты - среду Муромцева-Геретсена (5-кратное разведение); микроорганизмов, потребляющих азот в минеральной форме (актиномицетов) - крахмало-аммиачный агар (КАА). Использовали методические рекомендации B.C. Рождественского, А.П. Васильева (194), Н.А. Красильникова (1949), Д.Г. Звягинцева (1980, 1991), Ю.М. Возняковской (1982).

Ферментативную активность почвы определяли в воздушно-сухих образцах, из которых предварительно убирали корни растений и другие органические остатки.

Активность почвенной инвертазы определяли по Куприевичу; уреазы -методом Гофмана, каталазы - газометрически (Е.Н. Мишустин и др., 1968; Д.Г. Звягинцев, 1980, 1991)

РН почвы определяли электрометрическим методом с использованием прибора ЛПУ-01 (Н.С. Егоров., 1976).

Статистическую обработку цифровых данных проводили на ПЭВМ "Pentium 2 Celeron 266", с использованием прикладной программы Microsoft Exsel 97, включающей подсчет величин (М), стандартных ошибок (т) и стандартных отклонений (Р) по Стьюденту.

Результаты исследований

Выживаемость С. pseudotuberculosis в почве н в ризосфере растений. Было установлено, что не все, взятые в опыт растения, были способны вызывать гибель коринсбактерий двух штаммов в изучаемой почве, в течение своего вегетационного периода.

Из тринадцати изучаемых растений, восемь из них обеззараживали два вида почвы от С. pseudotuberculosis. К таким растениям относятся: рапс, донник, горох, викоовсяная смесь, полынь, сурепица, люцерна и ячмень. Однако, в ризосфере последних трёх, штамм №70-R был способен выживать в лугово-черноземной почве до конца вегетационного периода этих растений.

В ризосфере растений семейства злаковые: пшеница, рожь, овёс, костер и мятлик луговой, возбудитель казеозного лимфаденита 2-х штам мов, был способен выживать в течение вегетационного периода (110 дней), как в лугово-чернозёмной, так и луговой почве (рис. 1. 2..3. 4).

О вирулентность

Ввыжюаемоеть с потерей вирулентности

Рис. 1 Изменение вирулентных свойств С. pseudotuberculosis в ризосфере растений лугово-чернозеъшая почва штамм 146S

I В вирулентность Овьомеаемость с лотереи вирулентности

Рис. 2 Изменение вирулентных свойств С. pseudotuberculosis в ризосфере растений луговая почпа штамм 146S

О 20 40 яни 60 SO 100

Нвирупектчостъ Я выживаемость с потерей валентности

Рис. 3 Изменение вирулентных свойств С. pseudotuberculosis в ризосфере растений лугово-черноземная почва штамм 70R

горах полынь рэпе викоовес сурепица люцерна денник режь пшеница свес костер мятлик ячм ень

Рис. 4 Изменение вирулентных свойств С. pseudotuberculosis в ризосфере растений луговая почва штамм 70R

Гибель коринебактерий в ризосфере бактерицидных растений происходила в следующие сроки: штамм №70-R погибал в лугово-чсрнозсмной почве в период от 60 до 100 дней, в луговой - от 50 до 80; штамм №146-S - от 50 до 50 до 100 в лугово-чернозёмной и - от 50 до 80 дней в луговой. То есть полная гибель коринебактерий в ризосфере бактерицидных растений происходила от 50 до 100 дней (цветение-восковая спелость).

Выделенные из ризосферы бактерицидных растений С. pseudotuberculosis, сохранял вирулентные свойства в период: штамм №70-R до 30-80 дней в луговочернозёме, до 30-50 дней в луговой; штамм №146-S -до 30-50 в луговочернозёме и 30-40 в луговой. То есть потеря вирулентных свойств в ризосфере бактерицидных растений происходила в период от 30 до 80 дней - (колошение (бутонация) - цветение).

Выживая в течение всего вегетационного периода (110 дней), в ризосфере не бактерицидных растений, С. pseudotuberculosis утрачивал вирулентные свойства, начиная со стадии кущения до восковой спелости (в зависимости от вида растений). Так штамм №70-R сохранял вирулентные свойства 60-80 дней в 2-х видах почвы; штамм №146-S 20-60 дней в лугово-чернозёмной почве и - 40-60 дней в луговой.

Нами было установлено, что выживаемость С. pseudotuberculosis, как в ризосфере бактерицидных растений, так и не являющихся такими зависит от глубины нахождения микроорганизма.. Более ранние сроки гибели коринебактерий мы отмечали от поверхности до глубины 5 см и от 20 до 25 см (р<0,05). В средних слоях почвы (10-15 см) С. pseudotuberculosis способен выживать наиболее продолжительный период времени.

Аналогичные результаты получил И.Г. Трофимов (1994). Автор отмечал более активное снижение количества микроорганизмов в поверхностном слое почвы и на глубине 20 см, по сравнению со средними слоями. Однако гибель коринебактерий на глубине 20-25 см мы отмечали только в ризосфере, но не в почве без растений.

Нами не было установлено достоверных различий (р>0,05) в выживаемости и сохранении вирулентных свойств С. pseudotuberculosis в зависимости от вида почвы и штамма микроорганизма. Однако мы отмечали большую устойчивость штамма №70-R С. pseudotuberculosis в двух почвах, а . так же. лугово-чернозёмная почва является более благоприятной средой для коринебактерий 2-х изучаемых штаммов.

K.V.F. Jubb и Р.С. Kennedy (1970) считают, что микроорганизм способен длительное время существовать во влажной почве, богатой минеральными веществами.

По нашему мнению это связано с большим содержанием водораст-

воримых элементов (Са, С1, Мц, Иа, М:05. Р;О0 и гумуса в лугово-чернозёмной почве по сравнению с показателями луговой почвы (табл. 1).

Таблица 1

Результаты механического анализа образцов почв. (Гранулометрический состав почв).

Содержание фракций (%) при размере частиц, мм Гранулометрический состав

1-0,25 0,250,05 0,050.01 0,010,005 0,0050,001 < 0.001 <0,01

Лугово-черноземная почва Средиесугли- нистый Песчано-ило-ватый

11,53 29,13 18,13 5,71 9,83 22,67 38,21

Луговая почва Тяжелосуглинистый Иловато-крупнопылевой

0,96 15,36 38,65 5,58 15,22 24,23 45,03

Мы считаем, что повышенное содержание элементов питания в почве сказалось благоприятно на выживаемости С. pseudotuberculosis. Так же анализируя механический состав почвы (табл. 2), мы отмечаем большее содержание крупных фракций почвенных частиц в лугово-чернозёмной почве по сравнению с луговой. Из чего можно сделать предположение, что оструктуренная почва создаёт более благоприятные условия для С. pseudotuberculosis.

Таблица 2

Результаты химических анализов образцов почв в генетическом горизонте А

Глубина РН водного раствора

ччятия образца, см Водорастворимые элеме! гш %

COj НСОз CL Са Mg Na n2o3 p2o. к2о Сухой остаток гумус

Лугово-черноземная среднесуглинистая песчано-иловатая

0-30 7.17 шг 0.055 0.041 | 0.054 | 0.019 1 0.035 i 3x6 j_c6.6 29.7 i 0.83 9.42

Луговая тяжелосуглинистая ивато-крушюпьшеватая

0-30 ( 7.43 нег ОШ 0.011 | 0.003 | 0.001 | 0.01 | 1.-16 | Й58 | 423 | 0.123 4.17

Выделяя С. pseudotuberculosis из ризосферы всех изучаемых растении, мы отмечали изменение культуральных и морфологических свойств микроорганизма.

Изменение культуральных свойств коринебактерий заключалось в диссоциации №146-S в R-форму. Данные изменения обнаруживались при посеве на СТА, выделенных из ризосферы культур, начиная с фазы кущения (стеблевание) растений, то есть на 20-30-й день исследований. В культуре коринебактерий штамма №146-S мы обнаруживали колонии черного цвета с матовой шероховатой поверхностью, не ровными краями. При прикосновении бактериологической петлёй, колония крошилась, плохо сдвигалась по поверхности агара и суспензировалась, в физиологическом растворе. В дальнейшем количество таких колоний в культуре увеличивалось, но не становилось доминирующим.

Однако, А.В. Заболотных (1993) наблюдал обратное явление - диссоциацию R форм в S форму. Такие изменения происходили в не стерильной почве через 90 дней, а в стерильной через 150.

Кроме диссоциации в R форму, начиная с 70-го дня пребывания в ризосфере растений, коринебактерии начали утрачивать способность восстанавливать металлический теллур. Это заключалось в появлении культур 2-х штаммов колоний светло- и тёмно-коричневого цвета. Постепенно число таких колоний увеличивалось и в отдельных культурах становилось преобладающим.

Изменение морфологических свойств С. pseudotuberculosis было характерно для двух штаммов. Данные изменения характеризовались (в мазках-препаратах) увеличением размера клеток, которые располагались преимущественно изолировано друг от друга. Практически отсутствовали шаровидные формы, преобладали овоидные и короткие палочки булавовидной формы. Интенсивность окраски значительно увеличилась, как и полярность окраски. Такие изменения мы наблюдали, начиная с фазы кущения (стеблевания).

Такие же изменения культуральных и морфологических свойств мы наблюдали при изучении выживаемости С. pseudotuberculosis в не стерильной почве (контроль).

Два штамма С. pseudotuberculosis в лугово-чернозёмной почве выживали в течение 470 дней (срок наблюдения) и 120 дней в луговой (срок наблюдения). Гибель коринебактерий происходила лишь на поверхности на 30-й день, и на 60-80 день на глубине 5 см. Однако штамм №70-R на глубине 5 см, в лугово-чернозёмной почве выживал весь срок исследований (470 дней). На глубине 10-25 см С. pseudotuberculosis двух штаммов сохранял способность размножаться на питательных средах в течение всего

периода исследований.

В почве без растений, штамм №70-R сохранял вирулентные свойства 110 дней в лугово-чернозёмной почве и 60 дней в луговой; штамм №146-S - 80 дней в луговой и 30 дней в луговой.

Культуры С. pseudotuberculosis, выделенные из почвы, не имели отличий в биохимической активности в зависимости от штамма микроорганизма.

Мы отмечали изменение биохимической активности С. pseudotuberculosis в процессе пребывания в почве. Начиная с 30-го дня, у коринебактерий появилась способность ферментировать сахарозу и мальтозу, но была утрачена способность ферментировать желатин. На 90-й день мы обнаружили утрату способности ферментировать галактозу. Образование сероводорода было характерно для С. pseudotuberculosis в почве, у исходных культур мы не наблюдали этой способности.

Чувствительность С. pseudotuberculosis к фитонцидам. Одной го наших задач, позволяющих раскрыть механизм действия ризосферы растений на жизнеспособность С. pseudotuberculosis, было определение бактерицидной силы фитонцидов растений.

Всего были изучены фитонциды 42-х растений, в том числе и растений, взятых в опыт с вегетационными сосудами. Было установлено, что только фитонциды полыни обладали бактерицидным действием на С. pseudotuberculosis. Все другие растения, влияние ризосферы которых мы изучали, не проявляли антибиотической активности к коринебактериям.

■ Степень бактерицидности фитонцидов полыни (как и других, дополнительно взятых в опыт растений) зависела от используемого метода, вегетативной части растений и вида применяемого вещества.

Наиболее выраженными бактерицидными свойствами в методе "колодца" обладают все части кинзы (кориандр) - кашица; корни и стебли полыни - кашица; листья и корень полыни - эфирная вытяжка; луковица чеснока, корень лука репчатого - кашица; цветы календулы - кашица, эфирная вытяжка и листья в форме эфирной вытяжки; цветы, листья и семена настурции - кашица; листья аконита и все части укропа - кашица. Эфирная вытяжка аконита подавляла рост С. pseudotuberculosis на всей площади чашки Петри. Листья и цветы левкоя давали стерильные зоны лизиса до 10 мм, а семена тмина - свыше 10 мм.

Методом "опарения" мы определили наличие летучих фитонцидов у растений, обладающих активностью в методе "колодца". Результаты исследований показали, что лишь фитонциды кинзы способны полностью подавлять рост С. pseudotuberculosis в этом методе. Причём данным свойством обладали все части этого растения, как в форме сока, так и мезги.

Летучие фитонциды полыни, чеснока, лука репчатого были способны лишь задерживать рост коринебактерии

Методом "стекающей капли" мы определили бактерицидную силу фитонцидов растений. В предельном разведении (1:20) зон}' лизиса давал сок следующих растений: листья аконита, луковица чеснока, луковица лука репчатого, листьев и корня лука порея, листьев аконита.

Фитонциды полыни подавляли рост коринебактерий только в разведении до 1:10, при использовании листьев и стеблей этого растения.

Взаимоотношения С. pseudotuberculosis н почвенной микрофлоры. Выделенные из ризосферы различных растений почвенные микроорганизмы обладали различными культуральными свойствами, что повлияло на проявление антибиотических свойств по отношению к С. pseudotuberculosis. Так Вас. mesentericus проявляла антибиотические свойства в ризосфере гороха, рапса, донника, викоовса и люцерны. Наиболее активно почвенные бациллы проявляли себя в ризосфере рапса и викоовса (Вас. subtillis, Вас. cereus, Вас. inycoides).

При внесении С. pseudotuberculosis в стерильную почву, совместно с каждым видов изучаемых бацилл, к 47-му дню коринебактерии полностью погибали.

Грибы родов: Aspergillus, Mucor, Fusarium и Pénicillium не оказывали антагонистического действия на С. Pseudotuberculosis, в двух используемых методах.

Микробный состав, химические свойства почвы. Нами было установлено активное влияние ризосферы изучаемых растений на биологические процессы, протекающие в почве (химические свойства почвы, её ферментативную активность и микробный состав).

На протяжении вегетационного периода мы отмечали изменение численности нормальной микрофлоры почвы.

В течении вегетационного периода мы отмечаем уменьшение численности всех групп микроорганизмов. Только в ризосфере рапса, сурепицы и ячменя с 55-го дня вновь происходит увеличение численности микроорганизмов, выросших на: рапс - МПА, КАА, олигонитрофилов и мобилизирующих минеральные фосфаты; сурепица и ячмень - МПА, КАА, мобилизаторов минеральных фосфатов.

Количество нитрификаторов уменьшается в ризосфере всех изучаемых растений и в контроле. Их количество к 80-му дню уменьшалось доТ'тыс. в 1г почвы.

Динамика развития грибов в ризосфере растений отличалась от динамики выше указанных групп микроорганизмов. Так максимальное увеличение численности грибов происходит на 55-й день исследований (середина вегетационного периода), затем мы наблюдали обратный процесс.

В почве без растений (контроль) перепадов численности почвенной микрофлоры мы не отмечали, а происходило постепенное снижение их численности кроме грибов, количество которых постепенно увеличивалось и достигло максимума 257 тыс. в 1 гр. почвы.

Как видно в ршосфере растений и почве увеличение численности грибов совпадает по времени с уменьшением численности бактерий, что может говорить о различных требованиях этих групп микроорганизмов к условиям, складывающимся в условиях почвы.

Несмотря на снижение численности почвенных микроорганизмов в ризосфере растений, их количество значительно превышало показатели контроля, что говорит о более благоприятных условиях для нормальной микрофлоры почвы в ризосфере растений. В ризосфере рапса и викоовса почвенная микрофлора получила наибольшее развитие и превысила показатели контроля на 97 % и 56,3% соответственно.

Одним из показателей санитарных свойств почвы служит коэффициент минерализации, который в ризосфере люцерны, сурепицы, рапса и викоовса был наибольшим и равнялся: 1,36; 1,13; 1,12 и 1,02 соответственно. В контроле этот коэффициент был наименьшим - 0,66.

Изменение динамики почвенной микрофлоры может быть связано с изменением рН почвы под влиянием ризосферы.

Так ризосфера рапса, сурепицы, полыни, гороха, люцерны, донника и викоовса, в большей или меньшей степени, ощелачивали почву. Растения семейства злаковые: пшеница, рожь, овёс, ячмень, костер, мятлик луговой снижали рН почвы.

В контроле мы не наблюдали перепадов рН, происходило постепенное снижение рН до 7,0 в лугово-чернозёмной почве и 7,1 в луговой. То есть ризосфера не бактерицидных растений, окисляя почву, оказывала более благоприятное влияние на почвенные грибы, которые не являются антагонистами к С. pseudotuberculosis.

В ризосфере растений мы отмечали увеличение активности трёх почвенных ферментов по сравнению с контролем, в котором активность уреазы постепенно снижалась.

В ризосфере активность уреазы ■ превышала значение контроля в 1,6-3,3 раза; каталазы на 6-9 %; инвертазы в 1,9-2,1 раза.

Возможность выноса С. pseudotuberculosis из почвы вегетативными частями растений определяли путём посева на СТА, смывов с надземных частей растений на фазе всходов.

Было установлено, что выноса коринебактерий не происходит, как вегетативными частями бактерицидных, так и не бактерицидных растений.

Контаминации ночны овцеводческих хозяйств С. pseudotuberculosis. Было проведено исследование почвы двух овцеводческих хозяйств Омской области: ГПЗ "МарьяновскшГ Марьяновского района и АО "Большевик" Полтавского района. Процент поражения туш в среднем по овцеводческим хозяйствам составил на 1998 год 5,27 % (М.В. Заболотных, А.С. Крупко, 1999).

Отбор почвенных образцов проводился по общей методике, описанной Н.С. Егоровым (1976). Составляли пробы поверхностного слоя почвы и пробы почвы-монолита (глубиной до 30 см).

Проводили отбор проб фекалий овец на пастбищах и прифермских участках. Так же 2 пробы фекалий были взяты непосредственно из прямой кишки двух овец, убитых с диагностической целью в АО "Большевик". У данных овец был установлен казеозный лимфаденит.

Всего было отобрано в совхозе "Овцевод" (ГПЗ "Марьяновский") 20 проб поверхностного слоя почвы, монолитов (глубиной до 30 см.) и 20 проб фекалий с различных участков пастбищ и прифермских участков.

В АО "Большевик" Полтавского района было взято 15 проб почвы монолитов, столько же проб поверхностного слоя почвы и 10 проб фекалий, 2 из которых от двух овец, убитых с диагностической целью, остальные с пастбищ и прифермских участков.

Почвенную суспензию высевали на корннсбакагар с теллуритом калия. Культивировали при 37°С до 5 суток. При образовании характерных для коринебактерий колоний выделяли чистую культуру и изучали её морфологические, биохимические и биологические свойства.

Характерные для С. pseudotuberculosis колонии образовывались при посеве материала из трех проб поверхностного слоя почвы и двух проб почвы монолитов, взятых в совхозе "Овцевод". Причем, одна из этих проб была взята с пастбища (почва-монолит). Относительно проб фекалий были получены следующие результаты. Характерный рост микроорганизмов наблюдался при посеве материала из шести проб, пять из которых были взяты на территории прифермских участков совхоза "Овцевод".

При посеве на СТА исследуемого материала, взятого с пастбищ в АО "Большевик" положительный результат в виде образования характерных для С. pseudotuberculosis колоний R и S-форм, диаметром 1-2 мм, получен из 4-х проб почвы монолитов и 4-х проб поверхностного слоя почвы. .

При посеве исследуемого материала 10-ти проб фекалий, положительный результат дали две пробы, взятые с прифермских участков. Так же положительный результат дали 2 пробы, полученные от двух овец, убитых с диагностической целью.

В мазках-прспарагах, окрашенных по Граму, микроорганизмы выгля-

дели как короткие овоидные палочки с закругленными концами, фиолетового цвета с четко выраженной биполярной окрашенностью полюсов клетки. Микроорганизмы выделенные, из почвы были немного крупнее и в меньшей степени присутствовали овоидные формы, чем в культурах, выделенных из фекалий или из патологического материала. Так же наблюдалось более интенсивное окрашивание клеток по полюсам полученных из почвы.

Исходя из того, что биохимические свойства возбудителя казеозного лимфаденита (С. pseudotuberculosis) сильно варьируют (Н.М. Колычев, И.Г. Трофимов, 1993), но имеют ряд стабильных характеристик, позволяющих идентифицировать этот микроорганизм можно заключить, что выделенные культуры микроорганизмов в исследуемых хозяйствах относятся к C.pse-udotuberculosis. Основанием для этого служит то, что все выделенные культуры были каталазоположительны, были способны образовывать зону гемолиза при посеве на кровяной агар. При посеве на углеводные среды все выделенные культуры расщепляли глюкозу. Микроорганизмы, выделенные из фекалий в обоих хозяйствах, были способны расщеплять ксилозу. Сахароза и мальтоза расщеплялись при посеве коринебактерий полученных из почвы совхоза "Овцевод" и АО "Большевик". Также необходимо отметить, что сероводород образовывался при посеве на -белковые среды коринебактериями, выделенными из патологического материала, полученного при диагностическом убое двух овец в АО "Большевик". Фермент желатиназа присутствовал лишь у культур, выделенных из фекалий в совхозе "Овцевод".

Все выделенные культуры коринебактерий не вызывали гидролиз крахмала, не ферментировали арабинозу, рафинозу, рамнозу, дульцит, были уреазоотрицательными. Ни одна из выделенных культур не была способна ферментировать глицерин. Каких либо различий в биохимической активности выделенных культур в зависимости от фенотипических свойств, нами не установлено.

В отношении биологических свойств выделенных коринебактерий получены следующие результаты. При заражении белых мышей микробной взвесью культур, выделенных из патологического материала, почвы и фекалий, взятых в АО "Большевик" наблюдалась гибель лабораторных-животных на 16-28 сутки. Заражение проводили взвесью C.pseudotuber-culosis в концентрации 500 тыс, 1, 2, 3 и 4 млрд. микробных тел в 1 мл физиологического раствора натрия хлорида, внутрнбрюшинно. Гибель лабораторных животных наблюдалась при введении взвеси в концентрации 1 млрд. микробных тел/мл физ. раствора и выше, независимо от источника выделения микроорганизмов.

Культуры, полученные из почвы и фекалий совхоза "Овцевод" не вызывали гибели белых мышей не в одной из применяемых концентраций.

Павшие лабораторные животные заметно отставали в развитии от контрольных. На вскрытии обнаруживалось увеличение печени и селезенки, печень была не равномерно окрашена с участками просветвлсния. На месте введения микробной суспензии наблюдалось утолщенно брюшной стенки в виде просяного зерна. При посеве из внутренних органов таких животных, на сывороточный теллуритовый агар, на 2-3 сутки наблюдался характерный рост коринебактерий в виде образования черного цвета колоний 1-2 мм в диаметре, R- и S-форм.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Комплексные исследования, проведённые нами, дали возможность выявить группу высших растений (рапс, сурепица, горох, викоовсяная смесь, полынь, донник, люцерна, ячмень), в ризосфере которых С. pseudotuberculosis погибает в течение вегетационного периода этих растений. Так же наши исследования дали теоретическое обоснование причин гибели возбудителя казеозного лимфаденита в ризосфере названных растений и условий, влияющих на выживаемость этого микроорганизма в почве.

ВЫВОДЫ

1. Возбудитель казеозного лимфаденита (С. pseudotuberculosis) сохраняет жизнеспособность в почве до 470 дней (срок наблюдения).

2. Потеря вирулентных свойств у патогенных корннебактерий в условиях почвы происходит в период: штамм № 70-R от 110 дней в лугово-черноземной почве и от 60 дней в луговой; штамм № 146-S от 80 дней пребывания в условиях лугово-черноземной почвы и от 30-ти в луговой.

3. Выявлены растения: рапс, сурепица, горох, викоовсяная смесь, донник, люцерна, ячмень, полынь, способные обеззараживать почву от С. pseudotuberculosis в течение своего вегетационного периода. Однако в ризосфере сурепицы, люцерны и ячменя штамм № 70-R сохранял жизнеспособность в течение всего вегетационного периода.

4. В ризосфере бактерицидных растений, штамм 70-R погибал: в лугово-черноземной почве в период от 60 до 100 дней, в луговой почве - от 50 до 80 дней. Гибель штамма 146-S происходило в лугово-черноземной почве от 50 до 100 дней, — в луговой почве от 50 до 80 дней.

5. Выделенные из ризосферы бактерицидных растений патогенные культуры С. pseudotuberculosis сохраняли свой вирулентные свойства в пе риод: штамм № 70-R до 30-80 дней в лугово-черноземной почве и 30-50

дней в луговой; штамм № 146-S терял вирулентность от 30 до 50-ти дней в луговочерноземе и 30-40 дней в луговой.

6. Растения: пшеница, рожь, костёр, овёс и мятлик луговой не оказывали бактерицидного действия на коринебактерии в течение своего вегетационного периода.

7. Вирулентные свойства в ризосфере не бактерицидных растений С. pseudotuberculosis сохраняет в течение: штамм № 70-R 60-80 в двух почвах, а штамм № 146-S терял эту способность через 20-60 дней в луговочерноземе и 40-60 дней в луговой почве.

8. С. pseudotuberculosis в процессе пребывания в почве меняет свои культуральные, морфологические (начиная с фазы кущения растений) и биохимические свойства.

9. Антагонистическими свойствами в почве по отношению к возбудителю казеозного лимфаденита обладают почвенные бациллы, выделенные из ризосферы бактерицидных растений. К ним относятся: Вас. subtillis, Вас. cereus, Вас. mesentericus, Вас. mycoides. Почвенные грибы, выделенные из ризосферы всех изученных растений, не оказывали антибиотического действия.

10. Из всех изученных растений, взятых в опыт с почвами, лишь полынь обладала фитонцидами, способными подавлять рост С. pseudotuberculosis-in vitro.

11. Возбудитель казеозного лимфаденита овец находится в почве овцеводческих хозяйств, попадая с испражнениями больных животных, являющихся одним из основных факторов загрязнения почв пастбищ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

На основании проведенных исследований установлено, что в отношении возбудителя казеозного лимфаденита возможен биологический способ обеззараживания почвы. Данный способ основан на посеве ряда высших растений. Предложены рекомендации "Разработка биологического способа обеззараживания почвы от возбудителя казеозного лимфаденита овец (С. pseudotuberculosis). Рекомендации рассмотрены и одобрены на заседании Ученого Совета ИВМ ОмГАУ. Протокол № 5, от 4 апреля 2000 г.

Мы предлагаем включить выше указанные растения, оказывающие губительное действие на С. pseudotuberculosis, в севооборот при смене пастбищ в хозяйствах неблагополучных по казеозному лимфадениту овец и хозяйствах угрожаемой зоны.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Сухотина В.П., Зигунов В.В., Разсохин В.В. Чувствительность псевдотубсркулёза к фитонцидам растений // Сб. мат. Юбилейно-производ. конф. сотрудников и аспирантов института ветеринарной медицины ОмГАУ.-Омск, 1998.-С.301-305.

2. Разсохин В.В., Сухотина В.П. Поиск способов биологического обеззараживания почвы при инфицировании её С. pseudotuberculosis // Механизмы функциональной активности организма: мат. республ. научно-практ. конф. посвящ. 75 - летию кафедры физиологии человека ОмГМА. -Омск, 1999,-С.114-115.

3. Разсохин В.В. Охрана почв от заражения // Тезисы докладов межрег. науч.-практ. конф. "Роль инноваций в развитии регионов",- Омск, 1999.-С.77-78.

4. Разсохин В.В. Выживаемость С. pseudotuberculosis в почве, в ризосфере растений // Диагностика, профилактика и лечение заразных и незаразных болезней. Вопросы токсикологии, анатомии животных и птиц.-Омск, 1999.-С.116-119.

Проблема охраны окружающей среды в последние десятилетия приобрела большое значение. Загрязнение почвы, флоры, водных ресурсов и воздушного бассейна происходит во многих странах вследствие урбанизации, интенсификации промышленного и сельскохозяйственного производства В.Д. Баранников (1985).

В связи с возросшими в последние десятилетия темпами интенсификации производства в различных экологических системах, возникает дисбаланс процессов, складывающихся на протяжении тысячелетий. Не удивительно, что в последнее время, медицинские работники многих областей сталкиваются с новыми болезнями экологической этиологии, видоизменением уже достаточно изученных болезней и с появлением не свойственных данному региону патологий. Так решая одну проблему, человек создает много других трудноразрешимых задач, воздействуя на природные системы не свойственными последним веществами, например дезинфицирующими.

Одной из основных природных экологических систем является почвенная экосистема, входящая в агробиогеоценоз. На первый взгляд кажущаяся хаотичность биологических и физико-химических процессов, происходящих в почве обманчива. Эти процессы подчиняются взаимосвязанным законам взаимоотношений компонентов этой среды. Причем все эти компоненты находятся в непрерывном взаимодействии, так или иначе, влияя друг на друга. Антропогенные воздействия нарушают естественные взаимодействия растений, животных и микроорганизмов, в том числе и почвенных. Происходит гибель почвенной сапрофитной микрофлоры, которая является антагонистической для патогенных 5 микроорганизмов, разлагает сложные органические вещества, очищая окружающую среду от опасных органических остатков, обуславливает круговорот веществ в природе.

Патогенные микроорганизмы, попав в почву, сталкиваются с широким спектром биотических и абиотических факторов, воздействующих на них. Одни из них погибают или теряют свои патогенные, вирулентные свойства, другие способны в течение длительного времени сохранять свои биологические свойства, обуславливая этим создание резервуара потенциально опасных для человека и животных микроорганизмов.

Изучив и поняв эти процессы, мы можем направлять их в нужном для нас русле. На экологически естественном воздействии на почвенные экосистемы, с целью очищения последних от патогенных микроорганизмов, основан биологический способ обеззараживания почвы путем посева растений. Особое значение этот метод приобретает при профилактике и ликвидации таких инфекционных болезней, при которых одним из основных факторов передачи возбудителя в эпизоотологической цепи является почва.

Так академик ВАСХНИЛ А.А. Поляков (1980) считает, что почва как фактор передачи патогенных микроорганизмов занимает одно из первых мест среди других компонентов окружающей среды. На эпидемиологическое и эпизоотологическое значение почвы ранее указывали многие исследователи (Ф.Ф. Эрисман, JI.B. Гро-машевский, К.И. Скрябин, З.К. Заболотный, В.М. Жданов, Е.Н. Мишустин, М.И. Перцовская и др.)'

Одной из таких болезней, в эпизоотологическом процессе которой почва играет немаловажную роль, является казеозный лимфаденит овец. 6

Казеозный лимфаденит овец это хронически протекающая болезнь, чаще мелкого рогатого скота, характеризующаяся образованием в лимфатических узлах, легких, печени и других органах и тканях специфических гнойно-некротических очагов, развитием кахексии и заканчивающаяся преждевременной выбраковкой или гибелью животного.

Возбудитель данной болезни Corynebacterium pseudotuberculosis известен с прошлого века (Nocard Е. 1888, Preis Н. 1897). В последние десятилетия большое внимание данной болезни стало уделяться по всему миру, особенно в странах с развитым овцеводством (Австралия, Новая Зеландия, США, Англия и др.). Так в Австралии казеозный лимфаденит стал основной болезнью овец, создавая большую экономическую проблему (Batey R.G., 1987).

Несмотря на то, что на территории бывшего СССР данной проблеме не уделялось большого внимания, в литературе имеются данные, показывающие широкое распространение казеозного лимфаденита в Российской Федерации и в странах СНГ (Новосибирская область, Дагестан, Ставропольский и Краснодарский край, Ростовская область, Актюбинская область Казахстана, Башкирия, Оренбургская область).

Не стала исключением в этом вопросе и Омская область (И.Д. Головко с соавт. 1983, 1986; И.Г. Трофимов, 1984, Трофимов с со-авт., 1988; М.В. Заболотных, 1989, 1991; А.А. Кобзев с соавт., 1991; М.В. Заболотных, А.С. Крупко, 1999).

На актуальность изыскания новых средств борьбы с казеоз-ным лимфаденитом овец показывают данные И.Г. Трофимова (1983) касающиеся экономического ущерба от данной патологии, 7 складывающегося из многих показателей, таких как снижение оп-лодотворяемости (на 5,7%), чаще наблюдаются аборты (на 4,7%), рождение мертвых ягнят (на 15,8%), гибель ягнят до отбивки (на 41,1%). Шерстная продуктивность снижается на 0,9 кг в физическом весе, и на 0,4 кг в мытом волокне. До 60% убытков, наносимых болезнью, приходится на гибель овец, 10% на утилизацию туш, органов и тканей при убое, 29% на недополучение шерсти, 1,3% на недополучение приплода.

М.В. Заболотных (1999) сообщает об изменении органолеп-тических показателей мяса, полученного от больных животных, причем это не зависит от степени поражения туши.

Вышесказанное говорит о широком распространении казеоз-ного лимфаденита во всем мире и необходимости дальнейшего изучения и изыскания способов борьбы с возбудителем данной болезни.

Цель работы. Изыскание растений, способных обеззараживать почву от С. pseudotuberculosis в течение своего вегетационного периода.

Были поставлены следующие задачи:

1) Изучить сроки выживаемости и сохранения вирулентных свойств С. pseudotuberculosis в почве, в ризосфере некоторых растений.

2) Изучить бактерицидное действие фитонцидов изучаемых растений на С. pseudotuberculosis.

3) Изучить действие ризосферной микрофлоры на возбудителя казеозного лимфаденита.

4) Изучить влияние ризосферы на динамику нормальной микрофлоры почвы, её ферментативную активность и химиче8 ские свойства.

5) Изучить степень зараженности пастбищ и прифермских участков некоторых овцеводческих хозяйств Омской области Corynebacterium pseudotuberculosis.

6) Предложить высшие растения, посев которых на пастбищах овцеводческих хозяйств, способен очистить почву от С. pseudotuberculosis.

Научная новизна.

- Определены сроки выживания и сохранения вирулентных свойств возбудителя казеозного лимфаденита овец в почве и в ризосфере растений.

Определены факторы, влияющие на выживаемость С. pseudotuberculosis в почве.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на заседании научной конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов ИВМ ОмГАУ (1998 г.); на научно-практической выставке «Роль инноваций в развитии регионов» (Омск, 1999).

Публикации. По теме диссертации опубликовано четыре научные работы.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 173 страницах машинописного текста и состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материалов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Диссертация иллюстрирована 15 таблицами, 36 рисунками. Список литературы включает 199 источников, из них 65 зарубежных авторов. 9

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Сроки выживаемости и сохранения вирулентных свойств ,С. pseudotuberculosis в почве и ризосфере растений.

2. Факторы, влияющие на жизнеспособность С. pseudotuberculosis в почве и ризосфере растений.

10

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ВЫВОДЫ

1. Возбудитель казеозного лимфаденита (С. pseudotuberculosis) сохраняет жизнеспособность в почве до 470 дней (срок наблюдения).

2. Потеря вирулентных свойств этого вида патогенных коринебактерий в условиях почвы происходит в период: штамм № 70-R от 110 дней в лугово-черноземной почве и от 60 дней в луговой; штамм № 146-S от 80 дней пребывания в условиях лугово-черноземной почвы и от 30-ти в луговой.

3. Выявлены растения, которые способны в течение одного вегетационного периода привести к гибели, находящегося в их ризосфере возбудителя казеозного лимфаденита. К таким растениям относятся: рапс, сурепица, горох, викоовсяная смесь, донник, люцерна, ячмень, полынь. Однако в ризосфере сурепицы, люцерны и ячменя штамм № 70-R сохранял жизнеспособность в течение всего вегетационного периода.

4. Штамм № 70-R погибал в ризосфере: рапса - на 75-й день в лугово-черноземной почве и 50-й день в луговой; сурепицы - на 75-й день в луговой почве; гороха - на 60-й день в луговочернозе-ме и в луговой на 80-й день; викоовсяной смеси - на 80-й день в двух видах почвы; донника - на 110 и 75 дни в лугово-черноземной и луговой почвах соответственно; люцерны - на 75-й день в луговой почве; ячменя - на 60-й день в луговой почве; полыни - на 75-й день в двух видах почвы.

5. Штамм № 146-S погибал в ризосфере: рапса -на 75-й день в лугово-черноземной почве и 50-й день в луговой; сурепицы- на 15-й день в двух видах почвы; гороха - на 60-й и 80-й дни в лугово-черноземной и луговой почве соответственно; викоовсяной смеси

151 на 80-й в луговочерноземе и 60-й день в луговой; донника - на 50-й день в двух видах почвы; люцерны - на 110 и 50-й день в луговочерноземе и луговой почве соответственно; ячменя - на 110 и 60-й день в лугово-черноземной и луговой почве соответственно; полыни - на 50-й день в двух видах почвы.

6. Выделенные из ризосферы бактерицидных растений патогенные культуры С. pseudotuberculosis сохраняли свой вирулентные свойства в период: штамм № 70-R до 30-80 дней в лугово-черноземной почве и 30-50 дней в луговой; штамм № 146-S терял вирулентность от 30 до 50-ти дней в луговочерноземе и 30-40 дней в луговой.

7. С. pseudotuberculosis в процессе пребывания в почве меняет свои культуральные, морфологические (начиная с фазы кущения растений) и биохимические свойства.

8. Были выявлены растения, которые не способны вызвать гибель возбудителя казеозного лимфаденита в своей ризосфере. К таким растениям относятся: пшеница, рожь, костер, овёс и мятлик луговой. В ризосфере этих растений коринебактерии, выживая в течение всего вегетационного периода, сохраняли способность размножаться на питательных средах.

9. Вирулентные свойства в ризосфере не бактерицидных растений С. pseudotuberculosis сохраняет в течение: штамм № 70-R 6080 в двух почвах, а штамм № 146-S терял эту способность через 20-60 дней в луговочерноземе и 40-60 дней в луговой почве.

10. Гибель возбудителя казеозного лимфаденита в ризосфере отмеченных растений происходит в результате действия комплекса факторов, таких как: микробный антагонизм, бактерицидная активность фитонцидов некоторых растений, изменение химических

152 свойств почвы.

11. Выживаемость С. pseudotuberculosis в почве зависит от глубины залегания в связи с влиянием таких факторов, как развитие корневой системы растений и температурного фактора. Наиболее долго коринебактерии сохраняются на глубине 10-15 см в ризосфере растений и 10-25 см в почве без растений.

12. Нами не выявлено достоверных различий в выживаемости С. pseudotuberculosis в почве и ризосфере растений в зависимости от вида почвы, однако 70-R штамм дольше сохранял жизнеспособность по сравнению со штаммом 146-S. Так же установлено, что лугово-черноземная почва является более благоприятной средой для данного вида коринебактерий, ввиду наличия в ней большего количества органических и неорганических элементов питания и оструктуренности, по сравнению с данным видом луговой почвы.

13. Антагонистическими свойствами в почве по отношению к возбудителю казеозного лимфаденита обладают почвенные бациллы, выделенные из ризосферы бактерицидных растений. К ним относятся: Вас. subtilis, Вас. cereus, Вас. mesentericus, Вас. mycoides. Почвенные грибы, выделенные из ризосферы всех изученных нами растений, не оказывали антибиотического действия на данный вид коринебактерий.

13. Из всех растений, взятых в опыт с вегетационными сосудами, лишь полынь обладала фитонцидами, способными подавлять рост С. pseudotuberculosis.

14. Возбудитель казеозного лимфаденита находится в почве овцеводческих хозяйств Омской области. Присутствие этого микроорганизма в фекалиях больных казеозным лимфаденитом овец в вирулентном и авирулентном состоянии говорит о возможности

153 обсеменения пастбищ испражнениями больных животных.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

На основании проведенных исследований установлено, что, в отношении возбудителя казеозного лимфаденита возможен биологический способ обеззараживания почвы. Данный способ основан на посеве ряда высших растений. Предложены рекомендации "Разработка биологического способа обеззараживания почвы от возбудителя казеозного лимфаденита овец (С. pseudotuberculosis). Рекомендации рассмотрены и одобрены на заседании Ученого Совета ИВМ ОмГАУ. Протокол № 5, от 4 апреля 2000 г.

Мы предлагаем включить выше указанные растения, оказывающие губительное действие на С. pseudotuberculosis, в севооборот при смене пастбищ в хозяйствах неблагополучных по казеоз-ному лимфадениту овец и хозяйствах угрожаемой зоны.

154