Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.06) на тему:Ветеринарно-санитарная оценка продуктов убоя овец, больных казеозным лимфаденитом

На правах рукописи

ЗАБОЛОТНЫХ | Михаил Васильевич

I ВЕТЕРИНАРНО-САНИТАРНАЯ ОЦЕНКА

! ПРОДУКТОВ УБОЯ ОВЕЦ, БОЛЬНЫХ

КАЗЕОЗНЫМ ЛИМФАДЕНИТОМ

I

16.00.06 - ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза

Автореферат диссертации на соискание учёной степени * доктора биологических наук

Казань - 2003

Работа выполнена на кафедре ветеринарно-санитарной экспертизы, стандартизации и сертификации продуктов животного происхождения Федерального государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования Института ветеринарной медицины Омского государственного аграрного университета

Научные консультанты:

заслуженный деятель науки РФ и РТ, доктор биологических наук, профессор Фролов Виктор Петрович;

Официальные оппоненты:

Ведущее учреждение:

заслуженный деятель науки РФ, доктор ветеринарных наук, профессор Колычев Николай Матвеевич

доктор биологических наук, профессор Васильев Дмитрий Аркадьевич;

доктор биологических наук Конюхов Геннадий Владимирович;

заслуженный деятель науки РТ, доктор ветеринарных наук, профессор Госманов Рауис Госманович

Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины

Защита состоится «Л- » С 2003 г. в «13» часов на заседании диссертационного совета Д 220.034.01 при Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана 420074, Казань, ул. Сибирский тракт, 35.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана

Автореферат разослан » ¿£¿¿2 ср_2003 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, профессор

М.С. Ежкова

A

{OOJO

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Животноводство, представляющее одну из важнейших отраслей сельского хозяйства России, несет значительные потери в результате выбраковки и гибели скота от различных заразных болезней. В связи с этим перед ветеринарной наукой и практикой возникла необходимость разработки новых целевых комплексных программ, обеспечивающих ветеринарно-санитарное благополучие хозяйств по наиболее распространенным острым и хроническим болезням животных.

Среди таковых программ приоритетным становится изучение возбудителей инфекционных болезней общих для человека и животных, их биологической роли, циркуляции и адаптации в определенных эколого-географических зонах. Все вышеуказанное ставит на одно из первых мест вопросы непосредственно связанные с бактериологической диагностикой редко встречающихся, трансформирующихся, атипичных форм болезней и возбудителей во всем их многообразии. Среди возбудителей многочисленных заразных болезней имеются такие, биология которых еще слабо изучена, а таксономическое их положение постоянно меняется. К подобного рода болезням относятся коринебактериозы и, в частности, казеозный лимфаденит (псевдотуберкулез) овец, возбудителем которого является Corynebacterium pseudotuberculosis.

Отечественными и зарубежными исследователями накоплен определённый материал по изучению эпизоотологии, клинических проявлений, патогенезу, терапии и профилактике казеозного лимфаденита овец (В.М. Туман-ский, 1958; М. Ashfag, 1980; М. Nairn, J. Robertson, 1974; D. Burell, 1981; Y.M. Battey et al., 1986; И.Г. Трофимов, 1994). В настоящее время недостаточно сведений о характере, частоте и формах пораженг-, микробной обсе-мененности органов и тканей при казеозном лимфадените овец, что затрудняет постановку диагноза и санитарную оценку продуктов убоя.

В действующих «Правилах ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясопродуктов»'1988 года нет указаний о ветеринарно-санитарной оценке продуктов убоя при различных формах проявления казеозного лимфаденита овец. Что же касается мяса и других продуктов убоя, полученных от больных казеозным лимфаденитом овец, то вопросы, связанные с его химическим составом, товарной и санитарной характеристикой, остаются до настоящего времени недостаточно изученными. Комплексных исследований качественных показателей мяса овец при казеозном лимфадените не проводилось.

В связи с этим изучение биологии возбудителя, форм проявления болезни и разработка вопросов ветеринарно-санитарной экспертизы продуктов убоя овец при казеозном лимфадените являются актуальными задачами.

Цель и задачи исследований. Целью научных исследований является изучение основных биологических свойств С. pseudotuberculosis и комплексное научно-практическое обоснование ветеринарно-санитарной оценки мяса и мясопродуктов при казеозном лимфадените овец.

j ГОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ i БИБЛИвТЕКА

I I

i

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи: s

1. Изучить распространение казеозного лимфаденита (псевдотуберку- 1 леза) овец в Западной Сибири и определить экономические потери, свя- * занные с выбраковкой туш и органов при промышленном убое овец. 1

2. Определить частоту поражения туш и внутренних органов овец, ' больных казеозным лимфаденитом. 1

3. Изучить контаминацию мяса и субпродуктов коринебактериями и

другой сопутствующей микрофлорой. 1

4. Изучить основные биологические свойства коринебактерий, выде- 1 ляемых от овец данного региона.

5. Усовершенствовать методы индикации и идентификации С. pseudotuberculosis в лабораторных условиях.

6. Изучить устойчивость коринебактерий в процессе созревания мяса к воздействию высоких и низких температур, растворов поваренной соли и уксусной кислоты. I

7. Определить качественные показатели, химический состав и биологическую ценность баранины, полученной в результате убоя овец, больных казеозным лимфаденитом.

8. Разработать рекомендации по ветеринарно-санитарной оценке туш и органов при казеозном лимфадените овец, а также методы и режимы обезвреживания мяса.

Научная новизна. На основании комплексных исследований впервые даны научные и практические обоснования ветеринарно-санитарной оценки продуктов убоя овец, больных казеозным лимфаденитом.

Получены новые данные по распространению казеозного лимфаденита в хозяйствах Западной Сибири, частоте поражения органов и тканей овец. Определен экономический ущерб от недополучения мяса и других продуктов убоя. Усовершенствованы методы индикации и идентификации С. pseudotuberculosis в лабораторных условиях.

На значительном количестве выделенных культур коринебактерий определены основные биологические свойства R-, 1-, S-форм возбудителя казеозного лимфаденита овец и их циркуляция среди овец Западной Сибири.

Впервые в России проведено лиофильное высушивание С. pseudotuberculosis, что позволило сохранять выделенные культуры до 15 лет (срок наблюдения).

Изучены патологоанатомические и гистоморфологические изменения i

лимфатических узлов, внутренних органов и тканей больных овец. Установлены четыре формы казеозного лимфаденита: лимфаденитная, висцеральная, ге-нитальная и генерализованная.

Определена микробная обсемененность мяса овец, больных разными формами казеозного лимфаденита. Установлено влияние разных форм болезни на мясную продуктивность овец, морфологический и химический состав мяса и субпродуктов.

Определена пищевая и биологическая ценность мяса, полученного от больных овец.

Впервые изучено действие электромагнитных волн сверхвысоких частот на коринебактерии и возможность применения этого метода для обезвреживания мяса и других продуктов убоя, полученных от больных казе-озным лимфаденитом овец.

Получены три патента на изобретения: Штаммы бактерий С. pseudotuberculosis № 74R, № 209R, № 146S, используемые в качестве референтных и для изготовления диагностических препаратов при казеозном лимфадените овец (Патенты: № 2051964 от 10 января 1996 г., № 2051965 от 10 января 1996 г., № 2053295 от 27 января 1996 г.).

Теоретическая и практическая значимость. Результаты исследований позволяют расширить наши знания о биологии возбудителя казеозного лимфаденита и способности его при определённых условиях приобретать различные морфологические и фенотипические R-, 1-, S-формы.

Установлено, что возбудитель, попадая в организм восприимчивых животных, может вызывать поражения отдельных лимфатических узлов (лимфаденитная форма), внутренних органов (висцеральная форма), половых органов (генитальная форма) и вызывать генерализованный процесс (генерализованная форма).

Комплексным методом установлено, что мясо больных овец характеризуется низким качеством, а глубина изменений, происходящих в мясе больных овец, зависит от формы проявления болезни. Полученные результаты по выделению и циркуляции С. pseudotuberculosis у овец племенных и товарных хозяйств Западной Сибири занесены в эпизоотические карты Омской, Новосибирской областей и Алтайского края. Это позволяет прогнозировать эпизоотическую ситуацию по казеозному лимфадениту овец и определить меры борьбы и профилактики.

Результаты исследований явились основой для разработки методических указаний «Диагностика казеозного лимфаденита (псевдотуберкулёза) овец», включающих диагностический ключ по идентификации патогенных коринебактерий, одобренных и утверждённых СО РАСХН, протокол № 5 от 10 января 2003 г.; методических рекомендаций «Мероприятия по профилактике и ликвидации казеозного лимфаденита овец», одобренных и утверждённых СО РАСХН, протокол № 6 от 10 января 2003 г. и методических рекомендаций «Ветеринарно-санитарная оценка продуктов убоя овец, больных казеозным лимфаденитом», одобренных и утверждённых СО РАСХН, протокол № 9 от 17 февраля 2003 г.

Выделенные культуры возбудителя казеозного лимфаденита овец (С. pseudotuberculosis № 74R, № 209R, № 146S) депонированы в коллекцию микроорганизмов Всероссийского государственного научно-контрольного института ветпрепаратов (Москва).

Разработаны методы обезвреживания мяса больных казеозным лимфаденитом овец путём проварки, приготовления вареных колбас и СВЧ-нагрева, что позволяет сохранить у этих продуктов пищевую и биологическую ценность.

Определён экономический ущерб от недополучения продуктов убоя и снижения их качества при казеозном лимфадените овец.

Полученные данные использованы для внесения соответствующих изменений в существующие «Правила» по ветеринарно-санитарной оценке мяса и других продуктов убоя при казеозном лимфадените (псевдотуберкулёзе) овец.

Внедрение результатов исследования. Выделенные и изученные штаммы С. pseudotuberculosis № 70R, 74R, 209R, 146S депонированы во Всероссийском государственном научно-контрольном институте ветпре-паратов (Москва, 1991) и используются для разработки и приготовления специфических средств борьбы и профилактики при казеозном лимфо-дените овец (Патенты: № 2051964, № 2051965 от 10 января 1996 г., № 2053295 от 27 января 1996 г.).

Результаты исследований используются в хозяйствах, ветеринарных лабораториях Омской, Новосибирской областей и Алтайского края при диагностике казеозного лимфаденита овец.

Обезвреживание мяса, полученного от больных казеозным лимфаденитом овец, апробировано и внедрено на Омском мясокомбинате путём проварки и приготовления варёных колбас.

Часть результатов диссертационной работы вошла в монографию «Казеозный лимфаденит (псевдотуберкулёз) овец» Н.М. Колычев, И.Г. Трофимов, 1993 г.

Основные материалы диссертационной работы используются в учебном процессе: при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий со студентами и слушателями ФПК по эпизоотологии, микробиологии и ветеринарно-санитарной экспертизе продуктов животноводства Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана, Института ветеринарной медицины Омского государственного аграрного университета, Алтайского государственного аграрного университета, Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины.

Апробация результатов научных исследований. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на III Всесоюзной конференции по эпизоотологии (Новосибирск, 1991), научно-методической конференции ОмГАУ (Омск, 1994), научной конференции профессорско-преподавательского состава, аспирантов и студентов Института ветеринарной медицины ОмГАУ «Теоретические и практические разработки проблемных задач современной ветеринарии и животноводства» (Омск, 1996); II Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины и ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции» (Москва, 1997); учебно-методической и научно-производственной конференции ИВМ ОмГАУ (Омск 1988-1999); Международной конференции, посвящённой 80-летию МВА им. К.И. Скрябина (Москва, 1999); научно-практической конференции молодых учёных «Обеспечение ветеринарного благополучия животных с учётом технологии животноводства» (Барнаул, 2000); Международ-

I

ной научной конференции, посвящённой 70-летию образования зооинже-нерного факультета (Казань, 2000); Всероссийской научно-методической конференции по патологической анатомии животных (Омск, 2000), межрегиональной научно-практической конференции Алтайской НИВС «Актуальные проблемы диагностики, профилактики и терапии болезней животных в современных экологических условиях», (Барнаул, 2001); научных конференциях профессорско-преподавательского состава Института ветеринарной медицины ОмГАУ (Омск, 2001,2002).

Основные материалы, изложенные в диссертации, обсуждены и одобрены на заседаниях учёного совета Института ветеринарной медицины ОмГАУ (1990-2002 гг.), а также на межкафедральных совещаниях сотрудников кафедр ветеринарно-санитарной экспертизы, стандартизации и сертификации продуктов животного происхождения, микробиологии, вирусологии и иммунологии, эпизоотологии и инфекционных болезней сельскохозяйственных животных, патологической анатомии ИВМ ОмГАУ (2003) и КГАВМ им. Н.Э. Баумана (2003).

Публикации результатов исследования. Основные результаты и положения изложены в 38 научных статьях, опубликованных в центральной печати, в материалах Международных, Всероссийских, региональных конференций, в сборниках научных трудов ИВМ ОмГАУ, в методических указаниях и трех методических рекомендациях.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 489 страницах компьютерного текста и состоит из общей характеристики работы, обзора литературы, описания результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и практических предложений, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 63 таблицами, 95 рисунками, графиками, диаграммами. Список литературы включает 449 источников, в том числе 144 иностранных.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Распространение и формы проявления казеозного лимфаденита овец в хозяйствах Западной Сибири.

2. Биологические свойства циркулирующих штаммов С. pseudotuberculosis.

3. Органолептические, физико-химические и бактериологические показатели мяса овец при различных формах болезни.

4. Обезвреживание продуктов убоя больных овец и их биологическая ценность.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы исследований

Работа является разделом комплексной темы научных исследований Института ветеринарной медицины Омского государственного аграрного университета «Разработка методов, средств диагностики, профилактики и мер борьбы с коринебактериозами сельскохозяйственных животных», имеющей номер государственной регистрации 01.9.90.000 196.

Научно-производственные опыты проведены на пяти мясокомбинатах, в 41 овцеводческом хозяйстве Омской, Новосибирской областей, Алтайского края и в учебном хозяйстве ИВМ ОмГАУ «Камышловское».

Объектом исследования являлись овцы различных пород: советский и австралийский меринос, прекос, советская мясо-шерстная, алтайская тонкорунная; различных половозрастных групп. Всего было обследовано 400 994 животных.

Материалом для исследования служили измененные органы и ткани овец в количестве 2 426 проб; длиннейшая мышца спины - 245 проб; подкожный и внутренний жир - 35 проб; кровь - 123 пробы. В экспериментах были использованы 1 572 белые мыши, 86 белых крыс-самцов, 64 морские свинки, 1 665 овец породы советский меринос. Бактериологическому исследованию подвергнуто 4 617 проб.

В лабораторных опытах использовали референтные штаммы Corynebacterium pseudotuberculosis № 146S; № 74R; № 209R; № 70R; депонирование в ВГНКИ в 1991 году М.В. Заболотных, Н.М. Колычевым, И.Г. Трофимовым; Corynebacterium renale № 888; Corynebacterium egui № 1; Actinomyces pyogenes № 3 Corynebacterium pyogenes № 3), полученные из лаборатории воспроизводства сельскохозяйственных животных ВИЭВ (Москва, 1990), а также штаммы Staphylococcus aureus 209Р и Escherichia coli 147, полученные из бактериологического музея кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ИВМ ОмГАУ.

В основе исследований по распространению инфекции был использован комплексный эпизоотологический подход (И. А. Бакулов с соавт., 1982).

Течение и клиническое проявление казеозного лимфаденита овец изучали общепринятыми методами. Совместно с ветеринарными специалистами хозяйств было обследовано более 250 000 овец.

Послеубойный ветеринарно-санитарный осмотр осуществляли на убойных пунктах хозяйств и мясокомбинатах в соответствии с «Правилами ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов» (1988).

Патологоанатомические изменения органов и тканей изучали у естественно больных и искусственно инфицированных коринебактериями животных.

Материал для гистологических исследований фиксировали в 10%-ном нейтральном формалине, готовили парафиновые срезы, окрашивали их гематоксилин-эозином, по Ван-Гизону - на соединительно-тканные волокна, по Шабадашу - на гликоген, по Эйнерсону — на РНК, по Бонхе-гу - на общий белок.

Категорию упитанности туш определяли по ГОСТ 1 935-55* «Мясо баранина и козлятина в тушах». Морфологический состав туш овец определяли методом обвалки на мясокомбинате «Омский» с последующим взвешиванием мышечной, жировой и костной тканей, а также измерением величины «мышечного глазка».

Характер созревания мяса овец, больных казеозным лимфаденитом, изучали в пробах, отобранных из длиннейших мышц спины при температуре хранения +2...+4°С. Количество гликогена определяли по методу S. Seifter et al. (1950), молочной кислоты - энзиматическим методом J.B. Barker, W.H. Summerson (1941) и величину рН - потенциометриче-ским методом при помощи рН метра (рН-150).

Степень обескровливания туш определяли по Родеру, коэффициент кислотности - окисляемости мышечной ткани, содержание амино-аммиачного азота по Н. Сафронову и активность мышечного фермента пе-роксидазы по В.А. Макарову и др., 1987.

Качество мяса, полученного от больных казеозным лимфаденитом овец, и степень его пригодности для пищевых целей определяли методами, рекомендованными ГОСТ 7269-79 и 23392-78, а также «Правилами ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясопродуктов» (1988).

Способность мяса удерживать влагу определяли с помощью «пресс-метода», предложенного Грау-Гамма (1953) в модификации ВНИИМП. Влагу - методом высушивания навески при температуре +105°С до постоянной массы. Общий азот определяли методом Къельдаля, жир - по методу Сокслета. Общее количество минеральных веществ - сжиганием сухой навески в муфельной печи при температуре +800°С.

Содержание в мышечной ткани и внутренних органах макро- и микроэлементов определяли на атомно-абсорбционном спектрофотометре марки A ASIN.

Количество аминокислот в общем белке мышечной ткани овец определяли на автоматическом инфракрасном спектроанализаторе К-4500 «Аг-ротех». Белково-качественный показатель мяса устанавливали по отношению триптофана к оксипролину.

В целях изучения биологических и санитарно-гигиенических показателей подкожного и внутреннего жира его подвергали органолептической оценке, определяли химический состав, кислотное и перекисное числа (ГОСТ 8285-74).

Бактериологические исследования продуктов убоя проводили соглас-

но ГОСТ 21237-75 «Мясо. Методы бактериологического анализа» и Сан ПиН № 2.3.2.560-96.

Выделение коринебактерий осуществляли путем прямых посевов на питательные среды: сыворочно-телпуритовый агар (СТА), кровяной теллурито-вый агар (КТА), pH сред 7,2-7,4. Морфологические тинкториальные и культу-ральные свойства выделенных культур изучали общепринятыми в микробиологии методами.

Видовую идентификацию коринебактерий проводили по Берги (1980) и в соответствии с методическими указаниями, разработанными И.Г. Трофимовым, М.В. Заболотных, Н.М. Колычевым и др. (1990).

Морфологию коринебактерий изучали при помощи светового, фазово-контрастного и электронного (ЭМ-125) микроскопов.

Для выявления L-трансформации проводили посев культур на питательную среду Школьниковой в модификации Дорожковой (1984).

Гемолитические свойства культур изучали на кровяном агаре по методу Н. Сагпе (1939) и МПБ с добавлением 5%-ной взвеси эритроцитов барана.

Токсичные свойства коринебактерий изучали in vitro по методу М.М. Zaki (1965) и D.H. Burrell (1979). Патогенные и вирулентные свойства выделенных культур изучали на белых мышах, морских свинках и овцах породы советский меринос. Генотипические свойства изучали у 40 культур С. pseudotuberculosis, выделенных от овец Омской области. В качестве контроля использовали ДНК эталонных штаммов микобактерий (BCG) и бруцелл (шт. 19).

Нуклеотидный состав ДНК (мол.% ГЦ) исследуемых препаратов определяли методом тепловой денатурации J. Marmur, R. Doty, (1962). Степень гомологии нуклеотидных последовательностей ДНК изучаемых культур определяли в реакции молекулярной ДНК-ДНК гибридизации по J. DeLey, J. DeSmedt (1975). ДНК метили методом ник-трансляции (Т. Maniatis, 1982).

Устойчивость коринебактерий в продуктах убоя к действию высоких и низких температур, СВЧ-нагрева, а также в процессе созревания, изучали методом посева материала на питательные среды. Устойчивость, чувствительность коринебактерий к 3, 5, 7, 10, 14 и 20%-ным растворам натрия хлорида определяли методом серийных разведений в жидкой питательной среде. Устойчивость к действию 3-10%-ных растворов уксусной кислоты изучали методом стекающей капли.

Лиофипизацию коринебактерий проводили в сублимационном аппарате Т-50 «Чехословакия». Контроль жизнеспособности лиофильновысу-шенных коринебактерий проводили в течение 15 лет.

Обезвреживание мяса проводили путем проварки в открытых котлах в течение трёх часов и изготовления вареной колбасы «Отдельная баранья» ГОСТ 23670-79. Мясо и фарш обсеменяли коринебактериями искусственно.

Органолептические и физико-химические исследования колбас проводили согласно ГОСТ 16290-86 и норм Сан. ПиН 2.3.2.560-96.

Сверхвысокочастотный нагрев мяса проводили в бытовой микровол-

новой печи фирмы «Samsung» мощностью 800 W при частоте 2 450 МГц и равномерной напряженности поля.

Пищевую и энергетическую ценность готовых мясных продуктов определяли по И.М. Скурихину и В.А. Шатерникову (1984).

Биологическую ценность и безвредность мяса определяли в опытах на растущих крысах-самцах в течение 28 дней в соответствии с рекомендациями ВАСХНИЛ (1977).

Экономический ущерб от снижения продуктивности овец, качества продукции, браковки пораженных туш, органов и сырья определяли по методикам расчета этих показателей (И.Н. Никитин, М.Х. Шайхаманов, , В.Ф. Воскобойников, 1996).

Статистическую обработку цифровых данных проводили на ПЭВМ «Pentium 2 Celeron 266», с использованием прикладной программы Microsoft Exsel 97 и программы биометрической обработки «PGN v. 1.0», , включающей подсчет средних величин (М), стандартных ошибок (ш). Сте-

пень достоверности (р) определялась по критерию Стьюдента.

Распространение казеозного лимфаденита овец в хозяйствах Западной Сибири

При изучении эпизоотической ситуации по казеозному лимфадениту в хозяйствах Омской области было обследовано 387 417 овец, принадлежащих

31 овцеводческому хозяйству. Все хозяйства входили в состав двух природно-географических регионов области и располагались в её южной части.

При проведении ветеринарно-санитарной экспертизы овец в 1987-2001 гг. на пяти мясокомбинатах и убойных пунктах Омской области было выявлено

32 876 туш с патологическими признаками казеозного лк лфаденита, что составляло 8,48% от числа исследованных.

Наибольшее число больных казеозным лимфаденитом овец было зарегистрировано в 1989, 1993 и 1995 гг., наименьшее - в 1987, 1992, 1994, 1999, 2000 и 2001, превалентность в эти годы составляла 9,03; 10,49; 9,75 и 6,09; 4,86; 6,45; 4,81; 3,93; 3,75 (на 100 животных) соответственно (рис. 1).

В 2001 году стационарные очаги казеозного лимфаденита сохранялись в АО «Ольгинское», АО «Большевик» Полтавского района, ЗАО «Алабо-тинское», ЗАО «Руспол», ЗАО «Сибиряк» Русско-Полянского района, ЗАО .1 «Татарское» Черлакского района, ЗАО «Ерморловское» Калачинского рай-

она, АО «Любимовское» и АО «Чистовское» Оконешниковского района, ООО ПЗ «Марьяновский» Марьяновского района и ЗАО ПЗ «Москален-ский» Москаленского района. * Анализ выделенных от овец культур (табл. 1) показал, что в зонах

сильного и значительного поражения чаще циркулировали С. pseudotuberculosis в R- и 1-формах (28,6-44,3%). В зоне умеренного и слабого поражения чаще выделяли S-формы (24,1-31,5%). Все без исключения хозяйства Омской области являлись неблагополучными по казеозному лимфадениту овец. Средний показатель превалентности по товарным хозяйствам

составлял 5,54 (на 100 животных). Болезнь протекала хронически в четырех формах: висцеральной — 34,8%, лимфаденитной - 20,4, генитальной -0,9 и генерализованной - 14,2%. Чаще болезнь регистрировали у взрослых овцематок - 63,5%, баранов-производителей - 24,3 и 13,2% — у молодых овец до двух лет.

При изучении эпизоотической ситуации по казеозному лимфадениту в Новосибирской области было исследовано четыре хозяйства трех природ-но-географических районов, расположенных на юге области и граничащие с Республикой Казахстан.

0 "1-1--1---1-1--т-1-1-1-—I-1-1-1-г--1

1987 1988 1989 1990 1991 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001

годы

Рис. 1. Превалентность овец казеозным лимфаденитом в Омской области

Таблица 1

Выделение фенотипических форм коринебактерий от овец Омской области в хозяйствах с различной зоной поражения

Зона поражения Выделено культур

Я-форма Б-форма 1-форма

Количество % Количество % Количество %

Сильного 54 32,3 41 17,0 4 28,6

Значительного 74 44,3 66 27,4 6 42,8

Умеренного 21 12,6 76 31,5 2 14,3

Слабого 18 10,8 58 24,1 2 14,3

Из обследованных 2 750 овец было вьивлено 42 животных с увеличенными лимфатическими узлами, в том числе, поверхностными шейными - 63,0%, коленной складки - 37,0%. При проведении ветеринарно-санитарной экспертизы туш и органов обнаружены казеозно-некротические очаги различных размеров в поверхностных лимфатических узлах 15-ти туш, такие же очаги были в легких - 36,6%, печени - 2,4, селезенке - 1,8, мышечной ткани — 1,8, молочной железе - 0,2%. При бактериологическом исследовании патологического материала в 88% случаях были выделены культуры в R- и S-формах, которые типировали как С . pseudotuberculosis. Кроме того, в органах и мышечной ткани в 46% случаев обнаруживали 1 микрофлору из рода Salmonella, Staphylococcus, Proteus, Esherichia и суль-

фитредуцирующие клостридии.

Таким образом, казеозный лимфаденит овец регистрировался во всех ( исследуемых хозяйствах Новосибирской области и проявлялся в виде эн-

зоотий. При этом уровень превалентности составлял 1,52 на 100 животных. Заболеванию были подвержены овцы различных пород и половозрастных групп. Болезнь протекала хронически, в четырех формах: лимфаденитной, висцеральной, генитальной и генерализованной.

При изучении эпизоотической ситуации по казеозному лимфадениту в хозяйствах Алтайского края было обследовано 10 527 овец пяти пород: алтайская тонкорунная, советский меринос, советская мясо-шерстная, австралийский меринос и алтайская полутонкорунная, принадлежащих шести хозяйствам четырех природно-географических районов. При клиническом обследовании было вьивлено 106 овец с увеличенными лимфатическими узлами: поверхностными шейными - 58%, коленной складки - 42%. Пораженные лимфатические узлы были увеличены в 1,5-3 раза. Повышения местной температуры не отмечено. Выраженных особенностей в течении и проявлении казеозного лимфаденита у разных половозрастных групп не отмечено. При проведении ветеринарно-санитарной экспертизы туш и внутренних органов обнаружены казеозно-некротические очаги различных размеров в поверхностных лимфатических узлах в 13%, в легких - 40,2, в печени - 16,4, в почках - 3,1, в мышечной ткани - 2,3% случаев. При разрезе таких очагов выявлена плотная соединительно-тканная капсула, под которой находилась желто-зеленая творо-1 жистая масса без отложения солей кальция. Установлены три формы болезни:

лимфаденитная, висцеральная и генерализованная.

Бактериологические исследования патологического материала с наличием специфических очагов позволили в 73,3% случаев выделить культуры, коп торые по морфологическим и биохимическим свойствам типировали как С. pseudotuderculosis. В 37% случаев данные очаги были контаминированы стафилококками, кишечной палочкой и грибами вида Asperqillus fiimiqatus. В АО «Степное» и АО «Шаталовское», расположенных в юго-западной степной части Алтайского края, у овец пород советский и австралийский меринос чаще выделяли R-формы С. pseudotuberculosis. В восточной предгорной части у

овец пород алтайская тонкорунная и советская мясошерстная, принадлежащим трем хозяйствам, выделяли культуры в 8-формах, в то же время у овец породы алтайская полутонкорунная принадлежащим СВХ «Тумановский» чаще выделяли Я-формы возбудителя. Казеозный лимфаденит овец регистрировали во всех исследуемых хозяйствах Алтайского края. При этом превалентность овец составляла 1,02 (на 100 животных). Болезнь распространена как в юго-западной степной, так и восточной предгорной зонах Алтайского края. Заболеванию подвержены овцы различных пород и половозрастных групп. Болезнь протекала хронически, в трёх формах: лимфаденитной (24,8%), висцеральной (50,0) и генерализованной (25,5%).

Таким образом, проведённые исследования показали, что казеозный лимфаденит регестрируется во всех исследуемых овцеводческих хозяйствах Западной Сибири. Болеют овцы различных пород более старших возрастов. Болезнь встречается в виде энзоотий, поражая от 1,0 до 24,0% поголовья овец. Протекает хронически в четырёх формах: лимфаденитной (32,5%), висцеральной (35,4), генерализированной (20,6) и генитальной (1,9%). Казеозный лимфаденит чаще регистрируется там, где большая плотность поголовья овец и слабый санитарно-гигиенический контроль (табл. 2).

Таблица 2

Формы проявления казеозного лимфаденита овец в Западной Сибири

Формы проявления, %

Регион лимфаде- висце- гениталь- генерали-

нитная ральная ная зованная

Омская область 20,4 34,8 0,9 14,2

Новосибирская область 52,4 21,4 2,4 23,8

Алтайский край 24,8 50,0 2,4 23,8

В среднем по региону 32,5 35,4 1.9 20,6

Характеристика С. pseudotuberculosis, выделенных от овец, больных казеозным лимфаденитом Морфологические свойства. При бактериологическом исследовании патматериала было выделено 533 культуры С. pseudotuberculosis. Коринебак-терии представляли собой полиморфные неподвижные, не образующие спор и капсул палочки или овоиды, которые часто имели на концах клеток булавовидные утолщения и содержали неравномерно окрашивающиеся гранулы во-лютина. Чаще всего они располагались кучками, реже в виде китайских иероглифов, а иногда одиночно. Бактериальные клетки имели следующие размеры длины и ширины: палочковидные - 2,54-3,15 и 0,92-0,94 мкм, овоидные - 0,52-0,68 и 0,40-0,60, кокковые - 0,70-0,86 и 0,70-0,90 мкм соответственно.

Электронно-микроскопические исследования С. pseudotuberculosis показали, что клетки! имели округлую, овальную или слегка вытянутую формы.

Микрокапсула была представлена тонким, осмиофильным мелкозернистым слоем, отделенным от клеточной стенки осмиофобным слоем шириной около 16,6 им. В большинстве клеток выявлена пятислойная структура клеточной стенки 15-20 нм и трехслойная структура цитоплазматической мембраны. I Цитоплазма клеток представлена мелко-гранулярным компонентом с

зонами повышенной плотности размером 20-40 нм (рибосомы, полисомы). В различных частях клеток обнаруживали значительное количество внутрици-топлазматических мембранных структур. Нуклеоид был представлен небольшой, достаточно дифференцированной осмиофобной зоной, в которой располагались тяжи, образованные слипшимися нитями ДНК. На электроно-9 граммах коринебактерий выявлялись достаточно крупные и многочисленные

включения - гранулы волютина, представленные множеством зёрен различной величины 0,18-0,20 мкм. Они имели разрыхленную центральную часть и плотную осмиофильную периферию. Такие гранулы располагались вблизи от 0 нуклеоида или на концах клеток. Деление коринебактерий происходило пу-

тем образования перетяжки с последующим ее расщеплением.

Кроме типичных клеточных форм, находили клетки с деструктивными изменениями клеточных стенок или совсем ее лишенных (L-формы). Редко встречались единичные лизированные светлые клетки.

Тинкториальные свойства. При окраске простым методом микроорганизмы хорошо воспринимали фуксин Циля, генцианвиолет, бриллиантовый зеленый, метиловый синий, но окрашивались неравномерно, причем палочковидные формы окрашивались биполярно. Все бактерии позитивно окрашивались по методу Грама. Палочковидные формы и, реже, овоидные окрашивались интенсивнее по полюсам.

При окраске по Нейссеру у всех культур выявляли метахроматические зерна (волютин), которые окрашивались в сине-фиолетовый цвет. В ово-идных формах бактерий волютин чаще занимал центральное положение.

При окраске по методу Циль-Нильсена кислого- и спиртоустойчивых коринобактерий выявлено не было.

Культуральные свойства. При росте на твёрдых питательных средах при температуре +37°С (рН 7,0-7,4) С. pseudotuberculosis образовывали колонии, характерные для R-, S- и I-форм. На мясо-пептонном агаре рост коринебактерий в 75% случаев появлялся на первые сутки. Типичным для 1 всех культур являлось образование мелких росинчатых колоний. У куль-

тур R-форм эти колонии имели желто-серый цвет и матовую поверхность, у культур S-форм - серо-белый цвет и блестящую поверхность, у культур, С отнесенных к переходным I-формам, колонии имели характеристики обеих

форм. На вторые и третьи сутки культивирования размеры их увеличивались до 1,5-3,0 мм в диаметре и появлялись четко очерченные конфигурации. У колоний R-форм края были неравномерно зазубрены, центр слегка приподнят в виде купола, периферия радиально исчерчена, консистенция сухая, структура крупнозернистая. Эти фенотипические признаки

(R-формы) были характерными для 201 культуры (37,7%).

Колонии S-форм С. pseudotuberculosis на вторые сутки культивирования достигали размеров от 1 до 4 мм в диаметре. Цвет их незначительно менялся от серо-белого к желтоватому. Поверхность колоний была блестящая, реже - матовая, куполообразная. Консистенция пастообразная, края ровные. Эти признаки были типичными для 301 культуры (56,4%).

Колонии I-форм имели характеристики обеих форм. Однако они были меньших размеров, от 1 до 2 мм. Такие формы колоний были характерными для 31 культуры (5,8%).

На МПБ рост культур появлялся через 24-30 часов. R-формы С. pseudotuberculosis на поверхности бульона образовывали нежную, ломкую, полупрозрачную серо-белую пленку и скудный, в виде манной крупы, осадок. 1

Помутнения среды не отмечалось. При встряхивании пробирки пленка ломалась и быстро оседала на дно, при этом бульон оставался прозрачным.

Культуры, отнесенные к S-формам, при росте на МПБ в 93,1% слу- ,

чаев образовывали нежную, слабовыраженную серовато-белую пленку на поверхности среды и осадок на дне в виде комочка ваты в первые сутки культивирования. При этом среда была мутной. При встряхивании осадок и пленка легко разбивались и медленно оседали на дно пробирки.

I-форма на поверхности мясо-пептонного бульона образовывала хорошо развитую пленку, скудный зернистый осадок и незначительное помутнение среды.

Все культуры разных диссоциативных форм одинаково хорошо росли на твердых средах с добавлением 10%-ной дефибринированной крови крупного рогатого скота, лошадей и овец.

На 10%-ном кровяном агаре через 24 часа наблюдали появление колоний серо-желтого цвета также R-, S-, I-формах. На месте появления колоний размерами 1-1,5 мм обнаруживали слабо заметную зону р-гемолиза (83,6%).

На кровяном теллуритовом и сывороточном теллуритовом агаре (КТА, СТА и КТА с канамицином) через 24-48 часов обнаруживали колонии черного цвета в R-S-1-формах.

Имели место и такие культуры коринебактерий, которые не росли на обычных питательных средах и были требовательны к постоянной температуре (+37°С), отсутствию света и атмосферного воздуха. Дальнейшее изучение этих культур позволило отнести их к особой группе покоящихся, не культивирующихся на обычных питательных средах.

При росте на среде Школьниковой у 28 культур коринебактерий (77,7%) была выявлена L-трансформация в молодых, развивающихся и в стареющих культурах.

Биохимические свойства. Выделенные культуры С. pseudotuberculosis I

R-, S-, I-форм на 2-4 сутки ферментировали с образованием кислоты без газа глюкозу (93,2%), галактозу (69,5), мальтозу (71,7), сахарозу (73,2%). Не ферментировали арабинозу, рамнозу и дульциг, не вызывали гидролиз крахмала, не восстанавливали лакмусовое молоко. Культуры R-формы, в отличие от S-, не ферментировали рафинозу. Сахаролитическая активность

культур S-форм была разнообразна. Так, 97,2% культур ферментировали глюкозу, 83,7%-галактозу, 71,3-мальтозу, 76,9-сахарозу,45,5%-маннит.

Протеолитические свойства культур R-, S-, I-форм были слабо выражены. Все исследованные культуры не образовывали индола, редко (5,1%) образовывали сероводород и свертывали молоко (5,6%), иногда, на 5-6 сутки, вызывали гидролиз желатина (4,0%). Образование катапазы отмечали у всех культур. Образование уреазы наблюдали только у R-форм в 4,4% случаев. I- и S-формы были уреазоотрицательными.

Культуры обладали слабыми редуцирующими свойствами. Не восстанавливали нитраты и лакмусовое молоко. ' Токсигенные свойства. Наиболее выраженными токсигенными свой-

ствами обладали S-формы С. pseudotuberculosis. R- и I-формы были менее токсигенны. Понижение температуры культивирования на МПА до 2-4°С I приводило к повышению токсикообразования всех форм культур. Зараже-

ние белых мышей фильтратом культур приводило в 65% случаев к их гибели на 3-8-е сутки. При патологоанатомическом вскрытии у мышей обнаруживали отёки, кровоизлияния в брюшной и грудной полостях.

Вирулентные свойства. Расчётным путём были установлены заражающие и 50%-ные летальные дозы (LD50) для мышей при заражении их культурами С. pseudotuberculosis. Для культур I-формы LD50 составляла 112 тыс.м.т., для R-формы - 1,0 млн. м.т., и S-формы — 21,8 млн. м.т. Культуры коринебактерий в 1-форме были более вирулентными, чем культуры в R и S-формах. При вскрытии погибших мышей находили кровоизлияния в органах грудной и брюшной полостей и экссудат. На месте инъекции у шести мышей обнаруживали гнойные очаги размером с горошину, при бактериологическом исследовании были выделены ретрокультуры.

Патогенные свойства. Мыши, заражённые взвесью агаровых культур коринебактерий S-, R-, 1-форм подкожно в дозе 0,3х106 м.т. (по ОСМ), погибали на 3-15-е сутки. Культуры R-формы вызывали гибель животных в течение 7,63±0,46 суток, I-формы - 7,17 ±0,63, а S-формы - 9,33±0,93 суток. Патологические изменения выявлены у 87,6% исследуемых мышей. При этом в 100% случаев изменения вызывали I-форма; в 97,3% - R- и в 93,7% - S-формы коринебактерий. При вскрытии обнаруживали серозно-| геморрагическое воспаление в органах грудной и брюшной полостей. На

месте введения культуры находили милиарные узелки. Исходные культуры были выделены от 88,75% животных.

При внутрибрюшинном заражении морских свинок в дозе 0,5x10б м.т. культурами различных форм гибель наступала в течение 5-20 суток. Характерные патологические изменения выявлены у 88,8% исследуемых животных. При этом в 100% случаев изменения вызывали R- и I-формы и в 91,6%- S-формы коринебактерий. Для морских свинок более патогенной является R-форма микроба, I- и S-формы (при р<0,001) - менее патогенны. Так, культуры R-формы вызывали гибель морских свинок на 9,7±1,39 суток, I- на

14,6 + 1,8 и S-формы - на 17,0+1,84 сутки. У погибших животных обнаруживали сильное истощение, при вскрытии - гнойно-фибринозный перитонит, гнойные очаги в печени, в брыжеечных лимфатических узлах на серозной оболочке брюшины, в паренхиме селезёнки, почках и семенниках. Из пораженных паренхиматозных органов выделяли исходную культуру.

При патологоанатомическом исследовании 15 экспериментально зараженных овец породы советский меринос были выявлены гнойно-некротические очаги в различных органах и тканях у животных опытных групп. На разрезе очаги имели хорошо выраженную соединительно-тканную капсулу, в которой были заключёны зеленовато-жёлтые, смегганоподобные гнойно-некротические массы без запаха. При исследовании поражённых лим- '

фатических узлов и органов находили множество гранулём в начальной стадии их развития. При патологоанатомическом исследовании контрольных жи- , вотных изменения не найдены. При бактериологическом исследовании патологического материала выделены исходные культуры от всех больных животных. От контрольных животных коринебактерий не вьщеляли.

Генотипическая характеристика коринебактерий. Исследованию подвергнуто 40 культур С. pseudotuberculosis в R-, S- и I-формах. Концентрация ДНК их варьировала в широких пределах от 140 до 7 ООО мкг/мл. Средний показатель ГЦ ДНК 36 культур коринебактерий составил 54,2±1,9 мол.% при минимальном значении 41,4, а максимальном - 76,7 мол.% ГЦ. По содержанию ГЦ штаммы были разбиты на три группы: для первой группы (R-формы) - 55,68+2,58 мол.%; для второй (S-формы) - 53,10+3,42; для третьей (1-формы) - 50,72±5Д7 мол.%. По критерию Стьюдента не установлено достоверных различий данных этих групп по нуклеотидному составу.

Результаты реакции ДНК-ДНК гибридизации коринебактерий показали, что тесную генетическую группу с репером 70R образуют два штамма: 70S и 371 с уровнем гомологии 94-100%. Гомология нуклеотидных последовательностей ДНК, штамма 70R и его диссоцианта 70S, с большой степенью свидетельствовали о их принадлежности к одному и тому же виду микроба. Последующие реакции с репером штамма 13R позволили выделить большую группу штаммов с высоким уровнем схожести нуклеотидных последовательностей. В группу с уровнем гомологии 70-100% входили штаммы 13, 69,209,220,404. Штаммы 15,61,74,213,214, 226, 281,290 j и 9 проявляли гомологичность в 30-60%. С репером штамма 214 наиболее генетически связанными были штаммы 213, 74, 146, 61 и 404 с уровнем гомологии 70-100%. Штаммы 13, 15, 209, 220, 226, 281, 290, 9 и 69 проявляли схожесть нуклеотидных последовательностей ДНК порядка 30-60%. ' На основании проведённых исследований гомологий нуклеотидных последовательностей ДНК коринебактерий, выделенных от больных казеозным лимфаденитом овец, было установлено наличие трёх взаимосвязанных на уровне 10-20% групп: к! первой отнесены штаммы 70R- и 37I-; ко второй - 13R-, 69S-, 209R-, 220R- и 4|04R-; к третьей - 214R-, 213R-, 74R-, 146S- и 61R-.

I 18

Результаты исследования ГЦ и ДНК-ДНК гибридизации в полной мере подтверждают генетическое родство R-, S-, I-форм коринебактерий, циркулирующих в Западной Сибири.

Усовершенствование методов длительного хранения культур С. pseudotuberculosis

Для сохранения основных биологических свойств возбудителя казеозного лимфаденита овец был апробирован метод лиофильного высушивания штаммов С. pseudotuberculosis 70,74 - R-формы, 50 - S-формы и 37 - 1-формы. I Результаты контроля жизнеспособности лиофильно-высушенных ко-

ринебактерий на протяжении 15 лет (срок наблюдения) показали, что все штаммы сохраняли способность роста на питательных средах. По мере увеличения сроков хранения количество колониеобразующих единиц (КОЕ) уменьшалось. При температуре +4...+6°С коринебактерии сохранялись лучше по сравнению с таковыми, хранившимися при комнатных температурах (+18...+20°С) на протяжении всего срока наблюдения.

Защитные среды имели определяющее значение в сохранении жизнеспособности коринебактерий. В сывороточно-глюкозной и желатино-сахарозной защитных средах коринебактерии лучше сохранялись на протяжении всего срока хранения. При хранении коринебактерий в течение 15 лет они теряли вирулентность и снижали гемолитическую, гли-колитическую и каталазную активности.

Ветеринарно-санитарная экспертиза и оценка качества продуктов убоя овец, больных казеозным лимфаденитом

Частота поражения и патоморфологические изменения в тушах и органах. Характерным и постоянным признаком поражения служили типичные для всех органов и тканей казеозно-некротические очаги. Размеры их варьировали от просяного зерна до боба - мелкие, до голубиного яйца -средние и до кулака взрослого человека - крупные. Обнаруженные патологические очаги классифицировались нами как гранулёмы со специфиче-I ским проявлением воспалительной реакции с преимущественным хрони-

ческим течением. При длительном развитии гранулём они достигали ' больших размеров. Гранулёмы чаще локализовались в лёгких - 46,2%, пе-

чени - 13,2%, лимфатических узлах: средостенных - 14,7%, бронхиальных t - 10,7, поверхностно-шейных - 8,5 и коленной складки - 5,2%. В меньшей

степени они встречались в селезёнке, сердце, почках, половых органах и мышечной ткани - 0,2-0,9%. Все гранулёмы макро- и микроскопически имели одинаковую структуру. Центральная часть бесструктурная, иногда сметаноподобная или казеозная, в некротических массах содержалось большое количество белка и малое количество воды. Цвет гранулем варьи-

ровал от серовато-белого до желтовато-зелёного. Очаги снаружи были окружены плотной серо-белой соединительно-тканной капсулой. Некротические массы легко отделялись от неё. В последующем происходило их гнойное расплавление. Вокруг участков некроза имелась демаркационная линия, ограниченная соединительно-тканной капсулой умеренной толщины, внутри которой находились нейтрофилы.

Иногда по периферии гранулём, за пределами их капсулы, регистрировали гиперемию мелких кровеносных сосудов и кровоизлияния.

Созревание мяса, полученного от больных овец. В мясе больных овец в первые часы его созревания содержание гликогена было достоверно меньшим и соответствовало тяжести патологических изменений в органах и тка- 1 нях. Так, спустя три часа после убоя в мясе здоровых овец количество глико- ) гена составляло 573,53 мг%. В то же время в мясе больных овец его было меньше и составляло при лимфаденитной форме - 372,90 мг%, при висце- I ральной - 429,24 и генерализованной форме поражения - 375,08 мг%. Через 24 часа после убоя количество гликогена в мясе от контрольной груп- | пы животных уменьшилось на 59,73%, в то же время в мясе от овец опыт- 1 ных групп с лимфаденитной на 31,12, с висцеральной на 35,68 и с генерализованной формой поражения на 35,84% (Р< 0,01-0,001). I

В последующие часы в опытных группах гликогенолиз протекал медленее. Так, в контрольной группе спустя 72 часа гликогена оставалось I

44,40 мг% (7,7%). В мясе, полученном от овец с лимфаденитной формой -100,07 мг% (26,8%), в мясе от больных овец с висцеральной формой - 1

92,46 (21,5) и в мясе от овец с генерализованной формой поражения - 1

85,88 мг% (22,9%), (Р< 0,001). ,

Скорость образования молочной кислоты и ее количество было прямо пропорционально количеству гликогена на тот же период исследования. Так, через 72 часа её содержание в мясе от овец больных лимфаденитной формой было достоверно меньше на 29,0%, с висцеральной формой - 6,8 и генерализованной на 33,7% (табл. 3). Незначительное накопление молочной кислоты в мясе, явилось причиной снижения показателя концентрации | водородных ионов на протяжении всего срока созревания. 1

Таким образом, проведенные исследования дают основания полагать, что в мясе больных овец гликогенолиз протекает медленнее. (

I

I

Динамика гликогенолиза мяса больных овец

Таблица 3

м

Сроки исследования, час Группы опыта Показатели гликогенолиза

гликоген (мг%) молочная кислота (ммоль/л) рН

3 контроль 573,53±5,57 0,026±0,002 6,69±0,02

0-1 372,90±10,43*** 0,030±0,004 6,66+0,02

0-2 429,24+6,53*** 0,076±0,004*** 6,74±0,01

О-З 375,08±4,68*** 0,073±0,002*** 6,83±0,02**

12 контроль 467,08±5,64 0,076±0,003 6,21±0,02

0-1 298,50±14,04*** 0,058±0,002*** 6,27±0,02

0-2 355,54±12,95*** 0,123±0,007*** 6,58±0,03***

0-3 295,05+8,57*** 0,090±0,001 *** 6,68±0,01 ***

24 контроль 342,58+12,85 0,144±0,004 5,91±0,02

0-1 256,87±8,70*** 0,089±0,002*** 6,11±0,02***

0-2 276,10+10,78** 0,174±0,007*** 6,38±0,03***

0-3 240,63±6,72*** 0,119±0,003*** 6,49±0,01 ***

48 контроль 134,00± 12,96 0,290±0,003 5,71+0,01

0-1 152,42±6,53 0,177±0,005*** 5,88±0,03**

0-2 168,^ +±5,81* 0,267±0,008* 6,18±0,02***

0-3 139,72+6,77 0,194±0,005*** 6,32±0,01 ***

72 контроль 44,40±3,15 0,369±0,005 5,6б±0,02

0-1 100,07±4,18*** 0,262±0,007*** 5,77±0,02**

0-2 92,46±4,04*** 0,344±0,006** 6,21±0,02***

0-3 85,88±5,89*** 0,245±0,004*** 6,32±0,01 ***

Примечание. *- Р < 0,05; **- Р < 0,01; *** -Р < 0,001.

Мясная продуктивность и морфологический состав туш овец, больных казеозным лимфаденитом. Результаты контрольных убоев больных овец показали, что они имеют, по сравнению со здоровыми, меньшую живую массу - при лимфаденитной форме на 9,6%; при висцеральной - 8,6 и генерализованной на 38,3%; меньшую массу парной туши соответственно на 14,2%; 13,8 и 45,0%, а также убойного выхода на 2,3%, 2,6 и 5,1% соответственно. При лимфаденитной форме поражения категория упитанности туш фактически не отличалась от таковых здоровых животных. В то же время при висцеральной и генерализованной формах они имели отличия. Так, 50,0 и 68,3% туш имели соответственно II категорию упитанности, а 16,6 и 33,3% - тощую.

При обвалке туш от больных лимфаденитной формой овец было получено меньше мышечной ткани на 2,37 кг (13,7%), при висцеральной -3,70 (21,3) и генерализованной на 7,76 кг (70,2%) по сравнению с таковой здоровых животных. У овец с лимфаденитной формой внутреннего жира было меньше на 0,81 кг (22,3%); с висцеральной формой — 1,20 (44,0) и генерализованной на 2,26 кг (82,8%) по сравнению с количеством такового контрольных животных. У истощенных животных внутренний жир в жировых депо имел признаки жировой дистрофии.

О низкой ценности туш больных животных свидетельствуют данные увеличения доли сухожилий, костей и хрящей (табл. 4). Снижение росто-весовых показателей больных овец и их туш приводило, в конечном итоге, к недополучению мясной продукции и экономическим убыткам. Ущерб от недополучения мяса и субпродуктов на одно заболевшее животное составил 117,0 рублей в год.

Таблица 4

Показатели мясной продуктивности овец больных казеозным лимфаденитом

Показатель Здоровые животные, п = 6 Больные животные, группы, п = 6

контроль 0-1 0-Н 0-1И

Живая масса, кг 43,59+1,75 39,40±1,03 39,84±1,28** 26,89+1,21**

Масса парной туши, кг 20,16+0,82 17,32±0,45* 17,37±0,56* 11,05±0,36**

Убойный выход, % 46,23 43,96 43,59 41,09

Категория упитанности по ГОСТ 1935-55* 1-5 Н-1 тощая-0 1-4 И-2 тощая-0 1-2 11-3 тощая-1 1-0 П-4 ющая-2

Площадь «мышечного глазка» 13,6+0,24 13,4+0,23 12,8±0,16* 10,2+0,13**

Примечание. *- Р < 0,05; ** - Р < 0,001.

Химический состав, пищевая и биологическая ценность продуктов убоя овец при казеозном лимфадените. При выраженных патологических изменениях в органах и тканях овец и соответствующих им формах казеозного лимфаденита снижалось количество сухих веществ в мышечной ткани. Так, при лимфаденигной форме было меньше белка на 11,9%, при висцеральной -14,2 и генерализованной на 19,3%, чем в мясе здоровых животных.

Значительные и достоверные различия были по содержанию жира в мясе больных овец при висцеральной и генерализованной формах, где его количество было соответственно меньше в 2,5 и 5,1 раза (р<0,001), чем в мясе здоровых животных. Мясо, полученное от овец при висцеральной и генерализованной формах поражения, имело меньшую энергетическую ценность соответственно на 17,09 и 40,38% (р<0,01-0,05) в сравнении с мясом контрольных животных.. Мясо от овец с лимфаденитной формой болезни по энергетической ценности не отличалось от контроля (табл. 5).

Таблица 5

Химический состав и энергетическая ценность мяса овец, больных казеозным лимфаденитом, %

Форма болезни Показатель

Вода Белок Жир Минеральные вещества Энергетическая ценность, кДж/100г

Лимфаде-нитная 74,89 ± 1,08* 16,85 + 0,68 9,03 ± 1,21 0,85 ± 0,05 780,27

Висцеральная 75,04 ± 1,01* 16,41 ± 0,29* 4,60 ± 0,63*** 0,88 ± 0,03 640,57

Генерализованная 76,63 ± 0,97** 15,43 ± 0,70** 2,30 ± 0,09*** 0,91 ± 0,03 464,01

Контроль 69,73 ± 1,57 19,12 ± 0,69 11,64 ± 0,46 0,97 + 0,04 772,62

__* ?** *_ " ^ _> *"___

Примечание. *- Р < 0,05; **- Р < 0,01; *** - Р < 0,001

Аналогичное снижение пищевой и энергетической ценности было и в субпродуктах, полученных от больных овец.

Для более полной оценки качества мяса в науке и практике используют биологические методы, дающие объективную оценку продуктам. Установлено, что в мышечной ткани больных овец суммарное количество аминокислот белка, в том числе незаменимых, было ниже, чем в белке мяса, полученного от здоровых животных. Количество аминокислот в белке было прямо пропорционально тяжести и форме болезни. При лимфаденитной форме их суммарное количество было меньше на 4,9%, при висцеральной - 6,5 и при генерализованной на 7,4%.

В белках мышечной ткани овец с лимфаденитной формой поражения, в отличие от белка здоровых животных, было достоверно меньше (р<0,05-

0,001) незаменимых аминокислот: валина - на 11,0%, изолейцина — 34,7, триптофана - 23,25 и фенилаланина на 13,2%. Из заменимых аминокислот было больше (р<0,05) аланина на 4,25% и меньше (р<0,001) глицина - на 12,7%. При висцеральной форме поражения количество незаменимых аминокислот в белках достоверно уменьшалось за счёт: валииа — на 16,4%, изолейцина - 47,9, лейцина - 19,3, лизина - 11,2, триптофана - 30,8 и фе-нинапанина на 18,6%. В то же время из заменимых аминокислот было достоверно больше аланина на 8,6%, глутаминовой кислоты - 6,3, пролина -9,2, серина- 2,3 и цистина на 5,2, но меньше глицина - на 17,2%.

При генерализованной форме казеозного лимфаденита овец в белках мышечной ткани было отмечено достоверное снижение таких незамени- (

мых аминокислот, как: валина на 18,6%, изолейцина - 53,65, лейцина -26,4, лизина - 14,5, триптофана - 35,8 и фенилаланина на 26,2%. При этом содержание заменимых аминокислот в таком мясе было значительно выше, за счёт аланина на 17,0, глутаминовой кислоты - 6,7, пролина - 24,8, < тирозина - 24,3 и цистина на 6,0 %. В то же время содержание глицина и серина было меньше на 21,6 и 5,5% соответственно.

Суммарное количество заменимых аминокислот в белках мяса больных овец имело тенденцию к увеличению. Так, во II и III группах их было достоверно больше на 361,60 мг/100 г (3,2%) и 580,79 мг/100 г (5,1%) соответственно. Достоверных отличий I опытной группы от контрольной не было.

Белково-качественный показатель для мяса больных овец был ниже, чем для мяса здоровых: на 26,6% - при лимфаденитной, на 34,6 - при висцеральной и на 36,8% - при генерализованной формах поражения.

Расчеты аминокислотных скоров по идеальному белку выявили, что лимитирующей аминокислотой для мяса больных казеозным лимфаденитом овец, независимо от форм поражения, является фенилаланин; при генерализованной форме поражения - валин, лейцин, триптофан и фенилаланин (табл. 6).

Таблица 6

Скор незаменимых аминокислот мяса овец при казеозном лимфадените, %

Группа опыта Аминокислоты

валин изоле йцин лейцин лизин мети онин треонин триптофан фенилаланин

Контроль 117,6 165,5 125,1 171,2 142,8 147,1 154,5 119,4

0-1 105,7 173,4 108,4 168,4 142,0 145,2 118,6 99,3

0-П 100,3 138,2 101,0 137,3 140,2 140,7 106,9 93,1

0-Ш 95,7 125,8 92,1 146,4 133,0 135,5 99,3 84,5

Исследования количества минеральных веществ показали, что в мясе и органах больных овец содержится меньше кальция на 25,0-85,7%; фосфора - 22,7-32,7; калия на 35,1-52,2%.

Изучение содержания в органах и тканях микроэлементов даёт возможность дополнить сведения о биологической ценности мяса. Во внутренних органах и мышечной ткани, больных казеозным лимфаденитом овец, уровень железа, меди, цинка и марганца был снижен на 25,0-33%. Более выраженные и достоверные изменения в содержании микроэлементов были отмечены при висцеральной и генерализованой формах поражения.

Органолептические и физико-химические показатели мяса больных овец. Туши от овец с висцеральной и генерализованной формами поражения были низкой упитанности, плохо обескровлены, в 75,0% случаев имели тёмную окраску и слабо выраженную корочку подсыхания. При пробе варкой I мясо больных овец не имело посторонних запахов и в то же время бульон в

26,3% случаев приобретал полупрозрачный и мутноватый вид.

Физико-химические исследования показали, что глубина и степень изменений свойств мяса зависит от выраженности патологического про, цесса в органах и тканях овец. Мясо овец с лимфаденитной формой поражения не имело достоверных отличий от мяса здоровых животных. При висцеральной и генерализованной формах поражения в 41,6% случаев степень обескровливания (по Родеру) была плохой. Интенсивность окраски мышечной ткани (по миоглобину) была меньше соответственно на 9,13 и 19,64 ед. экстракции, что указывало на снижение интенсивности окислительных процессов в мышечной ткани больных овец. Водосвязывающая способность была снижена на 7,9% в мясе, полученном от больных животных с висцеральной формой поражения. [

Содержание летучих жирных кислот и амино-аммиачного азота в мышечной ткани больных овец этой группы оставались в пределах допустимых норм доброкачественного мяса. Показатель рН мяса по истечении 72 часов созревания соответствовал аналогичному показателю мяса больных животных и составлял при висцеральной 6,30 и генерализованной форме поражения 6,33. В то время как при лимфаденитной он находился в пределах допустимой нормы и соответствовал мясу контрольных животных. Продукты первичного распада белков (полипептиды, пептоны) в мясе больных овец были выявлены в 33,3% случаев. Пероксидаза в мышечной ткани больных овец при висцеральной форме была положительной в 16,7% и отрицательной в 50,0% случаев. Коэффициент кислотности-окисляемости мяса больных животных был ниже кон-| трольного на 0,11; 0,49 и 0,53 ед., соответственно при лимфаденитной, висце-

| ральной и генерализованной формах, что также определяло принадлежность

его к мясу, полученному от больных животных.

При хранении в охлаждённом виде при +2...+4°С и относительной влажности воздуха 85% баранина в тушах сохраняла свою свежесть не* одинаково. Мясо, полученное от больных овец с лимфаденитной формой поражения, имело показатели свежего в течение 12 суток, с висцеральной - 9 и генерализованной - 6 суток. , Органолептические и физико-химические показатели жира боль-I ных овец. Подкожный и внутренний жир от овец с лимфаденитной фор; мой поражения не имел отличий по органолептическим показателям от

жира животных контрольной группы. В то же время жир от овец с висцеральной и генерализованной формах поражения имел серо-белый цвет, мажущуюся консистенцию и в 40,4% случаях - дистрофические изменения.

В подкожном и внутреннем жире больных овец было больше воды и меньше белка и жира, чем в жире от здоровых животных, в связи с чем их пищевая и энергетическая ценности были ниже: при лимфаденитной на 1,0%, при висцеральной - 4,6 и на 16,2% при генерализованной форме поражения.

Топлёный жир, полученный от овец с поражением только поверхностных лимфоузлов, не имел существенных и достоверных различий с контрольными образцами жира и соответствовал ГОСТ 25292-82. Жир, полученный от больных овец с множественными поражениями внутренних органов и генерализацией процесса, имел пониженные показатели качества, а именно: высокую температуру плавления (47,3-48,5°С), низкие показатели йодного числа (29,8-32,8 ед.) и высокие - кислотного числа на (2,4-2,6 мг КОН). Пере-кисное число этого жира превышало допустимые нормы в 2,1 раза.

Результаты исследований позволяют констатировать, что жиры, полученные от овец, больных казеозным лимфаденитом, имеют низкую пищевую и биологическую ценность и не подлежат длительному хранению.

Микробная обсеменённость продуктов убоя овец. Бактериологические исследования, проведенные в соответствии с ГОСТ 21237-75, показали, что мясо и внутренние органы больных овец контаминированы коринебактериями и другой сопутствующей микрофлорой, количество которой соотносилось с тяжестью поражения. Мясо овец с лимфаденитной и висцеральной формами были обсеменены в большей степени, чем контрольные пробы на 7,13 и 17,1% соответственно. При генерализованной форме количество посторонней микрофлоры в мясе превышало аналогичные показатели здоровых овец в 4,1 раза. Аналогичные результаты были получены при микроскопическом исследовании мазков-отпечатков мяса, где в поле зрения микроскопа в Среднем находилось: при лимфаденитной форме 9,92+0,65, при висцеральной - 27,92±1,83 и генерализованной - 35,5011,98 микробных клеток, т.е. было больше по сравнению с контролем в 2,2,6,1 и 7,8 раза соответственно.

Видовой состав выделенной микрофлоры мяса и внутренних органов больных овец представлен мезофильной аэробной и факультативно-анаэробной микрофлорой следующих видов: Е. coli, S. tiphimurium, S. enteritidis, St. aureus, Pr. vulgaris и St. pyogenes. Сальмонеллы были выделены из лимфоузлов, мышечной ткани, легких, печени и сердца больных овец только при висцеральной и генерализованной формах.

В процессе низкотемпературного хранения мяса, полученного от больных овец, количество микрофлоры достоверно (р<0,01-0,001) уменьшалось как в контрольных, так и в опытных группах и составляло к окончанию исследования (9 мес): в I группе 22,08+1,35; II - 30,17±1,31 и III -40,75±2,66 (КОЕ/см3) в то же время в контрольной группе микробная об-семененность была достоверно (р<0,001) ниже, чем во всех опытных груп-

пах в 1,4, 1,9 и 2,6 раза соответственно. 1 Разработка методов обезвреживания и биологическая оценка про-

1 дуктов убоя овец, больных казеозным лимфаденитом. Были испытаны

три способа обезвреживания мяса больных овец: проварка в открытых котлах в течение трёх часов, приготовление вареных колбасных изделий и сверхвысокочастотный нагрев (СВЧ). Предварительно была определена устойчивость коринебактерий и другой сопутствующей микрофлоры мяса больных овец к различным физико-химическим факторам.

Исследования показали, что процесс созревания мяса в течение 72 часов при температуре +18...+20°С не оказывал губительного действия на штаммы ^ С. pseudotuberculosis, St. aureus, Е. coli, Pr. vulgaris. В замороженном мясе

С. pseudotuberculosis оставались жизнеспособными в течение 18 месяцев (срок наблюдения). Через 9. месяцев они теряли каталазную активность и вирулентные свойства. Наряду с коринебактериями в течение 12 месяцев )( сохранялись стафилококки и кишечная палочка. Не менее важным было

выяснение устойчивости коринебактерий к высоким температурам как основного фактора обезвреживания мяса. Известно, что разные виды коринебактерий обладают определённой устойчивостью к физико-химическим и биологическим факторам. В связи с этим в опыт были включены, наряду с С. pseudotuberculosis и другие коринебактерии: С. egui и С. bovis. Было установлено, что в физиологическом растворе коринебактерии погибали при нагревании до + 60°С в течение 12-19 минут; при + 65°С - 8-18 и при +70°С в течение 2-4 минут. В гнойно-некротических очагах и мясе срок жизни коринебактерий увеличивался до 12-21; 8-15 и 3-6 минут соответственно. По устойчивости все виды коринебактерий занимали промежуточное положение между St. aureus и Е. coli.

Воздействие СВЧ-поля на С. pseudotuberculosis сопровождалось переходом S-формы в I-форму; образованием деформированных, неравномерно окрашенных клеток, расположенных чаще короткими цепочками или одиночно. СВЧ-поле вызывало у коринебактерий в R-, S-, I-формах повреждение клеточных структур, что приводило к замедленной репродукции их, к изменению морфологических, тинкториальных, культуральных и биологических свойств и прекращению токсинообразования.

Испытание в качестве химических консервантов растворов поваренной соли и уксусной кислоты показало, что 3-14% концентрация NaCl не t оказывает бактериостатического действия на С. pseudotuberculosis, в то

время как 20%-ный раствор NaCl оказывал бактерицидное действие на третьи-пятые сутки. При этом R-форма культур была более устойчива к действию поваренной соли. ^ При изучении действия растворов уксусной кислоты на коринебактерии

было установлено, что 6-8% её концентрация оказывает на С. pseudotuberculosis бактериостатическое действие, а 9-10% - бактерицидное.

Бактериологические исследования варёного мяса показали, что уже по-1 еле 20 минутной проварки при температуре +100°С в открытых котлах кори-

небактерии и санитарно-показательная микрофлора во всех искусственно и

естественно инфицированных кусках мяса отсутствовали. Учитывая, что в варёном мясе могут быть токсические продукты клеточного метаболизма, мы определили на крысах его биологическую ценность и безвредность. Опыты показали, что сваренное в течение трех часов мясо, полученное от овец с лимфаденитной формой поражения, не имело достоверных различий по относительной биологической ценности (ОБЦ) и сравнительной биологической ценности (СБЦ) с мясом овец контрольной группы. В то время как ОБЦ мяса, полученного от овец с висцеральной и генерализованной формами была достоверно ниже, по сравнению с контролем, соответственно на 27,1 и 32,0%. Сравнительная биологическая ценность вареного мяса по отношению к идеальному белку (казеину) характеризовалась определенными различиями по соответствующим группам овец. Результаты расчётов СБЦ показали, что при скармливании мяса овец с лимфаденитной, висцеральной и генерализованной формами поражений, росто-весовые показатели крыс были меньше контрольных на 5,0,27,7 и 32,2% соответственно.

Приготовленная в соответствии с техническими условиями ГОСТ 23670-79 колбаса «Отдельная баранья», сырьём для которой являлось естественно и искусственно инфицированное мясо от больных овец, по орга-нолептическим и бактериологическим показателям не отличалась от контрольной партии колбасы. Длительное скармливание колбасы крысам приводило к увеличению их ростовых показателей и не вызывало отклонений клинического статуса и патологоанатомических изменений, характерных для интоксикации, что свидетельствовало о её безвредности. Расчёты КЭБ показали, что относительная биологическая ценность колбасы выше таковой варёного в течение трех часов мяса на 13,0-33,5%.

С целью консервирования мяса и мясопродуктов в настоящее время всё чаще применяется СВЧ-нагрев, позволяющий не только ускорить процесс термической обработки сырья, но и обеспечить ему биологическую ценность и санитарную безупречность. Опыты показали, что нагрев фарша (массой 100 г.) в СВЧ-поле, в течение 1,5 минут обеспечивало 100% гибель всей микрофлоры. Изучение биологической ценности мяса после трёхминутной экспозиции СВЧ-нагрева показало, что длительное скармливание такого фарша крысам не вызывает у них специфических гнойно-некротических изменений и признаков интоксикации. В то же время при скармливании фарша, полученного из мяса овец с генерализованной формой поражения, в 25,0% случаев у крыс наблюдали признаки интоксикации и некротические очаги в печени и лёгких. При пяти минутной экспозиции СВЧ-поля росто-весовые показатели крыс были ниже. После эвтаназии крыс признаков интоксикации не наблюдали.

выводы

1. Казеозный лимфаденит овец широко распространён в хозяйствах Западной Сибири. Среди мериносовых и кроссбредных овец поражается до 24,0% поголовья. Заболеванию чаще подвержены взрослые овцы породы: советский меринос, алтайская тонкорунная, австралийский меринос, сибирский тип советского мериноса и прекос. Болезнь протекает хронически и проявляется в четырёх формах: лимфаденитная, висцеральная, генитапь-ная, генерализованная. Установлены различные зоны поражения: сильного от 20% и выше, значительного - от 10 до 20; умеренного - от 5 до 10 и слабого - от 1 до 5% больных овец. В зонах сильного и значительного поражения возбудитель чаще циркулирует вЯ-и 1-формах, а в зонах слабого и умеренного преобладают Б-формы.

2. Овцы, больные казеозным лимфаденитом, отличаются от здоровых, низкой живой массой и меньшим выходом мясной продукции. Мясоперерабатывающие предприятия и хозяйства Омской области теряют при этой болезни от недополучения мяса и других продуктов убоя ежегодно 3019815,9 рублей в расчёте прейскуранта цен на 1 января 2000 года.

3. Мясо, полученное от больных казеозным лимфаденитом овец с висцеральной и генерализованной формами поражения, характеризуется плохим обескровливанием, высоким показателем рН 6,3-6,4, слабой активностью пероксидазы, повышением уровня амино-аммиачного азота на 32,8-38,2% и летучих жирных кислот на 22,5-30,2%.

4. Мясо и внутренние органы (сердце, лёгкие, печень, почки) больных казеозным лимфаденитом овец имеют низкую питательную ценность, содержат больше воды на 7,4-9,6%, меньше белка на 11,8-19,3%, жкра в 2,5-5,0 раз, и минеральных веществ на 0,1-0,4%. В протеине мышечной ткани больных овец содержится меньше на 4,9-7,4% незаменимых и больше на 3,2-5,1% заменимых аминокислот (Р<0,01 - 0,001). Лимитирующими аминокислотами являются фенилаланин, валин, лейцин и триптофан. Белково-качественный показатель такого мяса снижен на 26,6-36,8% за счёт увеличения доли соединительно-тканных белков. Величина этих различий находится в прямой зависимости от тяжести и формы проявления болезни. Наиболее выраженные изменения химического состава мяса происходят при висцеральной и генерализованной

' формах поражения. Энергетическая ценность мяса, полученного от больных

овец с висцеральной и генерализованной формами болезни снижена на 17,1 и 40,4% соответственно по сравнению с мясом здоровых овец. I 5. Химический состав жира меняется в соответствии с формами проявле-

' ния болезни. При висцеральной и генерализованной формах он содержит в

1,5-2 раза больше воды, меньше белка на 19,1-53,8% и жира на 2,7 и 15,3%. Энергетическая ценность такого жира снижена на 4,6-16,2%. Физико-химические показатели жира меняются в зависимости от степени и формы поражения. При лимфадениггной форме жир характеризуется снижением тем-

пературы плавления на 1,4°С, уменьшением йодного числа на 15,9% и увеличением кислотного числа на 28,6%. При висцеральной и генерализованной формах поражения жир характеризуется снижением температуры плавления на 2,4 и 3,7°С, йодного числа на 26,2 и 33,2%, увеличением кислотного числа на 40,7 и 46,9% и перекисного числа на 33,3 и 33,3% соответственно.

6. В тушах овец с висцеральной и генерализованной формами поражения процесс гликогенолиза мяса протекает медленно, в результате чего полного его созревания не происходит. В процессе созревания мяса при температуре +18...+20 °С в течение 72 часов гибель коринебактерий не наступает. Мясо от больных животных характеризуется пониженной влаго-удерживающей способностью и является не стойким при хранении.

7. Мясо и другие продукты убоя больных казеозным лимфаденитом овец при висцеральной и генерализованной формах поражения в 2-4 раза больше обсеменены коринебактериями и другой микрофлорой представленной эшерихиями, сальмонеллами, стафилококками, стрептококками и протеем, вызывающими пищевые токсикоинфекции и токсикозы.

8. Патологоанатомическая картина казеозного лимфаденита овец характеризуется образованием в лимфатических узлах, органах и тканях специфических гнойно-некротических очагов (гранулём), размерами, от 2-5 мм до 6-8 см, с хорошо выраженной соединительно-тканной капсулой пастообразным или творожистым, желто-зелёного цвета, без запаха содержимым. Чаще поражаются лёгкие (46,2%); печень (13,2); лимфатические узлы: сре-достенные (14,7), бронхиальные (10,7), поверхностные шейные (8,5), коленной складки (5,2%); реже мышечная ткань (1,3%); половые органы (0,9); почки (0,7); селезёнка (0,3) и сердце (0,2%).

9. Возбудитель казеозного лимфаденита (псевдотуберкулёза овец) - С. pseudotuberculosis - грамположительная, полиморфная, неподвижная, аэробная бактерия размером 0,5-3,1 мкм в длину и 0,5-0,9 мкм в ширину, не образующая спор и капсул. Культивируется на КТА и СТА, образуя чёрные колонии R-, S- и I-форм. На кровяном агаре 83,6% культур коринебактерий образуют зону р-гемолиза. Расщепляют до кислоты без газа мальтозу (71,7%), сахарозу (73,2), глюкозу (93,2), галактозу (69,5%), не образуют индол и сероводород, не ферментируют арабинозу, рамнозу, ра-финозу, дульцит и сорбит обладают высокой каталазной и низкой уреазной активностью. Протеолитическая активность выражена слабо.

10. Электронно-микроскопические исследования возбудителя казеозного лимфаденита выявили различия морфологических и фенотипических вариантов С. pseudotuberculosis, связанные с ультраструктурной организацией клеточной стенки, цитоплазматической мембраны, нуклеоида и гранул (волкхгина).

11. Растворы поваренной соли в концентрациях 3,5,7,10,14% (рН 7,0 -7,2) в течение 5 суток не влияют на жизнеспособность С. pseudotuberculosis. В то же время 20%-ный раствор хлорида натрия оказывает на них бактериостатиче-ское действие. Коринебактерии не чувствительны к слабым растворам (2-4%)

уксусной кислоты, умеренно устойчивы к средним концентрациям (6-8%). Растворы (9-10%) уксусной кислоты обладают бактериостатическим и бактерицидным действием.

12. Гибель коринебактерий в мясе происходит при воздействии высокой температуры (+70°С) в течение трёх-пяти минут. Надёжное обезвреживание мяса, обсеменённого коринебактериями, обеспечивается варкой колбасных изделий при температуре +75...+85°С в течение 50 минут.

13. Мясо, полученное от больных казеозным лимфаденитом овец, сваренное в течение трёх часов, имеет меньшую на 2,3-6,7% биологическую ценность по сравнению с мясом, сваренным в течение 20 минут, но в то же время является безвредным.

14. Электромагнитные волны сверхвысоких частот (2 450 мГц) оказывают бактерицидное действие на клетки коринебактерий, вызывая их гибель в течение двух минут. Воздействие СВЧ-поля в течение трёх-пяти минут позволяет получить обезвреженные мясопродукты.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Результаты научных исследований использованы при разработке нормативно-технических документов и рекомендаций, предложенных для практического применения:

-методические указания «Диагностика казеозного лимфаденита (псевдотуберкулёза) овец», одобренные и утверждённые СО РАСХН, протокол №5, от 10.01.2003 г.

-методические рекомендации «Мероприятия по профилактике и ликвидации казеозного лимфаденита овец», одобренные и утверждённые СО РАСХН, протокол № 6, от 10.01.2003 г.

-методические рекомендации «Ветеринарно-санитарная оценка продуктов убоя овец, больных казеозным лимфаденитом», одобренные и утверждённые СО РАСХН, протокол № 9, от 17.02.2003 г.

-штаммы С. pseudotuberculosis 74 R, 209 R, 146 S используются для приготовления диагностических препаратов при казеозном лимфадените овец (патенты на изобретения № 2051964. № 1051965, № 2053295).

2. В ветеринарно-бактериологическую практику внедрены рационализаторские предложения:

-«Сывороточный теллуритовый агар с канамицином» (№ 373 от 25.03.02.).

-«Криопротективная среда для лиофилизации С. pseudotuberculosis» (№ 374 от 25.03.02.).

3. В качестве основной питательной среды для выделения С. pseudotuberculosis от больных казеозным лимфаденитом овец нами предложены теллуритовый или сывороточный теллуритовый агар с канамицином (рН 7,0-7,2) (рационализаторское предложение от 25.03.2002 г. № 373, приложение 2).

4. В лабораторных условиях выделенные культуры С. pseudotuberculosis можно сохранять на 0,25% полужидком агаре при температуре +4...+6°С в течение 18 месяцев. В лиофильно-высушенном состоянии они сохраняют жизнеспособность до 15 лет (срок наблюдения) при этом после 12 лет хранения R-формы переходят в S-форму и теряют вирулентность.

5. Пункт 3.1.5 «Правил ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясопродуктов» (1988.) «Псевдотуберкулёз» следует изложить в следующей редакции:

-3.1.5. «Казеозный лимфаденит (псевдотуберкулёз) овец».

-3.1.5.1. Тощие туши при любой форме поражения органов и тканей, а также туши не зависимо от состояния упитанности, головы, внутренние органы, в том числе и кишечник при генерализованном процессе с поражением органов грудной и брюшной полостей, направляют на утилизацию.

-3.1.5.2. Туши нормальной упитанности с висцеральной формой поражения и отсутствием таковых в скелетных лимфатических узлах и мускулатуре, используют в зависимости от результатов бактериологического исследования.

При обнаружении коринебактерий, сальмонелл и стафилококка, тушу и непоражённые органы направляют на проварку или изготовление консервов. При отсутствии выше указанной микрофлоры тушу и непоражённые органы направляют на изготовление колбасных изделий или мясных хлебов в соответствии с п. 11.5.1 и 11.5.2.

-3.1.5.3. Туши нормальной упитанности с поражением отдельных скелетных лимфатических узлов после зачистки последних, направляют на промышленную переработку с повышенным температурным режимом (+75°С).

6. Создана коллекция гистологических препаратов и составлен альбом макро-, микрофотографий и слайдов, отражающих морфологическую и субмикроскопическую характеристику возбудителя казеозного лимфаденита овец, формы патологического проявления и органную патологию спонтанно и искусственно заражённых С. pseudotuberculosis овец, которые могут быть использованы для практических, научных и учебных целей в вузах ветеринарной медицины.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Заболотных М.В. Диагностическое значение окраски по Граму и Нейсеру коринебактерий, выделенных из овец // Интенсивные технологии в сельскохозяйственном производстве и исследованиях молодых ученых и специалистов: Тез. докл. науч.-практ. конф.- Свердловск, 1988. - С.60.

2. Заболотных М.В. Частота поражения туш баранины казеозным лимфаденитом в Омской области // Диагностика и профилактика инфекционных и инвазионных заболеваний сельскохозяйственных животных в Западной Сибири: Сб. науч. тр. / ОмСХИ.- Омск, 1989. - С. 14-16.

3. Диагностика казеозного лимфаденита (псевдотуберкулеза) овец: Рекомендации: Утв. НТС| АПК Ом. облисполкома, от 15 сент. 1989 г. / ИГ. Трофимов, MB. Заболотных, Н.М. Колычев, ИД Головко, В.Н. Тарасова - Омск, 1990. -20 с.

4. Заболот шх А.В., Заболотных М.В. Выживаемость возбудителя ка-

зеозного лимфаденита овец в объектах внешней среды // Тез. докл. Ш Все-союз. конф. по эпизоотологии-Новосибирск, 1991-С. 361-363.

5. Колычев Н.М., Заболотных М.В. Казеозный лимфаденит овец и биологические свойства возбудителя // Эпизоотология, диагностика, лечение и профилактика инфекционных и инвазионных болезней животных: Сб. науч. тр. / ОмСХИ. - Омск, 1991. - С. 4-9.

6. Казеозный лимфаденит овец / Н.М. Колычев, И.Г. Трофимов, В .Г. Ощеп-ков, М.В. Заболотных и др. // Ветер инария.-1993.-№11-12.-С. 35-41.

7. Диагностика казеозного лимфаденита овец. / Н.М. Колычев, И.Г. Трофимов, М.В. Заболотных и др. // Диагностика, лечение и профилактика незаразных и инфекционных болезней сельскохозяйственных животных Западной Сибири: Сб. науч.тр. / ОмГАУ.- Омск,1994. - С.18-30.

8. Заболотных М.В. Казеозный лимфаденит, биология возбудителя и ветеринарно-санитарная оценка туш и органов // Тез. докл. науч. конф. / ОмГАУ. - Омск, 1994. - С.42-43.

9. Заболотных М.В. Ветеринарно-санитарная экспертиза туш и органов при казеозном лимфадените овец // Теоретические и практические разработки некоторых проблемных задач современной ветеринарии и животноводства: Материалы науч. конф. / ОмГАУ. - Омск, 1996. - С.46-47.

10. Пат. 2051964. Штамм бактерий С. pseudotuberculosis используемый в качестве референтного и для изготовления диагностических препаратов при казеозном лимфадените овец / М.В. Заболотных, |Н.М. Колычев, И.Г. Трофимов - № 5067312; Заявлено 10.07.1992; Приоритет 10.07.1992; Опубл. 10.01.96, Бюл. Изобретения заявки и патенты №1,1996 г. - С.217.

11. Пат. 2051965. Штамм бактерий С. pseudotuberculosis используемый в качестве референтного и для изготовления диагностических препаратов при казеозном лимфадените овец / М.В. Заболотных, Н.М. Колычев, И.Г. Трофимов-№ 5067313; Заявлено 10.07.1992; Приоритет 10.07.1992; Опубл. 10.01.96, Бюл. Изобретения заявки и патенты № 1,1996 г. - С.217.

12. Пат. 2053295. Штамм бактерий С. pseudotuberculosis используемый в качестве референтного и для изготовления диагностических препаратов при казеозном лимфадените овец / М.В. Заболотных, Н.М. Колычев, И.Г. Трофимов -№ 5067379; Заявлено 10.07.1992; Приоритет 10.07.1992; Опубл. 21.07.96, Бюл. Изобретения заявки и патенты № 3,1996 г. - С.221.

13. Заболотных М.В. Частота поражения и санитарная оценка туш и органов при казеозном лимфадените овец // Актуальные проблемы ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции: Тез. докл. 2-ой между-нар. Науч.-практ. конф. МГУПБ (25-27 июня 1997 г.) - М„ 1997. - С. 58.

14. Заболотных М.В., Харитонова Н.А. К вопросу о контаминации туш и органов овец // Диагностика, лечение и профилактика болезней животных: Сб. науч. тр. / ИВМ ОмГАУ. - Омск: Изд-во ОмГПУ, 1999. - С. 40-41.

15. Заболотных М.В. Распространение казеозного лимфаденита овец Омской области // Проблемы инфекционных и инвазионных болезней в животноводстве на современном этапе: Тез. докл. междунар. конф., по-свящ. 80-летию МВА им. К.И.Скрябина. - М., 1999. - С.146-147.

РОС.

НАЦИОНАЛЬНА»*! БИБЛИ0ТЕКА ") С. Петербург >\ 09 ?00 „т ; f

16. Заболотных М.В., Крупко A.C. Распространение казеозного лимфаденита овец в Омской области // Диагностика, лечение и профилактика болезней животных: Сб. науч. тр. / ИВМ ОмГАУ. - Омск: Изд-во ОмГПУ,

1999. -С. 38-39.

17. Заболотных М.В., Крупко A.C., Харитонова H.A. Частота поражения туш и органов, биохимические показатели мяса овец больных казеоз-ным лимфаденитом // Материалы учебно-методической и научно-производственной конференции Института ветеринарной медицины ОмГАУ: Сб. науч. тр. - Омск: Изд-во ОмГПУ, 1999. - С. 40-41.

18. Заболотных М.В. Частота поражения туш и органов овец больных казеозным лимфаденитом // Материалы учебно-методической и научно-производственной конференции Института ветеринарной медицины ОмГАУ: Сб. науч. тр.- Омск: Изд-во ОмГПУ,1999. - С.4.

19. Заболотных М.В., Нагайцев Ф.С., Харитонова H.A. Биохимические показатели мяса овец, больных казеозным лимфаденитом // Актуальные проблемы ветеринарной медицины в современных условиях и пути их разрешения: Сб. науч.тр. / ОГМА - Омск, 2000. - С.45-50.

20. Заболотных М.В., Харитонова H.A. Ветеринарно-санитарная оценка мяса овец, больных казеозным лимфаденитом // Незаразные болезни животных: Материалы Междунар. науч. конф., посвящ. 70-летию образования зооинж. фак. (30-31 мая 2000 г.) - Казань, 2000. - С.220-221.

21. Заболотных М.В., Нагайцев Ф.С., Божко С.П. Ветеринарно-санитарная экспертиза мяса овец больных казеозным лимфаденитом // Материалы Всероссийской научно-методической конференции патологоанатомов ветеринарной медицины, (20-22 сент. 2000г.) - Омск, 2000. - С.28-29.

22. Заболотных М.В., Крупко A.C. Выявление овец, больных казеозным лимфаденитом на территории Алтайского края // Актуальные проблемы ветеринарной медицины в современных условиях и пути их размещения: Сб. науч. тр. / ИВМ ОмГАУ - Омск, 2000. - С. 45-50.

23. Заболотных М.В., Крупко A.C. Казеозный лимфаденит овец в Омской области // Обеспечение ветеринарного благополучия животных с учетом технологии животноводства: Материалы докл. науч.-практ. конф. молодых ученых (21-22 октября 1999, г. Барнаул) / PÄCXH, Сиб. отд-ние. -Барнаул, 2000 - С. 33-34.

24. Заболотных М.В., Крупко A.C., Харитонова H.A. Случаи выявления больных казеозным лимфаденитом овец в хозяйствах Омской области // Инфекционные и инвазионные болезни животных: Материалы Междунар. науч. конф., посвящ. 70-летию образования зооинж. фак. (30-31 мая 2000 г.) - Казань, 2000. - С. 58-59.

25. Колычев Н.М., Заболотных М.В. Казеозный лимфаденит овец в Алтайском крае // Вестник ОмГАУ. - 2000. - №2. - С. 53-55.

26. Устойчивость возбудителя казеозного лимфаденита овец / Н.М. Колычев, М.В. Заболотных, В.И. Плешакова и др.// Ветеринария. -

2000.-№3. - С. 21-23.

27. Заболотных М.В., Заболотных A.B. Факторы, влияющие на жизнеспо-

собность и свойства коринебактерий при лиофилизации и длительном хранении / / Материалы Всероссийской научно-методической конференции патологоанатомов ветеринарной медицины, (20-22 сент. 2000г.) — Омск, 2000. — С. 29-30.

28. Заболотных М.В., Лещева Н.А. Качественные показатели мяса овец больных казеозным лимфаденитом // Актуальные проблемы диагностики, профилактики и терапии болезней животных в современных экологических условиях: Материалы межд. науч.-практ. конф. (г. Барнаул, 2001 г., 29-30 авг.) / РАСХН, Сиб отд-ние. - Барнаул, 2001. - С. 144-148.

29. Заболотных М. В., НоваковскийА.С., Крупко А.С. Казеозный лимфаденит овец в Новосибирской области // там же. — С.139-144.

30. Изучение свойств штаммов С. pseudotuberculosis после долговременного хранения в лиофильном состоянии /А.С. Новаковский, И.Г. Трофимов, М.В. Заболотных, Е.С. Новаковская // Актуальные проблемы диагностики, профилактики и терапии болезней животных в современных экологических условиях: Материалы междунар. науч.-практ. конф. (г. Барнаул, 2001 г., 29-30 авг) / РАСХН, Сиб. отд-ние - Барнаул, 2001. - С. 134-138.

31. Колычев Н.М., Заболотных М.В. Казеозный лимфаденит овец в Алтайском крае //Докл. РАСХН. - 2001. - №1. - С. 44-45.

32. Таксономия штаммов С. pseudotuberculosis по спектральным характеристикам с использованием норм/А.С. Новаковский, JI.3. Шрайбер, М.В. Заболотных, Е.С. Новаковская// ВестникОмГАУ. — 2001. — №4,— С.49-51.

33. Заболотных М.В., Лещева Н.А. Сывороточный теллуровый агар с канамицином: Рац. предлож. Per. № 373 / ИВМ ОмГАУ. — Омск, 2002. — 1 с.

34. Заболотных М.В., Плешакова В.И., Зигунов В.В. Криопротективная среда для лиофилизации Actinobaculum suis и Corynebacterium pseudo-tuberculosis: Рац. предлож. Per. № 374 / ИВМ ОмГАУ. - Омск, 2002. - 1 с.

35. Характеристика популяций возбудителя казеозного лимфаденита овец / Н.М. Колычев, Л.В. Гежес, Е.В. Лебеденко, М.В. Заболотных // Ветеринария. — 2002. - № 9. - С. 20-23.

36. Диагностика казеозного лимфаденита (псевдотуберкулёза) овец: Метод, указания: Утв. СО РАСХН от 10.01.2003. / И.Г. Трофимов, М.В. Заболотных, И.Д. Головко и др. — Краснообск, 2003. — 14 с.

37. Мероприятия по профилактике и ликвидации казеозного лимфаденита (псевдотуберкулёза) овец: Метод, рекомендации: Утв. СО РАСХН от 10.01. 2003. / Н.М. Колычев, И.Г. Трофимов, М.В. Заболотных. — Краснообск, 2003. — 7 с.

38. Ветеринарно-санитарная оценка продуктов убоя овец, больных казеозным лимфаденитом: Метод.рекомендации: Утв. СО РАСХН от 17.02.2003. / М.В. Заболотных, В.П. Фролов, Н.М, Колычев, Н.А. Лещёва, А.С. Крупко. — Краснообск, 2003. - 7 с.

(oojo

^ 0 03 0

(

I

I

Per. № 29. Сдано в набор 17.04.03. Подписано в печать 23.04.03. Печать на ризографе. Бум. писчая. Формат 60x84 1/16. Печ. л. 2,25 (2,09). I

Уч.-изд. л. 2,64. Тираж 100 экз. Заказ 82.

Типография филиала издательства ИВМ ОмГАУ, Омск-7, Октябрьская, 92

Актуальность темы. Сельское хозяйство, в частности животноводство России, несет значительные потери в результате выбраковки и гибели скота от различных заразных болезней. Разработанные ранее мероприятия по профилактике и оздоровлению животных от острых и хронических инфекций оказались недостаточно эффективными. В этой связи перед ветеринарной наукой и практикой возникла необходимость разработки новых комплексных программ, обеспечивающих ветеринарно-санитарное благополучие по наиболее распространенным острым и хроническим болезням животных в отдельно взятом хозяйстве, районе, субъекте РФ и России в целом.

Среди таковых приоритетными становятся изучение возбудителей инфекционных болезней, общих для человека и животных, их биологической роли, циркуляции и адаптации в определенных эколого-географических зонах. Происходящая в последнее время трансформация возбудителей ряда инфекционных болезней, связанная с изменением основных морфологических, биохимических, антигенных, генетических свойств, усугубляется многообразием путей и способов их передачи, длительностью персистирования в организме, выживанием и накоплением микробов во внешней среде.

Все вышеуказанное ставит на одно из первых мест вопросы, непосредственно связанные с бактериологической диагностикой редко встречающихся, трансформирующихся, атипичных форм с многообразием их свойств. Среди возбудителей многочисленных заразных болезней имеются такие, биология которых еще слабо изучена, а таксономическое их положение постоянно меняется. К подобного рода болезням относятся коринебактериозы и, в частности, казеозный лимфаденит (псевдотуберкулез) овец, возбудителем которого является Corynebacterium pseudotuberculosis.

Казеозный лимфаденит — инфекционная болезнь овец и коз, характеризующаяся образованием в лимфатических узлах, органах и тканях специфических казеозно-некротических инкапсулированных очагов. Болезнь наносит ощутимый экономический ущерб народному хозяйству за счёт потери упитанности больных животных, снижения их продуктивности, убойного выхода и качества мясной и шерстной продукции, а также вследствие значительной выбраковки поражённых туш и органов (К.Т. Maddy, 1953; R.V.F. Jubb, Р.С. Kennedy, 1970; S.S. Sutherland et al., 1987; H.M. Колычев, И.Г. Трофимов, 1993).

Имеющаяся отечественная и зарубежная литература по казе-озному лимфадениту свидетельствует о широком распространении этой болезни у нас в стране и особенно за рубежом, в странах развитого овцеводства (К.Т. Maddy, 1953; К.Ф.Ламихов,1954; С. Ben-ham et al., 1962; М.А. Купырева, 1972; D.H. Burrell, 1981; С.М. Cameron, 1982; G. Holstad, 1986). К возбудителю казеозного лимфаденита восприимчивы многие виды животных, в то же время известно, что С. pseudotuberculosis представляет определенную опасность и для здоровья человека (J.F. Lopez, F.M. Wang, 1966; H.R. Carne, 1967; Y. M. Battey et al., 1986, И.Г. Трофимов, 1991).

Отечественными и зарубежными исследователями накоплен определённый материал по изучению клинического проявления, патогенезу, эпизоотологии, терапии и профилактики казеозного лимфаденита овец (В.М. Туманский, 1958; М. Ashfag, 1980; М.Е. Nairn, I.P. Robertson, 1974; D.H. Burrell, 1981; Y.M. Battey et al., 1986; И.Г. Трофимов, 1994).

В то же время в ветеринарии еще встречаются инфекционные болезни, при которых показатели качества и ветеринарно-санитарная оценка туш и органов недостаточно изучены или вообще не разработаны. К таким болезням относятся иерсиниозы, коринебактериозы, некробактериоз, паратуберкулез, атрофический ринит и другие. Перечисленные болезни вызывают ослабление защитных сил организма, что способствует значительному обсеменению мяса возбудителями пищевых токсикоинфекций и токсикозов.

Решая основную задачу максимального сохранения количества и качества мясной продукции, ветеринарная служба ставит на первое место её безопасность для здоровья потребителей, что является одной из главных целей ветеринарно-санитарной экспертизы и гигиены производства на предприятиях мясной промышленности.

Известно, что при воздействии различных факторов внешней и внутренней среды на организм животных качество мяса и мясных продуктов может изменяться. Особое значение эти изменения приобретают при различных инфекционных болезнях животных (И.С. Загаевский, 1960; Н.З. Билетова, Р.П. Корнелаева, 1980; Ю.Г. Косте нко и др., 1995; К. Annemarie et al., 2000). В соответствии со статьей 21 закона Российской Федерации «О ветеринарии» организация и проведение ветеринарно-санитарной экспертизы, условия использования продуктов животноводства для пищевых целей в зависимости от результатов этой экспертизы определяются «Правилами ветеринарного осмотра убойных животных и ветери-нарно- санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов», 1988. Согласно этим «Правилам» мясо и мясопродукты, полученные при вышеназванных болезнях, чаще выпускаются без ограничений и фактически приравниваются к мясу здоровых животных. Поэтому в новых социально-экономических условиях назрела острая необходимость привести эти «Правила» в соответствие с новыми реалиями.

Повышение качества, пищевой ценности и безвредности продуктов питания остаётся главной проблемой современной перерабатывающей промышленности нашей страны. В связи с этим задачи, поставленные перед сельским хозяйством, мясной и молочной промышленностью, рассчитаны на оптимальное удовлетворение физиологических потребностей человека в мясе, мясных продуктах, безупречных и безвредных в санитарном отношении, с высокой биологической ценностью.

В руководствах и справочниках по ветеринарно-санитарной экспертизе ещё недостаточно сведений о характере, частоте и формах поражения органов и тканей при казеозном лимфадените овец, что затрудняет постановку диагноза и санитарную оценку продуктов убоя на мясокомбинатах. Отсутствуют данные о бактериологическом исследовании туш и органов при различных формах поражения овец.

В действующих «Правилах» 1988 года нет указаний о ветеринарно-санитарной оценке продуктов убоя при различных формах проявления казеозного лимфаденита овец. Что же касается мяса и других продуктов убоя, полученных от больных казеозным лимфаденитом овец, то вопросы, связанные с его химическим составом, товарной и санитарной характеристикой, остаются до настоящего времени недостаточно изученными. Комплексных исследований качественных показателей мяса овец при казеозном лимфадените не проводилось.

Анализ литературных данных позволяет констатировать, что до настоящего времени слабо изучены вопросы, касающиеся прижизненного и посмертного обсеменения мяса и мясопродуктов ко-ринебактериями и другой сопутствующей микрофлорой. Остаются невыясненными сроки выживаемости коринебактерий в мясе при созревании, воздействии высоких и низких температур, растворов поваренной соли и уксусной кислоты. Отсутствуют данные по пищевой и биологической ценности мяса, полученного от больных овец. Не определена степень опасности мяса и готовой продукции для человека. Не разработаны режимы обезвреживания продуктов убоя больных овец при различных формах проявления казеозного лимфаденита. В связи с этим изучение биологии возбудителя, санитарно-гигиенического состояния и разработка вопросов ветери-нарно-санитарной экспертизы продуктов убоя овец при казеозном лимфадените являются актуальными задачами, а тема и результаты исследований приобретают важное теоретическое и практическое значение.

Институт ветеринарной медицины ОмГАУ определил приоритетное направление по изучению этой проблемы. В институте создана проблемная лаборатория, в которой более 20 лет проводится научно-исследовательская работа по теме №6 «Разработка методов и средств диагностики, профилактики, мер борьбы с коринебакте-риозами сельскохозяйственных животных», имеющей государственную регистрацию ГР - 01.9.90.000196.

Цель и задачи исследований. Целью научных исследований является изучение основных биологических свойств С. pseudotuberculosis и комплексное научно-практическое обоснование ветеринарно-санитарной оценки мяса и мясопродуктов при казеозном лимфадените овец.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить распространение казеозного лимфаденита (псевдотуберкулеза) овец в Западной Сибири и определить экономические потери, связанные с выбраковкой туш и органов при промышленном убое овец.

2. Определить частоту поражения туш и внутренних органов овец, больных казеозным лимфаденитом.

3. Изучить обсеменение мяса и субпродуктов коринебакте риями и другой сопутствующей микрофлорой.

4. Изучить основные биологические свойства коринебакте-рий, выделяемых от овец данного региона.

5. Усовершенствовать методы индикации и идентификации С. pseudotuberculosis в лабораторных условиях.

6. Изучить устойчивость коринебактерий в процессе созревания мяса при воздействии высоких и низких температур, растворов поваренной соли и уксусной кислоты.

7. Определить качественные показатели, химический состав и биологическую ценность баранины, полученной в результате убоя овец, больных казеозным лимфаденитом.

8. Разработать рекомендации по ветеринарно-санитарной оценке туш и органов при казеозном лимфадените овец, а также методы и режимы обезвреживания мяса.

Научная новизна. На основании комплексных исследований впервые даны научные и практические обоснования ветеринарно-санитарной оценки продуктов убоя овец, больных казеозным лимфаденитом (псевдотуберкулёзом).

Получены новые данные по распространению казеозного лимфаденита в хозяйствах Западной Сибири, по частоте и формам поражения органов и тканей овец. Определен экономический ущерб от недополучения мяса и других продуктов убоя. Усовершенствованы методы индикации и идентификации С. , pseudotuberculosis в лабораторных условиях. Л

Получены три патента на изобретения: Штаммы бактерий С. pseudotuberculosis № 74R, № 209R, № 146S, используемые в качестве референтных и для изготовления диагностических препаратов при казеозном лимфадените овец (Патенты: № 2051964 от 10 января 1996 г, № 2051965 от 10 января 1996 г., № 2053295 от 27 января ^ 1996 г.).

На значительном количестве выделенных культур коринебак-терий определены основные биологические свойства R-, I-, S-форм возбудителя казеозного лимфаденита овец и их циркуляция среди овец Западной Сибири.

Впервые в России проведено лиофильное высушивание С. ^ pseudotuberculosis, что позволило сохранять выделенные культуры до 15 лет (срок наблюдения).

Изучены патологоанатомические и гистоморфологические изменения лимфатических узлов, внутренних органов и тканей больных овец. Установлены четыре формы казеозного лимфадени-(Ц та: лимфаденитная, висцеральная, генитальная и генерализованная.

Бактериологическим методом определена степень микробного обсеменения мяса овец, больных разными формами казеозного лимфаденита. Определено влияние разных форм болезни на мясную продуктивность овец, морфологический и химический состав мяса.

Изучена пищевая ценность мяса и субпродуктов по химическому составу, содержанию аминокислот, макро- и микроэлементов. Определена биологическая ценность варёного мяса, колбасных изделий, полученных из мяса овец, больных казеозным лимфаденитом.

Впервые изучено действие электромагнитных волн сверхвысоких частот на коринебактерии и возможность применения этого метода для обезвреживания мяса и других продуктов убоя, полученных от больных казеозным лимфаденитом овец.

Теоретическая значимость. Результаты исследований позволяют расширить наши знания о биологии С. pseudotuberculosis и способности его при определённых условиях приобретать различные морфологические и фенотипические R-, I-, S-, L- формы.

Установлено, что возбудитель, попадая в организм восприимчивых животных, может вызывать поражения отдельных лимфатических узлов (лимфаденитная форма), внутренних органов (висцеральная форма), половых органов (генитальная форма) и вызывать генерализованный процесс (генерализованная форма). Циркуляция патогенных штаммов в определённой географической зоне позволяет прогнозировать эпизоотическую ситуацию по казеозному лимфадениту овец.

Комплексным методом исследований установлено, что мясо больных овец характеризуется низким качеством, а глубина изменений, происходящих в мясе больных овец, зависит от формы проявления болезни.

Практическая значимость. Полученные результаты по выделению и циркуляции С. pseudotuberculosis у овец племенных и товарных хозяйств Западной Сибири занесены в эпизоотические карты Омской, Новосибирской областей и Алтайского края. Это позволяет прогнозировать эпизоотическую ситуацию по казеозному лимфадениту овец и наметить меры борьбы и профилактики.

Результаты исследований явились основой для разработки методических указаний «Диагностика казеозного лимфаденита (псевдотуберкулёза) овец», включающих диагностический ключ по идентификации патогенных коринебактерий, одобренных и утверждённых СО РАСХН, протокол № 5, от 10.01.2003 г.; методических рекомендаций «Мероприятия по профилактике и ликвидации казеозного лимфаденита овец», одобренных и утверждённых СО РАСХН, протокол № 6, от 10.01.2003 г. и методических рекомендаций «Ветеринарно-санитарная оценка продуктов убоя овец, больных казеозным лимфаденитом», одобренных и утверждённых СО РАСХН, протокол № 9, от 17.02. 2003 г.

Разработан способ лиофильного высушивания С. pseudotuberculosis, позволяющий сохранять их жизнеспособность на протяжении 15 лет (срок наблюдения) и использовать для научных целей. Штаммы бактерий С. pseudotuberculosis № 74R, № 209R, № 146S используются в качестве референтных и для изготовления диагностических препаратов при казеозном лимфадените овец.

Выделенные культуры возбудителя казеозного лимфаденита овец (С. pseudotuberculosis № 74R, № 209R, № 146S) депонированы в коллекцию микроорганизмов Всероссийского государственного научно-контрольного института ветпрепаратов (Москва).

Разработаны методы обезвреживания мяса больных казеозным лимфаденитом овец путём проварки, приготовлением вареных колбас и СВЧ-нагрева, что позволяет сохранить у этих продуктов пищевую и биологическую ценность и быть безвредными для употребления в пищу. Определён экономический ущерб от недополучения продуктов убоя и снижения их качества при казеозном лимфадените овец.

Полученные нами данные внесены в качестве предложений для изменения в существующие «Правила» по ветеринарносанитарной оценке мяса и других продуктов убоя при казеозном лимфадените (псевдотуберкулёзе) овец.

Реализация результатов исследования. Выделенные и изученные штаммы С. pseudotuberculosis № 70R, 74R, 209R, 146S депонированы в Всероссийском государственном научно - контрольном институте ветпрепаратов, г. Москва, 1991 г. и используются для разработки и приготовления специфических средств борьбы и профилактики при казеозном лимфадените овец.

Результаты исследований используются в хозяйствах и в ветеринарных лабораториях Омской, Новосибирской областей и Алтайского края при диагностике казеозного лимфаденита овец (приложение 2). Обезвреживание условно-годного мяса, полученного от больных казеозным лимфаденитом овец, апробировано и внедрено на Омском мясокомбинате путём проварки и приготовления ^ варёных колбас (приложение 2). Часть результатов диссертационной работы вошла в монографию «Казеозный лимфаденит (псевдотуберкулёз) овец» Н.М. Колычев, И.Г. Трофимов, 1993 год.

Основные материалы диссертационной работы используются в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-<4 практических занятий со студентами и слушателями ФПК по эпизоотологии, микробиологии и ветеринарно-санитарной экспертизе продуктов животноводства в Казанской государственной академии ветеринарной медицины им Н.Э. Баумана, Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины, Уральской государственной академии ветеринарной медицины, в Институте ве-I теринарной медицины Омского государственного аграрного университета, в институте ветеринарной медицины Алтайского государственного аграрного университета.

Апробация результатов научных исследований. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на III Всесоюзной конференции по эпизоотологии (Новосибирск, 1991); научно-методической конференции ОмГАУ (Омск, 1994); научной конференции профессорско-преподавательского состава, аспирантов и студентов Института ветеринарной медицины ОмГАУ «Теоретические и практические разработки проблемных задач современной ветеринарии и животноводства» (Омск, 1996); II Международной научно-практической конференции "Актуальные проблемы ветеринарной медицины и ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции" (Москва, 1997); учебно-методической и научно-производственной конференциях ИВМ ОмГАУ (Омск 1988,

1999); Международной конференции, посвященной 80-летию МВА им. К.И. Скрябина (Москва, 1999); научно-практической конференции молодых учёных «Обеспечение ветеринарного благополучия животных с учётом технологии животноводства» (Барнаул,

2000); Международной научной конференции, посвящённой 70-летию образования зооинженерного факультета (Казань, 2000); Всероссийской научно-методической конференции по патологической анатомии животных (Омск, 2000), межрегиональной научно -практической конференции Алтайской НИВС «Актуальные проблемы диагностики, профилактики и терапии болезней животных в современных экологических условиях» (Барнаул, 2001), научных конференциях профессорско-преподавательского состава института ветеринарной медицины ОмГАУ (Омск, 2001, 2002).

Основные материалы, изложенные в диссертации, обсуждены и одобрены на заседаниях учёного совета Института ветеринарной медицины ОмГАУ (1990-2002), а также на межкафедральных совещаниях сотрудников кафедр ветеринарно-санитарной экспертизы, стандартизации и сертификации продуктов животного происхождения, микробиологии, вирусологии и иммунологии, эпизоотологии и инфекционных болезней сельскохозяйственных животных, патологической анатомии ИВМ ОмГАУ (2003) и КГАВМ им Н.Э. Баумана (2003).

Публикация результатов исследования. Основные результаты и положения изложены в 38 научных статьях, опубликованных в центральной печати, в материалах Международных, Всероссийских, региональных конференций, в сборниках научных трудов ИВМ ОмГАУ, методических указаниях и трёх методических рекомендациях.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 489 страницах компьютерного текста и состоит из общей характеристики работы, обзора литературы, описания собственных результатов исследований, обсуждения, выводов и практических предложений, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 63 таблицами, 95 рисунками, графиками, диаграммами. Список литературы включает 449 источников, в том числе 144 иностранных.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Распространение и формы проявления казеозного лимфаденита овец в хозяйствах Западной Сибири.

2. Биологические свойства циркулирующих штаммов С. pseudotuberculosis.

3. Органолептические, физико-химические и бактериологические показатели мяса овец при различных формах болезни.

4. Обезвреживание продуктов убоя больных овец и их биологическая ценность.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

4. ВЫВОДЫ

1. Казеозный лимфаденит овец широко распространён в хозяйствах Западной Сибири. Среди мериносовых и кроссбредных овец поражается до 24,0% поголовья. Заболеванию чаще подвержены взрослые овцы породы: советский меринос, алтайская тонкорунная, австралийский меринос, сибирский тип советского мериноса и прекос. Болезнь протекает хронически и проявляется в четырёх формах: лимфаденитная, висцеральная, генитальная, генерализованная. Установлены различные зоны поражения: сильного от 20% и выше, значительного — от 10 до 20%; умеренного - от 5 до 10% и слабого - от 1 до 5% больных овец. В зонах сильного и значительного поражения возбудитель чаще циркулирует в R- и I-формах, а в зонах слабого и умеренного преобладают S- формы.

2. Овцы, больные казеозным лимфаденитом, отличаются от здоровых, низкой живой массой и меньшим выходом мясной продукции. Мясоперерабатывающие предприятия и хозяйства Омской области теряют при этой болезни от недополучения мяса и других продуктов убоя ежегодно 3019815,9 рублей в расчёте прейскуранта цен на 1 января 2000 года.

3. Мясо, полученное от больных казеозным лимфаденитом овец с висцеральной и генерализованной формами поражения, характеризуется плохим обескровливанием, высоким показателем рН 6,3-6,4, слабой активностью пероксидазы, повышением уровня амино-аммиачного азота на 32,8-38,2% и летучих жирных кислот на 22,5-30,2%.

4. Мясо и внутренние органы (сердце, лёгкие, печень, почки) больных казеозным лимфаденитом овец имеют низкую питательную ценность, содержат больше воды на 7,4-9,6 %, меньше белка на 11,8-19,3%, жира в 2,5-5,0 раз, и минеральных веществ на 0,10,4%. В протеине мышечной ткани больных овец содержится меньше на 4,9 - 7,4% незаменимых и больше на 3,2 -5,1% заменимых аминокислот (Р<0,01 - 0,001). Лимитирующими аминокислотами являются фенилаланин, валин, лейцин и триптофан. Белково-качественный показатель такого мяса снижен на 26,6 -36,8% за ' счёт увеличения доли соединительно-тканных белков. Величина этих различий находится в прямой зависимости от тяжести и формы проявления болезни. Наиболее выраженные изменения химического состава мяса происходят при висцеральной и генерализованной формах поражения. Энергетическая ценность мяса, полученного от больных овец с висцеральной и генерализованной формами болезни снижена на 17,1 и 40,4% соответственно по сравнению с мясом здоровых овец.

5. Химический состав жира меняется в соответствии с формами проявления болезни. При висцеральной и генерализованной формах он содержит в 1,5-2 раза больше воды, меньше белка на

19.1 - 53,8% и жира на 2,7 и 15,3%. Энергетическая ценность такого жира снижена на 4,6-16,2%. Физико-химические показатели жира меняются в зависимости от степени и формы поражения. При лимфаденитной форме жир характеризуется снижением температуры плавления на 1,4 °С, уменьшением йодного числа на 15,9% и увеличением кислотного числа на 28,6%. При висцеральной и генерализованной формах поражения жир характеризуется снижением температуры плавления на 2,4 °С и 3,7 °С, йодного числа на

26.2 и 33,2%, увеличением кислотного числа на 40,7 и 46,9% и пе-рекисного числа на 33,3 и 33,3% соответственно.

6. В тушах овец с висцеральной и генерализованной формами поражения процесс гликогенолиза мяса протекает медленно, в результате чего полного его созревания не происходит. В процессе созревания мяса при температуре +18.+20 °С в течение 72 часов гибель коринебактерий не наступает. Мясо от больных животных характеризуется пониженной влагоудерживающей способностью и является не стойким при хранении.

7. Мясо и другие продукты убоя больных казеозным лимфаденитом овец при висцеральной и генерализованной формах поражения в 2 - 4 раза больше обсеменены коринебактериями и другой микрофлорой представленной эшерихиями, сальмонеллами, стафилококками, стрептококками и протеем, вызывающими пищевые токсикоинфекции и токсикозы.

8. Патологоанатомическая картина казеозного лимфаденита овец характеризуется образованием в лимфатических узлах, органах и тканях специфических гнойно-некротических очагов (гранулём), размерами, от 2 - 5 миллиметров до 6 - 8 сантиметров, с хорошо выраженной соединительно-тканной капсулой пастообразным или творожистым, желто-зелёного цвета, без запаха содержимым. Чаще поражаются лёгкие (46,2%); печень (13,2%); лимфатические узлы: средостенные (14,7%), бронхиальные (10,7%), поверхностные шейные (8,5%), коленной складки (5,2%); реже мышечная ткань (1,3%); половые органы (0,9%); почки (0,7%); селезёнка (0,3%) и сердце (0,2%).

9. Возбудитель казеозного лимфаденита (псевдотуберкулёза овец) - С. pseudotuberculosis - грамположительная, полиморфная, неподвижная, аэробная бактерия размером 0,5-3,1 мкм в длину и 0,5-0,9 мкм в ширину, не образующая спор и капсул. Культивируется на КТА и СТА, образуя чёрные колонии R-, S- и I- форм. На кровяном агаре 83,6% культур коринебактерий образуют зону гемолиза. Расщепляют до кислоты без газа мальтозу (71,7%), сахарозу (73,2%), глюкозу (93,2%), галактозу (69,5%), не образуют индол и сероводород, не ферментируют арабинозу, рамнозу, рафино-зу, дульцит и сорбит, обладают высокой каталазной и низкой уре-азной активностью. Протеолитическая активность выражена слабо.

10. Электронно-микроскопические исследования возбудителя казеозного лимфаденита выявили различия морфологических и фенотипических вариантов С. pseudotuberculosis, связанные с ультраструктурной организацией клеточной стенки, цитоплазма-тической мембранны, нуклеоида и гранул (волютина).

11. Растворы поваренной соли в концентрациях 3, 5, 7, 10, 14% (рН 7,0 - 7,2) в течение 5 суток не влияют на жизнеспособность С. pseudotuberculosis. В то же время 20%-ный раствор хлорида натрия оказывает на них бактериостатическое действие. Коринебактерии не чувствительны к слабым растворам (2 - 4%) уксусной кислоты, умеренно устойчивы к средним концентрациям (6 - 8%). Растворы (9 - 10%-ный ) уксусной кислоты обладают бакте-риостатическим и бактерицидным действием.

12. Гибель коринебактерий в мясе происходит при воздействии высокой температуры (+70 °С) в течение трёх-пяти минут. Надёжное обезвреживание мяса, обсеменённого коринебактериями, обеспечивается варкой колбасных изделий при температуре +75.+85 °С в течение 50 минут.

13. Мясо, полученное от больных казеозным лимфаденитом овец, сваренное в течение трёх часов, имеет меньшую на 2,3 - 6,7 % биологическую ценность по сравнению с мясом, сваренным в течение 20 минут, но в то же время является безвредным.

14. Электромагнитные волны сверхвысоких частот (2450 мГц) оказывают бактерицидное действие на клетки коринебактерий, вызывая их гибель в течение двух минут. Воздействие СВЧ-поля в течение трёх-пяти минут позволяет получить обезвреженные сопродукты.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Ф 1. Результаты научных исследований использованы при разработке нормативно-технических документов и рекомендаций, предложенных для практического применения:

-методические указания «Диагностика казеозного лимфаденита (псевдотуберкулёза) овец», одобренные и утверждённые СО РАСХН, протокол № 5, от 10.01.2003 г.

-методические рекомендации «Мероприятия по профилактике и ликвидации казеозного лимфаденита овец», одобренные и утверждённые СО РАСХН, протокол № 6, от 10.01.2003 г.

-методические рекомендации «Ветеринарно-санитарная оценка продуктов убоя овец, больных казеозным лимфаденитом», одоб-ф ренные и утверждённые СО РАСХН, протокол № 9, от 17.02.2003г.

-штаммы С. pseudotuberculosis 74 R, 209 R, 146 S используются для приготовления диагностических препаратов при казеозном лимфадените овец (патенты на изобретения № 2051964. № 1051965, № 2053295).

2. В ветеринарно-бактериологическую практику внедрены ра-^ ционализаторские предложения:

-«Сывороточный теллуритовый агар с канамицином» (№ 373 от 25.03.02.).

-«Криопротективная среда для лиофилизации С. pseudotuberculosis» (№ 374 от 25.03.02.).

3. В качестве основной питательной среды для выделения С. <ф pseudotuberculosis от больных казеозным лимфаденитом овец нами предложены теллуритовый или сывороточный теллуритовый агар с канамицином (рН 7,0-7,2) (рационализаторское предложение от 25.03.2002 г. № 373) (Приложение 2).

4. В лабораторных условиях выделенные культуры С. pseudotuberculosis можно сохранять на 0,25% полужидком агаре при температуре +4.+6 °С в течение 18 месяцев. В лиофильно-высушенном состоянии они сохраняют жизнеспособность до 15 лет (срок наблюдения) при этом после 12 лет хранения R- формы переходят в S- форму и теряют вирулентность.

5. Пункт 3.1.5 «Правил ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясопродуктов» (1988) «Псевдотуберкулёз» следует изложить в следующей редакции:

-3.1.5. «Казеозный лимфаденит (псевдотуберкулёз) овец».

-3.1.5.1. Тощие туши при любой форме поражения органов и тканей, а также туши не зависимо от состояния упитанности, головы, внутренние органы, в том числе и кишечник при генерализованном процессе с поражением органов грудной и брюшной полостей, направляют на утилизацию.

-3.1.5.2. Туши нормальной упитанности с висцеральной формой поражения и отсутствием таковых в скелетных лимфатических узлах и мускулатуре, используют в зависимости от результатов бактериологического исследования.

При обнаружении коринебактерий, сальмонелл и стафилококка, тушу и не поражённые органы направляют на проварку или изготовление консервов. При отсутствии выше указанной микрофлоры тушу и не поражённые органы направляют на изготовление колбасных изделий или мясных хлебов в соответствии с п. 11.5.1 и 11.5.2.

-3.1.5.3. Туши нормальной упитанности с поражением отдельных скелетных лимфатических узлов после зачистки последних, направляют на промышленную переработку с повышенным температурным режимом (+ 75 "С).

6. Создана коллекция гистологических препаратов и составлен альбом макро-, микрофотографий и слайдов, отражающих морфологическую и субмикроскопическую характеристику возбудителя казеозного лимфаденита овец, формы патологического проявления и органную патологию спонтанно и искусственно заражённых С. pseudotuberculosis овец, которые могут быть использованы для практических, научных и учебных целей в ВУЗах ветеринарной медицины.