Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Туберкулез крупного рогатого скота в республиках Северного Кавказа и Калмыкии (эпизоотология, проблемы дифференциальной диагностики и меры борьбы)



о-

ВСЕРОССИЙСКИЙ МАУЧиО ИССЛЕДОВЛТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ ИИ. Я. Р. КОВАЛЕНКО

ПРИКАСПИЙСКИЙ ЗОНАЛЬНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК

На правах рукописи

РАШШН АБДШШШНЧ

ТУБЕРКУЛЕЗ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В РЕСПУБЛИКАХ СЕВЕРНОГО КАВКАЗА И КАЛМЫШ

(эпизоотология, проблемы дифференциальной днагиосгаки н меры борьбы)

Специальность 16.00.03— ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ ДОКТОРА ВЕТЕРИНАРНЫМ НШ

Москва — 1998

Работа выполнена « лабораториях тиюоттогии, диагностики и профилактики бруцсхнпа и туберкулеза животных российского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии к». Л. Р. Кочаченко и Прикаспийского зонального научно-исследовательского ветеринарного института

!

Научные консультанты: доктор ветеринарных наук, про<]>сссор OBJUIEilKOII.il.,

док-гор ветеринарных наук, про4«ссор УРГУЕВ К. Р.

Официальные оппоненты:

II. А. Шаку.юв В. А. Ведерников — А. II. Шаров —

Ведущее учреждение:

доктор ветеринарных наук, профессор, академик РЛСХН (ВНИИВВиМ); '

доктор ветеринарных наук, про^юссор, заслуженный деятель наук» РФ (ВИЭВ); доктор ветеринарных наук (ВГНКИ).

Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока (ИЭВСиДВ. г. Новосибирск).

Защита диссертации состоится « <Р» „¿С&^Я, 1998 г. в 14 час. на заседании специализированного совета Д.020.28.01 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук при Всероссийском ш1\~чно-исследоватсльском инеппуте экспериментальной ветеринарии им. Я. Р. Коваленко. 109472, Москва, Кузьминки, ВИЭВ.

. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЭВ.

Автореферат разослан л 199Я г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат ветеринарных паук Ф. Г. Терешков

1. ВВЕДЕНИЕ

1.1. Актуальность проблемы. Развитие животноводства неразрывно связано с улучшением ветеринарного обслуживания, снижением заболеваемости и падежа животных от различных болезнен. Б этой связи первоочередной задачей ветеринарной науки является разработка более совершенных средств и методов диагностики, специфической профилактики и мер борьбы с инфекционными болезнями животных.

Среди болезней, продолжающих наносить значительный экономический ущерб скотоводству, туберкулез занимает одно из первых мест в структуре инфекционной патологии! Это связано с широкой распространенностью болезни и обязательным убоем выявленных больных животных, недополучением ценной продукции. В неблагополучных хозяйствах велики затраты на проведение комплекса ветерннарно-санитарных и организационно-хозяйственных мероприятий, фактически прекращается племенная работа, ограничивается хозяйственная деятельность. Из-за несовершенства методов дифференциации специфических и параспецифичсских реакций проводится неоправданный убой здоровых животных, за счет чего еще более увеличиваются размеры экономического ущерба, претерпеваемого животноводством. Туберкулез животных имеет таклее чрезвычайно важное социальное значение, так как возбудитель болезни передается человеку и может вызвать массовое заболевание людей.

За истекшие 110 лет со времени открытия Р. Кохом возбудителя туберкулеза. теоретические и практические вопросы болезни разрабатывались фундаментальными исследованиями известных ученых (Кальмет и Герен, Гутман В. Г., Гамалея Н. Ф., Вышелссский С. Н., Юсковсц М. К., Вишневский П. П., Подлубский И. В. и многие другие).

Изучены биология возбудителя, патоморфогенез, эпизоотология, что коренным образом изменило практическое построение противоту беркулезных мероприятий. Однако, до настоящего времени остаются недостаточно изученными многие вопросы диагностики, проблема неспецифических реакций на туберкулин, вопросы взаимозаражасмости людей и животных, специфической профилактики болезни и другие.

Огромный опыт борьбы с туберкулезом позволил разработать систему профилактических, противоэпизоотических мероприятий, вполне оправдавших себя в условиях многих регионов страны. Вместе с тем, сохраняется сложная эпизоотическая обстановка в раде регионов страны, в том числе республик Северного Кавказа и Калмыкии, усугубляемая кризисными явлениями в экономике народного хозяйства в период ее реформирования. Поэтому повысилась важность изучения и учета конкретных природно-географических и хозяйственно-экономических особенностей каждого региона, влияющих на динамику эпизоотического процесса туберкулеза в сложившихся условиях.

Крайне напряженной стала эпидемиологическая обстановка по туберкулезу в России. Учитывая такое положение. Государственная Дума при-

пяла обращение «К Правительству Российской Федерации о чрезвычайных мерах по борьбе с туберкулезом в Российской Федерации». В марте 1997 г. было принято Постановление Правительства РФ «О мерах по предупреждению распространении туберкулеза в Российской Федерации», а в ноябре 1497 г обсужден проект Федерального закона «О защите населения от ту-

бсрк\ ,1С".У>'

Широкое распространение получили в последние 30 лет параспсцифи-чсскис рел.ц.ш ьа туберкулин. Известна роль атипичных микобактерий в возникновении нсспсцнфичсских реакций на туберкулин для млскоптаю-щих. однако не изучена способность микроорганизмов, родственных мнко-бактсриям по антигенной структуре и многим другим свойствам, сенсибилизировать организм животных и вызывать параспецнфичсские реакции на туберку лнн.

В связи с изложенным, совершенствование систем диагностики, дифференциальной диагностики, профилактики и мер борьбы с туберкулезом крупного рогатого скота с учетом региональных природно-хозяйствснных особенностей представляется очевидной акту альной проблемой.

1.2. Цель и задачи исследовании. Главной целью работы являлось изучение региональных особенностей эпизоотического процесса туберкулеза крупного рогатого скота, изучение этиологических факторов сенсибилизации организма живогных и.определение роли и значения микроорганизмов родов МосагЛит и Шю<Зососсия в возникновении нсспсцнфичсских реакций к ППД-туберкулнну для млекопитающих, разработка и усовершенствование способов комплексной диагностики и дифференциации аллергических реакций на туберкулин, совершенствование системы,мероприятий по профилактике этой болезни с учетом природно-хозяйствснных условий;

В соответствии с указанной целью на разрешение были поставлена задачи:

ш изучить особенности эпизоотического процесса туберку леза крупного рогатого скота в республиках Северного Кавказа и Калмыкии;

и изучить экологию близкородственных микобактсриям микроорганизмов родов МосагЛит и 1Ию(1ососси5;

и определить сенсибилизирующую активность'микроорганизмов родов >)осаг<1шт и ЮкхЬсоссиБ к ППД-тубсркулину для млекопитающих;

■ разработать режимы изготовления аллергенов из нокардий и родо-кокков, изучить их специфичность и акт ивность; •

в разработать комплексный метод диагностики туберкулеза и дифференциации параспсцнфичсских реакций на туберкулин; .

■ определить пути совершенствования системы мероприятий по профилактике и борьбе с этой болезнью с учетом' природно-хозяйствснных условий.

1.3. Научная новизна работы. Установлена зависимость распространения туберкулеза от природно-климатических условий и системы ведения животноводства. Определены основные факторы, влияющие на изменение

эпизоотической обстановки к причины параспецифической сенсибилизации крупного рогатого скота к тубермлину для млекопитающих в регионе. Изучена сс зонная зависимость проявления реакций на туберкулин.

Установлено, что нокардни и родококки имеют широкое распространение в прлрюдс и выделяются из организма животных. Разработаны и изучены наиболее оптимальные питательные срсды для их первично/о выделения и культивирования. Разработана новая оригинальная высокоэффективная гиггательная среда для ку лътнвировакия мнкобакгернй нокардий и родококков. На среду получено положительное решение ВНИИГГ1Э на еы-дачу патента [№ 95111841' / 13 (020618)].

Впервые доказано, что родококки так же как и нокардни сенсибилизируют организм животных к Г1ГЩ-т\ беркулину для млекопитающих.

Предложен эффективный метод частичной очистки и концентрации активного белка нокардий и родококков, пригодного для использования в качестве аллергенов и антигенов в иммунологических реакциях. Разработаны режимы изготовления из ннх сенснтинон. Установлено наличие перекрестных аллергических и других иммунологических реакций у животных, зараженных микобактериями, родококками и нокарднями.

На способ диф(]х:рснцналы1ой диагностики аллергических реакций на ППД-губсркл'лнн для млекопитающих получено Авторское свидетельство (№ 1821977 от 12.10.1992 г.).

Разработан способ одновременной серологической диагностики бруцеллеза и туберкулеза с единым антигеном в РСК (получено положительное решение ВНИИГПЭ на выдачу патента № 95111840. от 19.06.97 г.). Сконструированный комбинированный антиген для РСК оказался более чувствительным для диагностики бруцеллеза, чем существующий единый бруцеллезный антиген дтя РСК и РА (на антиген получено Авторское свидетельство № 1750687 от 1.04.1992 г.).

Усовершенствована методика оценки эпизоотической обстановки, определены приемлемые в местных условиях пути совершенствования комплекса мероприятий по профилактике и борьбе с ту беркулезом животных.

1.4. Практическая ценность. На основе данных по изучению обссме-ненности внешней срсды и циркуляции в животном организме мнкобакте-рий. нокардий и родококков, .анализа эпизоотической обстановки туберкулеза в республиках Северного Кавказа и Калмыкии, метода дифференциальной диагностики аллергических реакций на ту беркулин, а также способа приготовления эффективной питательной среды дтя выделения и выра-щнвания' мнкобакгернй и близкородственных микроорганизмов, разработаны методические рекомендации по диагностике туберкулеза крзтшого рогатого скота, утвержденные Ученым Советом Прикаспийского зонального НИВИ 26 ноября 1995 г., одобренные и рекомендованные к широкому практическому применению НТС МСХ и продовольствия Дагестана 12 февраля 1996 г.

Ре;\лыагы исследовании по региональной эпизоотологии туберкулеза и 1 инк «ими мнкобакгернй, выделенных от больных туберкулезом людей и ;мчю1ны\. использованы при обосновании и ра »работке Государственной

целевой программы «Борьба с туберкулезом в республике Дагестан» на 1994—2000 гг.

Предложены адаптированные к условиям разной природной зональности п эпизоотическому статусу .хозяйств комплексные системы диагностических и оздоровительных мероприятии. Некоторые результаты этих исследовании учтены при разработке «Наставления по диагностике туберкулеза сельскохозяйственных животных» (19X6) Их внедрение позволило обеспечить дифференциацию реакций на туберкулин, ускорить оздоровление хозяйств от туберкулеза и надежно контролировать эпилогическую ситуацию, что имеет важное народнохозяйственное значение

1.5. Апробация работы. Материалы работы доложены и обсуждены на зональных семинарах ветеринарных специалистов республики Дагестан (Махачкала. 1985!—1996 гг.; Хасавюрт. 1996; Бабаюрт. 1990). Кабардино-Балкарии (Нальчик. 1УК9), Северной Осетии (Владикавказ, 19Н9). на 3-ей республиканской научно-практической конференции «Современные проблемы профилактики .зоонозных болезней и пути их 'решения» (Гродно, 1987), на научно!) конференции, посвященной ^О-летию лаборатооии эпи- . зоотологии, диагностики и профилактики тлберкулеза- и паратуберкулеза ВИЭВ (Москва, 1992), на НТС МСХП республики'Дагестан (Махачкала, 1996), на-4-ой региональной научной конференции «Химики СЬвСрного Кавказа производству» (Махачкала, 1996), на республиканской научно-практической конференции «Состояние и перспективы развития животноводства в Дагестане» (Махачкала. 1996). на республиканской научно-практической конференции «Сельскохозяйственная эколопш» (Махачкала. 1996), на нау»шой конференции, посвященной 90-летию академика М. К. Га-нисва (Баку. 1997), на республиканской научно-практической конференции, посвященной 40-летию Даг. НИИСХ (Махачкала. 1996). на Бюро' отделения ветеринарной медицины РАСХН (Москва, 1997). на Международной, конференции «Современное состояние и перспективы интеграции ветеринарной науки и практики в условиях реформирования сельскохозяйственного производства Прикаспийского региона» (Махачкала. 1997). на научной конференции «Биологические проблемы и перспективы их изучения в регионах Каспийскою моря при интенсивном во ¡действии природных и антропогенных факторов» (Махачкала. 1997), на межлабораторных и Ученых советах Прикаспийского зонального НИВИ (Махачкала, 1987—1997), на межлабораторном совещании сотрудников ВИЭВ (Москва. 1998).

1.6. Публикация результатов исследований. Основные научные положения и прастичсские рекомендации изложены в методических рекомендациях «Диагностика туберкулеза крупного рогатого скота», в 34 опубликованных (10 — находятся в печати) научных статьях, получено'два Ав-' торски.х свидетельства и два положительных решения ВНИЙГПЭ на изобретения. Зарегистрированы 2 отчета по законченным темам.

1.7. Объем и структура оиссертации. Диссертационная работа изложена на 354 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзо-

ра литературы, собственных исследований, обсуждения основных результатов, выводов, практических предложении, списка литературы и приложения. Диссертация иллюстрирована 68 таблицами. 14 рисунками, 11 фотографиями. Список литературы включает 7!4 работ отечественных и -зарубежных авторов.

1.8. Основные положения диссертационной работы, выдвигаемые на защиту: результаты изучения некоторых вопросов эпизоотологии туберкулеза крупного рогатого скота и экологии возбудителя болезни в реет бликах Северного Кавказа и Калмыкии, а также теоретическое обоснование и экспериментальное доказательство возникновения нсспсцнфичсских реакций на туберкулин при заражении нокардоподобными бактериями, разработка и усовершенствование способов и методов диагностики и дифференциальной -диагностики туберкулеза кру пного рогатого скота.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнялась в период с 1984 по 1997 гг. на базе: лабораторий эпизоотологии, диагностики и профилактики туберкулеза и бруцеллеза ВИЭВ и Прикаспийского зонального НИВИ; экспериментальных баз институтов; животноводческих хозяйств республик Северного Кавказа (Дагестан, Северная Осетия, Кабардино-Балкария, Ичкерия, Ингушетия) и Калмыкии; мясокомбинатов и областных ветеринарных лабораторий, в соответствии с планами научно-исследовательских работ. Отдельные исследования по сравнительному испытанию серологических и аллергических методов диагностики туберкулеза крупного рогатого скота выполнялись в хозяйствах Краснодарского кутая. Калужской области и Казахстана.

Банк статистической информации, необходимой для анализа проявлений эпизоопгчсского процесса, формировали на основе данных официальной ветеринарной отчетности: ' а отчетов о заразных болезнях животных (1-вет.); а отчетов о противоэпизоотических мероприятиях (1-вет. А); а отчетов о работе ветеринарных лабораторий (4-вст.); в отчетов о встсринарно-санитарном надзоре на убойных пунктах хозяйств и организаций, в лабораториях всгсанэкспертизы (5-вет.); □ отчетов о ветсрннарно-саннтарном надзоре на мясоперерабатывающих предприятиях (6-вст.). Анализ собранной нн<]юрмацин проводили с использованием методов, описанных в методических у казаниях но эпизоотологическому исследованию (Бакулов И. А. с соавт., 1982). При обследовании районов, хозяйств и эпизоотических очагов руководствовались планом, приложенным к этим Указаниям.

. Аллергические исследования животных проводили внутрикожной и г .та ¡нон пробами по методикам, преду смотренным «Наставлением по ди-

агностике тл бсркулсза животных» (1986). Дтя выполнения внутривенной пробы использовали ППД-тлбсркулнн для млекопитающих в aoic 1 мл (50 тыс. МЕ) на 100 кг живого icca. Перед введением в яремную вену, препарат ди> кратно разбавляли растворителем. Пальпсбральную пробу выполняли п$ методике. описанной Н. Л. Овдпенко и соавт. (1987).

Для изготовления опытных образцов аллергенов. культуры N. asteroides (ВКМ Ас 1077), Рч. bionchialis (ИМВ Ас 737) и полевые изоляты выращивали на синтетической среде Сотона с pH 7,0—7,2. Посспы инкубировали в термостате при 37"С. периодически сстряхивая в течение 2 месяцев. Колбы с выращенными кулыурамн овтоклавнровалн при 120°С 30 мин. Культу-ральную жидкость отделяли паприфугпрованисм при 4000 об/мин. 20 mini. Осаждение белка производили гсксаметафосфагом иатрни, сернокислым аммонием, хлористым натрием. трихлоруксусной кислотой Осажденный , белок отделяли, растворяли в дистиллированной воде. Дополнительную, очистку ог остатков солен производили диализом. Концентрацию белка в препарате определяли по методу Лоури. Испытание на стерильность'и безвредность проводили по общепринятым методам. Биологическую активность изучали на сенсибилизированных нокардшши'и родококкамл кроликах, на здоровых н на больных туберкулезом животных,' на Животных с параспсш|фичесьч)й сенсибилизацией к туберкчлийу'. ^спьпанйя различных способов введения туберкулина и'сснентмюв поводили в пйлитсстс. _

Для проведения аллергических исследовании попользовали безйголь-ный инъектор БИ-7 и одно-двух мл шприцы. В общей сложности исследовали: вкутрикожной пробой — 62921, пальпебртльной — 6722, внутривенной — 467. симультанной с KAM — 3065 голов животных. Кроме того, в политсстс с сснситинхми исследовали 278 голов. Аллергические исследования проводили совместно с научными сотрудниками М. И. Нажаловым и М. Н. Магомсдовым.

С целью уточнения диагноза'и взятия материалов для лабораторных ' исследований провели котродьно-диагносгичсскнй убой 2632 животных в хозяйствах и на мясокомбинатах. Материалы от животных исследовали: на выделение микобактерий по методу А. П. Аликаевой (1940), по модифицированной методике и методом флотации (Яшенко Т. Н.". 1973); на выделение ноклрдий и родококков — метод «парафиновой приманки» (Söiigcn N.. 1913) в модификации R. Gordon и W. Hagan (1936), метод, описанный О. А. Нсстеренко с соавт. (197S). Для изоляции этих же микроорганизмов из проб объектов внешней среда использовали метод А. Н. Макковсйской и модифицированный О. А. Нсстсренко (1978) метод с использованием срсды Мюнца, содержащего 2 % жидкого парафина.

Для выделения и культивирования микобактсрий использовали срсду Финн II и сс модификации, Лсвснштейна-Йснссна, картофельную срсду, сшггстическую срсду Сотона. В этих же целях д;ш нокардий и родококков использовали срсду N. Söngcn, среду Мюнца, МПА, шпритный агар по Виноградскому (Тсппср Е. 3., 1976). срсду с «парафиновой приманкой», Бушнслла-Хааса (1941), Фрся и Хагана (1931) глицериновый агар и среду Ora вы.

Для идентификации вида выделенных культур использовали принятые

ГОСТ 26072-84 — «Методы лабораторной диагностики туберкулеза» (Ст. СЭВ 3457-81 от 9.01.1984) и ГОСТ 27318-87 — «Метода чдаггификаиии атипичных мнкобакгернй (Ст. СЭВ 5627-86 от 2.06.1987). Идентификацию нокардин н родококков проводили на основе изучения биохимических свойств по следующим методам: метод определения качественного моно-caxapiúHoro состава гидролизатов целых клеток по М. Lechcwalicr (1968); метод определения ДАПК в клетках бактерий по В. Bccker (1964); метод определения лилида LCN-a (свободные миколовыс кислоты) по F. Ка-nclsuna, A. Bartoli (1972); гидролиз орпншчсских компонентов по М. Goodfcl-low (1971); определение кнслотоустойчивости по R. Е. Gordon, М. М. Smith

(1953); определение образования индикатина на ¡«дольной среде no Р. Gray (1928); образование уреазы по R. Gordon, J. Mihm (1959); солеустойчивостъ по R. Gordon et М. Smith (1953); окраска клеточных стенок по R. В. Webb

(1954); усвоение органических кислот и образование кислоты из углеводов no R. Gordon, М. Smith (1953); гидролиз крахмала по R. Gordon, J. Mihm (1959); восстановление нитратов в нитриты по R. Gordon, М. Smith (1953); анаэробное у своение глюкозы по R. Hugh и Е. Lefson (1953).

В проведении бактериологических исследований приняли участие научный сотрудник Э. А. Вердиева и ст. лаборант А. А. Гаргацев.

Серологические исследования проводили в РСК с антигеном УНИИЭВ и фенольным антигеном Сиб. НИВИ по методикам, предусмотренным «Наставлением по диагностике туберкулеза животных» (1986), в РНГА — по методике, описанной Н. П. Овдненко и А. И. Козиным (1985) во «Временном наставлении по постановке РНГА для дифференциации специфических и неспсцифичсских реакций на туберкулин для млекопитающих у крупного рогатого скота с антигенными эритроцнтарными диагностикума-ми ВИЭВ». Стабилизацию эритроцитов проводили по методу Feeley et al. (1958), сенсибилизацию — путем смешивания их с разведением антигена 1:2500 в соотношении 1:4 и инкубацией в аппарате «Vibroterm» в течение 12 час. при 38°С. Реакцию ставили в плашках типа «Titcrtck» в объеме 0,2 мл, используя полуавтоматические пипетки фирмы «Qilson» и «Titertck».

В целях определения специфичности антигенов и использования в качестве контроля в иммунологических реакциях, получили гипериммунные сыворотки от кроликов по методу Фрсйнда. В качестве антигенов использовали М. bovis. М. avium, М. scrofulaceum, М. fortuitum, N. asteroides и R. bronchialis. В серологических реакциях исследовали 14113 проб сывороток крови.

Экспериментальное заражение подопытных животных проводили музейными штаммами культур: М. bovis шт. 637, М. scrofulaceum, М. БЦЖ, М. flei. М. avium, М. tuberculosis; N. asteroides — ВКМ Ас 1077, N. brasili-ensis — ВКМ Ас 863. N. transvalcnsis — ВКМ Ас 867, N. vaccinii — ВКМ Ас 856. R. amarac — ВКМ Ас 801; R. equi — ИМВ Ас 740. R. rhodochrous — ИМВ Ас 744, R. ruber — ИМВ Ас 745. R. luteus — ИМВ Ас 385, R. та-ris — ИМВ Ас 195. R. bronchialis — ИМВ Ас 737. Культуры мнкобакгернй поддерживались в лаборатории Культуры нокардий были получены из Всероссийской коллскшш микроорганизмов (г. Москва), а культуры родо-

кокков — из ИМВ им. Д. К. Заболотного АН Украины.

У зараженных животных изучали динамику кожных аллергических реакций на ПГЩ-тубсркулин для млекопитающих, KAM и сенситшш из но-кардий и родококков по методике, описанной Н. А. Ивановой и А. С. Соколовой (1988). Динамику состояния клеточного иммунитета изучали в реакции розеткообразования (РОК) по микрометоду А. С. Закс с соавт. (1986), в PTMJI по предложенной М. М. Авербах методике (1971), в РСЛД по методике Г. А. Гсртманец (1976) и в РБТЛ (Гюрджи JI. Н.. 1988).

Другие методики исследований изложены в соответствующих разделах диссертации.

Цифровые показатели, полученные в процессе работы, обрабатывали методами вариационной статистики в зависимости от поставленной цели (Лающ Г. Ф, 1980; Петухов В. Л. и др., 1985). Вычисления проводили на программированном микрокалькуляторе марки МК-52. Были использованы программы «Б-01», «Корреляция», программы для определения среднегеометрического и доверительного интервала, определения достоверности разницы между средними двух зависимых и независимых выборок, метод «критерий знаков».

2.2. ОСОБЕННОСТИ ПРОЯВЛЕНИЙ ЭПИЗООТИЧЕСКОГО ПРОЦЕССА ТУБЕРКУЛЕЗА КРУПНОГО РОГАТОГО CKQTA

В РЕСПУБЛИКАХ СЕВЕРНОГО КАВКАЗА И КАЛМЫКИИ

2.2.1. Удельный все туберкулеза i> структуре инфекционной иато.топш крупного рогатого скота и основные показатели проявлении эпизоотического процесса

Туберкулез крупного рогатого скота широко распространен в республиках Северного Кавказа и Калмыкии. Во всех 5 республиках наиболее развито животноводство с более чем 1,5 млн. годов крупного рогатого скота.

Число неблагополучных по туберкулезу хозяйств в регионе в отдельные годы (1988—1989) доходило до 200, и:» которых более половины (110) приходилось на Чеченскую Республику. Статистика показывает, что наименьшее распространение в настоящее время болезнь имеет в Дагестане, стабильно напряженной остается эпизоотическая ситуация в Калмыкии, где за последние 6 лет оздоровлено только 8 хозяйств (к концу 1996 г. зарегистрировано 18 неблагополучных хозяйств). В близком к оздоровлению ситу ация сложилась в Кабардино-Балкарии, тогда как в Северной Осетии эпизоотия имеет тенденцию к большему распространению. К концу 1996 г. в Северной Осетии зарегистрировано 24 неблагополучных из 67 имеющихся хозяйств общественного сектора. Только за период 1985—89 гг. в этой республике по причине туберкулеза сдано на убой 26587 голов крупного рогатого скота. За это же время было оздоровлено 32 неблагополучных

хозяйства, из которых 10 — методом полной замены. За последние 3 года в респу блике вновь выявлено 17 неблагополучных хозяйств.

Результатом социально-экономических потрясений, происходящих в последние годы в Республике Чечня, явилось сильное распространение инфекции. В 1989 г. здесь было зарегистрировано 117 неблагополучных по туберкулезу хозяйств. Дальнейшее уменьшение их числа к 1994 г. (55 неблагополучных хозяйств), вероятно, более связано с лшевидацией поголовья общественного сектора, а ситу ация в частном секторе остается невыясненной.

Среди всех зарегистрированных инфекционных болезней крупного рогатого скота за последние 10 лет в Дагестане, на долю туберкулеза приходится 10,89 % неблагополучных пунктов и 19,03 % заболевших животных. Туберкулез занимает второе место в нозолопгчсском профиле из 17 зарегистрированных болезней крупного рогатого скота. По причине туберкулеза за это время вынужденно убито 5413 животных, 73,8 % из которых составлял^ коровы.

Эпизоотическая ситуация по туберкулезу крупного рогатого скота в республиках за последние 30 лет менялась дважды, чередуя подъемы и спады в отношении числа неблагополучных пунктов и численности больного скота в них. Первый период охватил 1961—1975 гг. с наибольшим числом неблагополучных пу нктов в 1967 г. и второй — с 1977 до 1990 г. с максимальным развитием в 1984 г. Изменения ситуации были вызваны теми же причинами, что и во многих других неблагополучных регионах России. Широкомасштабные мероприятия, развернутые с туберку лезом в 60-х годах, чему способствовало укрепление народного хозяйства и улучшение ветеринарного обслуживания, позволили повсеместно уточнить эпизоотический статус хозяйств. Одновременно снижался уровень передержки больного скота. Принятые мерЬ1 обеспечили стабилизацию, а с 1968 г. начался процесс ее постепенного улучшения до 1976 г. Второму осложненшо ситуащш»по'1убфкулезу постужтыо комплектование крупных комплексов по производству мяса и молока, по, направленному выращиванию телок и нетрлей'СборйьЙ1'Шгол8въс.у, которое проводилось без достаточного учета эпизоотического уШ^'Ш Хо^йсго-пояашфпсов, что способствовало воз-никновеш1ю нБ£ьЬс эйтШот^^ Вместе с тем, об-

раща^болЬше'Ъш&гаШе на р^орррление существующих неблагополучных пунктов-, СЧ968' г.'%е<&6лько уэдешдаара*объемы,контрольных аллергит. ческихг мсхлёдо'^ййш^шв<этны?с ^ благополучных, хозяйствах. Запоздалые,-комисоиойиый 1 иссл£ас(йт$я. скр-р^, начатые, с, 1-978 г., ййказали'особенное сильное распро&з^'й'еУте болезни среди .животных комплексов промыт-,;1 ленного типар'так^! на1?р1т^ср,'в Дагестане за период с 1978 по 1990>г: не^* осталось .ни одМОго из 21 комплекса, где не был бы зарегистрирован туберкулез и кру пногб рогатого скота. Аналогичная картина наблюдалась и в остальных республиках. Только за 1981—1988 гг. было выявлено 272 неблагополучных хозяйства, в которых заболело 93299 голов скота. Туберкулез подтвержден у 28873 (32.1 %) из 89981 убитого животного.

Анализ причин возникновения туберкулеза в благополучных хозяйствах пока швает. что болезнь проявлялась у коров персого — третьего оте-

лов. Хозяйства ранее были неблагополучны, и молодняк от ранее неблагополучного поголовья использовался ятя воспроизводства стада. По-видимому. этот молодняк инфицировался в молодом возрасте, а как известно, туберкулез проявляется при стрессовых явлениях (отел, неполноценное кормление, отсутствие изолированного выращивания молодняка и т. д.).

Происходящие в системе хозяйствования радикальные изменения в настоящее время закономерно приводят к изменениям эпизоотической ситуации. Статистические данные подзывают, что число исследуемого скота уменьшалось нз года в год. Наб.людается повышение показателя очаговости и заболеваемости скота, а в отдельных хозяйствах туберкулез зарегистрирован повторно. Вместе с тем, увеличивается частота выделения возбудителя бычьего вида от больных туберкулезом людей. Эти изменения, . естественно, определяют необходимость пересмотра стратегии и тактики • противоэпизоотических мероприятий. Такой пересмотр .состоялся после , перевода животноводства на промышленную основу и явно назрел в настоящее время, когда происходят изменения обратного порддка. Вместе р ликвидацией и разукру пнением промышленных комплексов растет количс-; ство мелких, подсобных, фермерских хозяйств, и численность сельхОзжи- ' вотны.х личного подворья. Общий спад экономики и ослабление властных стру ктур приводят к снижению экономических -возможностей хозяйств, ухудшению условий содержания и кормлений скота, затруднению контроля за осуществлением встеринарно-санитарных мероприятий. На этом фоне растет значимость мюсобактериозов, а рост заболеваемости людей туберкулезом еще более усугубляет эпидсмио-эпизоотическую ситуацию.

Установлена сезонность проявления реакций на туберкулин у больного туберкулезом скота. 80.0 % животных из числа всех реагирующих были выявлены весной и осенью (март, апрель, май, июнь, сентябрь и октябрь), причем не установили прямой'зависимости между числом исследованных , животных и реагирующих на туберкулин (выборка за 10 лет).

На примере Дагестана установлено, что в прямой зависимости от вертикальной зональности находится степень распространения туберкулеза крупного рогатого скота. Из 87 бывших неблагополучных хозяйств за последние 20 лет, только 10 располагаются в горной, 10 — в предгорной и 67 — в равнинной. 31 из последних составляют кутаны хозяйств горных районов.

Анализ природно-климатических, хозяйственных, экономических и картографических факторов, способных прямо или косвенно оказать влияние на распространение туберкулеза крупного рогатого скота, показал большую подверженность животных заболеванию и тенденцию к распространению в плоскостной зоне. Высокая эффективность естественной сана* кии, богатая растительность, используемая для кормопроизводства, и естественные пастбища, богатый кислородом и чистый воздух, чему способствует умеренное выпадение осадков, содержание животных на небольших фермах, частая смена пастбищ, ограниченные мсжхозяйствснныс связи и преимущественный вывоз скота — это тс факторы, которые препятствуют широкому распространению не только туберкулеза, но и других инфекци-

очных болезнен жнпотных в горных условиях содержания.

Роль других факторов, предрасполагающих к неблагополучию хозяйств по туберкулезу крупного рогатого скота при сопряженном картографическом и хозяйственно-экономическом анализе выявить не удалось.

Таким образом, эпизоотическая обстановка по туберкулез)' крупного рогатого скота в республиках Северного Кавказа и Калмыкии продолжает оставаться напряженной. Динамика проявления эпизоотического процесса свидетельствует об усилении эпизоотического надзора в 1981—89 гг. и последующем его ослаблении в связи с хозяйственно-экономическими изменениями. происходящими в последние годы. Установлен характер сезонной динамики проявления показателей заболеваемости, зависимость эпизоотической ситуации по туберкулезу от природно-климатических и хозяйственных условий. Эти закономерности в одинаковой степени характерны для всех республик Северного Кавказа и Калмыкии.

2.2.2. Изучение распространенности, видовой принадлежности микобактерий и вопросы экологии возбудители

Произвели контрольно-диагностический убой 404 голов крупного рогатого скота, и 238 проб бноматерналов исследовали бактериологическими методами. Работу проводили в 42 хозяйствах 19 районов 3-х республик.

Из 238 проб материалов выделили 43 культуры микобактерий, из которых 18,06 % составляли М. bovis и 81,94 % — атипичные виды. Ни в одном случае не удалось выделить М. tuberculosis. Из атипичных культур: 55,1 % относились ко II. 41,45 % — к IV, 3,45 % — к III гр. классификации Руниона.

Исследования, проведенные в разные периоды стадии угасания эпизоотии показали, что по мере оздоровления стад от туберкулеза, число бактериологического подтверждения показаний внутрикожной пробы уменьшается. Так, в ранний период стадш! угасания, при убое 993 реагировавших на ту берку лин животных, у 310 (31,2 %) был установлен туберкулез. Из 275 выделенных культур — 98 (35,6 %) оказались М. bovis. Подробное изучение 57 штаммов атипичных ку льту р показало, что 18 (31,6 %) относятся к М. gordonae, 10 (17,5 %) — к М. scrofulaceum, 7 (12,6 %) — к М. fortuitum. 3 (5,3 %) — к М. avium-intraccllularae, 2 (3.5 %) — к М smegma-tis. 2 (3,5 %) — к М. flavcsccns. 1 (1,8 %) — к М. flei. Остальные 14 (24,6 %) остались неопределенными.

Аналогичные исследования, проведенные в более поздний период стадии угасания эпизоотии, показали следующее: из 125 хозяйств — в 21 животные болели туберкулезом; из материалов, взятых от животных 55 хозяйств. выделили атипичные мнкобакгерии; не удалось выделить культуры микобактерий из проб, взятых от реагировавших на туберкулин животных 49 хозяйств.

Мнкобакгерии обнаружили в 14,2 % пробах, полученных от животных в равнинной зоне, в 50.0 % — в предгорной зоне и в 24,4 % — в горной

зоне.

Исследовали 248 проб, взятых из объектов внешней среда. В 65 (26.3 %) были обнаружены микобактерии, из которых: 83.0 % составляли атипичные культуры, относящиеся ко 2-й и 4-й гр. Руниона и 7 (10.7 %) — к М. Ъоузб. Наиболее часто микобактерии изолировали из проб навоза и почвы, взятых с территорш! ферм. В большом количестве микобактерии (атипичные) обнаружили в пробах кукурузного снлоса. Их изолировали из 28,3 % проб, взятых в хозяйствах плоскостной зоны, нз 22,2 % — предгорной и из 10,0 % — горной зоны.

При идентификации 129 ку льту р микобактерии, выделенных от больных туберкулезом людей, — 91 (75.8 %) определены как микобактерии человеческого типа и 29 (24,2 %) отнесены к микобактерням бычьего вида. 9 культур по разным причинам остались неопределенными.

Таким образом, микобактерии широко распространены в объектах внешней среды и цирку лируют в организме кру пного рогатого скота. Установлена зависимость: степени распространения микобактерии от вертикальной зональности; частоты их выделения из организма крупного рогатого скота, от стадии оздоровления хозяйств.

2.3. ИЗУЧЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МИКОБАКТЕРИИ, НОКАРДИЙ И РОДОКОККОВ

2.3.1. Подбор питательных сред дли выделения и культивировании микобактерии, иокарлиц к родококкоа

В целях повышения эффективности бактериологической диагностики туберкулеза, провели сравнительные испытания различных препаратов для предпосевной обработки материалов и выссвасмости питательных сред и их модификаций.

Для предпосевной обработки пагматсриала, раствор едкого натра оказался эффективен в 3 % концентрации при экспозиции 2—5 час.; 4 % — от 0,5 до 2 часов. При обработке проб из внешней среды. 3—4 % концентрация ее была эффективной при экспозиции 4—5 час.

Серная кислота наиболее эффективна при экспозиции 0.5—1 час. в 5 % концентрации и 0,5 час. при 6 % концентрации. Увеличение концентрации до 10 % и более или при увеличении экспозиции снижалась высевасмость, и первичные колонки появлялись в более поздние сроки.

Наиболее щадящим и с широким диапазоном действия оказался лау-рилсульфат натрия. Концентрация его 1,5 % в 1,5 % растворе едкого натрия освобождал патматсриал от посторонней микрофлоры за 30 мин. Увеличение контакта до 2—3 час. не вызывало задержку роста и уменьшение числа выросших колоний микобактерии, одновременно подав.лш рост посторонней микрофлоры в более загрязненных пробах материала.

Провели сравнительное испытание на высевасмость срсды Левсиштсй-на-Йеисена, Финн II и 6 се модификаций. Наиболее эффективной оказалась среда, содержащая в качестве источника азота дрожжевой аутолизат. аммоний щавелевокислый и смесь н-алкаков (С|:—Сп—жидкий парафин). В

состав среды, входили: магний сернокислый — 0,15 г, натрий лимоннокислый — 0,3 г. жслезоаммиачныс квасцы — 0,015 г, калий фосфорнокислый однозамещснный — 6.0 г, щавелевокислый аммоний — 1,5 г. После растворения солен в 300 мл дистиллированной воды и автоклавировання, добавляли 30 мл дрожжевого аутолизата и 6 м.т глицерина, а по мере смешивания с яйцами доливали 10 мл 2 % раствора малахитового зеленого. За сутки черед посевом на поверхность готовой среды наносили 4—5 капель н-алканов на косяк в пробирке.

Высевасмость бноматсриала, полученного от экспериментально зараженных микобактсриями кроликов на данной среде, на 13 % превышала Финн II и на 12 % — АФ-I. Колонии мнкобактерий появлялись на 2—3 суток раньше. При высеве патматсриала, полученного от реагировавших на туберкулин животных, первичный рост колоний на модифицированной дэеде обнаружили от 6 до 15 дней раньше, чем на среде Левенштейна-Иенссна различных вариантов. Высеваемость мнкобактерий из биомате-рнала на модифицированной среде превышала 16—19 %, а из мокроты больных туберкулезом людей — в 2 раза.

Замена глицерина жидким парафином оказывала благоприятное влияние на мнкобактерий только первоначально. Первичный рост на такой среде был обнаружен на 3—4 суток раньше, чем на такой же среде с глицерином. К 11—13 дню рост выравнивался, а к 14—16 дням количество бак-массы на среде с глицерином примерно в 2 раза было больше.

Нанесение жидкого парафина на поверхность яичных сред вызывало стиму ляцию роста и накопление бакмассы М. bovis, выделенных из патма-тсриалов от животных. Через 25 дней культивирования, на этих средах получен рост М. bovis, не уступающий по накоплению бакмассы, получаемому на тех же средах без углеводородов по истечении 40—45 дней.

Наиболее эффективным методом выделения нокардий из патматсриала и объектов внешней среды сказался метод R. Gordon, W. Hagan (1936) и предложенный О. А. Нссгсренко с соавт. (1978) метод получения накопительных культур бактерий на среде Мюнца с содержанием 2 % объемной доли н-алканов.

При сравнительном испытании на высеваемость н накопление бакмассы лабораторными штаммами культур среды Мюнца, Виноградского, Бушнела-Хааса. Фрея и Хагана. Фиш И, Левенпггсйна-Йенсена, АФ-I, Со-тона и модифицированного варианта установили, что обильный рост культур нокардий и родококков на последней появляется через 4—5 суток после посева, на среде Финн II и Сотона с жидким парафином — на 15-й день. Обильный рост на среде Сотона с парафином дали N. asteroides, N. brasiliensis, N. transvalensis, R. bronchialis и др.

2.3.2. Определение распространения п юучепие физиологических свойств шолнгов нокардий и родококков

Из 291 пробы, взятой из объектов внешней среды, выделили 190 штаммов нокардий и родококков. Дифференциацию выдслснных>кудь'^ур

проводили по узком)' набору изучаемых признаков, в числе которых использовали тест Хью н Лсфсона. определение арильсульфатазной активности и определение чувствительности к мтггомицину. На основе изучения перечисленных признаков 56 (19,2 %) отнесены к нокаряиям и 134 (46,1 %) — к родококкам Наиболее пригодным для выделения нокарднй оказался метод накопительных культур на среде Мюнца с н-алканами. а для родокок-ков — метод «парафиновой приманки».

Нокарднй выделили из проб: воды стоячих водоемов — 16,7 %; воды речной — 11,1 %; зеленой массы — 20.0 %; сена разнотравного — 5,9 %; силоса — 11.1 %; почвы — 30.3 %; навоза — 23,6 %; остатков корма из кормушек — 20,0 %; комбикорма — 15,6 %; проб с пола помещений — 27,2 %. Родококков выделили соответственно: 61,6; 33,3; 50,0; 58,8; 29.6; 71,4; 41,8; 40,0; 36.7; 18,2 %. Кроме того, родококков обнаружили в 50,0 % случаев в пробах соломы и 40,0 % проб сенажа. Не удалось обнаружить их в пробах воды самоистекающих артезианских скважин.

Нокардии были выделены из проб, взятых от убитых, реагировавших на туберкулин животных в 13,1 % случаях. Из этих же проб в 26,3 % случаев выделили родококков. , ' '

Идентификацию выделенных культур проводили на, основе изучения культуралъно-морфологичсских и биохимических свойств по широкому набору признаков, состоящего из 31 теста и определения 66 параметров их свойств. При этом, были определены 42 (68,9 %) штамма N. asteroides, 9 (14,7 %) — N. transvalensis, 4 (6,6 %) — N. brasiliensis, в (9.8 %) — N. vaccinti, 65 (45,2 %) — R. erythropolis, 18 (12,5 %) — R. equi, 1 (0,7 %) — R. bronchialis. 14 (9,7 %) — R. rubropcrtinctus, 16 (11,1 %) — R. luteus и 30 (20,8 %) — R. coproíllus.

2.3.3. Изучение иммунно-Сиологпческою состояния опытных животных, зараженных музейными и выделенными культурами

Для заражения кроликов использовали: музейные итгаммы М. БЦЖ, М. avium, М. scrofulaceum, N. asleroides —ВКМ Ас 1077, N. brasiliensis — ВКМ Ас 801, R. equi — ИВМ Ас 740, R. bronchialis — ИВМ Ас 377; выделенные и идентифицированные культуры N. asteroides («Гслииская»), N. transvalensis («Рассвет-17»), N. brasiliensis («Хамаматюрт-2»). Каждой культурой заражали по 4 кролика, подкожным введением в область брюшка 10 мг культуры во взвеси в физиологическом растворе. Наблюдения вели в течение 90 дней. Кроликов исследовали 3 раза — через каждые 30 дней Они включали: постановку реакции розсткообразования. реакции торможения миграции лимфоцитов — PTMJ1. реакции бласпран;формации лимфоцитов — РБТЛ, реакции специфического лизиса ли\к|юцитов — РСЛЛ, РСК и РНГА. В качестве специфического митогена в РТМЛ, РБТЛ, РСЛЛ использовали ППД-туберкулии для млекопитающих, а неспсцифи-ческого — ФГА (фитогемагтлкпинин).

Изучение в динамике относительного содержания Т- и В-розстко-

образующих клеток показало, что в ответ на воздействие любого из использованных антигенов обе системы иммунитета отвечают повышением продукции данных клеток в сравнении с исходными показателями. Только в гру ппе зараженных мнкобактерюшп при первом исследовании обнаружили снижение количества Т-клсток н повышение продукции В-лимфоци-тов.

В РБТЛ у большинства животных наблюдали повышение бластообра-зования в сравнении с контролем. В группах, зараженных микоблктерия-ми, показания образования бластов достигал до 17.4. Положительные результаты РБТЛ на ту беркулин со статистически достоверной корреляцией выраженности в сравнении с контролем (Р < 0,05) обнаружили у кроликов, зараженных N. asteroides («Гслинская»), R. bronchialis («Хамаматюрт-2»), «Хамаматюрт-1» и «Гслинская». Такая корреляция сохранялась до 60 дней в группах 5 и 11, а $ 1—3 гр. (зараженные микобактериями) оставалась до конца наблюдений. В то же время, у животных, даже не реагировавших на туберкулин, отмечалась резко положительная реакция на ФГА (до 80 %), что указывает на высокую неспецнфическую реакцию лимфоцитов у подопытных жижггных.

В РСЛЛ наблюдалось закономерное повышение (к 30 и 90 дням после заражения) процента лизиса лейкоцитов. Наиболее высокий процент лизиса был отмечен у животных, зараженных микобактериями.

Не установили строгой динамики или корреляции торможения миграции по сравнению с контролем в РТМЛ у животных, зараженных нокар-диями и родококками.

Наиболее высокие титры антител в РСК и РИГА обнаружили у кроликов, зараженных микобактериями (от Хо Д° Ко в РСК и от Хб ДО Уаь в РНГА). Невысокие титры комлементсвязывающих антител (}{0—У^) обнаружили практически у всех животных (с антигеном УНИИЭВ и Сиб. НИВ И) остальных групп в разное время исследований.

Таким образом, близость антигенной структу ры изучаемых микроорганизмов проявлялась в тестах на определение состояния клеточного и гуморального иммунитета с использованием туберкулезных антигенов. Показатели реакций в тестах с гомологичными заражению антигенами были резко позитивными. В то же время, наблюдали перекрестные реакции in vitro с этими же антигенами у животных, инфицированных гетерологич-ными антигенами, но с более низкими показателями.

2.3.4. Определение сенсибилизирующих свойств нокардин и родококков к туберкулину в эксперименте

Для экспериментального изучения аллергических реакций на туберкулин у зараженных нокардиями и родококками животных были использованы те же кролики, на которых проводили исследования для сравнительного изучения иммунно-биологичсского состояния.

При исследовании через месяц после заражения реагировали кролики

всех групп, за исключением зараженных музейными культурами N. brasiliensis, R. broncbialís. Однако кролики. $а1)ажснныс полевыми изолятамн этих же культу р, реагировали на туберкулин. Не реагировали на туберкулиновую пробу кролики, зараженные R. eiythropolis В колшюствснном отношении реагировали на туберкулин: зараженные мнкобактериямн при исследовании через 30 дней — 77.8 %, через 60 дней — 44.4 % и через 90 дней — 22.2 %; соответственно зараженные нокардиямн. 55,6; 0; 5,6 % и родокок-ками: 33.3; 0; 8.3 %. Установили, что реакции на туберкулин у экспериментально зараженных кроликов сохранялись недолго, но у некоторых восстанавливались при последующих исследованиях.

В другом опыте заражение кроликов осуществили только нокардиямн: asteroides, amarac. brasiliensis, vaccinii, oütídis-caviarum, transvalensis и полевым изолятом «Хамаматюрт-1». Заражение произвели 10 и 50 мг влажной культуры, подкожно. Исследовали через 15, 30 и 60 дней после заражения. При исследовании через 15 дней реагировали зараженные N. asteroides обеих грутш. N. vaccinii и N. otiüdis-caviarum; через 30 дней реагировали зараженные N. asteroides. N. amarac, N. brasiliensis и N. transvalensis; через 60 дней реагировали зараженные N. asteroides, N. brasiliensis, N. transvalensis и незначительная реакция отмечена у зараженных N. otitidis-caviarum и N. amarac. Не установили достоверной зависимости между дозой заражения и интенсивностью проявления реакций на туберкулин. Контрольные животные не реагировали на туберкулиновую пробу.

При патологоанатомичсском вскрытии и осмотре внутренних органов установили следу ющие изменения: у всех зараженных животных на месте инокуляции культур обнару жили воспалительные явления различной степени выраженности. У кроликов, зараженных N. asteroides, в процесс были вовлечены и регионарные лимфоузлы Аналогичные изменения обнаружили у зараженных N. transvalensis У большинства животных наблюдалась гиперплазия регионарных лимфоузлов, переполнение мочевого пузыря, метеоризм кишечника и дру гие симптомокомплсксы.

2.3.5. Подбор и изучение методов очистки и концентрации активною белка из кулыуралыюй жидкости

Материалом исследования служили цеитрифупггы 2-мссячкых ку льтур N. asteroides и R. bronchialis. полученные на синтетической среде Сото на. Колбы с культурами автоклавнровали при 1,5 атм. 30 мин.

Осаждение белка производили сернокислым аммонием при 10, 20, 40. 45 и 50 % концентрации и рН 5,2; 5,4 .6,4. Наибольшее количество белка получили при 30 % его концентрации и рН 5.8. „

Хлористый натрий использовали в 5, 10, 15, 20, 25 и 30 % концентрации и рН 3,5; 3,7 ... 4,5. Установили, что при 25, 30 % концентрации соль полностью не растворялась и выпадала в осадок вместе с белком и плохо растворялась в дистиллированной воде Лучшие результаты полу чили при рН 3,9 и концентрации соли 20 %.

Концентрации трихлоруксусной кислоты вьгше 20 % приводили к денатурации белка, а белок осаждался в незначительном количестве.

Осаждение гексамет а фосфатом натрия проводили при рН от 3 до 4,5 и добавлением 0,1; 0,2; 0,3 и 0,4 г. В этом случае осадок выпадал незначительный. Белок, полученный при добавлении 0,3 и 0.4 г и низких температурах хорошо растворялся в дистиллированной воде. Лучшие результаты получили при рН 3,5—3,9 и количеством соли 0,4 г при 4°С.

Полученные таким образом белковые осадки растворяли в дистиллированной воде, частично очищали от остатков солей диализом. Подводили содержание остаточного азота до 0,7 мг/мл и стерилизовали, пропуская через фильтр Зсйтца.

Готовые препараты испытывали на активность на кроликах, зараженных N. asteroides и R. bronchialis. Наиболее активный белок был получен осаждением хлористым натрием 15—20 % концентрации н рН 3,9—1,1.

2.3.6. Испытание аллергенов в кожных реакциях в эксперименте и в производственных условиях

Испытания аллергенов проводили на зараженных музейными и выделенными из материалов реагировавших на туберкулин животных культурами М. БЦЖ, М. avium, М. scrofulaceum, М. flei, N. asteroides, N. brasiíiensis, N. transvalensis, N. vaccinii, R. cqui, R. bronchialis. R. crythropolis. В 5 группах кроликов заражали полевьши изолятами нокарднй и родококков. Каждой культурой заражали по 3 кролика, и 8 находились в контроле. Всего в опыт взяли 53 кролика. Наблюдения вели 90 дней.

При исследованиях через 30 дней после заражения, на туберкулин реагировали кролики всех групп, за исключением зараженных N. vaccinii, R. bronchialis, R. crythropolis (полевой изолят) и контрольных. Наибольшая интенсивность реакций наблюдалась в группах, зараженных полевыми изолятами N. transvalensis, N. asteroides и N. brasiíiensis, R. bronchialis. Примерно с одинаковой интенсивностью на туберкулин и нокардиозный сенситин реагировали кролики, зараженные микобакгериями. При последующ!« исследованиях через 60 и 90 дней после заражения, как число реагировавших, так и интенсивность реакций на туберку лин в этих группах была выше, чем в остальных группах животных. Вместе с тем, при сохранении реакций на нокардиозный аллерген через 60 и 90 дней после заражения, реакции на ту беркулин обнаруживались только у отдельных животных, зараженных N. transvalensis, N. brasiíiensis (полевой изолят) и R. bronchialis (полевой изолят). К концу срока наблюдений в группах зараженных микобакгериями, на нокардиозный аллерген реагировали только 2 кролика из 12. Аналогичные результаты получили в опыте при сравнительном изучении аллергических реакций на туберкулин и родококковый сенситин.

Больные туберкулезом животные неблагополучного стада реагировали на сенситин из нокардий. Интенсивность реакций у реагировавших на туберкулин животных составляла 4.7 ± 0.09, а на аллерген из нокардий —

4,0 ± 0,07 мм. Из 40 животных 8 реагировали на туберкулин и 4 на сенси-тин при полном совпадении позитивных показаний. Здоровые животные не реашровали на аллергены.

2.4. ИЗУЧЕНИЕ МЕТОДОВ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ

НЕСПЕЦИФИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ НА НПД-ТУБЕРКУЛИН ДЛЯ МЛЕКОПИТАЮЩИХ У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

2.4.1. Результаты исследований на туберкулез крупного рогаюго скота ППД-тубсрку.тшюм для млекопитающих

Исследования проводили в стадах с различной ситуацйен по туберкулезу, в хозяйствах, расположенных в горной, в предгорной и плоскостной зонах. Исследовали 24383 головы крупного рогатого скота. Реагировали на внутрикожную пробу 959, из которых 382 (39,8 %) —■ в' неблагополучных . стадах и 577 (60.2 %) — в благополучных. > , ' ,

Из 238 проб патматсриалов. ёзятых от убитых, реагировавших на туберкулин животных, изолировали в чистую .культуру 43 оггамма микобак-тсрий. Из них 14 (18.06 %) определены; как М. Ьо\к н 29 (81,9 %) как атипичные виды. Из последних к М. 5СгоГи1асеиш относились — 12 (41,3 %), М. §огс1опас — 4 (13,8 %), М. 5тс§таи5 — 4 (13,8 %), М. Ае1 ~ 6 (20,7 %), М. ГогШПшп — 2 (6,9 %) и М.а\лит-пигасс11и1агае — 1 (3,5 %). Этими ку льтурами заражали кроликов н морских свинок. Наблюдения вели в течение 90 дней. Через каждые 30 дней животных исследовали симультанной пробой.

Установили, чго культуры, использованные для Сражения, обладали >' выраженной сенсибилизирующей макроорганизм способностью.

В 6 хозяйствах 2 райо^рв Дагестана исследовали внутрикожной пробой 3473 животных, среди которых только 11 болели актиномикозом. У 229 (95,4 %) животных, больных актиномикозом. реакцию на туберкулин не обнаружили. Из материалов 11 убитых, реагировавших на туберкулин больных актиномикозом животных, в 4 случаях были выделены М. БсгоГиЬсеит.

В дру гом случае, при 10-кратных исследованиях в течение 2-х лег животных одного н того же стада внутрикожной пробой, обнаружили /61 (1,5 %) реагирующих. Из них только 2 (1,2 %) оказались больными ариномико-зом. У 197 больных актиномикозом реакция на внутрикожную пробу не была обнаружена.

Исследования показали, что реакции на внутрикожную пробу \ больных актиномикозом животных не связаны с данной болезнью, а ь1пваны какими-либо другими причинами с высокой степенью достоверности

Длительная перевозка скота автотранспортом, возможно, провоцирует проявление реакций на латентное носительство микобактернй. Вттрнкож-ной пробой были исследованы 435 животных, подлежащих перевозке из хозяйств Краснодарского края Реагирующих не обнаружили. Эгнх же жи-

вотных повторно исследовали после перевозки в хозяйства Дагестана в период нахождения на карантине. Реагировали 110 (25,3 %) животных. Реакции не прекращались и при последующих исследованиях через 3 и 6 месяцев. Притом, редко встречались животные, реагировавшие при двух последовательных исследованиях. Были убиты 48 голов, и ни в одном случае туберкулез не установлен. При бактериологических исследованиях материалов ни в одном случае не выделили М. bovis.

Таким образом, установлено, что кроме специфических реакций на ППД-тубсркулин в неблагополучных по туберкулезу стадах, широкое распространение в регионе получала параспецифическая сенсибилизация скота, вызванная атипичными видами микобактсрин, в основном 2-й и 4-й гр. Руниона. Причиной параспецифической сенсибилизации к туберкулину не является заболевание актиномикозом.

2.4.2. Сравнительное испытание аллергически! проб д.1я диагностики туберкулеза

Определение диагностической ценности и критериев оценки реакции на пальпебральную пробу изучали на 35 экспериментально зараженных М. bovis телятах, на 353 больных туберкулезом ik на 271 здоровом животном благополучных стад.

Реакция на пальпебральную пробу у экспериментально зараженных животных начиналась через 15—20 мин и четко проявлялась через 2—3 часа после подкежного введения туберкулина. Ее интенсивность выражалась различных размеров припу хлостью нижнего века глаз, четко конту ри-рутощей с окружающей тканью, тестоватой консистенции, болезненной при . пальпации. Размеры припухлости иногда достигали до величины ку риного яйца, сопровождающейся сли'тсто-пюйным нстеченуем из внутреннего угла глаза и полным закрытием глазной щели. По характеру воспалительной реакции и размерам припу хлости давали условную оценку, обозначаемую от «+» до «++++».

В опыте 1И 353 больных туберкулезом животных установили, что через 24 часа после введения туберкулина реагировали 96.03 %, через 48 часов — 95,1 % и через 72 часа — 82,1 % животных. Наибольшее число реагирующих животных с интенсивностью реакций в 3 и 4 креста (215 — 60,9 %) обнару жили через 48 часов после введения препарата. При учете через 24 часа их было 197 (55.8 %), а через 72 часа — 149 (41.9 %). При убое 61 исследованных животных у 51 (80,9 %) был установлен ту беркулез. Притом. 93.07 % из последних реагировали через 48 часов и только 82,3 % — через 72 часа после введения туберкулина. Не удалось обнаружить зависимость между интенсивностью реакций и тяжестью туберкуле того процесса при послсубойном осмотре. Поэтому реагирующими на пальпебральную пробу ечнгали животных с оценкой реакции «+» и более при учеге через 48 часов послс введения туберкулина.

В стадах с различной степенью заражения скота туберкулезом провели сравнительное испытание внутрикожной, пальпебральной и глазной проб

Исследовали в полтссте 2596 животных 8 хозяйств. При этом только на внутрикожную пробу реагировали — 189 (7.3 %). только на пальпебральную — 146 (5.6 %) и только на глазную — 6 (0.2 %). На все пробы реагировали 713 (27.5 %) По чувствительности пальисбральная проба не уступала внутрикожной. Не лстановили достоверных различий в показаниях обоих проб = 0,93 < = 3.84 при Р0.05).

В эпизоотическом отношении наибольший интерес представляли животные. реагировавшие только на пальпебральную пробу (5,6 %). Численность этой группы животных увеличивалась при исследованиях в зимний период, доходя в некоторых группах до 27.1 %.

Для определения специфичности проб, произвели убой и осмотр внутренних органов и бактериологическое исследование материалов 47 реагировавших только на пальпебральную пробу животных. Туберкулез установили у 31 (65,9 %) животного. При убое 18 реагировавших только на внут-рикожную пробу , у 12 (66,7 %) также обнаружили туберкулез. Наибольший процент подтверждения (80.8 %) болезни установили в группе реагировавших на обе пробы

Резу льтативность глазной пробы в среднем на 18 % была .меньшей, чем пальпебральной. и редко встречались животные, реагирующие только на эту пробу. Практически все позитивные показания глазной пробы перекрывались таковыми внутрикожной и пальпебральной.

Таким образом, резу льтаты проведенных исследований у беждают, что при одновременном применении внутрикожной и пальпебральной проб в оздоравлнвасмых стадах выявляются реагирующие только на пальпебральную пробу (в среднем 5,6 %) больные туберкулезом животные. Простота техники выполнения, учета и оценки реакции, сокращение времени проведения и экономия материальных средств делают эту пробу более приемлемой для комплексной диагностики ту беркулеза кру пного рогатого скота в озлоравливаемых хозяйствах. Не усту пая по результативности и специфичности внутрикожной. данная проба намного превосходит аналогичные критерии офтальмопробы.

Показательными в этом отношении явились комплексные исследования. проведенные в длительно неблагополучном по туберку лезу стаде. При исследовании в политсстс 1022 голов реагировали: на все пробы — 15 (1,5 %). на внутрикожную и пальпебральную — 15 (1.5 %), на внутрикожную и глазную — 3 (0,29 %). на пальпебральную и глазную — 2 (0.19 %), только внутрикожно — 10 (0.97 %), только на пальпебральную — 6'(0.58 %), только на глазную — 1 (0,09 %). Всего выявили 52 (5.08 %) реагирующих. Таким образом, если на внутрикожную пробу (при применении в единственном числе) реагировали 43 (4,5 %). то в комплексе с пальпебральной пробой их число увеличилось до 51 (4,99 %) против 46 (4.5 %) в комплексе с глазной Поэтому считаем целесообразным для комплексной диагностики болезни использовать пальпебральную пробу вместо предусмотренной действующими санитарными и ветеринарными правилами глазной пробы.

Внутривенной пробои исследовали 14 телят, зараженных миксюакте-риями сычымо вида, за 1.5 года до постановки пробы, и 33 таких животных по илеченнн I- м.ччисв после зарэжендо первой группе р;агнрова-

ли 6, а во второй — 14. Реакции в обеих группах обнаружили в интервале 6—9 часов после введения туберкулина. Туберкуле» установили в перади группе у 5 и во второй — у 12 животных. Причем, у 4 ш 5 а первой группе были обнаружены свойственные туберку ле ¡у патологические изменения, тогда как у 36.3 % животных 2-й группы болезнь была подтверждена только бактериологическим исследованием материалов от них. Значит, на внутривенную пробу реагируют животные независимо от тяжести патологического процесса.

Из 28 реагировавших на внуфикожтю пробу животных 24 дали положительные показания на внутривенную пробу. При убое всех 28 жипот-ных у 24 обнаружили свойственные туберкулезу изменения, из которых 23 (95,8 %) реагировали на внутривенную пробу.

Из 55 не реагировавших на внутрикожную пробу животных, но с по пг-тивнымн показаниями в РСК и в РИГА. — 37 дали температурную реакцию. При убое 49-ти изменения обнаружили у 39-ти, из которых 25 (67,6 %) реапфовали на внутривенную пробу.

Значит, прн исследовании внутривенной пробой реагирующих на внутрикожную пробу животных повышается степень вероятного обнару жения болезни. С другой стороны, выявляются больные туберкулезом, не реагирующие из внутрикожную пробу . Численность таких животных в стадах с различной степенью заражения скота и длительности неблагополучия варьировала от 2.4 до 7.6 %.

84.6 % животных реагировали на внутривенную пробу в интервале от 4 до 9 часов после введения препарата Температура тела у реагировавших животных повышалась от I до 1,74РС. У здоровых животных температура повышалась в среднем на 0.45°С выше среднесуточной.

Таким образом, целесообразной областью использования внутривенной пробы является — уточнение диагноза на туберкулез и обнаружение больных исрсагируювдих на внутрикожную пробу животных.

2.4.3. Определение диагностической ценности РСК н РНГЛ при туберкулезе крупного рогатого скота

Работу проводили о 13 хозяйствах, в 2-х экспериментальных базах в областных и районных встбэклабораториях и на мясокомбинатах.

При четырехкратном исследовании сыворогок крови телят, зараженных М. bovis, не удалось обнаружить какой-либо закономерности в динамике синтеза комплеистсвязывающих анпггел. Не установили достоверной корреляции между количеством реагиру ющих на внутрикожную пробу и численностью животных, в сыворотках крови которых были обнаружены диагностические тнтры анпггел. В трех случаях антитела были обнаружены у нерсагировавших на внутрикожную пробу животных.

В РСК исследовали 1361 пробу сывороток крови от животных длительно неблагополучных стад и групп передержки скота. Только в сыворотках крови 14,7 % животных выявили диагноеппгсекие титры антител с КТА и в 2 раза меньше с фенольным антигеном. На внутрикожную пробу

реагировали 984 (72.3 %). и 377 (27.7 %) не реагировали. Ш числа последних в 14.1 % случаях в РСК с КТА и в 8.9 % с фснольным антигеном обнаружили антитела в диагностических титрах. Следовательно, РСК расширяет возможности диагностики ту беркулеза.

Произвели убой и осмотр внутренних органов 100 животных с различными показаниями на внутрикожную пробу и в РСК. Наибольший интерес в эпизоотическом отношении представляла группа нсрсапфуюпшх на внутрикожную пробу, но с позитивными показаниями в РСК. В 100 % случаев у этих животных обнаруживали туберкулез. Аналогичную картину наблюдали у животных с позитивными показаниями в обоих тестах.

В стадах с различной степенью заражения скота туберкулезом в сыворотках крови нерсапфовавших на туберкулин животных в РСК с КТА обнаруживали антитела в 3,7 % случаев, а с фенолъным антигеном — в 1,3 % случаев.

, Таким образом. РСК выявляет а реактивных к туберкулину животных, больных ту беркулезом.

В РСК исследовали 1273 пробы сывороток крови, полученных от реагировавших на внутрикожную пробу животных. Диагностические титры антител выявили в 207 (16,3 %) пробах с КТА и в 89 (7,0 %) пробах с фснольным антигеном. Еще меньшее число позитивных показаний в РСК были получены при исследовании сывороток крови животных возрастом 1—2 года, антитела обнаружили в РСК с КТА в 3,4 % и с фенолъным антигеном в 1.1 % случаях.

Эти исследования показывают низкую чувствительность РСК с существующими антигенами. Однако в длительно неблагополучных (озаорав-ли&аемых) стадах обнаруживаются животные в состоянии анергии, которые выявляются с помощью РСК. Численность таких животных варьировала от 1,3 до 3,7, и у них при убое всегда обнаруживали туберкулез.

Не установили прямой зависимости между тяжестью туберкулезного процесса н титром комплеменгевязывающих антител. Так. средние титры антител в РСК с КТА у животных с тяжелыми туберку лезными изменениями составляли 1:64,4 ± 20,2, а с фенолъным антигеном — 1:31,1 ± 6,7. И наоборот, у животных с локальными изменениями — соответственно 1:74.8 ±27,9 и 1:21,8 ±4,4.

Провели сравнительное испытание методов стабилизации эритроцитов, используемых для сенсибилизации полисахаридным антигеном. Стабилизацию эритроцитов проводили по методам, предложенным Fcelcy ct al., Wcinbach, Ling и ВИЭВ.

Установили, что разница между титрами антител, установленных в гомологичных и гетсрологичиых антигену из М. bovis сыворотках, была максимальной при стабилизации эритроцитов по Fcelcy. Так. диагносгнкум из М bo\is с гомологичной сывороткой дал гемагглютинацию в паре 1:4096. а с сыворотками кроликов, иммунизированных М. avium. — 1:1024, М scrofulaccum — I 256 и БЦЖ — 1:1024. Обратную картину наблюдали в РИГА с диагностику чом из М fortuitum Наиболее высокий тигр антител (1 2Н4Х) в пом случае получен с сывороткой кроликов. им,мунтированных М scrofuhccum Диагнлп икумы стандартизировали в РИГА с сыворотка-

ми, титр которых был известен.

Исследовали 1911 проб сывороток крови в РИГА с полисахаридными эритроцитарными диагностикумами из М. bovis н М. fortuilum. Пробы крови были взяты от 18Ü животных туберкулезного изолятора, от 1016 животных неблагополучного оздоравливаемого хозяйства, от 522 животных с параспсцнфичсской сенсибилизацией на туберкулин и от 193 здоровых-животных благополучного стада.

В первых двух стадах число позитивных показаний и среднегеометрические титры антител были достоверно больше выражены в РИГА с диагностику.мом из М. bov is (Р < 0.05). а в третьем — наоборот. В сыворотках крови здоровых животных диагностические титры антител не обнаружили В 87.5 % случаев познпшных показаний РИГА с диапкхликумом из М. bov is был подтвержден туберкулез при послеубонном осмотре. В 22,1 % случаев из материалов убитых животных третьего хозяйства выделили культуры атипичных микобактсрий. Позитивные показания вкутрнкожной пробы и РИГА совпадали в 37,07 % случаев. Из 25 нереагировавшн.х на внутрн-кожную пробу, но с позитивными показаниями РНГА с диагностику мом из М. bovis животных, у 20 был обнаружен туберкулез. Следовательно. РНГА довыявляст больных животных, ареактивных к туберкулину.

2.4.4. Сравнительная опенка методам днагноешки туберкулеза кру пного рогатого скота

Были использованы 7 наиболее приемлемых в практических условиях ссроадлсршчсских тестов. Следует отметить, что каждый дополнительно примененный тсст вносил коррективу в комплекс результатов исследований. Обнаруживались животные, у которых устанавливали поштивные показания только на определенный диагностический «тест, которые подтверждались > обнаружением туберкулеза при послеубонном осмотре Не наблюдалась корреляция между показаниями аллергических проб и серологических реакций. Меньше различались показания отдельных методов внутри одного способа диагностики.

Исследовали 1022 животных неблагополучного стада в политесте внутрикожнон. пальпебральной и глазной пробами. Реагировали только на внутрикожную — 10. на лальпебральную — 6 н на глазную — 1 животное. В различных комбинациях проб реагировали еще 35 голов.

Из числа нерсагировавших (970) дали позитивные показания только в РСК с КТА — 20, только в РНГА — 201 и ни одно в РСК с фенольным антигеном. В различных комбинациях выявили еще 47 животных. У 20 животных реакции проявлялись на несколько тестов (серологических н аллергических), но во всех случаях реагировали на внутрнкожную и лальпебральную пробы. Весь ссроаллсргичсскин комплекс выявил 340 (33.1 %) реагирующих животных.

Анализ результатов прижизненных исследований и послеубонного осмотра 175 животных показал следующее: реагировали на внутрикожную пробу — 96 (54.9 "»). в комплексе с пальпебральной — 122 (69,7 %). толь-

ко на глазную — 1 (0.6 %) и в различных комбинациях — 19 (10,9 %). На все аллергические пробы реагировали 123 (70.3 %); 17 (9,7 %) не реагировали на аллергические тесты, но у них были обнаружены антитела в сыворотках крови, и они же реагировали на внутривенную пробу; 35 (20,0 %) дали негативные показания во всех тестах. Таким образом, комплексные исследования позволили выявить 140 (80.0 %) животных с позитивными показаниями вместо 96 в случае использования внутрикожной пробы в единственном числе.

При диагностическом убое и осмотре внутренних органов и бактериологическом исследовании материалов от них туйеркулез установили: у 77,1 % реагировавших на внутрнкожную пробу, у 75.9 % — на пальпебральную. у 80.0 % — на глазную, у 76.0 % — на внутривенную; у 92,0 % с позитивными показаниями в РСК с KT А. у 100,0 % — в РСК с фенольным антигеном. у 87,5 % — в РИГА с диагностикумом из М. bovis. Из 35 нереагиро-вавших ни на один тест животных у 14 (40,0 %) также установили туберкулез.

Таким образом. псрв)гчныс исследования на туберкулез в благополучных стадах следует проводить комплексно с использованием внутрикожной, пальиебральнон проб. FHFA с полнеахаридными днагностнкумами; в неблагополучных оздоравлнвасмых стадах — комплексно, с использованием тех же аллергических проб и сывороток крови — в РСК с KT А.

2.4.5. Совершенствование методов дифференциации аллергических реакций на туберкулин

В 6 хозяйствах у животных были установлены параспецифичсские реакции на туберкулин. В 5 из них исследовали симультанной пробой 2867 животных, комплектованных в 7 стад. В 6 из них результаты симу льтанной пробы остались неопределенными, только в одном реакция была достоверно выражена на KAM. На ППД-тубсркулин реагировали 144 (5,0 %). на KAM — 131 (4,6 %) животных. Только 5 (0,2 %) реагировали на пальпебральную пробу.

На 6 фермах одного хозяйства исследовали 758 голов крупного рогатого скота внутрикожной и пальпебралънон пробами в политестс. На внутри-кожную пробу реагировали 36 (4.8 %), а на пальпебральную — 3 (0,4 %). Реакции на пальпебральную пробу у 8 реагировавших животных характеризовались незначительной припухлостью, которая полностью исчезла к 72 часам посте введения туберку лина. Число реагирующих на пальпебральную пробу животных было меньше, чем на внутрнкожную пробу с ППД-тубсркулином для млекопитающих и KAM с высокой степенью достоверности (Р < 0.005). При исследовании животных неблагополучных стад достоверных различий в показаниях этих проб не наблюдали.

На способ дифференциации аллергических реакций с 11ПД-губсркули-ном для млекопитающих пол\чсно Авторское CBiueie.acrao на изобретение Si- 1S219 77.

У 138 животных с парааллергической сенсибилизацией определили срсднссуточную температуру. Она колебалась в пределах 38.1—39.5Т (в среднем — 38.6 ± 0,003°С). Температура тела животных повышалась в среднем на 0.3РС после внутривенного введения туберкулина. При убое, патологоанатом ичсском осмотре и лабораторными исследованиями биома-терналовот 13 животных туберкулез не был подтвержден. Следовательно, внутривенную пробу с успехом можно применять для дифференциации параспсцифическтгх реакций.

В РИГА с полисахарнднымн диагностикумами исследовали 974 пробы сывороток крови животных 2-х хозяйств с установленной параспецнфичс-ской сенсибилизацией. Позитивные показашш с диагностнкумом из N1. bov is получили в 43 случаях, с диагностнкумом из М. fonuilum — в 79 случаях. Причем, срсднегсомстричсскис тшры антител во втором случае достоверно превышали. Аналогичные результаты получили при исследовании 758 проб сывороток крови животных 6 ферм одного хозяйства. При диагностическом убое и осмотре внутренних органов, характерные туберкулезные изменения не были обнаружены. В 22,1 % случаев из бноматсриалов выделили культуры атипичных микобактсрий.

В комплексе с внутрикожной и пальпебральной пробами, РИГА с по-лисахаридными диагностикумами даег дополнительную информашпо об этиологии сенсибилизации к туберкулину животных ранее благополучных хозяйств.

Часто в практике бактериологических исследований биоматериалов, взятых, от у битых реагировавших на ту беркулин животных, не удастся вы-делнть культу ры микобактсрий. и причина сенсибилизации остается невыясненной. При дополнительном исследовании таких материалов специальными методами удалось высеять в 13,1 % нокардий« в 26,3 % случаев родококков. По культурально-морфологическим свойствам нокардий и родококков трудно отличить от микобактсрий. Поэтому необходимо было выбрать минимальное число тестов, с помощью которых можно было бы эффективно дифференцировать выделенные культуры.

Исследования показали, что в целях дифференциации микобактсрий от нокардий и родококков с успехом может быть использован метод определения липида LCN-a в этанол-эфирных экстрактах с помощью тонкослойной хромотографни. Как известно, высокомолекулярные миколовые кислоты микобактсрий не являются данным растворителем и не выявляются на хромотофамме.

Для дифференциации рода Nocardia от Rhodococcus использовали определение арильсульфатазной активности и анаэробного усвоения глюкозы (тест Хью и Лсфсон). Родококхи не обладают арильсульфатазной активностью, а нокарднн не способны анаэробному усвоению глюкозы. В сомнительных случаях, в качестве дополнительного теста использовали метод определения устойчивости этих культур к митомицину С. Родококки устойчивы к этому антибиотику.

2.4.6. Раэрабоиса ассоциированного антигена для РСК при бруцеллезе и пберкулезс

Нами была предпринята попытка получить комбинированный бруцеллезный н туберкулезный ангнген для использования в РСК. Такой антиген позволил бы почти в 2 раза сократшъ работу ветеринарных специалистов, серологов и настолько же экономить материальные расходы, нежели чем при постановке РСК с каждым антигеном в отдельности.

Ассоциированным антиген получали путем прямого смешивания единого бруцеллезного антигена для РСК с туберкулезным антигеном, полученным лабораторным путем. Оптимальные режимы постановки реакции и соотношения компонентов отработали с позитивными и негативными бруцеллезными и туберкулезными сыворотками. Многократные повторения опытов показали, что наиболее оптимальными условиями постановки главного опыта являются: время экспозиции баксистсмы при комнатной гсмпсратурс. в водяной бане и инкубации после добавления гемолитической системы соответственно — 45. 30 и 20 мин; удвоенный титр гемолизина и 2 % взвесь эр1Процлтов в гсмсистс.мс; объемы компонаггов — 0,2 мл.

Оптимальные соотношения составляющих ассоциированного антигена в РСК определяли исследованием 40 проб сывороток крови коров естественно больных бруцеллезом ц 17 проб сывороток крови от животных с установленным туберку лезом. Установили, что при соотношениях компонентов 1:0.5 и выше чувствительность реакции была предельной. Использование в смеси микобактсриатьного антигена в иных соотношениях приводило либо к снижению чу вствительности реакции, либо к его перерасходу.

Многократное повторение опытов по постановке РСК с сыворотками крови естественно больных и имму низированных животных показали, что ассоциированный антиген выявлял на 15—20 % больше сывороток с диагностическими титрами протнвобру целлезных антител, чем единый бруцеллезный антиген. При постановке РСК с сыворотками крови естественно больных туберкулезом и иммунизированных микобактсриями животных, комплсмснгсвязывающис антитела с ассоциированным антигеном обнаруживались в полностью совпадающих титрах с таковыми РСК с использованием мнкобактсриального антигена (Способ повышения чувствительности единого бру целлезного антигена для РА и РСК защитен Авторским свидетельством на изобретение N° 1750687 от 1992 г.)

Исследовали 126 проб сывороток крови, полученных от животных стада с двойной инфекцией В РСК с ассоциированным антигеном выявили 41 позитивную сыворотку. При повторном исследовании »тих сывороток только с туберкулезным антшеном обнаружили 32 позитивные Разница (41 - 32 = 9) в показаниях первой постановки РСК и вгорой составляли позитивные бруцеллезные сыворотки Только с единым бруцеллезным антигеном были обнару жены 7 позитивных бруцсллсшыч сывороюк, т. с. на 2 меньше Как видно, при использовании ассоциированною антигена рецикле* 2 важные залачи повышается чувсчвшсльность бруцеллезного

антигена; одновременно сыворотки крови исследуются на ту берку лез. (На способ получено решение о выдаче патента на изобретение.)

2.5. МЕРОПРИЯТИЯ ПО ПРОФИЛАКТИКЕ И БОРЬБЕ С ТУБЕРКУЛЕЗОМ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

2.5.1. Коррекция схемы комплексной диагностики туберкулеза крупною рогатою скота

Основным и общепринятым методом диагностики туберкулеза является внутрикожная проба. Однако в связи с широким распространением нс. специфических реакций на туберкулин, показания этой пробы становятся ориентировочными при первичной постановке диагноза. Исследования показали, что аналогичными атншгчным бактериям свойствами сснсибили-1 ' 'зировать Организм животных к туберкулину обладают нокардин и родококки. Такое положение еще более затрудняет дифференциацию аллерги-" ческих реакций на туберкулин в связи с необходимостью проведения дополнительных исследований, направленных на идентификацию выделенных культур.

Исследования показали, что нокардин и родококки широко распро-.странсны в природе. Они обнаружены в почве, независимо от вертнкдль-*:ной зональности— в кислой и щелочной. Родококки устойчивы в соленых почвах Прикаспня. Они выделяются из навоза и бноматернала от убитых, реагировавши на туберкулин животных. Однако в практических лабораториях не всегда исследуют поступающие клинические материалы на выделение данных микроорганизмов. Поэтому отчасти причины сенсибилизации остаются невыясненными. I; Вместе с тем. внутрикожная проба, примененная в единственном числе на животных оздоравливаемых стад, не полностью выявляет больных туберкулезом животных. В стадах остается достаточно большое число животных в состоянии энергии к туберкулину, а для их выявления необходимо использовать комплекс специальных методов.

В эпизоотическом отношении все стада крупного рогатого скота можно условно подразделить на благополучные и неблагополучные по ту берку лезу. Не менее многочисленна третья категория стад, занимающая промежуточное положение между ними. Это стада, в которых обнаруживаются реагирующие на внутрикожную пробу животные, но контрольно-диагностическим убоем и лабораторными исследованиями диагноз на туберкулез не получаст подтверждения. В каждой категории стада на дашгый момент можно определить отдельный статус. Поэтому диагностику туберкулеза всегда нужно начинать со сбора анамнестического материала, который позволит определить категорию стада, статус и наиболее эффективный комплекс диагностических тестов.

В благополучных стазах исследование здорового скота достаточно проводить внутрихожной пробой ППД-тубсркулином для млекопитающих в дозе 10 тыс. МЕ. Этим достигается контроль благополучия и раннее вы-

явление зараженных животных в самом начале возникновения болезни.

Следует определить место пальпебралыюн пробы в диагностике туберкулеза Исследования показали значительное превосходство этой пробы в сравнении с глазной. В благополу чных хозяйствах при выявлении реагирующих на внутрнкожную пробу животных очередные исследования проводят в симультанной пробе. В слу чаях получения неопределенных результатов реагирующих на оба аллергена животных отделяют и псрсисслсдуют пальпебральной пробой. При этом реагирующими считают животных, давших положительные показания на обе пробы. Этих животных исследуют внутривенной пробой, и при выявлении реагирующих производят обязательный контрольно-диагностический убой и лабораторные исследования материалов.

В стадах, в которых не прекращается выделение реагирующих miвот-ны.х. а контрольно-диагностическим убоем и лабораторными исследованиями туберкулез не подтверждается, необходимо использоезть РИГА с эритроцнтарными диагностикумами. При этом, если количество животных и среднегеометрические лгтры антител с диагностикумами из М. avium или М. forluitum выше, чем с диагностику мом из М. bovis, реакции на туберкулин считать неспсцнфичсскими. Если наблюдается обратная картина, животных с наиболее высокими титрами антител исследуют внутривенной пробой. Реагирующих на эту пробу убивают и проводят осмотр внутренних органов, а материалы от них исследуют лабораторными-методами. При получении отрицательных результатов реакции.на•ЩЩяубсркулиНтакже*-' считают неспсцнфичсскими и не производят контрольно-диагностический убой. _ , ., = f.

Во всех случаях при выделен ип' нз,материдлов от. животиыхяубитых' '¿'" ко1прольно-днагностнчсскон целью'; М' bovis, диагноз на туберкулез считают установленным. ^ , , д1...пи>х •;;-i'jS4" В неблагополу чных потуберкулезу'Ь^^'л^гаосгичссигс.'МОСл^ДЬй^" ния необходимо проводить*} зависимскггйот стадии оздоровления. На пер^ь вых этапах проведения оздоровительных м.сропрнятий следу ет исследовать только внутрикожнон пробой до тех1 пор. пока будет подтверждаться туберкулез результатами гтологоанатбмнческих и лабораторных исследований В дальнейшем в ком плекс диагнскл ичесы^. исследований необходимо включить дополнительно• шльпеб'ралЬтю' рробу, .При, этом.реагирующих тодько на эту пробу животных следует также уда.^ять из стадами ■ <

Независимо от степени оздоровления стада! в год,одлн,раз (желательно осенью, перед постановкой на стойло) провести комплексные, сероаллерги-чсскис исследования, включающие внутрнкожную, пальпебральную пробы. РСК и вттрнвенную npoöv. Животных с позитивными показаниями в рек отделяют и исследуют в»лтривснной пробой Реагирующих также отправляют на убой

Комплексное исследование позволяет наиболее полно выявите больных животных. у которых по каким-то причинам «выпадает» реакция на в ну грикожнуто пробу При этом сводится к минимуму число возможных источников инокини в стаде перед переводом на стойловое содержание. 1л: степень вероятного перс сражения животных очень велика.

Используя способ одновременной серологической диагностики бруцеллеза и туберкулеза в РСК с ассоциированным антигеном, сыворотки крови от животных из любого хозяйства можно одновременно исследовать на обе инфекции. Притом чувствительность антигена повышается на 15—26 % в отношении выявления больных бруцеллезом животных.

Материалы убитых с диагностической целью животных, поступивших их хозяйств с невыясненной этнологией аллергических реакции на ту беркулин, следует подвергнуть бактериолопп/сскому исследованию на выделение нокардий и родоконков.

2.5.2. Оптимизация системы мероприятий но профилактике п ликвидации туберкулеза крупного рогатого скота

Система мероприятий- по профилактике и ликвидации туберкулеза предусматривает общие положения по профилактике и ликвидации туберкулеза животных в разных регионах страны, которые должны быть взяты за основу при разработке комплексных программ для определенного района. области, края и республики. Особенности географических, природно-климатических, экономических, этнографических и многих других факторов прямо или косвенно .влияют на эпизоотическую ситуацию по туберкулезу, в связи с чем необходимо внести изменения в некоторые элементы системы, исходя из сложившихся у словий.

В условиях республик Прикаспийского региона тоже имеются свои специфические особенности. К ним можно отнести неоднородность рельефа, которая делится на низменну ю, предгорную и горную зоны, от личающиеся климатическими условиями и растительностью. В свою очередь, в зависимости от последних находится специфика ведения животноводства. Массовые перемещения скота, связанные с отгонно-паЬтбищной системой ведения, определенно сказывается на эпизоотической ситу ации не только туберку леза, не меньшее значение имеют межхозяйственныс связи и рынки по купле и продаже животных индивидуального сектора. Важной особенностью является широкое распространение туберкулеза среди людей.

Наблюдения показывают, что в горной зоне крупный рогатый скот относительно редко болеет ту беркулезом. В течение 20 лет болезнь регистрирована здесь только в 10 хозяйствах. Такое положение, вероятно, связано с тем, что относительно малое количество животных на фермах и наличие богатых травостоем естественных пастбищ, высокая эффективность естественной санации, ограниченность межхозяйственных связей, перемещений и перегруппировок скота препятствуют распространению болезни.

Несколько отличается эпизоотическое состояние по туберкулезу в районах предгорной зоны. Так, в Дагестане, за 20 лет в этой зоне зарегистрировано 10 неблагополучных пункта. Если в горной зоне на одно неблагополучное по туберкулезу хозяйство приходится в среднем 84287,5 га сельхозугодий, то аналогичный показатель в предгорной зоне составляет 43989,4 га. а в равнинной — 24611.5 га. Последний показатель станов1гтся еще меньше, если исключить площади сельхозугодий Ногайского района.

где болезнь почти не зарегистрирована. Естественно, такое положение создает условия для вовлечения в угрожаемк> зону большего числа хозяйств в равнинной зоне.

Основным эпицентром туберкулеза крупного рогатого скота в республиках является равнинная зона. Примером может слу жить Калмыкия, где территория, занимаемая сю. только равнинная. В Дагестане — это центральная часть плоскостной зоны, включающая территории Бабаюртовско-го. Кизилюртовского. Карабудахкенте кого и предгорного Буйнакского районов. В этой зоне болезнь зарегистрирована в 67 хозяйствах. Почти половину из них составляют прикутанные хозяйства горных районов.

Исходя из изложенного, диагностические исследования на туберкулез скота, стационарно находящегося в горной зоне, считаем целесообразных« проводить в 2 года един раз перед постановкой животных на стойловое содержание. Контроль за благополу чием в течение этого времени можно частично осуществлять осмотром туш убитых животных. Такие же исследования в хозяйствах предгорной зоны желательно проводзггь раз в год, а в плоскостной зоне — 2 раза в год. В неблагополучных хозяйствах, независимо от природно-климатических зон, оздоровление следует проводить, используя весь комплекс диагностических исследований, и удалением из стада больного скота, а при необходимости принимать радикальные меры.

ВЫВОДЫ

1. Эпизоотическая обстановка по туберкулезу крупного рогатого скота в республиках Северного Кавказа и Калмыкии продолжает оставаться напряженной. Изучение динамики проявления эпизоотического процесса свидетельствует об усилении ветеринарного надзора в 1981—89 гг. и последующем его ослаблении в связи с хозяйственно-экономическими изменениями. происходящими в последние годы. Одновременно повысилась социальная значимость туберкулеза кру пного рогатого скота, о чем свидетельствуют результаты наших исследований по идентификации микобак-тсрий, выделенных от больных людей. 24,2 % этих культур определены как М Ьолтб.

2. Установлена зависимость эпизоотической ситуации по туберкулезу от природно-климатических и хозяйственных условий. В Дагестане из 86 неблагополучных пунктов, выявленных за последние 17 лет, 66 (76.7 %) локалнзоватись в равнинной зоне с частично-пастбищным содержанием животных. Уточнен характер сезонной динамики проявления показателей заболеваемости. Эти закономерности в одинаковой степени характерны для всех республик Северного Кавказа и Калмыкии.

3. Доказано широкое распространение параспсцифических реакций на туберкулин у скота благополучных по туберкулезу хозяйств. В отдельных стадах параспсцифнчсские реакции выявляли у 0.7—10.1 % исследованных животных В 14 из 41 обследованного хозяйства (34,1 %) установлена связь возникновения таких реакций с инфицнрованностью скота и объектов внешней среды античными мнкобактсриями Не подтвержден1

симость возникновения парасиецифических реакций па туберкулин от пораженное™ скота ам иномнко юм.

4. В экспериментах на кроликах и морских свинках установлена способность нокардий вызывать сенсибилизацию к туберкулину. Впервые доказано. что такой же спо:обностью обладают родококки. Реакции на туберкулин оказались более выраженными у кроликов, зараженных N. asteroides. N. brasiliensis, R. bronchialis. При исследованиях сывороток крови этих кроликов получены позитивные результаты в РСК, РСЛЛ. РНГА. РБТЛ и РТМЛ с туберкулезными антигенами

5. Подобраны питательные среды для первичного выделения нокардни и родококков. Установлено, что для выделения нокардни наиболее пригоден метод накопительных культур на среде Мюнца с 2 % жидкого парафина. а дтя выделения родококков — метод «парафиновой приманки». Доказана эффективность ку льтивирования нокардий и родококков на синтетической среде Сотона с добавлением жидкого парафина и модифицированной плотной яичной срсде Финн II.

; 6. Замена ртутаминовокислого натрия дрожжевым аутолизатом. а аммония цитрата — аммонием щавелевокислым,' и добавление и-алканов (С|;—Сп) в среду Финн 11 стимулиру ют рост и размножение микобакле-рий. нокардий и родококков. Использование этой среды, разработанной нами, увеличивает на 16—19 % выссваемость мнкобактсрий из биомате-рнала от животных и почти в 2 раза — выссвасмость из мокроты больных туберкулезом людей.

7. Установлена широкая распространенность нокардий и родококков в пробах из объектов внешней среды. Их обнаруживали во всех природных зонах РД. Наиболее часто выделяли N. asteroides и R. erythropolis. Из внутренних органов, лимфатических узлов и дру гого биоматериала, взятого от крупного рогатого скота; реал[рутощего га туберкулин, выделили N. asteroides. N. brasiliensis, R. cqui. R. bronchialis, тогда как микобактсрии в организме этих животных не были обнаружены.

8. Впервые изгоговлены лабораторные серии нокардиозного и родо-коккового аллергенов. В экспериментах на кроликах доказаны их специфичность и активность. Представляется перспективным использование этих аллергенов для дифференциации неспецифичсских аллергических реакций на туберкулин.

9. В широком производственном опыте доказана эффективность комплекса диффсрсншшльно-диагносгических тестов, включающего пальпеб-ральную. ■ внутривенную и внутрикожную ту беркулиновые пробы. Комплексное использование этих проб обеспечивает полноту выявления больных животных п неблагополучных по туберкулезу стадах и надежность дифференциации параслецифичсских реакций.

10. Разработан комплексный бруцеллезно-туберкулезный антиген дтя РСК. Его широкое использование в практике ветеринарных лабораторий позволяет обеспечить действенный контроль благополучия стад крупного рогатого скота по обоим инфекциям и повысить (на 15 %) выявляемость больных бруцеллезом животных.

11. Результаты проведенных нсследова1шй позволяли разработать

:ч

адаптироважгую к современным условиям РД комплексную систему профилактических и оздоровительных мероприятий, включенную отдельным разделом в Государственную целевую программу «Борьба с туберкулезом в Республике Дагестан на 1994—2000 гг.». Предложенные мероприятия направлены на уточнение реальной эпизоотической и эпидемиологической ситуации туберкуле,а и проведение профилактических и контрольных мероприятий с учетом зональных различий природного, хозяйственного и эпизоотологичсского характера Основные положения разработанной системы мероприятий признаны актуальными для всех республик Северного Кавказа и Калмыкии.

Практические предложения

Изучение региональных особенностей эпизоотологии туберкулеза позволяет рекомендовать принятую в Республике Дагестан комплексную систему профилактических и оздоровительных мероприятий к внедрению во всех респу бликах Северного Кавказа и Калмыкии.

Целесообразно широкое использование (во всей зоне) методических рекомендаций по диагностике туберкулеза крупного рогатого скота, одобренных НТС МСХ и продовольствия Дагестана (12.02.1996 г.). Предложенный комплекс диффсрснциально-диагностичсскнх тестов, включающий пальпеоральную, внутривенную и внутрикожную пробы, обеспечивает полноту выявления больных туберкулезом животных и надежную дифференциацию параспсцифических реакции на ту берку лин

В целях повышения эффективности контроля благополучия стад крупного рогатого скота рекомендуется широкое производственное испытание комплексного бру целлезно-ту беркудезного антигена для РСК.

Представляется необходимым дальнейшее изучение роли нокардий и родококков в сенсибилизации кру пного рогатого скота к туберкулину.

Предложена эффективная питательная среда для первичного выделения и культивирования микобактсрий. нокардий и родококков.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Нуратинов Р. А. Внутривенная туберку линовая проба в диагностике ту берку леза крупного рогатого скота // Тезисы докладов 3-й республиканской научно-практической конференции «Современные проблемы профилактики зоонозных болезнен и шти их решения». — Гродно. 1987. — С. 89.

2. Пальпсбральная проба при туберкулезе крупного рогатого скота / Овдненко Н. П. Н\ратинов Р А . Найманов А X . Кочаров П Э // Ветеринария — 1987 -- — С 32—3>

3 И\ратина /' .1 Выттсние больных туберкулезом животных.

энергичных к туберкулин) // Сб. научи, тр. Ссвсрокавкачского и Прикаспийского юн. НИВИ — Новочеркасск. 1987. — С. —26

4. Козин .1. //., Нуратннов Р. А. Применение внутривенной туберкулиновой пробы при диагност икс туберкулеза крмшого рогатого скота // Бюлл. ВИЭВ. — 19Н7. —• Вып 64. С. 23—24.

5. Нуратнноь Р. Л. Комплексное аллергическое исследование крупного рогатого скота при туберкулезе // Сборн нлучн. ф. Северокавказското и Прикаспийского зон. ННВИ. —'Новочеркасск. 1988. —С. 18—25.

6. Устойчивость к туберкулезу быков некоторых порюд и линий в условиях искусственного заражения / Бороздим '3. К.. Исаев М. К.. Овдн-енко Н. П.. Найманов Л. X , Косенко В. И.. Кочзроа П. Э.. Якушева О. В , Халлков М. X., Нуратннов Р. А.. Байту баев Г. Т., Шувалов В. М, Ерошкин В. Ф.. Зимин Г. Я. // Со тр. Всерос. НИИ плем. дела. «Исследование высокоценных плем. с.-х. жив-х». — М.. 1988. — С. 29—36.

7. Устойчивость к туберкулезу быков разных пород в условиях искусственного заражения / Бороздин Э К., Исаев N1. К. Овдиенко Н. П., Найманов А.,Х.. Косснко В. И.. Комаров. П. Э.. Якушею О В.. Халиков М. X, Нуратннов,Р. А., Байгу блев Г". Т.. Шу валов В. N1.. Ерошкин В. Ф.. Зимин Г. Я. // Селекция-с.-х. жив-х на устойчивость к болезням и повышению резистентности в условиях пром. техн. Всерос. НИИ плем. дела. — М.. 1988. — Вып. 8. — С."59.

8. Дифференциация поствакцинальных и пост инфекционных реакций на туберкулин у молодняка крупного рогатого скота / Найманов А. X , Нуратннов Р. А, Байтлбаев Т. Г., Комаров П. Э. // Бюлл. ВИЭВ. — 1988. --Т. 66. — С. 32—38."

9. Пуратипоа Р. ,! Применение микроэлемента кобальта в получении гнпериммунных сывороток против мйкобактсрин // Тр. Ссверокаиказ-ского и Прикаспийского зон. НИВИ. —-1989.

10. Нуратннов Р. А. К вопросу диагностики туберкулеза крупного рогатого скота // Ветеринария. — 1990. — X» 8. — С. 20—21.

11. Найманов Л. Л'., Нуратннов Р..!., Дубовой П. С. Применение диагностических тестов в неблагополучных по ту беркулезу хозяйствах // Ветеринария. — 1990. — № 1. — С. 31—33.

12. Нуратннов Р. А., Х'а.'шков М. Л", Па.щаюв А/. //. Выссвасмость микобактерий на среде Финн II в различных модификациях // Бюлл. ВИЭВ. — 1990. — Т. 73—74 — С. 54—58.

13. Нуратннов Р. А. РНГ'А в диагностике туберкулеза крупного рогатого скота // Ветеринария — 1991. — №11.— С. 57—59.

14. Нуратннов Р. .!., Ур.уев К. Р., Юсупов О Ю„ Нажинов М. II Способ серологической диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота И Авторское свидетельство на изобретение № 1750687. — 1991.

15. Овбнчнко П. П., Найманов А. Л", Нуратннов Р. .1. Способ дифференциальной диагностики аллергических реакций на туберкулин у крупного рогатого скота // Авторское свидетельство XV 1821977. — 1992.

16. ПуритшннI Р. .1. Кожные аллергические ре,акции на туберкулин у экспериментально зараженных нокардкнми кроликов // Тезисы докл. науч. конф. к 7().дсгшо лаб. туберкулеза и паратуб. ВИЭВ. (В печати).

17. Иуратинов Р. .!., Ур.-усв К. Р.. Юс упов О. 10., Нажита М //. Серологическая диагностика бруцеллеза кр\ иного pot a юга скота // Ветеринария — 1993. — X? 2. — С 55—56.

18. Пуратшшч Р. А., Катков М. X. Проблемы ликвидации туберкулеза крупного рогагогс скота в Дагестане // Сельские будни. — 1994. — № 6.

19. Иуратинов Р. А , Хаткоь М Л*. Проблемы ликвидации туберкулеза крупного рогатою скота в Дагестане // Информ. бюлл науч.-тех. отд. МСХ'Дагестана — 1994. — 1 '6. — С. 30—39.

20. Иуратинов Р. А , Магомедов \[. //. Изучение сенсибилизирующей способности к туберкулину организма опытных животных микроорганизмами рода нокардиа /'/ Ветеринария. — 1996. — Л"> 5. — С. 27—29.

21. Иуратинов Р. А., Устаров ;[. К. Диагностика туберкулеза крупного рогатого с ко га. Методические рекомендации — Махачкала, 19%. — 12 с.

22. Иуратинов Р. А. Сравнительное испытание методов стабилизации эритроцитов Х1я получения полисахаридиых диагностик-умов для РНГА // Сб. научн. тр. Севсрокавказского и Прикаспийского зон. НИВИ. — 1995.

— С. 29—30.

23. Иуратинов Р. .1. Способ получения биологически активного белка из культуралыюй жидкости бактерий N. asteroides // 4-я региональная на-vui конф. «Химики Северного Кавказа ирои ;аодств\». — Махачкала, 1996 — С. 133.

24 Иуратинов Р. А., Магомедов М. П. Видовая принадлежность мн-кобактернн и вопросы экологии возбудителей туберкулеза в Дагестане // Информ листок ЦНТИ. — Махачкала, 199о. — 3 с.

25. Иуратинов Р. .!., Л/агомейов М. //., Вердисва Э. II. Изучение ареала распространения микроорганизмов родов в природе // Респ. н/пр. конф. «Проблемы сельскохозяйственной экологии». — Махачкала, 1996.

— С. 147—148.

26. Иуратинов Р. . !.. Шаршюв К. О, Нажаюв М. И. Испытание внутривенной пробы в дифференциации аллергических реакций и для выявления энергичных к туберкулину животных // Информ. листок ЦНТИ. — Махачкала. 1996. — 4 с.

27. Иуратинов Р. А . Рачазанова D. Гасанова 3. Изучешгс сенсибилизирующей способности к туберкулину организма опытных животных микроорганизмами рода нокардиа // Медико-биологический журнал Дагестана — 1997. — Л'» 2. — С. 30—33.

28 Овдиенко И И, Иуратинов Р. А., Катков М. А'.. ИаИманов А X. Сравнительное испытание различных аллерппсскнх проб с туберку лином в диагностике туберкулеза крупного рогатого скота // Тез. докл. международной конф. «Современное состояние и перспективы шггеграции ветеринарной науки и практики в условиях реформнрогання с/х-го производства Прикасп региона" —Махачкала. 1997 —С 41—12.

29 Оядисньо И //, Иуратинов Р. А. Туберкулез крупного рогатого скота в Прикаспийском регионе // Там же — С 42—í4.

30 Ц\рач1ии<>* РА. Р.ттанови "). Сравнительное изучение иммунного отпета opi.uii'лм животных, сраженных микобактернями нокардия-чн И роз^к-н .¡ми "1.14 .».с - С 47—<■>