Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Трансмиссионный гастроэнтерит свиней: вирусоносительство и специфическая профилактика

На правах рукописи

Ье

•ИЙ ФЕДОРОВИЧ

ТРАНСМИССИВНЫЙ гастръэнТЕРИТ СВИНЕЙ : ВИРУСОНОСИТЕЛЬСТВО И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА

16.00.03 - ветеринарная микробиология, пирусояогия,

ЭПИЗООТОЛОГИЯ, МИКОЛОГИЯ и иммуиолошя

АВТОРЕФЕРАТ

диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

\

Воронеж - 1997

Работа выполнена в отделе болезней свиней Краснодарской научно-исследовательской ветеринарной станции

Научны е руководители:

Заслуженный деятель науки РФ • доктор биологических наук, профессор

Член-корреспондент УААН, доктор биологических наук, профессор

Официальные оппоненты:

Доктор ветеринарных наук, профессор

Кандидат ветеринарных наук

В.А. Сергеев

А.И. Со

Ануфриев А! Бфанова Л.И.

Ведущая организация - Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им.Я.Р.Ковалснко

Защита диссертации состоится » 199/г. в «/4;

часов

на заседании диссертационного совета № К. 120.54.03. при Воронежском государственном аграрном университете им.К.Д.Глинки (394987, Воронеж, ул.Мичурина №1)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке университета Ученый секретарь

диссертационного совета

H.A. Шсвченк

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы.

Кишечные инфекции являются главной причиной заболевания и гибели животных в первые недели постнатального периода (Притулин П.И., 1975, Артемов Б.Т., 1979; Saif L.G.et.all, 1994; VanierP. et.all., 1983). Синдром острого гастроэнтерита у свиней может развиваться при многих болезнях, вызываемых вирусами, бактериями и другими микроорганизмами. Однако, несмотря на полиэтйологичность вирусных диарей^неонатальная диарея поросят ассоциирована прежде всего с вирусом трансмиссивного гастроэнтерита свиней. (ТГС), типичным представителем коронавирусов (Закстельская Л.Я.,' Шеболдов A.B., 1969' Орлянкин Б.Г.-, Сергеев В.А., 1980; Bohl E.H., 1981). При острых вспьшшах данного заболевания летальность поросят до 2-х недельного возраста может достигать 100%. Несмотря на интенсивное изучение ТГС и разработку, средств диагностики и специфической профилактики, это заболевание до настоящего времени -составляет серьезную проблему современного свиноводства. Особую угрозу заболевание представляет для крупных свиноводческих хозяйств (А.Г.Шахов и др., I980;'Bohl E.N., 1981; Pensaert М.В., 1979). Несмотря на исключительную важность вопроса об источнике инфекции при ТГС,в мировой и 01ечесгвенной литературе приводится недостаточно экспериментальных данных о сроках персистенции вируса ТГС в организме переболевших животных, сроках выделения вируса во внешнюю среду и их эпизо'отической опасности для восприимчивых животных.

Разработке вакцин против ТГС и способов их применения посвящено множество исследований, тел» не менее,специфическая профилактика данного заболевания требует существенного усовершенствования. Традиционные подходы вакцинопрофилактик^широко применяемые при многих заболеваниях(не оправдали себя при ТГС (Притулин II.И., 1975; Pensaert М.В., 1979). В последние годы,благодаря детальному изучению механизмов местного иммунитета^появились научно обоснованные предпосылки для применения новых нетрадиционных способов иммунизации против так., называемых локальных инфекций, в том числе ТГС (Лершин Б.Б., 1980; Селиванов А.Б., Хасанов Ч.Г., 1983; Шварцман Я. С., ХазенсонЛ.Б,, 1978; McNabb P.C., 1981).

Данная работа являете* фрагментом многолетних комплексных исследований, проводимых сотрудниками ВИЭВ, УкрНИВИ, СКЗНИВИ, Краснодарской НИВС.

Цель и задачи исследования.

Целью данной работы являлось определить продолжительность персистенции вируса ТГС в организме реконвалесцентов и их эпизоотическую опасность, а также совершенствование средств специфической профилактики ТГС.

ч

В задачи исследования входило:

- изучить продолжительность вирусоносительства при экспериментальном ТГС; .

- определить локализацию вируса в организме реконвалесцентов, пути и сроки выделения его во внешнюю среду;

- выяснить эпизоотическую опасность реконвалесцентов;

- получить аттенуированный штамм вируса ТГС и изучить его свойства;

- сравнить иммуногенную активность некоторых живых вакцин против ТГС, в экспериментальных и производственных условиях;

- определить иммуногенную ценность респираторного коронавируса свиней при ТГС.

Научная новизна работы. •'

Установлена возможность экспериментального заражения двухмесячных поросят вирулентным штаммом "СВ" вируса ТГС различными методами. Определена ИД50 штамма для новорожденных безмолозивных поросят при пероральном заражении.

- Изучены сроки персистенцни ТГС в различных органах-реконвалесцентов. • . •

- Определена продолжительность выделения вируса ТГС переболевшими животными во внешнюю среду с секретами и экскретами.

- Определена продолжительность эпизоотической опасности', реконвалесцентов при совместном содержании с восприимчивыми поросятами.

- Получен новый аттенуированный штамм вируса ТГС ("БГ-40"), обладающий выраженными днтигенными и иммуногенными свойствами.

- Изучена иммуногенная активность вакцинного препарата из аттенуированного штамма в экспериментальных и производственных условиях. Подтверждена перспективность использования респираторного коронавируса свиней в специфической профилактике ТГС.

Практическая значимость. '

Разработан лабораторный регламент изготовления вакцинного препарата на основе аттенуированного штамма "БГ-40" и оптимизирована схема его применения. Определены сроки вирусоносительства реконвалесцентов и эпизоотическая опасность их для восприимчивых животных. . ' ;

Проведена сравнительная оценка иммуногенности различных вакцинных препаратов в экспериментальных и производственных условиях. Апробация полученных результатов.

Материалы диссертации доложены;на заседаниях Ученого совета краснодарской НИВС по итогам НИР(1985-1996), Всероссийской научно-производственной конференции (г.Краснодар, 1996), Всесоюзной научно-, технической конференции (г.Махачкала, 1987). , Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 работ. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 108 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, собственные '

исследования, обсуждение, выводы, практические предложения, список

литературы. Работа иллюстрирована 2! таблицами. Список литературы содержит 165 источников, в том числе 138 иностранных.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы

Работа выполнена в отделе болезней свиней Краснодарской НИВС и СКЗНИВИ, использованы фрагменты совместной работы с сотрудниками ЗИЭВ, УкрНИВИ; Житомирской НИВС в период 1982-1996 гг.

В работе использованы различные штаммы вируса ТГС: аттенуированный штамм' РИМС'(ГДР), вирулентный штамм"СВ"(выделен в КНИВС), вирулешный штамм'Дзг (УкрНИВИ), аттенуированный штамм ''ТО« д,п (Япония) и ег.о клонированный вариант ТМК"(И.А. Краснобаев, 1984), вакцинный культуральный штамм"БГ-40"(КНИВС), культуральный штамм'ЛУК'ресиираторного коронавируса свиней (Сергеев В.А. и др.).

В опытах использовали перевиваемую линию клеток почки эмбриона свиньи (СПЭВ), полученную из лаборатории технологии клеточных культур и питательных сред ВИЭВ, первично трипсинизированную культуру клеток почек змбриона свиньи (ПЭС). Для иммунизации свиней применяли вакцины в нескольких формах: исходная вируссодержащая суспензия или лиофилизированный препарат, сорбированные- или эмульгированные вакцины. В качестве адъюванта использовали смесь минерального масла и ланолина (1:1). При идентификации вируса, изученип'вирулентных и иммуногенных свойств применяли разные методы: реакцию нейтрализации (РН), непрямую ге.магглюгинацию (РНГА) и нммуноферментный анализ (ИФА, Алипер Т.И. и др.. 1988), рекомендованные при ТГС.

В экспериментальных и производственных условиях использовали супоросных СЕиноматок, подсосных поросят, безмолозивных новорожденных поросят и поросят отъемного возраста крупной белой породы. В серологических реакциях использовали пробы сыворогки крови, молозива и молока от подопытных животных.

Статистическую обработку полученных результатов проводили, используя учебное пособие "Биометрия" Г.Ф. Лакиц (1980).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Выделение, идентификация и изучение вирулентных свойств штамма

СВ.

Из суспензии тощей кишки больного ТГС 3-х дневного поросенка в первичной культуре клеток ПЭС нами выделен штамм СВ"(впоследствии адаптирован к линии клеток СПЭВ), который по физико-химическим свойствам и в реакции нейтрализации со специфической антисывороткой к

: € :

эталонному штамму ТОзйУД 192 вируса ТГС, а также с антисыворотками к ряду серотипов энтеровирусов свиней идентифицирован как коронавирус -

ТГС. . - - ■ "

Изучение вирулентности и определение ИД50 культурального полевого штамма"СВ"для подсосных новорожденных поросят провели в опыте на 5 глубокосупоросных серонегативных к коронавирусу свиноматках и 50 подсосных поросятах 2-3 дневного возраста. Поросятам 1,2,3 и 4 групп интраназально ввели по J мл (6,5 lq ТЦД50 )'вируса' СВ" ' второго пассажа в культуре клеток СПЭВ в разведении 1:1,1:2, 1:4,1:8, поросятам 5-й контрольной группы п по 1 мл раствора Хенкса. В результате опыта все поросята 1-й группы заболели и пали с характерными для ТГС признаками; во 2-й группе заболело 100% поросят, пало - 80%; в 3-й группе - 50% и 20%.соответственно, поросята 4 и 5 групп в течение 10 дней (срок наблюдения) оставались клинически здоровыми. При математической ,обработке полученных результатов вирулентная доза •• вируса,"СВГ,-вызывающая заболевание и гибель 50% инфицированных 2-3' дневных поросят (ЛД50) составила 6,0 lq ТЦДзо.в разведйши исходного вируса 4,98 lq2 - ' (* '

Экспериментальное заражение, покосят различными методами.

В этом разделе представлены'результаты экспериментального заражения серонегативных к коронавирусу 2-х месячных поросят вирулентным вирусом "СВ'различными методами: 1 группа - внутримышечно, 2-я - внутривенно, 3-я -перорально, 4-я - интраназально в дозе" 100 ИД50 для новорожденных поросят. .В каждой группе находилось в изолированных условиях по 26 голов. Учет результатов проводили по заболеваемости, продолжительности инкубационного периода, клинической картине, количеству павших и выздо-■ ровевших поросят, патанатамической картине. ] ' ' , ■ . Таблица'1

Вирулентность штамма "СВ" вируса ТГС для двухмесячных поросят,при

Группы порос»т Кол-во ГОЛОВ В группе Метод заражения , % .< Забрлело л Пало Выздоровело

ГОЛ. %. гол. % гол. % "

1., 26 внутримышечно 26 . 100 1 3,84 - 25 96,16

. 2.1 > 26 внутривенно 26 . 100 1 зм 25 96,16

■ ' . ' 26 - перорально 26 100 2 7,68 24 92,32

4,1 26 интраназально 26 100 3 II 54 23 88,46 •'

■5, ■ 26 контроль - - ' „ -

т

Результаты опыта, приведенные в таблице 1, показывают, что независимо от способа заражения вирус вызывал заболевание всех поросят и гибель небольшой части животных. Поросята всех опытных групп заболевали через 48-72 часа с клиническими признаками ТГС и через 3-5. суток 93,2 из них выздоровели, а 6,72 (с более тяжёлыми клиническими признаками)'пали на 2-5 сутки с характерной для ТГС тмтанатомической картиной. Из 10% суспензии, приготовленной из тканей тощей кишки, легких и миндалин павших поросят в культуре клеток ПЭС реизолирован исходный вирус, идентифицированный в РН. Животные контрольной группы в течение всего периода наблюдения оставались клинически здоровыми.

Динамика выделения вируса ТГС во внешнюю среду и • перагстештя его в организме реконвалесцентов.

С целью изучения сррков выделения вируса во 'внешнюю среду исследовали секреты и экскреты экспериментально зараженных поросят. Для этого у 3-х подопытных животных из каждой группы (таблица 1) 1 раз в 10 дней в теч'ение месяца, а в последующем 1 раз в месяц отбирали пробы фекалий, мочи и носового секрета для реизоляции вируса в культуре клеток ПЭС. Результаты опыта представлены в таблице 2. • ' ... .. , , .ч Таблица 2

Выделение вируса ТГС во внешнюю среду перебдлевшими свиньями

.4» п/п Объекты исследований Сроки проведения исследований (дни) п ~ 15

.10 20 30 60 90 120 150 180

. 1. Носовой секрет 12 1-4 10 2-4 6 ' 1,2,4 8 3,4 5 3,4 1 4 - -

2... Моча 6 ' 1-4 5 1-4 6 1-4 3 3,4 ' 3 3,4 - - -

3. Фекалии 9 1-4 5 . 1-4 7 1-4 • 1 3 3 3,4 •. - - -

числитель - количество положительных результатов;

знаменатель - номера групп поросят с положительными результатами.

Из результатЬв опытов видно, что наиболее часто вирус удавалось выделить из носовых выделений переболевшихпоросят. Из 120 исследованных.проб носовых выделений вирус изолирован из 42 образцов (35,0%), придем в течение 30 дней после заражения от животных всех 4-х опытных групп и через 90 дней от животных 3. и 4 групп.

- Из 1-20 исследованных образцов мочи вирус изолировали в 23 случаях (1.0,2%) в течение 30 дней после'заражения от животных всех'4-х групп и через -90 дней от животных 3 и 4 групп. ' .

Из .120 образцов фекальных масс и соскобов слизистой прямой кишки вирус изолировали в 25 случаях (20,8%) с длительностью выделения аналогично 2-й опытной группе животных.

В реакции нейтрализации со специфической гипериммунной антисывороткой вирусные изоляты идентифицированы как вирус ТГС.

Исследования аналогичного материала от животных 5-и контрольной группы с целью выделения вируса в 5 последовательных 'пассажах на клетках СПЭВ и ПЭС дали отрицательный результат.

Таким образом, поросята после пероральног'о и интраназального заражения выделяли вирус с мочой, фекалиями и носовым секретом в течение 90 дней и 30 дней после внутримышечного и внутривенного заражения. "

На этих же животных изучали продолжительность персйстенции вируса ТГС в организме переболевших поросят, проводя убой подопытных животных через 30,60,90,120,150,180,210 и 360 дней после .

экспериментального заражения. В указанные сроки убивали по 3 подопытных животных из каждой Группы (см. таблицу1). • . При убое учитывали характер пат<злогоанатомических изменений. Отбирали кусочки тонкого отдела кишечника (Т.О.К.\легкого, печени, почек, селезенки и мезентёриальных лимфоузлов. Цробы материала^взятьр от каждого животного исследовали индивидуально с использованием культур клеток ПЭК и СПЭВ. Всего исследовано 1332 пробы. , •

" " Таблица 3

№ . п/п' Объекты , исследований Время после заражения (дни) Частота выделения' вирус'а(%),.

30 60 90 120 150 180

1. Т.О.К. 12 1-4 3 3,4 4 .14 - \ - • 21,1

2. Легкое 12 1-4 8 , 2-4 ' ' 5 2,4 1-4 - - 35,5 *

3.-- Печень . 6 1,2 - - - - - -. 6,6

4. Почка 5 1,'2 5 2,3 ' 2' ' 1,2' - , - 1. 13,3

, 5. Л/узлы 5 1-4 4 1,4 5 2,3 1 4 - • 16,6

6. Селезенка 2 1,2 3 1,2 - - - ■ 5,5

числитель-количество положительных результатов;. . - ^ знаменатель - номера групп поросят с'положительными результатами.

Приведенные в таблице 3 результаты свидетельствуют о длительном ■ присутствии вируса ТГС в организме переболевших свиней. В легочной ткани он сохранялся э течение 120 дней при всех изучаемых методах заражения, а в. миндалинах в течение того же- срока только при интраназальном способе • заражения. Через-90 дней после "заражения вирус удалось выделить из тощей кишки поросят 3 и 4 групп (пёроральное и интраназальное заражение) и почек 1 и 2 групп (внутримышечное и внутривенное заражение). Вирус персистировал в течение 60 дней в селезенке и 30 дней в печени поросят при внутривенном и внутримышечном заражении:

. • 9'. •'.

1 Вирусологические исследования аналогичного материала, полученного при контрольном убое в более поздние сроки (через 150 и 180 дней после заражения), дали отрицательные результаты.Таким"образом,можно предположить, что максимальная продолжительность персистенция вируса ТГС в организме переболевших поросят составляют-120 дней после заражения с локализацией вируса в легочной ткани, миндалинах и мезентериальных лимфоузлах. Все выделенные вирусные изоляты дали положительные результаты в реакции нейтрализации с гипериммунной типоспецифическ'ой антисывороткой против коронавируса ТГС.

Эпизоотическая опасность переболевших ТГС животных для

восприимчивых поросят

-/ Опыты по изучениюконтактной передачи вируса от переболевших свиней неиммунными свиньям провели в 2 этапа с интервалом через 36 и 127 дней после заражения подопытных животных. На каждом этапе перед ■ подсадкой восприимчивых поросят к переболевшим проводили комплекс .санитарных мероприятий, исключающих возможное влияние ранее' инфицированной среды. На обоих этапах опыта к переболевшим свиньям подсаживали по 5 здоровых серонегативных к вирусу ТГС поросят 2-х Месячного возраста для контактного содержания. Через 14 дней от начала контактного содержания прорели диагностический убой рыздоровевших . лоросят для реизоляции вируса. Учет результатов опыта проводили по - заболеваемости и гибели содержащихся совместно с реконвадесцентами .

поросят. При этом учитывали продолжительность инкубационного периода, • тяжесть переболевания, количество заболевших и выздоровевших, результаты' паталогоанатомических, бактериологических и вирусологических исследований, проведенных общепринятыми методами.

Таблица 4

Результаты опытов по.изучению эпизоотической опасности

Группы свиней реконва-лесценто в Количество свиней - ' в опыте .Заболело свиней при контактно м заражении Количество свиней в опыте. Заболело свиней при контактом заражении

переболе вших 3640 дней '.тому назад помеще иных на контакт всего переболевши х 127-135 дней тому назад помещенных на контакт ' всего % . '1

23 5 4 80 14. 5 3 60

2. '23 .•5 ■ 5 ' 100 " 44 4 5 • 3 60

'У 23 5 5 100 14 5 4 - 80

4. 23 5 5 100 14 5 5. 100

5. 23 5 0 0 14 ■ 5 ".0 ' 0

Всею " 115 25 19 76 70 25 15 6 0

Ю

Результаты, представленные в таблице 4 показали, что здоровые серонегативные к коронавирусу ТГС 2-х месячные поросят^, при контактном содержании с реконвалесцентами спустя 36'и 127-дней после экспериментального заражения различными методами, заболевали с типичными клиническими признаками ТГС на 3-5 сутки. В первый период опыта (36 дней после заражения)при контактном заражении заболело 78% поросят, во второй период опыта (127-Дней после заражения) - 60% поросят.

Из тонкого отдела, кишечника, легких, почек, миндалин и; / Тиезентериальных лимфоузлов выделены изоляты, проявляющие ЦПЭ в культуре клеток с ПЭС и СПЭВ на 3-4 пассаже. Пр результатам РН с типоспецифическими гиперрммунными сыворотками изоляты идентифицированы как вирусы ТГС.

Таким образок, результаты проведенных-опытов показали, что клинически выздоровевшие поросята после экспериментального заражения различными методами остаются эпизоотически опасными для восприимчивых животных в течение 4-х месяцев (срок наблюдения). Вирус от переболевших животных вероятно обладал большей вирулентностью, чем исходный культуральный. • , ,

Изучение свойств аттенуированного штамма"БГ-4(УТГС.

Аттенуацию вирулентного штамма'БГ',' типированного в лаборатории болезней свиней ВИЭВ как вирусГТЛ, проводили методом серийного * пассирования в перевиваемой культуре клеток СПЭВ, •( *х

В процессе аттенуации штамма через 10,15,20,30 и 40 серийных пассажей изучали изменение титра инфекционности в культуре клеток • СПЭВ и антигенные свойства дшГноворожденных- поросят (РН) при » пероральной иммунизации.

Таблица 5

: Инфекционная и антигенная активность штампа "БГ" в процессе '

Титры > Число пассажей в культуре, клеток СПЭВ

10 15 ' 20 '30 40 .

Титр инфекционности ТЦЦ» - 4,66 5,25 5,82 4 6,0 6,0

Титр нейтрализующей _ активности сыворотки крови привитых поросят 1:304 ±65 1:256 ±117 1:215 ±94 1:1,86" -±47 1:179 ±38

' ' Как видно из представленных в таблице 5 реЗультатовдитр инфекйионной активности штамма при серийном пассировании увеличился примерно в 20 раз, что можно объярнить адаптацией вируса к клеткам СПЭВ.

В процессе серийного пассирования в культуре клеток СПЭВ (40 пассажей) штамм БГ'вызйвал образование чВНА при^перор'альном введении новорожденным поросятам, хотя по мере аттенуации "снижалась антигенная . активность вируса. ''

Вирулентность и реверсибельность атГенуированного штамма ЕГ-40

изучали в серии опытов на новорожденных безмолозивных поросятах 1

методом биопробы. Приученным и искусственному кормлению суточным

безмолозивным поросятам в условиях вивария вводили перорально по 20 мл

культурального вируса (6Д ТЦД5о )"БГ" прошедшего различное число

серийных пассажей на линии клеток СПЭВ. В каждом пассаже заражали по 4

поросенка, по 2 головы оставляли незараженными для контроля при

содержании в аналогичных изолированных условйях. От убитых в

атональном состоянии или по окончании срока наблюдения отбирали

кусочки легкого", тонкого отдела кишечника, мезентериальных лимфоузлов,

готовили 5% суспензию на физиологическом растворе, часть материала

. использовали для реизоляции вируса, другую часть - для последующего

заражения безмолозивных поросят с целью изучения реверсибельных свойств

штамма:*- _ ■

1

' . 1 - Таблица 6

Изменения в процессе аггенуации вирулентности

Число пассажей в культуре СПЭВ количество поросят в . опыте За.болело Пало

голов % ГОЛО}} " %

- 10 4 - 4 1 100 г - . 50

15 4 " 4 100 - 2 * 50

20 ' 4 , / 2 - 50 , г ; 50 ,

30 8 4 50 ; 0' , , 0

40 12 ч 0 ' -0 - 0'

В результате проведенных опытов установлено, что штамм'БГ'вируса ТГС, прошедши1\10,-Л5 и 20 серийных пассажей в линии клеток СПЭВ сохранил свои вирулентные свойства для восприимчивых поросят при пероральйом введении. Из патматериала инфицированных' поросят в культуре клеток ПЭС реизолировали исходны^ вирус. ,

Через/30 серийных пассажей вирус не вызвал заболевания у .инфицированных поросят в первом пассаже, однако во втором пассаже на восприимчивых поросятах он'проявил вирулентные свойства и вызвал слабовыраженное заболевание у 2-х'из 4-х йоросят. ! ■> *

Штамм, прошедший 40 еерАйныхпассажей в культуре Клеток СПЭВ не, i вызвал заболевмпга при пероральном введении 2.107 Ц ТЦДзо не ■ * . восстанавливал вирулентные свойства после 3-х последовательных пассажей на безмолозивных поросятах. 1 - < - ^

Иммуногбнные и антигенные свойства атгенуированного штамма БГ-40 изучали в-серии опытов на супоросных свиноматках путем иммунизации их различными методами вакцинным препаратом перед опоросом.

Напряженность лактогенного иммунитета определяли перрральным . . заражением2-3 суточных новорожденных поросят вирулентным штаммом"СВ" вируса ТГС 2,0 Ц ЛД?о

_Таблица 7

Группы свиноматок Мётод иммунизации Кратность и сроки иммунизации "

1. внутримьниечйо дважды за 30 и 15 дней до опороса.

2. внутримышечно ■ .однокра'гно за 30 дней до опороса

3. перорально, дважды за 30 и 15 дней до "опороса

4. комбинировано (в/м + перорально) однократно за 10 дней • • до опороса

S (контроль) не иммунизировали

Иммуног-енность-и эффективность схем иммунизации оценивали по , степени зашиты поросят от'заболрвания илеталбного исхода. ■ •

Результаты опытов, приведенные в таблице 8 показывают, что > аттенуированный штамм'БГ-40"вируса ТГС обладает выраженной иммуногенной активностью. Напряженность лактогенного иммунитета у новорожденных поросят зависит от метода и сроков, иммунизации супоросных свиноматок. . - - ,

" . Таблица 8

Группы Количество вакцинированных Родилось Заболело ПаЛО Выжило t > Процент защиты s

свиноматок поросят Î. î

» 1 t ч î от забрле-вания от гибели

1. 8 67 8 4 63 88,1 94,0

2.. 3 - 26, - 2 2 24 92,3 92,3 ..

3. .. 3 1 25 3 -•«.з у 22 88,0 86,0 '

4. 3 22 '7 2 20 68,2 90,9

^Гконтроль) - 4 31 22 2Î 20 . 29,1 31,4

Сравнительйое испытание иммуногенности аттенуированных штаммов вируса ТГС и эффективности схем иммунизации

. -Комиссионное сравнительное испытание двух аттенуированных • штаммов ГТМК"и*БГ-40"цроведено на базе СКЗНИВЦ. Оба штамма цмели титр инфекционности 10б ТЦ Д50 . Свиноматок, свободных от антител к .

Таблица 9

Результаты испытания иммуногенности двух аттенуированных штаммов ("БГ-40" и "ТМК") и эффективности-двух схем иммунизации

№№ фупп Штамм вируса для вакцинации Кратность вакцинации Количество вакцинированных-свиноматок. Количество родившихся поросят ч Результат контрольного заражения поросят

заражено незаболело остались живы % защиты

от заболева! от гибели

1. "БГ-40" двукратно 2 18 * 18 ; 12 15 « ИЙ 66,7 83,3

2. "БГ-40" однократно 2 • 20 20 13 18 65,0 90,0

3. "ТМК'.' двукратно 3 24 24 18 ' 23 75,0 95,8

4, "ТМК" однократно 3 27 " 27 21 27 77,8 100,0 .

5 , контактные 2 •15 '15 . г 12 ■ 46,7 80,0

6Л невакциниров ■ анные (контроль) 1 8 В 0 0 0,0 0,0

- ' • пч

вирусу ТГС, прививали комбинированным методом, предложенным ВИЭВ. При однократной вакцинации свиноматкам вводили нативный культуральный вирус интраназально по 5,0 мл (5- 10б ТЦД50) и "рог же вирус в • виде водно-масляной эмульсии внутримышечно в дозе 5 мл. При двукратной вакцинации спустя 14 дней свиноматкам дополнительно вводили внутримышечно эмульгированный препарат в дозе 5 мл. Свиноматок в обеих случаях прививали за 26-30 дней до опороса'каждым. способом: по 3 св.чно-'матки штаммом"ТМК"и по 2 свиноматки - штаммом"БГ-40'! Две серонегативные свиноматки.,той же степени'супоросности не были г' вакцинированы, но содержались в одном помещении в соседнем боксе и „ служили тестом горизонтальной передачи.вакцинного штамма вируса ТГС.

Напряженность лактогеннрго иммунитета определяли методом заражения 2-3 дневных поросят назо-орйльно" вирулентным штаммом "Д52" вируса ТГС в дозе 1(^0 ЛД5о.

■ Как видно из таблицы 9 штамм "БГ-40" при двукратной иммунизации свиноматок рбеспе'чил защиту- рт_ гибели 83,3% и от заболевания 66,7% поросят; при однократной иммунизации - ' 90% от гибели и 65% от заболевания. Штамм*ТМК"при двукратнбй иммунизации обеспечил защиту -от гибели 95~8% и от заболевания 75% поросят,, а при однократной иммунизации -100% от гибели и 77,8% от заболевания. , '

У двух ' неи^лмунных свиноматок,! находившихся в контакте со .свиноматками, вакцинированными штаммом'ТМК'защита ослабели составила 80% и от заболевания - 46,7% поросят, что свидетельствует о возможности передачи вакцинного штамма вируса ТГС от иммунизированных свиноматок и поросят контактным способом.... -

Все 8 поросят, полученных от не вакцинированной свиноматки "" с погибли на ^-14 сутки послсГзаражения. • ,

В тех же условиях провели'оценку иммуногенности вакцин, приготовленпых из штамма"ТМК"виру<;а'ТГС и штамма"ЛУ}Среспираторного_5оронавируса свиней (РКВС), ; , г • ' г

, - . Таблица 10

Схема вакцинации супоросных свиноматок

Группы свиноматок. Штамм вакцинного * вируса 1-я вакцинация (70-7^ дни супоросности) 2-я вакцинация (100105 дни - супоросноеГги)

I * "тык"ТГС интраназально 3 мл ' внутримышечно с масляным адъювантом внутримышечно о масляным адъювантом 3 мл

^ II < .< "лук"рквс интраназально 3 мл внутримышечно с масляным адъювантом 3 мл внутримышечно с масляным' адъювантом 3 мл

Ш Контроль

Контрольное заражение поросят лроводили на 3:5 сутки после рождения. Поросятам каждого помета перораль'но вводили по 2 мл суспензйи

Таблица 12

Суммарные данные по изучению антигенности"и иммуногенности 1 различных закцин против ТГС в производственных условиях

№№ пп Вакцина г •' Схема вакцинации Количество привитых • свиноматок Титры антител в ИФА (п = 20) \ Сохранность поросят к . отъему (%)

сыворотка крови свиноматок в день опороса молозиво сыворбтка крови поросят в день--, опороса

1. ВИЭВ(ТР-1) 70 дней 100 дней. 20350 1:64000-1.128000 1:64000-1:128000 1:64000-1:128000 90-95%

2. "РИМС" двукратно за 8 и 2'недели до опороса(по наставлению) 2200 "1:16000-1:32000 1:8000-1.'16000 1:8000 67-75°/о

3. . . "БГ-40" 70 дней 100 дней 250 1:32000-1:64000 "1:64000 1:32000-1:64000 90-96%

4. "Нативная" (Ипьногорская) 90-100 дней ' 10600 1:32000-1:64000' ,1:64000 * 1:32000-1:64000 92-96% '

5. Контроль. (неиммунизиров энные) 320 ' 1:500-1:2000 ~ ' -1:4000 ' 1:500-1:2000 20-50%

/£

кишечника (1:10) поросят-гнотобиотов, погибших от заражения вирулентным штаммомУЫ'вируса ТГС. Результаты Опыта представлены в таблице II. Поросята практически оказались в одинаковой степени устойчивыми к экспериментальному заражению вирулентным штаммом ТГС , что подтверждает тесное антигенное родство между вирусами ТГС и РКВС.

" - - Таблица 11

Результаты контрольного заражения поросят, полученных от свиноматок,,

вакцинированных двумя штаммами вируса

Группа свиноматок* Количество свиноматок Результаты контрольного заражения поросят

заражено погибло остал'ись живы % зашиты

I 4 36 10 26 72 -

-II 8 - 63 18 . ' 45 67

III ■ 2 20 18.. 2 10-,

*-см.таблицу 10

Производственные испытания различных вакцинных препаратов против ТГС провели в стационарно неблагополучном по ТГС совхозе-комбинате «Ильиногорский». Опытные группы свиноматок иммунизированы производственными сериями вакцин «ТР-1», «РИМС»;-экспериментальной серией вакцины лз штамма «БГ-40» и скармливанием супоросным свиноматкам суспензии тонкого отдела кишечника поросят, инфицированных вирулентным штаммом вируса ТГС. Контролем служили группы не вакцинированных свиноматок. •.

Из данных, приведенных в таблице 12 видно, что вакцины'ТР-ГиБГ-40" обладали сходной антигенной и иммуногенной активностью. Вакцина «РИМС» уступала этим препаратом по степени иммунного ответа.

; ' ВЫВОДЫ .

1. Серонегативные 2-х месячные поросята восприимчивы к экспериментальному заражению вирулентным штаммом вируса ТГС различными методами: перорально, интраназально, внутримышечно, внутривенно. Заболевание в большинстве случаев (20 из 26) заканчивалось выздоровлением через 3-5 суток после заражения.

2. У экспериментально зараженных поросят вирусоносительство продолжилось в течение 120 дней: Вирус наиболее часто удавалось выделить из легких и лимфоузлов (до 120 дней) и реже из тонкого"отдела кишечника, почек, селезенки (до 60 дней). ■ .

3. Переболевшие поросята выделяли вирус во внешнюю среду с секретами и экскретами в .-течение 90'дней после экспериментального заражения, который передавался при тесном контакте неиммунным поросятам в течение J 27 дней, вызывая у них заболевание в период совместного содержания.

4. Вирулентный штамм "БГ",вируса ТГС после серийного пассирования в перевиваемой культуре клеток СПЭВ в течение 40 пассажей • угратил вирулентность для новорожденных безмолозивных поросят и

сохранил антигенные и иммуногенные свойства.

5. Экспериментальные еерии вакцины из аттенуированного штампа "БГ-40" ьируса ТГС оказались эффективными при иммунизации супоросных свиноматок в экспериментальных и производственных условиях.

6. Аттенуированный штамм "БГ-40" по иммуногеннОсти оказался аналогичным агтенуированному штамму "ТМК" (модифицированный, клонированный японский штамм ТОзб5 Д192), способному к горизонтальной передаче.

7. Оба штамма "БГ-40" и "ТМК" при комбинированном способе иммунизации супоросных сриноматок, заключающийся в одновременном введении вируса за 20-24 дня до опороса интраназально и внутримышечно (с масляным адьювантом) обеспечивали выраженную защиту поросят при

экспериментальном заражении вирулентным штаммом вируса ТГС (защита от заболевания и гибели соответственно 70 и 90%).

8. Респираторный коронавирус свиней (штамм "ЛУК"), являющийся природноатгенуированным авирулентны.м мут нтом вируса ТГС, обладает выраженными антигенными и иммуногенными свойствами и может быть использован для профилактики ТГС.

9. При испытании в стационарно-неблагополучном по ТГС свиноводческом комплексе вакцины из атгенуированных штаммов'ТМК" (вакцина ТР-1) и "БГ-40" по эффективности практически не уступали иммунизации супоросных свиноматок кишечным вирулентным вирусом (сохранность около 90% поросят. Вакцина "РИМС" оказалась менее . иммуногенной (сохранность около 70% поросят).

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Результаты проведенных исследований служат основанием для внесения изменений в действующую инструкцию "О мероприятиях по профилактике и ликвидации заболевания свиней трансмиссивным гастроэнтеритом", утвержденную Главным управлением ветеринарии МСХ СССР II .03.1985 г. в части продления сроков снятия ограничений, а также проведения других оздоровительных мероприятий, предусмотренных настоящей инструкцией.

2. Сравнительные испытания вакцин из аттенуированных штаммов и вирулентного вируса ТГС позволяют сделать выбор в пользу стратегии применения безопасных вакцинных препаратов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ •

1. Бибиков Ф.А., Болоцкий И.А., Сологуб Т.М., Васильев В.Ф., Шипицын А.Г., Дашков Н.М. / Рекомендации. Краснодар, 1980.

2. Васильев В.Ф., Болоцкий И.А., Щипицын А.Г. Некоторые вопросы течения

эпизоотии вирусного (трансмиссивного) гастроэнтерита свиней. /"Ветеринария", М., 1982. №12. .

3. Васильев В.Ф., Болоцкий И.А., Шипицын А.Г., Семенцов В.И.

Биологическая проба при вирусном (трансмиссивном) гастроэнтерите свиней / М. "Ветеринария", 1985, №9. ■ ,

4. Васильев В.Ф., Семенцов В.И.; Болоцкий И.А., Шипицын А.Г.

желудочно-кишечные заболевания поросят / "Свиноводство". М., 1985, №1.

5. Бибиков Ф.А., Болоцкий И.А., Сологуб Т.И.; Шипицын А.Г., Васильев ' ВЛ., Семенцов В.И., Хантий C.B. / Рекомендации, г. Краснод? п, 1986.

6. Васильев В.Ф., Болоцкий И. А., Семенцов В.И., Дружина К. В. / «Опыт оздоровления свинопоголовья ферм от вирусного (трансмиссивного) , гастроэнтерита свиней в хозяйствах Краснодарского края / Информ. листок №25, Краснодар, 1990,4с.

7. Васильев В.Ф., Болоцкий И.А., Семенцов В.И. Вирусоносительство при экспериментальном заражении поросят ТГС / Тезисы

докладов научной конференции,. "Состояние и перспективы развития научных исследований по профилактике и лечений» болезней сельскохозяйственных животных и птиц" Краснодар, 1993.

8. Васильев В.Ф., Болоцкий И.А. Методика специфической профилактики вирусного (трансмиссивного) гастроэнтерита свиней// Труды Кубанского . агроуниверситета "Эффективность ветеринарных мероприятий в животноводстве Кубани",Вып.ЗЗЗ, 1996 г., с.66-69.

- 9. Васильев В.Ф., Болоцкий И.А. Разработка методов специфической •. профилактики вирусного (трансмиссивного) гастроэнтерита свиней // Тезисы докладов Всесоюзной научно-технической конференции. Махачкала, 1987 г. .