Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Влияние предельно допустимых доз нитрата калия на иммунологическую реактивность животных, вакцинированных против рожи свиней

Л1Ш1ИСТЕРСТВ0 СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ВОРОНЕЖСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

ИМ. К. Д. ГЛИНКИ

На правах рукописи

ДЫНИН Виталий Иванович

УДК 619:615.916:615.371/:579.8б9

ВЛИЯНИЕ ПРЕДЕЛЬНО ДОПУСТИМЫХ ДОЗ НИТРАТА КАЛИЯ НА ИММУНОЛОГИЧЕСКУЮ РЕАКТИВНОСТЬ ЖИВОТНЫХ, ВАКЦИНИРОВАННЫХ ПРОТИВ РОЖИ СВИНЕЙ

16.00.03 — ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соисканне ученой степени кандидата ветеринарных наук

ВОРОНЕЖ 1992

Работа выполнена на кафедре, эпизоотологии .и микробиологии Воронежского государственного аграрного университета им. К. Д. Глинки.

Научные руководители: доктор ветеринарных наук, профессор Б. Т. Артемов; кандидат ветеринарных наук, доцент Л. И. Ефанова.

Официальные омпоненты: доктор ветеринарных наук, профессор А. Г. Шахов; доктор ветеринарных наук, профессор А. А. Евглевский.

Ведущая организация — Белгородский филиал Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я. Р. 'Коваленко.

Защита диссертации состоится с |<3 » 1992 г.

о о

в \Ц часов на заседании специализированного совета

К 120.54.03 три -Воронежском государственном аграрном университете имени К. Д. Глинки то адресу: ,394087, г. Воронеж, ул. Ломоносова, 114-а. Ветклиника 'ВГАУ.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке гос-агроуниверситета по адресу: 394087, г. Воронеж, ул, Мичурина, 1.

Автореферат разослан « 1 £ » К О % В Р %_ '992 г.

Ученый секретарь

специализированного совета кандидат ветеринарных наук

Чаплыгина

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность темы. Интенсификация животноводства невозможна без полноценного кормления животных. В связи с этим в последние годы значительно возросло использование а растениеводстве и кормопроизводстве минеральных удобрений, особенно азотсодержащих. По данным Ракитова Н. Г. (¡974), азотные соединения, внесенные в почву, создают предпосылки для увеличения концентрации сырого (Протеина в кормах, и в то же время это сопровождается накоплением нитратов и их восстановленной формы — нитритов в почве, воде, продукции растениеводства, а в конечном итоге в организме животных и человека.

Вопрос об изучении влияния нитратов на организм животных стоит сегодня особо остро, так как установлено их многогранное отрицательное влияние на живые биологические объекты. Так, 'по данным Н. И. Петухова с соавт. (1972), Д. М. Вовк (1977) и др., под влиянием нитратов гемоглобин переходит в метгемоглобин, что сопровождается нарушением окислительной способности крови и приводит к кислородному голоданию тканей организма. При эгом нарушаются обменные процессы (Н. Ф. Панько, 1986; Д. М Вовк с соавт., 1989; В. Н. Байматов, 1991, и др.) и угнетаются ферментные системы (Л. Я. Лептис с соавт., 1969; 3. П. Скородинжип с соавт., 1979; С. В. Старченков с соавт., 1989; Л. А. Ефимов с соавт.. 1990).

Способность нитратов обусловливать развитие вторичных иммунодефнцитных состояний в настоящее время изучена недостаточно. Однако в литературе имеются данные о неблагоприятном воздействии этих веществ на общую резистентность и устойчивость макроорганизмов к инфекционному началу. В. Т. Митченков (1972) отмечает изменение фагоцитарной реакции нейтрофилов и количества пропердина крови у белых крыс при скармливании нитрита натрия. Отрицательное воздействие нитратов на иммунную систему животных подтверждается исследованиями П. М. Дарьенко с соавт. (1980), И. М.

Карпуть с соавг. (1989), А. С. Козлюк с соавт. (1989), В. Т. Митченкова (1990).

В то же время, как показывает практика, корма, содержащие незначительные (количества нитратов, используются в животноводстве без учета последствий их длительного скармливания, хотя на кумулятивные свойства этих веществ указывают многие авторы (П. ¡М. Дарьенко с соавт., 1980; И. М. Карпуть с соавт., 1989; В. А. Боев, 1991, и др.). В результате многие ветеринарные специалисты склонны 'рассматривать прорывы поствакцинального иммунитета у животных как _следствие_ плохого-качества биопрепаратов или погрешностей "при .проведении иммунизации. Обращают на себя внимание факты прорыва (противорожисгого иммунитета у животных, содержащихся в апецхозах, несмотря на широкое проведение вакцинальной профилактики. При этом вспышки рожи в отдельных хозяйствах регистрируют через 2—3 месяца после проведенной иммунизации. В данных случаях качество используемых вакцин не вызывает сомнения.

Учитывая приведенные сообщения, остро встает вопрос о необходимости более глубокого изучения влияния предельно допустимых доз нитратов на формирование тюствакцинально-го шротиворожисгого иммунитета.

1.2. Цель и задачи исследования. В нашей работе ставилась цель изучить роль ПДД нитрата калия в формировании поствакцинального противорожисгого иммунитета у лабораторных животных и поросят.

Для решения этого вопроса поставлены следующие задали:

1. Изучить влияние ПДД нитрата калия у а морфологию пммунокомпетентных органов у интактных и вакцинированных против рожи лабораторных животных и свиней. ) 2. Изучить влияние нитратов на состояние клеточных и гуморальных факторов защиты животных при вакцинальной профилактике рожи.

3. Определить в эксперименте особенности расселения вакцинного и: патогенного штаммов возбудителя рожи свиней на фоне .поступления в организм животных ПДД нитратов.

4. Определить напряженность и шродолжитель/ность поствакцинального 'противорожистого иммунитета у свиней на фоне скармливания ПДД нитрата калия при экспериментальном заражении.

1.3. Научная новизна. Изучено влияние ПДД нитрата калия на морфологию пммунокомпетентных органов белых мы-

шей и поросят. Экспериментально доказано отрицательное воздействие длительного скармливания Г1ДД нитрата калия на .характер иммунологической перестройки у мышеи при ■введении депонированной вакцины против рожи свиней. Установлено иимунодепрессшзное действие длительного скармливания ПДД нитрата калия при формировании протпворожи-стого иммунитета у поросят, 'привитых депонированной вакциной против рожи свиней.

1.4. Практическая ценность работы. Полученные данные расширяют имеющиеся сведения о влиянии нитратов на живые объекты. Выявлены закономерности угнетающего действия длительного поступления в организм ПДД нитрата калия на формирование поетвакцинального противорожнетого иммунитета. Предложено учитывать содержание ПДД нитратов в кормах животных при проведении плановых профилактических прививок еншюлоголовья против рожи.

1.5. Апробация работы. Материалы работы доложены на научных конференциях молоды.х ученых «Новые методы диагностики, способы 'профилактики н лечения незаразных болезней животных» (Воронеж, 1990) п конференции ¡лрофесеор-ско-'преподавательекого состава и аспирантов ветеринарного факультета Воронежского государственного аграрного университета им. К. Д. Глинки в 1992 г.

1.6. Публикация результатов исследований. Основные положения диссертации опубликованы в 4 научных статьях.

1.7. Объем работы. Диссертация изложена на 147 страницах машинописного текста и состоит из введения, краткого обзора литературы, результатов собственных исследований, обсуждения 'полученных данных, выводов и предложений. Работа содержит 5 таблиц и иллюстрирована 34 рисунками. Описок литературы включает 213 наименований, из них 47 иностранных авторов.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИИ

Работа выполнена в период с 1989 по 1992 г. в лаборатории кафедры эпизоотологии и микробиологии Воронежского государственного аграрного университета им. К- Д. Глинки и в колхозе «Знамя коммунизма» Новоусманского района Воронежской области.

Экспериментальная часть работы проведена на 452 белых мышах и 42 'Поросятах в возрасте от 1,5 до 5 месяцев.

В процессе работы были использованы методы: эпизоого-логический, токсикологический, бактериологический, клинический, патологоанатомический, гистологический, гистоиммуно-логическнй, серологический.

Для ¡проведения опытов использовали:

1. Химически чистый нитрат калия, ГОСТ 4217—65.

2. Депонированную вакцину против рожи свиней Гожуль-ской биофабрики серии 68 и 71.

3. Вакцинный из матрикса Конева и вирулентный 1329 штаммы бактерий рожи, полученные из ВГНКИ ветеринарных препаратов. _____ . ... — -

Прививку мышей проводили подкожно смывом 24-часовой агаровой культуры бактерий рожи вакцинного штамма в дозе 100 тыс. микробных клеток (в объеме 0,2 мл). Депонированную противорожистую вакцину для свиней применяли двукратно с интервалом между инъекциями 12 дней в дозах ■при первой прививке — 0,3 мл, при второй — 0,5 мл.

Нитрат калия мыши получали в дозе 14 мг на животное в сутки, поросята — 100 мг на голову в сутки с кормами.

Заражение мышей осуществляли подкожно шатогенным штаммом 1329 ВГНКИ возбудителя рожи свиней в дозе 50 тыс. микробных'клеток (а объеме 0,2 мл), а свиней — вну-трикожно в дозах от 25 тыс. до 2,5 млн. микробных клеток (в объеме 0,1 мл) по методу В. В. Тилга (1960).

Паренхиматозные органы у мышей отбирали после умерщвления путем обескровливания, лимфатические узлы у свиней — экстирпировали. Образцы крови от свиней получали путем ампутации кончика хвоста.

Для выявления поствакцинальных ■противорожнстых антител в сыворотке крови использовали «пробу роста».

Бактериологическое исследование осуществляли путем посева патологического материала на МПБ и МПА.

Степень бактериальной обсемененности органов изучали при ¡помощи РИФ с применением сухих рожистых люминесци-рующих сывороток.

Морфологические .изменения органов изучали после фиксации материала в 10% нейтральном формалине с последующей заливкой в 'парафин. Гистосрезы окрашивали гематоксилин-эозином. Для выявления жиров срезы готовили на замораживающем микротоме и окрашивали Суданом III и суданом IV.

При определении общей плазмоцитарной реакции материал фиксировали по Карнуа с последующей заливкой в пара-

фин. Гистоерезы окрашивали азур П-эозииом по Романовскому. Учет клеток плазмоцитарного ряда проводили по методике О. Л. Симаковой и Д. Д. Бутьянова с соавт. (1970), пользуясь при этом номенклатурой, принятой в 1960 году на Парижском конгрессе (Л. Ра^гаия, 1960) и дополненной М. П. Покровской с соапг. (1965).

Определение антителоенптезпрующи.х клеток проводили прямым методом, а антигенсодержащих клеток — по непрямому методу Кунса (А. X. Куне, 1971) в реакции иммуно-флюоресценции.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Влияние длительного скармливания нитратон на лимфоидные органы интактных белых мышей

Нами установлено, что скармливание белым мышам нитрата калия в дозе 14 иг на животное в сутки в течение 90 дней приводит 'к деструктивным изменениям в пмиунокомпе-тентных органах. Однако в течение всего опыта животные были активны, сохраняли аппетит и воспроизводительную способность.

При гистологическом исследовании в печени, селезенке и лимфатических узлах были выявлены изменения, которые находились в прямой зависимости от сроков экспериментального скармливания нитрата калия. Уже на 3-й день мы отметили зернистую дистрофию гепатоцитов и наличие очажков экстрамедуллярного кроветворения, состоящих из гистиоцитов, сегмептоядерных нейтрофилов н небольшого числа лим-фоидных клеток. На 10—15-й день скармливания нитрата калия отмечали жировую дистрофию, расширение синусоидных капилляров и отложение амилоида между печеночными балками и стенкой синусоидных капилляров, Через 25 дней с момента начала скармливания ПДД нитрата амилондоз 'принял диффузный характер. На 50-й день в 'паренхиме органа были выявлены ксантомные клетки. Через 80—90 суток отмечали большое количество некротических узелков, инфильтрированных клетками гранулоцнтарного ряда.

В селезенке уже через 5 дней наблюдали увеличение объема красной и уменьшение белой пульпы, а также уменьшение количества лимфоидных клеток в фолликулах органа. На 35-й день констатировали ксантоматоз органа и амилои-

доз, 'который к 80-му дню принял диффузный характер.

Видимые изменения со стороны лимфатических узлов у мышей, получавших нитрат калия, 'были отмечены нами только на 60-й день опыта. При этом резко уменьшилось количество лимфоидных клеток в фолликулах. На 80 и 90-е сутки выявлено значительное уменьшение количества клеточных элементов в мякотных тяжах, сужение и запустение синусов.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что длительное поступление ПДД нитрата калия вызывает деструктивные изменения в иммунокомпетентных органах, которые сопровождаются дистрофическими и некробиотическлми (процессами. Наши данные подтверждают исследования А. И. Яцышина с соавт. (1979), которые отметили аналогичные изменения под действием токсических доз нитратов в органах животных.

3.2. Формирование поствакцинального противорожистого иммунитета у белых мышеи на фоне поступления ПДД нитратов

Опыт по изучению воздействия Нитрата калия в ПДД на .устойчивость белых мышей к рожистой инфекции был поставлен на 4 группах животных. Мыши .первой (60) и третьей (10) групп получали нитрат калия в дозе 14 мг на одну мышь в сутки в течение 45 дней. Животные второй (60) и четвертой (10) групп нитрат калия не получали. По истечении этого срока мыши I и II групп были вакцинированы против рожи. Через 12 дней после вакцинации животные всех групп были заражены вирулентным штаммом 1329 ВГНК'И рожи свиней.

На 3-й день 'после вакцинации у мышей I и II групп отмечались признаки заболевания, которые характеризовались светобоязнью, жаждой, катаральным конъюнктивитом. Гибель мышей в I группе в поствакцинальный период составила 80,1%, тогда как во II — 10%.

•После заражения вирулентным возбудителем рожи мыши, получавшие ПДД нитрата калия (I группа), погибли в течение 3 суток. Среди вакцинированных животных, не получавших нитрат калия, гибель -после 'заражения составила лишь 1,6%. Невакцинированные животные после заражения также пали, но гибель мышей, получавших! нитрат калия в ПДД (III группа), началась на 2-й день, тогда как мыши, не получавшие -нитрат калия (IV группа), погибали только на 4-й день.

G

При бактериологическом исследовании материала от мышеи I группы бактерии рожи вакцинного штамма обнаруживались во всех органах через 3 часа после вакцинации и на протяжении 5 последующих суток. Во II группе животных нам удалось выделить микроб через б часов только из трубчатой кости, из сердца — через 9, 12 часов и 5 суток после вакцинации, печени — в период через 12, 24 часа и 3 суток, селезенки — на 1—3-й сутки, почки — через 3 и 5 суток.

Таким образом, расселение вакцинного штамма у мышей, получавших нитрат калия, проходило более интенсивно, чем во II группе. Процесс приобрел септический характер на 3-й сутки и сопровождался гибелью животных. У мышей II группы (не получавшие нитрат) во все сроки исследования ни в одном случае вакцинный штамм не выделялся одновременно из всех органов, а через 7 дней его не удалось изолировать ни из одного из исследованных органов.

После заражения вакцинированных мышей вирулентным штаммом рожистой палочки у животных II группы возбудитель был выделен через 24 часа из всех исследованных органов, на 5-е сутки — только у одного животного из селезенки.,' В более поздние сроки исследований нами были получены отрицательные результаты. В то же время в I группе мышей все животные погибли в течение 1—3-го дня опыта.

При выяснении интенсивности бактериальной обсеменен-ности органов мышей с использованием РИФ установлено, что через 3 часа после вакцинации бактериальные клетки выявлены во всех исследованных органах и лимфатических узлах мышей I и II групп. Однако у животных, вакцинированных на фоне длительного скармливания нитрата, наибольшее количество клеток обнаружено в селезенке, паховом и подчелюстном лимфатических узлах.

Через 6 часов у мышей I группы высокая концентрация микробных клеток была в паховом лимфоузле, а у мышей II группы — в селезенке. Спустя 9 часов после вакцинации у животных I группы наибольшее количество клеток возбудителя обнаружено в паховом лимфоузле, наименьшее — в крови сердца. У мышей II труппы в этот период наибольшее количество микробных клеток оказалось в селезенке и подколенном лимфоузле, наименьшее — в подчелюстном лимфоузле, сердце, печени.

Через 12 часов у мышей I и II групп увеличилось количество »бактериальных клеток в крови (почти в 2 и 4 раза соответственно),

Через 3 суток среди мышей, получавших нитрат калия в ПДД, начался падеж. Микробные клетки вакцинного штамма обнаружены во всех органах. Количество клеток микроба у мышей, не получавших нитрат, было значительно ниже во всех органах.

Через 5 суток максимальные количества микробных клеток у мышей II группы выявлены в крови и .печени.

Через 7 суток статистически.достоверной-разницы в обсе-"мененноеги органов у мышей I и II групп не было. Однако у животных II группы снизилось количество клеток в лимфоузлах по сравнению с исследованием на 5-е сутки после вакцинации.

Через 12 дней были исследованы лишь мазки-отпечатки из органов от мышей, не получавших нитрат калия (II труппа). Количество микробных клеток при этом было минимальным.

На 3-й сутки после заражения мышей вирулентным штаммом возбудителя рожи была сопоставлена степень обсеменен-.ности органов мышей I и II групп. Количество микробных тел у животных, получавших нитрат калия, до вакцинации превышало этот же показатель у контрольных животных: в сердце — в 5 раз, неченн — и 6 раз, селезенке — в 2,8 раза, почке — в 7 раз, в лимфатических узлах — от 1,6 до 11,2 раза.

Таким образом, нами установлено, что скармливание белым мышам в течение 45 дней ПДД нитрата калия существенно снижает резистентность организма, отрицательно влияет на формирование поствакцинального противорожистого иммунитета, что сопровождается усиленным расселением и приживаемостью вакцинного и патогенного штаммов рожи. Поствакципальный период у таких животных протекает с высокой гибелью, обусловленной септическим процессом даже при использовании вакцинного штамма возбудителя рожи. В то же время у мышей, не получавших до вакцинации нитрат калия, происходила иммунологическая перестройка организма, обеспечивающая специфическую защиту животных.

Важную роль в формировании иммунитета играют плазматические клетки, которые активно участвуют в синтезе специфических белков-антител (Ю. И. Афанасьев и др., 1967).

При учете количества плазмоцитов в поверхностных лимфатических узлах мы отметили, что кратность их численного увеличения после вакцинации по сравнению с исходными уровнями у мышей, получавших ПДД нитрата калия (I группа) и не получавших его (И группа), составила: в'подмышеч-

ном лимфоузле 1,2 и 5 раз (24 часа), 2,3 и 12 раз (3 суток). 7,4 и 38 раз (5-е сутки), 1,1 и 38,02 раза (7-е сутки); в паховом — 3,33 и 3,6 раза (24 часа), 2,5 и 9,0 раза (3-н сутки), 12,3 и 53,8 раза (5-е сутки), 3,3 и 62,4 раза (7-е сутки); в подколенном — 0,00 и 22,7 раза (24 часа), 4,3 и 18,6 раза (3-й сутки), 7,3 и 106,5 раза (5-е сутки), 1,22 и 68,6 раза (7-е сутки) соответственно. Суммарное возрастание численности плазмоцитов в поверхностных лимфатических узлах белых мышеи после иммунизации их против рожи составило: у животных I группы — в 19,24 раза, у животных II группы — » 263 раза.

Соотношение различных типов плазмоцитов в поверхностных лимфатических узлах белых мышей на 3-й сутки после зарал<ения вирулентным возбудителем рожи представлено в таблице 1.

Таблица 1

Соотношение различных типов плазмоцитов на 3-и сутки после заражения мышей патогенной культурой возбудителя рожи (%)

Количество плазмошгтов, %

Группа плазмобласты проплазмоциты зрелые

I 62,0 7,[) 31,0

II 4,0 19,8 76,2

III 100 —

IV 33,0 15,0 52,0

Наибольшее количество зрелых плазмоцитов выявлено а лимфатических узлах мышей, не получавших до вакцинации ПДД нитрата калия. Основная масса плазматических клеток у животных, вакцинированных с последующим заражением на фоне скармливания ПДД нитрата калия, была представлена бластньши формами этих клеток, которые менее активны в отношении синтеза антител.

У невакцинированных животных, подвергнутых заражению на фоне поступления нитрата калия (III группа), мы не обнаружили зрелые формы плазмоцитов и проплазмоциты, тогда как у животных, зараженных без 'предварительного скармливания нитрата калия, зрелые плазмоциты составляли 52% от общего количества этих клеток.

Следовательно, длительное поступление в организм белых мышей ПДД нитрата калия, по нашим данным, существенно

снижает чгосгвакцинальный ллазмоцитопоэз, что, в свою очередь, делает неэффективной специфическую противорожи-стую защиту макроорганизма при внедрении патогенного штамма возбудителя рожи.

3.3. Влияние нитратов на специфическую реактивность поросят, вакцинированных ---------------------- против рожи

Изучение действия нитрата калия на формирование и напряженность иммунитета у поросят, вакцинированных против рожи, было проведено на 42 животных полуторамесячного возраста. Поросята были разделены на 4 группы. Животные I группы (15) в течение 15 дней с кормом получали нитрат калия 'в дозе 100 мг на голову в сутки, животные II группы (15) нитрат не получали. По истечении этого срока лоросята обеих групп были привиты двукратно в дозах 0,3 и 0,5 мл с интервалом 12 дней депонированной вакциной против рожи. Шесть поросят, получавших нитрат калия (III группа), и шесть поросят, не получавших его (IV группа), иммунизации лротив рожи не подвергались.

По истечении срока скармливания нитрата калия, а также через 12 дней шосле первой и 12 дней после второй вакцинации от поросят I и II групп (по 3 из каждой) брали кровь и экстирпировали паховые лимфатические узлы. Напряженность лротиворожисгого иммунитета у 'поросят I, II, III и IV групп определял]! экспериментальным заражением через 14 дней и спустя 3 месяца после вакцинации. Животные III и IV групп (ие иммунизированные) служили контролем.

При изучении морфологических изменений лимфатических узлов через 15 дней скармливания нитрата калия в ПДД мы отметили утолщение капсулы органа, нитевидные скопления лимфоидных'клеток под капсулой, незначительное утолщение трабекул и инфильтрацию последних гистиоцитами и лимфо-идными клетками. У животных II группы (не получавшие нитрат) структура лимфатических узлов была типичной.

На 12-й день после введения первой дозы вакцины у поросят I группы выявлено сильное увеличение и покраснение лимфатических узлов. При их гистологическом исследовании отмечено наличие под капсулой мелких фолликулов. В просвете кровеносных сосудов выявлено большое ¡количество лимфоцитов, сегментоядерных и палочкоядерных нейтрофи-лов. Все структуры органа 'интенсивно инфильтрированы

эозинофнлами. У животных 1! группы наблюдалось значительное увеличение количества лимфоидиых клеток в фолликулах и мякотных тяжах, а также образование множества мелких фолликулов.

На 12-й день после введения второй дозы вакцины отмечено существенное отставание в росте и развитии поросят, получавших нитрат калия, но при этом животные были подвижны, сохраняли ал петит и не проявляли .признаков какого-либо заболевания. Однако нам не удалось обнаружить у них паховых лимфоузлов, регнонарных месту введения вакцины. Лишь у одного поросенка мы эксгирпировали некое подобие лимфатического узла. При гистологическом исследовании этого образца выявили разрозненные соединительнотканные элементы и скопления лимфондных клеток и небольшого числа нейт-рофилов и эозинофилов. Лимфатические узлы поросят, не получавших нитрат калия, содержали в паракортикальной зоне большое количество ретикулярных клеток. В синусах, мякотных тяжах и фолликулах было обнаружено значительное количество клеточных элементов лимфоидного ряда.

Следовательно, вакцинация на фоне скармливания ГЩД нитрата калия способствовала заметному отставанию в росте и развитии поросят. При этом глубокой деструкции подверглись регионарные лимфоузлы.

Р. В. Петров (1981) отмечает, что полноценный иммунитет формируется только при взаимодействии антигенсодержа-щих и антителопродуцирующих клеток. Отклонения в числе этих клеток влекут за собой развитие иммунодефицитных со-' стояний.

Данные о содержании антигенсодержащих клеток в паховых лимфатических узлах приведены в таблице 2.

Таблица 2

Антигенсодержащие клетки в лимфоузлах поросят после вакцинации

/Количество антигенсодержащих клеток (М±м)

Группа до нзкцинаци'и через !2 дней после

1 вакцинации | II вакцинации

I 0,00 268±84,45 -

II 0,00 404±31,232 660+35,294 11

До проведения вакцинации у животных I и II трупп в срезах лимфоузлов обнаруживались лишь единичные флюоресцирующие клетки. Через 12 дней после I вакцинации количество их у поросят I группы было в 1,5 раза меньше, чем у животных II группы. После введения второй дозы вакцины число антигенсодержащих клеток в лимфоузлах животных 11 группы увеличилось в 1,6-раза по сравнению с предыду-_______ щнм исследованием.

Примечательно, что данные клетки у поросят I группы локализовались в синусах мозгового вещества и незначительное их количество обнаруживалось в фолликулах, тогда как у животных II группы эти клетки располагались в мякотных тяжах и незначительное их количество встречалось в 'Краевом синусе.

Данные об относительном количестве антителосинтезиру-ющих клеток в разные сроки после вакцинации приведены в таблице 3.

Таблица 3

Лнтителосинтезирующие клетки в лимфоузлах поросят после вакцинации

Группа Количество антителоск «тезирующих клеток (А1±;1м).

¡до вакцинации через 42 дней после

I вакцинации II вакцинации

I 9,6±4,62 20,6± 6,30 —

И 17,6±3,36 250,3± 35,294 265,5+30,232

До проведения вакцинации против рожи в срезах лимфоузлов поросят I и II групп содержание антителосинтезиру-гощих клеток достоверно не различалось. На 12-й день после первого введения вакцины нх число у поросят, не ¡получавших нитрат калия (II группа), в 12,5 раза превосходило этот же показатель у животных, получавших нитрат калия (I группа).

На 12-й день после второхч) введения вакцины количество антителопродуцентов у поросят II группы увеличилось в 1,1 раза по сравнению с уровнем после первого введения вакцины. Материал для исследования от животных I группы в этот срок не был получен в связи с невозможностью обнаружения лимфатических узлов.

Таким образом, ежесуточное поступление в организм поросят 100 мг нитрата калия в течение 15 дней, предшествующих вакцинации животных против рожи, способствовало значительному снижению количества антигенсодержащих н антителосинтезирующих клеток в регионарных лимфатических узлах, а также влияло на нормальное перераспределение этих клеток в структурах органа. «Исчезновение» лимфоузлов после вакцинации против рожи свидетельствует о выраженном иммунодепресспвном действии нитрата калия па организм поросят.

Одним нз наиболее важных факторов защиты макроорга-пизма при роже свиней является продукция специфических антител.

Превентивные свойства сывороток крови определяли путем постановки «пробы роста», используя в качестве индикаторной суточную бульонную культуру бактерии рожи свинен (штамм 1329 ВГНКИ). Исследуемые сыворотки добавляли к МПБ, получая разведения от 1 : 10 до 1 : 640.

В результате нами было установлено, что в указанных разведениях сывороток крови поросят I и II групп до проведения иммунизации специфические агглютинирующие антитела не выявлялись. Данные «пробы роста» после вакцинации представлены в таблице 4.

руина

Таблчиа 4

Уровни агглютинирующих антител в сыворотках крови поросят после вакцинации против рожи

Разведения сывороток

животных 1:10 1 : 20 1 : 40 1 : 80 1 1:160 1:320 1 1 : 640

2 .3 4 5 6 7 1 8 9

•1

Черен 12 дней после первой вакцинации

4 3 3 4 2 —

4 4 3

1 2 3 4 5 (5 г 8 9

(Через 12 дней после второй вакцинации

I 1 3 2 2 2 -— — —

2 4 3 1 ... — - -— - -----

Л 4 3 3 — — —

11 1 4 4 4 4 3 2 —

2 4 4 4 4 4 3 2

3 4 4 4 3 3 2 —

Примечание: цифры в таблице означают опенку «пробы роста» е крестах.

Результаты наших исследований свидетельствуют, что после первой вакцинации в сыворотках крови поросят присутствовали шротиворожистые агглютинирующие антитела. Однако их наличие было установлено лишь у одного животного из I группы ('получавшие нитрат). При этом положительная реакция в 2 креста выявлена в разведениях сыворотки 1: 10 и 1 : 20. У двух других поросят, исследованных в этот срок, антитела к (Возбудителю рожи обнаружены не были.

Сыворотки крови 'поросят II группы ('не 'получавшие нитрат калия) полностью задерживали рост возбудителя в разведении 1 : 10. У одного поросенка разведение сыворотки 1 : 20 также обеспечило агглютинацию всех бактерий рожи, а у двух других заметно сдерживало размножение возбудителя и обладало достаточно выраженными агглютинирующими свойствами. Агглютинация рожистой палочки выявлена и в более высоких разведениях сыворотки (1 :40 и 1 : 80) у двух животных из трех.

На 12-й день после второго введения вакцины отмечено возрастание агглютинирующей активности сывороток крови у животных обеих групп.

При этом в I группе поросят агглютинацию возбудителя рожи в 3 и 4 креста обусловливали разведения сывороток крови 1 : 10 и 1 : 20. Лишь в одном случае агглютинация рожистой палочки в разведении 1 :40 была оценена в 3 креста, а в разведении 1 :80 — в 2 креста. Более высокие разведения сывороток агглютинирующими свойствами не обладали.

Сыворотки крови животных II грул'пы имели значительно более выраженные агглютинирующие свойства в отношении

возбудителя рожи по сравнению с сыворотками поросят I группы. Полная агглютинация микроба установлена в разведениях от 1:10 до 1 :80, а в одном случае — в разведении 1 : 160. Достаточно высокая степень агглютинирующих свойств сывороток (2 и 3 креста) была установлена в разведениях 1 : 160 и 1 : 320. У одного из трех поросят, исследованных в этот срок, сыворотка крови агглютинировала палочку рожи в разведении 1:640.

Таким образом, уменьшение количества антителопродуци-рующих клеток в поверхностных лимфатических узлах поросят, вакцинированных против рожи на фоне 15-дневного поступления в организм с кормом 100 мг нитрата калия, сопровождается значительным снижением уровня противорожистых агглютинирующих антител в сыворотке крови животных. У поросят, содержащихся на безнитратных рационах, уровень поствакцпнальных агглютинирующих противорожистых антител в сыворотках крови в 4—8 раз превышал показатели животных, потреблявших ПДД нитрата калия.

Для определения напряженности поствакцинального про-тиворожистого иммунитета проводили экспериментальное внутрнкожное заражение ¡поросят ¡вирулентной культурой возбудителя рожи по методу В. В. Тилга (1960). При этом использовали 5 различных доз патогенного штамма 1329 ВГНК.И (25, 125, 250 тыс., 1,25 и 2,5 млн. микробных тел), которые вводили одновременно в разные участки тела. Реакцию кожи определяли через 24, 48 и 72 часа и оценивали в крестах.

Результаты экспериментального заражения представлены в таблице 5.

Таблица 5

Устойчивость поросят к экспериментальному заражению возбудителем рожи

0 § о, и 1 № ЖИВОТНЫХ Реакция жожи1 через 24/48 часов иа Заболели

25 тыс. 125 тыс. 250 тыс. 1,25 млн. 2,5 млн.

2 3 4 5 6 7 8

Через 14 дней после вакцинации

I 1 4/1 4/2 4/4 4/4 4/4 +

2 4/ 4/3 4/4 4/4 4/4 +

3 4/2 4/4 4/4 4/4 4/4 +

II 1 —/— —/— -/1 2/2. —

2 —/— —/— -/1 1/2 —

3 —/— —/— —/— ~/'1 2/1 —

1 2 3 4 5 6 7 8

111 I 2/3 4/4' 4/4 4/4 4/4 +

2 2/3 4/4 4/4 4/4 4/4. +

3 2/3 4/4 4/4 4/4 4/4 +

IV 1 3/3 4/4 4/4 4/4 . 4/4 +

2 - 4/4. 4/4 - " 4/4 4/4 +

3: 3/4 4/4 4/4 4/4 4/4 +

•Чфе 3 месяца после вакцинации

1 ¡1 4/4 4/4 4/4 4/4 '4/4 +

2 4/4 4/4 4/4 4/4 4/4 +

3 4/4 4/4 4/4 4/4 4/4 +

и 1 2/2 3/3 3/3 4/4 4/4 —

2 2/3 2/3 4/3 4/4 4/4 +

3 2/3 3/4 4/4 4/4 4/4 —

III 1 4/4 4/4 4/4 4/4 4/4 +

2 2/4 4/4 4/4 4/4 4/4 +

3 2/4 4/4 4/4 4/4 4/4 +

IV 1 3/4 4/4 4/4 4/4 4/4 +

2 2/4 4/4 4/4 4/4 4/4 +

3 3/4 4/4 4/4 4/4 4/4 +

Поросята, получавшие до вакцинации ПДД нитрата калия (I группа), оказались более чувствительными к патогенному действию микроба, чем животные, не получавшие нитрат (II группа). У животных I группы наблюдалось общее заболевание, которое сопровождалось ¡признаками угнетения, повышением температуры тела до 41,3—41,6°С, появлением на 'коже участков эритемы. У поросят II группы через 72 часа после заражения местная ¡кожная реакция отсутствовала. Среди невакцинироваиных поросят высокая степень кожной реакции и общее заболевание наблюдались как среди получавших до заражения нитрат калия в ПДД (III группа), так и не получавших его (IV группа).

Спустя 3 месяца после вакцинации у животных I группы иммунная защита отсутствовала. Все ¡поросята, зараженные в этот срок, заболели через 48 часов. При этом снизилась напряженность иммунитета и у животных II группы, но «клиническая картина заболевания была зарегистрирована лишь в одном случае. У двух других поросят заболевание протекало доброкачественно, что сопровождалось отторжением корочек с поверхности кожи в течение 72—96 часов после экспериментального заражения, отсутствием повышения общей температуры.

Результаты исследовании показывают, что Поросята, вакцинированные против рожи на фоне скармливания нитрата калия, приобрели иммунитет низкой напряженности. Спустя 3 месяца после вакцинации их иммуиореакгивность практически не отличалась от таковой у певакцинированиых животных, что подтверждено результатами экспериментального заражения.

Таким образом, иммунодепрессивное действие ПДД нитрата «алия в значительной мере препятствует формированию у животных прогиворожистого иммунитета.

Полученные намд данные были подтверждены при изучении причин постващипальных осложнений у поросят в одном из хозяйств Воронежской области лосле иммунизации их против рожи. Через 5 дней после проведенной вакцинации заболеваемость поросят достигла 27%, летальность — 88,6%. При исследовании кормов мы обнаружили в них нитрат- и нитрит-ионы в количествах 0,08 г/кг и 15 мкг/кг соответственно. Содержание нитратов в органах павших животных доходило до 0,2 мг/кг, а нитрит-ионов—до 35 мкг/кг. При бактериологическом исследовании из органов павших животных был выделен вакцинный штамм возбудителя рожи. В других группах поросят, не получавших корма, содержащие нитраты, поствакцинальных осложнений не наблюдалось.

ВЫВОДЫ

1. Длительное (15 дней и более) поступление с кормом нитрата калия в ПДД (14 мг белым мышам) и 100 мг поросятам в сутки сопровождается снижением естественной резистентности животных и вызывает выраженные морфологические изменения в иммунокомпетентных органах без заметных отклонений в общем состоянии организма.

2. Под влиянием нитрата калия в ПДД уже в первые 3— 10 дней развиваются изменения, характеризующиеся белковой и жировой дистрофией, экстрамедуллярным гранулоцито-поэзом, а в более поздние сроки — ам'илоидозом, ксантомато-зом и микронекрозами в печени, селезенке, уменьшением количества клеточных элементов в фолликулах-и мякотных тяжах лимфатических узлов, сужением и запустением их синусов.

3. Поступление ПДД нитрата калия способствует усиленному расселению и приживаемости вакцинного и патогенного

штаммов рожи свиней в органах, сопровождаясь сепсисом и гибелью белых мышей в 80,1% случаев в поствакцинальный период и в 100% случаев после заражения.

4. Вакцинация на фоне поступления ПДД нитрата калия в организм белых мышей и поросят с 1,5-месячного возраста сопровождается у них, в сравнении с контролем, развитием выраженного иммунодефицита, что характеризуется:

а) снижением поствакцинального плазмоцитопоэза в 13.2 раза;

б) уменьшением в 1,5 раза количества антигенсодержащнх клеток в поверхностных лимфатических узлах, сопровождающимся перераспределением фагоцитов в структурах органа;

в) снижением в 12,5 раза количества антителосинтезиру-ющих клеток в регионарных лимфатических узлах;

г) снижением в 4—8 раз титров специфических противоро-жистых антител в сыворотке крови поросят.

5. Вакцинация поросят против рожи на фоне поступления нитрата калия не сопровождается формированием напряженного иммунитета, что проявляется низкой устойчивостью их к экспериментальному заражению возбудителем рожи свиней уже через 14 дней после прививки.

6. Проведенные исследования свидетельствуют о том, что предельно допустимые дозы нитратов, не влияющие на иммунологический статус животных, требуют дополнительного изучения.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Необходимо предусматривать возможность отрицательных последствий вакцинации животных лротив вирусных ¡1 бактериальных инфекций на фоне поступления нитратов с кормами в течение 3 и более дней даже в предельно допустимых дозах.

2. В случаях прорыво,в противорожистого иммунитета у животных или поствакцинальных осложнений в первый месяц после прививки следует проводить анализ используемых 'кормов на наличие в них нитратов и при обнаружении последних решать вопрос о необходимости повторной вакцинации, исключив из рационов корма, содержащие тштраты.

Список опубликованных работ по теме диссертации:

1. Артемов Б. Т., Ефанова Л. И., Дынин В. И. Влияние предельно допустимых доз нитрата калия на иммуногенез при роже // Инф. листок № 315—92 Воронежского межотраслевого территориального центра НТИП. — Воронеж, 1992.

2. Дынин В. И., Ковырялова С. В. Морфологические изменения в паренхиматозных органах белых мышей под влиянием нитратов // Ножые методы диагностики, способы профилактики и лечения незаразных болезней животных / Материалы конференции молодых ученых. — Воронеж, 1990.— С. 13.

3. Ковырялова С. В., Дынин В. И. Изменения некоторых показателей белой крови у мышей под влиянием нитратов // Новые методы диагностики, способы профилактики и лечения незаразных болезней животных / Материалы конференции молодых ученых. — Воронеж, 1990. — С. 23.

4. Ковырялова С. В., Дынин В. И. Влияние нитратов и нитритов на общую и специфическую реактивность сельскохозяйственных животных // Диагностика и профилактика инфекционных болезней сельскохозяйственных животных / Сб. науч. тр. ВСХИ, —Воронеж, 1990.— С. 55—58.

Тип. ВГАУ, зак. 1553-92 г., игр. 100. Объем 1 л. Л.