Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Токсикологическая характеристика препаратных форм некоторых синтетических пиретроидов и пиретроида непиретроидного строения

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА и ПРОДОВОЛЬСТВИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ

На правах рукописи

РА X М А Т У Л ЛИН Эмиль Касымович

УД К:6! 9:615.9:614.449.57:616

ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕПАРАТИВНЫХ ФОРМ НЕКОТОРЫХ СИНТЕТИЧЕСКИХ ПИРЕТРОИДОВ И ПИРЕТРОИДА

НЕПИРЕТРОИДНОГО СТРОЕНИЯ 16.00.04 - Ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Санкт-Петербург - 1997

Работа выполнена в Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии

Научный консультант - заслуженный деятель науки

Российской Федерации, доктор ветеринарных наук, профессор Б.А.Тимофеев

Официальные оппоненты:

1. Доктор медицинских наук, профессор Э.П.Зацепин

2. Доктор ветеринарных наук, профессор VI.Г.Арестов

3. Доктор биологических наук, профессор Э.Б.Кербабаев

Ведущая организация - Всероссийский ордена Дружбы народов научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии, гигиены и экологии.

Защита состоится Ог^/игСЛ. 1997г. в // _ часов

на заседании диссертационного совета Д120.20.02 при Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины (196084, г.Санкт-Петербург, ул.Черниговская, д.5). .

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медици-

ны.

Автореферат разослан "(ХС г

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук, доцент

О.В.Уломова

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Последние два десятилетия характеризуются всевозрастающей химизацией сельскохозяйственного производства, в том числе и животноводства.

Однако быстрый рост числа и общей массы химических соединений, которые могут оказывать влияние на здоровье человека и животных непосредственно из производственной или окружающей среды, а также опосредственно через повреждения экологических систем, предопределяет высокую опасность создавшейся ситуации.

Бесконтрольное использование пестицидов и других химических соединений может иметь непоправимые отрицательные последствия. Это особенно касается возникновения наследственных болезней, индукции опухолей, проявления тератогенных эффектов у человека и животных.

В целях предупреждения отрицательных последствий химических соединений и пестицидов в разных странах сложились или создаются системы предупредительных мероприятий, среди которых одними из главных являются токсикологическая оценка химических веществ и композиций, включающая их предварительный отбор для последующего производства и применения, ограничение допустимых уровней воздействия в производственной и окружающей среде.

Следует подчеркнуть, что еще одним весьма перспективным решением данной проблемы является использование пестицидов, выделенных из природных объектов и их аналогов. В последние годы появились новые эффективные пестициды с улучшенными саннтарно-токсикологическимн и экологическими характеристиками. Примером могут служить пиретролдные инсектициды и их синтетические аналоги.

Одним из таких препаратоп является перметрии, ципермет-рин и другие аналогичные препараты, обладающие наряду с оглушающим действием п реппелентными свойствами.

На основе цнперметрина завод "Хннопн" (Будапешт) выпускает ветеринарный препарат "Хпнмикс", обладающий широким спектром действия.

Хинмикс рекомендовал для борьбы с эктопаразитами, в том числе и для лечения и профилактики чесотки овец.

Представляло интерес заменить ГХЦГ (гексахлоран) на хнн-мик'с и использовать в качестве активной добавки к бесфенольио-му креолину. При этом преследовались три основные цели. Первая - снижение концентрации и расхода указанных компонентов, что выгодно как с экономической, так и токсикологической точкн зрения. Вторая - усиление эффективности композиции (сн-

нергнзм), т.к. известно, что креолин сам обладает акарицндноИ активностью и используется с профилактической целью с концентрации 2-2,5%. • Третья - увеличение срока действия (пролонгирование) композиции за счет способности хреолииг удерживаться на кожном (шерстном) покрове,

В связи с этим в лаборатории контроля и стандартизации противопаразитарных препаратов ВГНКИ ¡в 1990 г. был создан акарицндный препарат, получивший условное название креохт (креолин с хинмиксом).

Однако, поскольку с состав крсохина входит импортное сырье (хшшнкс) выпуск их сдерживается дефицитом и дороговизной указанного компонента. Учитывая это, необходимо было создат* такой препарат, который бы содержал в качестве основного действующего вещества отечественную субстанцию. Такой препарат был разработан в лаборатории контроля и стандартизации про> тивопаразитарных препаратов ВГНКИ совместно с Волгоградским объединением "Хнмпром". Он получил условное назван»« "Пирвол". В качестве активно действующего вещества в его'со-став входит отечественный препарат перметрин.

В данной лаборатории были также созданы два вида композиций на основе ципермстрина, которые применяют методом поливания животных (луроны),

1-й состав - циперметрин-пурон (названный для краткости

пуронИ).

2-й состав - циперметрин+хлорофос-пурон (названный для краткости пурон I

Кроме того с дайной лаборатории были созданы инсектицидные порошки на основе пермстрина, ципермстрина и деньги-

метрика.

В связи с тем, что акарицкзные препараты с пирстроидноИ основой: креохин, хинмикс, пирвол, бутокс. пурон I, пурон М, инсектицидные порошки и препаративная форма ниретроида пели-ретроидного строения требон 10% флоу недостаточно изучены е отношении возможных негативных и отдаленных последствий ил влияния на организм животных; перед нами для исследования были поставлены следующие задачи:

1. Определить параметры острой токсичности препаратов для лабораторных животных.

2. Изучить влияние креохина, пирвола, хинмнкси, требон 10% флоу , бутокса, пурона I и пурона 11 на антитоксическую функцию печени.

3. Выяснить наличие или отсутствие эмбрнотоксических и тератогенных свойств у приведенных препаратов.

4. Изучить влияние препаратов на биохимические понизители сыворотки крови животных.. ..'•.''

5. Изучить в динамике показатели естественной резистентности овец, обработанных указанными препаратами.

6. Выяснить влияние данных препаратов на эмбриогенез овец и на постнатальное развитие ягнят.

7. Изучить остаточные количества перметрнна, циперметри-на и дельтаметрина в органах и тканях овец, обработанных крео-хином, пирволом и бутоксом.

8. Изучить инсекто-акарицидные свойства порошков на основе перметрина, циперметрина и дельтаметрина.

Научная новизна.

• Изучены острая токсичность пнрвола, хинмнкса, креохнна, требон 10% флоу, бутокса, пурона I, пурона II и инсектицидных порошков. Показано, что креохин, пирвол, хинмикс, бутокс, пу-рон I, пурон II и инсектицидные порошки относятся к 3-му классу опасности, а требон 10% флоу - к 4 классу опасности согласно ГОСТ12Л .007-76.

- Показано, что функциональное состояние ферментов мнк-росомального окисления является высокочувствительным и информативным показателем действия на организм пиретроидов разных химических групп.

, На примере исследованных веществ установлено, что их поступление в организм модифицирует активность различных ферментов, характер и степень этой модификации зависит от физико-химических свойств путей поступления, величины доз и концентраций, а также длительности воздействия указанных препаративных форм.

Сформулирована концепция об обязательном взаимодействии (чаще косвенно) большинства пиретроидов, попадающих в организм, с системой ферментов переаминировання. Подтверждена роль ферментов как наиболее важного механизма биохимической адаптации к воздействию пиретроидов и их препаративных форм.

- Сформулированы п обоснованы иммупо-биологические аспекты системы животные-ксенобиотики. В частности подтвержден |)акт, что между иммунным ответом на пнрстроиды и реакцией микросомалышх ферментов, метаболизнрующих указанные препаративные формы, имеются определенные взаимосвязи, и что шмуиный ответ в. своей молекулярной основе базируется на функции тех или иных ферментов.

• Показано отсутствие у пирвола, креохнна, бутокса, требон 10% флоу, пурона I и пурона II эмбриотоксическнх и тератоген-1ЫХ свойств.

Подтвержден вывод о том, что адекватная оценка беремен-юсти как функциональной нагрузки является одной из оозможио-;тей учета и анализа адаптационных реакций организма. При

изученин общетоксического действия химических соединений на организм беременных животных можно проводить токсикологическую оценку веществ на белых крысах в целях их гигиенического регламентирования и учета отдаленных последствий.

Практическая ценность работы.

Использование полученных данных способствует объектив-нон оценке реальной опасности используемых препаративных форм пирстроидов и пиретроида непиретроидного строения при их остром и хроническом поступлении в организм, что позволяв: учитывать и прогнозировать характер их комбинированного действия.

По результатам исследований разработаны:

1. Технические условия на креохнн ТУ 10-07 (Утверждено де парта ментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ 18.04.95г.).

2. Технические условия на пирвол ТУ 6-00-5763450-132-91 (Утверждено ГУ В 5.08.91г.).

3. Технические условия на пиретроиды (перметрин, ципер метрин, дельтаметрин) ТУ >0-07-049-92 (Утверждено ГУ1 7.08.92г.).

4. Временное наставление по применению пирвола для борь бы с псороптозом овец (Утверждено ГУВ 5.08.91г.).

5. Временное наставление по применению перметрнна, .ц» перметрина (хинмикса) н дельтаметрина (дециса и бутокса) : форме инсектоакарнцидногр порошка; №22-4177 (Утвержден! ГУВ 7.08.92г.).-

6. Наставление по применению креохина при псороптоз овец, №13-4-21275 (Утверждено департаментом ветеринарии Мин сельхозпродаРФ 18.04.95г.).

Кроме того, материалы исследований используются при прс ведении лекционных » практических занятий со студентами п специальности "Ветеринария" в Ульяновской государственно сельскохозяйственной академии.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту;

- токсикологическая характеристика препаративных фор некоторых пиретроидов н пиретроида непиретроидного строен») используемых в животноводстве и ветеринарии;

- состояния гематологического и биохимического гомеостаз животных, обработанных указанными препаратами;

- иммунобиологические аспекты системы животны' ксенобиотики:

- теоретические и практические основы борьбы с эктопарал тами животных.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены одобрены: на заседаниях ученого совета и научно-практичсск! конференциях Ульяновской государственной сельскохоэяйстве

ной академии 1991-1996 гг., на 7-й межгосударственной научно-практической конференции "Ноные фармакологические средства в ветеринарии" (Санкт-Петербург, 1995г.), на научно-производственной конференции "Состояние и перспективы развития научных исследований по профилактике и лечению болезней сельскохозяйственных животных и птиц", посвященной 50-летию Краснодарской НИ ВС (г.Краснодар, 1996г.), на научно-практической конференции "Профилактика и меры борьбы с инфекционными болезнями молодняка крупного рогатого скота и свиней" (г.Новосибирск, 1996г.).

Публикации результатов исследования. Основные положения диссертации изложены в 13 научных работах и 3 сданы в печать.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 275 страницах и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований (экспериментальная часть содержит 12 разделов), обсуждение полученных результатов, выводов, практических рекомендаций, списка литературы и приложений. Работа включает 49 таблиц, 3 рисунка, 7 фотографий. Список литературы включает 425 источников, в том числе 124 зарубежных авторов.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы исследований

Экспериментальная часть работы выполнена в 1990-1996 гг. на кафедре анатомии и гистологии Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии, а также в лаборатории контроля и стандартизации противопаразитарных препаратов ВГНКИ вет-препаратов, ОПХ "Манихнно,"в овцеводческих хозяйствах Ульяновской области.

Под опытом находилось 1100 белых беспородных-крыс, 100 мышей, 20 кроликов, 202 овец, 16Е ягнят, 10 собак, 8 кошек, 3 ко-, ровы, 6 телят. В работе использовали акарнцндные препараты: хинмнкс, креохин, пирвол, требон 10% флоу, бутокс, пурон I, пу-рон II и инсектицидные порошки.

На основе ципепметрина запоя "Хнноин" (Будапешт) выпускает ветеринарный препарат хинмикс. обладающий широким спектром действия. Его используют против мух, кровососущих, волосяных вшей, блох, а также для лечения и профилактики чесотки овец, вызываемой клещами вида псороптес, как посредством опрыскивания растворами, так н погружением (купкой) б них животных ( в разведении 1:400 - профилактика н 1:200 - лечение).

Состав хинмикса: циперметрин - 250 г/л и эмульгатор (змульснон АГ 2222 - 70 г/л, петролеум (ксилол) • до 100 мл).

Основное его активное действующее вещество - ципермет-рин, эмпирическая формула которого С::Н1уС1:Ь10>.

Акарииидный Препарат креохин. разработанный в лаборатории стандартизации и контроля протнвопаразитарных препаратов ВГНКИ ветпрепаратов, представляет собой композицию (физическую смесь) креолина каменноугольного бесфенолыюго и хинмикса. Препарат является концентратом указанных веществ, взятых в соотношении 1:10, т.е. 1 часть хшшнкса и 10 частей бес» фенольного креолина.

Пирвол был разработан в ВГНКИ ветпрепаратов совместно с Волгоградским объединением "Хиыпром". В качестве активно действующего вещества в его состав входит отечественный пер-метрин.

Состав пирвола: перметрни (активно-действующее вещество) » 2%, нефраз (пролонгатор) - 44%, неонол (эмульгатор) • 10%, ди-оксанол (растворитель) - 44%. Основное его активно действующее вещество - перметрнн, эмпирическая формула которого С:|НиС1:6з.

Японской фирмой "Искру"-'предложен для исследования новый акарицндный препарат - требои (зтофенпрокс). эмпирическая формула которого СмНгвО).

Это быстродействующий инсектицид. Он имеет простую, несложную эфирную связь. Действующим веществом трсбона 10% флоу является этофснпрокс-2-(4-этог:снфсн«л)-2-мстнлпропил-3-фенокснбензиловый эфир. Требоп 10% флоу обладает широким спектром инсектицидного действия, предназначен для уничтожения тараканов, мух, блох и постельных клопов в помещениях различного назначения (жилье, производственные), а также вне помещений (личинки комаров, мух п т.д.). В наших опытах мы испытывали препарат требои 10% флоу, содержащий в своем составе пиперонилбутоксид в качестве сниергнста.

Производителем бутокса является фирма "Руссель-Уклаф". Актив недействующим веществом данного препарата является пи-ретроид - дельтаметрин, эмпирическая формула которого СпН^ВггМОз. Его концентрация в бутоксе - 5%.

В лаборатории стандартизации «I контроля протпвонаразн-тарных препаратов ВГНКИ ветпрепаратов были разработаны два вида пуронов следующего состава:

Пурон 1: циперметрин - 0,5%, хлорофос - 0.5%. бутилацетат -25% и бутанол - до 100%:

Пурон II: циперметрин - 1%, бутилацетат - 25% и бутанол -до 100%.

Инсектицидные порошки представляют собой смесь цеолитов

различных месторождений или других наполнителей (оксида магния, талька) и пирстрондов (перметрина или ципсрметрина (хинмикса), или дельтаметрнна (дециса, бутокса)). В 1-ой тонне порошка содержится 1 кг нерметрина, или 1,6 кг хинмикса (содержит циперметрнн), или I кг бутокса, или 2 кг дециса.

Изучение острой токсичности пуроиои, креохина, хинмикса, пирвола. бутокса и требон 10% (¡)лоу проводили па белых беспородных крысах с массой тела 1S0-200 г. Дли опыта использовались клинически здоровые животные, находившиеся в одинаковых условиях содержания и кормления. Испытуемые препараты вводили внутрижелудочно в виде водной эмульсии.

Расчет ЛДт и других показателей осуществляли методом пробит анализа, предложенного Литчфилдом и Уилкоксоном в модификации З.Рота (М.Л.Беленький, 1963).

Изучение острой токсичности инсектицидных порошков проводили на нелинейных мышах массой 18-20 г. Величину ЛДзо определяли по Керберу.

Наблюдения за экспериментальными животными после однократного введения препарата проводили 'в течение не менее 14 дней. Если гибель животных отмечали в первые сутки, наблюдения ограничивали этим сроком.

Изучение раздражающих свойств инсектицидных порошков проводили на белых мышах массой 20-22 г и кроликах массой 2-3 кг. Для проведения опытов па спине каждого животного выбривал» участок кожи:-мышам размером 1x1см, кроликам - 4x5 см. Удаляли всю шерсть и через 24 часа втирали, порошки: мышам из расчета 10 г/кг массы тела в течение 1-2-х минут, кроликам - 1 г/кг. Каждый препарат испытывали-на 20 мышах, 3 кроликах. Контрольным животным втирали тальк.

Влияние креохина, хинмикса, пирвола, бутокса, пуронов и требой 10% флоу па антитоксическую функцию печени изучали на белых крысах по методу В.К.Розина (1964) с помощью гексенало-оогосна.

Прсдварптеяыюе'нзучсвие влияния креохина на гематологи-' чеекпе и биохимические показатели сыворотки крови крыс проводили нанесением на 2/3 хвоста в течение 21 дня при ежедневной экспозиции 4 часа. v 7

Для оценки характера влияния креохина на гематологические и биохимические показатели сыворотки кропи а подостром эксперименте использовали 30 крыс-самок (3 группы по 10 животных). Животным 1 -П и 2-ой подопытных групп в течение '2-х месяцев ежедневно орально (с двухдневным перерывом d неделю) вводили 1 мл водной эмульсии креохина в дозах 1/10 и 1/50 ЛД50. Животным контрольной группы вводили соответствующий объем дехлорированной водопроводной воды.

Для изучения влияния пурона I и пурона II на биохимические показатели сыворотки крыс были скомплектованы 21 группы, из расчета 6 голов в каждой группе. Препараты испытывали в терапевтических и 10-кратно терапевтических дозах. Биохимические показатели изучали через 3,5 часа, 1, 5, 14 и 29 дней после введения препаратов.

Для изучения влияния различных акарицидных препаратов на биохимические показатели крови овец были созданы следующие группы: овцы 1 группы (5 голов) были искупаны в рабочей концентрации креохина, овцы 2-й группы (5 голов) - в 10-кратной терапевтической концентрации креохина, овцы 3-й группы (5 голов) - в рабочей концентрации хннмикса, овцы 4-й группы (5 голов) - в 10-кратной терапевтической концентрации пирво-ла, овцы 5-й группы (5 голов) - в рабочей концентрации пирвола, овцы 6-й группы (5 голов) были искупаны в ванне 1,25%-ной концентрации требон 10% флоу (с пиперонил-бутокендом), овец 7-й группы (контрольной) купали в чистой воде. Животные были в возрасте 2-3-х лет, тонкорунной породы. Время экспозиции 1 минута, температура эмульсин 18-20°С. Кровь у животных брали до хупки, через 3 часа. 1, 3,5, 10 и 15 суток.

Для изучения влияния акарицндов на биохимические показатели сыворотки крови животных нами были выбраны следующие показатели: содержание белка, глюкозы, аскорбиновой кислоты, активность ферментов ЛДГ, МДГ (лактат- и малататдегидрогена-зы), щелочной фосфатазы, холинэстеразы. АлАТ и АсАТ (аланин-н аспарататаминотрансферазы), мочевины, азот мочевины и остаточный азот.

Содержание общего белка в сыворотке крови подопытных животных определяли рефрактометрическим методом. Для определения глюкозы и аскорбиновой кислоты использовали набор фирмы "Хемапол", ЛДГ н МДГ определяли спсктрофотометрнче-ски по методу Бергмейера Н.Э. (1974). Активность щелочной фосфатазы в сыворотке крови овец определяли по методу Боданско-го. Активность АлАТ и АсАТ в сыворотке крови проводили ди-ннтрофенилгндразиновым методом. Определение активности холинэстеразы проводили методом с субстратом бутирнлтиохолнна йодидом. Концентрацию мочевины определяли унифицированным методом по цветной реакции с диацетилмонооксимом.

При изучении влияния пуронов на биохимические показатели сыворотки крови крыс (белок, холинэстераза, АлАТ, АсАТ, щелочная фосфатаза, мочевина) использовали набор "ЬасЬеша".

В основу изучения эмбриотоксического и тератогенного действия препаратов были положены "Методические указания по изучению эмбриотоксического действия фармакологических веществ и влияния их на репродуктивную функцию", одобренные

фармакологическим комитетом МЗ СССР 10 января 1986 г.

Для изучения влияния препаратов на эмбриогенез овец были скомплектованы 15 групп овцематок, из расчета 8-10 голов в каждой группе. Работа проводилась в сельскохозяйственном производственном кооперативе "Алга" Чердаклинского района Ульяновской области. Животных двукратно обрабатывали эмульсиями креохина, пирвола, хннмнкса, бутокса и требой 10% флоу в терапевтической концентрации на 17-и и 29-й, 35-й и 45-й, 90-й и 120-й дни суягности, из расчета 1-1,5 литра препарата на 1 голову. Контрольную группу обрабатывали подои. Об эмбриотропном действии препаратов судили, изучая потомство в момент рождения и некоторое время спустя.

В день родов определяли продолжительность беременности, а также период времени до вставания па ноги и самостоятельного подхода новорожденных к вымени матери, их массу, длину, половую принадлежность. .

Изучение влияния акарнцндов на показатели естественной резистентности проводилась на оацах в .терапевтических и 5-кратно терапевтических концентрациях. Для изучения были выбраны бактерицидная и лизоцнмная активность сыворотки крови. Определение указанных показателей проводили перед обработкой овец препаратами' и через 5, 15, 30 дней после действия пестицидами. Бактерицидную активность сыпороткл крозп определяли ротозяектроколорцметрпчесюш методом'(по Смирнову О.В. н Кузьминой Г.A., i965). Активность лизоцима определяли фото-}лектроколорннетрическ!ш методом по ДорофеЛчуку А.Г.

Остаточные количества 'цнперматрнна (АДВ кре.охина), пер-•летрина (АДВ пирвола) и дельта метрнна (АДВ бутокса) проиодн-III согласно "Методически» указаикяи по определению сннтсти» ICCKHX. пиретропдов в растениях, воде подоелоз хромотографпчз* •ленми методами".

Для исследований гшретроидой з органах н тканях озец, об-шботатшх хутгочпммп з;;ул?.оадмн, пробы Зрзлн от шгвотшдх, 'битых через 5, 10 а 15 дней (а д'дьтакстгмпт - 7, 10, 35 дней), ■о под опытен кахо.чилос» M ол-;д u á -тгх-т.

Микрокод ччог пп «•г?*ггро"ло:1 опргдог>.'-ги ¡ja газовом ютографс "Цпст W.

Изучение чи-:с::то-" <аимич гшк cno'Jcn порогако.! на осилз; •ермстрина, и*«»«? ionra:а л .и^льтп^стпггм ггрозодили un П ;о-акая :д 8 ко'ааа^ разк;,^ аауаа :: зозпаата с п^азапааиш са.ааы-оза и ногоэ-дост.

Лечебную >;нс:ач ащада л.; норошаоч тат

рупного рогатого з;:отз проводили аа j тчака-лх с массой тело '•?»• 0 кг 10-12-тч псеячггзгэ иираа-а с гфа:<аг:а;аа гаг-'лтогашозч a J оровз;: с зуднезоЛ аасотаоп.

Полученные данные экспериментальных исследований обрабатывали методом вариационной статистики. Для этой цели использовали программируемый микрокалькулятор МК-52. Работу проводили согласно методическим указаниям "Применение программируемых микрокалькуляторов для биометрических расчетов" (Баюн Ю.К., 1988). Статистическую значимость различий устанавливали по величине "t" критерия Стьюдента.

При выполнении отдельных этапов работы исследования были проведены в комплексе с сотрудниками ВГНКИ вет. препаратов: Г.В.Кирюткиным, В.О.Бондаренко, Л.П.Степановой.

Результаты исследований

1. Изучение острой токсичности крсохИна, хинмикса, пирвола, требон 10% флоу, бутокса, пуронов и инсектицидных порошков

В результате изучения токсических свойств прн оральном ■введении креохина, хинмикса, пирвола, бутокса, требон 10% флоу и пуронов установили, что средиесмертельная доза (ЛДм) для креохина составляет 3381 (2633+4532): для хинмикса • 715 (501,8+1019); для пирвола - 2060 (1140+3708); для бутокса - 182 (176,4+187,В); для требон 10% флоу - более 45000 (ЛДя>>4500 мг/кг по ДВ); для пурон Г- 2180 (2011,0+2363); пурон И • 3340 (2830,5+3941,2) мг/кг.

Согласно классификации пестицидов по степени токсичности, разработанной Л.И.Медведем и Ю.С, Каганом (1986) крео-хин, пирвол, пуроны и требон 10% флоу отнесется к малотоксичным препаратам (ЛДзо более 1000 мг/кг), а по степени опасности, предложенной ВОЗ (1979), - к малоопасным, веществам (ЛДзо более 2000 мг/кг). .

При анализе величины ЛД>о для хинмикса и бутокса можно сделать вывод о том, что хинмикс по классификации Л.И.Медведя и Ю.С.Кагана (1986) относится к веществам средней токсичности (ЛДзо более 200 мг/кг), а бутокс - к высокотоксичным веществам (ЛДзо более 50 мг/кг). По степени опасности, предложенной ВОЗ (1979), хинмикс - к умеренном опасным веществам (ЛДз» от 200 до 2000 мг/кг), соответственно бутокс к очень опасным веществам (ЛДзо от 20 до 200 мг/кг).

В результате изучения токсических свойств при Оральном введении инсектицидных порошков установили, что среднесмертельная доза для белых мышей (ЛДзо) для порошка с мерметрииом составляет - 220, для порошка с цнперметрином • 200, для порошка с дельтаметрином - 160 мг/кг. Согласно классификации пестицидов по степени токсичности, разработанной Л. И.Медведем и

ГО.С.Каганом (1968), порошки с перметрином и цнперметрином относятся к веществам средней токсичности, а порошки с дельта-метрином - к высокотоксичным веществам.

1.1. Изучение раздражающих свойств инсектицидных порошков на основе перметрнна, циперметрина и дельтаметрина

В результате изучения раздражающих свойств инсектицидных порошков установили, что однократное втирание их на выбритые участки кожи белым мышам в дозе 10 г/кг, а кроликам - в дозе 1 г/кг, вызывает гиперемию и небольшое скоропроходящее беспокойство. Аналогичные признаки наблюдали у контрольных животных при обработке их тальком.

2. Влияние креохина, хинмикса, пнрвола, бутокса, требон 10% флоу и пуронов на антитоксическую функцию печени

Опыты по изучению влияния акарицпдов па антитоксическую функцию печени показали, что продолжительность сна подопытных крыс, обработанных креохином в дозе 200,0 н 800,0 мг/кг (терапевтической и 4-х-кратиой терапевтической), не достоверно отличалась от таковой в контроле, что свидетельствует об отсутствии гепатотокспческого действия.

Обработка крыс хннмиксом в терапевтической концентрации (500 мг/кг) приводила к угнетению животных и парезу задних конечностей. После введения гексенала через 1,3 и 5 часов после обработки акарнцидом животные погибали, что свидетельствует о выраженном гепатотокснческом действии.

Снижение дозы хинмикса до 100 мг/кг (пять раз ниже терапевтической концентрации) не приводило к угнетению антитоксической функции печени.

Опыты по изучению влияния пнрвола на антитоксическую функцию печени показали, что продолжительность сна подопытных крыс, обработанных препаратом з дозах 500,0 мг/кг (терапевтической) и 2000,0 мг/кг (4-кратпой терапевтической), недостоверно отличалась от таковой в контроле, что свидетельствует об отсутствии гепатотокспческого действия.

Бутокс в дозе 500,0 мг/кг (5-кратной терапевтической дозе) обладал сильным гепатотоксйчесзаш действием через 1 час после введения препарата. Подопытные животные после введения гексенала не просыпались и погибали.' В терапевтической дозе (100 мг/кг) бутокс не угнетал антитоксическую функцию печени.

Требон 10% флоу d дозе 5000,0 мг/кг (4-кратной терапевтиче-

ской) не обладает гелатотоксичсскнм действием. Продолжительность сна подопытных крыс, обработанных акарицидом в указанной дозе, статистически недостоверно отличалась от таковой в контроле.

Пуроны (I, 11) в Ю-кратно терапевтических дозах (2000, 3000 мг/кг) угнетают антитоксическую функцию печенн крыс через 5 и 24 часа после введения. Введение гексснала в указанные сроки приводило к достоверному увеличению продолжительности сна опытных крыс по сравнению с контрольными (Р<0,05). Пуроны (I, II) в терапевтических дозах (200, 300 мг/кг) не угнетали антитоксическую функцию печени.

3. Влияние креохина, хинмикса, пирвола, требон 10% флоу я пуронов на биохимические показатели сыворотки крови животных

3.1. Влияние креохина на гематологические и биохимические показатели сыворотки крови крыс

Нанесение креохина на 2/3 часть хвоста в течение 21 дня (экспозиция 4 часа) не приводило к изменению со стороны гематологических и биохимических показателей. Определенные колебания количества эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов и нзмег нения активности аланнновой амннотрансферазы (АлАТ), аспара-гиновой амннотрансферазы (АсАТ) и цитохромоксидазы печенн были статистически недостоверны (Р>0,05).

Иная картина наблюдалась при оральном ежедневном введении крысам 1/10 (1 группа) и 1/50 (2 группа) от ЛДзо в течение 2-х месяцев (с двухдневным перерывом в неделю).

Из гематологических показателей необходимо отметить достоверное снижение числа лейкоцитов в 1-й подопытной группе в конце эксперимента (5,0410,47 против б.З±0,5 тыс./мкл в контрольной группе) и тенденцию к повышению относительного числа эозинофилов во 2-й подопытной группе после 2-х недель эксперимента. Число эритроцитов имеет тенденцию к'повышению в 2-ой подопытной группе в конце эксперимента. Гемоглобин достоверно выше в 1-й подопытной группе после 2-х недель эксперимента (156,013,58 против 140,015,56 г/л в контрольной группе) и имеет тенденцию к снижению во 2-й подопытной группе после I месяца эксперимента.

Что касается биохимических показателей, то с целом выявлены существенные изменения ферментативной активности сыворотки крови у животных подопытных групп. Так, животные 1-й подопытной группы в 1-й срок исследования (2 недели) отреагировали достоверный снижением АлАТ в сыворотке крови

(0,445±0,025 против 0,631+0,075 ммоль/л час. в контрольной группе). Во 2-й срок исследования (1 месяц) в данной группе выявлено достоверное повышение АлАТ (0,788±0,054 против 0,480±0,074 в контрольной группе). В конце эксперимента АлАТ еще более выражена и составила 1,12±0,11 ммоль/л час. (1=5,87) (Р<0,05). Во 2-й подопытной группе данный показатель достоверно выше после 1 и 2 месяцев исследований (1,214±0,083 и 0,97+0,17 ммоль/л час., 1=6,6 и 3,16).

Что касается АсАТ, то она достоверно выше в конце эксперимента у животных 1-й подопытной группы (!,38±0,056 против 1,14±0,076 ммоль/л час.), у животных 2-й подопытной группы через 2 недели отмечено достоверное снижение этого показателя, а в конце эксперимента выявлена тенденция к повышению.

В гомогенатах печени отмечена . тенденция к повышению АсАТ у животных 1-й подопытной группы в конце эксперимента (792,85±56,68 против 687,7+13,29 ммоль/л час. а контрольной группе).

Цитохромоксидаза (ЦХО) имеет тенденцию к понижению в печени в 1-й подопытной группе (2,42+0,'257 против 2,99+0,16 мкмоль/г мин. в контрольной группе) и достоверно выше в почках в этой же группе (4,32±0,087 против 3,95±0,08 мкмоль/г мин.). Во 2-й подопытной группе отмечено повышение ЦХО.

Активность холинэстеразы в сыворотке крови без изменений во все сроки исследования.

Анализируя отдельные показатели, необходимо отметить значительное снижение числа лейкоцитов в дозе 1/10 ЛДзо и повышение активности аспарагиновой амннотрансферазы в почках в этой дозе в конце эксперимента, а также повышение активности аланиновой амннотрансферазы сыворотки крови у животных обеих подопытных групп. Эти показатели могут свидетельствовать об усилении окислительных процессов в почках при большой дозе, нарушении внутриклеточной организации ферментов и проницаемости гистогематических барьеров у животных обеих подопытных групп.

Полученные данные по биохимическим п гематологическим показателям после действия креохина на белых крыс свидетельствуют о потенциальной возможности у креохина к метаболизму и выведению из организма. Наблюдаемые изменения у животных обуславливаются диффузией препарата из области поступления до мишеней с одной стороны, и скоростью элиминации вещества и его метаболитов из организма - с другой.

Необходимо отметить, что с увеличением дозы креохина уменьшается детоксицирующал функция печени, о чем можно судить по повышению активности ашшотрансфераз (признаки, характерные для состояния энергодефицита).

Во всяком случае метаболические нарушения хорошо коррелируют с дозой (концентрация) - временными параметрами воздействия химических агентов. Необходимо отметить, что они являются также чувствительными и высокоинформативными показателями действия.на организм различных по своей структуре токсических веществ. Изменения этой системы служат объективными и надежными показателями пороговых доз и концентраций вредного действия химических веществ при разработке различных нормативов в объектах окружающей среды и в первую очередь организма животных.

3.2. Влияние пуронов на биохимические показатели сыворотки крови крыс

ОПЫТЫ С ПУРОНОМ 1. После нанесения препарата на спину крыс в терапевтических (200 мг/кг) и 10-кратно терапевтических (2000 мг/кг) дозах общее состояние крыс было удовлетворительным: явления токсикоза, выпадение шерсти и падеж отсут-,ствовали. На протяжении 29 суток опыта концентрация общего белка, активность щелочной фосфатазы, аланинаминотрансфера-зы (АлАТ) и аспарататаминотраисферазы (АсАТ) колебалась незначительно.

Что касается холинэстеразы, то она достоверно выше в нача-. ле эксперимента, то есть в группах животных через 3,5 Часа и I сутки после введения препарата. Наибольшей активности холинэ-стераза достигала у животных через 3,5 часа после введения 10-кратной терапевтической дозы (13,24+1.37 против 6,1б±0,42 мккат/л в контрольной группе). Через сутки она начинает снижаться, но остается еще достоверно высокой по сравнению с контролем (8,92±0,003 против б,!б±0,42 мккат/л) (Р<0,05).

В группах у животных через 5 и 14 суток после нанесения пестицида в 10-кратной терапевтической дозе происходило достоверное снижение активности холинэстеразы (соответственно 4,16±0,3 и 3,57±0,23 против б.16±0.42 мккат/л в контрольной группе). В конце эксперимента, то есть через 29 суток после введения препарата, уровень активности холинэстеразы не достоверно отличался от контрольного (5,64±0,59 против 6,16±0,42 мккат/л).

Снижение дозы препарата до терапевтической повлияло на активность холинэстеразы.

В группах у животных через 3,5 часа и Г сутки после введения акарицида, происходило достоверное повышение активности фермента. Снижение активности фермента в группах через 5 и 14 дней после введения терапевтической дозы было статистически недостоверно.

Что касается содержания мочевины, азота мочевины и остаточного азота, они достоверно снижаются на 5-е сутки после введения 10-кратной терапевтической дозы, а в остальных группах не достоверно отличаются от контроля (Р>0,05).

Повышение уровня глюкозы практически во всех группах связано, по-видимому, с стрессовым состоянием, которое возникало у животных перед забоем при взятии крови.

ОПЫТЫ С ЛУРОНОМ II. Опыты с указанным препаратом проводили аналогично.с предыдущим. После нанесения препарата на спину крыс в терапевтических (300 мг/кг) и 10-кратно терапевтических (3000 мг/кг) дозах общее состояние крыс было удовлетворительным: явления токсикоза, выпадение шерсти и падеж отсутствовали. На протяжении 29 суток опыта концентрация общего белка, активность щелочной фосфатазы колебались незначительно.

Что касается АлАТ, то она достоверно выше после обработки пестицидом в 10-кратной терапевтической дозе через 5 суток (2,34±0,23 против 1,52 + 0,19 ммоль/л в контрольной группе) (Р<0,05).

Активность АсАТ наиболее высокой оказалась через 3,5 часа и 14 суток после обработки пестицидом в 10-кратной терапевтической дозе (2,99±0,16 и 3,03±0,09 против 2,17±0,25) (Р<0*05).

Наибольшей активности холниэстераза достигала у животных через 3,5 часа после обработки пестицидом в 10-кратной терапевтической дозе (11,9± 1,69 против 6,16 + 0,42 мккат/л) (Р<0,05). Через сутки активность холинэстеразы снизилась до уровня контрольной группы (6,83+0,82 против 6,1б±0,42 мккат/л) (Р>0,05). Через 5 суток достоверно снизилась ниже уровня контрольной группы (4,!4±0,38 против 6,1б±0,42 мккат/л) (Р<0,05). На 14 сутки активность холинэстеразы поднималась до уровня контрольной группы (5,94+0,71 против 6,16+0,42 мккат/л) (Р>0,05). В конце эксперимента, то есть через 29 суток, происходило достоверное снижение активности холинэстеразы по сравнению с контролем (4,6±0,43 против 6,16+0,42 мккат/л) (Р<0,05).

После обработки препаратом з терапевтической дозе активность холинэстеразы наиболее высокой была через 3,5 часа (7,64 + 0,33 против 6,16 + 0,42 мккат/л). В остальных группах (через 1, 5, 14 и 29 суток после введения) активность холинэстеразы была низкой, по имела достоверно незначимый характер (Р>0,05).

Что касается содержания -мочевины и азота мочевины, они достоверно снижаются на 5 и 29 сутки после обработки препаратом в 10-кратной терапевтической дозе (Р<0,05).

Повышение уровня глюкозы практически во всех группах связано, по-видимому, с стрессовым состоянием, которое возникало у животных перед забоем при взятии крови.

Анализируя отдельные показатели, необходимо отметить значительное повышение активности холинэстеразы, АсАТ после обработки пуронами в 10-кратной терапевтической дозе в начале эксперимента и понижение их активности в конце эксперимента, а также понижение мочевины, азота мочевины и остаточного азота. Эти показатели могут свидетельствовать об усилении адаптационных процессов в организме животных в начале опыта, в дальнейшем происходит усиление окислительных процессов в почках и нарушение внутриклеточной организации ферментов.

3.3. Влияние креохина. хинмикса, пирвола и требон 10% флоу на биохимические показатели сыворотки крови овец

После купания в эмульсин креохина 0,05 и 0.005%-ной, хинмикса 0,05%-ной, пирвола 0,01 и 0,1%-ной концентрациях общее состояние овец было удовлетворительным: аппетит и жвачка сохранены, явления токсикоза, выпадение шерсти и падеж отсутствовали. Обработка овец креохином, хинмиксом и пирволом практически не оказала, воздействия на биохимический статус крови. На протяжение 15 суток опыта концентрация белка, активность лактатдегидрогеназы, малататдегидрогеназы, щелочной фосфата-, зы колебались незначительно. Увеличение содержания глюкозы через 24 часа после обработки креохином и хннмнксом было статистически недостоверным. Некоторое снижение уровня аскорбиновой кислоты в это время связано, по-видимому, с гипоксией, которая развивалась у овец после обработки препаратами.

Уменьшение содержания глюкозы и аскорбиновой кислоты через час после обработки пирволом является следствием стресса и гипоксии, которым подвергаются животные в процессе купки. Через 24 часа отмечается нормализация этих показателен.

После купания в эмульсин требон 10% флоу 1,25%-ной концентрации общее состояние овец было удовлетворительным, явления токсикоза и падеж отсутствовали. На протяжении 10 суток опыта содержание количества эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов и скорость оседания эритроцитов оставались неизменными. Концентрация белка, активность лактатдегидрогеназы. малатат-дегидрогеназБГ," аланинаминотрансферазы и глюкозы колебались незначительно. Постоянный уровень активности аланинаминотрансферазы свидетельствует о том, что препарат требон 10% флоу не оказывает токсического действия на печень.

4. Изучение эмбриотокснческОй и тератогенной активности креохина, хинмнкса, пнрвола, требон 10% флоу,бутокса и пуронов

В результате исследований установлено, что многократное купание крыс в эмульсиях креохнна, пнрвола, требон 10% флоу и бутокса с концентрациями соответственно 0,02%, Г/о, 2,5%, 0,2% с 1-го по 6-й дни беременности не вызывало у крыс выраженных токсических явлений. При вскрытии крыс на 20-й день беременности установили, что животные, обработанные выше указанными препаратами, по числу желтых тел в яичнике, числу мест имплантаций и резорбций в матке, а также по числу живых и мертвых плодов существенно не отличались от контрольных животных. Показатели предимплантацнонной, постимплантацнонной и общей эмбриональной смертности в подопытных группах, обработанных креохином, пнрволом, требон 10% флоу и бутоксом не отличались от контрольных (Р>0,05).

Средняя преднмплантационная смертность при обработке креохином, пнрволом, требон 10% флоу и бутоксом равнялась соответственно 10,9611,19; 9,98±0,5; 9,66±!,26;. 10,74±0,895%; пост-имплантацнонная - 1.9Ш.23; 2,06±1,4; 2,52±1,32; 1,94±1,31%; общая эмбриональная смертность - 12,79± 1,30; 11,81 ±1,46; 12,03+1.20; 12,51 ±1,24%; в контроле эти показатели соответственно составляли - 12.2±1,83; 2.08±1,42; 14,07±1,99%.

Различия в массе плодов, их длине не достоверны (Р>0,05). При макроскопическом наружном осмотре плодов в подопытных и контрольных группах изменений не обнаружено.

При исследованиях внутренних органов и костной системы плодов дефектов развития не выявлено.

После купки хинмиксом в двукратно терапевтической дозе (концентрации) в течение 2-х минут у беременных самок (1-й и 2-й день беременности) вначале появились (через 10-15 минут) возбуждение, потом зачесы в области носа и морды, у некоторых животных - параличи задних конечностей (у 25-30% животных), которые были заметны через сутки.

После второго купания (на следующий день) через 5-10 минут появилось угнетенное состояние н животные забивались в угол. Две из подопытных крыс погибли. Учитывая такое действие ака-риннда на крыс, и их падеж, дальнейшую обработку препаратом прекратили.

Вскрытие животных на 20-й день беременности показало, что в яичнике имеются желтые тела, но в матке не обнаружено ни мест имплантации, ни живых эмбрионов. Этот факт дал нам основание считать, что зародыши погибали до имплантации. Такое явление наблюдали у всех подопытных животных.

Изучение эмбрнотоксического и тератогенного действия пирвола, требон 10% флоу и бутокса с 6-го по 16-й день беременности проводили также путем купания в эмульсиях с концентрацией, двукратно превышающей терапевтическую, креохина - 4-х кратно превышающей терапевтическую, хинмикса - терапевтической концентрации.

Обработка креохином, пирволом, требон 10% флоу и буток-сом с 6-го по 16-й день беременности не вызывало у крыс выраженных токсических явлений. При вскрытии крыс на 20-й день беременности установили, что животные, получившие вышеуказанные препараты, по числу желтых тел в яичнике, имплантаций и резорбций в матке, а также по количеству живых и мертвых плодов существенно не отличались от контрольных животных. Показатели предимплантационной, постнмплантационной и общей эмбриональной смертности в подопытных группах, обработанных креохином, пирволом, требон 10% флоу и бутоксом в вышеуказанных концентрациях и выбранном режиме введения не отличались от контрольных (Р>0,05).

Средняя предимплантацнонная смертность при купке в эмульсиях креохина, пирвола, требон 10% флоу и бутокса с 6-го по 16-й день беременности равнялась соответственно 11.,06±1,19; 8,89±1,04; 10,04±1,46; 10,96±1,6%; постимплантациониая -1,77±1,19; 1,91±1,28; 2,36±1,58; 1,52±1,02%; общая - 12,69±!,2б; 10,72±1,53; 12,29±1,28; 12,42±1,2%; в контроле эти показатели соответственно были следующими 12,2±1,83; 2,08±1,42 и 14,07± 1,99%.

Различия в массе плодов, их длине не достоверны (Р>0,05). При макроскопическом наружном осмотре плодов в подопытных и контрольных группах изменений не обнаружено.

При исследовании внутренних органов и костной системы плодов дефектов развития не выявлено.

Купание крыс с эмульсиях креохина, пириола, требоп 10% флоу и бутокса (соответственно с концентрациями 0,02; 1; 2,5 и 0,2%) с 16-го по 19-й дни беременности не вызывало у крыс выраженных токсических явлений.

При вскрытии крыс на 20-н день беременности установили, что животные, обработанные вышеуказанными препаратами, по числу желтых тел в яичнике, числу мест имплантаций и резорбции в матке, а также по количеству живых и мертвых плодов существенно не отличались от контрольных животных.

Показатели предимплантационной, постнмплантационной и общей эмбриональной смертности в подопытных группах, обработанных креохином, пирволом, требон 10% флоу и бутоксом, не отличались от контрольных (Р>0,05). Средняя величина показателей предимплантационной смертности при обработке креохином,

пирволом, требон 10% флоу и бутоксом составляла соответстпен-!!0 11,31± 1,47; 9,7б±0,32 10,46±0,69; 9,24±[,21; постимплантациои-пой - 1,71±1,16; 1,23±1,23 2,34±1,55; 2,3б±!,53; общей эмбриональной смертности - 12,88± 1,47; 10,87±1,18; 12,58±1,41; 11,49±1,16; в контроле эти показатели соответственно равны 12,2± 1,83; 2,08± 1,42; 14,07±1,99%.

Различия в массе плодов, их длине не достоверны (Р>0,05). При исследовании внутренних органов и костной системы плодов дефектов развития не выявлено. При подсчете количества костей всех отделов скелета у эмбрионов опытных групп не отмечено достоверных различий по сравнению с контролем (Р>0,05). Все это свидетельствует о том, что испытуемые препараты не обладают эмбриогоксическим и тератогенным действием.

Поскольку, после действия хинмикса на первый и второй день беременности в двукратнотерапевтической концентрации у беременных крыс появились токсические явления и происходила гибель зародышей, мы для изучения эмбриотокснческого и тератогенного действия хинмикса в период органогенеза (6-16 дни беременности) снизили дозу до терапевтической концентрации.

После двукратного купания (6, 7 дни беременности) в экспозиции 2 минуты у животных наблюдалось через 5-10 минут сильное возбуждение, агрессивность, некоторые животные копали подстилку. Через 2-3 часа после второго купания (на 2-й день) возбуждение сменялось угнетением. Учитывая такую реакцию на крыс, дальнейшее введение препарата прекратили.

Вскрытие животных на 20-и день беременности показало, что в яичнике имеются желтые тела, но в матке только у двух животных из опытной группы (10 голов) обнаружены места имплантации и живые эмбрионы.

Изучение эмбрионального материала показало, что двукратное купание крыс в эмульсин хинмикса терапевтической концентрации на 6-й, 7-й день беременности вызывает увеличение пре-димплантационной смертности до 83,54± 10,98%, постимпланта-цнонной до 4,55±4,61%, общей эмбриональной смертности до 87,39±8.79%.

Изучение краниокаудальных размеров и массы эмбрионов показало, что наблюдается задержка роста у плодов по сравнению с контролем. Так. среднее значение краниокаудального размера и массы плодов в группе крыс после действия хинмиксом (купка) в терапевтической концентрации составило соответственно 26,0±0.94 мм и 2157,14+54,9 мг,> в то время как в контроле 31,7±0.15 мм и 2333,8±!0,3 мг. Различия были статистически достоверны (Р<0.05).

Следовательно, хинмикс в терапевтической концентрации

прн двукратной купке на 6 и 7-й день беременности обладает эм-бриотоксическим действием, вызывая в основном предимпланта-цнонную гибель зародышей.

В связи с тем, что хинмикс на 1-2-н и 6-7-й дни беременности при терапевтической и двукратнотерапевтической концентрациях прн двухминутной купке вызвал эмбрнотокснческнй эффект, мы исследовали его действие на эмбриогенез крыс на 15-й и 17-й день беременности. При этом эмульсию хннмнкса готовили в терапевтической концентрации, время купки сократили до одной минуты.

После однократной купки беременных крыс на 15-й и 17-й день беременности у животных возникало угнетение, шаткость. Несмотря на токсические явления абортов, выкидышей у животных не наблюдали. При вскрытии крыс на 20-й день беременности установили, что животные, получившие хинмнкс, по числу желтых тел в яичнике, мест имплантаций и резорбций в матке, а также по количеству живых и мертвых плодов существенно не отличались от контрольных животных. Показатели преднмплантаци-онной, постнмплантационной и общей эмбриональной смертности в подопытных группах не отличались от контрольных (Р>0,05).

Средняя предимплантационная смертность при введении хинмикса на 15 и 17-й дни беременности (купание в эмульсии хинмикса терапевтической концентрации в течение 1 минуты) соответственно составляла 9,32±0,43; 9,32±0,41; постимплантацион-ная - 2,49±1,61; 2,18±1,43; общая - 11,61 ±1,18; 11,31 ±1,08%; в контроле эти показатели »соответственно равнялись - 12,2±1,83; 2,08± 1,42; 14,07±1,99%.

Различия в массе плодов, их длине недостоверны (Р>0,05). При макроскопическом наружном осмотре плодов в подопытных и контрольной группах изменений не обнаруживали.

При исследовании "внутренних органов и костной системы плодов дефектов развития не выявлено. Соотношение числа самцов и самок в помете от самок, обработанных хинмиксом в вышеуказанные дни и в вышеуказанной дозе, не отличались от контроля (Р>0,05).

Все это свидетельствует о том, что однократное купание беременных крыс на 15-й и 17-й день беременности в эмульсии хинмикса терапевтической концентрации (в течение 1 минуты) не вызывает у них эмбриотокснческого и тератогенного действия.

Изучение эмбриотокснческого и тератогенного действия пу-рона I и пурона II проводили путем нанесения препаратов на кожу спины в дозах, двукратно превышающих лечебную. Многократная обработка крыс препаратами с 1-го по 6-й, с 6-го по 16-й и с 16-го по 19-й дни беременности не вызывала у животных выраженных токсических явлений.

При вскрытии крыс на 20-й день беременности установили,

что животные, обработанные вышеуказанными препаратами, по ЧИСЛУ ж елтых тел а яичнике, мест имплантаций и резорбций в матке, а также по количеству живых и мертвых плодов существенно не отличались от контрольных. Показатели предим-плантационной, постимплантационнон и общей эмбриональной смертности в подопытных группах, обработанных пуроном I и пуроном II, не отличались от контрольных (Р>0,05). Средняя пре-димплантацнонная смертность при обработке препаратами с 1 по б, с б по 16 и с 16 по 19 дни беременности составляла соответственно: пурон I - 6,47±1,16; б,45±!,04; 9,67±0,68%; пурон II -3,34±0,47; 8,21±0,46; 8,81±!,44%; постнмплантационная: пурон I -2,31 ±1,18: 2,1±1,08; 2,13±1,П%; пурон И - 2,13±1,13; 2,32±1,18; 2,21±1,18; 2,21±1,94% и общая: пурон I - 8,бб±1,31; 8,45±1,19; 10,64±0,99%; пурон II - 10,35±0,98; 10,36±0,97; 10,91± 1,25%; в контроле эти показатели были соответственно следующими 7,68±1,07; 3,78±1,94; П,8±2,02%.

Обработка препаратами не приводила к достоверному снижению массы плодов, их длнны по сравнению с контролем (Р>0,05).

При исследовании внутренних органов и костной системы плодов дефектов развития не выявлено.

Вскрытие животных, получивших цнклофосфан в один из дней (13) беременности, показало, что в яичнике имеются желтые тела, в матке - плацента с остатками мертвой ткани, причем размеры плаценты значительно меньше таковых у контрольных животных того же срока развития. Эмбрионы у этих животных отсутствовали. Эти явления наблюдали у 10% животных. У остальных крыс этой группы эмбрионы были с различными внешними аномалиями. Недоразвитие черепной коробки - 83,3%, кровоизлияния в области поясницы и спины - 36,4%, искривление задних конечностей 25,8%, недоразвитие позвонков, ребер - 88,5%.

Изучение эмбрионального материала показало, что введение цнклофосфана крысам а дозе 30 мг/кг массы тела в один из дней беременности (13) вызывает увеличение постимплантационнон смертности до 55,98±7,7б% и общей эмбриональной смертности до 61,34±6,33%, а контроле эти показатели составили соответственно 2,08±1,42; 14,07±1,99%.

Изучение краниокаудальиых размеров показало, что наблюдается задержка роста у плодов. Так, среднее значение кранио-каудалъного размера плодов в группах крыс, получивших цнклофосфан в 13 день беременности а дозе 30 мг/кг (подкожно), не превышало 21,71±0,27, в то время как а контроле - 31,7+0,15 мм (Р<0,05).

Исследование внутренних органов у плодов показало, что сердце, легкие, печень и другие органы недоразвиты по сравнению с плодами контрольной группы.

Следовательно, циклофосфан в дозе 30 мг/кг при введении самкам белых крыс обладает эмбриотоксическим и тератогенным действием.

Представленный материал свидетельствует о том, что при купонном применении креохина, пнрвола, требон 10% флоу, бу-токса и при нанесении на кожу спины пуронов эмбриотокснческо-го и тератогенного действия не выявлено. Хинмикс вызывает гибель зародышей до плацентации. После формирования плаценты возникает плацентарный барьер. И, несмотря на возникновение токсических явлении у беременных самок, эмбриотоксического и тератогенного эффекта не наблюдается.

5. Влияние препаратов на постнатальное развитие крыс

В результате исследований установлено, что роды у самок, обработанных акарицнднымн препаратами с пнретроидной основой (креохин, пирвол, бутокс и требон 10% флоу) в различные периоды беременности наступали, рак правило, на 23-и день беременности. В тот же день наступали роды И у контрольных животных. Численность помета у самок' была такой же как и в контроле. Масса тела и длина подопытных крысят мало отличались от контроля на протяжении"всего периода изучения. Как в подопытных так и в контрольных группах шерстный покров у крысят появлялся на 3^4 день, ушные раковины отлипали на 4-й день, резцы прорезывались на 9, открывание глаз происходило на 16-17 день.

При исследовании эмоционально-двигательного поседения, способности тонкой координации методом переворачивания в воздухе, с последующим вставанием на четыре лапы, различии с контрольными крысятами не установлено.

Постнатальная гибель крысят наблюдалась в единичных случаях и была сравнима с контролем. Проведенные исследования свидетельствует об отсутствии отрицательного влияния креохина, пирвола, бутокса и требон 10% флоу на постнатальное развитие крысят.

6. Влияние креохина, пирвола, хинмикса, требон 10% флоу и бутокса на эмбриогенез овец и на постнатальное развитие ягнят

Изучение эмбриотоксического и тератогенного действия креохина, хинмикса, пирвола, требон 10% флоу и бутокса на овцах проводили путем опрыскивания эмульсией акарицндов терапевти-

ческой концентрации.

Результаты исследования показали, что двукратная обработка овец препаратами в 17 н 29, 35 и 45, 90 и 120 дни суягности не вызывает у овцематок выраженных токсических явлений. В группе, обработанной бутоксом на 17 и 29 дни суягности, и в контрольной группе по одной овцематки абортировали. Аборты были травматического характера.

В результате исследования установили, что овцематки, получившие вышеуказанные препараты, по продолжительности суягности, по числу абортированных и несуягных овцематок существенно не отличались от контрольных (Р>0,05). Средняя продолжительность суягности в днях после обработки ове?ц акарици-дами в 17 и 29, 35 и 45, 90 и 120 дни суягности равнялось соответственно у креохина - 149,6±0,16; 149,510',17; 149,7±0,15; у хинмнк-са - 149,7±0,15; 149,810,16; tSO.IiO.3l; у пнрвола -' 149,7±0,17; 149,510,19; 149,9±0,23; у требон 10% флоу-149,510,19; 149,710,17; 149,810,15; у бутокса - 146.213,47; 149,810,13; 149.610.16; в контроле этот показатель составил • 147,612,04.

С целью изучения влияния креохина, хннмикса, пнрвола, требон 10% флоу н бутокса на постнатальное развитие осуществляли наблюдения за новорожденными ягнятами. Ягнята рождались -.хивьти, без внешних аномалий.

Различия во времени появления сосательного рефлекса у ягнят от овцематок опытных и контрольных групп не достоверны (Р>0,05).

При изменении массы ягнят и краниокаудального размера в 2 и 4-месячном возрасте достоверных отличий с контролем не выявлено.

Проведенные исследования свидетельствуют об отсутствии отрицательного влияния креохина, хинмнкса, пирвола, требон 10% флоу н бутокса на эмбриогенез и постнатальное развитие ягнят.

7. Влияние креохина. хинмикса, пнрвола, бутокса и требон 10% флоу на некоторые показатели естественной резистентности овец

Нарушение неспецифических защитных механизмов, которые могут возникнуть под действием физических, химических и биологических факторов, может поалечь за собой и расстройства клеточного взаимодействия, необходимого для индукции специфического иммунного ответа.

Для изучения влияния препаратов на уровень естественный резистентности мы выбрали два показателя; бактерицидную и ли-зоцимную активность сыворотки крови.

После купания в эмульсиях креохина, хинмикса, пирвола, требон 10% флоу и бутокса терапевтической и пятикратной терапевтической концентрациях общее состояние овец было удовлетворительным, явления токсикоза отсутствовали.

Обработка овец акарицидами практически не оказывала влияния на показатели естественной резистентности. На протяжении 30 суток опыта бактерицидная активность сыворотки крови (БАСК) и активность лнзоцнма колебались незначительно (Р>0,05).

Средние показатели БАСК в группах до обработки и через 5, 15, 30 суток после воздействия акарицидами пятикратной терапевтической концентрации равнялись соответственно у креохина -88,06+0,94; 89,36±1,82; 86,76+1.61; 87,22+1,39%; у хинмикса -88,8± 1,0; 90,78± 1.31; 89,7±1,86; 89,48+0,95%; у пнрвола - 88,8±1,0; 88,6512,61; 87,49± 1,36; 87,22±0,75%; у требон 10% флоу -87,31 ±1,38; 89,36±1,45; 88,96±1,51; 87,97±1,9%; у бутокса -88,06±0,94; 88,65±1,42; 89,710,93; 87,97±0,95% угнетения роста.

Средние показатели лизоцимной активности сыворотки крови в группах до обработки и через 5, 15, 30 суток после воздействия препаратами пятикратной терапевтической концентрации равнялись соответственно у креохина - 26,0±1,34; 25,Sil,01; 26,83+0,65; 26,6710,76%; у хинмикса - 24,67+0,72; 25,17+0,79; 25,0+1,0; 25,83±1,2%; у пирвола - 23,67+1,67; 24,831:1.63; 24,0± 1,21; 24,83+1,19%; у требон 10% флоу - 28,5± 1,09; 29,33+0,56; 28,6710,99; 28,510,67%;, у бутокса - 28,83+0,31; 29,5+0,43; 30,0±0,52; 29,33±0,33% лизиса.

Проведенные нами исследования указывают на нерезкие колебания лнзоцнма и бактерицидной активности сыворотки крови у животных после их обработки препаратами. По всей вероятности, естественная сопротивляемость организма, будучи одним из объектов гомеостатнческой функции организма, под действием используемых пестицидов находится в состоянии адаптации, не переходя в компенсаторную фазу.

8. Остаточные количества щшерметршт, перыстрпна и дельтаметрнна в органах и тканях овец, обработанных креохипом, гшрволом и бутоксом

Через 5 суток после обработки овец креохнном рабочей эмульсии наибольшее количество цииермстрнла наблю.талп по внутреннем жире, печена, ночках, сердце - 109+11,4;. 89±9,1; 72±7,0 и 62+5,9 мкг/кг соответственно. На 10-е сутки цнисрмстрин находили лишь ко внутреннем.жире, в других органах оп у/.;е отсутствовал.

При изучении содержания цнперметрнна в молоке оззц, не-

купаиных в рабочей эмульсин креохннл, наличие циперметрина не установлено. Данный пнретроид также не обнаружен в органах и тканях ягнят, питавшихся молоком в течение 7 дней от указанных овцематок.

Полученные данные показывают, что наибольшее количество перметрнна находится в мышечной ткани, где он задерживается на более длительное время, чем в других органах и тканях.

У контрольных животных, убитых до обработки, перметрин не был обнаружен. Аналогичные результаты получены и при исследовании проб от овец, убитых через 15 дней после обработки.

При изучении содержания перметрина в молоке овец, искупанных в рекомендуемой концентрации пнрвола, наличие пнрет-роида не установлено. Перметрин также не обнаружен в органах и тканях ягнят, питавшихся молоком в течение 7 дней от указанных овцематок.

Проведенные исследования показали, что в пробах от овец после купания в 0,05%-ной водной эмульсии пнрвола через 3 суток-.наиболее высокое содержание перметрина отмечается в мышце, сердце, печени, почках, составляя соответственно 51,215,31; 48,413,86; 44,8±5,1; 42,8±3,91 мкг/кг, а наиболее низкое - в селезенке и легких - 10,2±5,31; 9,610,9 мкг/кг. На 10-ые сутки перметрин находили лишь в мышце, в других органах он уже отсутствовал.

Проведенные исследования показали, что в пробах от овец после купания в 0,005%-ной водной эмульсии бутокса через 7 суток наиболее высокое содержание дельтаметрина отмечается в мышце, почках, печени, селезенке - 300,6131,1; 44,2±4,3; 42,4±4,1 и 23,4±2,1 мкг/кг, соответственно. На 10-е сутки после купки распределение дельтаметрина по органам происходит следующим образом: почки - 20,4±|,8 мкг/г, печень - 19,2±1,5 мкг/г, мышца -14,2±1,1 мкг/кг. Полная элиминация препарата из органов и тканей происходит через 35 дней.

9. Изучение инсекто-акарицидных свойств порошков на основе перметрина, циперметрина и дельтаметрина

В результате исследований установлено, что при саркоптозе собак лечебный эффект достигается при опудриванни порошков перметрнна в дозе 5-6 г/кг, циперметрина в дозе 3-4 г/кг, дельтаметрина - в дозе 1-2 г/кг массы тела.

При нотоэдрозе кошек лечебный эффект достигается при двукратном применении с интервалом 7-10 дней порошка с пер-метрином в дозе 5-6 г, с циперметрнном в дозе 3-4 г, с дельтамет-рнном в дозе 1-2 г на 2-5 кг массы животного.

У телят с признаками гематопиноза, обработанных порош-

ком в дозе 1 г/м2 исчезновения вшей происходит через 1-2 дня.

При зудневой чесотке лечебный эффект достигается при 3-х кратном (интервал 3 дня) втирании порошков в дозе 2 г/м2.

Опыт показал, что при поражении сельскохозяйственных животных вшами, наиболее оптимальной формой обработки является опудривание, а при поражении крупного рогатого скота коже-едной чесоткой предпочтительной является втирание порошков в места инвазии.

ВЫВОДЫ

1. Величина ЛДзо при внутрижелудочном введении для белых крыс у креохина составляет 3381 (2633+4532); ЛДзо хинмикса - 715 (501,8*1019); для пирвола - 2060 (1140*37008); для бутокса - 182 (176,4*187,8); для требон 10% флоу • более 45000; для пуроиа 1 -2180 (2011,0*2363); для пурона И - 3340 (2830,5+3941,2) мг/кг, что позволяет отнести креохин, пирвол, хинмикс, бутокс, пурон 1 и пурон II к третьему классу опасности, а требон 10% флоу к четвертому классу опасности (согласно ГОСТ 12.1.007.76).

Величина ЛД50 для белых мышей при виутрижелудочиом введении инсектицидного порошка с перметрином составляет 220, с циперметрином - 200, дельтаметрином - 160 мг/кг, что позволяет отнести все эти препараты к третьему классу опасности (согласно ГОСТ 12.1.007.76). .

2. Патоморфологические «змемеиия при остром отравлении крыс акарицидными препаратами с пиретроидной основой характеризуются выраженными гемодннамичсскими нарушениями ро внутренних органах и головном мозге, точечными кровоизлияниями на эпикарде и эндокарде, дегенеративными .изменениями в печени и почках, катаральным воспаленней слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта.

3. Креохин, пирвол, требон 10% флоу о тераиейтнческон п 4-х кратной терапевтической дозах (концентрациях), а пуроны - в терапевтических дозах, не оказывают гспатотокснческого действия. Пуроны в 10-и кратной терапевтической, бутокс в 5-и кратной, хинмикс в терапевтической дозах (концентрациях) с значительной степени угнетают антитоксическую функцию печени у лабораторных крыс.

4. Изменения активности ферментов, характер и степень которых хорошо коррелирует с дозо(концентрация)-врсмснными параметрами воздействия препаративных форм пнретроидов и пи-ретронда непиретрондного строения, являются чувствительными и информативными показателями действия на организм различных по своей структуре химических соединений. Изменения этой

системы служат объективными и надежными показателями пороговых доз и концентрации вредного действия пестицидов при установлении их лечебных доз и гигиенических регламентов в различных объектах внешней среды.

5. Нанесение креохина на 2/3 части хвоста белых крыс в течение 21 дня (экспозиция 4 часа) не влияет на гематологические показатели, не изменяет активности аланиновой амннотрансфера-зы, аспарагиновой амннотрансферазы, цитохромоксидазы сыворотки крови и гомогенатов печени.

6. Действие креохина в подостром опыте носит дозозависи-мый характер, в частности, при оральном ежедневном введении крысам в дозе 1/10 от ЛД?о происходит:

а) через 2 недели достоверное повышение гемоглобина крови и снижение активности аланиновой амннотрансферазы;

б) через 2 месяца достоверное снижение числа лейкоцитов крови и повышение активности аспарагиновой амннотрансферазы я сыворотке крови и а почках.

Повышение активности аланиновой амннотрансферазы сыворотки крови и аспарагиновой амннотрансферазы в почках в конце эксперимента в подостром опыте с креохином, свидетельствует об усилении окислительных процессов а почках прн большой дозе, а тнкяе нарушении внутриклеточной организации ферментов и проницаемости гнстогематологических барьеров у белых крыс.

7. Пуроп 1 и пурон II в терапевтических дозах не снижают у подопытный крыс количество общего белка, мочевины, азота мочевины. остаточного азота, не изменяют активности щелочной фосфатазы, алашш- и аспарататаминотрансферазы. Введение пу-роиа I а терапевтической дозе приводит к повышению холинэсте-разы » течение суток, а пуроиа И - в течение 3,5 часов.

3. При введении пуроиа 1 и пуроиа И крысам в 10-кратной терапевтической дозе происходит:

а) через 3,5 часа достоверное повышение в сыворотке крови активности холинэстеразы и аспарататаминотрансферазы;

б) через 5 суток достоверное снижение в сыворотке крови хо-лииэстеразы, мочевины, азота мочевина и остаточного азота, которое длится у «урона II а течение 29 суток;

а) через 14 суток достоверное снижение активности холинэ-стсразы (пурон I) и аспарататаминотрансферазы (пурон II).

9. Крсохнн. пирвол в терапевтической и 10-и кратной терапевтической, яинмикс и требон !<)% флоу в терапевтической концентрации не снижают у подопытных овец в сыворотке кровн количество общего белка, глюкозы и аскорбиновой кислоты, не изменяют активности щелочной фосфатазы, ЛДГ и МДГ.

10. Пирвол. бутокс, требон 10% флоу, пурон I и пурон II в 2-

х кратной терапевтической, а креохин в 4-х кратной терапевтической концентрациях при многократной обработке беременных крыс с 1 но 6-й, с 6 но 16-й и с 16 по 19-й день не увеличивают эмбриональной смертности, не вызывают врожденных пороков развития и не оказывают отрицательного влияния на постнаталь-ное развитие крысят. Хинмикс вызывает гибель зародышей до плацентацни. После формирования плаценты не оказывает эм-бриотоксического и тератогенного действия.

11. Двукратная обработка овцематок эмульсией креохнна, пнрвола, хинмнкса, бутокса и требон 10% флоу терапевтической концентрации в 17 и 29, 35 и 45, а также 90 и 120 дни суягности не вызывает эмбриональную смертность и врожденных пороков развития, не оказывает отрицательного влияния на постнатальное развитие ягнят.

Адекватная оценка беременности белых крыс и овец как функциональной нагрузки является одной из возможностей учета адаптационных реакций организма на воздействие препаративных форм пиретроидов и пнретроида непиретроидного строения.

Учитывая существенные различия в видовой чувствительности животных к одному и тому же эмбриотропному агенту, при изучении эмбриотоксического и тератогенного действия ветеринарных препаратов, для полной экстраполяции необходимо проводить опыты на тех видах животных, для которых рекомендовано применение данного препарата.

12. Креохин, пирвол, хинмикс, бутокс к требон 10% флоу в терапевтической и 5-и кратной терапевтической концентрациях не снижают бактерицидную активность сыворотки крови.

Креохин, пирвол, хинмикс, бутокс и требон 10% флоу в терапевтической и 5-и кратной терапевтической концентрациях не влияют на лизоцимную активность сыворотки крови.

13. Спустя 15 дней после обработки циперметрин (АДВ креохнна) и перметрин (АДВ пирвола) в органах и тканях овец не обнаруживаются, мясо пригодно к выпуску и реализации на пищевые цели. С молоком перметрин и циперметрин на выделяются. Полная элиминация дельтаметрина (АДВ бутокса) из органов и тканей происходит через 35 дней.

14. Порошки на основе перметрина, циперметрина и дельтаметрина обладают высокой инсекто-акарицидной активностью, стабильностью и удобством применения.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Технические условия на креохин ТУ 10-07 (Утверждено де партаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ 18.04.95г.).

2. Технические условия на пирвол ТУ 6-00-5763 450:132-91 (Утверждено ГУВ 5.08.91г.).

3. Временное наставление по применению пирвола для борьбы с псороптозом овец (Утверждено ГУВ 5.08.91г.).

4. Технические условия на пиретронды (перметрин, ципер-метрнн, дельтаметрнн) ТУ 10-07-049-92 (Утверждено ГУВ 7.08.92 г.).

5. Временное наставление по применению перметрина, ци-перметрнна (хинмикса) и дельтаметрнна (дециса и бутокса) в форме ннсекто-акарнцндного порошка, №22-4/77 (Утверждено ГУВ 7.08.92г.) /

6. Наставление по применению креохина при йсороптозе овец 13-4-2/275 (Утверждено департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ 18.04.95г.). I

СПИСОК РАБОТ. ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Рахматуллин Э.К. Токсикологическая оценка креохина. // Ветеринария, 1994 - №6 - С.43-45.

2. Рахматуллин Э.К., Тимофеев Б.А., Степанова Л.П. Токсикологическая характеристика препарата пирвол. I Сб. науч. тр. ВГНКИ. М.. 1995, том №58 - C.3I-40.

3. Рахматуллин Э.К. Динамика некоторых показателей естественной резистентности у овец после действия препарата "Креохин" /Материалы 7-й межгосударственный межвузовской научно-практической конференции "Новые фармакологические средства в ветеринарии". • Санкт-Петербург, 1995, С.54-55.

4. Рахматуллин Э.К., Бондзренко В.О., Кнрюткии Г.В. Инсекто-акарицидная активность требон 10% флоу / Материалы 7-й межгосударственный межвузовской научно-практической конференции "Новые фармакологические средства в ветеринарии".-Санкт-Петербург, 1995, С.16-17.

5. Рахматуллин Э.К., Бондаренко В.О., Кирюткин Г.В., Степанова Л.П. Токсикологическая характеристика препарата требон 10%-ный флоу II Ветеринария, 1996. - №1 - С.47-49.

6. Рахматуллин Э.К. Влияние бутокса на окостенение скелета плодов на разных стадиях эмбриогенеза крыс II Деп. НИИТЭИ 14.02.96. teil ВС-96 (5 стр.).

7. Рахматуллин Э.К. Влияние бутокса на постнатальное развитие крыс //Деп. НИИТЭИ 06.03.96. № 30 ВС-96 (5 стр.).

8. Рахматуллин Э.К. Влияние препарата креохин на эмбриогенез овец //Деп. НИИТЭИ 06.03.96. №31 ВС-96 (9 стр.)

9. Рахматуллин Э.К. Токсикологическая характеристика бутокса

II Вестник Российской академии с/х наук, 1996. - МэЗ. - 74-76.

10. Рахматуллнн Э.К. Влияние препарата пирвол на эмбриогенез овец и на постнатальное развитие ягнят. Материалы научной конференции, посвященной 50-летию Краснодарской НИВС "Состояние и перспективы различных исследований по профилактике и лечению с.-х. животных и птиц". - Краснодар, 1996. - Ч.Н. - С.38-39.

11. Рахматуллин Э.К., Бондаренко В.О., Кирюткин Г.В., Степа- , нова Л.П. Влияние требон 10%-но го флоу на показатели кров&1 и естественную резистентность организма овец // Ветеринария, 1996. - №8. - С.59-61.

12. Рахматуллнн Э.К. Динамика биохимических показателей и уровень естественной резистентности овец после применения хинмикса II Вестник Российской академии с/х наук, 1996. -№4. - С.72-74.

13. Рахматуллин Э.К. Токсикологическая характеристика хинмикса. II Вестник Российской академии с/х наук, 1997. -

№1 - С.72-73.

Подписано в ие>

Уч.-изд. л. У. 7 Тираж «а

ГП облтипография .Печатный двор', филиал 432061, г. Ульяновск, ул. Пушагреш, и