Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Усовершенствование дифференциальной диагностики смешанных рота- коронавирусных энтеритов новорожденных телят

ШСТИТУТ ЕКСПЕРИА\ЕНГАЛЬН01 I КЛ1ШЧН0Т ВЕТЕРИНАРИЮ! МЕДИЦИНИ

На правах рукопису

ПРОХОРЯТОВА Олена Валентитвна

/ДОСКОНАЛЕННЯ ДИФЕРЕНЩЙНОГ ДИАГНОСТИКИ ЗМ1ШАНИХ POTA- I КОРОНАВ1РУСНИХ ЕНТЕРИТ1В НОВОНАРОДЖЕНИХ ТЕЛЯТ

lö.00.03 — ветеринария мшробшлопя, в!русолопя, етзоотолопя i ¡мунолопя

АВТОРЕФЕРАТ

дисертаци на здобутгя наукового ступеня кандидата ветеринарних наук

Харкш -— 1990

Дисертащею е руконис. ;

Робота виконана в 1нституп скспсриментальпо! 1 клппчноТ ¡ветеринарно! медицини УААН.

НАУКОВИЙ КЕР1ВНИК: кандидат ветсринарних наук,

старшин науковии сшвроотшк Бабкш В. Ф.

■ОФ1ЦШН1 ОПОНЕНТИ:

— доктор ветеринарних наук, старший науковии ствробгшик _НЕШОДНА-НАТАЛШ-ПАВЛШНА---

— доктор ветсринарних наук, професор ПУСТОВАР ОЛЕКСАНДР ЯКОВИЧ

ПРОВ1ДНА УСТАНОВА — Сумський альськогослодарськпй

1нститут, Мпгальгосппрод Украши, м. Суми.

Захист вщбудеться ^ 1995 на зааданш сие-

щал!зовано1 вчено1 ради Д 02.32.01 в 1нститут1 експерименталь-ноТ 1 клшчноТ ветеринарией медицини УААН, 310023, м. Харюв, сул. Пушкшська, 83..

3 дисертащею можна ознайомитися о б1блк>тец! Гнституту скспериментально! } клшчюл ветеринарнсп медицини, м. Харшв, вул. Пуишнська, 83.

Автореферат розклано ,996

Вчений секретар спещалЬованоТ вченоУ ради,

доктор ветеринарних наук ^ / Конаржевський К. 6.

i. загальна хлрлтеристика ровоти актуальнiсть та стушнь дослiдженостi тематики дисерташг. зм!на умов ведения тваришшатва, пов'язана з конпентрашсю юголю'я тварин. ао сприяс розповсюдженню piзних 1нфека1йнш: ¡ахзорювань. V за'язку з ним. перед ветеринарное наукою 1 практи-сою пспирилася проблема насових респ!раторних i сниечних захворювань молодняка великоТ рогато1 худоби. серед якия ¡начне Micce посмдае я1арея новонароджених телят.

üiüciko. ulo ¡алункоио-кииков! захворювання телят з д1ареииин ■индронон широко розповсюджеШ в багатьок kpaihax св!ту (Коромис-:ов г. Ф., 1992; BeilinzoniR.. 1987; spaan w. . 1990). у тому чкс-и i в VKpaiHi (0нуфр1св В. П. . 1988). Вони наносять значно* еконо-[1чно1 шкоди молочннм i м'ясним промисловим комплексам (Bulgin И., 983).

Лосл!дженняни вчених на даниа час установлено, ао 1нФекШй-[ими агентами. як1 викликають захворювання шлуяковокишкового трак-■у у новонароджених телят, можуть бути бактерП. в1руси. серед 1ких вахпива роль надаеться рота- 1 коронав|русам <Гоголев h.h.. 983; Соколова Н. Л.. 1982: Степенно В. I.. 1986; СкибШькия В. Г.. 994; CoiUnJ.i:.. 1987: Durham Р.. 1979; voode G.. t975).

СЛ1д Шдкреслити. mo захворавання SMimaHoi етюлог)i з д!а->ейкин синдромом эалишаються наловивченини. a ycnlx боротьби э ен-•еритани багато в чому залежить В1д ступеню вивченост! ешзоотич-;оТ ситуапп 1 правильного розшифрування етиолопчних фактор 1з. к! викликають дане захворювання. v зв'язку с широкою розповсюд-:ен1стю хвороб шлунково-кишкового тракту новонароджених телят 1 tдносно обмеженин спектром 1снуючих д!агностичних засоб1в. за-ропоновано високочутливия експрес-иетод - Флуоресаентних зондfв. кий в!дкривае можлив1сть ранньо! д(агностики хвороби.

МЕТА РОБОТИ. Нетою данот робота було вивчеяня розповсюдження

заквсфювань илунково-кишкового тракту новонародхених телят асот-йовано! (рота-, коронав1руси 1 кол^бактерШ етиологп в умовах пронислового тваркнниатва. визначення питомо! ваги даних 1нФекц1й серед 1нших ентеропатоген1в, окрем! питания еШзоотологП, вляв-лення причин повторного лрояву шишчних ознак д!ареУ у телят до ю-денного В1КУ. а також застосування методу Флуоресдентнш; зoндiв для ¡ндшсаип рота- ! коронав|рус1В велико! рогато! худобп у Фекальному матераль

_ЭАВДАННЯ. ДОСЛ1ДХЕННЯ:_______________________ _________________________

- вивчити рсзловсюкаення зм!шаних рота-. коропав1русн;!х ¡п-Фегл1й у великих твариннипьких господарствах на теркторП УкраТкн 1 Рос!!;

- вивчити дикам!ку вид!лекня рота-. коронав!рус1в 1 кол1бактерий у телят ю-денного в!ку в неблагополучному по них 1нФекШях господарств! ;

. - провести ислекулярнс-б1олопчниЯ анал1£ икилеиих еп13оот;:ч-них штам) в Р0таВ1РУС1в 13 Фекалш телят;

- в1дпраиовати та эапропонувати нетод Флуорессектклх ?0!;д5б для вяявлення кяпкових рота- 1 коронав!РУс1в велико! рогато! :;у-доеи;

- дат»' он1вку д1агкостично1 ефектисност! методу Флуоресцентна зоплЛв у поранят;! з традит'йними лабораторндаи'тестами.

ТЕОРЕТИЧНА ТА ПРАКТИЧНА ЦШИСТЬ ДОСЛIДГЕККЯ ТА ЛОГО ЧА'ЛЮСА г:св'л2!ь\. Впечено еп1зоотичну ситуаигы соло плукково-иекоекх га-хвоР»вань иезокароджених телят зн!сано! рота-. коронзшруспо! ? кол! бактер^озьо! етиологп в окремяк тгарикнаьгапс госпсдагствс:; Украгни та РссИ.

3 використачаям скршпнгових досл|дхень Фексгай телят до Ю-яе:,кого ' в1ку встаяовлено особялвост! вядьюння рога- 1 :-;орон-га-°уЛб при асопШовакпх ШФемияк в пеблагополучк;!."

Бперсе в УкраШ застосовано для д1агностики зм1шаних (рота-1 корокав1РУсних) 1нФекШй у новонароджених телят застосовано метод Флуореснрктних зонд1в (ФЗ) та визначено його д1агиостичну а 1 нн; сть.

За допомогое молекулярно-б1олопчного анал1зу РНК ротав!ру-с1в, 'вид1лених ¡3. Фекал1й хеорих новонароджених телят неблагополучного государства встановлена иаявнють р!зних електрофоретн-п!в ротас!рус1в.

Практична цхнн!сть роботи лолягае у тому, ¡до вперве виявлено еп13оотпчн1 особл;1вост1 д1аре! новонароджених телят пол-ютаоло-Пчно1 прирсди (рота-, коронаэ1руси. кол! бактерп) у польових умовах. Запрспоновко спос!б застосування Флуоресиентних зонд ¡г лея \ дсп-б з метою виявлення рота- I коронавюус1з велико! гато! яудоби. На основ! проведено! пор1вняльноа отнки еФективн: т! р!зния лабораторних тестев розроблена схема д1агностики рота ! коронаП^екШй в залегност! в1д завдань 1 мети дослиджень.

р1бень реал13ацц та впровадження результатiв досл1д2ення.

/

Результата каукових розробок лягли в основу методичких рекомендаций "1ндикац1я рота- та коронав!рус1в велико! рогато! худоби методом Флуоресцентних зонд:в". затвердженжг методичною радою 1ЕКЕИ 11 травня. 1995 року, протокол » 7: а також рекомекдацП " Д1 агностика коронав!русно! кишково! !нФекП за допемогою Флуо-ресиентного зонду ДСП". яки викладен! в 1нФормашпному лист1 тез Укра!ни Н 52. 1994 року, випуск 1.

апробац]я та пунл1кад1я результат!в досл1 дзсЕНЬ. Осноен1 положения дисерташйног роботи були пов^домлен! на заседаниях вче-но! ради 1екби (1992-1995); на м*жнародн1й науковсгпрактнчнш конФерениГ! "теоретические и практические вопросы •ветеринарии" (Тарту, 1990); в;есоюзн1й науков1й конференип "Повышение индуктивности сельскохозяйственных животных и совершенствование

. - 1 -

борьба с болезнями в условиях интенсивного ведения животноводства ,в ..создания Фермерских хозяйств" (Харк1в, 1991); науково --врактичшй конФеренап "Еютехполоня ветеринарних препарат! в" (Харк1в. 1953); першону установчому з'1'зд1 Укра1нсы<ого hIkpo-бюяопчного товариства <одеса, 1993); науково-практичнш коп-• ФеренпП "Актуальные вопросы микробиологии, эпидемиологии и иммунологии" (Харк1в, 1993); м!жнародн1й науковгй конферендп "Общая эпизоотология: иммунологические, экологические и методологические проблемы" (XapKlB, 1995). За матер1алами дисертацп опу-бл1ковано 1 г наукових правь.

СТРУКТУРА ТА обсяг дисЕГ'тацп. дисертаи!я викладена на 1го ctopihkas иааинописного тексту i складасться з вступу, огладу •л1тератури. власних досл1джень, узагальнення, висновк!в. списка л!тератури 1 додатк!в. Робота ¡люстрована 15 таблицами, ю рисунками. список Л1 тератури Mi стать 140 джерел. э яких 73 Жоземнш:.

.ОСОБКСТИИ ВКЕСОК ДИСЕРТАНТА V РОЗРОБКУ НАУЕОВИХ РЕЗУЛЬТАТА, ИО ВИНОСЯТЬСЯ НА ЗАХИСТ. Дисертантом швностыэ саиост!йно вико-нако весь обсяг методично!, експериментально! роботи при прове-денн! бактерюлог1Чних,. в1русолог5чиих, серолоПчних та туноло-г1чник доел!джень, за вннятког-; п!дбору тест-культур методом Флуор«сдентного зонд/ та проведения електронно-Шкроскошчного анагазу в лабораторП шдикадП BipyclB вкдгзт (nie кер1вниытвом доктора вет. наук ¿Псенка В. О. . за участи канд. бЮл. наук Новожиловой е.е.); Biдпрадювання елекентхв очиаення BipyclB в лаборз-Topii ¿нуннофериентного анал13У 1НБГ ли Укра"üi:i (за участю канд. б10Я. наук. 1вьнсько1 Н. I. ); молехулярно-бЮлоИчного анал)гу РНК ?в в лабораторп в1русних ¡нфс-кШй хня1к1 in. 1.1. нечшкова (зав. лаборатории. доктора мед. наух Панченко Л. О.).

На п!дстаз1 анал1зу результата доел!дження т.з сп!оставления '¡к з данкик д1тератури дисертантом сФоркульпюн!" такм положения.

о викосяться на захист:

1. Натер1али анал1зу еп1зоотичнох ситуаиГ! великих тварин-ипькия господарств по шлунково-кишковим 1нФекц1яя новояароджепшг елят рота-коронав!p/cho'í та кол1бактер1озно! етиологН.

2. Нетодпка застосування засобу Флусреспентних зонд!в для илвлення рота- i kopoh.ieíp/cíb велико!' рогато'i иудоби у '"екал: як.

3. Результата пор1вияльио1 ошнки лабораториях метод!в, як! икористсву»ться для д1агностики влунково-киакових захворогань елят рота- i корокав^русно! етиологп.

МАТЕР Г А/И I ПЕТОДЯ.

Катеру алом для доел: джень 'булн Фекальк; проби хворпя i згог"'-

их телят, сиро затки kpobí велико! рогато! худоби р!зних bucos::::

рул i г.лтологоаьптсн!натертая в!д загиблих тзарин.

Зсього бактер10яопчно обстеасено 538 проб фекал1й новона-

оахених телят } пробя патаатер1алу В1Д 29 труп1в тварин.- Сероло-

!чно дссл!джеко 477 телят i 307 голов доросло! худоби, а також

i

то Фекалт si с 588 телят.' V лабораторних досЛ1дах • використано 5 крол13 породи шиншилла i 2042 безпор! дних б1лих-милей.

Культури кл i тин. . • • '

- Зикористанх перешеплкван! культури клiтин: агЕЗ, IB-SS-E. К-56. ВНК-21. ПК. нк. ПТ. vero. tr, Нер-г. Hela, rh. Вiруси:

- ротав!рус велико! рогато! худоби,- штам РН (BIEB, н. Москва);

- ротав!рус велико! рогато! худоби, штам eniзоотичний 480 ГЕКВН УААН. н. XapKiB):

- ротав1р:гс мавп. ■ итак-SM1-(ХКД1ЙП \к. - i:Иечнпадва, и. ,

1pkí3):

- KOPOHaBipyc велико! рогато! худоби, итак КЛ-2 (ЗГЕВ, н.

- коронав1рус людини. штам ОС43 (ХНД1Н1 1н. 1.1. Нечшкова. и.-харк1в); ,

- Bäpyc хвороби Ньюкасла (БНДВШ, и. С.-Петербург);

- Bipyc синдрому зшгжейня несучост! (ССЯ-70) (БНДВШ. и. С. -Петербург).

Бико рис то вувалия СЕедиФ1чн1 сироватки до вказаних BipyciB.

Флуоресииэт! засоби.

Використовували так» Флуореснююч1 зонди:

1: дог <п-лииетилаи1ностэрил)-1-нетилшрйдин1й п-толуолосуль-ФОЯЭТ CJ3HztKe Oj S. Н. И. - 410.54.

£. ДСП-б. 4- <п-диметилам!ностерил)-1-гексилс1ридин1й п-толу-олосульфонат, Н^ Н- 03 S. к. н. 466.0.

Бактер1олог1чн! методи.

!кентиф1кап1ю бактер!й родини Escherichia проводили зг1дно з Д1ючими "К етодичесними указаниями по бактериальной диагностике колибактериоза", затвердженишг ГУВ КСГ.СРСР l. ia. 1981

.Яатогенк! властивост! еид$пенях йташв визиачаяи внутрШньо-ЧеРЙБИННОЮ 1н0куляд1сю зниву яобово* arapoBo'i культури в доз! 500 или, м неробких tin до 3-е б ¡лиг нишей, культури бактер!й. як! сяк-ликали загибель олн;с5 i б!льиг мишей у nePEi 3 Д1б. вважали пато-генними.

Виэначення ccpcsapiai-iTiB, видi пении патогенник для 61 лкх нишей штам1в Е. coli проводили за допомого» набору агглютинкруюакх О-коли сывороток. зПдно, э наставлением, затвердасених ГУВ КСГ СРСР 16 червня 1980 р.

В1русолог1чн1 нэтоди. Культивугання i заражения kjiitkobi;?. л1н1й m vitro. • ,

Електрониа м1кроскоп1я. Використовували прякий метод иега-тиввного контрастування ФосФорко-вольФрановою кислото». • Перегляд 'препаратов проводили у електроннону Шкроскоп! ekf 100 з прискз-

оючою капруго» 80 kB 1 1нструиентаяьному зб1яыаекн4 50 тас.

Нолекулярно-бюлопчш методи. Очизекня t кокпектрашю в1ру-!в здшснювапли за допомогою ультраиектркфугування в градиентах сстини гл!аерину I сахарози. Спочатку проводили попередне очишен-1 на подушку, а пот1н у л!н1йних град1ентах густота при юоооо g. хадгенти Фраки¡ювали по 1 си3 . визначали оптичну I плавучу гус->ту кожно'1 Фраки! 1..

ЕлектроФорез ротав!руснот РКК у поя1акрилам1ЯНому гель Ви-лення poTasipycHoI РНК э Фекальних проб проводили безФенольнин •тодом при низькошвидк!сному пентрифугуванн!. ЕлектроФорез зд!й-:г;вали прнлад; АБГЕ-I з гельовими ком;рками 115X11X1 паралель-> на двох пластинах, сдночасно пропускали 26 проб.

Для визначення ^лектрофоретипу зд^Яснювали :п!льнии електро-рез в ошип лу1ш1 геля доел!джусмо! РНК i РНК стандартного ята-poTaBipycy мавп SAH i у подалызому сглвставляли вшносне роз-зування сегмент!в ротав1руснох РНХ у кожн!й з 4-х труп (одинад-ть сег.чент)в РВ РНК по електрофоретичшй рухливост1 роэпод!ля-ься на 5 групи'. 1 група Mi стать. 1. 2. ъ. 4 сегненти; 2 група -гиенти 5 i б; з група. - т.. 5, .9 и група - сегиенти ю t ш визначали електрофоретип у bücobiдност! до представлено'! кла-4iKamnHoi схени. Анал1з проФ!лю Mlrpauli сегмент1 в РКК здшс-вали за методикою, запропонованою сп!вро61тникани Горьк!всь-го НД1 ешденюлог! I 1 м1кроб1олог11 МОЗ Pocts H.A. Нов1ковою И.В. ешФановою. Шсля пор!вняння 1дентичност! кзртин розпод!-тая сегнент!в РНК досл!дженого штаму' з. однин з представлении cxeHi електр-оФоретип1в Mlrpauli сегмент1в. присвосвали елект-Форетипу порядковий номер.

Серолопчн1 нетоди. В робот! використовували в1дом! сероло-rai методи РДП. РГГА, Р31ЕФ, 1Фд i фз у стандартна постанови! гпешально пШбраних. для визначення рота- !. коронав!русних

¡ЯФектя у.човах.

. Визначення РВ 1 ХВ-антиген!в .за допоиогою фз леи 1 дсп-6 ...

"Контрольна 'Флуориметр!я Iнтактних кл! тин.

3

До 0.5 см кглтинно! суспензп Тг або СНЕВ на середовии! 199 (1 млн кл1тин в снэ) додавали 0,1 сн3 16 у. водного розчину зонду ДСН (ДСП-б) до к^нцево! концентратI 9 (10) мкН. 1нкубаа!ю проводили 15-го хвилин при 37°с, дал!, проводили Флуориметр! ю. Гнтен-сивн!сть-Флуоресаенд!£ зонду вим!рювали на м!кроФлуоринетр1 лшак

_____________ I-3 (ЛОНО) 1/за допоного» Фотометрично! приставки ФНЕЛ-1А. Плоша

Фотонетричнсго зонду приставки ФМЕЛ-1А. з яко! .здшснюеться вим! -' рювання,. Д0Р1ВК»е <1-6.3 мкм. величина вин1рювання Флуоресаенап с у ко вне» :виражена в •кв. ~

• За_одинишо -вишрюваиня Флуоресаенап. прийкали середн1й по-казник Флуоресаенап ю-го кштин' (П. ' ,

;'Визначення/ротав!руского антигена. ■ - .

,До 0.'5.' с,ч~.суспензП яультури клЛин СНЕВ додавали 0,2 см досл1джуемоГ дроби-Фекал!й,! ¡нкубували 30 хвилин при 37°с. Пот!м .вносшш О,4 .см3.1б к-водного розчину-зонду ДСН (ДСП-6) до к!наево1' кокаентрацН-9 (10) мкН 1 1нкубували при т!й же температурь П1сля аього проводили Флуориметр !'ю. Визначали середн1й показник Флуорес-денсН 10 кл 1 тин воаиджувано! дроби - Р дос.- НаявнЮть ¡нФек-а1'йного агента визначали по покаэнику !итенсивност! Флуоресаенап к, якип розраховували за формулою;

Е ='7дос / Ёконтр

При значбин! показюпеа ¡итенсивност! Флуоресаенап К. району 1.5 ¡зише заключали лро наявшеть. в1РУса в доел! джусмому зраз-

■ 'Для: п1атвердження ,;.ст:ециФ!чност1 внайденого !нФека!йного збудника застососували сиеакФ1 чду «штиротав!рушу сироватку у ро-боЧоиг роз чинена!. До 0.2 см^ фекал 1й вносили 0.2 сн* спешМчноТ

сироватки i 0,5 см-3 кл1тинно! суспенз!*. Одержан? сумш 1нкубува-ли при 37° С на протязI 30 хвилик. ПотШ додавали О, I си3 розчину зонду леи або ясп-б витринували у тих же уиовах го хеилин. тидго-товлеш зразки Флуоркметрували як описано виие. Якшо показник 1к-тенсивност1 К був ненше 1.5 або энижувався в 1,5 i б1льае раз, то ue сказувало на те. то в!русния агент нейтрал!зовано спеии-ич-кини антит1лами, шо Я Шдтверджус спеииф1чн1сть знайденого potíbí-руса.

Зизначення коронав!русного антигена за допокогою -J3 дсм

(ДСП-63.

1ндикаи1» коронавирусного антигену проводили на суспензИ' кя!тин тг. описано» виае методикою. 1дентаФ1катю зд1йснювали за сопомсго» спеииФ1ЧноТ коронав1русно1 сирс-ватки.

• ' ochobhi результат!!'дисерташг.-.

Обстежено 16 господарств Халузьког, üaPKlBCbKOí i Полтавсь-коТ областей у перход з 1989 до 1993 рр.

.цровеяек! нами еШзоотолоичн! дослшхення хворих телят показали, • по стушнь о"оплення погсл!в'я телят до 30-денного В1ку на злУ1п<ово-кизков'1 захворювання досягала .100 и.. а летальность -у середньону склала б1ля" .5.0 х.

длхН1чн1 обстеження показали, то захворювання мало хвилепо-Д1бнпя характер, перш! ознаки якого- з'явилися на .2-'3- день, пот!н; на 5-6 1 7-ю дн1 хиття телят. .

При вивчени роз.повсюдженост! ¿нФегаи'йних- збудншив захвоРязань телят, по супроводжувапись :д1 арейнин• синдромом'." дос.Иджечс 1334 проб сирозаток кров! kopíb i телят" в i ком. во 30 дн1в. При пьо--му егаяовлено. по антипла до ротав1русу •• зи.ая.>яилися 7 дорс-л;« тварля-у .54, 713, о 7. випадкх'в, ау молодняку 52. i i3» 2 х (табл. ;■>. як видно 'з табляи; г." антигемаглютиннни дс. короназ1?усу аш>е-

■•■■.'. „,•'.,. - ' ' • таблшш А ,.-]

Результата серслоИчногс обстеження Ьелико? рогатой худоба на'прйсутп!сть .'.' рота- 1 'коронав!русиих антити г ' :

Калуэька.

■ Область, "варитш ' Обстеж. клльк!сть тваркн ■ АТ до РВ в РД з НИХ: АТ ДО КВ'в РТГЛ 1 АТ до РВ Й КВ

ЛбСОЛ. числа- .. Р 1 - Р - Абсол. Числа АбСОЛ. числа Р ! .Р..

корови

Телята

,Харк1вська коровн - телята

'165, .251 54.012.3 414 . 89.011.5 200 '13,042.4

26Г . 134 ,51.514.3 252 ■961910,7 119 44.613,0

261 157. 60,ПЗ,9 222 . 65. 112.4 152 58,21<|.0

136 . '55 , 47,416,8 61 69,615,'! . 54 46,616,9

I

о

. Полтаве ы«

Вгього

коровя

телята

корови телята

¡13 43 35,117.5 102 90,912,

112 59 58,416.5. . 95 ■ 94. И2.

839 ' 451 54,713,'0 730 88.ОН.

495 240 52,113,2 211 42.612,

41

43

393 217

36. 217, 5 Зб.ЧИ.б

46, 0Н.6 43.813. 4

П.р и я I т к а: в!к телят яо 30 дшв.

- 11--"

нлися у корiв i телят частиве. ' н!ж:антитела до ротзв1русу 1 ста-¡опил!! у дорослих тварин 68,011.1 и, а у нолодняка - б ..2 рази • »¡дпе - 42.6ta.2 в!дпов1ано. - • • .-'

Ояночасно аитит1ла проти рота- t коронав1русно1 ¡нФекШТ у цроватц1 kpobI 6ули 7 46.811.7 у- kopIb 1 43.513,4 х телят. Одержи! дан1 св!дчать про те, шо тзарини часто кали контакт з двока будннкани одночасно.

Баз-лочись на результатах ретроспективно! д(агностики встано-пчг.о, позван! рота- 1 корона!нФекц!i иаить значне розповсвд-»кнч в Р1зкии регионах.

:< метою еивчення етиолопчно! структури i визначёння питомо! аги рота-, короназ! рус1з i бактерШ родини Escherichia серед рудник¡в кишкоеих ¡нфектя були проведен! в1русолог1чн! 1 бакте-1олог;чн1 лосл!дження Фекальних проб з!д хворих з Д1арейнин син-ронон i здороаих телят 10 великих твариннииьких комплекс!в 1 б олочних ферм 3-х областей УкраТни та. Poci i.

в етиолог!чн1й структур! захворюванкя шлунково-кипкового ракт'у новонародхених телят в!дсоток ноно1ИФекШй становив 32.Si ,о х, з них рота-, корона- 1Ч,И1,1 ко.ИбактерП 16.611.7 к протет - 1.8Ю.6 у. та асоа1йод;аких - 27,311,9 и.' ' - ,

При вивченн! вшплеяих вами ' ентероцатогелних.штат в. К. col1 :тановнли. то з 227 вид!лених культур 24, 212,8 Гз них"..' належа-i до серовару 066. 19,412, б у- до 05. 0101, 14, 312. 3 у. до 015.

Сл1д Шдкреслити, по серея зтианих Форм'хвороби част!ие зу- '

й,

ГР1чалис17 в 1 рус - бактор 1 алька. <24.2*1.8 v.), у тону числ! коро- • iblp/c 3 Б. сои - 8,8Ю (Г*. р0тзв1рус 3 к coll. 4, ЗЮ, 8 •/ .1 5шша в1руси- з etoepixic»'- 5, 511,0 у. Асои1йована в1русна 1нФек-[я становила всього 3,3*0,8 у..

Ка рисунку 1 показано питому-вагу моно-, 1 асоШйованих 1нфек-й елунково-киекового тракту новонароджених телят у середньому з

J-- "до-.'.':?9hbj -дагтя.При'.ioo'-.кдшчному гюояв} д!аре1, значний вадсоток (39.4i2, 1 '■■'/.) ■. захворкщань 4лио1" етиологи. Не вказуе ка .те, .со захворювання. новонароджених тварин вккликане б!льш широ-' "ким спектром лнФекхНйних а'гент1в. ...

Частота виявлення варусних 1 бактер5альних збудник!в у хворкх на д1арею.новонароджених телят р!зного' в!ку

,Иаксииальн! локазшжи, випадк!в -асоаиаовано! анфекша вадма-чеш ■ у. телят - BiKOM до -М .'днав; у телят старшого В1ку калъкасть .. зн!ааних В1шадк1.в т2омЗтно знениусться (рис. 2). ..:..'.

•Як^ица0.зл>ясункал-г^-'.п1кзиявяенкя-илькц в1русних антиге--Я1В у'.кворих телят' пряходиться.'ка .7-9 дна г- знижуеться до 20 дня. Не-ноже бути зумовлене ;тиМ| шо у телят.до 9-денного BiKy знаходи-- ли ентеропатогенн! ;штанн £,~. coiiv У. телят , - старшого Biicy "вид1яя-лись непатогекн! ентеробактерл.: рота- i ■ KOFOHaBipyci.

При-зилганШ' В1руси0-8актер1альн!я Форма nepe6iry 'захворю-ванкя спостер!гали три.паки, ча сане.*' перший Шяйон у дводеняоиу -в! ш. --другий "---у 4-5-денноиу ¡-третей - у-в-9гденному -в!т. • При Еипадкак. рота-корокавгрусиоа-бактерг'ально'! acouiauia кайбальшия випгшив в!дм!чався тальки на 4 i 7 дна .-г.иття телят. "

••• Динаи!ка-видалення-'рота-,-KOPOKasipycy 1-Е. coll у •• .

.. - ... ' -'•' sbophx нозонарэджеких телят з ©знаками fliape'i'

Доеладхення проводили у зимово-весняний nepioa у стапаонарио неблагополучному на . шлуиково-кииков! закворювання господарств! (к-п ¡к. S Березня ЗачепилИвсысого району Харглвсько! области.

. . 3 Hie» нетою до'сл!джували зразки Фекалышх проб, В1Д1бРан1. Eia 10 хворих теляг на протяз! : перших 10 дн5в життя. Есього до-.слыжено 92 пробя ¿екал!а.-' ; . - • • . '..

Елтгроватогели.1.' в;;астивЬстз--ешер1 siй виэкачаля ■ на балия инках, ■ (д«нти<и kauiif'»¿тзв{рус!в ■■ зглвен^валк нетодзхи бъ мруснач

— 39,4

32.8

100. )"

l

•27,8

Рис. 1. Питома вага moho- i асоцшованих ЫфекцШ шункозо-кишкового тракту иоЕсизроджених телят

I

.05

» ■'

irnuoi этюлогй ; MOHO- асощйоват

процент хворих тваршг ; 50

40 30 20 10 0

V

Л \ 4 l < ; .

/ "'Í4'' \ f4 д< № 4 i ñ / i

H %

О

j—Jí—B+Ii

I -и-в+ij

Рис.2 Процент асоцЖоваиих шлумково-кишкових ¡нфекц!й телят разного шку ¡tótír^Q+K+B

10 12 14 16 18 20

Diu СДН1В)

I

IA»

L» I

PKK ' у пмг. рдп. Б1ЕФ, 1ФА1 ФЗ; коронэр1рус - методами рга i РГГА. ФЗ i BIEi.

1з фекала вид1лено 86 культур е. coli, "э них 71 ¡bh,-6i4,1 ¡с) культура нала латогенними властивост1. Ентеропатогенн! втами вияв-лен! у Фекал!ях телят, старших лобового в!ку. Вил!лення ix про-лсвжувалася до e-9-яенного BiKy. Культури -Е.. coli. вид1лен] В1д телчт у 9-деннону oiui у 40 у- I у. Ю-деннля телят не володили ен-теропатогеними властивостями.

Р0тав1русну РНК виявлено у 42 пробах-З1д 6 телят. Виделення Bipycy вочалося на другиП день зкиття 1 продовжувалася до 9 дн!в. -Тип1зашя ротав1русно! РКК за допомого» ЕФ у-пааг, показала, шо 35,1 у. належали до 39. електрофор'еткпу, • який характеризуемся "дов-гим" розтавуванням Ю i и сегментов г малин перёмшенням 3 i 8 сегнент!в. у 5 випадках (11,9 :<) анал!з проф^л.о м!грацГ£ ротав!-русно'1 РНК показав IX налехнЮть до ¡ншого - 41 електроФоретипу. якнП нас "довге" розташування---10 1 11 сегмент!в К нале перем1-иення 0 сегмента. ' .;.,'•'."' '-. , ::

V великих твариннидъких господарствах Älap'ei молодняку иа»ть став!онарний ' характер. ЗнФ1КУваш-:я в1русйини. 1 бактер1альними збудниками вгдбувасться в пера! години хиттяЛ. В' пей. .'час.. 1иукний захкст новонароджених телят вирахений слабо, а-.нолозизо кор1в-ма-repiB i особливо першотеличок не забезпечусновонароджеяип орга-зн достатньо» шлшсто антиротав!руския аатет!л,- вид1лення ?отав1рУС)з з 4екал1ями Biдбувалося з 2 до 6-9 днЧ. життя. Виявле-шя ротав!РУС1в, як1 налетать до pi зних еле.ктрофоретишв (39 1 41) 51 д одного теляти, св}дчить яр^ ¡¡охпизЗсть 1к$й»-вання телят оя-¡очасно двоиа птамами ротзз$русу i сШвпадае .у час!., з повторяй;! сл1н1чним ярояйом д1аре1.- Коронав1рУсния антиген здайдешй У .14 15.i zj-'.эразках. як1-.-налегать: трьок тзгрикан. -/ В:1Д1лекня коро-;ав1Р?су почалося на 3-4 сн! sisrrss i продовхувзлсСя ко-3..тая. 2о

карактеризуе загальну тривал1сть квороби.

1ндикад1я шрусних 1 бактер1альник антигенов в органах телят

Нетою наших досл!джень 6уло вивчення розпод1лу рота-, коро-HaBipyciB Г бактеР1й в органах загиблих телят, як1 хвор!ли на д!а-рею i заразилися природнин шляхом. Досл1джувалися проби Фекал1й. станки тонкого 1 товстого В1ДД1Л1В кишечнику, легень селезенки, печ;нки В1Д 29 телят. Всього бактеР10лог1чно, а тако.т за допомо-гоо РДП, !ФА, РГА i РГГА вивчено 1Т4 зразки патнатергалу.

пор! вняльния ' аН«ММЭ ОЯвоцзяих дани* позилпаг чоллнти вксно-вок, шо найб1льше число позитивних результат!в отримано при дославши Фекальних проб. Так. ротав!рус знайдешй у 16 телят (55,216,3 Ю- а коронав!рус - у 13 ('14,8+3,6 X). Цек Факт посюо-сться г.кшковим тропимом даних BipyciB: ¡нтенсивно реплПсуючись в ентеропитак кишечнику, вони викликають норфофункц!ональн1 пору-шенвя.' як! 'спрйяють пост!йн!й екскреип Blpycy з Фекал!ями. При досл'1шенн1 внутр!шн!х орган!в встановлено,со найбиьша кглькють ■ антиген!в posipycy 12,4 Is) ! коронавхрусу (t.7 is) м!ститься у jтонкону в!дд!л1 киаечнику. ,

Кр!н дього встановлено, ио антигени KB у велшай кхлькост!

* •

мостились у гокогенат! легерЛв (3.601 is). ток! як антиген ?3 не -• вияв%вся. на думку деяких досл!дник!в, видмення коронав!рус!в в респ!ратори;:х органах ноже служити йагляднин прикладом еволюшй-но! адаптацП кишковпх в!рус!в до первинно! репл!кааП у найб!льа сприятливнх уковах. Ножлив!сть !н<Нкування тварин гпявиауеться за рахунок реллПсацП BipyciB у рестраторному тракт! з пояальиин iх заковтуванням-у великих дозах - (Reynolds D. J, , 1985).

В результатов анал!зу розпод!лення. в!руских антигенов в организм! з'згпблкк телят будо встаноьяено найб!льш дошяьне викори-станкя, гоногенату тонкого' в!дд!лу кишечника / для «етекШ5 даних

в1рус1в.

Застосування методу Флуоресаентних эонд!в для д!агностики рота- i коронав1русно"1 1нФекцИ у новонароджених телят Бажливим етапом наио"! робота було удосконалення методу ФЗ для ¡ндикаиП рота- i коронав1рус1в великой рогато'! худоби в ¡н- . Фекшйному катер! ал i. Застосування ФЗ для, д!агностики в1 рус них !НФека1й е. новим дриоритетним напрямком в лабораторий д!агности-д1. Час ¡дентифп'.аш"i ротав^русних 1 коронав1русних агент1в за

допомогою фз не перевитуе г годин. .....•

На першому еташ розробки методу ни пШ брали- оптимально концентрат I ФЛУоресшоючих. речовин ДСК i ДСЯ-б. 3 Шею метою го-туваяя спиртов! розЧйяи кожного зонду: 0:001н. о, oooim. • о, 00001М, ВЯ80ДОТИ з того» , йд нойекуйяраа маса дси = 410.54. а дсп-б = 466,0. 3 спйртових розэдшв готували 8,1 Б 1 24 '/• в0дн1 розчини на б1дисТильован1и Boai. Флуореспентя. яка добре-рееструвалася. дали 16 у. воан) 0.001 М спиртов! розчини обох рёчовин.' Шд час внесения ФЗ у досй(ааУсм1 зразки sx к!ниева кончентрашя для ДСМ становпла 9 мкИ. .для ДСй-б - Ю мкН.

Для эастссУВання методу ФЗ з набору перешеплюваних лШй кл1-тин, який був в наявность виявлен!" лермкивн! у в1дношенн! до рв культури ¡штин: ППК-ббб (показник ¡нтенсивност! к становив г.сз). ПГСк-зо (К - 2,1). внк-21 (К - 1.5) та у в1дношенн! до кв-культура кл!ткя трахе! ембрюну, велико! рогато! худоби (Tri (К -2, 35). '■*'.-'. ; ".

Розроблено умови йиготовлення •. i збережеяня культур кл!ткн в _ вигдяд! суспевз'И. Встановлено. по для отрямаяня стаб!льшге результат^. а тгкоа для зб1льшеняя часу використатгя культур кл(-тнп. ■ несбх! iffio. - Лобову - суспензю готузати ' яа .середовш! ¡99 з ; кЬЧькКТ» гсл1г.Я1 в ск3 t ялн. i зберIгати при текператур.!1 i

При дотриманн! сих умов кл!тикну суспенз!» но«на використосувати на' протяз! Ч д1б без суттевих зн1н результаи досл!джень.

Нами встановлено високу спедиФ1чн1сть методу ФЗ з викорис-танняи широкого набору р1зноиан1тних в!рус 1 в 1 гетеролопчних ск-роваток (табл. 2).

таблипя 2

Результата вивчення специФ1Чност! методу 43 за показняком ¡нтенсивност! Флуоресденш I ( К )

Доел i дхуван i bi руси

г пд llji-i ; VI! i сироватки

Хвороби сся Рота- Рота- KB КРС KB ч

Ньюкасла Рй 430 кл-г ОС43

Еез сироватки 1.50 1. 51 1, 73 1, 62 1.9s 1. 36

X. Ньюкасла i; 16* 1. 53 1,73 1. 56 1, 62 1.71

ССЯ. . . 1.59 ' 1. 09« 1, 74 1. 65 2.03 i. 92

Рота СРН). 1. 53 1, 55 1.07" 1, 03« 1. 93 1, 35

Рота.(180) 1.61 . 1. 54 1. 12« 1.02« - г. оо 1. T9

KB (КЛ-2* . • 1. 56 " 1. 50 . 1.7i Ь 64 1. 13» 1, 21«

KB (ОС43) ' .1. 54 1. 53 1. 80 i. 59 1, 08» 1, 00»

Ембрюнальна 1.52. . 1. 57 1, S3 1. 63 2.01 1. 94

Культура wiiTHH

без вирусу . 1.0 1. ,0 1.0 1.0 1,0 1.0

Прии1тка: » - эниження показника К у 1.5 рази досл1дху-ваних проб пюля взаемодИ в!русу з гомолог! ч-ною сироваткою

При доел!axeHHi чутливост! методу фз за здатн!стю виявляти м!н!мальну концентрацию рота- i коронэв!русного б!лку. межа чут-

ливост! тесту при використанн1 ФЗ дсм станоЕила ю нг/см ^. Одержан! результата узгодхуються. з даниии Ново*илоео1 е. В. (1992) про сп1вставляння методу ФЗ по аьому крктерцо з 1ФА i PIA.

При досл1дженн! Фекал1й biд хворих телят з д1арейним синдромом нами було виведено статистично в1рог1дний показник зни-ження ¡нтенсивност! ФлуоресаенпП' проб при взаемодп ¡з специфично» сироваткою. так, якшо показник ¡нтенсивност! Флуоресденшi К дослано!' проби п!сля взаемодп з. антиротав1русною сироваткою знижуеться не менше, Н1ж у 1.5 рази, можна впевнено затверджувати спедиФ1чн!сть виявлення ротав!руснсго агента. Якшо К досл1дно! проби п!сля взаемодп з антикоронавiрусною сироваткою зменшусть-ся не менше, н1ж у 1,5 рази, можна впевнено затверджувати специ-ф1ЧН1сть виявлення коронав1русного агента. Нохпив!сть похибки у дьому випадку р!вна 0,01 г.

Застосування методу ФЗ довзволило одномоментно 1дентиФ1кува-ти рота- i коронав1руси, тобто виявлялти вияадки асошйованих ¡нфеюпй. значно скорочуючи час постановки заключного лабораторного д1агнозу. За допомогою .ФЗ ротав1русний антиген знайдено s 29.341,7 Я i к0р0нэв1русний - У 27; 613.2 Z. •

Пор1вняльна отнка лабораторних д1агностичних метод!в Н'дикацП рота- 1 коронав1рус!з великою рогато!' худоби для ошнки еФективност1 запропонованого методу у паралельних гкеперйментах 'було досл1д»ено 92 Фекальних зразки в!д хворих.на з1арею новонароду.ених телят ка наявн1сть ротав!русного 1 173 зраз-си коронав!русного антигена у р, зрл'к тестах. - Ротав1русний антиген зстановшш за допомогою ЕФ в ПААГ (45.615.2 X випадкШ.РДП (16,31. 5,9). В1ЕФ 121.714,3), 1ФА (31.514.9) 1 ФЗ (29.314.7). .

Електрофореэ с самим> 1НФориативним. так як з його допомогою адалося вид!лити най51льшй пропент позитивних проб poTaBipyciB,

тону oeiHKy лабораториях метод!в проводили в пор!внянн! з ним. СЛ1Д п!дкреслити. то найб!льш bhcokî показники зб!гу позитивннх Р63УЛЬТат1В BifiMi4eHi БРИ nOPiBHftHHi еф у ПААГ i i>3 (83.713.9 "¿1 та ЕФ i 1ФД (77,014, (Л. причому спостеР1гали 92-100 y. 36ir не-гативних результат!в фз i еф.

Одержан! дан! св^дчать про те, во ЕФ. 1Ш i ФЗ - тести. як1 за !нФормативн!стю не поступаються одне одному.

Коронав!русний антиген виявили за допомогою РГГА у SS. 612.9* ВИПЭДЮВ, BiЕФ - у го, 2i3, б г ! фз - у 27.6*3. о г.

Пор!внянкя ouiHKa д!агностичних метод!В показзлл. mr. hîî-б \ лъщ чутлнвин був метод Флуорсспеитник зонд i в. Тону оценку алии тестев давали по в!аношенн» до цього методу. Cniвставления збiry результат!в як позитивных. так i негагивних у фз з в;еф fiOPiBh»c 36.3 ¡72.5497,5 У. BiCnOBiflHO), а У.фз 3 ргга 67. ô СН.О i 94,! V Biflnoeijutoi. Разом з tsim." заявляти про иизьку «Фективн-.сть ?ггл у nopiвнянн1 з В1ЕФ .не ложна, ockîлькн у пих реакШях виявляються piзн! Bipycui антигени i аглютин'ши i преиишгпни ). иабуть. нас значения i к^лькюне спхвв1Дношення у зразках Фекал!» кшсних !з зруйнованою структурою bïpIohîb. у зв'язку э чин,, для б!яыао!

визначаеност! вирусних антцген1В кожну пробу сл!д досл5джувьти не

« *

меняе, н1ж у деох реак«!я)?.

На ochobî одержаних результатов розроблен! ! затверджен! ке-" тодично» радо» IEKBM методичи! реконендаш! по д!агностид1 рота- i KopoHaBipycHix !нФекц!й велико! рогато! худоби, а також рекоиенда-нП по д!агностиц! коронав!русно! кишково'1 ¡нФекц!ï у детей, hkî викладен! у хнФормашвному лист! ноз Украгни.

В î Î.H о в к и

1. F обстежеиих нами господарствах у- 27,8л, о у. встановле-iïi ассигнован! ротй-к6рона-кол5бактер!озн[ ' ¡кФеклП" ллунково-ккш-

- го -

<озого-тракту новонароджених телят, у зг.еи.? /• - ноно^нФекш'!, у гону числи рота-, корона- - 14.1И.1 У- \ кол1бактер!оз 16,841, т х. 1РОТе5 - 1,910,6 у.

2. При асошиованих В1русн0-бактер1апьних ¡нфекч^ях шлунко-5о-к1сакового тракту новонароджених телят патогенна штамп кол1бак-:ер!й вид!ляли в!д тварин г-9. а рота 1 коРонав!РУси - у телят 9-:о-денного в!ку.

3. Полекулярно-б!олог1чний анал13 рнк ротав!рус!В, вшпле-[их В1д Фекал1й хворих телят неблагополучного господарства за до-гомогою електрофорезу у пол!акрялан!дному гел! показав наявн^сть >!зних електроФоретипIв Р0Тав1РУС1в,

4. розроблено 1 запропоновано для лабораторно! експресно'!

агностики рота-, коронав]русно! ¡нФекнП велико! Рогато'! худо-

и метод Флуореспентних зондов, який являсться спеаш:чнпм ! висо-

з

:очутлизик. Нежа чутливост! тесту складае 10 нг/см в]русного

¡ЛКУ,

5. При дс-сл1дя:енн1 ФекаЛ1й в!д хворих телят в р!зних тес-ах выявлено ротав1рус за допоногою ЕФ в пмг - 46,515,2 >:. 1ФЛ -1.514. 9 У; ФЗ - 29.414.7 У.. Р81ЕФ - 21,714,3. И, РДП - 16.313,9 У.

КОРОНаВ!РУСИ методом ФЗ В 27,613.2 РГГА - 18.612.9 У- 1 В! ЕФ 20,243.1 У. . ~

6. При пор!енялькону аяал1з! иетод!в. як! ешсористовуються лабораторий! д!агностиШ рота-' ! коронав1рус!в велико! рогато!

гдоби, встаноалено. ио за спеииФ1чн1стю 1 чутлив1Стю метод флуо-есиоктних зонд!в переверни-е В1ЕФ. ргга ! рдп на 7.6, 9 1 13 и ¡дпов!дпо,

СПИСОК !!АУКОВИХ ПРАЦ», ОПУБЛГКОВЛНИХ ЗА ТЕНОО ЛИСЕРТАШ Г !. прохорятова Е. В. серологическое обследование, стад крупн-у-рогатого скота пэ яэлитае рота-, и коронаеируснык ннФекиин //

- гг -

Теоретические и практические вопросы ветеринарии. - Катериалг межд. науч. практ. конФ. -Тарту, 1990. - С. 115-117.

2. Прохорятова О. В., Новожилова C.B.. Експрес-!кдикаа!я ро тав1русу велико! рогато'!' худоби методом Флуоресаентних зонд!в // Проблем» ветеринарно! медешши по обслуговаш»' твариниатва колек-тивних та Фермерських господарств. - натертая» кокФеррнаП г.оло-дих вчених ¡ спея!ал!сТ1В УкраШ!. - Харкгв, 1992- - С. 22.

3. индикация рота- и коронавирусов с помошыо Флуоресаэнтного зонда ЯСК. Е. В. Прохорятова, и. В. . Смелянскал, В. Ф. Бабкин, Л. А. Панченко. / Актуальные вопроси микробиологии, ^пиле-миологии и иммунологии инфекционных болезней . Мат .»риалы мржд. науч. г.онф. -Харьков. 1993.- С. 211.

4. Використання методу.Флуоресиентннх зонд!в для добору i oaiHKi системи репродукап BipyciB. Шшенко в. о., Е!лок1нь B.c., Прохорятова О. В., Новожилова е. в. , Нетл!к!на И. О. i i я. / Пютех-нологП ветеринарнах препарат!в. - Натер!али наук, практ. кокф.-xapKiB, 1993. - с. 18.

5. прохорятова О. В.. Бабк!н В. ф. , Усенко Т.е. Детек1Ля рота-BlpycHoï геномно!' рнк за допомогое електроФорезу у ПААГ ¡з фекаль-них проб хворих д¡зреею телят.// Збереж1Нсть молодняка с/г тва-рин - запорука розвитку твариниатва УкраШ:.- Зб!рник ст. наук, практ. конф. - Харк!в. 1994. --с. 64-65.

6. смелянская Н. В.. Прохорятова Е. В.. Баб. ин в. Ф.. Панченко Л. А. Применени? метода Флуоресцентных зондов для диагностики килечной инфекаии у детей // Никробиол. журнал. - к., 1994. - Т. 50, H 5. - С. 105.

7. Д!агностика KOPOHaBipycHO'i кииково! 1нФекП за допомогею Флуоресцентного зонду ДСК. Волянський Ю. Л. , Си1лянська И. В. . Про-хс-Рятова о. в. , Панченко Л. о. . Бусол в. о., Ea6KiH 3. Ф. /1нФормаа!й-

лист КОЗ VKPaïHH, К 92. - 1991. - 2с.

S. Использование Флуоресцентных зондов для идентификации не-торцх вирусов животных и антител к ним. В. А. Кишенко, А. И. Дуд-ков, в. Н. Захаров, Е. В. Новожилова. И. А. Базаров, Е. В. Прохоря-ва, А. Н. Смирнов, В. ф. Бабкин и др.. // Вопросы вирусологии. -95. - Т. 1. - С. 12-14.

9. смелянская и. В.. Прохорятова Е. В.панченко Л. А. и др. типизация услоеий использования клеточных культур для индикации русов с помопыэ метода Флуоресцентных зондов // клиническая ла-раторная диагностика. - 1995, - И 5. - С, 44.

10. 1кд1:катя рота- та коронав!рус1в велико! рогато! худоби годом «луоресцентного зонду. Бусол В. О.. Бабкгн В. ф. . Прокорято-0. з., 151 гонко В. О. . См1лянська Н. В. / Нетод1чни указ1вки. - X, ?5. - Сс^

11. Разработка условий изготовления и сохранения клеточных :ьтур для использования в методе Флуоресыентных зондов. Бусол i.. Еаекни В. 0.. Прохорлтова Е. В., Усенко Т. С., Смелянская й. В., ¡чспко Л. А. / оспая эпизоотология: иммунологические, экологн-:кие и методологические проблемы. - Материалы мезсд. науч. конф. ->ьков, 1995. - С. 243-250.

12. Кндпкапия рота-, коронавирусов методом Флуоресцентных ■дов. нишенко В. А., Прохогятова Е. В. г Смелянская к В. . Нетлики-Н. А. . Смитов Н. Б. / Вирусные и никробнне болезни животных. -

НГ.УЧ. ТРУДОВ. - Владимир, 1995.' - С. 125-126.

Лрохорятоза Е. В. Усовершенствование дифференциальной диагностики смешанных рота- коронавнрусных энтеритов новорожденных телят, защищается рукопись диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук по специальности 16.оо. 03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология и иммунология, ин-т эксперим. и клин. вет. медицины улан. Харьков. 1995.

Выявлены эпизоотические особенности диареи новорожденных телят полиэтиологичной природы ( рота-, коронавирусы. колибактерии) в полевых условиях. Предложен экспрессный диагностический метод Флуоресцентных зондов для индикации рота-, коронавирусов крупного рогатого скота в Фекальном материале. Порог чувствительности данного теста составил 10 нг/ см3 вирусного белка. Ка основании проведенной сравнительной оценки эффективности лаборагорних методов, используемых для диагностики рота-, коронавнрусных ипФек-аий даны рекомендации по их использованию в зависимости от задач и целей исследования.

Protoioryatova И. V. improvement of differential diagnosis of mixed. rota- and coronaviral ententes of newborn calves. Hanus-cript of thesis for candidate's degree (vetervnarv) in specialized fields 16. 00. 03 - vetervnarv microbiology, virology, episootology and lmmunoioey. Institut of experimental and clinical vetarlnarr medicine of UAAS, KharKov. 1996.

Epizootic peculiarities of diarrhoea of poiyetiologic nature (rota-, coronavlruses, colibacilli) of newborn calves in field conditions have been reveled. Rapid diagnostic method of fluorescent probes for b&vme rota- and coronavlruses indication in feces is proposed. SensitlvitV threshold of the test is 10 ne /cm* of virus protein. Laboratery methods, applied for rota-and coronaviral infection diagnosis, have n comparatively evaluated. for; efficiency :and are recommended to r~e used in dependence of the test purposes and objectives.

Ключов! слова: новонароджен1 телята, рота-, корочав1руси, кол1 бак^ терц, д1 агностика