Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Трансмиссивный гастроэнтерит свиней: вирусоносительство и специфическая профилактика



На правах рукописи

\

ВАСИЛЬЕВ ВАЛЕРИЙ ФЕДОТОВИЧ

ТРАНСМИССИВНЫЙ ГАСТРОЭНТЕРИТ СВИНЕЙ : ВИРУСОНОСИТЕЛЬСТСО И СПЕЦИФИЧЕСКИ ПРОФИЛАКТИКА

16.00,03 - ветеринарная микробиология, вирусология, ЭПИЗООТОЛОГИЯ, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Воронеж - 1997

Работа выполнена в отделе болезней свиней Краснодарской научно-исследовательской ветеринарной станции

Научные руководители:

Заслуженный деятель науки РФ доктор биологических наук,

профессор В.А. Cq)reca

Член-корреспондент УААН, доктор биологических наук, профессор

А.И. Col

Официальные оппоненты:

Доктор ветеринарных наук, профессор Ануфриев A.t

Кандидат ветеринарных наук Ефанова Л.И.

Ведущая организация - Всероссийский научно-нссяедоватеяьшш институт экспериментальной ветеринарии им Л .Р.Ков аленко

Защита диссертации состоится «¿Л; LA 199уг. в

часов

на заседании диссертационного совета № К. 120.54.03. ири Воронежском государственном aq)apHO?.x университете им.К.Д.Глинки (394987, Воронеж, ул. Мичурин а №1)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке университет; Ученый секретарь

диссертационного совета H.A. Шевченк

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы.

Кишечные инфекции являются главной причиной заболевания и ибели животных в первые недели постнатальяого периода (Притулин П.И., 975, Артемов Б.Т., 1979; Saif L.G.et.all, 1994; VanierP. et.all., 1983). Синдром ¡строго гастроэнтерита у свиней может развиваться при многих болезнях, 1ызываемых вирусами, бактериями и другими микроорганизмами. Однако, ксмотря на полиэтиологичность вирусных диареи(неонатальная диарея юросят ассоциирована прежде всего с вирусом трансмиссивного -астроэнтерита- свиней (ТГС), типичным представителем коронавирусов Закстельская Л.Я./Шеболдов A.B., 1969'Орлянкин Б.Г.', Сергеев В.А., 1980; Sohl E.H., 1981). При острых вспышках данного заболевания летальность юросят до 2-х недельного возраста может достигать 100%. Несмотря на интенсивное изучение ТГС и разработку, средств диагностики и специфической профилактики, это заболевание до настоящего времени -составляет серьезную проблему современного свиноводства. Особую угрозу заболевание представляет для крупных свиноводческих хозяйств (А.Г.Шахов идр., 1980; Bohl E.N., 1981;PensaertM.B., 1979). Несмотря на исключительную важность вопроса об источнике инфекции при ТГС,в мировой и отечественной литературе приводится недостаточно экспериментальных данных о сроках перснстенции вируса ТГС в организме переболевших животных, сроках выделения вируса во внешнюю среду и их эпизоотической опасности для восприимчивых животных.

Разработке вакцин против ТГС и способов их применения посвящено множество исследований, тем не менее; специфическая профилактика данного заболевания требует существенного усовершенствования. Традиционные подходы вакцинопрофилактик^широко применяемые при многих заболеваниях^не оправдали себя при ТГС (Притулим Н.И., 1975; Pensaert М.В., 1979). В последние годы,благодаря детальному изучению механизмов местного иммунитета,появились научно обоснованные предпосылки для применения новых нетрадиционных способов иммунизации против так., называемых локальных ин срекций, в том числе ТГС (Лершин Б.Б., 1980; Селиванов А.Б., Хасанов Ч.Г., 1983; Шварцман Я. С., ХазенсонЛ.Б,, 1978; McNabb P.C., 1981). '

Данная работа является фрагментом многолетних комплексных исследований, проводимых сотрудниками ВИЭВ, УкрНИВИ, СКЗНИВИ, Краснодарской НИВС.

Цель и задачи исследования.

Целью данной работы являлось определить продолжительность перснстенции вируса ТГС в организме реконвалесцентов и их эпизоотическую опасность, а также совершенствование средств специфической профилактики ТГС.

м

В задачи исследования входило:

- изучить продолжительность вирусоносительства при экспериментальном ТГС; . . • .,

- определить локализацию вируса в организме реконвалесцентов, пути и сроки выделения его во внешнюю среду;' - '

- выяснить эпизоотическую опасность реконвалесцентов;

- получить атгенуированный штамм вируса ТГС и изучить его свойства;

- сравнить иммуногенную активность некоторых живых вакцин против ТГС, в экспериментальных й производственных условиях;

- определить иммуногенную ценность респираторного коронавируса свиней при ТГС. . ' •„

Научная новизна работы. • ,. 1 - ;

Установлена возможность экспериментального заражения двухмесячных поросят вирулентным штаммом "СВ" вируса ТГС различными методами. Определена ИДзо штамма для новорожденных безмолозивных поросят при пероральном заражении.

- Изучены сроки персистенции ТГС в различных органах-реконвалесцентов. •• . г

- Определена продолжительность выделения вируса ТГС переболевшими животными во внешнюю среду с секретами и экскретами.

- Определена продолжительность эпизоотической опасности" реконвалесцентов при совместном содержании свослриймчивыми поросятами. ' , '

- Получен новый аттенуированный штамм вируса ТГС ("БГ-40"-), обладающий выраженными антигенными и иммуногеннымй свойствами.

- Изуч.ена иммуногенная активность вакцинного препарата из аттенуйрованного штамма в экспериментальных и производственных условиях. Подтверждена перспективность использования респираторного коронавируса свиней в специфической профилактике ТГС. .

Практическая значимость^ " <

Разработан лабораторный регламент изготовления вакцинного препарата_ на основе аттенуированного штамма "БГ-40" и оптимизирована схема его применения. Определены сроки вирусоносительства реконвалесцентов и эпизоотическая опасность их для.восприимчивых животных.' , ,

Проведена сравнительная оценка иммуногенности различных вакцинных препаратов в экспериментальных и производственных условиях. Апробация полученных результатов.' -

Материалы диссертации до'Поженыгна заседаниях Ученого совета краснодарской НИВС по итогам НИР((985-1996_к Всероссийской научно-производственной конференции (г.Краснодар, 1996), Всесоюзной научно-, технической конференции (г.Махачкала, 1987). , •Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 работ. • Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 108 страницах •машинописного текста и включает введение, обзор литературы, собственные '

исследования, обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы. Работа иллюстрирована 21 таблицами. Список литературы содержит 165 источников, в том числе 138 иностранных.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы Работа* выпо'лнена в отделе болезней свиней Краснодарской НИВС и СКЗНИВИ, использованы фрагменты совместной работы с сотрудниками ЗИЭВ, Укрйиви; Житомирской НИВС в период 1982-1996 гг. .

В работе использованы различные штаммы вируса ТГС: аттенуированный штамм РИМС'(ГДР), вирулентный штамм"СВ"(выделен в КНИВС), вирулентный штамм',Д52(УкрНИВИ), аттенуированный штамм ''ТХЭзбЭ Д192 (Япония) и ег.о клонированный вариант ТМК"(И. А. Краснобаев, 1984), вакцинный культуралькый штамм"БГ-40"(КНИВС), культуральный штамл1"ЛУК"респираторного коронавируса свиней (Сергеев В. А. и др.).

В опытах использовали перевиваемую линию клеток почки эмбриона свиньи (СПЭВ), полученную из лаборатории технологии ■ клеточных культур и питательных среД ВИЭВ, первично трипсинизированную культуру клеток почек эмбриона свиньи (ПЭС). Для иммунизации свиней применяли вакцины в нескольких формах: исходная вирусеодержащая суспензия или Люфилшир'ованный препарат, сорбированные или эмульгированные вакцины. В качестве адъюванта • использовали смесь минерального масла и* ланолина (1:1). При идентификации вируса, изучении'вирулентных й иммуногенных свойств применяли разные методы: реакцию нейтрализации (РН), непрямую гемдгглкУгинацию (РНГА) и иммуноферментный анализ (ИФА, А'липер Т.И. и др., 1988),'рекомендованные при ТГС.. « ;

В экспериментальных и производственных условиях использовали супоросных свиноматок, подсосных поросят, безмолозивных новорожденных поросят «"поросят отъемного возраста крупной белой породы. В серологических реакциях использовали пробы сыворотки крови, молозива и молока от подопытных живбтных. . ; 1 ь

Статистическую обработку прлученныхрезультатов проводили, используя учебное пособие "Биометрия'"' Г.Ф. Лакот) (1980).

; РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

. Выделение, идентификация и изучение вирулентных свойствгитамма СВ. ■ . , .

Из суспензии тощей кишки больного ТГС 3-х дневного поросенка в первичной культуре клеток-ПЭС нами.выделен штамм"СВ"(впоследствии аДаптиров'ан к линии клеток СПЭВ), который "по физико-химическим свойствам и в реакции Нейтрализации со специфической антисывороткой .к

, е ■

эталонному штамму ТОз<£Д 192 вируса ТГС, а также с антисыворотками к ряду серотипов энтеровирусов свиней идентифицирован как коронавирус -ТГС. '

Изучение вирулентности и определение ИД50 культурального полевого штамма"СВ"для подсосных новорожденных поросят провел« в опыте на 5 глубокосупоросных серонегативных к коронавирусу свиноматках и 50 подсосных поросятах 2-3 дневного возраста. Поросятам 1,2,3 и 4 групп интраназально ввели по .1 мл (6,5 lq ТЦД50 )'вируса"СВ" ' второго пассажа в культуре клеток СПЭВ в разведении 1:1,1:2, 1:4,1:8, поросятам 5-й контрольной группы ч по 1 мл раствора Хенкса. В результате опыта все поросята 1 -й группы заболели и пали с характерными для ТГС признаками; во 2-й группе заболело 100% поросят, пало - 80%; в 3-й группе - 50% и 20%. соответственно, поросята 4 и 5 групп в течение 10 дней (срок наблюдения) оставались клинически здоровыми. При математической-обработке полученных результатов вирулентная доза ■' вирусаСВ",-вызывающаязаболевание и гибель 50% инфицированных 2-3' дневных поросят (ЛД50) составила 6,0 lq ТЦЦ50.В разведении ирходного вируса 4,98 lq2 - ' ~ '

Экспериментальное заражение, поросят различными методами.

В этом разделе представлены*результаты экспериментального зараженш серонегативных к коронавирусу 2-х месячных поросят вирулентным вирусом "СВ'различпыми методами: 1 группа - внутримышечно, 2-я - внутривенно, 3-я -перораль'но, 4-я - интраназально в дозе?'100 ИД50 для новорожденных поросят. В каждой группе находилось в изолированных условиях по 26 голов. Учет результатов проводили по заболеваемости, продолжительности инкубационного периода, клинической картине, количеству павших и выздо-■ ровевших поросят, патанато.чической картине, i * . , .- Таблица'1

/ , Вирулентность штамма "СВ" вируса ТГС для двухмесячных поросят.при

различных методах, заражения

Группы пороегг |\ Кол-во голов в группе Метод заражения ^ Заболело t Пало , Выздоровело

гол. %. гол. % гол. % '

1, 26 внутримышечно 26 100 ■ ( I 3,84 " 25 96,16

26 внутривенно 26 . 100 i 3,84 25 96,16

• 3., - . 26 - пероралъно 26 100 2 7,68 24 92,32

1 4, 26 интраназально 26 100 3 11.54 23 88,46

■5, 26 . контроль - -

■г

Результаты опыта, приведенные в таблице 1, показывают, что независимо от способа заражения вирус вызывал заболевание всех поросят и гибель небольшой части животных. Поросята всех опытных групп заболевали через 48-72 часа с клиническими признаками ТГС и через 3-5. суток 93,2 из них выздоровели, а 6,72 (с более тяжёлыми клиническими признаками)'пали на 2-5 сутки с характерной для ТГСпатанатомической картиной. Из 10% суспензии, приготовленной из тканей тощей кишки, легких и миндалин павших поросят в культуре клеток ПЭС реизолирован исходный вирус, идентифицированный в РН. Животные контрольной группы в течение всего периода наблюдения оставались клинически здоровыми. •

Динамика выделения вируса ТГС во внешнюю среду и • персистенция его в организме реконвалесцентов.

С целью изучения сроков выделения вируса во внешнюю среду исследовали секреты и экскреты экспериментально зараженных поросят. Для этого у 3-х подопытных животных из каждой группы (таблица 1) 1 раз в 10 дней в течение месяца, а в последующем 1 раз в месяц отбирали пробы фекалий, мочи и носового секрета для реизоляции вируса в культуре клеток ПЭС. Результаты опыта представлены в таблице 2.

■ . , Таблица 2

Выделение вируса ТГС во внешнйю среду переболевшими свиньями

№ п/п Объекты исследований Сроки проведения исследований (дни) п ~ 15

10 20 30 60 90 120 150 180

1. Носовой секрет 12 1-4 10 2-4 6 1,2,4 8 3,4 5 3,4 1 4 - -

2... Моча 6 ' 1-4 5 . 1-4 6 1-4 3 3.4 ' 3 3,4 - -

3. Фекалии 9 1-4 5 '• . 1-4 7 1-4 1 3 3 3,4 •. - - -

числитель - количество положительных результатов;

знаменатель - номера групп поросят с положительными результатами.

Из результатов опытов видно, что наиболее часто вирус удавалось выделить из носовых выделений переболевших'поросят. Из 120 исследованных,проб носовых выделений вирус изолирован из 42 образцов

причем в течение 30 дней после заражения от животных всех 4-х опытных групп и через 90 дней от животных 3 и 4 групп.

Из 120 исследованных образцов мочи вирус изолировали в 23 случаях (]£!,2%) в течение 30 дней по'сле'заражения от животных всех' 4-х групп и через 90 дней от животных 3 и 4 групп.

Из 120 образцов фекальных масс и соскобов слизистой прямой кишки вирус изолировали в 25 случаях (20,8%) с длительностью выделения аналогично 2-й опытной группе животных.

г '

В реакции нейтрализации со специфической гипериммунной антисывороткой вирусные изоляты идентифицированы как вирус ТГС.

Исследования аналогичного материала от животных 5-й контрольной группы с целью выделения вируса в 5 последовательных ' пассажах на клетках СПЭВ и ПЭС дали отрицательный результат.

Таким образом, поросята после перорального и интраназального заражения выделяли вирус с мочой, фекалиями и носовым секретом в течение 90 дней и 30 дней после внутримышечного и внутривенного заражения. •

На этих же животных изучали продолжительность персистенции вируса ТГС в организме переболевших пороСят, проводя убой подопытных животных через 30,60,90,120,150,180,210 и 360 дней после экспериментального заражения. В указанные сроки убивали по 3 подопытных животных из каждой Группы (см. таблицу 1). ■ . При убое учитывали характер паталогоанатомических изменений. Отбирали кусочки тонкого отдела кишечника (Т.О.К.);легкого, печени, почек, селезенки и мезентёриальных лимфоузлов. Пробы материала^« ятые от каждого животного, исследовали индивидуально с использованием культур клеток ПЭК и СПЭВ. Всего исследовано 1332 пробы. , •

■ Таблица 3

Длительность персистенции вируса в организме реконвалесцентов

№ . п/п Объекты исследований Время после заражения (дни) Частота выделения вируса(%) „

30 60 90 120 150 180

Ь Т.О. К. 12 1-4 3 3,4 4 3,4 - - - 21,1

2. : Легкое 12 1-4 8 . 2-4 " ' 5 2,4 Т-1-4 - - 35,5 •••

3: Печень 6 1,2 - - - - - 6,6

4. Почка 5 1,2 5 2,3 " 2' 1,2 ; - - 13,3

. 5. Л/узлы 5 1-4 4 1,4 5 2,3 1 4 - •* 16,6

6. Селезенка 2 1,2 3 1,2 - - - - 5,5

числитель - количество полджительных результатов;. - - V знаменатель - номера групп поросят с*положительными результатами.

Приведенные в таблице 3 результаты свидетельствуют о длительном • присутствии вируса ТГС В организме переболевших свиней. В легочной ткани он сохранялся в течение 120 дней при всех изучаемых методах заражения, а в. миндалинах в течение того же- срока только при интраназальном способе заражения. Через 90-дней после заражения вирус удалось выделит*, из тощей кишки поросят 3 и 4 групп (пёроральное и интраназальное заражение) и почек 1 и 2 групп (внутримышечное и внутривенное заражение). Вирус персистировал в течение 60 дней в селезенке и 30 дней в печени поросят при внутривенном и внутримышечном заражении:

Вирусологические исследования аналогичного материала, полученного при контрольном убое в более поздние сроки (через 150 и 180 дней после заражения), дали отрицательные результаты..Таким'образом,можно предположить, что максимальная продолжительность персистенция вируса ТГС в организме переболевших, поросят составляют-] 20 дней после заражения с локализацией вируса в легочной ткани, миндалинах и мезентериальных лимфоузлах. Все выделенные вирусные изоляты дали положительные результаты в реакции нейтрализации с гипериммунной типоспецифической антисыврроткой против коронавируса ТГС.

Эпизоотическая опасность переболевших ТГС животных для восприимчивых поросят

-' Опыты по изучению контактной передачи вируса от переболевших свиней неиммунньши свиньям провели в 2 этапа с интервалом через 36 и 127 дней после заражения подопытных животных. На каждом этапе перед . подсадкой восприимчивых поросят к переболевшим проводили комплекс .санитарных мероприятий, исключающих возможное влияние ранее* инфицированной среды. На обоих этапах опыта к переболевшим свиньям подсаживали по 5 здоровых серонегатавных к вирусу ТГС поросят 2-х' месячного возраста для контактного содержания. Через 14 дней от начала контактного содержания провели диагностический убой выздоровевших поросят для реизоляции вируса. Учет результатов опыта проводили по заболеваемости и гибели содержащихся совместно с реконвалесцентами . поросят. При этом учитывали продолжительность инкубационного периода, тяжесть переболевания, количество заболевших и выздоровевших, результаты паталогоанатомических, бактериологических и вирусологических исследований, проведенных общепринятыми методами.

•'";.. • Таблица 4

Результаты опытов по.изучению эпизоотической опасности

Группы свиней реконва-лесценто в Количество свиней ■ ' в опыте .Заболело свиней при контактно м заражении Количество свиней в опыте. Заболело свиней при контактом заражении

переболе вших 3640 дней (тому назад помеще иных на контакт всего переболевши х 127-135 дней тому назад помещенных на контакт - всего % . ■■ '1

1. 23 5 4 80 14. 5 3 60

2. 23 .•5 • - 5 • 100 ' - 14 ' 5 • 3 60

'3. • 23 5 5 100 14 5 4 ' 80

4. 23 5 5 100 14 5 5 100

5. 23 5 0 0 14 ■5 .0 0

Всег о ' 115 25 19 76 70 25 15 60

IP

Результаты, представленные в таблице 4 показали, что здоровые серонегативные к коронавирусу ТГС 2-х месячные поросята, при контактно содержании с реконвалесцентами спустя 36'и 127- дней после экспериментального заражения различными методами, заболевали с типичными клиническими признаками ТГС на 3-5 сутки. В первый период опыта (36 дней после заражения)при контактном заражении заболело 75% поросят, во второй период опыта (127-дней после заражения) - 60% поросят.

Из тонкого отдела, кишечника, легких, почек, миндалин и-мезентериальных лимфоузлов выделены изоляты, проявляющие ЦПЭ в культуре клеток с ПЭС и СПЭВ на 3-4 пассаже. По результатам РН с типоспецифическими гипериммунными сыворотками изоляты идентифицированы как вирусы ТГС.

Таким образом, результаты проведенных опытов показали, что клинически выздоровевшие поросята после экспериментального заражения различными методами остаются эпизоотически опасными для восприимчивых животных в течение 4-х месяцев (срок наблюдения). Вирус о переболевших животных вероятно обладал большей вирулентностью, чем исходный культуральный. ' .

Изучение свойств аттенуированного штамма"БГ-40ТГС.

Аттенуацию вирулентного штамма" БГ" типировандого в лаборатории болезней свиней ВИЭВ как вирус!ТГС, проводили методом серийного4 пассирования в перевиваемой культуре клеток СПЭВ., *4

В процессе аттенуации штамма через 10,15,20,30 и 40 серийных пассажей изучали изменение титра инфекционности в культуре клеток • СПЭВ и антигенные свойства даиГноворожденных- поросят (РН) при * пероральной иммунизации. '

Таблица 5

Инфекционная и антигенная активность штампа "БГ" в процессе *'

Титры Число пассажей в культуре, клеток СПЭВ

10 15 1 20 ' 30 40 .

Титр инфекционности ТЦДя ' 4,66 -. 5,25 5,82 4 6,0 6,0

Титр нейтрализующей, 1 .

активности сыворотки 1:304 1:256 1:215 1:179

крови привитых поросят ±65 ±117 + 94 ±47 + 38

Как видно из представленных в таблице 5 результатов^титр инфекционной активности штамма при серийном пассировании увеличился примерно в 20 раз, что можно объяснить адаптацией вируса к клеткам СПЭВ.

В процессе серийного пассирования в культуре клеток СПЭВ (40 пассажей) штамм БГ'вызывал образование.ВНА при пероральном введении новорожденным поросятам, хотя по мере аттенуации "снижалась антигенная . активность вируса.

Вирулентность и реверсибельность атгенуированного штамма БГ-40 изучали в серии опытов на новорожденных безмолозивных поросятах методом биопробы. Приученным и искусственному кормлению суточным безмолозивным поросятам в условиях вивария вводили перорально по 20 мл культурального вируса (6,01я Т1ДД5П )"БГ" прошедшего различное число серийных пассажей на линии клеток СПЭВ. В каждом пассаже заражали по 4 поросенка, по 2 головы оставляли незараженными для контроля при ' содержании в аналогичных изолированных условиях. От убитых в атональном состоянии или по окончании срока наблюдения отбирали кусочки легкого^ тонкого отдела кишечника, мезентериальных лимфоузлов, готовили 5% суспензию на физиологическом растворе, часть материала . использовали для реизоляции вируса, другую часть - для последующего . заражения безмолозивных поросят с целью изучения реверсибельных свойств штамма.'' .

»• • ' ' Таблица 6

Изменения'в процессе аттенуации вирулентности

Число пассажей в культуре СПЭВ •Количество поросят в ; опыте Заболело Пало

голов % голов " %

- 10 4 ' 4 100 2 ' 50

15 4 ' 4 100 ■ 2 " 50

20 • 4 , / 2 , 50 , 1' 50 .

30 8 4 50 <■0' . ' , о

40 12 ч 0 ' -о - ' • 0' .

V , В результате проведенных опытов установлено, что штамм"БГ"вируса ТГС, прошедШий,10,-Л5 и 20 серийных пассажей в линии клеток СПЭВ сохранил свои вирулентные свойства для восприимчивых поросят при ' ; пероральйом введении. Из патматериала инфицированный поросят в культуре клеток ПЭС реизопировали ибходны^й-вирус. '

Через,<30 серийных пассажей вирус не вызвал заболевания у -инфицированных поросят в первом пассаже, однако во втором пассаже" на восприимчивых поросятах он'проявил вирулентные'свойства и вызвал слабовыраженное заболевание у 2-х' из 4-х поросят. ' >

Штамм, прошедший 40 еерййных пассажей в культуре Клеток СПЭВ не; вызвал заболевания при пероральном введении 2-1071ц ТЦД50 не - , восстанавливал вирулентные свойства после 3-х последовательных пассажей на безмолозивных поросятах. 4 - " ■ > ' ' ' ■

Иммуногённые. и антигенные свойства атгенуированного штамма БГ-40 изучали в •серии опытов на супоросных свиноматках путем иммунизации их различными[ методами вакцинным препаратом перед оНоросом. - ■ '

■ (г

Напряженность лактогенного иммунитета определяли пероральным заражениай-З суточных новорожденных поросят вирулентным штаммом',СВ" вируса ТГС 2,01ч Л Дм

_Таблица. 7

Группы свиноматок Мётод иммунизации Кратность и сроки иммунизации "

1. внутримьплечно дважды за 30 и 15 дней до опороса

2. . внутримышечно • .однократно за 30 дней до опороса

3. перорально. дважды за 30 и 15 дьей до опороса

• . 4. комбинировано (в/м + перорально) однократно за 10 дней ■ 1 до опороса

S (контроль) не иммунизировали

Иммуногенность-и эффективность схем иммунизации оценивали по .. степени защиты поросят от'заболевания и.леталбното исхода.

Результаты опытов, приведенные в таблице 8 показывают, что > аттенуированный штамм'БГ-40"вируса ТГС обладает Выраженной иммуногенной активностью. Напряженность лактогенного иммунитета у новорожденных поросят зависит от метода и сроков, иммунизации супоросных свиноматок. . -

- / • Таблица 8 Иммуногенность вакцинного штамма «БГ-40» _

Группы Количество вакцинированных свиноматок Родилось поросят Заболело 1 Пало Выжило Процент защиты

\ • - от заболевания от гибели

1. 8 67 8 4 63 88,1 94,0

2.. 3 ■■ 26, • 2 2 24 92,3 92,3 ..

3. 3 7 25 3 - -..3 ,22 88,0 86,0 '

4. 3 '22 '7 2 20 68,2 90,9

^(контроль) ■ 4 '31 22 21 20 . 29,1 31,4

Сравнительное испытание иммуногенности аттенуированных штаммов вируса ТГС и эффективнЪстй схем иммунизации

. -Комиссионное сравнительное испытание двух аттенуированных штаммов ГТМК'и'"БГ-40"цроведено на базе СКЗНИВИ. Оба штамма имели титр инфекционности 106 ТЦД50 . Свиноматок, свободных от антител к .

Таблица 9

Результаты испытания иммуногенности двух аттенуироеанных штаммов ("БГ-40" и "ТМК") и эффективности -двух схем иммунизации

№№ групп Штамм вируса для вакцинации Кратность вакцинации -Количество вакциниро ванных-свиноматок. Количество родившихся поросят Результат контрольного заражения поросят

заражено незаболело остались живы ' % защиты

от яаболева! от гибели

1. "БГ-40" ч! двукратно . 2 18 18 ' 12 15 ЧИЛ 66,7 - 83,3

2. "БГ-40" однократно 2 • 20 20 13 18'. 65,0 90,0

3. "ТМК1.' , двукратно 3 24 24 18 ' 23 и 75,0 • 95,8

4. "ТМК" однократно ■ 3 27 " 27 21 27 77,8 100,0 .

5. , контактные 2 -15 '15 . 7, 12' V 46,7 80,0

6.'-. невакциниров энные (контроль) 1 1 8 8 0 0. 0,0 0,0

- ' • • пч

вирусу ТГС, прививали комбинированным методом, предложенным ВИЭВ. При однократной вакцинации свин'оматкам вводили нативный культуральный вирус интраназально по 5,0 мл (5* 106 ТЦД5о) и тот же вирус в виде водно.-масляной эмульсии внутримышечно в дозе 5 мл. При двукратной вакцинации спустя 14 дней свиноматкам дополнительно вводили внутримышечно эмульгированный препарат в дозе 5 мл. Свиноматок в обеих случаях прививали за 26-30 дней до опороса'каждым. способом: по 3 евлно-'матки штаммом'ТМК'и по 2 свиноматки - штаммом"БГ-40'. Две серонегативные свиноматки той же степени'супоросности не были вакцинированы, но содержались в одном помещении в соседнем боксе и , служили тестом горизонтальной передачи вакцинного штамма вируса -ТГС.

Напряженность лактогенного иммунитета определяли методом заражения 2-3 дневных поросят назо-орально" вирулентным штаммом "Д52" вируса ТГС в дозе 100 ЛД50. ■ . ■

•■ Как видно из таблицы 9 штамм "БГ-40" при двукратной иммунизации свиноматок рбеспе'чил защиту, от гибели 83,3% и от заболевания 66,7% поросят; при однократной иммунизации - ' 90% от гибели и 65% от заболевания. Штамм"ТМК"при двукратной иммунизации обеспечил защиту-от гибели 95",8% и от заболевания 75% поросят,, а при однократной иммунизации -100% от гибели и 77,8% от заболевания. ,

У двух ' неиммунных свиноматок, i находившихся в контакте со .свиноматками, вакцинированными штаммом"ТМК"защита от/^бели составила 80% и от заболевания - 46,7% поросят, что свидетельствует о возможности передачи вакцинного штамма вируса ТГС от иммунизированных свиноматок и поросят контактным способом. -,

Все 8 поросят, полученных от не вакцинированной свиноматки (

погибли на 3-14 сутки после заражения. ■ :

В тех же условиях провели оценку иммуногенности вакцин, приготовленных из штаммаТМК'вируса ТГС и штамма"ЛУ.К'респираторного_коронавируса свиней (РКВС). ,. - > - . ... : , '

- , Таблица 10

Схема вакцинации супоросных свиноматок

аттенунрованным штаммом'ТМК"вируса ТГС и штаммом "ЛУК" PKBG

Группы свиноматок Штамм вакцимного вируса 1-я вакцинация (70-75 дни супоросности) 2-я вакцинация (100105 дни - супоросности)

I - "тмк'тге интраназально 3 мл ' внутримышечно с масляным адъювантом ЛгС" внутримышечно с- масляным адъювантом Î мл

11 . "лук"рквс интраназально 3 мл внутримышечно с масляным адъювантом 3 мл внутримышечно с масляным ' адъювантом 3 мл

m Контроль

Контрольное заражение поросят .проводили на 3-5 сутки после рождения. Поросятам каждого помета перорально вводили по 2 мл суспензии

Таблица 12

Суммарные данные по изучению антигенности^ иммуногенности 1 -. различных вакцин против ТГС в производственных условиях

№№ пп Вакцина 'Схема вакцинации Количество привитых . свиноматок , Титры антител в ИФА (п = 20) Сохранность поросят к . отъему (%)

•• f ^ сыворотка крови свиноматок в день опороса молозиво сыворотка крови ггоросят в день опороса , • -

1. ВИЭВ (ТРИ) 70 дней 100 дней '20350 1:64000-1:128000 1:64000-1:128000 '1:64000-1:128000 90-95%.

2. "РИМС" двукратно.-за 8 и 2 недели до опороса(по . наставлению) 220*0 "1:16000-1:32000 1:8000-1;16000 1:8000 .67-75%

3. , . "БГ-40"' 70 дней 100 дней . ' ~ 250 ■ 1:32000-1:64000 '1:64000 ■ 1:32000-1:64000 90-96%

4. "Нативная" (Ильногорская) 90 -100 дней- ' 1Ó600\ 1:32000-1:64000 ' ,1:64000 * "1:32000-1:64000 92-96% '

5. Контроль', (неиммунизиров анные) , 320 4 1.-500-1:2000 - ' -1:4000 " 1:500-1:2000 20-50%

>

■ /

/

кишечника (1:10) поросят-гнотобиотов, погибших от заражения вирулентным штаммом"Д52 вируса ТГС. Результаты Опыта представлены в таблице 11. Поросята практически оказались в .одинаковой степени устойчивыми к экспериментальному заражению вирулентным штаммом ТГС , что подтверждает тёсное'антигенное родство между вирусами ТГС и РКВС.

' - 1 - Таблицам

Результаты контрольного заражения поросят полученных от свиноматок, .

вакциниррванных двумя штаммами вируса

Группа свиноматок* Количество свиноматок Результаты контрольного заражения поросят

/ ■ заражено погибло • осталась ЖИВЫ % защиты

I .- 4 36 10 26 , ■ 72 •

11 .8 т . 63 / 18.. " 45 67

III ' 2 20 18-, 2 10-,

-см.таблицу 10

, .Производственные испытания различных вакцинных дрепаратов против ТГС провели в стационарно неблагополучном по ТГС ровхозе-комбинате «Ильцногорский». Оп'ытные-группы свиноматок иммунизированы производственными сериями вакцин «ТР-1», «РИМС»;.-экспериментальной, серией вакцинылз штамма «БГ-40» и скармливанием супоросным свиноматкам суспензии тонкого отдела кишечника >поросят, Инфицированных вйрулентным "штаммом вируса ТГС. Контролем служили группы не, вакцинированных свиноматок. г

Из'данных, приведенных в таблице 12 видно, чтавакцины'ТР-Ги"БГ-40' .обладали сходной антигенной и иммуногенной активностью. Вакцина «РИМС» уступала этим препаратом па степени иммунного ответа.

• ^ 'ВЬЩОДЬД " > •'

1. Серонегативные 2-.\ месячные лоросята восприимчивы к экспериментальному заражению вирулентным штаммом дируса ТГС различными методами: перорально, цнтраназально, внутримышечно, внутривенно. Заболевание в большинстве случаев (20 из 26) заканчивалось выздоровлением через 3-5 суток после заражения. - '

2. У экспериментально зараженных поросят вирусоносительство пррдолжйлось в:течение 120 дней; Вирус наиболее часто удавалось выделить из легких и лимфоузлов (до 120 дней) и реже из тонкого'отдела'кишечника, " почек, селезенки (до 60 дней). г ~ -

3. Переболевшие поросята выделяли вируСво внешнюю среду с - ; ' секретами и экскретами в течение 90"дней после экспериментального заражения, который передавался при тесном контакте неиммунным поросятам в течение )27 дней, вызывая у них заболевание в период ' совместного содержания. ■ >

4. Вирулентный штамм "БГ"У вируса ТГС после серийного пассирования в перевиваемой культуре клеток СПЭВ в течение 40 пассажей -утратил вирулентность для новорожденных безмолозивных поросят и ;.

..'' - 'Г сохранил антигенные и иммуногерные свойства. '

'5. Экспериментальные серии вакцины из аттенуированного штампа "БГ-40"-Вируса ТГС оказались эффективными при иммунизации супоросных свиноматок в экспериментальных и цроизводственных условиях.

' 6. Аттенуированный штамм "БГ-40" по иммуногеннОстн оказался аналогичным аттенуированному штамму "ТМК" (модифицированный, клонированный японский штамм .ТОзбв Дто), способному к горизонтальной передаче. *

7. Оба штамма "БГ-40" и "ТМК" при комбинированном способе иммунизации супоросных свиноматок, заключающийся в одновременном 1 введении вируса за 20-24 дня до опороса интраназально и внутримышечно (с* . масляным адъювантом) обеспечивали выраженную защиту поросят при

экспериментальном заражении вирулентным штаммом вируса . ТГС (защита от заболевания и гибели соответственно 70 и 90%). \ 8. Респираторный коронавирус свиней (штамм "ЛУК"), являющийся природноаттенуированным авирулентным мух нтом вируса ТГС, обладает выраженными антигенными и иммуногенными свойствами й может быть '' использйван для профилактики ТГС.

' 9. При испытании в стационарно-неблаГопЬлучнОМ по ТГС ■■ ' , свиноводческом комплексе вакцины из аттенуированных штаммов'ТМК" (вакцина ТР-1) и ч'БГ-40" по эффективности практически не уступали 4 ,> иммунизации супороснкх■свиноматок кишечным вирулентным" вирусом (сохранность около 90% поросят. Вакцина "РИМС" оказалась менее иммуногенной (сохранность около 70% поросят). ч.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ > V

« 1. Результаты проведенные исследований служат основанием для внесенияизменейий в действующую инЪтрукцию "О мероприятиях по Ч профилактике и ликвидации заболевания свиней трансмиссивным! гастроэнтеритом", утвержденную Главным управлением ветеринарии МСХ СССР II .03.1985 г. в( части продления сроков снятия ограничений, а также, проведения других оздоровительных мероприятий, предусмотренных ' -настоящей инструкцией. 1 ' • -

2. Сравнительные Испытания вакцин из аттенуированных''штаммов и ; вирулентного вируса ТГС позвЬляют сделать выбор в пользу стратегии -применения безопасных вакцинных препаратов.

IS '

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ •

Бибиков Ф.А., Болоцкий И.А., Сологуб Т.М., Васильев В.Ф., Шипицын А.П, Дашков Н.М. / Рекомендации. Краснодар, 1980. Васильев В.Ф., Болоцкий И.А., Щипицын А.Г. Некоторые вопросы течения эпизоотии вирусного (трансмиссивного) гастроэнтерита свиней. /"Ветеринария",. М., 1982. №12.

Васильев В.Ф., Болоцкий И.А., Шипицын А.Г., Семенцов В.И. Биологическая проба при вирусном (трансмиссивном) гастроэнтерите свиней / М. "Ветеринария", 1985, №9. ' ■ , Васильев В.Ф.. Семенцов В.И.1, Болоцкий И. А., Шипицын А.Г. желудочно-кишечные заболевания поросят / "Свиноводство". М., 1985, № 1. ' _

Бибиков Ф.А., Болоцкий И.А., Сологуб Т.И., Шипицын А.Г., Васильев ВЛ., Семенцов В.И., Хантий C.B. / Рекомендации, г. Краснодар, 1986.

6. Васильев В.Ф., Болоцкий И. А., Семенцов В.И., Дружина К. В. / «Опыт оздоровления свинопоголовья ферм от вирусного (трансмиссивного) , гастроэнтерита свиней в хозяйствах Краснодарского края / Информ. листок №25, Краснодар, 1990,4с.

7. Васильев В.Ф., Болоцкий И.А., Семенцов В.И. Вирусоносительство при экспериментальном заражении поросят ТГС / Тезисы

докладов научной конференции, "Состояние и перспективы развития научных исследований по профилактике и лечению болезней сельскохозяйственных животных и птиц" Краснодар, 1993.

8. Васильев В.Ф., Болоцкий И.А. Методика специфическом профилактики вирусного (трансмиссивного) гастроэнтерита свиней// Труды Кубанского . агроуниверситета "Эффективность ветеринарных мероприятий в животноводстве Кубани",Вып.ЗЗЗ,1996 г., с.66-69.

- 9. Васильев В.Ф., Болоцкий И.А. Разработка методов специфической -профилактики вирусного (трансмиссивного) гастроэнтерита свиней // . Тезисы докладов Всесоюзной научно-технической конференции. Махачкала, 1987 г.

1. 2.

3.

4.

5.