Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Влияние аватека и цикостата на гематологические и патоморфологические показатели у поросят при экспериментальном криптоспоридиозе

На правах рукописи

МАЛАХОВ НИКОЛАЙ СЕРГЕЕВИЧ

I

ВЛИЯНИЕ АВАТЕКА И ЦИКОСТАТА НА ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЕ И ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ У ПОРОСЯТ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ КРИПТОСПОРИДИОЗЕ

16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Саранск -2006

Работа выполнена на кафедре патанатомии, инфекционных и инвазионных болезней животных ГОУВПО «Мордовский государственный университет

им. Н. П. Огарева»

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук профессор Васильева Валентина Алексеевна

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук профессор

Селезнев Сергей Борисович доктор ветеринарных наук профессор Архипов Иван Алексеевич

Ведущая организация: Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия

00

Защита состоится «лР» 2006 г. в <10 часов на заседании дис-

сертационного совета К 212.117.05 при Мордовском государственном университете им. Н. П. Огарева (430000, г. Саранск, ул. Большевистская, 68).

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке им. М. М. Бахтина Мордовского государственного университета им. Н. П. Огарева

Автореферат разослан «_»

Ученый секретарь диссертационного совета

Т. А. Романова

3364

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Проблема повышения темпов развития животноводства для более полного обеспечения населения продуктами питания - одна из важнейших в сельском хозяйстве. Однако увеличению поголовья скота препятствуют различные болезни, в том числе паразитарные.

Среди паразитарных болезней свиней наиболее широко в России распространены аскаридоз, трихоцефалез, эзофагостомоз, эймериоз и криптос-поридиоз.

Криптоспоридиоз - протозойное заболевание животных и человека, возбудителем которого служат кокцидии рода Cryptosporidium, широко распространен особенно среди телят, ягнят, поросят молочного периода. Протекает с признаками расстройства пищеварения, сопровождающегося диареей, и нередко заканчивается гибелью животных. Установлено, что криптоспори-диозом заболевают обычно животные с ослабленным иммунитетом (R. Fayer, S. Ungar, 1986; Т. В. Бейер, 1998; И. И. Бочкарев, 1996; В. А. Васильева, 2004, 2005 и др.).

К настоящему времени криптоспоридиоз у новорожденных животных зарегистрирован во всех странах мира, о чем свидетельствуют многочисленные данные (I. Pavlasek, 1981, 1982; Ю. К. Горбов, Б. С. Цыряпкин, 1984; П. И. Пашкин, 1988; С. A. Scott, Н. V. Smith et al„ 1995; М. В. Якубовский, Т. Я. Мясцова, С. И. Лавор, 1998; В. А. Васильева, 1998; 2000; 2001 и др.).

Этиология болезней желудочно-кишечного тракта заслуживает серьезного внимания. Необходимо как можно раньше выявить причину возникновения диарей различного характера, определить их сущность и своевременно и квалифицированно поставить диагноз. Вместе с тем до сих пор остаются невыясненным и некоторые вопросы патогенеза криптоспоридиоза животных, а также его лечения и профилактики.

На современном уровне знаний представления только о клинических, физиологических и патологоанатомических показателях явно недостаточно, необходимо также иметь сведения о происходящих при этом в организме биохимических изменениях как до применения препаратов, так и после лечения.

Цель и задачи исследований. Целью нашей работы является сравнительная оценка применения аватека и цикостата при экспериментальном криптоспоридиозе поросят с использованием морфологических, биохимических и патоморфологических показателей. Для реализации указанной цели были поставлены следующие задачи:

- изучить морфологические изменения в организме поросят до и после применения аватека и цикостата при криптоспоридиозе;

- определить динамику содержания общего белка и белковых фракций в сыворотке крови поросят до и после применения аватека и цикостата при экспериментальном криптоспоридиозе;

РОС НАЦИОНАЛЬНА*' БИБЛИОТЕКА 1

- изучить активность АлАТ, АсАТ, СДГ, ГДГ, ШФ и КФ в сыворотке крови поросят до и после применения аватека и цикостата при криптоспори-диозе;

- выявить патоморфологические изменения, происходящие в организме животных при криптоспоридиозе после применения препаратов.

Научная новизна. Впервые изучено действие аватека и цикостата на С. рагуит у поросят при криптоспоридиозе. Проведен морфофункциональ-ный анализ системы паразит - хозяин. Впервые дана сравнительная пато-морфологическая оценка эффективности аватека и цикостата.

Проведенные исследования дают новые данные о значении количественных изменений биохимического состава сыворотки крови в динамике при криптоспоридиозе поросят и тем самым значительно расширяют, дополняют и уточняют существующие представления о патогенезе этого заболевания до и после проведенного курса лечения.

Практическая ценность работы. На основании изучения и анализа симптомокомплекса криптоспоридиозной инвазии поросят в динамике и анализа морфологических, биохимических и патоморфологических изменений установлены закономерности метаболических процессов.

Показана определенная эффективность химиотерапевтических средств аватека и цикостата - при криптоспоридиозе новорожденных поросят. Полученные данные по влиянию криптоспоридий на организм поросят могут быть использованы в постановке диагноза непосредственно в хозяйствах и при лабораторной диагностике в научно-исследовательских лабораториях, а также при написании учебников и учебных пособий по протозоологии.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

1. Влияние аватека и цикостата на гематологические показатели при криптоспоридиозе поросят.

2. Характеристика биохимических изменений, выявленных в сыворотке крови после курса лечения.

3. Патоморфологические изменения в органах и тканях поросят после применения аватека и цикостата.

Апробация работы. Основные положения работы доложены на XXXIII Огаревских чтениях Мордовского госуниверситета (Саранск, 2004); VI Сибирской Международной научно-практической конференции по проблемам ветеринарной медицины (Новосибирск, 2004); Всероссийской научно-производственной конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (Москва, 2004; 2005); X научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов (Саранск, 2005); Республиканской научно-практической конференции по инновационным технологиям (Саранск, 2005); на заседании кафедры патанатомии, инфекционных и инвазионных болезней

животных Аграрного института Мордовского госуниверситета (протокол № 4 от 12 апреля 2006 г.).

Внедрение результатов исследований. Основные положения диссертационной работы отражены в 5 научных статьях, в которых изложены основные положения и выводы по изучаемым вопросам. Полученные результаты внедрены в районных ветеринарных лабораториях Республики Мордовия, а также используются при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий на кафедре патанатомии, инфекционных и инвазионных болезней животных Аграрного института Мордовского государственного университета им. Н. П. Огарева.

Объем и структура диссертации. Диссертация включает общую характеристику работы, обзор литературы, анализ результатов собственных исследований, их обсуждение, выводы, практические предложения, список использованной литературы, приложение. Она изложена на 116 страницах машинописного текста, иллюстрирована 40 рисунками (фотографиями, графиками, диаграммами). Список использованной литературы включает 181 источник, в том числе работы иностранных авторов.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы исследования

Работа выполнена в 2001 - 2005 гг. на кафедре патанатомии, инфекционных и инвазионных болезней животных Аграрного института Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева в рамках задания «Разработка и внедрение методов диагностики, лечения и профилактики болезней животных в Нечерноземной зоне Российской Федерации» (номер государственной регистрации 01200105275). Часть исследований проведена в областной ветеринарной лаборатории г. Ульяновска, патологоморфологическом отделении Республиканского онкологического диспансера, испытательной лаборатории контроля физиологического состояния животных (сектор № 3).

Опыты по изучению морфологических и биохимических показателей в крови при криптоспоридиозе проводили на 27 поросятах из 8 пометов от одного до трехдневного возраста одного пола и примерно одинаковой массы (1,0 - 1,5 кг), которые были распределены на 1 контрольную и 2 опытные 1руппы по 9 голов в каждой. Перед постановкой опыта все поросята были трижды исследованы на ооцисты криптоспоридий.

Ооцисты криптоспоридий для экспериментального заражения поросят получали от инвазированных свиней в свиноводческих хозяйствах Республики Мордовия и Ульяновской области. Ооцист, выделенных из фекальных масс методом Фюллеборна, отмывали в 10-кратном объеме дистиллированной воды от соли и посторонних примесей методом центрифугирования (3

тыс. об/мин в течение 10 мин.). Полученную биомассу сохраняли в 2,5% растворе гентамицина или в 2% растворе двуххромовокислого калия. Предварительно пробы фекалий трижды проверяли микроскопически для исключения другой инвазии. Перед заражением культуру криптоспоридий тщательно размешивали на магнитной мешалке и проводили 3-разовый подсчет в камере Горяева, а затем набирали нужную дозу.

Поросят инвазировали суспензией ооцист криптоспоридий в дозе 1 тыс. на 1 кг живой массы. Содержали животных в одинаковых условиях, исключающих естественное заражение, что подтверждается трёхкратным и отрицательными результатами копрологических исследований и отсутствием простейших и других паразитов у контрольных животных в течение эксперимента.

Кровь для исследования в объеме 4 - 5 мл брали перед кормлением одноразовыми шприцами из непарной хвостовой вены, идущей под телами хвостовых позвонков. Для приготовления сыворотки кровь из шприца осторожно по стенке переливали в пробирку, помещали ее в теплое место (в термостат при 37 ° С) на 20 мин., затем тонкой спицей из нержавеющей стали или стеклянной палочкой освобождали стенки пробирки от налета и помещали в холодильник для уплотнения образовавшегося сгустка. Отделившуюся сыворотку сливали в отдельную пробирку, предварительно ее отцентрифугировав

Исследования проводили дважды до заражения и на 3, 5, 8-е сутки после заражения, затем с кормом давали препараты аватека и цикостата в дозе 15 мг/кг массы тела в течение 5 дней подряд, делали 5-дневный перерыв, проводили убой на 15-е сутки затем курс лечения повторяли и проводили убой на 25-е сутки.

Подсчет форменных элементов крови осуществляли общепринятыми методами в камерах Горяева (И. П. Кондрахин, Н. В. Курилов, Г. И. Малахов, 1985).

Из биохимических показателей с помощью биохимического анализатора «НушаНгег 2000» определяли активность щелочной и кислой фосфатаз, общий белок, белковые фракции, активность аминотрансфераз (АсАТ, АлАТ) и дегидрогеназ (ГДГ, СДГ).

В течение опыта за животными регулярно велись клинические наблюдения.

Для патогистологического исследования кусочки материала брали из краниального, среднего и каудального участков двенадцатиперстной, тощей, подвздошной кишок, а также из сердца, печени, почек и легкого, фиксировали в жидкости Карнуа и в 10% водном растворе нейтрального формалина, заливали в парафин и полученные срезы окрашивали гематоксилин-эозином и по Ван-Гизону.

Цифровой материал статистически обрабатывали на персональном компьютере с использованием критериев Стьюдента, Т-критерия Уайта.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Гематологические показатели крови поросят при экспериментальном криптоспоридиозе

Кровь обеспечивает взаимосвязь обменных процессов, протекающих в различных органах и тканях, выполняет защитную, транспортную, регуля-торную, дыхательную, терморегулирующую и другие функции. Морфофунк-циональный анализ крови позволяет весьма объективно оценить действие различных факторов на организм, хотя эти реакции и не всегда специфичны. Биохимическая характеристика крови очень важна как для оценки физиологического статуса организма животного, так и для своевременной диагности-( ки патологических состояний.

Наши данные показали, что у поросят всех опытных групп в крови не наблюдалось никаких отклонений, так как все показатели (содержание гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов и т. д.) были в норме. > При некоторых патологических состояниях, в том числе при криптос-

поридиозе, в достаточно стабильной системе крови происходят как количественные, так и качественные изменения форменных элементов.

Гематологические исследования зараженных криптоспоридиозом поросят показали, что как в первой, так и во второй опытной группе происходит достоверное понижение содержания гемоглобина. Оно составило 8,0±0,18 и 8,4±0,16 г % (Р<0,001) соответственно при 11,9±0,26 г % в контрольной группе. В обеих опытных группах наблюдалось снижение количества эритроцитов с 6,8±0,15 млн/мкл до 5,5±0,25 и 5,7±0,58 млн/мкл (Р<0,001). Отмечались лейкоцитоз и лимфоцитоз. ( Анализируя данные рис. 1, 2 и 3, следует отметить, что после прове-

денного лечения на 25-е сутки у животных опытных групп повысилось количество гемоглобина за счет исчезновения признаков диареи с 8,0±0,18 до 10,20±0,60 г% (Р<0,001) в первой опытной группе и до 10,50±0,64 г % (Р<0,001) - во второй. Количество эритроцитов увеличилось с 5,5±0,25 до 6,9±0,35 млн/мкл (Р<0,001) в первой опытной группе и с 5,7±0,58 до 7,20±0,43 млн/мкл (Р<0,001) - во второй. В контрольной группе уровень гемоглобина находился на верхней границе нормы, а количество эритроцитов -на нижней, что характерно для гипохромной анемии. В опытных группах насупило улучшение общего состояния, о чем свидетельствуют не только отсутствие клинических признаков, но и показатели крови, которые стабилизировались в пределах физиологической нормы, в то время как в контрольной группе отмечались небольшой лейкоцитоз и лимфоцитоз, а остальные показатели находились на верхней границе нормы, однако еще наблюдалось угнетение зрелых форм сегментоядерных нейтрофилов.

о

Контроль

1 2 Опытные группы

Рис. 1. Динамика количества гемоглобина при экспериментальном кригттоспоридиозе поросят после лечения

Опытные группы

Рис. 2 Динамика количества эритроцитов при экспериментальном кригттоспоридиозе поросят поел* лечения

Контроль 1 2

Опытны* группы

Рис. 3. Динамика количества лейкоцитов при экспериментальном крнптоспоридиозе поросят после лечения

Таким образом, результаты гематологических исследований показывают, что при криптоспоридиозе до применения препаратов происходит максимальное повышение уровня лейкоцитов, уменьшение количества эритроцитов, появляются эозинофилы, палочкоядерные, юные, лимфоциты. Эти данные согласуются с показателями других видов животных, которые приводит в своих исследованиях А. Л. Кряжев (2004).

Через 15 дней после введения цикостата и аватека у поросят обеих опытных групп было установлено достоверно более высокое (на 6,9 - 7,2 млн/мкл) по сравнению с контрольной группой содержание эритроцитов. Такая динамика сохранялась даже через 25 дней после применения препаратов. Количество лейкоцитов в крови поросят опытных групп не отличались от аналогичных показателей животных контрольных групп и было в пределах физиологической нормы.

В лейкоцитарной формуле наиболее существенные реакции были отмечены со стороны эозинофилов, количество которых у поросят, получавших цикостат и аватек в дозе 15 мг/кг массы, было достоверно более низким, чем у животных контрольной группы. В опытных группах по сравнению с контрольной среди нейтрофильных гранулоцитов отмечали тенденцию к уменьшению только палочкоядерных форм. Количество сегментоядерных нейтро-филов, лимфоцитов и моноцитов у животных всех групп достоверно не различалось.

Биохимические показатели крови поросят при криптоспоридиозе

В соответствии классификацией болезней молодняка (В. П. Урбан, 1978), новорожденные чаще заболевают в результате нарушения обмена веществ у свиноматок в период беременности. Расстройства пищеварения диагностируются на местах и в ветеринарных лабораториях как диспепсия и молозивный токсикоз. Чаще всего причинами возникновения желудочно-кишечных заболеваний являются криптоспоридии.

В последние годы во всех странах мира отмечена тенденция роста криптоспоридиозной инвазии у поросят-молочников, хотя до недавнего времени ветеринарное значение криптоспоридиоза в свиноводстве фактически игнорировалось.

Криптоспоридии вызывают тяжелое заболевание при дисбалансе иммунитета у хозяина, отягощают общее течение болезни. Проблема борьбы с такими болезнями не может быть решена без всестороннего изучения заболевания, а также иммунологических и биохимических процессов в инвазиро-ванном организме.

В настоящем исследовании из биохимических показателей крови изучались общий белок и белковые фракции, кислая и щелочная фосфатаза, АсАТ, АлАТ, ГДГ, СДГ, которым ввиду важной роли в физиологических и защитных функциях организма было уделено особое внимание при изучении криптоспоридиоза и взаимоотношений его возбудителя с организмом зараженных поросят в эксперименте до и после применения препаратов аватека и цикостата.

У опытных поросят кровь для исследований брали на 5-е сутки - в период проявления клинических симптомов криптоспоридиозной инвазии и обнаружения ооцист возбудителя в фекалиях. Исследования проводили на 8-е сутки в период наличия максимального выделения ооцист криптоспоридии с фекалиями и выраженного симптомокомплекса болезни с продолжающейся диареей, а также после лечения на 15-е и 25-е сутки.

В основе многих патологических и предпатологических состояний организма лежат нарушения функционирования ферментативных систем. Активность ферментов в сыворотке крови отражает сбалансированность скорости их синтеза внутри клеток и выхода их из клеток. Увеличение активности может быть результатом ускорения процессов синтеза, понижения скорости выведения, повышения проницаемости клеточных мембран, действия активаторов некроза клеток. Уменьшение активности вызывается повышением скорости выведения ферментов, действием ингибиторов, угнетением синтеза.

Повышение активности того или иного фермента является весьма ранним диагностическим тестом. Дополнительное определение изоферментного спектра позволяет уточнить локализацию патологического процесса, так как каждый орган имеет определенный изоферментный спектр. В последнее время большое значение имеет показатель активности аспартатаминотрансфера-зы и аланинаминотрансферазы. В крови животных активность обоих фермен-

тов очень мала по сравнению с их активностью в других тканях. Однако при патологиях, сопровождающихся деструкцией клеток, трансаминазы выходят через мембраны клеток в кровь, где их активность значительно увеличивается по сравнению с нормой (В. А. Васильева, И. Н. Борисова, Т. И. Решетникова, 2005 и др.).

Полученные нами данные по изучению активности сывороточных ферментов при экспериментальном криптоспоридиозе до и после проведения курса лечения показывают, что у поросят в обеих опытных группах после заражения отмечали клинические изменения, которые характеризовались диареей и дегидратацией. Паразитирование криптоспоридий в организме животных вызывает изменения биохимического состава сыворотки крови поросят.

Активность АсАТ и АлАТ говорит о влиянии ферментов на проницаемость мембраны клетки, что особенно остро проявляется при гастроэнтеритах, осложненных С. parvum у экспериментально зараженных животных. Известно, что гастроэнтериты являются постоянными спутниками новорожденных в первые дни жизни (В. П. Урбан, И. JI. Найманов, 1984; Н. М. Алтухов, 1993; С. М. Сулейманов, Ю. Н. Маносян, 1993; П. А. Паршин, 1999).

После проведения курса лечения кокцидиостатиками (цикостатом в первой опытной группе и аватеком - во второй) было выявлено следующее. Первые изменения появились на 5-е сутки после заражения. Они характеризовались увеличением количества АлАТ с 46,5±0,05 до 70,8±0,04 мкмоль/л-ч (Р<0,001), а АсАТ с - 31,5±0,05 до 394,3±0,04 мкмоль/л ч (Р<0,001) на 5-е сутки исследования. На 8-е сутки уровень АлАТ составил 97,0±0,03 мкмоль/л ч (Р<0,001) в первой опытной группе и 89,6±0,04 мкмоль/л ч (Р<0,001) - во второй, а АсАТ соответственно 421,5±0,04 и 472,1 ±0,03 мкмоль/л-ч (Р<0,001).

На 15-е сутки исследования после курса лечения отмечено уменьшение АлАТ до 47,3±0,05 мкмоль/л-ч. в первой опытной группе и до 46,5±0,04 мкмоль/л-ч (Р<0,001) - во второй, а АсАТ 32,5±0,03 и 41,2 ±0,03 мкмоль/л-ч (Р<0,001) соответственно.

На 25-е сутки после повторного курса лечения содержание АлАТ составило 46,5±0,04 мкмоль/л-ч, а во второй - 26,5±0,07 мкмоль/л-ч (Р<0,001), а АсАТ соответственно - 42,9±0,05 и 38,2±0,04 мкмоль/л ч (Р<0,001).

В результате проведенных исследований было установлено, что аватек и цикостат способствуют снижению АлАТ и АсАТ в сыворотке крови, что является критерием эффективности этих препаратов при криптоспоридиозе.

Характерно, что и активность дегидрогеназ во всех опытных группах после проведения курса лечения снижалась.

Наибольшее содержание дегидрогеназ отмечено на 8-е сутки, в первой опытной группе уровень СДГ достигал 683,4±0,04 мкмоль/л-ч, а во второй -до 620,2±0,04 мкмоль/л-ч (Р<0,001), а ГДГ - соответственно 574,1±0,03 и 521,4±0,03 мкмоль/л ч (Р<0,001). После курса лечения цикостатом и аватеком количество обоих ферментов снижается. Это говорит о том, что данные препараты способствуют уменьшению их активности в результате уничтожения ооцист криптоспоридий в кишечнике и нормализации биохимических про-

цессов в организме поросят.

Весь процесс развития ооцист от попадания в организм хозяина до выделения криптоспоридий нового поколения у млекопитающих занимает 4-7 дней. По результатам наших исследований, а также данным других авторов (Т. В. Бейер, 1986; Т. В. Бейер, Н. В. Сидоренко, 1991; В. А. Васильева, 1998; И. И. Бочкарев, 1996 и многих других), наибольшее выделение криптоспоридий бывает на 8-е сутки после заражения, когда происходит массовое образование тонкостенных и толстостенных ооцист. В цикле развития криптоспоридий наблюдаются две особенности, значительно повышающие репродуктивный потенциал этого возбудителя: во-первых, способность мерозоитов 1-го типа к циклическому развитию и, во-вторых, возможность аутоинвазии организма тонкостенными ооцистами. Это объясняет длительное сохранение паразита в организме животных даже при отсутствии повторных заражений.

Увеличение активности биологического окисления можно объяснить теорией Блюгера, основные положения которой сводятся к следующему.

1. Гиперферментемия есть неспецифическая реакция организма в ответ на действие раздражителей достаточной силы.

2. Гиперферментемия обусловлена выходом ферментов из клеток тканей и органов в кровяное русло в результате изменения проницаемости клеточных мембран.

При экспериментальном криптоспоридиозе, по данным В. А. Васильевой (1998), Е. В. Колмыковой (2000), Т. В. Тюриной (2002), Е. Н. Сковороди-на (2002) и многих других, отмечаются атрофия миокарда, дистрофия печени.

Проведенные нами исследования свидетельствуют, что при экспериментальном криптоспоридиозе у поросят происходят нарушения биохимических показателей сыворотки крови.

Осуществленный параллельно анализ сыворотки крови контрольных животных показал, что содержание общего белка в ней находится в пределах нормы. В опытных группах начиная с 5-го дня после заражения выявили уменьшение количества общего белка. Наименьший его уровень отмечен на 4 - 5-й день. Этот период совпадает со стадией шизогонии, когда происходит массовое образование шизонтов, что сопровождается проявлением клинических признаков: диареей, незначительным повышением температуры.

Таким образом, полученные нами результаты показывают, что белковый состав сыворотки крови при заболевании животных криптоспоридиозом изменяется. Происходит уменьшение содержания общего белка и альбуминов и увеличение количества а- и Р-глобулинов.

Основной причиной уменьшения уровня альбуминов в сыворотке крови в начале болезни, очевидно, является нарушение его синтеза в печени и усиление распада под влиянием токсичных агентов. Уменьшение количества общего белка происходит за счет гипоальбуминемии. В последующие дни нарушение синтеза белка объясняется еще и поражением клеток печени, что определяется патологоанатомически. Снижение уровня альбуминов у боль-

ных животных вызывает замедление процессов обновления белков клеточных культур организма.

Увеличение и содержания глобулиновых фракций указывает на выработку специфических иммунотел при криптоспоридиозе. Поражение клеток печени не влияет на их синтез, поскольку этот процесс локализуется в основном в лимфоидной ткани.

Возросший интерес к разработке методов раннего прогнозирования различных патологических состояний способствовал вовлечению в систему анализа многих биохимических показателей, в том числе ферментов щелочной и кислой фосфатаз (Л. Мусил, 1985; P. X. Кармолиев, 1997, 1999; В. А. Васильева, И. Н. Борисова, 2004; И. Д. Шелякин, В. Н. Кузьмичева, 2004; С. Г. Аллуханов, 2004 и др.).

Результаты наших исследований показали, что до опыта содержание щелочной фосфатазы в контрольной группе составляло 222,2±0,04 мкмоль/л-ч, а в первой опытной - 234,0±0,06 мкмоль/л-ч (Р<0,001), кислой фосфатазы - соответственно 230,6±0,03 и 228,0±0,05 мкмоль/л-ч (Р<0,001). Через 15 дней после курса лечения цикостатом в течение пяти дней содержание щелочной фосфатазы составляло в контрольной группе 196,3±0,03 мкмоль/л-ч, а в опытной - 210,6±0,05 мкмоль/л-ч (Р<0,001), кислой фосфатазы соответственно - 215,1±0,01 и 218,1 ± 0,04 мкмоль/л-ч (Р<0,001). После второго курса лечения в течение пяти дней эти показатели держались на уровне соответственно - 199,4±0,02 и 205,6±0,03 мкмоль/л-ч (Р<0,001) и 189,1 ±0,01 и 210,6 ± 0,02 мкмоль/л-ч (Р<0,001).

Таким образом, изменения морфологического и биохимического состава крови у поросят при криптоспоридиозе отражают развитие патологических и иммунных процессов и свидетельствуют о стрессовом состоянии организма, а также позволяют весьма объективно оценить действие различных факторов на организм при криптоспоридиозе.

Патоморфологические изменения в органах и тканях при криптоспоридиозе поросят

Патоморфологические изменения при криптоспоридиозе поросят изучены недостаточно и, как правило, при естественном течении болезни описываются очень кратко при более подробном анализе других признаков заболевания. Ряд работ посвящен изучению только эндогенных стадий развития криптоспоридий у различных видов животных без учета изменения окружающей ткани (Т. В. Бейер, И. В. Сидоренко, 1991; А. А. Алиев, 1993; И. И. Бочкарев, Т. А. Шибалова, 1996; R. Fayer, 1997; Л. А. Небайкина, В. А. Васильева, 1995; В. А. Васильева, 1998).

Актуальность наших исследований заключается в раскрытии патомор-фогенеза при экспериментальном криптоспоридиозе поросят в динамике болезни до и после применения аватека и цикостата.

Патоморфологические исследования контрольной группы животных

В сердце: сердечная мышца в пределах нормы, изменений со стороны сосудов нет. В печени: этих животных отмечено полнокровие сосудов, хорошо выражена система балок правильного строения; гепатоциты крупных размеров, много двуядерных; цитоплазма несколько разрыхлена, междолько-вая соединительная ткань слабо развита. В селезенке: красная и белая пульпа отчетливо различимы, рельефно выступают трабекулярный остов и пульпар-ные артерии; лимфатические узелки без заметных повреждений клеток; центральная часть состоит из крупных, более светлых лимфобластов, и они опоясаны зоной более мелких лимфоцитов; красная пульпа содержит ретикулярные клетки с их волокнами, в сети которой располагаются лимфоциты, небольшое число эозинофилов. В почках: эпителий канальцев сохранен; эпителиальные клетки крупные, высокие; почечные тельца довольно крупных размеров. В легких: ткань воздушная, малокровная, в некоторых мелких бронхах имеются лимфатические узелки, составляющие пакет из двух или трех узелков; лимфоциты представлены клетками примерно одной зрелости; альвеолоциты лежат пристеночно, явлений их набухания, слущивания не отмечено; железистый эпителий бронхов умеренно секретирует слизь, имеет единичные слущивающиеся клетки. В тонком отделе кишечника: в покровном эпителии крипт большое число бокаловидных клеток или видны их гильзы; основа слизистой содержит значительное количество лимфоцитов, среди них встречаются единичные эозинофилы; лимфатические узелки располагаются в подслизистом слое; мышечный слой слизистой без видимых изменений.

Патоморфологические исследования экспериментально инвазированных поросят

Изучение патогенного действия возбудителя С. рагуиш путем пато-морфологических исследований органов экспериментально инвазированных поросят, убитых на 8-е сутки в период массового выделения ооцист С. рагущп, показало следующие изменения. В сердце• в миокардиоцитах обнаружены явления зернистой дистрофии, интерстициальная ткань отечна, разрыхлена. В печени• круглоклеточная инфильтрация в соединительнотканной основе органа, наличие большого числа двухядерных гепатоцитов, набухание эндотелия синусоидов; среди круглоклеточного инфильтрата имеются эозинофилы и плазматические клетки; центральные вены и балочные капилляры полнокровны. В селезенке: фолликулы белой пульпы гиперплазированы, ре-

активные центры расширены, содержат значительное количество бластовид-ных клеток с выраженным митозом; красная пульпа депонирована эритроцитами, трабекулы отечны. В почках• эпителий извитых канальцев в состоянии зернистой дистрофии, встречаются участки кистообразно расширенных канальцев; в интерстиции наблюдается очаговое размножение лимфоидно-гистиоцитарных клеток; эндотелий капилляров клубочков с явлениями пролиферации, клубочки анемичны. В легких: межальвеолярные стенки местами утолщены, в некоторых ацинусах наблюдается их истончение и даже разрыв (очаговая альвеолярная эмфизема); бронхиолы сдавлены, в просвете содержат слущенные эпителиальные клетки; эпителий бронхов в отдельных участках десквамирован, в некоторых бронхиолах отмечается метаплазия однослойного мерцательного эпителия; кровеносные сосуды микроциркулярного ^ округа с явлениями дистонии и отечности периваскулярной соединительной

ткани; стенки отдельных сосудов в состоянии мукоидного набухания; периб-ронхиальная ткань гиперплазирована. В тонком отделе кишечника■ слизистая двенадцатиперстной кишки складчатая, утолщена за счет инфильтрации ^ ее лимфоидно-гистиоцитарными клетками, эозинофилами и отечности со-

единительнотканной основы ворсинок; ворсинки деформированы, апикальная их часть нередко с явлениями десквамации эпителия. В тощей кишке-слизистая с утолщенными и укороченными ворсинками, в просвете видны скопления ооцист С. рагуит, покрытые плазматическим эпителием, с примесью бокаловидных клеток с вакуолизированной цитоплазмой; просвет кишечных крипт расширен, в нем имеются следы слизи, единичные клетки спущенного эпителия, лимфоциты, гистиоциты, плазматические клетки; мышечная пластинка слизистой оболочки тонкая, местами плохо прослеживается; подслизистая основа разрыхлена, с крупными очагами скопления одно-4 типных округлых дуоденальных желез с артериальными и венозными сосу-

дами и лимфатическими щелями, мелкими клеточными инфильтратами из лимфоцитов, гистиоцитов и плазматических клеток; мышечная оболочка представлена двумя слоями - продольным и циркулярным, мышечными во-1 локнами, идущими в разных направлениях; серозная оболочка тонкая, пред-

ставлена клетками мезотелия. В подвздошной кишке: слизистая оболочка представлена полиморфными местами деформированными ворсинками, в просвете которых видны скопления ооцист; в просвете кишечных крипт следы слизи и единичные клетки слущенного эпителия; мышечная пластинка слизистой оболочки тонкая, местами разрыхлена, несколько отечна, содержит лимфоциты и гистиоциты; мышечная и серозная оболочки несколько истончены, с очагами клеточной инфильтрации.

Таким образом, в миокардиоцитах обнаружены явления зернистой дистрофии, в печени - круглоклеточная инфильтрация, в селезенке - отечность трабекулы, в почках - зернистая дистрофия, в легких - очаговая альвеолярная эмфизема, утолщение слизистой двенадцатиперстной кишки, скопление ооцист С. рагушп в просвете тощей кишки.

Патоморфологические исследования экспериментально инвазированных поросят после лечения

После курса лечения животных первой опытной группы цикостатом в дозе 15 мг/кг массы тела мы обнаружили следующее. В тонком кишечнике-криптоспоридии отсутствуют; гиперемия средней степени выраженности и диффузная отечность, особенно в основании крипт; высота ворсинок уменьшена при значительно большем их диаметре по сравнению с контролем. В печени: как и в контрольной группе, слабое расширение синусоидных сосудов, единичные неравномерные очаги инфильтрации в соединительнотканных прослойках; цитоплазма гепатоцитов выглядела просветленной; при повторном курсе лечения указанные изменения в структурах печени были менее выражены. В почках■ после введения цикостата даже при первичном курсе лечения характерных изменений, отличных от контроля, не выявлено. В легких: независимо от курса лечения определялись незначительные участки полнокровия.

У животных второй опытной группы, подвергнутых лечению аватеком в дозе 15 мг/кг массы тела, ооцисты также отсутствовали, но были признаки гиперемии и отека соединительнотканной основы слизистой оболочки кишечника, гиперплазии лимфоидных фолликулов. В печени: ткань с незначительными явлениями венозного полнокровия, дольчатость строения сохранена, междольковые перегородки хорошо прослеживаются. В почках: поверхность ровная, капсула гладкая; характерных изменений по сравнению с контролем не выявлено. В легких: ткань воздушная, в некоторых мелких бронхах имеются лимфатические узелки; характерных изменений также не выявлено.

Следовательно, изменения, обнаруживаемые после введения цикостата и аватека носили преимущественно временный функциональный характер, так как исчезал при повторном курсе лечения.

ВЫВОДЫ

1. При криптоспоридиозе поросят происходит общая интоксикация организма больного животного токсинами криптоспоридий и токсическими продуктами клеточного распада, проявляющаяся расстройством обменных процессов.

2. У поросят при криптоспоридиозе в стабильной системе крови происходят количественные изменения (отмечается снижение уровня гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитоз, лимфоцитоз).

3. В период шизогонии происходят наиболее существенные изменения, которые сводятся к следующему:

а) количество общего белка, альбуминов уменьшается, происходит увеличение количества а- и Р-глобулинов;

б) возрастает активность АлАТ и АсАТ, щелочной и кислой фосфатаз, ГДГ и СДГ, что свидетельствует об активизации обмена веществ, которая указывает на интоксикацию организма; применение кокциодистатиков приводит к восстановлению этих показателей.

4. Биохимические изменения сыворотки крови поросят при экспериментальном криптоспоридиозе обнаруживаются еще до появления клинических признаков и сохраняются на протяжении болезни, что свидетельствует о нарушении функций гипофизарно-надпочечниковой системы.

5. В патогенезе криптоспоридиоза поросят существенное значение имеют следующие факторы:

а) механическое повреждение клеток мигрирующими спорозоитами и мерозоитами;

б) общая интоксикация организма больного животного токсинами криптоспоридий и токсическими продуктами клеточного распада, проявляющаяся расстройством обменных процессов;

в) волнообразное усиление патогенности криптоспоридий, обусловленное тем, что их размножение в процессе шизогонии происходит циклично, вследствие чего их токсичность и патогенность непостоянны.

6. Проведенные исследования по изучению биохимического состава сыворотки крови поросят в ходе химиотерапии криптоспоридиоза дают теоретическое обоснование к применению кокцидиостатиков и позволяют судить об исходе и эффективности лечения.

7. Проведенные исследования дают новые данные о количественных изменениях отдельных компонентов сыворотки крови в динамике при криптоспоридиозе поросят и тем самым значительно расширяют, дополняют и уточняют существующие представления о патогенезе этого заболевания.

8. Основные гистологические изменения наблюдаются в кишечнике животных, где локализуются простейшие. На слизистой его оболочке отмечаются деформация ворсинок, единичные клетки слущенного эпителия, лимфоциты, гистиоциты и плазматические клетки. Криптоспоридии локализовались в просвете ворсинок, на верхушках и боковых поверхностях, в микроворсинках эпителиального слоя тощей и подвздошной кишок.

9. Схема применения аватека и цикостата и оптимальная доза - 15 мг/кг массы тела не вызывают выраженных патоморфологических изменений у поросят. Они носят временный функциональный характер и исчезают при повторном курсе лечения.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Практическое значение работы состоит в том, что представленные в ней экспериментальные материалы дают теоретическое обоснование использования средств химиотерапии для лечения криптоспоридиоза поросят.

Полученные результаты по изучению биохимических показателей сыворотки крови поросят при экспериментальном криптоспоридиозе до и после

лечения могут быть использованы:

1) для ранней лабораторной диагностики различных стадий криптоспо-ридиозной инвазии;

2) для оценки профилактической и терапевтической эффективности ан-тикокцидийных препаратов;

3) в научно-исследовательской работе;

4) при чтении лекций и проведении практических занятий со студентами специальности «Ветеринария».

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Васильева, В. А. Биохимические и патоморфологические изменения при криптоспоридиозе поросят / В. А. Васильева, Т. И. Решетникова, Н. С. Малахов // Материалы Сибирской Международной научно-практической конференции по проблемам ветеринарной медицины. - Новосибирск, 2004. - С. 47 - 49.

2. Васильева, В. А. Криптоспоридиоз поросят в Республике Мордовия / В. А. Васильева, Н. С. Малахов, П. А. Кулясов // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: материалы Всерос. науч.-практ. конф. -М„ 2004. - С.97 - 98.

3. Малахов Н. С. Кишечные паразитоценозы свиней в хозяйствах Республики Мордовия // Ресурсосберегающие экологически безопасные технологии получения сельскохозяйственной продукции: материалы Респуб. науч. практ. конф. - Саранск, 2005. - С. 180.

4. Васильева, В. А Изменения в сыворотке крови при криптоспоридиозе поросят / В. А. Васильева, И. Н. Борисова, Н. С. Малахов // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: материалы Всерос. науч.-практ. конф. - М., 2005. - С. 68 - 70.

5. Васильева, В. А. Сравнительная патоморфологическая оценка некоторых препаратов при криптоспоридиозе (экспериментальное исследование) / В. А. Васильева, Л А. Небайкина, Н. С. Малахов // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: материалы Всерос. науч.-практ конф. -М., 2005.-С. 70-71.

Подписано в печать 21 04.06. Объем 1,0 п. л. Тираж 100 экз. Заказ № 820.

Типография Издательства Мордовского университета 430000, г. Саранск, ул. Советская, 24

ft

1

'I

qooétv

Ȋ - 93 64

è

«

m

Актуальность темы. Проблема повышения темпов развития животноводства для более полного обеспечения населения продуктами питания - одна из важнейших в сельском хозяйстве. Однако увеличению поголовья скота препятствуют различные болезни, в том числе паразитарные.

Среди паразитарных болезней свиней наиболее широко в России распространены аскаридоз, трихоцефалез, эзофагостомоз, эймериоз и криптос-поридиоз.

Криптоспоридиоз - протозойное заболевание животных и человека, возбудителем которого служат кокцидии рода Cryptosporidium, широко распространен особенно среди телят, ягнят, поросят молочного периода. Протекает с признаками расстройства пищеварения, сопровождающегося диареей, и нередко заканчивается гибелью животных. Установлено, что криптоспори-диозом заболевают обычно животные с ослабленным иммунитетом (R. Fayer, S. Ungar, 1986; Т. В. Бейер, 1998; И. И. Бочкарев, 1996; В. А. Васильева, 2004, 2005 и др.).

К настоящему времени криптоспоридиоз у новорожденных животных зарегистрирован во всех странах мира, о чем свидетельствуют многочисленные данные (I. Pavlasek, 1981, 1982; Ю. К. Горбов, Б. С. Цыряпкин, 1984; П. И. Пашкин, 1988; С. A. Scott, Н. V. Smith et al., 1995; М. В. Якубовский, Т. Я. Мясцова, С. И. Лавор, 1998; В. А. Васильева, 1998; 2000; 2001 и др.).

Этиология болезней желудочно-кишечного тракта заслуживает серьезного внимания. Необходимо как можно раньше выявить причину возникновения диарей различного характера, определить их сущность и своевременно и квалифицированно поставить диагноз. Вместе с тем до сих пор остаются невыясненным и некоторые вопросы патогенеза криптоспоридиоза животных, а также его лечения и профилактики.

На современном уровне знаний представления только о клинических, физиологических и патологоанатомических показателях явно недостаточно, необходимо также иметь сведения о происходящих при этом в организме биохимических изменениях как до применения препаратов, так и после лечения.

Цель и задачи исследований. Целью нашей работы является сравнительная оценка применения аватека и цикостата при экспериментальном криптоспоридиозе поросят с использованием морфологических, биохимических и патоморфологических показателей. Для реализации указанной цели были поставлены следующие задачи:

- изучить морфологические изменения в организме поросят до и после применения аватека и цикостата при криптоспоридиозе;

- определить динамику содержания общего белка и белковых фракций в сыворотке крови поросят до и после применения аватека и цикостата при экспериментальном криптоспоридиозе;

- изучить активность АлАТ, АсАТ, СДГ, ГДГ, ШФ и КФ в сыворотке крови поросят до и после применения аватека и цикостата при криптоспоридиозе;

- выявить патоморфологические изменения, происходящие в организме животных при криптоспоридиозе после применения препаратов.

Научная новизна. Впервые изучено действие аватека и цикостата на С. рагушп у поросят при криптоспоридиозе. Проведен морфофункциональ-ный анализ системы паразит - хозяин. Впервые дана сравнительная пато-морфологическая оценка эффективности аватека и цикостата.

Проведенные исследования дают новые данные о значении количественных изменений биохимического состава сыворотки крови в динамике при криптоспоридиозе поросят и тем самым значительно расширяют, дополняют и уточняют существующие представления о патогенезе этого заболевания до и после проведенного курса лечения.

Практическая ценность работы. На основании изучения и анализа симптомокомплекса криптоспоридиозной инвазии поросят в динамике и анализа морфологических, биохимических и патоморфологических изменений установлены закономерности метаболических процессов.

Показана определенная эффективность химиотерапевтических средств аватека и цикостата - при криптоспоридиозе новорожденных поросят. Полученные данные по влиянию криптоспоридий на организм поросят могут быть использованы в постановке диагноза непосредственно в хозяйствах и при лабораторной диагностике в научно-исследовательских лабораториях, а также при написании учебников и учебных пособий по протозоологии.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

1. Влияние аватека и цикостата на гематологические показатели при криптоспоридиозе поросят.

2. Характеристика биохимических изменений, выявленных в сыворотке крови после курса лечения.

3. Патоморфологические изменения в органах и тканях поросят после применения аватека и цикостата.

Апробация работы. Основные положения работы доложены на ХХХП1 Огаревских чтениях Мордовского госуниверситета (Саранск, 2004); VI Сибирской Международной научно-практической конференции по проблемам ветеринарной медицины (Новосибирск, 2004); Всероссийской научно-производственной конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (Москва, 2004; 2005); X научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов (Саранск, 2005); Республиканской научно-практической конференции по инновационным технологиям (Саранск, 2005); на заседании кафедры патанатомии, инфекционных и инвазионных болезней животных Аграрного института Мордовского госуниверситета (протокол № 4 от 12 апреля 2006 г.).

Внедрение результатов исследований. Основные положения диссертационной работы отражены в 5 научных статьях, в которых изложены основные положения и выводы по изучаемым вопросам. Полученные результаты внедрены в районных ветеринарных лабораториях Республики Мордовия, а также используются при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий на кафедре патанатомии, инфекционных и инвазионных болезней животных Аграрного института Мордовского государственного университета им. Н. П. Огарева.

Объем и структура диссертации. Диссертация включает общую характеристику работы, обзор литературы, анализ результатов собственных исследований, их обсуждение, выводы, практические предложения, список использованной литературы, приложение. Она изложена на 116 страницах машинописного текста, иллюстрирована 40 рисунками (фотографиями, графиками, диаграммами). Список использованной литературы включает 181 источник, в том числе работы иностранных авторов.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ВЫВОДЫ

1. При криптоспоридиозе поросят происходит общая интоксикация организма больного животного токсинами криптоспоридий и токсическими продуктами клеточного распада, проявляющаяся расстройством обменных процессов.

2. У поросят при криптоспоридиозе в стабильной системе крови происходят количественные изменения (отмечается снижение уровня гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитоз, лимфоцитоз).

3. В период шизогонии происходят наиболее существенные изменения, которые сводятся к следующему: а) количество общего белка, альбуминов уменьшается, происходит увеличение количества а- и р-глобулинов; б) возрастает активность АлАТ и АсАТ, щелочной и кислой фосфатаз, ГДГ и СДГ, что свидетельствует об активизации обмена веществ, которая указывает на интоксикацию организма; применение кокциодистатиков приводит к восстановлению этих показателей.

4. Биохимические изменения сыворотки крови поросят при экспериментальном криптоспоридиозе обнаруживаются еще до появления клинических признаков и сохраняются на протяжении болезни, что свидетельствует о нарушении функций гипофизарно-надпочечниковой системы.

5. В патогенезе криптоспоридиоза поросят существенное значение имеют следующие факторы: а) механическое повреждение клеток мигрирующими спорозоитами и мерозоитами; б) общая интоксикация организма больного животного токсинами криптоспоридий и токсическими продуктами клеточного распада, проявляющаяся расстройством обменных процессов; в) волнообразное усиление патогенности криптоспоридий, обусловленное тем, что их размножение в процессе шизогонии происходит циклично, вследствие чего их токсичность и патогенность непостоянны.

6. Проведенные исследования по изучению биохимического состава сыворотки крови поросят в ходе химиотерапии криптоспоридиоза дают теоретическое обоснование к применению кокцидиостатиков и позволяют судить об исходе и эффективности лечения.

7. Проведенные исследования дают новые данные о количественных изменениях отдельных компонентов сыворотки крови в динамике при крип-тоспоридиозе поросят и тем самым значительно расширяют, дополняют и уточняют существующие представления о патогенезе этого заболевания.

8. Основные гистологические изменения наблюдаются в кишечнике животных, где локализуются простейшие. На слизистой его оболочке отмечаются деформация ворсинок, единичные клетки слущенного эпителия, лимфоциты, гистиоциты и плазматические клетки. Криптоспоридии локализовались в просвете ворсинок, на верхушках и боковых поверхностях, в микроворсинках эпителиального слоя тощей и подвздошной кишок.

9. Схема применения аватека и цикостата и оптимальная доза - 15 мг/кг массы тела не вызывают выраженных патоморфологических изменений у поросят. Они носят временный функциональный характер и исчезают при повторном курсе лечения.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Практическое значение работы состоит в том, что представленные в ней экспериментальные материалы дают теоретическое обоснование использования средств химиотерапии для лечения криптоспоридиоза поросят.

Полученные результаты по изучению биохимических показателей сыворотки крови поросят при экспериментальном криптоспоридиозе до и после лечения могут быть использованы:

1) для ранней лабораторной диагностики различных стадий криптоспо-ридиозной инвазии;

2) для оценки профилактической и терапевтической эффективности ан-тикокцидийных препаратов;

3) в научно-исследовательской работе;

4) при чтении лекций и проведении практических занятий со студентами специальности «Ветеринария».