Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Казеозный лимфаденит овец

олфсмп государственный зетеринарнып институт

На правах рукописи

ТРОФИМОВ Игорь Георгиевич

КАЗЕОЗНЫЙ ЛИМФАДЕНИТ ОВЕЦ

16.00.03 — ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, мнкрология и иммунология

Авторефер ат диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

новосибирск 1994

< Работа выполнена в Омской государственно)! ветеринарном институте.

Научннй консультант - доктор ветеринарных наук, профессор, заслуженный деятель науки Российской Федерации, академик Колычев Н.М.

Официальные оппоненты - доктор ветеринарных наук, профессор 1егидевич 3,(1., доктор ветеринарных наук, профессор ХайкинБ.Я., доктор ветеринарных наук Луницин В.Г.

Ведущее учреждение - ВНИИ контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов.

Защита диссертации состоится ___ 1994 г.

в ____ часов на заседании специализированного совета

Д.020.23.01 при Институте экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока (633128, Новосибирская область, п. Краснообск, СО РАСХН, ИЭВСиДВ)

С диссертацией можно ознакомиться в ЦНСХБ СО РАСХН. Автореферат разослан ______ 1994 г.

Мченый секретарь специализированного совета, доктор ветеринарных наук

А.А. Самоловов

- 3 -

I. йБЦАЗ ХАРАКТЕРИСТИКА РйБОТН

1.1. Актуальность. Казеозный лимфаденит овец и коз имеет вирокое распространение в страна* с развитым овцеводством, таких как Австралия, С1А, Индия, Новаа Зеландия. В результате выбраковки поравенных тди и органов, а такяз дополнительной специальной обработки баранины, болезнь наносит эти«' странам убытки, исчисляемые миллионами долларов,

В результате многолетних исследований накоплен значительный каучквй материал по этиологии, эпизоотологии, болезни, предловена концепция патогенеза казеозного лимфаденита овец. Однако ввиду существенной вариабельности фенотнпи-ческих свойств возбудителя инфекции, перед исследователями стоит рад нереаеннкх проблем, которые не позволявт предло-аить радикальный способ искоренения и профилактики болезни.

В Российской Федерации и странах СНГ казеозный лимфаденит имеет акрокое распространение. Болезнь зарегистрирована в Новосибирской области (К.Ф. Ламихов, 1954), в Дагестане (М.И, Далгат, 19П5), б Ставропольском и Краснодарском краях. Ростовской области (З.Л. йегидеви1', 1369), Дктвбинской области Казахстана, Баакирни, Оренбургской области (И.А. Купн-рева, 19?Л). Нами установлено неблагополучие всех овцеводческих хозяйств Омской области, ряда хозяйств Твменской, Липецкой областей России, Какчетавсьой и Павлодарской областей Казахстана (1979-1992 гг.).

Значительным недостатком в изучении казеозного лимфаде нитэ у овец является отсутствие в специальной отечественной литературе еообцений практических ветеринарных врачей, что срязано с отсутствием в учебной и справочной литературе достоверной информации о болезни и микроорганизме, вызывав-: чем ее. Нет научно-обоснованных и утвер«данннх для всей страны методов диагностики, мер борьбы и »фьфнлактики боле£ ни. Такая неосведомленность ветеринарных специалистов в вопросах диагностики, профилактики илфякции негативно сказывается на результатах работы овцеводческих хозяйств,

1.2. Цель работы - опрерчлить направления в поисках радикальных иетодзв диагностики, путей искоренения и профилактики каз-о^огэ лимфаденита с-вец.

- 4 -

1.3. Основные задачи исследований:

- обобщить и проанализировать данные о фенотипических и генотипических свойствах возбддителя инфекции;

- изучить патогенные, вирулентные. антигенные и токси-геинне свойства втаммов С. pseudotuberculosis, отнесенных по фено- и генотипа к разным группам;

- изучить устойчивость изолятов к физически«, химическим и биологическим факторам внеиней среды;

- усовервенствовать бактериологический метод диагностики;

- обобщить данные по распространении, 'мониторингу казе-озного лимфаденита в хозяйствах Омской области, 'выявить зависимость эпизоотологических особенностей болезни, клинического и патологоанатомического проявления у нивотных разного пола и возраста, природных и хозяйственных условий;

- изучить взаимодействие возбудителя инфекции, его антигенов с макроорганизиоы, внести коррективы в икещуися концепции о патогенезе;

- изыскать методику приготовления диагностических препаратов и определить эффективность их применения для прнкиз-ненной диагностики инфекции в лабораторных и производственных условиях;

- определить экономический ущерб, наносимий казеозным лимфаденитов овцеводству:

- произвести анализ результатов оздоровления неблагополучных по казеозиому лимфадениту хозяйств, определить.основные пути профилактики и ликвидации болезни.

1.4. Научная н о в и з н а. На основании изучения фено и генотипических свойств значительного числа итамиов Corynebacterium pseudotuberculosis, усовершенствован бактериологический метод диагностики болезни, что позволило но фенотипическим признакам патогенных видов коринебактерий, разработать дифференциальный ключ.

Впервые в мире на значительном количестве итамков С.pseudotuberculosis изучены генотипические свойства. Результаты этих исследований свидетельствуют об индивидуальных особенностях данного вида микроорганизма, не вписыпаюадсся в традиционные рамки гвносистеватиии.

Деление ютами»« но фенотипическим признакам на R-, I ,

S-формы, изучение их патогенных, вирулентных, токсигенных, антигенных свойств, определение устойчивости микроорганизмов к физическим, химическим, апологическая факторам внешней среды, позволили сделать закличение о значении различных форм микроорганизма п эпизоотическом процессе.

Издчены зпизоотологические особенности инфекция на значительном поголовье овец. Данные по мониторинга собраны за 14 лет.

Приготовлен антиген (прейсцнокардин Е) дла аллергической диагностики казеозного лимфаденита, который моает бить применен в реакции бласттранс^ориации лиыфацитов при изучении a инфицированных аивотных клеточного иммцшпзга ответа.

Предложен математический метод обработки фенотипических свойств атамиов С. pseudotuberculosis, позволявший определить наиболее антигешше из числа исследцемих,

В зпизоотологическоы эксперименте полцчен материал, позволявший произвести расчет экономического ццерба, наносимого казеозним лимфаденитам.

Впервые освежен опыт борьбы с казеозным лимфаденитом в овцеводческих хозяйстоах.

1.5. Теоретическая и практическая значимость. Результаты исследований позволят пересмотреть взгляды специалистов на проблема, вооружат их системой знаний по диагностике, дадут основание к проведении тех или иных мероприятий, направленных на борьбц с инфекцией.

Изучением значительного числа «таймов возбудителя инфекции определены фено- и генотилические свойства. Это позволяет использовать данный материал в руководствах по систематике микроорганнзиой рода Corynebacteriua. Кроме того, разработаны рекомендации по диагностике казеозного лимфаденита, вклочаичие в себя диагностический клич па идентификации патогенных нредстаоктелей рода коринебактерий,

Внесенн дополнения в концепции о патогенезе инфекции. Зто позволит исследователям болев компетентно подойти к вопросам создания специфических средств диагностики и профилактики 00 Л (ПИИ.

Чачченн jhu '.пош-итические оспбеииоств проявленьл инфок -цви s> и с." v.vjx wjiihsix «тцеводческих хозяйств, Выявлено вл"-

'.:',:!>! ,,¡1 1 , II,'lijir,ft]HJX И тахт)!.!)! ЬЧП.^КИЯ ЦСЛ0П1 i ¡м

эпизоотический процесс.

Разработан прижизненный метод (аллергический) диагностики казеозного лимфаденита у овец, который позволяет проводить более успевно прптивозпизоотические мероприятия в неблагополучных пс инфекции стадах.

Спредепн экономический ущерб, наносимый болезньп, что позволяет обратить внимание специалистов отрасли и руководителей хозяйств на необходимость проведения противоэпизооти-ческих и профи /тактических мероприятий.

1.6, йпробация работы. йатериалн диссертационной работы доложены и обсуждены в ГЯВ МСХ СССР С1388, 1990); на конференции молодых ученых (Новосибирск, 1385) на республиканской научно-практической кг»Ференции молод 'X ученых и специалистов (Чимкент, 1986): на Всесовзнои симпозиуме по биохимии сельскохозяйственных животных (Киев, 19В9); на научной конференции, посвяченной 70-легкю Омского ветеринарного института (Омск, 1990); на III Бсесовзной конференции по эпизоотологии (Новосибирск, 1391); на Всероссийской кнференции по патологической анатомии с-х животных (Воронеж, 1993); на семинаре заведувцих бактериологическими отделан» ветеринарных лабораторий, зетспрциалистов овцеводческих хозяйств и врачей ОПВК мясокомбинатов (Липецк, 199.1); на ежегодных научных конфепенциях профссссрско-препо-давательского состава Омского ветеринарного института (Омск, с 1984 по 1992). Рекомендации по диагностике и мерам борьбч с казеозным лимфаденитом одобрены подсекцией "Инфекционная патология животных п регионе Сибири и Дальнего Востока" (Новосибирск, 1994).

Основные положения, выводы и практические предложения, изложенные в диссертации, обсуждены и одобрены на менкафед-ральном совзчании профессорско-преподавательского состава Омского ветеринар-лого института (1994).

1.7, Публикация результатов. Но теме диссертации опубликовано 30 статей и монография,

1.8, Объем и структура диссертации. Диссертация изложена im 423 страницах машинописи, иллистри-рована Ш таблица«»» и 4 рисунками; систокт ил введения, обзора литературы, результатов собственных исследований, обсуждения рпзильтатов, выводов. практических пиедложени^ и

прнлоаениз. Список литературы включает 2ttfi источников, в том числе 54 отечественных и 232 иностранных, Текстовая часть диссертации составляет 298 страниц.

1.9. Основные положения, выносимые на эзциту: 1. сравнительная характеристика биологических свойств нтаимоп С. pseudotuberculosis, отнесенных по феноти-ническим признака« к R-. 1-, S-Фориан и ганотиппческим свойствам к трем основним подгруппам;

2. математическая модель определения втаммоп, обладавших наиболее выраженными антигенннаи свойствами, исхода нз фено-типичсских признаков;

3. зпизоптологнческие особенности каэеозиаго лимфаденита в овцеводческих хозяйствах Омской области;

4. диагностика казепзного лимфаденита у овец;

5. патогенез;

В. профилактика и неры борьбы.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Ватериалы и методы

Зпизоотологические, клинические*, патоло!морфологические, бактериологические, иммунологические и другие методы исследования по теме диссертационной работы проводили с 1978 по 1993 год в лабораториях кафедры эпизоотологии и кафедры микробиологии Омского ветеринарного института.

Материалом дла бактериологических исследований сложили гнойно-некротические очаги, полученные от больных казеозныи лимфаденитом овец, принадлежащих хозяйствам Омской области. Бактериологическому исследовании подвергли более 2000 очагов. Методика выделения возбудителя приведена в изданных нами рекомендациях по диагностике казеозного лияфаданита овец (И.Г. Трофимов и др., 1990). Всего получено более 450 культур С. pseudotuberculosis. Детально фснотипические свойства научили у 150 культур, руководствуясь общепринятым в микробиологической практике методикам (Биргрр И.О., 1982) и по раду специалмшх методов, приведенных и соотвегствуищих pan делах работа.

Гонт ипи'ннлшо спойсгпа иаучалн и 70-ти иидолишшх куль-

тур и у пяти втаммоз коринебактерий, отнесенных к вида» С, bovis, С. equi, С. pyogenes. С. renale, П. hoagi, предоставленных нам сотрудникам лаборатории воспроизводства сельскс-хозяйсюеннмх «иватных ВИЗВ (г.Москва). В качестве контрпла в исследовании использовали ДНК эталонных нтамнов иикабакте-рий (ВСЁ) и бруцелл (эт. 13).

Нуклеотидннй состав ДНК Смол.2 ГЦ) исследуемых препарс-тав определяли методом тепловой денатурации (J.Xamur, Р. Doty, 1962).

Степень гомологии нуклеотидких последовательностей ДНК определяли в реакции молекулярной ДНК-ДНК гибридизации, которую выполняли по методу 3. DeLey, 3, DeSsedt (1975), ДНИ метили методом ник-трансялции (Т. Kaniatis 198? V

Зкизоотологические особенности казеозноги лимфаденита изучали руководствуясь "Рекомендациями по методике зпизоото1 логического исследования" (И.О. бакулов и др., 1975)^ При этом использовали данные клинического осмотра и аллергического исследования овец пяти совхозов Омской области и совхоза "Кировский" Липецкой области. О распространении инфекции в овцеводческих хозяйствах судили пс результатам ее-теринарно-санитарной экспертизы тув свец, убиваемых на кясс-коибйнатах. Всего клиническому осмотру подвергли более 331 тыс, овцематок и 43 тыс. еивотных разных половозрастных групп, аллергическоки исследовании - 57 тис., ветеринар-но-санитарной экспертизе - 3i тыс. туи овец и очоло 43 тыс. молодняка.

Клинические признаки забояесаниг изучали на 40В9 спонтанно заразивяихся аквотных, а патологоанатоиичьские измене-, низ - на 6030. Кроке того, течение, клиническое прорвление, патологоанатомичвекие л гистоморфслогичрскио изменения наблюдали у 64 овец в острых опытах. При этом у винотных систематически изучали морфологический состав периферической коо ви, с выьедением лейксграммы, проводили биохимическое кссяе дивание сыворотки крови, стапи.чи реакцию блаеттрлнефоркации лимфоцитип (РБТЛ). Виутрикомным введением "фенчльного" антигена и "прейецнокардина К" изучали ответную реакции замедленного типа (ичфекциоппую аллергик?.

"Фенолышй' atrurfü гото»гли по методик« Кояикоп-а (В.В. Товарииц^ий, 1П''|7"). потр§,.г.шч-. СибИИВЙ,

- о -

иь нтаммов, щличанцихсз по снииа Фиио - й генэтипическим свойствам. Концентраций протеина » антипле определяли по методу Кьельдаля (ПЛ. Лебедев, П.'Г. 'Лсович, 197Р) а лаборатории биохимии ЙЗВ Сибири и Дальнего Востока.

В осниву приготовления антигена "прейсцлоклрдина Е" была полоаеча бразильская квтодика (П.Н. Langenegger, st al., 1987), иодифицированная нами, исходя ьз фено- и генотппи-ческих особенностей ислользованнкх лтаммпв. При этой бактериальной массу автсклавироБаяи при 120'С 20 минут. Суперна-тант, полученный сепарированием и содерващчй растворимый пготеин, осаядали трихлорукеусной кислотой, Для увеличения срока годности преларата, его стандартизации и удобства транспортировки "прейсцнокар.цин Е" подяергали лиафильнояу висйанвашш в сублиматоре ЕГ-50/4 на Омской биокоабинате. Концентрацию протеина в яидком и липфильно-кнеуйеьном "прейсцнокардине Е" определяли фотсие-рическиа Meiofioa в ВНИИТБ8 (г Омск). Контролем опыта слу£ил сухой очищенный (1ШД) туберкулин для млекппитавщих.

Оценку патоиэрфзлоги"еских изменений, оазвивнихса в ор-гаьизме 64 зкснеринеитально и 38 естественно инфицированиях овец, проводили в лабораториях эпизоотологии, патологической анатомии, гистологии ОГЗИ, в лаборатории патоморфологии 3!?И-ИТБ8. Более 3,5 тыс, парафиновых срезов из органов и тксней пкравивали гематоксилин-эозином, по оразе в модификация (И.Г. 8аков, n.M. Карпуть, 1967), выборочно суданон-3 - на знры, по Иабадаиу - на гликоген, по Граму-Вейгерту на микроорганизма. При окраске на РНК и гликоген отделыше срези обрабатывали рибонуклеазой и амилазой (для контроля), соответственно (Р. Яллли, 1969>.

БиокЕтричесиуп обработку зксперииенталышх данных произведи на основания алгоолтмов по H.A. Плсхикскому (П.Т. Яебо-ден, А.Т. Псович, 1S69). При этом иснпльзовалл такие приемы как: группировка данных; вычисление средней арифметической и ее киадратического отклонения; оценка разности генеральных долей; вычисление одномерных статистик; корреляционный анализ и др. Статистическув обработку результатов исследований проводили на программируемом микрокалькуляторе ЫК — 61 и на персональном койньатере ¡Вй ХТ/ЯТ процессор 286/207, с применением программ Вар Пи—i, Kopp ftn-1, Kopp Пн-2 (никрокал!

кулятор), "Quattro", "Stat". "Statgraf" (коииьвтер). Набор материалов диссертационной работы осуществляли по программе "Лексикон", распечатку текстовой части и таблиц - по программам "Printîx", "Лексикон", набор и распечатку рисунков -по программе "Quattro" на принтерах фиркч "Star" и "EPSGH FX -80" (Япо"ия),

Часть исследований была проведена совместно с сотрудниками лаборатории колекулярной биологии и биохимии 8КЭВ (Б.А. Фомин, Г.К. Артьэин), сотрудниками кафедр эпизоотологии и микробиологии Омского ГВЦ (И.Д. Головко, В.Н. Тарасова, В.Г. Очепков, Я.ft. Вареца), сотрудниками НПЛ "Эпизоотологии казеозного лимфаденита овец" этого института (И.Г. Алексеева, Й.А. Кобзев, В.В. Груденя, В.М. Враков, В.й. Яешкевич), аспирантами (Й.В, Заболотных, ft.В, Заболотннх, fi.fi. Ватутин), соискателем (Й.С. Бприсе(!ко), десятью студентаии-дип-лоиниками. Отдельные исследования выполнены в соавторстве с сотрудниками Института экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока (А.С. Донченко, В.Н. Донченко), Сибирского НИВЙ (ВНИИТБ!) (В.И.. Околелов, П.П. Красиков), Липецкой областной лаборатории (А.П. Мальков).

2.2, Результаты исследований

2.2.1. Распространение и дифференциальная диагностика казеозного лимфаденита у ооец

Казеозный лимфаденит - хронически и латентно протекающая инфекционная болезнь мелкого рогатого скота, характеризующаяся гнойно-некротическим воспалением соматических и висцеральных лимфатических узлов, а также органов и тканей. Этиологическим фактором болезни является Corynebacterius; pseudotuberculosis.

В Советском Соязе ветеринарные специалисты считали, что бояезнь встречается редко, т.к. глубокое систематическое исследование инфекция не проводилось, и до 1980 года количество рпубликованпык работ, посвячонных этоыч вопросу, не прспыиало десяти.

В действительности казеозный лимфаденит опец в овцепод-чос<:их -чозийствах нл территории Российской Федерации и быв

вих совзиах республик (странах СНГ) распространен довольно еироко.

Причиной, сдераивавщей изучение данной болезни, является преаде всего отсутствие надежных методов диагностики, связанное с недостатком информации о возбудителе инфекции, й это, а частности, сопряжено с несовершенствам бактериологического метода диагностики. Имевшаяся в настоящее врека официальная методика бактериологической диагностики ос:-озэна на выделении С. р5эи(МиЬегси1о313 с использоааннеы обычных питательных сред (В,Я. Антонов, П.Н. Блинов, 1971).

На первых порех изучения инфекции С. рзеийа1иЬег"и!оз1з у овец - перед исследователями стояла задача дифференциации ее от туберкулеза и ряда других заболеваний. До настоящего времени эта проблема существует, но чаще она связана с отсутствием информации об этиологии, эпизоотологии и методах диагностики казеозного лимфаденита.

Так, например, патологоанатонические изменения при каэе-сзиом лимфадените овец невозможно спутать с тдберкулезными, поскольку в очагах никогда не присутствуит кислотоустойчивые микобактерии, а вчедение гнойного содержимого очага морской свинке никогда не приводит к развитии туберкулеза.

Туберкулез редко встречаггея у овец, содержимое гранулем - сватло-велтого цвета, без зеленого оттенка, небольких размеров, часто содсряит соли кальция. Поэтому, казеоэный лимфаденит аовно дифференцировать у овец по абсцессам, так как они подвивки и на разрезе содержат густой гной зеленовато-желтого цвета. При определенных практических навыках мсг-но поставить диггноз по цвету и внежнему виду гноя, поскольку зти признаки специфичны.

Гистологически гранулемы отличаются от туберкулезных узелков преобладанием экссудативио-некротяческих процессов над пролиферативными и гипербластическиыи.

Невозможно принять патологоанатомические изменения при казеозноа лимфадените за дегенерирувщий эхинококкоз, так как в очаге нет признаков мембраны и головки паразита с крпчь-я*и. Кокцидиомяхоз у овец встречается ред.,о, оч^ги небольиих размеров, располагаются гроздьями, их содержимое - сливоч-но-аел1'ого цвета, никогда не бнвает творожистый, не содержит солей кальция, йлтииомияоз ц овец почт« всегда локализуется

в области юеи, очаги не содержат творогистого гноя. При нек-робактериозе содержимое абсцессов полужидкой консистенции, имеет специфический запах.

Кроме того, следует иметь в виду, что казеозный лимфаденит у баранов-производителей мокет протекать с клиническими признаками зпидкдиио-орхита, не отличавшимися от заболевания обусловленного Brucella ovis. В этих случаях следует инфекции дифференцировать на основании бактериологического и серологического ивтодов диагностики.

Мы считаеа, что поставить предварительный диагноз на казеозный лимфаденит у овец - не представляет особых трудностей. Особенно при наличии поражений поверхностных лимфатических узлов, а тем более абсцедирувчих с выделениеи гноя; при наличии специфических очагов в коже, подкожной клетчатке или в мускулатуре. Однако подтвердить диагноз бактериологическим исследованием гнойного содервимого очагов не всегда представляется возможным, особенно если обнаружены микроорганизмы рода CorynebacteriuM, но не установлен их вид.

В Определителе бактерий Bergey (1974) описано около 6Q видов коринебактерий. И патогенный коринебактериям животных и человека, кроме С. diphtheriae, отнесен 21 вид и подвид: С. pseudotuberculosis (ovis), С. xerosis, С. renale, С. kut-Sdieri, С, pseudodiphtheriticun (hoiianni), С. equi, С. bo-vis, С. pauro»etabolvm, С. pyogenes, С. haeaolyticua, C,en~ zysicu», C. hoagii, C. striatue, C. «urisepticu«, C.nephri-dii, C. phocae, C. vaginalis.

Таксономическое положение подавляющего больяинства этих коринебактерий все еще не определено и продолжает оставаться предметом изучения. Их серологические признаки практически не изучены и четкая дифференциация не всегда возможна.

Коринебактерий, паразитирующие ц человека и животных, имеит ряд обцих фенотипических, генотипических и антигешшх свойств. Поэтому, при подтверждении диагноза следует иметь в виду, что С, pyogenes и С. haeaoliticua являются возбудителями гноеродных инфекций у домавних животных. С. equi - связана с инфекционной бронхопневмонией жеребят и поражениями у свиней. С. renale - вызывает специфическое заболевание - ба-цилзрннй пиелонефрит крупного рогатого скота. С. pseudotuberculosis - кажзогшый лимфаденит и язвошшй лнчфангит лова-

- 13 -

дей. В дополнение к этим видам, зарегистрировали: С. bovis С. suis и другие, также вызывавшие заболевания у яивотных.

На основании морфологических, культуральных и физиологических свойств культур микроорганизмов, принадлежацих к роду Corynebacteriua; видам: С, pyogenes, С. pseudotuberculosis, С, equi, С. flauidua, С. pseudodiphtheriticuc, С. euri$epti-cuB, С. lipolyticua, выделенных от животных, R.F. Brooks, G.J. Hucker, ff944) предприняли попытку создать клачевуа систему дифференциации, которая оказалась неудачной, т.к. не обнаружено высокой степени взаимосвязи между изучаемыми признаками отдельных видов. При использовании культуральных признаков (но без учета вида животного, от которого получена культура) определены три главные группы дифтерондов у животных: 1 группа - С. e"tii, или активная группа;. 2 группа -промежуточная; 3 группа - С, pyogenes, или - не активная,

S.H. Dennis, U.H. Basford, 1 1980Э предлагали дифференцировать представителей рода Corynebacteriua ГП. equi, С. pyogenes, С. pseudotuberculosis,, С. renale) на основании культуральных и биохимических свойств.

С этой целью, на основании собственных исследований н данных литературы, мы предлагаем для дифференциации основный патогенных для животных и человека представителей рода Corynebacteriua использовать морфологические, тинкториаль-ные, культуралыше, биохимические, патогенные признаки, с обязательным учетом вида животных, от которых амделены микроорганизм«, клинического и патологоанатомического проявления заболевания.

2.2.2. Этиология казеозного лимфаденита

2.2,2.1. Фенотипические свойства С. pseudotuberculosis

Как в отечественной, гак и в зарубежной специальной литературе описаны фенотипические свойства С. pseudotuberculosis, характерные по нашему определению культурам R-форм; следовательно оольмаи часть, пиделлемыя из гнойного содержи-кого очага ьу'ьт.к), иытих снойства I- и S-форм, до нави"

•юспилоплпий Hl' пил.! ИЦГ . 1 lllJi.U|»pi)BaHli(jft .

В начале исследований мы питались объяснить наличие tj культур возбудителя казеозного лимфаденита R- и S-форм тем, что в организме больных овец возбудитель находится в R-фор-ис, a S-fopaa - результат диссоциации микроба на искусственных питательных средах. Но позднее, исследуя 37В свевевнде-лешшх культур ьтого вида, установили, что 60 7. из них находились в S- и 1-форыах.

Полиморфизм, «гироккй спектр биохимических свойств вызывали у нас сомнения в принадлежности выделенных втаамов к данному виду, которые от части удалось разрешить методом математической обработки фенотипических свойств, выраженных в числах. Таг например, произвели статистичес;.:-^ обработку морфологических, ткнкториальних, куяьтуральних и биохимических признаков С всего по 26 показателям) 26-ми ятаммов, выделенных от больных овец. Втаимн но всем 26 признакам сравнили друг с другой; выявляя коррелятивную зависимость. Коэффициенты корреляции каядого втамма, соответствуете средней н высокой зависимости, сгруппировали и вывели среднее квадратическое значение (табл. 1).

Из табл. I, видно, что наиболее аысокуш зависимость с 22 втамыами из 28 имеют атаман NN 70, 226, 29, 203, 203, 212. С двадцатью втамзаш - втаммы НН 15, 37, 38, 96.

Низкая корреляционная связь отмечена у втаммов НН 214, 101, 22 36, 302.

. На основании этих данных мовно с уверенностью говорить о наличии у представителя этого вида коринебактерий культу-ральных вариантов, т.е. R-, 1-, S-форы. Моано поставить под сомнение принадлекность к данному виду микроорганизмов итам-аов NH 214, 101, 302, 13, 69, 146, как имекчих наиболее низкие в феиотипическом плане корреляционные связи. Однако последующие исследования, в частности патогенные свойства и генотипическяе характеристики, указываят на их принадлежность к виду С. pseudotuberculosis.

Следуе: отметить, что птамм Н У0 был определен нами -как наиболее типичный представитель данного вида зикроорга-низмов, обладавший высокими антигенными (и в частмсти ал-лергизируючиии) свойствами,г Таким образом, данный метод не только позволил выявить корреляционные связи, ц казалось бы paauux по фонотипу культур, но и установить втакин с более

Таблица 1,

Математическая обработка значений коррелятивных связей 28-ии ятакмов С. рзвш1о1иЬегси1о913 но фенотипическин признакам

!Ш п/п Ш нтам- мсв Фораа зтам-на Коэффициент корреляции

п * И ( я б

1 290 й 14 0,59 + 0,04 0,15

2 70 Н 22 0,58 + 0,03 0,14

3 74 К 21 0,55 + 0.03 0,15

4 408 н 21 0,55 + 0,03 0,13

3 226 к 22 0,54 + 0,04 0,18

б 15 я 20 0,54 + 0,04 0,18

7 33 к 18 0,54 + 0,03 0,11

8 29 к 22 0,52 + 0,04 0,18

9 203 й 22 0,51 + 0,03 0,16

10 209 р. 22 0,51 + 0,03 0,14

11 37 I 20 0,51 + 0,03 0,13

12 212 1 22 0,50 + 0,03 0,15

13 50 5 19 0,50 * 0,03 0,15

14 38 5 20 0,49 + 0,03 0,16

15 281 Я 18 0,49 + 0,03 0,13

16 259 Я 19 • 0,48 + 0,03 0,13

17 96 И 20 0,46 + 0,03 0,15

18 18 5 12 0,45 + 0,04 0,13

19 410 5 18 0,44 ( 0,02 0,07

20 100 I 1В 0.44 + 0,03 0,15

21 214 Н 9 0,44 * 0,05 0,15

22 101 I 4 0,44 + 0,05 0,09

23 22 11 0,42 + 0,04 0,12

24 36 к 14 0,41 + 0,02 0,08

25 302 К 7 0,40 ! 0,03 0,07

26 13 (г 5 0,37 + 0,06 0,14

27 69 5 5 0,36 0,03 0,07

28 146 5 9 0,34 + 0,02 0,06

* - (п) - количество нтаымов показанвих среднви

0,3-0,7) и пипокан (г= 0,7-1,0) корролдцианина сопаь

внраяешшии антигенными свойствами. Следовательно, известное полевение о взаимосвязи фенотипа с антигенными свойствами у представителей микромира, нами подтверждено в математической иодели на «таыиах С. pseudotuberculosis.

2.2.2.2. Генотипические свойства С. pseudotuberculosis

Другув часть соинений пытались рззревить с использованием современных методических подходов. При этом опирались на научно обоснозаннув концепции о той, что при нолекулярно-би-ологическоы метода исследования в первичной структуре ДНК закодирована информация о структурных и знзиматических белках, обусловливающих фенотип иикроорганизыа, что позволяет на примере одной макромолекулы получить полнус информации о бактериальной клетке. Накопленные к настоящему временя научные данные позволили нсследователяк прийти к закявчешт, что виды строго специализированных родов различаится nfl нуклео-тидноку составу не более чем на 2X, менее специализированных родов - на 4-62, а внутривидовое различие не превнпает 5-10 иол.2 ГЦ, То есть, данные о величине геноыа бактерий говорят, что два отличающихся по молекулярному весу их ДНИ иик-роорганизма не могут быть близкородственными.

Еце более надежным критериев при идентификации микроорганизмов молекулярно-биологическим методом является подобие первичных последовательностей нуклеиновых кислот, которое определяит в реакции ДНК-ДНК гибридизации. У представителей одного вида гомология составляет 60-100Z, а у представителей разных видов одного рода - 20-602.

Анализ результатов молекулярно-биологичкского исследования позволяет нам утверждать о наличии индивидуальных гено-типических особенностей представителей рода Corynebacteriua и, в частности, вида С. pseudotuberculosis. Всестороннее изучение (фенотипа, генотипа, антигенных, токсигенках, патогенных свойств) значительного количества культур убедило нас в принадлежности их к данному виду. Нзряцу с этим, можно с уверенностью сказать о малой пригодности мппекулярно-биоло-гичпского метода исследования при идентификации и дифференциации С. prfeiiiint.iihprcHlnBig от лннп'х ирег'■ а(мийлай ятпгг

рода. Так например, у 40 изученных культур величина генома варьировала от 41,4 до 76,7 мол.% ГЦ. То есть, согласно принятых норм, эти культуры не могут быть блнзкородственпыаи. Кроме того, иуклеотидные последовательности были гомологичными в интервале 60-1002 лииь у 7,0% нтамнов, а в интервале 20-60% - у 15,32. Следовательно 77,77. исследованных культур не подпадают в границы рода, что совершенно исключается фе-нотипическиаи свойствами этих культур.

Составленная нами на основании результатов реакции ДНК-ДНК гибридизации дендрограмаа (Рис. 1), отранает связи практически всех исследуеыых культур на уровне от 10 до 100%. Это ногло бы подойти для идентификации представителей вида С. pseudotuberculosis, так как гомология нуклеотидных последовательностей с ДНК контрольных втаымов И. tuberculosis (BCG) и Br.abortus (пт.19) была нине 1 %, а с ДНК четырех патогенных для животных нтамиов рода Corynebacteriua (С. equi, С. pyogenes, С. bovis, C.renale) она не превышала 10% (табл. 2). Однако 67,7У. реакций (ДНК-ДНК гибридизации) иеяду итам-иами С.pseudotuberculosis так ге не превынали 10% гомологии.

В то ае время ДНК зтаммова С. hoagi и С. renale были гомологичны иезду собой (76% и 82%, соответственно) и показали гомологии (39% и 73%, соответственно) с ДНК одного из яеети итамыов С. pseudotuberculosis (ит. 96) (табл. 2.). В свои очередь при использовании в качестве реперного - препарата из втаима 96 высокое значение (98%) гомологии ответили с одним птаимом - N 425. Препарата из птааиов NH 70 и 50 бнли гоаологичнн реперному лишь на 34-35%, что указывает на принадлежность их к одному виду.

Таким образом, таксономические исследования, вк..ичаащие в себя изучение нуклеотидного состава и определение степени подобия нуклеотидких последовательностей ДНК, не иогут играть существенной роли в дифференциации патогенных представителей рода Corynebacteriua. Кроме того, генотнпические свойства С. pseudotnbercolosis не связаны с фенотипическими, от которых зависят антигенные, патогенные и вирулентные свойства втаамоп.

В последние годы в связи с активным изучением патогенеза качеозного лимфаденита, разработкой принизнешшх методов диагностики и специфических средств профилактики, исслпдонпто

- iß -

¡'исунок 1. Дэндрограмма подобий нуклеотидных последовательностей ДНК втамнов С. pseudotuberculosis, выделенных от овец Омской области I II III Ю Группы

70,37

13.209, 09,404

214,29,146 74,404

101, 403, 203,402 407 410, 405,302 412 70

9,410,15, 212,295 226,281, 290

18,9

9В, 265, 425, 70, 212 50

Обозначения процента гомологии: 60-100;-- 40-60;---- 20-40;

- - 10-20.

ли все чаще стали обращаться к подсчету микробных тел в гнойном содержимом специфических очагов больных еивотных и в суспензиях, применяемых для экспериментального заражения. Так, например, в 1 грамме гнойного содеряимого очага у овец содервится от 1,2 х 10*6 до 5,2 х 10'7 микробных тел (Н. Hairn, I. Robertson, 1974) С. pseudotuberculosis, - у. коз от 1 х 10*5 до 1 х 10'9 колония-образувщих единиц, а оптимальная доза для экспериментального заражения у коз составляет 1 х 10*6 КОЕ (U.K. AshfaR, S.G. СаярЬеП, 1980), у ягнят - 3,2 х Ю'З - 3,2 х 10*6 КОЕ (Brofiden К.A., et al., 1984).

В гнойно-некротическом содеряимом больных овец мы установили 2,5 х 10*5 - 1,8 х Ю'С микробных тел в 1 гракие, что соответствует 4,8 х 10*5 - 6,5 х 10*4 КОЕ. Оптимальной дозой для экспериментального воспроизведения болезни на овцах является 12,5 х 10*7 микробных тел, или - 8,1 х 10*6 КОЕ. При чем, S-<J)opnii культур обрллуют докторцрнп больше КОЕ на твер-

дшс питательных средах, ч?а I- и Я-фориа. Это связано с более внрапенной г.ачоагглитинацией й- и 1-фари за счет на,д"лиа более толстого лнпидного слоя на поверхности клзтхя.

Таблица 2.

Иуклсотидний состав и степень подобия ДНИ коринефорвнах микроорганизмов

Виды аикроорганизмов ГЦ состав (кол.Х) X гомология.

С. bovis C.eaui С.pyogenes С. renale С. ho-ап|

С. bovis 43,6-70.0 100 9 7 а 12

С. equl 14.6 2 100 98 6 9

С, pyogenes 43.6 2 110 100 4 t

С, renale 59,9 2 S 0 100 70

С. hoagi 63,9 3 3 3 02 100

C.pseudotub.

st. 214 47,0 21 1 2 5 1

эт. 410 52,8 2 1 4 4 а

st. 50 61,5 3 3 4 10 4

зт. 7 0 71,8 2 2 2 4 11

вт, 96 63,2 2 4 3 73 39

ат.70/33 71.4 3 2 5 3 3

Именно липидный слой придает штаммам С. рзеш!а{.цЬегси1о-515 характерные свойства К-, 1-, $-форы и заадает микроорганизма от неблагоприятных факторов внесней среды и в организме пивотного. Так наприыер, повызешше температщш действует в одинаковой степени губительно на любуй форму, но к ультрафиолетовым лучаи более устойчивы й-формы; антигенные (в частности риогенные), патогенные и вирулентные свойства культур й-фора значительно превосходят Б-формы, Одна:« к антибиотикам более резистентны 5- и 1-форка,

В больиинстве поставленных экспериментов по изучении биологических свойств возбудителя казеознг-о лимфаденита с учетоц фено- и генотипических свойств, ны окончательно убедились в существовании различных фора (й-, 1-, $-). Значение этого фототипического признака, оказалось более существенно.

чем принадлежность микроорганизма к той или иной генетической группе, А следовательно, утверждение H.R. Сагпе, С1933 ) об отсутствии изменений форн колоний, соответствувцнх вероховатокз (Г.) ои гладкому (S) типу - нагими исследованиями не подтвергдается. Причинами, не позволяющими исследователям выделять возбудителя казеозного лимфаденита б различных формах, яелязтся: а) слонивяиеся в течение многих лет критерии, по которой проводится идентификация выделенных втамйоа, и наличие эталонных втаымов, по которым ведется сверка фенотипических свойств; б) - выделение его на агаро-внх или бульонных средах с добавлением сыворотки крови sh-вотных, что не позволяет дифференцировать :;оринебактерии от представителей других родов. Мы в своих исслрдпваниях при выделении возбудителя инфекции из нативного материала использовали кровяной- или сывороточно-теллуритоЕцй агар', который задерживает развитие посторонней микрофлоры, не оказывая зааетного неблагоприятного воздействия на коринебакте -рии.

2,2.3, Эпизоотологические особенности каээозного лимфаденита овец

2.2.3.1. Значение R-, 1-, S-фори С. pseudotuberculosis в патогенезе и эпизоотическом процессе

Наличие у С. pseudotuberculosis свойств R-, 1-, S-фори имеет существенное значение в патогенезе инфекции' и эпизоотическом процессе. В острых опытах на овцах - образование в органах и тканях специфических гнойно-некротических очагоз отмечали на введение нтаммов, относимых по фенотипу к R- и иногда - I-формам. При заражении овец культурами со свойстваыи S-форм - патологоанатомическим макроскопическим исследованием чаце не удавалось обнаруживать специфические очаги. Хотя эти животные в аллергической пробе давали положительные реакции, имели признаки сенсибилизации в РБТЛ и при гистологическом исследовании oprauots и тканей. Зтот факт наводит на мысль, что в S-форме микроб может пребывать в организме иивотного, не вызывая заболевании, т. е, проявляет призиаки условно патогенного микро&п, однако не исклпчена

возмовиость eru перехода из S-формы - в R-фарму. Такуа возможность подтверждав многократные пересевы R-фори. на искусственные питательные среда, в результате которых »икрой приобретает свойства S-форм, не изменяя свои генетические особенности.

Более того, патогенные для лабораторных гизопш свойства птамаа й 50 S-форвн утрачивались в тече,:"!?. 3-4 месяцев его пробивания и почве, а культура сохраняла пл-неспособность 7 месяцев (срок наблюдения).

На объектах внеяней среды (дерево, сено, солома, фекалии) С. pseudotuberculosis остается жизнеспособной более продолжительное время (от 7 до 55 дней), если содержимое абсцесса саевать с измельченными объектам, чем на поверхности (от 1 до 8 дней) (j.L. flugustine, II.H. Renshan, 1985). В наянх исследованиях чистые культуры С, pseudntuberculosifl с биологической зацнтой (20%-ная сыворотка крови) сохраняла жизнеспособность в почве и сене - 100 (срок наблюдения), в подстилке, опилках, воде, на стекле и бетоне - 60, на шифере - 20 суток.

Гнойное содвргичое абсцессов, как пани установлено, является оптимальной биологической защитой для кикроба этого вида. Следовательно во вневней среде микроорганизм аояет сохранять жизнеспособность весьма продолжительное вре«ч (возйозио несколько лет), тем более в условиях Сибири, где температура в течение вести месяцев (ноябрь-апрель) дераитса ниже шля н прекрасно консервирует этот материал.

Микроб, находясь в организме овцы в. условно-патогешши состоянии, или попадая в него из объектов окруяаящей среды в авирулеНтном состоянии, аозет вызвать заболевание при ка-клх-то благоприятных для перехода из S- в R-;$opny условиях. Такими условиями аогут быть - длительная транспортировка или перегон животных Cd.ft. Зегидевич, 19S8), неудовлетворительные условия содержания и кормления (К.Ф. Ламихов, 1954). Однако. на паи взгляд, одним из оснивных предраспоыгаи«их факторов является повыиение солнечной активности, в результате которой в орг-лчизме животных значительно нарастает содержание фагоцитов с одновременным снижением ик ак'ивности. Такие фагоцит г : г прекрасные вестом для размножения возбудителя инфекции. С тпилшшоы благоприятных цсловий дяа

развития, вероятно, микроб переходит кз S- в R-форму, чей и объяснязтся более тяЕелые повреждения органов и тканей гной-но-некротнческики очагаыи в годы нарастания солнечной активности С!980, 1989гг.).

2.2.3.2, Влнгниб природных факторов на эпизоотический

процесс при казеозноы лимфадените овец Ццогофакторкйи корреляционным анализоа удалось установить полокительнуэ взаимосвязь меяду преваленотностьс ту® овец казеозшш лимфаденитом - с выходом ягнят на 100 овцематок, верстной продуктивностьв и обратнуи вс.:"*освязь со сиертностьг овец в хозяйствах Саской области в период с 1987 по 1992 года (табл. 3).

Таблица 3.

Корреляционная связь ыевду показателями солнечной активности, продуктивностью, превалентностьп. По овцеводческие хозяйствам Омской области С!987-1992гг.)

Показатели Коэффициент корреляций (г)

й Б В Г д

й. Солнечная активность хххх 0,55 -0,22 0,70 0,00

Б. Превалентность тун КЛД 0,55 ХХХХ -0,36 0,65 0,47

В. Смертность озец -0,22 -0,36 ХХХХ -0,76 -0,78

Г. Настриг нерсти (ч/в) 0,76 0,65 -0,76 ХХХХ 0,60

д. Выход ягнят на 100 о/м 0,00 0,47 -0.7G 0,60 ХХХХ

Примечание: А - Солнечная активность, внраяенная в числах Вольфа; Б - превалентность (поравение) туе гнойно-некротическими очагами; В - количество погибних в области овец по разным причинам, выравенное на 100 яивотных стада; Г - средний выход керсти (в мнтои волокне) на одно Енвотное; Д -средний вы/-«д ягнят на 100 овцематок.

Средшт степень корреляционной зависимости установили ме«ду показателями солнечной активности и поражением овец совхоза "Екатеринославский" лимфаденитной формой заболевания (табл. 4), Кроме того, превалентность на 100 кнвотннх с лим-

фаденитной формой болезни п период с 1979 по 1992гг. имела положительную корреляционнуп связь (г=0,88) со смертностью овец разного возраста, погибяих от казеозного лимфаденита, и отрицательная взаимосвязь со смертностью всего погибвего в хозяйстве нолодняка (г= -0,52), а также - верстной продуктивностью яивотнях всего стада (г= -0,39), Показатели смертности овец от казеозного лимфаденита имели отрицательную корреляции с шерстной продуктивностью (г= -0,49), смертностью взрослых опец -0,41) и молодняка (г= -0,40). Поспедние показатели говлрят о том, что благопря проводимым в хозяйстве оздоровительным мероприятиям, количество больных казеозным лимфаденитом животных сокращается, однако увеличивается смертность обусловленная другими причинами.

Таблица 4.

Взаиаосвязь показателей солнечной активности, заболеваемости, снертности в совхозе "Екаторинославский", неблагополучной по казеозноау лимфадениту овец (197Э/92гг.)

Признаки Коэффициент корреляции (г)

А Б В Г Д Е

й. Солнечная активность ХХХХ 0,46 0,25 0,19 -0,05 -0,00

Б. Превалентность КПД 0,4В "ХХХХ 0,88 -0,23 -0,52 -0,39

В. Смертность от КЛД 0,25 0,88 ХХХХ -0,41 -0,40 -0,49

Г. Смертность (взрослые) 0,19 -0,23 -0,41 ХХХХ 0,23 0,59

Д. Смертность (молодняк) -0,05 -0,52 -0,40 0,23 ХХХХ -0,04

Е. Выход жерсти на 1 н-е -0,00 -0,39 -0,49 0.59 -0,04 ?.Я(Х

Примечание: А - Солнечная активность, выраженная в числах Вольфа; Б - превалентность казеозным лимфаденитом, установленная по результатам клинического осмотра, выраженная на 100 животных; В - смертность от казеозного лимфаденита, выраженная на 100 животных; • Г - количество взрослых животных, погибяих в совхозе за год, выраженное на 100 овец стада; Д -количество молодняка, погибаего по разным причина» за год, выраженное на 100 животйых стада; Е - средний выход жерсти в мытом волокне на одно животное стада.

- 24 -

2.2.3.3. Влияние хозяйственных и технологических факторов на эпизоотический процесс при

казеозном лимфадените овец

Помимо природно-климатических - велика роль организационно-хозяйственных и технологических условий в распространении инфекции С. pseudotuberculosis. Прежде всего нанесение больиого количества ран во время стрижки увеличивает вероятность проникновения возбудителя инфекции в организм. В условиях производства на значительном количестве животных установили, что при стрижке раны чаце наносятся в области вей и передних конечностей, причем чаче с левой стороны тела. Эти данные с высокой степенью коррелируют с казеозно-некроти-ческим поражением поверхностных лимфатических узлов.

Не меньве вероятность заранения через поврежденную и даже неповрегдеинуа кожу - в ыомент противопаразитарного купания овец, проводимого с наруиением технологии (ранее, чей через две недели после стрижки). Возбудитель казеозного лиифадени-та в противопаразитарном растворе, содержащем ыыыьяк, остается жизнеспособный в течение 24 часов (М.Е, Nairn, I.P. Robertson, 1974), а в зиульсии креолина с гексахлораном, применяемой в хозяйствах Опекой области, - в течение вести суток (срок наблюдения). Замена противопаразитарного купания в ваннах - опрыскиванием - значительно сокращает количество животных в отарах с клиническими признаками лимфаденитной формы заболевания.

Несоблюдение правил асептики и антисептики при стрижке, обрезании хвостов, кастрации, окоте; несвоевременная и некачественная дезинфекция коиар, стригальных пунктов, мест тыр-ловок способствуют более вирокому распространении заболевания в стаде.

2.2.3.4, Значение сенсибилизирующих свойств С. pseudotuberculosis в эпизоотическом

процессе и в диагностике инфекции " Как уже упоминалось, независимо от фенотипической формы, в которой пребывает микроорганизм, в организме хозяина развивается клеточная йнщшаа реакция (сенсибилизация). Причен

заражении S-формами - клинических и патологоанатомических

изменений монет не вызывать. При повторном поступлении возбудителя инфекции в сенсибилизированный организм моает развиться состояние аллергии немедленного типа, которое приводит иивотное к гибели. В частности, в опыте у псти овец за-раиенных С, pseudotuberculosis отмечали аллергическуп реакции немедленного типа на введение "гретого" (убитого нагреванием) антигена, причем одно яивотное погибло через В пасов после введения антигена, а остальных удалось спасти парэнте-ральным введением димедрола и кофеина.

Не исклпчено, что в условиях производства в неблагопо- . лучных по казеозноцу лимфадениту хозяйствах от анафилактического шока погибает значительное количество вивотных. В хозяйствах Омской области наибольвее количество овец погибает в период стрижки, чем в остальное время года. Так например, спустя несколько часов после стрияки в совхозе "Екате-ринославский" набладали несколько случаев гибели от анафилаксии овец, ииевпих клинические признаки лимфаденитной формы заболевания.

Наличие у зтаммов С. pseudotuberculosis сенсибилизирующих свойств дало основание апробировать аллергический метод диагностики. В опытах на экспериментально- и спонтанно зараженных овцах установили возможность приаенения с этой целью "фенольного" антигена и "прейсцнокардина Е". Следует отметить, что эти свойства ндентичнч у ятаммов отнесенных по фе-нотипическин свойствам к R-, 1-, S-формам и генотипическим свойствам к трем основным группам. Однако для приготовления аллергена больже подходят итаммы, пребывающие в R-форие, так как антигенные ьвойства у них более выразены. Препарат "прейсцнокардин Е" из итаима N 70-R выявляет инфицированных С, pseudotuberculosis животных как среди овец мериносовой породы в-Омской области, так и цигайской породы в Липецкой области. Это говорит об идентичности антигенных свойств, вызываниях клеточнуп икмуннув реакции в макроорганизме, зтаммов возбудителя инфекции, ■ циркулирующих в регионах отдаленных более чем на 3 тнс. километров друг от друга.

Аллергическим методом диагностики можно выявлять не только больных животных, но и сенсибилизированных S-формами гтаммов С. pseudotuberculosis, что делает данный метод еще более ценным.

- 26 -

2.2.4. Система противоэпизоотических и крофилактических ыероприатий Отсутствие привизненных методов диагностики, за исключением выявления животных иетодом пальпации пораженных поверхностных лимфатических узлов, затрудняет проведение противоэ-пизоотических иероприптий в неблагополучных по казеозноыу лимфадениту овцеводческих хозяйствах, В частности, предложенный нами в 1980 году комплекс профилактических и противо-эпизоотичоских мероприятий, основанный на выявлении больных животных иетодом пальпации поверхностных лимфатических узлов с последуюцей изоляцией и убоем, а также проведение ветери-нарно-санитарных мероприятий в период стрижки и протнвипара-зитарного купания, позволил в совхозе "Екатеринославский" значительно снизить превалентность овец лимфаденитной формой заболевания (16,5 - 1980г. - 0,29 - 1990г.). Об эффективности этих мероприятий можно судить по пикам превалентности (16,5 - 1980г., 4,7 - 1983г.), которые, совпадая с периодами нарастания солнечной активности, указывант на действенную роль мероприятий, в сравнении с природный фактором (солнечной активность!)) (Рис. 2).

- 27 -

Применение "прейсцнокардина Е" для аллергической диагностики иазеозного лимфаденита и неблагополучных отарах показало превосходство этого метода над пальпацией в 6,6 раза. То есть, аллергическим методом удается дополнительно выявить 06,Э/£ животных, у которых заболевание протекает в скрытой форме, Метод позволяет в комплексе с клиническим осмотром (пальпацией) выявлять больве инфицированных нипотных, что приводит к сокращении сроков оздоровления стада.

Однако, только в'явлением и удалениям из общего стада источника возбудителя инфекции добиться оздоровления невозможно. Необходим комплекс санитарных мер по уничтожения микроорганизма во Внеиней среде и по недопущении его проникновения в организм восприимчивого животного.

На ная взгляд основой могут слуяить мероприятия, направленные на предотвращение травматизма коки овец в период стрияки; антисептическая обработка всех ран, как нанесенных стригальными машинками, так и хирургическим, зоотехническим инструментом при кастрации, обрезании хвостов, маркировке яивотных. Вторым не менее ваанан моментом является правильно организованное и проведенное противопаразитарное купание овец, особенно после стрияки. Не следует купать овец в про-тивопаразитарных ваннах ранее чем через 2-3 недели после стрияки, тем более в ваннах с несменяемым противопаразитар-ным раствором. При необходимости купание мояно заменить опрыскиванием свеяеприготовленными растворами.

Сравнительно высокая устойчивость С. pseudotuberculosis к воздействии факторов внеиней среди, способность длительное время сохраняться в почве в авирулентном состоянии, наличие хоровей биологической зациты в виде гнойного содеряимого очагов - вынуадаот обратить значительное внимание на вопроси санации объектов овцеводства. Особое внимание необходимо уделять дезинфекции стригальных пунктов в перийд стрияки, дезинфекции ковар перед окотом и перед постановкой овец на зимне-стойловые условия содервания. При выборе средств дезинфекции, их концентрации и экспозиции следует учитывать, что возбудитель казеозного лимфаденита по устойчивости к де-зосрсдствам занимает промежуточное положение, меяду стафилококком и кишечной палочкой. Контроль качества дезинфекции слодуот проводить по стафилококку.

- 28 -

2.2.5. Иммунитет и иммунизация

Исходя из весьма широкого распространения казеозного лимфаденита (все овцеводческие хозяйства Омской области неблагополучны по инфекции; кроме того, у овец поступающих для убоа на мясокомбинаты Омской области из хозяйств Тюменской и Новосибирской областей Российской Федерации, Кокчетавской и Павлодарской областей Казахстана, мы наблюдали характерные для заболевания натологоанатоыические изменения) можно предположить, что возбудитель инфекции весьма распространен во внешней среде и присутствует повсеместно. При данных обстоятельствах только воздействием на первые два звена эпизоотической цепи нельзя добиться стойкого благополучия. Необходимы специфические средства профилактики. Над этой проблемой продолжительное время работают ученые в США, ВАР, Австралии.

Значительная часть исследователей отдант предпочтение в своих исследованиях изучении гуморального иммунитета. Однако клеточный иммунитет может быть более важным, но пока не удается полностью оценить его значение и все неудачи можно отнести к неправильным экспериментальным приемам и недостатку реагентов, способных выявлять клетки, участвующие в иммунологической реакции.

Анализ данных зарубежных исследователей показывает, что до настоящего времени в мире не разработано биопрепарата, позволяющего. вызывать стойкий иммунитет у овец и коз против инфекции С, pseudotuberculosis. В ряде работ исследователи приводят информации, которая позволяет выбрать направление в изготовлении эффективного биопрепарата для специфической профилактики казеозного лимфаденита ц мелкого рогатого скота; В частности, рядом авторов установлено, что приготовленный из экзотоксина возбудителя анатоксин дает возможность предохранять-животных от последунцего поступления экзотоксина в организм. Однако применение анатоксина не позволяет создать невосприимчивость организма к антигенам самой микробной клетки возбудителя.

." Производились исследования по определению иммунизируюцей активности стенок микробных клеток, живых ослабленных штаммов возбудителя и инактивирпванных. "становлено, что стенки микробной клетки обладаят определенными антигенными евойст-

вани, но препараты, приготовленные из них - иенее активны, чем препараты из убитых и яивых ослабленных культур. Остановлено также, что вакцины из ослабленных зтаммев С. pseudotuberculosis по своим иммуногенным свойствам не превосходят препараты из инактивированных итамаов, применяемых в сочетании с депонирующими адьнвантами. Более того, живые вакцины вызыв-зпт образование в лимфатических -узлах и паренхиматозных органах характерные для заболевания некротические очаги. Однако вакцины нз живых и из инактивированных йтаымов не позволяют создать напряженный иммунитет. Поэтому, зарубежные исследователи много работ посвятили изучении возможности использования различных депонирующих адызвантов и привли к заключению, что значительными антигенными свойствами должны обладать вакцины с сочетанным применением гидроокиси алюминия и сапонина.

Мы в своих исследованиях по разработке специфических средств профилактики казеозного лимфаденита опирались на работы этих исследователей, Инактивированпуп вакцину готовили из птамиа Н 70-R, обладающего более вырааенными антигенными свойствами. Кроме того, пытались изготовить препарат, который содержал бы и анатоксин, йикроб и его экзотоксин инакти-вировали формалином, концентрировали осавдениеи гидроокисью . алюминия и добавляли адьпвант - сапонин. В острых опытах на овцах установили, что свежеприготовленный препарат иожет защищать овец от вирулентной культуры возбудителя инфекции если его вводить двукратно с интервалом^ две педели в дозе не более 1,5 мл. Более высокие дозы, более продолжительные интервалы между введениями вакцины, вакцины с длительным сроком хранения - не только не защищают организм, но и делают его более восприимчивым.

Введение овцам инактивированной вакцины вызывало в органах и тканях перестройку защитного характера, но во всех случаях экспериментальное заражение сопровождалось развитием специфических гранулем, характерных для данной болезни, -Кроне того, морфологические изменения с трудом можно было разделить на иммуноморфологические - и процессы, отражающие реакцию гиперчуствительнасти замедленного типа, так как эти два нроцпсса взаимосвязаны и развивантся одноврекенио.

Порвим при тком. иммуногенеза в организме овцы- после

введения вакцины и экспериментального зарааения вирулентной культурой С. pseudotuberculosis является интенсивная макрофага льная реакция. Резкое увеличение уагоцитируацих клеток во всех органах и тканях (особенно в коже в месте введения культуры или вакцины), в лимфатических узлах, вероятно, связано с выделением микробом экзотоксина. В местах присутствия С. pseudotuberculosis его экзотоксин окисляет сфингоыиелины и лизофосфагидилхолшш с образованием холина (ft. Soucek , et al., 1371), кроме того, макрофаги, выделяя медиаторы воспаления, повывают порочность кровеносных сосудов и мигрируит в ткань к источнику хеиигоксического раздражителя. При исследовании ыы отмечали высокую насыщенность фагоцитов гликогеном, однако большая их часть в очагах находилась в состоянии некробиоза или некроза. Особенно это явление ярко выражено у нейтрофильных лейкоцитов в местах формирования гранулем. Среди фагоцитирующих клеток в тканях преобладаит нейурофиль-ные лейкоциты. Но через 3-4 недели после зарааения вакцинированных овец ярко выражена и манрофагальная реакция. Крупные макрофаги (в частности ыоноциты) были более функционально активны, о чем свидетельствовало накопление гликогена в их цитоплазме и обилие цитоплазыатических мостиков в клетках, которые в больших количествах присутствовали в паренхиме легких, лимфатических узлах, печени, селезенке.

Некоторые исследователи (Ф. Гауровиц, 1969', ft.fi. Бойко, Е.П. Санегина, 1991) считают, что после фагоцитоза антигена макрофагами, в лизосонах которых он подвергается обработке, антиген становится более иммуногенным или сохраняет некоторую иммуногенность. Однако иммуногенность антигена теряется при поглощении его полиыорфноядерными нейтрофилаыи (микрофагами), которые вероятно полностью разрушают антиген. Л поскольку сегментоядернне нейтрофилы преобладают в клеточном субстрате в очагах скопления возбудителя казеозного лимфаденита, то возможно они является причиной снижения иммуноген-ности примененной нами вакцины.

tie только результаты гистоморфологических исследований указывают на значительную роль фагоцитоза в процессе выработки иммунитета у овец на инактивированнув вакцину, но и данные гематологических исследований. В большинстве опытов после инъекции вакцины достоверно увеличивался уровень ыоно-

цитов, нейтрофилов в периферической крови. Эти клетки выполняли фагоцитарную функции при внедрении в организм инфекционного агента.

Антигеннуп информацию от макрофагов получают Т- и В-лим-фоцитн и начинают дифференциацию иммунокомпетентных клеток. Т-лимфобласты продуцируют макрофаги, гранулоциты, лимфоциты, а из В-линфоцитов дифференцируются плазматические клетки не способные к дальнейшему делении, но синтезирующие антитела, являясь субстратом гуморального иммунитета,

Т-лимфоцитн трансформируются в клетки нпунологической памяти и длительно сохраняют информацию об антигене. В случае повторного внедрения антигена возникает вторичный ответ, который характеризуется более быстрым и интенсивным развитием иимунны* реакций СЛ.Н. Фонталин, 1988).

Наряду с макрофагальной реакцией в лимфоидных образованиях отмечается пролиферация иммуносинтезируицих клеток. Так, например, в мякотных ннурах, синусах, первичных и вторичных фолликулах лимфатических узлов у опытных овец наблюдали митозы в клетках, увеличение числа бластных форм омфо-цитоп, проплазмоцитав и плазмоцитов. Все эти тимусзависимые и независимые клетки рециркулируюцие с лимфой попадают в кроветок, совервая постоянный круговорот (Я.Дж. Герберт, 1974). Подобные процессы наблюдаются и в селезенке С А.Я. Фриденптейн, Я.Л, Чертков, 1969)',

Во всех случаях кроме указанных изменений, характерных для иммунной реакции, обнаружены типичные для данной болезни гранулемы в лимфатических узлах, легких, печени, коае. В отдельных случаях обилие гранулем не позволяет дифференцировать поствакцинальнай процесс от инфекционного, так как патологические изменения имеются и в лимфатических узлах п в органах. .

Наличие гранулем в месте введения вирулентной культуры С. pseudotuberculosis и в отдельных лимфатических узлах иммунизированных овец мокно- рассматривать как защитную реакцию. В этих случаях очаг инкапсулирован, хотя наличие возбудителя или его продуктов жизнедеятельности несомненно оказывает сенсибилизируюцее действие на организм. При гистологическом исследовании признаки аллергии аросвлявтся следующими изменениями: 1) мелкие крипеносныв сосуды инъецированы, эн-

дотелий их набухвий, а вокруг диффузно или очагово располо-аены клетки (моноциты, эозинофилы, средние и малые лимфоци-тц, плазмоциты, реже - тучные клетки). Иногда деструктивные изменения выражены очень интенсивно и сопровождаются закупоркой сосудов или кровоизлиянием, особенно это часто можно наблюдать на слизистых оболочках. По мнению ряда исследователей (Р.В. Петров, 1982; Я.Е. Поляков, 1980; Л. йегер, 1386) эти изменения являются показателем аллергической настроенности организма. Так, например, количество эозинофилов, содержащих целочную фосфотазу, пероксидазу, гидролазу, резко возрастает когда в организме одновременно присутствуют 1в Е антитела и антиген. В тучных клетках накапливается гепарин, Гистамин, серотонин, которые высвобождаются при реакции антител с реагинами. Число тучных клеток увеличивается в месте аллергической реакции - в коае или слизистой оболочке. Малые лимфоциты - основные клетки в иммунологической структуре и кроме того, что они носители иммунологической памяти, они еще эфферентные клсгки в реакции гиперчуствительности замедленного типа. Сенсибилизированные лиыфоцити трансформируются в бласты, которые попадая в кровь действуют в качестве клеток эффекторов в реакциях с антигеном. Одним из признаков сенсибилизации и участия в аллергической реакции организма малых лимфицитов является их очаговое скопление на границе кортикальной и мозговой зон, а также в синусах, которые вероятно являются воротами для выхода этих клеток в кровь, где и происходит их взаимодействие с антигеном. Именно такие изменения мы отмечали при гистологическом исследовании материала от иммунизированных и затем зараженных овец.

- Наыи исследования но разработке вакцины носили чисто рекогносцировочный характер, но получены весьма полезные данные. В частности, удалось установить, что инактивировашше вакцины, которые при большинстве инфекционных болезней если и не приносят пользы, то не приносят и ощутимого вреда для организма животного; при данной инфекции могут нанести боль-аой вред. По нлмему мнении это заключается в том, что убитая микробная клетка обладает сенсибилизирувцимн свойствами, а следовательно кадие новое поступление антигена в макроорганизм сопряжено с активной наработкой элементов клеточного иммунитете! и прежде всего - незрелых фо^и фагоцитов, г.огирмо

становятся лепюй добычей и прекрасной средой для развития вирулентных культур, что приводит к образованию больиего количества гнойно-некротических очагов, по сравнению с животными не обработанными такой вакциной. Это озн_чает, что к работам по применению корпускулярных инактивироианных сакцин следует подходить с больвой осторожностью.

Опыты по применению инактивированных вакцин доказали важную роль клеточного иммунитета при казеозном лимфадените. Реиить проблему специфической профилактики казеозного лимфаденита будет очень не просто, поскольку при данной инфекции прослеживается аналогия, как и-при инфекции И. tuberculosis, но при этом, кроме всего прочего, наслаиваются все последствия связанные с продукцией микробом экзотоксина, на который в макроорганизае может формироваться гуморальный иммунитет. Последний может лишь в некоторой степени сдерживать распространение вирулентного возбудителя в макроорганизме, который при этом вполне может быть источником воз'будителя инфекции, выделяя микроб с гнойным содержимым внутрикожных и подкожных абсцессов.

Невзирая на всю сложность проблем, с казеозным лимфаденитом в ближайяие десятилетия предстоит вести серьезную .борьбу. И не только потому, что заболевание приводит к гибели животных и уже сегодня занимает одно из первых мест в списке болезней служащих основной причиной гибели. И не потому, что с больных овец недополучаит версть, мясо, ягнят, а потому, что инфекции подвержены наиболее ценные высокопродуктивные животные и это сдерживает племенную работу в овцеводческих хозяйстнах. 9 нас имеются основания считать, что инфекция связана с породными качествами животных и особенно распространена таи, где проводится больная племенная работа. Примером току может слузить совхоз "Екатеринославский" Омской области, в котором болезнь буквально свирепствовала в конце 70-х - начале 80-х годов, и который в настоящее время является племенным, поскольку с овец этого хозяйства настриг шерсти болыяе чем в остальных совхозах области. Примером может служить и совхоз "Кировский" Липецкой области, который также является племенным.

- 34 -ВЫВОДЫ

1. Разработан метод бактериологической диагностики казе-озного лимфаденита овец, суть которого заклвчается в том, что при посеве гнойно-некротического содераиного очага на кровяной теллуритовы^ или сывороточно-теллщштовый агар изолируются культуры С, pseudotuberculosis в R-, 1-, S-формах. более высокой вирулентностью для лабораторных животных и овец обладают R- и I-формы культур, менее вирулентны S-фор-мк.

2. Фенотипические свойства атаммов С. pseudotuberculosis - вариабельны, но при соответствующей статистической обработке показателей установлена корреляционная зависимость между няни. Предловена математическая модель, позволявшая по набору фенотипических свойств выявлять итаммы с наиболее выраженными антигенными свойствами, что подтверждает взаимосвязь фенотипических свойств микроорганизмов с антигенными.

3. Нуклеотидный состав ДНК атаммов, выделенных от больных овец, ранжируется в пределах от 41,4 до 76,? иол.'/ ГЦ. лроме того, на данном этапе исследований не удалось установить связь меяду показателями нуклеотидного систава ЛИК с фенотипическиыи и антигенными свойствами. По степени подобия пуклеотиднык последовательностей ДНК установили три взаимосвязанных,. на уровне 10-202, группы втамиов Г. pssudotu-berculogis,

'4. Процент гомологии (98-100) установлен для С. equi и .С, pyogenes; - (76-100) для С. reaale и С. hoagi; - (39-3?) для С. hoagi и С. pseudotuberculosis. Полученные данные уна-зывавт на невозможность использования этого метсда с двфре-ренциально-диагностической целью, а саа молекулярно-биологи-чзский метод, при дифференциации представитеяей рода Согу-nebacteriua, - малоинформативен.

5. С. pseudotuberculosis сохтняш визпеспосоёностъ: а) чистые культург в - течение 10-15 минут при температуре 55'С, - 2-3 минуты - при 58'С; б) с суспензии гноиього материала - е течение 20 мищн при температуре 55'С, - 4-5 минут при 58'£, - одной шшут - при fiO'C; в) в сене - 160. в подстилке, опилках и водн - 60, на вифоре - 20, на бетоне и

стекло - 60 суток. К ультрафиолетовым луча» более устойчивы й-формы;

На поверхности объектов Сяелезо, дерево, бетон) независимо от фено- и гепптипических свойств уменьиается продолжительность иизни микроба пропорционально повышения теьпера-туры окружащей среды, D почве количество жизнеспособных клеток в течение семи месяцев укеньвается в 20 раз на поверхности и на глубине 20 см; в 4 раза - нэ глубине 5 см; в 2,5 раза - на глубине 15 см. Вирулентные свойства итанмов S-форм утрачиваится через 3-4 месяца.

Возбудитель инфекции чувствителен к хлорамину, феносмо-лину, глутаровому альдегиду; менее чувствителен к формалину, щелочам, хлорной извести, лизолу. Фено- и генотипические характеристики ятаммов не связяни с их резистентностью к химический средствам дезинфекции, по устойчивости к ним иикроб занимает промежуточное положение между Е. coli и St. aureus.

В. В патогенезе казеозного лимфаденита микробная' клетка занимает более значительное место, чем вырабатываем ев экзотоксин. Парзнтеральное введение живых неослабленных (R-форм), живых ослабленных (S-форм) и инактивированных втамиов С. pseudotuberculosis вызывает сенсибилизацию организма овоц и делает его более чупствительным к повторному поступлению антигена, что проявляется гиперчувтвительностьв замедленного типа (инфекционная аллергия) и немедленного типа (анафилактический шок) или приводит к генерализации инфекции.

7. В эпизоотическом процессе S-формы С. pseudotuberculosis играют важную роль. В объектах внешней среды они через 3-4 месяца утрачивают вирулентнтные свойства, но длительное время могут сохранять жизнеспособность и антигенные свойства. Попав в организм животного - сенсибилизируют его,

В. U С. pseudotuberculosis не удалось обнарувить общих антигенных свойств с И. tuberculosis и И, paratubercu-losis, на что указывали некоторые исследователи. Более выра-кенными антигенными свойствами в аллергической пробе обладают Р.-формы культур. Антигенные свойства ятаммов С. pseudotuberculosis, циркулирующие в Омской области у мериносовых овец и в Липецкой области у цигайских овец, идентичен, что дает основание к использованию единого аллергена для

диагногпши казеозного лимфаденита в разных регионах России к за ее пределами,

9. Казеозный лиьфаденит зарегистрирован во всех специализированных овцеводческих хозяйствах Омской области. Прева-лентность туя специфическими для инфекции очагами составляет 6,6 на 100 исслодовэкных туи, заболеваемость 6,10 - 6,97, смертность 2,40 - 3,45; летальность 38,10 - 49,50%. Распространение возбудителя инфекции связано с хозяйственной де-ятельностьв человека и природно-климатическими условиями, ь частности с солнечной активностью, что подтверждается корреляционной зависимостью со средней стэпеньв достоверности (г=0,60). Нарастание солнечной активности сопровоздается увеличением числа заболевнях животных с болев тяжелыми поражениями.

10. Источником возбудителя инфекции являются больные овцы, от которых коринебактарии выделяются во вневкюя сре^у с гнойным содержимым вскрывзяхся абсцессов кожи, подкожной клетчатки, поверхностных лимфатических узлов. Факторами передачи служат объекты вненней среды - почва, подстилка, оборудование коиар к стригальных пунктов, инвентарь, стригальные орудия, протквспаразитауный купсчный раствор и др. Зара-аение восприимчивых сивотных происходит «ре^кучестзбнно через раны, наносимые стригальными мавиикаыи, хирургичгеким и зостехническин инструментои, а также - через неповрежденную кожу при противопаразитарном купании. Болезнь характеризуется стационарностью и выраженной летне-осенней, иесен-не-летней сезонностью, что сопряжено с массовым травматизмом овец в период стрижки, противопаразитарного купания и окота.

- 11. Неблагополучие по казеизноиу лимфадениту отрицательно- сказывается на экономическом состояли овцеводческих: хозяйств. 9 больных овец снижаатся оплодотвсряемость (на 5,72): чаще наблюдаются аборты (на 4,?^), рождение мертвых ягнят (на 15,BZ) и гибель 5;гнят до зтбивки ( на 41,12). Шерстная продуктивность (в иытзм волокне) снь^зется на 0,4 кг. До 6ÖZ убытков, наносимых болезнью, приходится на гибель овец, 10* - на утилизацию туи, оргаьоь и тканей при L'öot, 29Z - на недополучение нерсти, 1,3'Х - на недополучение приплода, Установлена корреляционная зависимость между прева-лрнтностью ту* специфическими для инфакцки очагами - с выхя-

дои ягнят на 103 овцематок (г=0,47), верстной продуктивностью (г-0,65? и отрицательная зависимость со смертность» свец Сг= -0,36).

Ежегодный экономический ищерб, наносимый казеозным лимфаденитом свцеводствц Омской области, составляет 1397 тыс. рублей, а ущерб на одно заболевшее животное - 24,89 руб (в ценах 1983 года),

12. Оздоровление неблагополучных по казеозному лимфадениту овцеводческих хозяйств следует проводить путем систематических диагностических исследований с использованием кли-кико-оллергического метода, изоляции и последующего убоя больных и положигсльно реагирующих животных. Комплекс вете-ринарно-санитарных мор является неотъемлемой частью профилактических и оздоровительных мероприятий,

• ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДШЕНИЯ

/

1, Основанием к постановке первичного диагноза на казе-озный лимфаденит служит наличие в поверхностных лимфатических узлах С чаще поверхностных вейннх), в козе и подкожной клетчатке - подвижных, безболезненных, без повывения местной температуры, плотных очагов, ноторые иногда абсцедируют с выделением снетанаобразиого гнойного содержимого светло-зеленого или зеленовато-вептого цвета, не имеющего запаха. 3 погибзих овец или убитых с диагностическими целями инкапсулированное гнойно-некротические ачагк чаче располагаются в легких, лимфатических узлах средостения и бронхиальных, в печени. Значительно реке аналогичные очаги можно обнаружить в почках, сердечной мылце, селезенке и др. органах и тканях. Кро*е того, в ранее благополучном по инфекции С.pseudotuberculosis пункте осногаиием к подтверждении диагноза может служить наличие положительных аллергических реакций на вндт-рипояное вчеденке, разработанного нами препарата "прейецно-кардин Е". • .-

2. Для подтверждения диагноза гнойно-некротическое со- . деркимоч очага следует высевать на среды с теллуритом калия (КТР, ГГЙ). Посевы культивировать при 37'С.в течение трех суток с последующим пересевом на МПА и МПБ. При дифференциации С, psflud" nhe'rculnsis от патогенных для человека и жи-

нотных представителей рода СогупеЬас1ег1ив обязательно учитывают вид животного, от которого получен патологический материал, физические качества этого материала (цвет, консистенция, запах), морфологические, культуралыше, биохимические, патогенные, токсигешше и вирулентные свойства выделенной культуры, С использованием табл, 01 и 02 (приложение 3) можно определить вид микроорганизма.

3. После подтверждения диагноза бактериологическими исследованиаци пункт (отару) признаят неблагополучной по инфекции и проводят оздоровительные мероприятия, Причем аивот-ных, имешцих специфические очаги (как указано в п. 1) считают больными,

4. Иротивозпизоотические мероприятия должны быть основаны на систематических диагностических исследованиях (клиническое и аллергическое 2 раза в год); изоляции больных животных; соблюдения санитарных правил в период окота, стриж ки, противопаразитйрного купания; проведения санации ковар, стригальных пунктов, противопаразитарных купочных ванн, выгульных двориков и мест тырловок (с обязательным контролем качества дезинфекции по стафилококку).

5. С целью недопущения заноса возбудителя инфекции в благополучные по казеозному лимфадениту овец хозяйства и своевременной диагностики заболевания - ежегодно (через 1-2 месяца после стрижки) следует проводить клиническое и аллергическое исследование животных стада, а также всех вновь поступавцих в хозяйств^ овец.

6. Контроль за распространением болезни среди овец области удобней проводить по результатам ветеринарио-санитар-ной экспертизы туж при убое овец на мясокомбинатах.

СПИСОК ОПНБЛИКОВЙННЫХ РАБОТ, 0ТРЙ1ЩИХ ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Вашутин А.А,, Трофимов И.Г, Антигенные свойства итаммов возбудителя С, в аллергической реакции на экспери-

' ментально зараженных морских свинках /' Проблеммы интенсификации животноводства в Казахской ССР. ЧастьI, Алма-Ата, 1ЭВ6. С.101-102. .

2. Вааутин А.А., Трофимов И,Г. Антигенные свойства К-,

- 39 -

I-форм возбудителя казеозного лимфаденита овец // Эпизоотология, диагностика и профилактика инфекц. и инйяз, болезней животных: Меввуз. темат. сб. науч. тр./ ОмСХИ, - Омск, 1988. С.29-31.

3. Головко И. Д., Трофимов И.Г., Беляк М.И., Крикавцов И,В.

. Профилактика и меры борьбы с псевдотуберкулезом овец в

совхозе "Екатеринославский" Омской области // Информ, листок ЦНТИ Н 110, Омск, 1984.

4. Головко И.Д., Трофимов И.Г., Крикавцов И.В., Беляк М.И. Рекомендации по диагностике, мерам борьбы и профилактике псевдотуберкулеза овец Омской области // Инфекционные и паразитарные болезни с.-х. вивотных. Омск, 1983. С. 40-49.

5. Головко Й.Д., Трофимов И.Г. Псевдотуберкулез овец в совхозе "Екатеринославский" 1ербакульского района ' Омской области // Тр. ОмСХИ, - Омск, 1979, С. 4R-49,

6. Нобзев fl.fi., Колычев Н.М., Трофимов И.Г. Устойчивость коринебактерий, выделенных из гнойно-некротических очагов у овец, больных казеозным лимфаденитом, к повыиенным температура* // Бактериальные, вируСеые и паразитарные заболезаня с.-х. вивотных и птиц Сибири и Дальнего Востока: Сб. науч. тр. / ОмСХИ. - Омск, 1992. С. 7-9.

7. Колычев Н.Й., Трофимов И.Г., Ощепков В.Г, и др. Казеоз-ный лимфаденит овец // Ветеринария. N 11-12, 1993. С. 35-41.

8. Тарасова В.П., Трофимов И.Г. Гистохимические изменения в органах и тканях овец при казеозном лимфадените (псеьдо-туберкулезе) в эксперименте // Диагностика, лечение и патогенез инфекц. и инваз, заболеваний с.-х. вивотных. Омск, 1387. С. 72-76,

9. Трофимов И.Г., Беляк М.й. Диагностика и. ликвидация каэеозного лимфаденита (псевдотуберкулеза) овец // Омский ЦНТЙ, Информ. листок N 148, Омск, 1980.

10. Трофимов И,Г., Оорисенко И.С., Фомин Б.Й., йртввин С.К. Изучение генетических связей втаммов С.pseudotuberculosis, выделенных от овец Омской области // Эпизоотология, диагностика и профилактика инфекц. и инваз. болезней животных. Омск, 1993, СВ печати).

И. Трофимов К.Г., Udpacmiiio Я,С., Кисолжз Е.В., Забвлопшй

- 40 -

A.B. Колониеобразующая способность чистых культур С.pseudotuberculosis и концентрация ыикрооргаиизмов в гнойном содержимом специфических очагов при казеозном лимфадените овец // Бактериальные, вирусеые и паразитарные заболеваня с.-х, животных и птиц Сибири и Дальнего Востока: Сб. науч. тр. / ОмСХИ. - Омск, 1992. С. 38-41.

12. Трофимов И.Г., Ватутин А.Й, Изучение аллергического метода диагностики казеозного лимфаденита овец в эксперименте // Диагностика и профилактика инфекц. и инваз. заболеваний с.-х. животных в Западной Сибири: Сб. научн. трудов / ОмСХИ; - Омск. 1989. С. 15-19.

13. Трофимов И,Г., Важутин ft.ft, Казеозный лимфаденит у цигайских овец совхоза "Кировский" Липецкой области // Эпизоотология, диагностика и профилактика инфекц. и инваз. болезней животных, Омск, 1993. (В печати).

14. Трофимов И,Г., Ваиутин Да.А., Тарасова В.Н, Инфекционная аллергия при казеозном лимфадените овец // Эпизоотология, диагностика и профилактика инфекц. и инваз. болезней животных. Омск, 1988. С. 27-29.

15. Трофимов И.Г., Заболотных (1.В., Захаров В.ft,, Чесновский Я.И. Применение отходов промышленного производства для дезинфекции животноводческих помещений // Ииформ, листок N 232, ЦНТИ. Омск. 1991.

16. Трофимов И.Г.., Заболотный М.В.. Колычев H.H., Головко И.Д., Тарасова В.Н. Диагностика казеозного лимфаденита (псевдотуберкулеза) овец. Рекомендации // Омск - 1990. С. 1-20. .

17. Трофимов И.Г., Колычев U.M., Головко И.Д., Тарасова : В.Н., Кобзев ft.il. Казеозный лимфаденит овец // Земля Си-■ бирская Дальневосточная. Омск, 1988, 3, С. 40-42.

18. Трофимов И.Г., Колычев U.M. Казеозный лимфаденит (псевдотуберкулез) овец - Омск, 1994. 257 с. (монография)

19. Трофимов И,Г., Милых il.И. Реакция связывания комплемента с паратуберкулезным антигенои СибНИВИ при казеозном лимфадените овец // Эпизоотология, диагностика, лечение и

" профилактика инфекц. и инваз. болезней животных. ОкСХИ, - Омск, 1991. С. 21-22.

20. 'Грофиков И.Г. Морфологические, куяьтуралыше и биохимические свойства «таким; позбцяиюля псаищотиборк^пчд.

- 41 -

выделенных от овец Омской области // Профилактика нару-пений обмена веществ у с.-х. нивотных на Юге Украины. Одесса. 1981, С. 79-82,

21. Трофимов И,Г, Некоторые вопроси эпизоотолопш казеозного лимфаденита (псевдотуберкулеза) овец // Профилактика на-руиения обмена пеществ у с.-х. животных на Dro Нкраины. Одесса, 1981, С. 76-78.

22. Трофимов И.Г., Пронопчук В.О, К вопросу о неспецифической реакции на туберкулин больных казеозным лимфаденитом овец // Диагностика, патогенез и лечение инфекц. и инваз. заболеваний с.-х. животных. Омск, 1984, С. 31-33.

23. Трофимов И.Г., Прокопчук В,А., Козьма В,Г. Течение и клиническое проявление псевдотуберкулеза (казеозного лимфаденита) овец // Диагностика и патогенез инфекц. и инваз. заболев, с.-х. животных. Омск, 1980. С, 45-53,

24. Трофимов И.Г., Рахматов К.Н.. Груденя В.В., Левкевич В.А., Ираков Ю.М. Заболеваемость, смертность, летальность при казеозном лимфадените овец // Бактериальные, вирусые и паразитарные заболеваня с.-х. животных и птиц Сибири и Дальнего Востока: Сб. науч. тр. /ОмСХИ. - Омск, 1992. С. 34-38.

25. Трофимов И.Г. Роль С. pseudotuberculosis в патологии животных и человека // Эпизоотология, диагностика, лечение и профилактика инфекц. **' инваз." болезней животных, ОмСХИ, - Омск, 1991. С. 19-20.

25. Трофимов И.Г. Способ бактериологической диагностики казеозного лимфаденита (псевдотуберкулеза) овец // Информ. листок К 60, Омский ЦНТИ. Омск, 1988.

27, Трофимов И.Г., Тарасова В.Н., Гичев Ю.М. Иорфогистохими-ческие исследования при экспериментальном псевдотуберкулезе- овец // Диагностика, патогенез, патоморфология й профилактика болезней с.-х. животных: Материалы Всероссийской научно-методической конференции по патологической анатомии с.-х.- животных / Воронеж, 1993. С. 44.

28. Трофимов И.Г., Тарасова В.Н., Емельянов В.М. Изучение профилактического действия фармаэина с селенитом натрия при псевдотуберкулёзе овец // Диагностика и профилактика инфекц. и инваз. заболеваний с.-х. животных в Западной Сибири: Сб. науч. трудов / ОмСХИ. - Омск, 1989, С.19-25.

29, Трофимов И.Г., Тарасова В.Н., Пр^кппчцк В,й, Пг.евдоту-беркулез овец в совхозе "Екатеринославский" Омской области /.' Инфекционние и паразитарные болезни г.-х, ви-Еотных. Омск, 1983, С. 52-58.

30. Трофимов И.Г., Тарасова В.Н. Экспериментальный казеозный лимфаденит мериносовых овец. Клинический статус. (Сообц. первое) // Диагно.тика и патогенез икфекц. и инваз. заболеваний с.-х. животных, Омск, 1986, С. 3-8.

31. Трофимов И.Г., Тарасова В.Н. Экспериментальный казеозный лимфаденит (псевдотцберкулез) мериносовмх овец. Клинический статус; Сообщение 2 // Эпизоотология, диагностика и профилактика инфекц. и инваз, болезней животных. Омск, 19В8. С. 31-33.

32, Фомин Б.Й., йртяыия С.К., Борисенко И.С., Трофимов Й.Г. Молекулярно-биологические характеристики $НК изояятов СогунеЬасЬеМшв рзеи£1оЬцЬегси1о3151 выделенных от овец // Биохимия с.-х. животных и продовольственная программа: Всесоиз. симпозиум 26-27 сент. 1989г,; Тез. докл. / - Киев, 1989. С, 82-83.

Сдано з печать 27.05.34. Формат 30x134 1/16. Буи.тип. £ 3. Печать офсеишя. Уч.-изд.л. 2,0. Тирах 100 экз. Бзказ 189.