Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Токсикологическая характеристика и фармакологическое обоснование применения препарата аквасепт при субклиническом мастите у коров

На правах рукописи

Бурков Павел Валерьевич

Токсикологическая характеристика и фармакологическое обоснование применения препарата аквасепт при субклиническом мастите у коров

16.00.04 - ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

Троицк 2005 г

Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Уральская государственная академия ветеринарной медицины»

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Сунагатуллин Фарук Ахмадуллович

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук Самородова Инна Моисеевна

доктор ветеринарных наук, профессор Набиев Фанис Галинурович

Ведущая организация:

ФГОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет»

Защита диссертации состоится « Д. » Ц^О-^ууууОу 2005 г в 1ъчасов на заседании диссертационного совета Д.220.066.01 при ФГОУ ВПО «Уральская государственная академия ветеринарной медицины» по адресу: 457100, г. Троицк Челябинской области, ул. Гагарина, 13.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Уральская государственная академия ветеринарной медицины».

Автореферат разослан « » О^ЛА. д^О-^-л)4-_ 2005 г.

Учёный секретарь диссертационного совета

Т.В. Прокофьева

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. Добиться устойчивого роста производства продукции животноводства - важнейшая задача агропромышленного комплекса России. Анализируя сегодняшнее состояние животноводства, прежде всего, нужно отметить, что во многих субъектах России заметно повысилось производство продукции животноводства, наметился рост молочной продуктивности коров, увеличилось поголовье скота и птицы, улучшились показатели воспроизводства животных, уменьшился падёж.

Следует отметить, что в условиях рынка наиболее важным показателем эффективности производства является то условие как, сколько и какого качества будет произведено продукции сельского хозяйства.

Субклинический мастит приносит значительный экономический ущерб, который выражается в снижении молочной продуктивности, ухудшения качества молока. При субклиническом мастите возрастает число случаев задержания последа и послеродовых осложнений, происходит снижение репродуктивной способности коров. Телята, полученные от больных маститом коров, более подвержены заболеванию желудочно-кишечного тракта (А.А. Никитин, 1987; О.В. Степанова, 1987; Л.К. Попов, 1998; Л.Д. Демидова, 1999).

Для лечения этого заболевания рекомендуют препараты, которые в большинстве своём содержат антимикробные вещества, такие как антибиотики, сульфаниламиды и т.д. Однако большинство из этих веществ могут длительно выводиться с молоком и делать его непригодным к использованию в пищу человека и животных длительное время. Длительное применение антибактериальных препаратов вызывает появление устойчивых к ним рас микроорганизмов. Само применение антимикробных средств через молочную железу создает в ней сильное раздражение паренхимы и слизистых оболочек, что может вызвать нежелательное обострение процесса воспаления и, как следствие этого, ухудшение качества молока (К. Bakurdzhiev, Т. Kokosharov, 1977; A. Sobiraj, A. Kron et all., 1997; G.M. Friton, A. Sobiraj, A. Richter, 1998; E. Gentilini et all., 2000).

Несмотря на значительное количество предложенных средств для лечения коров, больных субклиническими маститами, поиск и создание новых препаратов продолжается. В последнее время он направлен на использование препаратов, имеющих природную, не синтетическую основу. Важное место в лечении коров больных субклиническим маститом занимает использование средств этиотропной и патогенетической терапии. Одним из таких средств является предложенный нами препарат аквасепт на основе катодной фракции активированной воды (католита, «живой воды») и коллоидного серебра (В.М. Бахир, 1990; Л.И.Таранов, 2001).

Для диагностики субклинического мастита используется боль-

шое количество средств и способов диагностики, однако в производственных условиях наиболее широко применяются реактивы из поверхностно-активных веществ и индикаторов (СМ. Чебурин, 1989; В.И. Родионов, 1997; В.М. Карташова, 1975; А.И. Ивашура, 1991). Однако они не всегда позволяют выявить заболевание.

Цель и задачи исследований

Целью нашей работы является изыскание и изучение экономически выгодного, безопасного средства для лечения коров, больных субклиническим маститом. В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1. установить параметры токсичности, эмбриотоксичности, тератогенного и раздражающего действия препарата аквасепт. Определить антимикробные свойства препарата;

2. определить влияние аквасепта на биоэлектрическую активность сердца путем снятия электрокардиограмм;

3. изучить возможность применения аквасепта при лечении коров, больных субклиническим маститом и его влияние на гематологические, биохимические показатели и показатели естественной резистентности;

4. определить экономическую эффективность.

Научная новизна работы. Разработан препарат аквасепт и изучены его токсикологические, антимикробные свойства и влияние на биоэлектрическую активность сердца. Изучены причины субклинического мастита коров в ряде хозяйств Челябинской и Свердловской областей. Разработано средство для диагностики субклинического мастита у коров. Дано фармакологическое обоснование применения препарата аквасепт при субклиническом мастите у коров, которое подтверждено клиническими, гематологическими, биохимическими исследованиями и исследованиями естественной резистентности. Составлена заявка на изобретение.

Практическая ценность работы и внедрение результатов исследований

По результатам работы разработаны и утверждены начальником Главного управления ветеринарии Челябинской области:

- временное наставление по применению препарата аквасепт;

- временное наставление по применению препарата для диагностики субклинического мастита у крупного рогатого скота.

Материалы исследований вошли в рекомендации по диагностике маститов.

Апробация работы

Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на межрегиональной научно-практической конференции УрГСХА -2003 г., на научно-практической конференции УГАВМ - 2004 г., в материалах 2003 года Союза животноводов России - 2004 г.

Публикации результатов исследований. По материалам дис-

сертации опубликовано 7 печатных работ, в которых отражены основные результаты экспериментальных исследований.

Внедрение результатов исследования. Опытно-промышленные испытания разработанных средств в учхозе «Новотроицкое» Троицкого района Челябинской области.

Получен Грант Правительства Челябинской области.

Составлено и утверждено временное наставление на препарат аквасепт для лечения коров, больных субклиническим маститом по Челябинской области.

Составлено и утверждено временное наставление на средство для диагностики субклинического мастита по Челябинской области.

На зашрту выносятся следующие положения:

- фармакотоксикологическая характеристика препарата аква-

септ;

- влияние аквасепта на биоэлектрическую активность сердца;

- фармакологическое обоснование применения препарата аква-септ при субклиническом мастите у коров и его влияние на i

; морфологические, биохимические показатели крови и показатели естественной резистентности;

- экономическая эффективность мероприятий.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 128 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов и практических предложений. Работа содержит 14 рисунков и 23 таблицы. Список литературы включает 239 источников, из них 148 отечественных и 91 зарубежных авторов.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материалы и методы исследования

Настоящая работа проведена в соответствии с тематикой научных исследований УГАВМ (номер госрегистрации 01200210915 «Изыскание природных средств для лечения и профилактики аку-шерско-гинекологических болезней животных»).

Работу выполняли на кафедре акушерства и искусственного осеменениея с.-х. животных, кафедре микробиологии и вирусологии, учхозе «Новотроицкое», ОАО «Щелкунское» в течение 2001-2004 годов.

Препарат аквасепт получали в электроактиваторе типа ЭВР-01 с графитовыми электродами и с помощью ионатора ЛК-27.

Острую и хроническую токсичность определяли по методике А.А. Ступникова (1975), раздражающее действие, эмбриотоксиче-ские и тератогеные свойства аквасепта определяли в соответствии с «Методическими указаниями по определению токси-

ческих свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве» (Л.П. Маланин и др., 1988).

Острую токсичность аквасепта изучали на 42 белых мышах. Для этого было сформировано 7 групп мышей по 6 животных в каждой группе. Препарат мышам вводили подкожно в дозах 0,01, 0,05, 0,1, 0,25, 0,5 и 1 мл. 7 группа была контрольной и ей препарат не вводили.

Хроническую токсичность аквасепта определяли на 42 белых мышах. Мышей разделили на 7 групп по 6 животных в каждой: 6 опытных и одна контрольная. Препарат мышам вводили подкожно в дозах от 0,01 до 1 мл. 7 группа была контрольной и ей препарат не вводили.

Раздражающее действие аквасепта при нанесении на кожу определяли на 20 кроликах, которых разделили на четыре группы по 5 животных в каждой. Препарат однократно наносили на кожу в разведении с дистиллированной водой 1:3, 1:5, 1:10. Кроликам контрольной группы наносили дистиллированную воду.

Эмбриотоксические и тератогеные свойства аквасепта определяли в двух вариантах с применением дозы аквасепта в 10 мл на крысу.

Влияние аквасепта на биоэлектрическую активность сердца исследовали в соответствии с «Методическими указаниями по электрокардиографии с.-х. животных и птиц» (Ю.Я. Кавардаков, Н.Т. Миф-тахутдинов, 1986 г). Эксперимент проводили на 10 кроликах живой массой 1,8-2,0 кг, в возрасте 5-6 месяцев. Аквасепт вводили подкожно в дозе 0,5 мл/кг по схеме: исходная запись; введение препарата и запись ЭКГ через 3, 5 и 24 часа; введение препарата и запись ЭКГ через 48 часов с начала опыта; введение препарата и запись ЭКГ через 72 часа с начала опыта.

Экспериментальная часть работы выполнена на коровах уральского отродья черно-пестрой породы.

Терапевтическую эффективность препарата аквасепт определяли в сравнении с мастисаном-А. Для этого по принципу парных аналогов отобрали три группы коров: две группы больных по 10 голов в каждой и одна здоровая также содержащая 10 голов. Больных коров первой группы лечили внутривымянным двукратным введением мастисана-А в дозе 5 мл в сосковый канал. Этот метод лечения принят в хозяйстве. Больных коров второй группы лечили препаратом аквасепт. Его вводили внутриаортально по Д.Д. Логвинову в дозе 150 мл подогретым до 39-40°С с интервалом 24 часа. Введение препаратов продолжали до двукратной отрицательной реакции с дима-стином.

Для диагностики мастита использовали следующие методы.

Пробы молока от всех исследуемых животных подвергались исследованию 5%-ным раствором димастина.

Бактериологическое исследование включало определение наличия патогенных стафилококков, стрептококков, бактерий группы кишечной палочки, энтерококков, бактерий рода Протей.

Для определения бактерицидных свойств препарата использовали четыре концентрации препарата: 100, 75, 50 и 25%-ную. Суточную бульонную культуру в количестве 0,1 мл смешивали с 1 мл препарата.

Для выяснения влияния кормления на возникновение субклинического мастита были изучены структура рациона, проведен его анализ по основным питательным веществам.

Изучали корма: силос, сено, солома, комбикорм - по методике, разработанной Е.А. Петуховой и соавт. (1983).

Полный зоотехнический анализ кормов проводили по общепринятой методике Всесоюзного института животноводства (Н.П. Дроз-денко, 1981).

Для выяснения влияния системы доения на возникновение субклинического мастита проводили исследования проб молока от коров при доении их аппаратом «Волга» и «Duovak-300».

Морфобиохимические показатели крови у опытных животных учитывали до и после применения препарата.

Кровь для исследований брали по методу, описанному Б.И. Антоновым и др. (1991).

В крови определяли: содержание гемоглобина, количество эритроцитов и лейкоцитов, выводили лейкограмму.

Микроэлементы в крови определяли на атомноадсорбционном спектрофотометре с микропроцессорным измерителем «МИКОН».

В сыворотке крови определяли: общий белок, белковые фракции, холестерин, кальций, неорганический фосфор, активность ас-партатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы, каротин, креа-тинин.

Для изучения естественной резистентности определяли: фагоцитарную активность лейкоцитов, фагоцитарный индекс, фагоцитарное число, фагоцитарную емкость, бактерицидную активность сыворотки крови.

Экономическую эффективность ветеринарных мероприятий устанавливали по «Методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий» (И.Н. Никитин и др., 1996).

Статистическую обработку результатов проводили с помощью программы Biostat for Windows на IBM PC.

2.2 Результаты собственных исследований

2.2.1 Методика получения препарата аквасепт

Процесс получения препарата складывается из двух этапов: получение активированной щелочной воды и обогащение ее частицами

коллоидного серебра.

Получение активированной щелочной воды

Активацию обычной питьевой воды проводили в электроактиваторе типа ЭВР-01 с графитовыми электродами.

Обогащение активированной воды коллоидным серебром

Коллоидный раствор серебра получали электрическим методом, предложенном в 1898 г. Бредигом (А.И. Болдырев, 1974) и реализованным в аппарате «Ионатор ЛК-27». Для этого электроды помещали в охлажденную активированную щелочную воду и включали прибор. Хранят препарат в защищенном от света месте в плотно укупоренной посуде.

2.2.2 Изучение токсичности, длительного действия и раздражающего действия препарата аквасепт

Для изучения токсичности и длительного применения препарата использовались белые мыши, которых разбили на 7 групп: шесть опытных и одна контрольная. Препарат мышам вводили подкожно в дозах 0,01, 0,05, 0,1, 0,25, 0,5 и 1 мл. Мышам контрольной препарат не вводили.

При изучении острой токсичности установили, что препарат аквасепт при подкожном введении в дозах 0,01, 0,05, 0,1, 0,25, 0,5 и 1 мл не оказывает токсического действия на организм белых мышей и не вызывает нарушений анатомического строения внутренних органов.

Изучение аквасепта при длительном применении показало, что общее состояние всех опытных животных за весь период наблюдения оставалось без видимых изменений. При гематологических исследованиях установлено, что с увеличением дозы препарата происходит снижение количества эритроцитов в крови в 3-6 группах по сравнению с контролем. Снижение эритроцитов в 4, 5 и 6 опытных группах - статистически достоверно (Р < 0,05), Количество гемоглобина увеличено по-сравнению с контролем, только во 2 опытной группе. В 36 группах происходит его уменьшение (в 5 и 6 Р < 0,05). В опытных группах, начиная со второй, происходит увеличение содержания гемоглобина в одном эритроците, что может явиться следствием уменьшения их количества. В четвертой опытной группе оно статистически достоверно (Р < 0,05). Увеличение количества лейкоцитов происходило в первой, второй и третьей опытных группах по сравнению с контролем. Причем во второй оно было статистически достоверным. В четвертой и шестой группах происходило их снижение. При убое и патогоанатомичеком вскрытии изменений во внутренних органах у мышей не наблюдали.

Таким образом, аквасепт при длительном применении относится к нетоксичным веществам.

Раздражающее действие аквасепта при однократном нанесении на кожу определяли на 20 кроликах, которых разделили на четыре группы по 5 животных в каждой. Авасепт наносили на кожу однократно в разведении дистиллированной водой: животным первой группы - из расчета 1:3, второй - 1:5, третьей - 1:10, четвертая группа - контрольная. На симметричный участок наносили дистиллированную воду. В течение суток наблюдали за состоянием кожи и общим состоянием животных. Видимых изменений на коже во всех группах животных не обнаруживали. Отсутствовали покраснение, отек, болезненность, утолщение кожной складки, расчесы, язвы. Общее состояние и кожа в месте нанесения препарата у всех животных оставались без видимых изменений и в последующие дни.

Таким образом, препарат аквасепт не обладает токсичными свойствами, раздражающими свойствами.

2.2.3 Изучение эмбриотоксических и тератогенных свойств

Установлено, что при введении беременным самкам в течение всей беременности препарата в дозе 10 мл подкожно общая эмбриональная гибель плодов на 21-й день внутриутробного развития составила 11,43%. Этот показатель отражает, как предимплантацион-ную гибель плодов, так и постимплантационную. В контрольной группе общая эмбриональная смертность составила 16,5%. Следовательно, в опытной группе наблюдается снижение общей эмбриональной смертности плодов крыс.

Вторая серия опытов была поставлена на 16 крысах-самках и 4 крысах-самцах, разделенных на 4 группы по 4 самки и 1 самцу. Животные 1-й и 11-й групп с момента спаривания ежедневно подкожно получали аквасепт в дозе 10 мл соответственно, а крысы 111-й и 1У-й групп служили контролем. О наступлении беременности судили по появлению сперматозоидов во влагалищных мазках. На 20-й день беременных самок убивали под эфирным наркозом, извлекали матку, взвешивали ее с плодами и плодными оболочками, определяли количество околоплодных вод, число плодов; рог матки исследовали на предмет обнаружения рассосавшихся плодов, а плоды изучали на предмет обнаружения дефектов развития. Результаты опытов приводятся в таблице 1.

1. Эмбриотоксические и тератогенные свойства аквасепта в дозе 10 мл на крысу, х+8х

Препарат Кол-во плодов Кол-во рассосавшихся плодов Масса плода, г Дефекты развития Масса матки, г Масса плодных оболочек, г Объем око-лоплод-ных вод, мл

Аквасепт 10,0±0,72 2 из 58 4,8±0,48 нет 5,4±0,25 3,86±0,05 3,8±0,13

Контроль 9,5±0,35 3 из 56 4,7±0,54 нет 5,3±0,39 3,85±0,05 3,8±0,25

Из таблицы следует, что аквасепт не обладает эмбриотоксично-стью и тератогенностью, о чем свидетельствует незначительное количество рассосавшихся плодов, отсутствие дефектов развития плодов и отсутствие разницы в количестве плодов, в массах плодов, матки, детского места, объема околоплодных вод между опытной и контрольной группой.

Патологических изменений органов при увеличении МБС от 10 до 56 раз, как в контрольной, так и в опытной группах не обнаружено.

2.2.4 Бактерицидные свойства аквасепта

В эксперименте использовали различные концентрации препарата: 25, 50, 75 и 100% на физиологическом растворе.

Результаты исследований показывают, что препарат аквасепт действует бактерицидно на кокковую микрофлору (St. epidermidis и St. aureus) в каждой из указанных концентраций. Рост колоний кишечной палочки отмечается при воздействии на нее препарата во всех четырех испытуемых концентрациях. Бактерицидные свойства раствора коллоидного серебра остаются аналогичными с препаратом аквасепт.

2.2.5 Изучение влияния аквасепта на биоэлектрическую ак-

тивность сердца

Установили, что после применения аквасепта показатели ЭКГ колебались в физиологических пределах и практически достоверно не изменялись. Это дает основание считать, что аквасепт слабо влияет на функциональное состояние сердечно-сосудистой системы.

2.2.6 Фармакологическое обоснование применения препара-

та аквасепт при лечении коров, больных субклиническим маститом

Для диагностики субклинического мастита мы разработали средство, состоящее из сульфонола технического, индикаторов нейтрального красного и метиленового синего, едкого калия и воды.

Для диагностики субклинического мастита реактив используют следующим образом: в лунки молочно-контрольной пластинки из каждой четверти надаивать по 1 мл молока последней порции (альвеолярного молока). Затем исследуемое молоко смешивать с 1 мл реактива в лунке молочно-контрольной пластинки.

Учет реакции вести через 4 секунды по степени образовавшегося желе (сгустка) и изменения цвета индикатора.

Реакция считается:

- отрицательной (нет мастита), если в лунке находится однородная жидкость фиолетового цвета;

- сомнительной, если в лунке отмечаются следы образования желе, которое при перемешивании стеклянной или деревянной палочкой тянется за ней в виде тонких нитей, цвет смеси - фиолетовый;

- положительной, если образовался густой сгусток, который при перемешивании легко выбрасывается из лунки стеклянной палочкой, цвет смеси - фиолетовый, или если образовался гутой сгусток, а смесь окрасилась в зеленоватый или ярко-зеленый цвет.

С целью выяснения диагностической ценности «троицкий мас-титный тест» был испытан в учхозе «Новотроицкое» Троицкого района Челябинской области в сравнительном аспекте с общепринятыми тестами: 5%-ным раствором димастина, пробой с метиленовым голубым при подтверждении пробой отстаивания.

Результаты испытания свидетельствуют, что при диагностике мастита 5%-ным раствором димастина из ста происследованных проб молока было выявлено 8 проб, дающих положительную реакцию, при исследовании проб с предложенным нами средством результаты реакции совпали с реакцией с димастином и дополнительно было выявлено 7 положительно реагирующих проб. Пробой с метиленовым голубым было выявлено 15 положительных реакций. Все положительные реакции были подтверждены пробой отстаивания.

Гематологические, биохимические показатели и показатели естественной резистентности коров, больных субклиническим

маститом

При изучении морфологического состава крови было установлено, что в крови больных животных по сравнению со здоровыми повышено количество эритроцитов на 38,5% (Р < 0,05) (у здоровых животных по отношению к норме количество эритроцитов снижено на 22%), количество гемоглобина на 3%, а среднее содержание гемоглобина в одном эритроците, напротив, снижено на 26,5% (Р < 0,05). Однако, оно повышено по отношению к норме у больные на 18,4%, у здоровых на 61,1%.

Низкое содержание эритроцитов у здоровых животных объясняется токсическим воздействием на органы кроветворения, уменьшением в крови марганца, нарушенное соотношение его с кобальтом, повышенного количества свинца. Количество эритроцитов у больных животных, соответствующее норме, можно объяснить сгущением крови. Для компенсации указанных отклонений увеличивается содержание гемоглобина в одном эритроците (Смирнов и др., 1981; Н.А. Уразаев и др., 1990).

В крови больных коров повышено содержание сегментоядерных

нейтрофилов - их больше, чем у здоровых на 25,7% (Р < 0,05), отклонение от нормы при этом составляет 20%. Количество моноцитов также больше, чем у здоровых на 43,8%, с отклонением от физиологических показателей на 31,4%. Количество лимфоцитов снижено как к здоровым животным (ниже, чем у здоровых на 22,3%), так и по отношению к норме на 8,8%. Остальные показатели процентного соотношения клеток лежат в пределах физиологической нормы.

Увеличения абсолютного количества лейкоцитов в крови больных и здоровых животных не произошло, изменилось лишь их процентное соотношение: повысилось количество сегментоядерных ней-трофилов и моноцитов, так как они образуют основу соматических клеток.

При изучении некоторых показателей белкового обмена установлено, что содержание общего белка в сыворотке крови у больных животных ниже нормы на 4,2%, у здоровых оно находится на нижней границе; содержание фракции альфа-глобулинов снижено по отношению к норме: у больных на 17,5% и у здоровых на 20,8%. У больных животных содержание альфа-глобулинов повышено по отношению к здоровым на 4,2%. Количество бета-глобулинов у больных животных повышено по отношению к норме на 13,8%, по отношению к здоровым на 32,8%. Содержание других фракций и общего белка находится в физиологических пределах.

Снижение общего белка в сыворотке крови у больных и низкое содержание у здоровых может произойти из-за недополучения его с кормом, у больных - повышенный распад в организме. Уменьшение концентрации альфа-глобулинов у больных и здоровых животных можно опосредованно объяснить низким содержанием церулоплаз-мина в сыворотке, о чем свидетельствует и низкое содержание меди в крови. Повышенное количество бета-глобулинов связано с токсическим воздействием на почки продуктов воспаления и повышенного количества свинца (A.M. Смирнов и др., 1981; И.И. Иванов, 1969; В.Дж. Маршалл, 2002).

Исследование некоторых показателей ферментного, витаминного, липидного, минерального и азотного обмена в сыворотке крови больных и здоровых коров показало, что биохимические показатели сыворотки крови у больных и здоровых животных существенно не отличаются между собой и нормой. Можно отметить, что содержание креатинина в сыворотке крови больных животных меньше нормы на 8,6%. У больных и здоровых животных нарушен фосфорно-кальциевый обмен. Так, у больных животных отношение кальция к фосфору составляет 1:1,1, а у здоровых - 1:1,2.

Нарушенное соотношение кальция к фосфору в сыворотке крови у больных и здоровых животных объясняется нарушением содержания в крови микроэлементов, регулирующих их обмен: кобальта и марганца (Н.А. Уразаев и др., 1990).

При изучении содержания некоторых микроэлементов в крови больных и здоровых коров установлено, что у больных коров в крови снижено содержание, цинка на 45%, магния на 4% (Р < 0,05), марганца на 34% и кобальта на 9%. В то же время в крови повышено содержание меди на 13% и свинца на 15%. По сравнению с нормативными показателями, и у больных и у здоровых животных в крови отмечается низкое содержание меди: у здоровых на 34,3%, у больных -25,7%; магния: у здоровых на 81,4%, у больных - 82,2%; марганца: у здоровых на 72,7%, у больных - 81,8%. Количество цинка у здоровых животных повышено на 9,6%, количество кобальта у здоровых в 6,87 раз, у больных - в 6,23раза.

Низкое содержание меди, магния, марганца можно объяснить их низким содержанием в корме, потреблением корма с низким содержанием белка (B.C. Камышников, 2003). Повышение содержания кобальта в крови объясняется по данным Н.А. Уразаева и др. (1990) нарушенным соотношением его с марганцем и, как следствие, не усвоение организмом.

Факторы естественной резистентности являются основополагающими в защите организма от вредоносного воздействия внешней среды. При исследовании некоторых показателей естественной резистентности установлено, что у больных животных по сравнению со здоровыми фагоцитарная активность ниже на 2%. Фагоцитарный индекс выше на 32,1%, фагоцитарное число на 33,3%, фагоцитарная емкость на 31%, бактерицидная активность сыворотки крови на 8,6%.

Полученные данные свидетельствуют о нарушении обмена веществ в организме больных коров, скрытой воспалительной реакции и дисбалансе факторов естественной резистентности.

Эффективность препарата аквасепт прилечении коров, больных субклиническим маститом и его влияние на гематологические, биохимические показатели и показатели естественной резистентности крови

Опыт по лечению коров, больных скрытым маститом проводили на коровах черно-пестрой породы. Для этого по принципу пар-аналогов были сформированы две группы коров по 10 голов в каждой: контрольная и опытная. Животных контрольной группы лечили введением в пораженную четверть мастисана-А два раза в сутки в дозе 5 мл. Коров опытной группы лечили внутриаортальным введением аквасепта в дозе 150 мл с интервалом 24 часа.

Коров лечили до выздоровления. Выздоровевшими считали животных, которые давали двукратную отрицательную реакцию с ди-мастином с интервалом 24 часа. Результаты лечения отражены в таблице 2.

2. Результаты лечения коров, больных субклиническим _ маститом (х+8х; п=10)_

Группа Продолжительность лечения, дни Выздоровело голов, %

Контрольная 5,3±0,3 60

Опытная 3,2±0,5* 100

- Р<0,05

Из таблицы 2 видно, что продолжительность лечения коров контрольной группы составила в среднем 5,3+0,3, при этом не выздоровело 4 коровы; коров опытной группы 3,2+0,5 (Р<0,05), выздоровели все коровы.

Через 7 дней после начала лечения от животных исследовали кровь на морфологические, биохимические и иммунологические показатели, которые сравнивали с показателями больных животных.

При исследовании некоторых показателей дыхательной функции крови мы установили, что у коров, которым для лечения применяли мастисан-А, по-сравнению с больными произошло увеличение количества эритроцитов на 3,7%, количество гемоглобина и среднее содержание гемоглобина в одном эритроците снизилось соответственно на 6 и 7,4%.

При лечении коров препаратом аквасепт количество эритроцитов снизилось на 7,4%, количество гемоглобина и среднее содержание гемоглобина в одном эритроците увеличилось на 0,5 и 10,5% соответственно.

При этом необходимо отметить, что количество эритроцитов у животных опытных групп больше, по сравнению со здоровыми. Увеличение числа эритроцитов объясняется снижением интоксикации продуктами воспаления, повышение усвоения кобальта, меди, снижением содержания свинца. Эти изменения способствую усилению кроветворения (В.Ф. Лемеги и др., 1954; Б.Д, Кальницкий, 1985; Н.И Лебедев, 1990; Л. Палика, 1998). Однако, содержание гемоглобина в одном эритроците еще достаточно велико, что объясняется компенсацией их низкого уровня.

При проведении лечения количество лейкоцитов в крови снизилось в пределах физиологической нормы. Так, при лечении коров мастисаном-А это снижение составило 53,2%, а при применении препарата аквасепт - 51,1%. При лечении коров мастисаном-А количество сегментоядерных нейтрофилов уменьшилось на 16,2%, аква-септом на 26,2% (Р<0,05), при этом их значения вошли в пределы физиологической нормы. Аналогичные изменения произошли и с количеством моноцитов в крови: их количество снизилось на 24% (мастисан-А) и 32,6% (аквасепт). Количественные изменения других клеток белой крови у выздоровевших животных изменялись в течение опыта в пределах физиологической нормы. Данные изменения

говорят об исчезновении воспалительной реакции в молочной железе.

Состояние некоторых показателей белкового обмена в сыворотке крови коров после проведения лечения аквасептом свидетельствуют о достоверном увеличении содержания общего белка на 14,5% (Р<0,05). Однако, это увеличение произошло в пределах физиологической нормы. Это говорит о нормализации обмена его, увеличении синтеза. Изменение количества общего белка у животных контрольной группы не произошло. Необходимо отметить, что в белковых фракциях произошло увеличение а-глобулинов на 93,9% (мастисан-А) (Р<0,05) и 2,0% (аквасепт). Повышение количества альфа-глобулинов, возможно, может произойти в результате повышения синтеза церулоплазмина, о чем свидетельствует и повышение усвоения меди из крови. В группе коров, которых лечили мастисаном-А, произошло увеличение выше физиологической нормы р-глобулиновой фракции в 1,5 раза (Р<0,05) и снижение фракции гамма-глобулинов на 85,4% (Р<0,05). Увеличение количества бета-глобулинов и снижение гамма-глобулинов может произойти в результате токсического воздействия антибиотиков мастисана-А на почки (бета-глобулины) и угнетения выработки антител лимфоцитами (гамма-глобулины). Бета-глобулины возрастают еще, по видимому, потому, что как компенсация низкого уровня гамма-глобулинов происходит усиление других факторов гуморальной защиты организма: комплемент C1-S, СЗ, С4, С5. (И.И. Иванов, 1969; A.M. Смирнов и др. 1981; B.C. Камышников, 2003). Изменения остальных показателей произошло в пределах физиологической нормы.

Изменения в ферментном, витаминном, минеральном, липидном и азотном обмене, произошедшие к концу опыта в крови опытных и контрольных животных, не выходили за пределы физиологической нормы. Из достоверных изменений (Р < 0,05) можно отметить увеличение содержания каротина на 88,4% (контрольная группа) и в 3,69 раза в опытной группе. Это произошло, по видимому, в результате повышения его усвоения из корма. Увеличение содержания креати-нина произошло на 29,7% (мастисан-А) и 37,5% (аквасепт). Изменилось соотношение кальция к фосфору. Если у больных животных оно составляло 1:1,1, то в контрольной группе после лечения оно составляет 1:1,3. В опытной группе оно не изменилось. Во всех группах повысилась активность трансаминаз, однако, оно находится в физиологических пределах. Указанные изменения говорят о нормализации, активизации обмена веществ. При этом в контрольной группе это, вероятно, обусловлено антимикробным действием антибиотиков и, как следствие, снижением интоксикации, а в опытной -стимулирующим действием щелочной воды (В.И. Прилуцкий, В.М. Бахир, 1995) и антимикробным действием серебра (Л.И. Таранов, 2001).

При анализе изменений в микроэлементном составе крови установлено, что при лечении коров мастисаном-А в крови у животных увеличивается по сравнению с больными содержание цинка на 3%, магния на 28 (Р < 0,05) и марганца на 33%. В то же время в крови происходит снижение меди на 54% (Р < 0,05), кобальта на 68% (Р < 0,05), свинца на 34%. В крови коров, которым для лечения применялся препарат аквасепт, происходит снижение меди на 52% (Р < 0,05), цинка на 20% кобальта на 71% и свинца на 24%. Повышается содержание магния на 22% и марганца на 8%.

Уменьшение содержания меди, кобальта, магния произошло, по-видимому, из-за повышения их усвоения. Эти изменения нашли свое отражение в изменении биохимических и гематологических показателей.

В результате эксперимента в контрольной группе произошло увеличение фагоцитарной активности на 5,1%, фагоцитарного индекса на 16,2%, фагоцитарного числа на 18,8%, бактерицидной активности сыворотки крови на 38,5% (Р < 0,05). Фагоцитарная емкость снизилась на 23,7%. В опытной группе фагоцитарная активность повысилась на 35,9%, фагоцитарный индекс на 32,4%, фагоцитарное число на 75%, фагоцитарная емкость на 8,8%, бактерицидная активность сыворотки крови на 54,25%. Данные изменения говорят об усилении защитнвж сил организма: клеточного и гуморального иммунитета.

2.2.7 Экономическая эффективность проведенных лечебных и диагностических мероприятий

Экономическая эффективность при применении для диагностики раствора димастина и лечения мастисана-А в контрольной группе составила 137,75 рубля и на 1 рубль затрат 0,8 рублей; в опытной группе с применением для диагностики димастина и лечения аква-септа 373,4 рубля и 9,4 рубля соответственно.

Экономическая эффективность при применении для диагностики раствора ТМТ и лечения мастисана-А в контрольной группе составила 142,15 рубля и на 1 рубль затрат 0,86 рублей; в опытной группе с применением для диагностики ТМТ и лечения аквасепта 377,8 рубля и 10,6 рубля соответственно.

Таким образом, предложенный нами способ диагностики и лечения коров, больных скрытым маститом, оказался наиболее экономически выгодным, чем способ, принятый в хозяйстве.

17

Выводы

1. Препарат аквасепт не токсичен и не обладает местно раздражающим действием. Дозы 0,01, 0,05, 0,1, 0,25, 0,5 и 1 мл на животное не вызывают гибели белых мышей при одноразовом и 30 дневном введении под кожу. При вскрытии и гистологических исследованиях отклонений не установлено.

2. Аквасепт не действует эмбриотоксически и тератогенно свойствами.

3. Данные электрокардиографических исследований кроликов через 3, 5, 24, 48 и 72 часа после подкожного введения аквасепта в дозе 0,5 мл/кг массы тела не выявили достоверной разницы с исходными данными.

4. Аквасепт в концентрации 100, 75, 50 и 25% действует бактерицидно в отношении кокковой микрофлоры и не обладает бактерицидными свойствами к кишечной палочке.

5. Введение раствора аквасепта в брюшную аорту коровы положительно влияет на гематологические, биохимические показатели и показатели естественной резистентности. Выздоровление коров наступает на 3-4 сутки.

6. Диагностическое значение разработанного нами препарата «троицкий маститный тест» выше по сравнению с димастином на 8%.

7. Экономическая эффективность применения разработанных нами препаратов для диагностики и лечения субклинического мастита у коров на 1 рубль затрат составляет 10,6 рублей.

Практические предложения

1. Для диагностики субклинического мастита применять препарат «троицкий маститный тест».

2. Для лечения коров, больных субклиническим маститом использовать препарат аквасепт внутриаортально по Д.Д. Логвинову в дозе 150 мл на корову с интервалом 48 часов до выздоровления.

Список работ опубликованных по теме диссертации

1. Бурков, П.В. Троицкий маститный тест. / П.В. Бурков, Ф.А Сунагатуллин // Сб. науч. тр. «Энтузиазм и творчество молодых ученых - агропромышленному комплексу Урала», Т. 2. - Екатеринбург, 2003. - С. 113-117.

2. Бурков, П.В. Лечение коров, больных субклиническим маститом. / П.В. Бурков, Ф.А. Сунагатуллин // Актуальные проблемы ветеринарной медицины. - Троицк, 2004. - С. 42-43.

3. Бурков, П.В. Острая и хроническая токсичность препарата аквасепт. / П.В. Бурков, ФА Сунагатуллин // Актуальные проблемы ветеринарной медицины. - Троицк, 2004. - С. 43-45.

4. Бурков, П.В. Средство для диагностики субклинического мастита у крупного рогатого скота. / Ф.А. Сунагатуллин, П.В. Бурков // Союз животноводов России. Сборник № 4 (материалы 2003 года). - Москва, 2004. - С. 66-69.

5. Бурков, П.В. Возникновение скрытых маститов в зависимости от доильных аппаратов. / П.В. Бурков, Ф.А. Сунагатуллин // Био. -2004. -№ 1.-С. 15.

6. П.В. Бурков, Ф.А. Сунагатуллин Методические указания по диагностике субклинического мастита у коров: Методические рекомендации. Троицк: УГАВМ, 2004.-23 с.

7. Сунагатуллин ФА, Бурков П.В. Эффективность лечения коров, больных субклиническим маститом. Информ. листок №01-083-05, Челябинский ЦНТИ.

на правах рукописи

Бурков Павел Валерьевич

Токсикологическаяхарактеристикаи фармакологическое обоснование применения препарата аквасепт при субклиническом мастите у коров

16.00.04 - ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

Сдано в набор 11.01.2005 г. Подписано к печати 13.01.2005 г. Формат 60x84/16. Печать офсетная. Лицензия № 021252 от 31 октября 1997 г. Объем 1 п.л. Заказ № т212вк74 Тираж 100 экз.

Типография Уральской государственной академии ветеринарной медицины Адрес типографии: 457100, г. Троицк, Челябинская обл., ул. Гагарина, 13

h

D"

Актуальность проблемы. Добиться устойчивого роста производства продукции животноводства - важнейшая задача агропромышленного комплекса России. Анализируя сегодняшнее состояние животноводства, прежде всего, нужно отметить, что во многих субъектах России заметно повысилось производство продукции животноводства, наметился рост молочной продуктивности коров, увеличилось поголовье скота и птицы, улучшились показатели воспроизводства животных, уменьшился падёж.

Следует отметить, что в условиях рынка наиболее важным показателем эффективности производства является то условие как, сколько и какого качества будет произведено продукции сельского хозяйства.

Субклинический мастит приносит значительный экономический ущерб, который выражается в снижении молочной продуктивности, ухудшения качества молока. При субклиническом мастите возрастает число случаев задержания последа и послеродовых осложнений, происходит снижение репродуктивной способности коров. Телята, полученные от больных маститом коров, более подвержены заболеванию желудочно-кишечного тракта (A.A. Никитин, 1987; О.В. Степанова, 1987; JI.K. Попов, 1998; Л.Д. Демидова, 1999).

Для лечения этого заболевания рекомендуют препараты, которые в большинстве своём содержат антимикробные вещества, такие как антибиотики, сульфаниламиды и т.д. Однако большинство из этих веществ могут длительно выводиться с молоком и делать его непригодным к использованию в пищу человека и животных длительное время. Длительное применение антибактериальных препаратов вызывает появление устойчивых к ним рас микроорганизмов. Само применение антимикробных средств через молочную железу создает в ней сильное раздражение паренхимы и слизистых оболочек, что может вызвать нежелательное обострение процесса воспаления и как следствие этого ухудшение качества молока (К. Bakurdzhiev, Т. Kokosharov, 1977; A. Sobiraj, А. Krön et all., 1997; G.M. Friton, A. Sobiraj, A. Richter, 1998; E. Gentilini et all., 2000).

Несмотря на значительное количество предложенных средств для лечения коров, больных субклиническими маститами, поиск и создание новых препаратов продолжается. В последнее время он направлен на использование препаратов, имеющих природную, не синтетическую основу. Важное место в лечении коров больных субклиническим маститом занимает использование средств этиотропной и патогенетической терапии. Одним из таких средств является предложенный нами препарат аквасепт на основе катодной фракции активированной воды (католита, «живой воды») и коллоидного серебра (В.М. Бахир, 1990; Л.И.Таранов, 2001).

Для диагностики субклинического мастита используется большое количество средств и способов диагностики, однако в производственных условиях наиболее широко применяются реактивы из поверхностно-активных веществ и индикаторов (С.М. Чебурин, 1989; В.И. Родионов, 1997; В.М. Карташова, 1975; А.И. Ивашура, 1991). Однако они не всегда позволяют выявить заболевание.

Цель и задачи исследований.

Целью нашей работы является изыскание и изучение экономически выгодного, безопасного средства для лечения коров, больных субклиническим маститом. В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1. установить параметры токсичности, эмбриотоксичности, тератогенного и раздражающего действия препарата аквасепт. Определить антимикробные свойства препарата;

2. определить влияние аквасепта на биоэлектрическую активность сердца путем снятия электрокардиограмм;

3. изучить возможность применения аквасепта при лечении коров, больных субклиническим маститом и его влияние на гематологические, биохимические показатели и показатели естественной резистентности;

4. определить экономическую эффективность.

Научная новизна работы. Разработан препарат аквасепт и изучены его токсикологические и антимикробные свойства. Изучены причины субклинического мастита коров в ряде хозяйств Челябинской и Свердловской областей. Разработано средство для диагностики субклинического мастита у коров. Изучена терапевтическая эффективность препарата аквасепт при субклиническом мастите у коров и подтверждена клиническими, гематологическими, биохимическими и иммунологическими исследованиями. Составлена заявка на изобретение.

Практическая ценность работы и внедрение результатов исследований

По результатам работы разработаны и утверждены начальником Главного управления ветеринарии Челябинской области:

- временное наставление по применению препарата аквасепт;

- временное наставление по применению препарата для диагностики субклинического мастита у крупного рогатого скота.

Материалы исследований вошли в рекомендации по диагностике маститов.

Апробация работы

Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на межрегиональной научно-практической конференции УрГСХА - 2003 г., на научно-практической конференции УГАВМ - 2004 г., в материалах 2003 года Союза животноводов России - 2004 г.

Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 7 печатных работ, в которых отражены основные результаты экспериментальных исследований.

Внедрение результатов исследования. Опытно-промышленные испытания разработанных средств прошли в учхозе «Новотроицкое» Троицкого района Челябинской области.

Получен Грант Правительства Челябинской области.

Составлено и утверждено временное наставление на препарат «аквасепт» для лечения коров, больных субклиническим маститом по Челябинской области.

Составлено и утверждено временное наставление на средство для диагностики субклинического мастита по Челябинской области.

На защиту выносятся следующие положения:

- фармакотоксикологическая характеристика препарата аквасепт;

- влияние аквасепта на биоэлектрическую активность сердца;

- фармакологическое обоснование применения препарата аквасепт при субклиническом мастите у коров и его влияние на морфологические, биохимические показатели крови и показатели естественной резистентности;

- экономическая эффективность мероприятий.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 128 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов и практических предложений. Работа содержит 14 рисунков и 23 таблицы. Список литературы включает 239 источников, из них 148 отечественных и 91 зарубежных авторов.

Выводы

1. Препарат аквасепт не токсичен и не обладает местно раздражающим действием. Дозы 0,01, 0,05, 0,1, 0,25, 0,5 и 1 мл на животное не вызывают гибели белых мышей при одноразовом и 30 дневном введении под кожу. При вскрытии и гистологических исследованиях отклонений не установлено.

2. Аквасепт не действует эмбриотоксически и тератогенно свойствами.

3. Данные электрокардиографических исследований кроликов через 3, 5, 24, 48 и 72 часа после подкожного введения аквасепта в дозе 0,5 мл/кг массы тела не выявили достоверной разницы с исходными данными.

4. Аквасепт в концентрации 100, 75, 50 и 25% действует бактерицидно в отношении кокковой микрофлоры и не обладает бактерицидными свойствами к кишечной палочке.

5. Введение раствора аквасепта в брюшную аорту коровы положительно влияет на гематологические, биохимические показатели и показатели естественной резистентности. Выздоровление коров наступает на 3-4 сутки.

6. Диагностическое значение разработанного нами препарата «троицкий маститный тест» выше по сравнению с димастином на 8%.

7. Экономическая эффективность применения разработанных нами препаратов для диагностики и лечения субклинического мастита у коров на 1 рубль затрат составляет 10,6 рублей.

Практические предложения

1. Для диагностики субклинического мастита применять препарат «троицкий маститный тест».

2. Для лечения коров, больных субклиническим маститом использовать препарат аквасепт внутриаортально по Д.Д. Логвинову в дозе 150 мл на корову с интервалом 48 часов до выздоровления.