Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:О течении коронавирусной инфекции у крупного рогатого скота

ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ СОВЕТА МИНИСТРОВ СССР ПО ПРОДОВОЛЬСТВИЮ И ЗАКУПШ

УКРАИНСКАЯ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ

»

СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ

На правах рукописи

ТАШУТА Сергей Григорьевич

уда 619:578.834.1

О ТЕЧЕНИИ КОРОНАВИРУСЮЙ ИШЕКЦИИ У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Киев 1990

Работа выполнена на кафедре микробиологии и вирусологии Украинской ордена Трудового Красного Знамен* сельскохозяйственной акадеиии.

Научный руководитель - доктор биологических наук,

профессор, член - корр. ВАСЮМИ В.П.ОНУФРИЕВ

Официальные оппонента: доктор ветеринарных наук,

профессор, член - корр. ВАСХНИЛ

А.И.СОБКО кандидат ветеринарных наук, доцент А.Ф. ЕВТУШЕНКО

Ведущая организация - Украинский НИИ сельскохозяйственной микробиологии /г. Чернигов/

Зашита диссертации состоится " "С'У'т-САГа; ^ 1990 г. в \Ч часов-минут на заседании специализированного совета К 120.71.05 в Украинской ордена Трудового Красного Знамени сельскохозяйственной академии по адресу: 252127, Киев-127, ул. Полковника Потехина, 16, учебный корпус №12, аудитория 41 / .

Просим принять участие в заседании совета или выслать отзыв на автореферат в 2-х экз., заверенный печатью, по адресу: 252041, Киев-41, ул. Героев обороны, 15, УСХА, секретариат специализированных советов.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке академии.

Автореферат разослан " -( " О ■' И-^ | ■, 1990 г.

Учений секретарь специализированного совета В.А.Бортничук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность теш. В условиях интенсификации и специализации животноводства перед ветеринарными работниками стоят сложные и • ответственные задачи по обеспечению благополучия хозяйств по инфекционным и инвазионным заболеваниям, сохранению поголовья скота и повышению его продуктивности, а также по увеличению выхода и сохранности молодняка. Последняя задача является весьма актуальной в связи с широкий распространением желудочно-кишечных заболеваний новорожденных телят, принимающих во многих случаях массовый характер. Отсюда следует, что решение даже части вопросов, связанных с данной проблемой, имеет большое экономическое и социальное значение потому, что может быть весьма существенным резервом в выполнении Продовольственной программы.

Желудочно-кишечные заболевания новорожденных телят инфек- ' ционной природа имеют весьма широкое распространение. Среди вирусных инфекций, вызывающих эту патологию,, особое значение приобрела коронав1фусная ии^екция новорожденных телят, которая установлена во многих странах мира с развитым животноводством

/Яеа. е£. *£., 1981/.

Впервые коронавирус крупного рогатого скота был выделен в США в 1971 году от больных энтеритом телят. Патогенетическая роль

его в возникновении энтеритов новорожденных телят была подтвежде-

>

на на телятах-гнотобиогах и телятах лишенных молозива Дйг-гч. ¿Ж.

1972; ТЯеНа^ША, 1976; С.МЛ.а^

1975, 1978; Вовк С.И. и соавт., 1988/. Этот возбудитель, наряду с ротавирусом и кишечной палочкой, играет одну из основных ролей в патологии гастроэнтеритов новорожденных телят.

Доказано, что норонавирусная инфекция весьма широко распространена во многих странах мира и наносит ощутимые материальные

убытки промышленному животноводству. Над.решением проблем профилактики коронавирусиого энтерита новорожденных телят работают многие исследовательские центры мира. Изучением коронавирусной шфекции новорожденных телят в нашей стране занимаются исследователи внииэв, штв и усха.

Хотя ».оронавирусная инфекция крупного рогатого скота известна науке около 18 лет, но в изучении особенностей течения инфекции, патогенеза, иммуногенеза и других вопросов этого заболевания имеется еще много'неясного.

Цель и задачи исследований. Целью нашей работы являлось изучение некоторых вопросов эпизоотологии коронавирусной инфекции крупного рогатого скота, особенностей течения инфекции в неблагополучных хозяйствах и в эксперименте на новорожденных безмолозив-ннх телятах.

Для достижения этой цели мы должны были решить следуюцие задачи:

- определить широту распространения коронавирусной инфекции в животноводческих хозяйствах Украинской ССР;

- изучить характер течения коронавирусной инфекции в экспериментальных условиях на новорожденных безмолозивных телятах и в неблагополучных хозяйствах, у которых инфекция протекает как энзоотия;

- усовершенствовать лабораторные методы диагностики корона-вирусного энтерита;

- экспериментально подтвердить инфекционность фекалий коров, содержащих корокавирус, на новорожденных безмолозивных телята* и на взрослых животных;

- изучить развитие коронавирусной инфекции в отдельных обособ-лешснх стадах крупного рогатого скота.

Научная новизна. В результате проведенных исследований

впервые экспериментальным путем доказана возможность инфицирования новорожденных телят фекальными массами клинически здоровых коров-матерей, выделяющих коронавирус с фекалиями. Таким образом, подтвердилось предположение, высказанное СчоисА СЛ ¿¿. а?^ /1985/ и К-шЬилдгл. М. ¿¿.а^; /1987/. .Доказана высокая восприимчивость взрослых животных к коронавирусу, у которых инфекционный процесс протекает в виде латентной инфекции о интенсивным вирусовыделением.

Впервые экспериментально изучена особенность течения эпизоотического процесса, вызванного бычьим коронавирусом, который круглогодично циркулирует в обособленных стадах крупного рогатого скота.

Теоретическая значимость и практическая ценность работы. На основании проведенных исследований установлено, что коронавирус-ная инфекция крупного рогатого скота протекает в неблагополучных хозяйствах в виде энзоотии, при которой вирус циркулирует в стаде в течение всего года. Источником инфекции являются не только больные и переболевшие телята, но и взрослые животные, у которых инфекция протекает латентно и сопровождается интенсивным вирусовыделением в течение 2-3 недель. Показано, что максимальное напряжение эпизоотического процесса отмечается в холодное время года и в период массовых отелов. Подтверждением этому являются периодическое возрастание титров антиноронавирусных антител в , организме взрослых животных, сопровождающееся усилением выделения коронавируса с фекалиями, отмечаемое в это время года, а также повышение заболеваемости и гибели новорожденных телят.

Сравнительное изучение серологических методов РГА и РЗГА наряду с электронно-микроскопическими исследованиями показало достаточно высокую эффективность этих методов при лабораторной диагностике коронавирусного энтерита новорожденных телят.

4 '

Простота и доступность РГА и РЗГА позволяют широко использовать их при диагностике коронавирусного энтерита в диагностических лабораториях.

На основании проведенных нами исследований на защиту выносятся следующие положения:

- результаты эпизоотологических исследований особенностей течения энзоотического процесса при коронавирусной инфекции крупного рогагогв скота}

- о течении коронавирусной инфекции и вирусовыделения в экспериментальных условиях у новорожденных безмолозивных телят и у животных, находящихся в неблагополучных хозяйствах;

- о распространении коронавирусной инфекции в животноводческих хозяйствах некоторых областей Украинской ССР;

- усовершенствование лабораторных методов диагностики коронавирусного энтерита;

- о продолжительности и напряженности постин$екционного иммунитета при коронавирусной инфекции в отдельных изолированных стадах.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и получили положительную оценку на заседаниях совета ветеринарного факультета Украинской сельскохозяйственной академии /1988, 1989гг./; на научных конференциях профессорско-преподавательского состава и аспирантов Украинской сельскохозяйствешюй академии /1988, 1990гг./; на республиканской научной конференции аспирантов /г. Харьков, февраль 1990г./, а также на расширенном заседании кафедр эпизоотологии, микроС юлогии и вирусологии /июнь 1990г./.

Публикации. Основные положения диссертации опубликованы в 4 работах.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 149 страницах машинописного текста, иллюстрирована 16 таблицами и 15 рисунками. Состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения материалов, выводов и практических предложений. Список литературы включает в себя 220 источников, в том числе 182 работы зарубежных авторов.

С0ЕСТ1ШШЕ ИССЛЕДОВАНИЯ '

Работа выполнялась в течение 1987 - 1990 годов на кафедре микробиологии и вирусологии Украинской ордена Трудового Красного Знамени сельскохозяйственной академии, а также в четырех неблагополучных по острим желудочно-кишечным заболеваниям телят хозяйствах.

Материалы и методы. В основу работы положены материалы соб- ' ствешшх исследований и наблюдений проведенных в четырех хозяйствах, неблагополучных по острым желудочно-кишечным заболеваниям хозяйствах. Кроме того,, для изучения широты распространения коро-навирусной инфекции новорожденных телят на территории республики проводили отбор проб крови от крупного рогатого скота различного возраста и направления продуктивности на мясокомбинатах Киева, Ровно и Николаева. А для установления степени распространения бычьего коронавируса среди других видов животных проводили отбор крови от свиней, овец, лошадей, кроликов, морских свинок и крыс.

Всего же в процессе выполнения диссертационной работы произведено исследование 6944 проб материала /крови, молока, молозива и фекалий/ от 6668 животных из 202 хозяйств различных регионов , Украины. У 328 животных материал отбирался многократно для повторных исследований.

Весь материал в лабораторных условиях исследовался с помощью РГА. и РЗГА, а в отдельных опытах применяли методы электронной и

иммуноэлектронной микроскопии и выделение коронавируса в перевиваемой культуре клеток Уело . В качестве специфического корона-вирусного антигена использовали вируссодержащуга суспензию, полученную после экспериментального заражения новорожденного безмоло-зивного теленка коронавирусным изолятом любезно предоставленного нам сотрудниками УНШЭВ. Специфичность этого изолята была подтверждена в РЗГА с иммунными сыворотками^ полученными на референтные штаммы коронавируса крупного рогатого скота /Р-17, 0-800 и КЛ-2/.

Диагностические сыворотки получали от теленка-реконвалесцен-та, зараженного в эксперименте коронавирусным изолятом, а также на кроликах, морских свинках и белых крысах после двухкратных внутримышечных иммунизаций. Для иммунизации лабораторных животных использовали очищенный и концентрированный коронавирусный антиген, смешанный в равном объеме с _маслинным адыовантом, изготовленным во Всесоюзном научно-исследовательском ящурном институте. В качестве нормальной /отрицательной/ сыворотки использовали нативную сыворотку эмбрионов коров.

РГА и РЗГА ставили микромегодом по общепринятой методике с некоторыми нашими модификациями.

При изучении эпизоотологии коронавирусной инфекции новорожденных телят, в хозяйствах неблагополучных по этой инфекции, пользовались методом эпизоотологического исследования, предложенным академиком ВАСХНИЛ В.П.Урбаном /1981/. Особое внимание при эпизоотологическом обследовании ферм крупного рогатого скота обращали на наличие в них родильных помещений и профилакториев для новорождённых телят, соответствие их г чтеринарно-саштарным требованиям, и особенно на организацию приема телят при родах и гас . кормление в первые часы жизни.

Анализировали, особенности течения заболевания /продолжитель-

ность и тяжесть течения болезни, возраст заболевших животных, уровень заболеваемости и смертности, влияние времени года на частоту заболевания/, а также изучали эффективность проводимых в хозяйствах ветеринарно-санитарных мероприятий, профилактических и лечебных мер.

Статистическую обработку результатов исследований осуществляли общепринятыми в биологии методами.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Норонавирусный антиген для диагностических целей мы получали из гомогената слизистой оболочки кишечника и его содержимого новорожденного безмолозивного теленка, перорально зараженного вирус-содержшцим материалом, а также при культивировании полевых изоля-тов вируса в перевиваемой культуре клеток Ve^o .. Из гомогената слизистой оболочки инфицированного кишечника и его содержимого было получено 6500 мл высокоактивного коронавирусного антигена /с гемагглютинирутоцгад титром Is 1024/. Цультуральшй вирус имел геы-агглютинационный титр 1:16. Концентрирование суспензий культура-льного коронавируса, при помощи обработки ПЭГ /м.в. 6000/ или С помощью адсорбции-элюции на эритроцитах крыс, значительно повыпало гемагглютинационные титры коронавируса. Гемагглютинациошше гитры, приготовленных таким образом препаратов, значительно повышались и достигали значений 1:128 1:256. В процессе хранения три низких температурах /-20 и -35°С/ гемагглютинациошше титр/ горонавирусного антигена не изменялись и оставались на прежнем уровне в течение 27 месяцев /период наблюдения/.

Специфическая сыворотка, полученная от теленка-ренонналес-ента, имела антигемагглютинациошшй титр 1:128. Получено 800 ил пецифической сыворотки, которая была расфасована в маленькие

полиэтиленовые пробирочки /по 0,9 мл/ и помещена на хранение в холодильную камеру при температуре -35°С. Режим хранения ее в течение двух лет не изменялся, что позволило иметь диагностическую сыворотку с постоянным антигемагглютинационным титром.

Из лабораторных животных наилучшими продуцентами диагностической сыворотки оказались морские свинки и крысы, в организме которых активно вырабатывались антитела к бычьему коронавирусу. У морских свинок и крыс, через две недели после повторной иммунизации, титры антител в сыворотке крови достигли 1:2048 и 1:1024 соответственно. Но, как выяснилось, в сыворотке крови непривитых крыс /контрольных/ были обнаружены антигемагглютинины к коронавирусу крупного рогатого скота в титрах I:16 - I:32. Наличие антител в крови крыс к коронавирусу диареи новорожденных телят можно предположительно объяснить циркуляцией среди крыс антигенно близкородственного штамма коронавируса крыс. По этой причине иммунная сыворотка, полученная на крысах, не использовалась нами при диагностике коронавирусного энтерита новорожденных телят, хотя и была достаточно активной.

При отработке оптимальных условий лабораторной диагностики коронавирусного энтерита новорожденных телят с помощью РГА и РЗГА мы особое внимание уделяли подбору оптимальных концентрации используемых в реакциях инградиентов, таких как суспензии эритроцитов и рабочей дозы коронавирусного антигена. Учитывали и корректировали температурные и временные параметры, при которых более четко проходили РГА и РЗГА.

В наших опытах бычьий коронавирус агглютинировал эритроциты мыши, крысы и хомяка, но не агглютинировал эритроциты человека группы 0, коровы, теленка, лошади, курицы, цыпленка, барана, кози, индюка, гуся, утки, морской свинки, кролика, голубя, свиньи, карпа,

лягушки, собаки и кошки.

Сравнительные исследования по установлению оптимальной концентрации суспензий эритроцитов, используемых в реакциях, показали, что более оптимальной является 1Й-ная суспензия эритроцитов. Предпочтительное использование ее, по сравнению с 0,55<-ной концентрацией, заключается в следующем: во-первых, почти никогда не бывает спонтанной агглютинации эритроцитов, особенно при использовании эритроцитов крыс и, во-вторых, быстрее и четче проходят реакции.

Экспериментально установлено, что РГА более целесообразно проводить при комнатной температуре, а учет результатов - только после полного оседания эритроцитов в контроле или же по истечении 45 минут.

Исследования по установлению достоверности Получаемых результатов в РГА и РЗГА показали, что средняя статистическая ошибка при учете результатов РГА равняется,ш =40,081^, а при учете результатов РЗГА, тх =*0,044Это говорит о том, что величины средних статистических ошибок не превышают значений 0,I8^t, поэтому и критерий достоверности /¿/ наших опытов был достаточно высок /более 90/, хотя для большинства биологических исследований критерий достоверностиt = 2 или 2,5 считается вполне достаточным.

Важным-звеном в постановке диагноза на коронавирусный энтерит является выделение возбудителя в культуре клеток. В наших опытах, при культивировании бычьего коронавируса в перевиваемой культуре клеток Veto , ш использовали два изолята, полученные от больных энтеритом телят из хозяйств неблагополучных по острым желудочно-кишечным заболеваниям. Оба изолята размножались в клетках Veto , что подтверждалось отчетливым ВДД, которое удавалось наблюдать в зараженных культурах клеток начиная с третьего пассажа. Инфекцион-

к 7

ные титры вируса в одиннадцатом пассаже достигли 10 ' ТЩбо/мл. При электронной микроскопии образцов вируссодержащих культураль-ных суспензий обнаруживались, главным образом, округлые и овальные вирусные частицы, имеющие диаметр 70 - 120 нм. Вирусные частицы, имевшие булавовидные выступы, встречались редко. При ИЭМ довольно часто в поле зрения обнаруживались скопления округлых вирусных частиц как с булавовидны»« проекциями, так и без них.

Течение коронавирусной инфекции изучалось в четырех неблагополучных хозяйствах по желудочно-кишечным заболеваниям новорожденных телят путем обнаружения коронавирусного антигена в фекалиях и специфических антител в сыворотках крови, молозива и молока. В Киевской области обследованию подвергались животноводческие стада совхозов им. Щорса и "Богдановский" Броварского района, в Ровен-ской области колхозы "Маяк" и "Ленинский шлях" Червоноармийского района. Проведенные исследования показали, что возбудителями массовых энтеритов в этих хозяйствах являются коронавирусы. Кроме того, в колхозах "Маяк" и "Ленинский шлях" помимо коронавирусов были обнаружены ротавирусы и кишечная палочка, способные кал в отдельности, так и в ассоциации вызывать тяжелые кишечные расстройства у новорожденных телят. Эпизоотологическими обследованиями, изучением первичной учетной документации была установлена массовая заболеваемость и значительная гибель новорожденных телят от инфекционных гастроэнтеритов, а лабораторными методами исследований подтверждена этиологическая роль бычьего корэнавируса в возникновении диарей в этих: хозяйствах. Гибель новорожденных телят ст инфекционных кишечных патологий е течение года колебалась от 1,3 до 6,2», Но в зимние месяцы гибель телят достигала 23,3*.

Клиническое проявление естественно протекающего коронавирусного энтерита у новорожденных телят в неблагополучных хозяйствах

характеризовалось разной степенью тяжести переболевания. У одних животных энтерит протекал в легкой форме с кратковременной диареей, у других наоборот, в тяжелой форме, с профузным изнуряющим поносом и сильной дегидратацией организма, С появлением диареи у больных телят отмечалось снижение или исчезновение аппетита, подавленность и вялость. Фекальные массы, в зависимости от стадии инфекционного процесса, имели жидкую или водянистую консистенцию с примесью слизи и непереваренных кусочков корма, а в отдельных случаях в фекальных массах находили прожилки крови. Окраска фекалий была желтой, с темными или светлыми оттенками. Шерстный покров задней части тела больных телят взъерошен и обильно покрыт фекальными массами. Температура тела у поносящих животных обычно в пределах физиологической норш и лишь в агональном состоянии снижается на I - 1,б°С.

Но нашим наблюдениям, продолжительность течения болезни при коронавирусной инфекции в среднем составляет 3-6 дней. Некоторые животные переболевали коронавирусным энтеритом дважды. Длительность переболевания и тяжесть течения инфекции во многом зависела от доз вируса, поступающего в организм телят, а также от иммунологического статуса животных. Из наблюдений и проведенных исследований следует, что чем выше был колостральный иммунитет, тем легче и короче протекало заболевание.

Выделение коронавируса с фекалиями продолжается в течение , 4-12 дней, что способствует интенсивному инфицированию окру-жаюцей среда и создает благоприятные условия для заражения восприимчивых животных.

Тяжесть переболевания и исход болезни во многом эаичсят от глубины развития патологических процессов, участия в патогенезе этой инфекции бактериальной флоры, а также от своевременного и правильного симптоматического -течения. Кроме того, на исход заболе-

в&ния оказывал ряд других факторов, влияющих на общую резистентность организма новорожденного животного.

При впизоотологическом обследовании животноводческих ферм неблагополучных хозяйств были установлены нарушения в содержании и кормлении глубокостельных коров. Отелы проходили непосредственно в стойле, в неудовлетворительных санитарных условиях. Поэтому родившиеся телята часто сразу же попадали в условия, при которых они легко могли заражаться циркулирующем в хозяйстве возбудителем коронавирусного энтерита, находящимся в огромных количествах в фекалиях коров, в инфицированной подстилке, на загрязненном вымени, на различных предметах помещения. Благоприятные условия для развития инфекции создавались при рождении телят ночью, потому что поступление болезнетворных агентов в организм родившегося животного происходит задолго до принятия материнского молозива. Отмечено, что в ряде случаев первая выпойка молозива осуществлялась через 4-6 и даже 10 часов после рождения теленка. Неоднократно от таких телят, уже на второй день после рождения удавалось обнаруживать коронавирус в фекалиях. Несоблюдение ветеринарно-санитарных требований при содержании коров-матерей и новорожденных телят, а также постоянная циркуляция в этих хозяйствах вируса приводили к высокой заболеваемости телят коронавирусным энтеритом, с охватом всего восприимчивого поголовья.

Из 186 проб фекалий, отобранных от.больных энтеритом ново-розденных телят, в 105 был обнаружен коронавирусный антиген /табл. I/. Наибольшая частота обнаружения коронавируса в фекалиях отмечалась в первые две недели жизни к: зотных.

Заболеваемость новорожденных телят коронавирусным энтеритом отмечается на протяжении всего года. Наиболее интенсивно эта инфекция проявляется и наносит ощутимый экономический ущерб в

13 ■ . .

зимне-весенний период. Это обуславливается массовыми отелами, наличием.большого количества восприимчивого к вирусу поголовья животных и лучшим сохранением возбудителя во внешней среде.

Табл. I.

Частота обнаружения коронавирусного антигена в фекалиях больных энтеритом телят различного возраста

Возраст Исследовано Обнаружен КВ Количество вирусо-

телят животных антиген в пробах выделителей /в % /

/в днях/ фекалий

Г - 3 20 13 65

4-7 • .49 34 69,4

8 - 14 103 53 51,5

Т5 - 21 9 4 44,4

22 - 28 5 I - 20

Всего . 186 105 56,4

При изучении коронавируской инфекции было уделено внимание исследованиям по установлению циркуляции вируса и специфических антител в крови животных этих хозяйств. Эти исследования проводились с целью установления динамики эпизоотического процесса в обособленных стадах, изучения развития иммуногенеза при корона-вирусной инфекции и определения особенности выделения норонавиру-са коровами, у которнх клинические симптома коронавирусного энтерита не наблюдались.

В течений года у всех обследованных коров в крови обнаруживали специфические антитела к коронавирусу крупного рогатого енота в титрах от 1:15 до 1:1024. Систематические исследования показали, что наиболее интенсивно эпизоотический процесс проявляет:7

ь осенне-весенний период года, когда у животных обследуемых стад отмечадся подъем титров антител в среднем 6,1 - 7,12 + 0,04 . В вто время года набяццали 2-3 волны подъема титров антител к коронавирусу примерно У 80* животных, тогда как у остальной части коров титры антител удерживались на постоянном уровне или же отмечались несущественные колебания. Это наглядно видно из представленной диаграммы /Рис. I/. Заметно снижались титры антител к коронавирусу в летне-осенний период года, когда у 5 - 10* животных антитела в крови ые обнаруживались.

. Подьецу титров антител обычно предшествовала циркуляция корон&вируса в организме коров, присутствие которого обнаруживали примерно у 60* исследуемых животных в осенне-весекний период. 1Соронавярусный антиген в фекалиях коров в . это время обнаруживали в титрах 1:32 - 1:256. С апреля по сентябрь коронавирусний антиген обнаруживался в фекалиях коров значительно реже. Присутствие его в фекальных массах клинически здоровых коров устанавливалось лишь у 5 - 7* обследованных животных в титрах не превышающих Г:32. Обычно в это время отмечалось и некоторое снижение заболеваемости и гибели новорожденных телят от коронавирусного эитерита. И наоборот, эти показатели стремительно возрастали в осенне-зимний период года. Наблюдалась прямая зависимость между напряженностью эпизоотического процесса среди коров и заболеваемостью и гибелью новорожденных телят. Взрослые животные, среди которых коронавирусная инфекция протекает в латентной форме, могут быть источником заражения новорожденных телят, выделяя вирус с фекалиями /10® корона-вирусных частиц в I г фекалий/. Установлено, что короиавирус у взрослых животных выделяется не постоянно, а периодически. Диити-дьноегь выделения его колебалась в течение нескольких недель. Затем наступала пауза, когда вирус не обнаруживался. Через

С.

э

я ж

а

К С,

а о

--,-i-

III 17 7 71 711 Ш1 IX X XI" XII i II

1 9 8 9 г. '1 9 9 0 г.

?ис. I. Динамика титров антител к коронавирусу в крови коров колхоза "Ленинский шлях"

некоторое время у тех же животных снова обнаруживался вирус. Данные Исследований парных проб сыворотки крови свидетельствуют о нарастании титров антител в это время.

Установлено, что в первых порциях молозива содержится большое количество специфических антител, титры которых на I - 2 порядка. выше или такие же, как и в крови матери. Длительность выделения с молозивом антител незначительная и колеблется дгI до 7 дней. На длительность нахождения специфических антител в молозиве и молоке оказывает влияние напряженность гуморального постинфекционного иммунитета у коров-матерей. Обычно, чем он выше тем продолжительней обнаруживаются антитела в молозиве.

Анализируя результаты опытов по экспериментальному заражению новорожденных безмолозивных телят можно сказать, что коронавирусная ии$екция в экспериментальных условиях протекает остро в тяжелой форме и обычно заканчивается гибелью подопытных животных. Наибольшее накопление и выделение коронавируса с фека>-лиями больных телят отмечается через 20 - 28 часов После начала диареи.

Пероральное заражение новорожденного безмолозивного теленка фильтратом фекалий от коровы, в котором при электронной микроскопии были обнаружены коронавирусные частицы, приводило через 24 часа к диарее. В образцах фекалий, отобранных от больного теленка, обнаруживался коронавирусный антиген. Проведенный опыт показал, что коронавирус, изолированный от клинически здоровой коровы вызывал типичный коронавирусный энтерит у новорожденного безмолозивного теленка. Это подтверждалось характерным по- времени инкубационным'периодом,который составлял 24 часа и типичным течением болезни. Кроме того, от больного животного вновь удалось иволировать коронавирус, к^торий был идентифицирован в

серологических реакциях /РГА и РЗГА/ и методом ИЭИ.

У зараженного рнтерально 15-ти месячного бычка, в крови и фекалиях которого не было обнаружено антител и антигена соответственно, через 36 часов после заражения удалось обнаружить корона-вирусный антиген в титре 1:16. Через 72 часа после заражения титр коронавирусного гемагглютинина достиг значения 1:256, после чего он начал постепенно снижаться. Спустя 10 дней после заражения в сыворотке крови были обнаружены антитела к бычьему коронавирусу в титре.1:64. Общее состояние животного оставалось без видимых изменений.

Распространение коронавирусной инфекции крупного рогатого скота в хозяйствах республики изучали путем исследования образцов сыворотки крови от крупного рогатого скота разных пород, направлений продуктивности и возрастных групп. В Киевской области было обследовано 27 хозяйств из 12 районов, Николаевской -57 хозяйств из 10 районов и 116 хозяйств 13 районов Ровенской области.

Наибольшая частота обнаружения антикоронавирусных антител была выявлена среди коров /91,5%/, содержащихся на фермах крупных хозяйств /Табл. 2/. Среди коров, находящихся в личных хозяйствах граждан, наличие антител к коронавирусу крупного рогатого скота выявлено в 163 случаях из 367, что составляет 44,Значительно реже обнаруживались аотитела к коронавирусу в сыворотке крови бычков и телок в возрасте 1,5 - 2'лет.

Исследования показали, что только у животных двух хозяйств из 200 не обнаружено антител к коронавирусу. В остальных хозяйствах антигемагглюткнинн к коронавирусу крупного рогатого скота обнаруживались у 6,7 - 100% животных. Отмечено, что максимальное количество животных, у гсотормх обнаружил*лись антигекагглютининн

к бычьему коронавирусу, наблюдалось в молочных стадах. У животных откормочных хозяйств, у которых преобладали бычки, количество серопоэитивных проб сыворотки крови было значительно ниже, чем среди проб, полученных от коров. В сыворотках крови коров титры антител к коронавирусу крупного рогатого скота, как правило, были гораздо выше и достигали 1:1024, чем в сыворотках крови, полученных от бычков.

Табл. 2.

Содержание антигемагглютшшнов к коронавирусу крупного рогатого скота в сыворотке крови животных

Вид Число обследованных_

животных Всего Положительно реагирующих

абсолютное число %

¡£РС, всего 5978 4484 75,01

в том числе:

коровы /общ. сектор/ 1870 1711 91,5

коровы /личный сектор/ 36? 163 44,41

бычки и телки /1,5-2г./ 3643 2550 69,99

телята /до I месяца/ 98 60 61,22

лошади 8 0 0

свиньи 271 0 0

овцы 17 6 35,29

куры 50 0 0

крысы 25 25 . . 100

морские свинки 40 0 о •

кролики 7 0 0

Среди других видов животных антитела к бич; зму коронавирусу были найдены в сыворотке крови крыс /100'Л/ и овец /35,

ВЫВОДЫ

1. Систематическое обнаружение антигемагглготининов к бычьему коронавирусу в сыворотках крови крупного рогатого скота в большинстве хозяйств ряда обследованных районов трех областей республики свидетельствуют о широком распространений возбудителя коронавирусной инфекции новорожденных телят. Количество серо-позитивных животных в различных хозяйствах колеблется от 6,7 до 1009«.

2. Коронавирусная инфекция крупного рогатого скота в неблагополучных хозяйствах протекает в виде энзоотии в течение всего года. Максимальное напряжение эпизоотического процесса при коронавирусной инфекции отмечается в зимне-весенний период не только в результате увеличения количества отелов, но и лучшего сохрапсгал во пнагной срэдэ возбудителя заболевания часто на фоне неудовлетворительного ветеринарно-санитарного состояния неблагополучных хозяйств.

3. В.неблагополучных хозяйствах по массовым заболеваниям новорожденных телят, в которых была установлена коронавирусная инфекция крупного рогатого скота, заболеваемость и летальность колебались в пределах 64 - 100 и 4 - 6$ соответственно.

4. Источником инфекции в неблагополучных по коронавирусном энтерите хоэяйотвак являются не только больше и переболевшие новорожденные телята, но и взрослые животные, среди которых инфекция протекает п латентной форме. Вирус, выделяющийся с фекалиями клинически здоровых коров, является инфекциошмм для новорожденных телят.

5. Продолжительность инкубационного периода при коронавирусной инфекции-у нор"рожде!гннх бепмолозивных телят после исскуст-венного заражении составляет 20 - РА часа. Экспериментальная

инфекция протекает остро в тяжелой форме и обычно заканчивается гибель«; животных.

6. Максимальное накопление и выделение короиавируса с фекалиями, больных телят наблюдается через 20 28 часов после начала диареи и продолжается 6-12 дней. У взрослых животных корона-вирус;шй антиген в фекалиях обнаруживается с помощью РГА в течение 2-3 недель и титрах 1:32 - 1:256. Периоды вирусовыделения в течение года у одних и тех же животных повторяются 3-4 раза.

7. При первичном установлении диагноза и выяснении этиоло-гичосной роли короиавируса крупного рогатого скота в массовых заболеваниях новорожденных телят с явлениями диареи необходимо одновременно проводить исследования фекалий больных, содержимого тонкого отдела кишечника павших и сывороток крови переболевших животных по обнаружению вируса, специфического антигена и антител, используя РГА, РЗГА, электронную и иммуноэлектронную микроскопию.

8. При использовании электронно-микроскопических методов диагностики коронавирусной инфекции крупного рогатого скота предпочтительней применять имцуноэлектронную микроскопию. Обнаружение короиавируса с помощью ИЭМ на 15Й происходит чаще, чем при использовании прямой электронной микроскопии.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРНЦШШШ

1. При лабораторной диагностике корилаьирусной инфекции новорожденных теллт рекомендуем использоьмь метода прямой электронной и иииуповлектронной микроскопии, ITA и РЗГА, а для выделения возбудителя из патологического материала - перевиваемую культуру клеток Vt го.

2. Для получения специфических антикоронааирус'ных сывороток рекомепдуеи использовать схему иммунизации, отработанную нами на

морских свинках, а также метод получения специфической сыворотки от теленка-реконвалесцента.

3. Коронавирусный антиген для диагностических и научных целей рекомендуем полугать из содержимого Toimoro отдела кишечника новорожденных безмолояивчых телят, после пероральиого их заражения вируссодержащим материалом, а также из коронавируса, культивируемого в перевиваемой культуре клеток Vero после предварительной концентрации ПЭГ или путем адсорбции-элюции на эритроцитах крыс.

. Разработаны и находятся в печати "Методические рекомендации по диагностике и общей профилактике рота- и коронавирусной инфекции, способам диагностики, лечения ч профинактики нарушений обмена веществ у новорожденных телят при диареях".

СПИСОК РАБОТ, ОПУЕЧККОЕЛНШ ПО ТЬМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Онуфриев В.П., Ташуга С.Г., Акоста Рене. Выделение, идентификация и культивирование коронавируса диареи новорожденных телят.в перевиваемой культуре клеток Vezo /УСХА. -1{иев, 1989. - 11с. -Деп. в ВНИИТЭИагропром 04.12.1909, (Г562.

2. Ташута С.Г., Онуфриев В.Г1., Акоста Рене, Иванченко Г.Л. Сравнительная оценка эффективности электронной и иммуноэлектрон-ной микроскопии при обнаружении коронавируса крупного рогатого скота /УСХА. -Киев, 1989. - 7с. - Деп. в ВНИИТЭИагропром 04.12.1989, №563.

3. Ташута С.Г., Онуфриев В.П. Течение коронавирусиой инфекции в хозяйстлал:, где наблюдаются массовые гастроэнтериты новорожденных телят //Молодые ученые производству: Методические рекомендации по актуальным вопросам- ветеринарии. - УНШ1ЭВ. -Харьков, 1990. -С. 35 - 36.

4. Ташута С.Г., Онуфриев В.П. Результаты исследований в

РТГА сыворотки крови крупного рогатого скота к коронавирусу // Проблемы научного обеспечения животноводстра Молдавии: Тезисы докл. кон$., 26 мая 1990 г. - Кишинев, 1990. -С. 87 - 88.