Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Токсико-фармакологические свойства политрила и его влияние на морфологические показатели органов птиц

На правах рукописи

ШАРИПОВА ЛИЛИЯ КАМИЛОВНА

ТОКСИКО-ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ПОЛИТРИЛА И ЕГО ВЛИЯНИЕ НАМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ ОРГАНОВ ПТИЦ

16.00.04 - ветеринарная фармакология с токсикологией 16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Троицк-2005

Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет»

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Исмагилова Асия Фахретдиновна

Научный консультант: доктор ветеринарных наук, профессор

Сковородин Евгений Николаевич

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Самородова Инна Моисеевна

доктор ветеринарных наук, профессор Герунов Владимир Иванович

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Ульяновская государст-

венная сельскохозяйственная академия»

Защита диссертации состоится >> ¿ф^^^бу^ 2005 года В ¿^ча

на

заседании диссертационного совета Д. 220.066.01 при ФГОУ ВПО «Уральская государственная академия ветеринарной медицины» по адресу: 457100, Челябинская область, г. Троицк, ул. Гагарина, 13.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Уральская государственная академия ветеринарной медицины».

Автореферат разослан << /Оу> 2005 года.

Ученый секретарь диссертационного совета

Прокофьева Т.В.

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В последние годы в производстве и переработке животноводческой продукции России сложилось тяжелое положение. Ощущается острейший дефицит в кормах, сокращается поголовье животных и количество птицы, увеличивается их заболеваемость, ухудшается санитарное состояние животноводческих помещений.

Следует отметить, что существующими путями, методами и средствами трудно обеспечивать продуктивное здоровье сельскохозяйственных животных и птицы. Со всей остротой встал вопрос о новой стратегической политике в этом направлении. Сущность нового направления заключается во введении в технологию получения, выращивания и использования животных, комплекса новых фармакологических средств и способов для постоянного поддержания их продуктивного здоровья (Беркович A.M., Бузлама B.C., 2003).

Из всех антибиотиков, используемых в ветеринарной медицине, в европейском союзе применяется всего i % фторхинолонов, больше всего тетрациклинов (66%), беталактамов (9%) и макролидов (12%). Чаще всего фторхинолоноы в ветеринарной медицине применяются в Нидерландах. Кроме того, существуют доказательства того, что строгие санитарные меры на современных мясокомбинатах (скотобойнях) значительно снижают риск возможной контаминации мяса и мясных изделий, а правильное замораживание, различные процессы производства мясных изделий, а также термообработка снижают риск контаминации почти до ноля.

К настоящему времени препараты группы фторхинолонов прочно зарекомендовали себя как высокоактивные химиотерапевтические средства системного действия с широким диапозоном показаний к применению в ветеринарной практике (Андреева Н.Л., 2001; Антипов В.А., 2002; Олейник Н.Н., Файрушин Р.Н., Исмагилова А.Ф., Чудов И.В., Кирилов В.Г., Антипов В.А., 2003; Самородова И.М., Рабинович М.И, Гюрджи-Оглы С.Ж., 2004).

В связи с вышеизложенным в ООО «Поливит» проведен целенаправленный синтез производных фторхинолонов адерентного типа действия (Струнин Б.П., Антипов В А., 2001).

Цель и задачи исследований. Целью наших исследований явились изучение токсико-фармакологических свойств Политрила - нового препарата из группы фторхинолонов, а также обоснование его применения в ветеринарной практике.

Для достижения поставленной цели нами были определены следующие задачи:

- установить параметры острой токсичности для цыплят и кур;

- изучить антиульцерогенные и противовоспалительные свойства Политри-ла;

- изучить процессы перекисного окисления липидов и антиоксидантные свойства Политрила;

- раскрыть некоторые механизмы иммунотропного и сенсибилизирующего действия Политрила;

- изучить мутагенные и эмбриотоксические свойства;

- изучить влияние Политрила на морфологические показатели крови и массу внутренних органов кур;

- провести гистологические и гистохимические исследования внутренних органов кур;

Научная новизна. Впервые определены параметры острой токсичности для цыплят и кур, изучены антиульцерогенные и противовоспалительные, мутагенные и эмбриотоксические свойства, а также антиоксидантные свойства Политри-ла. Впервые раскрыты некоторые механизмы иммунотропного и сенсибилизирующего действия Политрила, проведены гистологические и гистохимические исследования внутренних органов кур.

Практическая и теоретическая значимость работы. Установленные особенности и закономерности морфологических изменений крови, гистологических и гистохимических исследований внутренних органов открывают возможность и перспективы применения Политрила в птицеводстве для улучшения и постоянного поддержания продуктивного здоровья животных и птицы.

Получено временное наставление, утверждённое Департаментом ветеринарии РФ от 12 августа 2002 года № 001417 ОП. Представленные материалы используются в учебном процессе на кафедре внутренних незаразных болезней, клинической диагностики и фармакологии ФГОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет».

На защиту выносятся следующие положения:

- токсико-фармакологическая характеристика Политрила;

- обоснование степени безвредности применения Политрила;

- о возможности использования Политрила для постоянного поддержания продуктивного здоровья животных и птицы.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы были представлены и обсуждены на: X и XI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2003, 2004); Международной научно-производственной конференции по актуальным проблемам агропромышленного комплекса (Казань, 2003); Всероссийской научно-методической конференции патологоанатомов ветеринарной медицины (Уфа, 2003); на Международной научно-практической конференции «Агро-2003» (Уфа, 2003); XV Международной научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии» (Санкт-Петербург, 2003); Международной научно-практической конференции «Наука сельскохозяйственному производству и образованию» (Смоленск, 2004).

Настоящая работа проведена в соответствии с тематикой научных исследований Башкирского государственного аграрного университета (номер государственной регистрации 01.86.0-07.68.78).

Публикация результатов исследований. Основные положения диссертационной работы изложены в 10 печатных работах, опубликованных в периодической печати, материалах конференций и семинаров.

Внедрение результатов исследования: опытно-промышленные испытания проведены на птицефабриках «Турбаслинская» Благовещенского района, «Уфимская» Уфимского района, племптицесовхозе «Знаменский» Белебеевского района Республики Башкортостан.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, сведений о практическом использовании результатов, рекомендаций по использованию научных выводов, списка используемой литературы и приложения. Диссертация изложена на 135 страницах машинописного текста, содержит 19 таблиц и 35 рисунков. Список литературы включает 158 источников, из них 79 зарубежных авторов.

2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ РЕЗУЛЬТАТЫ 2.1 Материалы и методы исследований

Экспериментальные лабораторные исследования проведены на кафедре внутренних незаразных болезней, клинической диагностики и фармакологии Башкирского государственного аграрного университета на белых беспородных мышах и мышах линии СВА и C57BI с живой массой 18-20 г, на белых крысах с массой 175-220 г, а также в условиях производства птицефабрики «Уфимская» Уфимского района РБ на 1000 цыплятах и курах кросса «Родонит», совместно с Башкирской научно-производственной ветеринарной лабораторией в период с 2002 по 2004 гг.

Лабораторные животные содержались в одинаковых зоогигиенических условиях вивария. Белые мыши содержались по 30-40 голов, белые крысы по 20-25 голов в специальных клетках.

Кормление животных проводили согласно суточной потребности лабораторных животных (Ковалевский КЛ., 1986).

Изучение острой токсичности Политрила проводили по общепринятой методике (Саноцкий И.В., 1970; Елизарова О.Н., 1971).

Противоязвенную активность определяли на моделях язв, вызванных индо-метацином и ацетилсалициловой кислотой, путём двукратного введения их в желудок крысам через зонд с учетом трехкратных эффективных доз. (Аничков СВ., Заводская И.С., 1965)

Противовоспалительная активность Политрила была изучена на общепринятых моделях воспалений, вызванных лидокаина гидрохлоридом, яичным белком и формалином (Тринус Ф.П., Мохорт Н.Ф. 1975).

Определение антителообразующих клеток (АОК) в селезенке иммунизированных мышей определяли с помощью метода локального гемолиза в жидкой фазе, предложенного Jerne N. К и Nordin E. А. (1963) в модификации Cunningham (1965).

Воздействие исследуемого соединения на функциональную способность Т -эффекторов изучали в реакции гиперчувствительности замедленного типа (РГЗТ), спровоцированной динитрофторбензолом, растворенным в ацетоне.

Влияние препарата Политрил на слизистые оболочки мышей и крыс проводили с использованием глазной реакции. Сенсибилизирующее действие Политрила исследовали на морских свинках-альбиносах массой тела 290-300 г в реакции на введение синего Эванса. (Любимов Б.И., Миронова М.И., 1988).

Влияние Политрила на эффекторную способность Т-лимфоцитов в реакции трансплантационного иммунитета оценивали путём воспроизведения феномена «Трансплантант против хозяина».

Степень мутагенной активности Политрила исследовали в соответствии с методическими рекомендациями по мутагенной активности препаратов, применяемых в животноводстве, утверждёнными ГУВ РФ (1993) на индикаторные штаммы ТА1950, ТА98, ТА100, предложенные B.N. Ames (1973).

Изучение эмбриотоксического действия проводили согласно общепринятых методик (Wilson, J., 1962; Dawson, A.B., 1926).

Изучение влияния Политрила на процессы перекисного окисления липидов и систему антиоксидантной защиты проводили согласно методических указаний, разработанных в Российской академии совместно с сотрудниками отделения ветеринарной медицины Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института патологии, фармакологии и терапии (Бузлама B.C., Рецкий М.И., Мещеряков Н.П., 1997).

Гематологические показатели крови кур и цыплят (эритроциты, лейкоциты и тромбоциты) определяли при помощи счётчика форменных элементов крови PS-5. Определение содержания гемоглобина в крови птиц проводили при помощи микрофотометра гемоглобинометра MF-1020.

Дифференциальный подсчёт лейкоцитов производили путём микроскопии сухих, фиксированных, окрашенных по Романовскому-Гимзе мазков крови с дифференциальным подсчётом лейкоцитов (Кондрахин И.П., 1985).

Для гистологического исследования кусочки тканей фиксировали в 10% нейтральном формалине, после обезвоживания в серии спиртов возрастающей концентрации, заливали в парафин по общепринятой методике- Срезы готовили на микротоме LEICA RM 2145, окраску проводили гематоксилином и эозином. Для гистохимических исследований кусочки тканей фиксировали в жидкости Карнуа в модификации Лилли (абсолютный этанол - 75 мл, ледяная уксусная кислота - 25 мл.). Наличие белка выявляли путем окраски срезов раствором амидо-черного 10 В. Обнаружение гранул гликогена в цитоплазме гепатоцитов проводили путем постановки ШИК-реакции (Кононский А.И., 1976).

Микроскопические исследования проводились с использованием светового микроскопа JENAVAL фирмы «CARL ZEISS» (Германия).

Статистическую обработку цифровых данных проводили на PC Pentium IV, с использованием прикладной программы MS Excel®, определением средних ве-

личин (М), средней ошибки среднеквадратических отклонений выборки (6), определения степени достоверности по Стьюденту.

2.2 Результаты собственных исследований 2.2.1 Изучение острой токсичности Политрила

Параметры острой токсичности Политрила определяли на курах с живой массой 950-1250 г, и двухнедельных цыплятах кросса «Родонит» при перораль-ном введении. Препарат вводили в разных дозах - от 2000,0 мг/кг до 7500,0 мг/кг.

При введении Политрила в дозе 6750,0-7500,0 мг/кг цыплятам и курам признаки отравления проявлялись через 20-25 минут в виде подергиваний крыльев и лапок, запрокидывания головы, в последующем они совершали плавательные движения на животе, появлялись выделения из клюва. После введения препарата в токсической дозе смерть наступала через 65-70 минут. При введении Политрила в среднетоксических дозах у цыплят и кур отмечалось угнетение с понижением двигательной активности, у выживших цыплят и кур аналогичные симптомы отравления исчезали через 3,5-5 часов.

Коэффициент вариабельности (К) для цыплят составил К=1,8, для кур, К=1,7. Среднесмертельная доза для цыплят 5250,0±208,10 мг/кг и кур 5312,50±202,21 мг/кг.

Таким образом, в результате проведенных исследований установлено, что согласно ГОСТ 12.1.00. 7-76 препарат относится к 4 классу опасности (малотоксичные вещества).

2.2.2 Противоязвенная и противовоспалительная активность Политрила

На современном этапе проблема местного лечения воспалительных заболеваний приобретает большую актуальность. В качестве новых противовоспалительных средств для ветеринарии и медицины представляют интерес соединения, проявляющие антиоксидантную активность.

Симптоматическая терапия заключается в снижении воспалительной реакции, что позволяет успешно повлиять не только на острую боль, но и предотвращать или существенно ослабить последствия воспаления, например нарушение сердечного ритма. Механизм действия противовоспалительных препаратов включает торможение циклооксигеназы, биосинтез простагландинов и тромбок-санов. Следствием угнетения синтеза простагландинов является повреждение желудочно-кишечного тракта, задержка натрия и воды, повышение давления и бронхоспазм. Нами в опытах не отмечены побочные эффекты при длительном применении Политрила в дозах 3,4,5,6 мг/кг.

Как показали исследования на модели воспалений, вызванных формалином, каррагенином, лидокаином и яичным белком Политрил в дозах 2,3,4,5 и 6 мг/кг достоверно задерживает развитие воспалительного отека по сравнению с контролем. Так Политрил в дозе 5 мг/кг достоверно угнетает развитие отека при лидо-

каиновом воспалении на 27%, при белковом на 29,4%, а при каррагениновом на 38,7% по сравнению с вольтареном.

Причиной возникновения язвенной болезни является нарушение равновесия между факторами агрессивными для слизистой оболочки, такими как секреция кислоты и пепсина, применение нестероидных противовоспалительных препаратов, инфицирование пилорическим гелиобактером, протективными факторами.

Анализ литературных данных свидетельствует о том, что до настоящего времени остаются недостаточно изученными антиулыдерогенные свойства производных фторхинолонового ряда.

Проведенными исследованиями установлено, что при индукции язв индо-метацином и ацетилсалициловой кислотой, Политрил в значительной мере предохраняет слизистую оболочку желудка.

При применении Политрила наблюдалось минимальное количество изъязвлений. При его введении в дозе 5 мг/кг, противоязвенная активность превышает таковую у животных, получавших байтрил на 67%, а у получавших фуразолидон на 74,9%. Фуразолидон практически не предохранял слизистую оболочку желудка от повреждений и проявляет наименьшую антиульцерогенную активность. В контрольной группе животных отмечались язвенные поражения в различных отделах желудка. Слизистая оболочка желудка была отечной, гиперемированной, с множественными мелкими эрозиями и крупными язвами.

2.2.3 Влияние Политрила на процессы перекисного окисления липидов и антиоксидантные свойства организма

Регуляция перекисного окисления липидов осуществляется ферментами: каталазой, оксидазой и глутатионпероксидазой и др. Центральное же место в неферментативном звене антиоксидантной защиты занимает такой жирорастворимый витамин, как токоферол (витамин Е), в значительно меньшей степени каротин и ретинол (витамин А).

У кур, получавших Политрил в течение 3 дней в дозе 5 мг/кг живой массы птицы, по сравнению с курами контрольной группы установлена более низкая концентрация начальных и промежуточных продуктов перекисного окисления липидов.

Так уровень коньюгированных диенов в крови опытных птиц был ниже, чем у контрольных на 44,68±0,02%, а малонового диальдегида на 26,42±0,05%. У опытных кур установлена тенденция к повышению уровня глутатион пероксида-зы на 21,93±0,01%, глутатион редуктазы на 14,6±0,35% и каталазы на 14,75±0,4% (Р<0,05 по отношению к контролю).

Повышение уровня витаминов Е на 13,0±0,05% в крови и 42,38+0,4% в печени, А на 31,25±0,25% в крови и 59,61±2,2% в печени, каротина, глутатион пе-роксидазы, глутатион редуктазы и каталазы после применения Политрила в изучаемой дозе 5 мг/кг живой массы кур, свидетельствуют о благоприятном действии исследуемого препарата на обменные процессы в организме.

Таким образом, по нашему мнению, Политрил тормозит процессы разрушения биомембран и функциональную активность белков-ферментов, а функционирующие в организме животных механизмы антиоксидантной защиты играют исключительно важную роль в поддержании гомеостаза.

2.2.4 Влияние препарата Политрил на кожу и слизистые оболочки белых мышей и крыс

Кожа является основным путем для поступления вредных веществ в организм. В отличие от ингаляционного пути, при котором поступление вредных веществ в организм прекращается сразу по окончании экспозиции, даже после однократного попадания на кожу вещество поступает в кровоток довольно длительно, хотя и медленно.

Однократная аппликация 5%-ного раствора Политрила на кожу мышей не вызвала гиперемию. После однократного нанесения соединения наблюдалась эритема. Через три недели под влиянием Политрила кроме эритемы наблюдались сухость кожи. После нанесения изучаемого соединения на слизистую оболочку глаза, отмечалось незначительное покраснение конъюнктивы, удерживающееся в течение 20 минут.

2.2.5 Влияние Политрила на эффекторную способность Т-лимфоцитов в реакции трансплантационного иммунитета

Оценку действия Политрила на эффекторную способность Т-лимфоцитов в реакции трансплантационного иммунитета осуществляли воспроизведением феномена «Трансплантант против хозяина» (РТПХ) на белых беспородных крысах.

Эта реакция происходит за счет включения двух субпопуляций лимфоцитов, предшественников Т-эффекторов РТПХ и Т-амплификаторов. Как результат реакции - происходит накопление зрелых Т-клеток. Увеличение количества клеток в лимфоидных органах, селезенке или лимфатических узлах происходит не только вследствие пролиферации введенных лимфоцитов, но и в результате размножения собственных клеток реципиента (Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1981).

В результате наших исследований было установлено, что средний индекс ретракции по массе селезенки у крыс контрольной группы составил 3,49+0,40; у крыс получавших Политрил в дозе 5 мг/кг- 4,92+0,29.

Таким образом, Политрил положительно влияет на эффекторную способность Т-лимфоцитов в реакции трансплантационного иммунитета и не проявляет сенсибилизирующего действия.

2.2.6 Изучение эмбриотоксических и мутагенных свойств Политрила

В опытах по исследованию эмбриотоксического действия Политрила на крысах установлено отсутствие эмбриотропного действия. Основные показатели,

характеризующие эмбриотропное действие - предимплантационная смертность зигот, постимплантационная гибель эмбрионов и общая эмбриональная смертность у опытных животных, получавших препарат в исследуемых дозах были в близких пределах с контрольными (Р<0,05). При анатомическом исследовании внутренних органов и костной системы плодов дефектов развития не выявлено, что указывает на отсутствие эмбриотоксического действия.

Длина участков окостенения в закладках исследуемых костей и позвонков в опытных и контрольных группах отличались незначительно (Р<0,05).

Роды у опытных самок, получавших Политрил, наступали, как правило, на 23-24 дни беременности. В те же сроки наступали роды и у контрольных самок. Численность помета у самок, получавших препарат, была такой же, как и в контроле. Крысята рождались живые, без внешних аномалий. Длина и масса опытных крысят мало отличались от контроля на протяжении всего периода исследований.

Выявление генных мутаций Политрила тестировали на разных индикаторных штаммах помощью теста 8а1шопеИа/микроеомы в условиях метаболической активизации и без нее. Нами установлено, что при однократном введении Полит-рила в дозах 5, 50 и 500 мг/кг в течение 5 дней не обнаружено достоверного увеличения хромосомных аббераций при разных экспозициях. Качественный спектр хромосомных нарушений у мышей линии С57В1 контрольных и опытных группах включали гены и одиночные фрагменты в одинаковом объеме.

2.2.7 Влияние Политрила на гематологические показатели крови кур

Система крови принимает непосредственное участие в специфических и неспецифических реакциях организма, влияя на его резистентность и реактивность. Кровь чутко реагирует на различные воздействия и служит важным критерием физиологического состояния живого организма.

Для изучения влияния Политрила на систему кроветворения производилось измерение клинико-лабораторных показателей периферической венозной крови кур в возрасте 150 дней. Полученные данные (таблица 1) сравнивались с общепринятыми нормативами.

Исследование влияния Политрила в дозах 5 и 6 мг/кг на систему гемопоэза птиц, показало, что его введение к седьмым суткам достоверно изменяло картину периферической крови.

Изучаемый препарат положительно влияет на клетки белой крови и их продукцию в целом. Увеличение дозы Политрила до 6 мг/кг не выявило достоверных изменений в гемограмме, что может говорить о нецелесообразности дальнейшего увеличения дозы Политрила. Сравнение эффекта Политрила в дозе 5 мг/кг и фу-разолидона в дозе 5 мг на 1 голову, показало, что фуразолидон отрицательно влияет на изменение картины периферической крови. Так, в группе получаемой фуразолидон происходило снижение содержания эритроцитов и гемоглобина на 2,50%, 0,18% с достоверным одновременным повышением содержания лейкоци-

тов и цветного показателя в периферической крови кур на 1,13% и 5,0% соответственно.

1. Влияние Политрила на показатели крови кур в возрасте 150 суток (п=150)

Группа Доза препарата Лейкоциты, 109/л Эритроциты, 10!2/л Гемоглобин, г/л Цветной показатель

Исходные - 3,60+0,29 3,3±0,12 110,0+0,62 2,010,18

Политрил 5 мг/кг 3,72±0,30 3,2910,17 118,19+0,58 2,110,20

Политрил 6 мг/кг 3,84±0,31 3,31+0,15 118,2210,55 2,010,15

Байтрил 5 мг/кг 3,88±0,27 3,1610,21 114,1710,47 2,1710,20

Фуразолидон 5 мг/кг 3,5810,32 3,1210,03 109,2Ю,35 2,110,14

Контроль - 3,5410,16 3,210,04 109,410,20 2,010,17

Примечание Р<0,01

Кровь опытных кур характеризовалась достаточно высоким содержанием лейкоцитов, что типично для данного возраста (Болотников И.А., Соловьёв Ю.В. 1980).

Соотношение отдельных видов лейкоцитов находилось в пределах физиологических границ (Кудрявцев А.А., Кудрявцева Л.А., 1975; Болотников ИА, Конопатов Ю.В. 1993), однако наблюдались некоторые особенности. Так, в первой и второй опытных группах процентное содержание эозинофилов и базофилов было ниже, на 6,50 и 9,0% - в первой опытной группе и на 9,42% и 12,46% - во второй опытной группе соответственно, чем в контроле, что свидетельствует о более выраженной сенсибилизации кур контрольной группы. В то же время некоторое увеличение количества лейкоцитов на 5,08 и 8,47% в крови кур опытных групп по сравнению с контролем свидетельствует о мобилизации иммунной системы в ответ на применение Политрила Повышение уровня лейкоцитов в крови указывает на усиление специфического иммунитета птиц, поскольку эти клетки являются основным исполнительным звеном в проявлении клеточной и гуморальной защиты организма (Болотников И.А., Соловьев Ю.В., 1980, Болотников И. А., Конопатов Ю.В., 1987).

Увеличение в крови опытных кур (где применялся Политрил) содержание псевдоэозинофилов, по сравнению с контрольными составило в среднем 10,8 и 11,5%, что говорит об усилении бактерицидной и антитоксической функции крови.

Некоторое увеличение лимфоцитов и моноцитов свидетельствует об активизации иммунной системы и усилении неспецифического иммунитета у птиц.

2.2.8 Оценка воздействия Политрила на массу внутренних органов кур.

В последние годы в России шире стали применять в птицеводстве пробио-тики. Иммунобиологические препараты необходимы для формирования норма-биоценоза, повышения общей резистентности и продуктивности птицы.

С целью обнаружения анаболического действия Политрила (в зависимости от длительности применения) на внутренние органы кур в возрасте 20 недель, со средней массой 1080,0±55,136 г, кросса «Родонит» были созданы 2 группы (опытная и контрольная по 5 кур в каждой). Обе группы получали одинаковый рацион, дополнительно опытной группе в течение 5 дней задавали данный препарат в дозе 5 мг/кг живой массы. По массе внутренних органов у кур в 25 недельном возрасте получены следующие результаты: (таблица 2).

2 Воздействие Политрила на массу внутренних органов кур

Желе- Мы-

Намено-вание соединения Доза-мг/кг Сердце Селезенка Печень зистый желудок шечный желудок Легкие

Политрил 5 12,80± 1,19 6,18± 0,41 33,12± 1,74 10,64± 0,57 32,54± 1,44 12,14± 0,92

Байтрил О 10,5± 6,14± 31,56± 9,00± 30,85± 11,71±

0,99 0,71 1,59 0,52 1,59 0,82

Контроль - 10,30± 0,68 6,14± 0,68 31,16± 1,62 8,96± 0,44 30,74± 1,71 11,62± 0,78

Примечание: Р<0,05

Анализируя данные таблицы 2 следует отметить, что в 25 недельном возрасте у кур в опытной группе увеличилась масса сердца на 2,5 г, печени на 1,96 г, селезенки на 0,04 г, железистого желудка на 1,68 г, мышечного желудка на 1,8 г, лёгких на 0,52 г больше, чем в контрольной группе.

Результаты исследований показали, что Политрил оказывает благоприятное влияние на увеличение массы внутренних органов у кур.

По нашему мнению Политрил через гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковую систему оказывает влияние на белковый и углеводно-энергетический обмены. Анаболическое действие возможно связано с антиокси-дантной активностью.

Введение Политрила в состав полнорационных комбикормов для кур при их откорме на мясо обеспечивает повышение переваримости питательных веществ, улучшается конверсия корма. Об этом свидетельствуют данные наших опытов, где представлены показатели об увеличении массы внутренних органов опытных кур (печени, мышечного и железистого желудков, лёгких, селезёнки и сердца).

2.2.9 Влияние Политрила на печень кур

Печень принимает участие в метаболизме, детоксикации и иммунных процессах организма и быстро реагирует на многие экспериментальные воздействия. Поэтому с помощью гистологических и гистохимических методов можно судить как об интенсивности обменных процессов, так и о токсическом действии препаратов на гепатоциты и строму органа.

Данный эксперимент проведен с целью выявления токсического действия Политрила на структурные элементы печени кур.

Опыты проводились с лечебной целью на курах с признаками общей дистрофии. У птиц наблюдался дефицит живой массы тела, отставание в росте и развитии. Согласно литературным данным существует корреляция между состоянием некоторых внутренних органов и общим состоянием организма кур. Так, в частности, МЕ. Пилипенко с соавторами (1978) отмечает, что по мере того, как увеличивается истощение курицы, соответственно уменьшаются внутренние органы. При временном повышении кормового рациона начинается восстановление внутренних органов, но всякое нарушение нормального состояния организма приводит к тому, что в органе начинаются атрофические и дистрофические процессы.

При гистологическом исследовании печени кур 1 группы (контроль) были обнаружены различные патоморфологические изменения. Изменения гепатоци-тов выражались в белково-жировой дистрофии цитоплазмы разной степени выраженности. За счет этого цитоплазма гепатоцитов во многих участках выглядела очень светлой. Ядра в клетках были различной величины, с неравномерным содержанием и распределением хроматина, часто в виде диффузного распыления. Ядрышки в ядрах не определялись. В отдельных участках паренхимы, чаще вокруг портальных трактов, обнаруживались немногочисленные гепатоциты с ин-тактным строением. Таких участков было очень мало. Синусоиды между набухшими печеночными клетками не просматривались. В тех зонах паренхимы печени, где такие явления были сильно выражены, нарушалось характерное для нормы пластинчатое строение печени. Наряду с этим в перипортальных зонах печени обнаруживались признаки воспалительных явлении: интенсивная инфильтрация лейкоцитами, преимущественно - эозинофильными гранулоцитами. В инфильтрате выявлялись также сегментоядерные нейтрофилы, единичные лимфоциты, клетки фибробластического ряда. Они появлялись в зонах с некротическими изменениями гепатоцитов. В области некоторых портальных трактов определялась выраженная лимфоцитарная инфильтрация. В отдельных портальных венах и артериях определялся стаз крови. В некоторых желчных протоках выявлялись признаки интенсивного слущивания клеток эпителия.

Гистохимические исследования выявили отсутствие гранул гликогена в цитоплазме гепатоцитов. ШИК-реакция была отрицательной. При окраске амидо-черным 10В в цитоплазме гепатоцитов определялось значительное количество белка (++).

Во 2-ой опытной группе кур (применение Политрила в дозе 5 мг/кг, в течение 14 суток) патоморфологические изменения были менее выражены, чем в 1-ой

группе. В перипортальных областях некоторых портальных трактов печени выявлялись небольшие лимфоцитарные инфильтраты и изредка, состоящие из эози-нофильных гранулоцитов. Признаки дистрофических процессов в цитоплазме ге-патоцитов проявлялись в слабой степени в отдельных участках паренхимы печени Синусоиды между гепатоцитами хорошо просматривались. Они были выстланы веретеновидными эндотелиальными клетками. В просветах синусоидов выявлялись крупные звездчатые макрофаги печени. Гепатоциты выстраивались в пластинчатые структуры. Строение желчных протоков было без видимых патологических изменений. При проведении гистохимической ШИК-реакции в отдельных гепатоцитах определялись лилового цвета гранулы гликогена (+). При окраске амидочерным 10В в цитоплазме печеночных клеток печени трех из пяти крыс белок выявлялся в относительно большом количестве (+++). У двух животных в печеночных клетках белок определялся слабо ( + ).

В 3-ей опытной группе кур (назначение Политрила в дозе 5 мг/кг, в течение 21 суток) морфологическая картина печени соответствовала норме. Паренхима состояла из однородных мелких гепатоцитов с восстановленными тинкториаль-ными свойствами - цитоплазма окрашивалась в ровный розовый цвет. Гепатоци-ты были составлены в типичные печеночные пластины, состоящие из двух рядов клеток. Синусоидные капилляры выстилали веретеновидные эндотелиальные клетки, а в просветах хорошо определялись звездчатые эндотелиоциты (клетки Купфера). Области центральных вен и портальных трактов были без изменений. Признаков воспалительных явлений не обнаружено. В цитоплазме гепатоцитов гранулы гликогена определялись в значительном количестве (от ++ до +++). При окраске амидочерным 10В в цитоплазме большинства гепатоцитов белок выявлялся слабо (+). Но иногда встречались в паренхиме зоны, где он определялся в значительном количестве (++).

Таким образом, в печени кур 1-й и 2-й групп кур были обнаружены пато-морфологические изменения в виде беЛково-жировой дистрофии гепатоцитов и очаговых воспалительных процессов в строме органа, наиболее выраженных у птиц 1-й группы. В 3-ей группе животных морфологическая картина печени приближалась к норме.

2.2.10 Микроморфология клоакальной сумки кур под влиянием Политрила

Функциональное значение фабрициевой сумки подчеркивает необходимость гистол-морфологического изучения ее, что помогает расшифровывать многие невыясненные вопросы влияния различных факторов на формирование гуморального иммунитета.

Эпителий выстилающий клоакальную сумку птиц контрольной группы высокий цилиндрический, с базально расположенными ядрами овальной формы. Ядра относительно темные, хроматин в ядре мелкозернистый равномерно расположен в кариоплазме. Цитоплазма некоторых эпителиоцитов с вакуолизирован-ной цитоплазмой. В эпителиальном слое и субэпителиальной зоне стромы клоакальной сумки видны кистозные полости, а также папилломаподобные выросты.

Между эпителиоцитами часто встречаются клетки мигранты. Поверхность эпителия неровная, нечеткая, покрыта слоем нейтральных гликозаминогликанов, содержащих спущенные эпителиоциты и лимфоциты.

Субэпителиальная зона стромы клоакальной сумки представлена рыхлой соединительной тканью богатой фиброцитами, фидробластами, лимфоцитами и гистиоцитами.

Фолликулы небольшие, округлые, лежат на значительном расстоянии друг от друга и разделены широкими прослойками рыхлой соединительной ткани. Последняя инфильтрирована лейкоцитами, эозинофилами, макрофагами, лимфобла-стами и плазматическими клетками. Инфильтраты наблюдаются и под эпителием.

Фолликулы относительно рыхлые, делимфотизированные. Хорошо видны ретикулярные волокна. Граница между корковым и мозговым зонами выражена нечетко. Мозговая зона расширена, за счет чего фолликулы просветлены. Центры фолликулов заполнены молодыми формами клеток, очень редко макрофагами, и большим количеством лейкоцитов. Переферию мозговой зоны фолликулов составляют бластные формы клеток, окрашенные слабо базофильно. Корковая зона слабо выражена и в виде узкой полоски видна по периферии фолликула. Корко-вою зону составляют зрелые клетки, окрашенные более базофильно. В ней встречается значительное количество микрокист.

К четырнадцати суткам при малом увеличении микроскопа хорошо видны складки клоакальной сумки, покрытые эпителием. Два ряда фолликулов четко выражены и в них четко видны корковый и мозговой слои. Фолликулы располагаются тесно и разделены тонкими прослойками соединительной ткани.

Эпителий клоакальной сумки более низкий, чем у контрольных животных с четко выраженным апикальным краем. Ядра эпителиоцитов располагаются приблизительно на одном уровне. Они относительно светлые. Цитоплазма эпителио-цитов в виде сеточки. Между ними много клеток мигрантов. Эпителиоциты лежат на хорошо выраженной базальной мембране. Микро- и макрокисты, клетки в состоянии некробиоза отсутствуют.

Субэпителиальная зона клоакальной сумки представлена относительно плотной соединительной тканью. Клеточные инфильтраты в ней не выражены, но отмечается повышенное содержание гранулированных форм тканевых базофи-лов. Между фолликулами соединительнотканная строма органа более рыхлая с извитыми коллагеновыми волокнами направленными циркулярно.

Фолликулы характеризуются хорошо различимыми корковым и мозговым веществом. Корковые зоны более темные вследствие плотно расположенных дифференцированных В-лимфоцитов и плазмоцитов. Мозговая зона представлена рыхло расположенными бластами, лимфоцитами и макрофагами, хорошо видна ретикулярная ткань. Картина «звездного неба» не выражена. В фолликулах хорошо видна пограничная зона в виде скопления недифференцированных клеток с крупными светлыми эксцентрично расположенными ядрами.

В некоторых фолликулах делимфотизация мозгового вещества хорошо выражена и соединительнотканная строма видна в виде сеточки ретикулярной ткани.

К двадцать первым суткам после начала применения препарата при малом

увеличении микроскопа хорошо видны крупные фолликулы, большая часть которых удлиненной формы. Корковая и мозговая зоны фолликулов выражены не четко за счет повышения плотности расположения лимфоцитов.

Между фолликулами располагаются тонкие прослойки соединительной ткани. Поверхность эпителия клоакальной сумки неровная с глубокими инвагинациями и выростами.

Цитоплазма эпителиоцитов содержит мелкую эозинофильную зернистость, концентрация которой повышается ближе к апикальной части клеток.

Межфолликулярная соединительнотканная строма клоакальной сумки представлена тонкими прослойками более рыхлой соединительной ткани с небольшим количеством клеток. Фолликулы располагаются более плотно.

Фолликулы содержат уплотненные мозговые зоны, в ней превалируют малые лимфоциты, лейкоциты и редко эпителиальные клетки. Соединительнотканная строма хорошо выражена. Граница между корковым и мозговым слоями нечеткая. Кроме того, можно отметить формирование нескольких мозговых центров по типу формирования фолликулов в фолликуле. Такие центры представлены бластными формами клеток и эпителиальными клетками по типу светлых центров лимфоидных фолликулов селезенки.

Таким образом, сравнительное гистологическое исследование клоакальной сумки кур контрольной группы и опытных групп показывает, что применение препарата предотвращает процессы акцидентальной инволюции этого органа, что-наиболее ярко проявляется на 21 -е сутки.

ВЫВОДЫ

1. Среднесмертельная доза Политрила для цыплят кросса «Родонит» составляет 5250,0±208,10 мг/кг, для кур 5312,50±202,21 мг/кг. Согласно ГОСТ 12.1.00.7-76 препарат относится к 4 классу опасности (малотоксичные вещества).

2. Политрил в дозе 5 мг/кг обладает наиболее выраженным антифлогисти-ческим действием по сравнению с вольтареном и защищает слизистую оболочку желудка от появления язв, не тормозя секреции кислоты.

3. Политрил в дозе 5 мг/кг тормозит процессы разрушения биомембран и функциональную активность белков-ферментов, активизирует процессы антиок-сидантной защиты в организме кур, играя важную роль в поддержании гомеоста-за.

4. Политрил в пяти различных дозах: 2, 3, 4, 5 и 6 мг/кг - в течение 7 дней на фоне иммунизации оптимальной иммуногенной дозой эритроцитов барана приводит к достоверному увеличению количества антителообразующих клеток и положительно влияет на эффекторную способность Т-лимфоцитов. Супрессия клеточного звена иммунитета связана с противовоспалительным и антиоксидант-ным действием изучаемого препарата

5. Политрил не обладает эмбриотоксическими и мутагенными свойствами.

6. Применение Политрила способствует улучшению лимфоцитоза и моно-цитоза, что свидетельствует об активизации иммунной системы и стабилизации

неспецифического иммунитета у птиц. Оказывает благоприятное влияние на увеличение массы внутренних органов, что связано с анаболическим действием и антиоксидантной активностью.

7. Применение Политрила с лечебной целью в дозе 5 мг/кг приводит к восстановлению структуры печени у кур, а также предотвращает процессы акциден-тальной инволюции фабрициевой сумки, что наиболее ярко проявляется на 21 сутки.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Политрил рекомендуется для применения в птицеводстве и ветеринарии в качестве препарата, повышающего неспецифическую резистентность организма и ростостимулирующего средства. Препарат рекомендуется применять в дозе 5 мг/кг в течение 5 дней с лечебной и профилактической целью (временное наставление по применению препарата подготовлено на основании проведенных испытаний, утверждено Департаментом ветеринарии РФ от 12 августа 2002 года № 001417 ОП).

Политрил является перспективным в птицеводстве для улучшения и постоянного поддержания продуктивного здоровья животных и птиц.

Список трудов опубликованных по теме диссертации:

1. Шарипова Л.К. Противовоспалительное действие Политрила /Л.К. Ша-рипова, Р.Н. Файрушин, А.Ф. Исмагилова, И.В. Чудов, В.Г. Кирилов, ВА Анти-пов, Б.П. Струнин //Человек и лекарство: тез. докл. /X Российский национальный конгресс. -М., 2003. -С.767.

2. Шарипова Л.К. Влияние Политрила на реакцию гиперчувствительности замедленного типа /Л.К. Шарипова, Р.Н. Файрушин, А.Ф. Исмагилова, И.В. Чудов, В.Г. Кирилов, ВА. Антипов, Б.П. Струнин //Человек и лекарство: тез. докл. /X Российский национальный конгресс. -М., 2003. - С.767 - 768.

3. Файрушин Р.Н. Определение острой токсичности нового антибактериального препарата фторхинолонового ряда Политрил /Р.Н. Файрушин, Л.К. Шарипова, А.Ф. Исмагилова, И.В. Чудов, ВА Антипов, В.Г. Кирилов, Б.П. Струнин //Человек и лекарство: тез. докл. /X Российский национальный конгресс. -М., 2003.-С.675.

4. Шарипова Л.К. Изучение влияния Политрила на процессы перекисного окисления липидов и системы антиоксидантной защиты /Л.К. Шарипова, Р.Н. Файрушин, А.Ф. Исмагилова, И.В. Чудов, В.Г. Кирилов, В.А. Антипов, Б.П. Струнин // Материалы XV Международной научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии», Санкт-Петербург, 2003. -С.48-49.

5. Шарипова Л.К. Изучение противоязвенной активности Политрила /Л.К. Шарипова, Р.Н. Файрушин, А.Ф. Исмагилова, И.В. Чудов, В.Г. Кирилов, В.А.

Антипов, Б.П. Струнин //Новые фармакологические средства в ветеринарии: Сб. науч. тр. /XV Международная научно-практич. конф. -С.-Петербург, 2003. - С. 49-50.

6. Шарипова Л.К. Влияние препарата Политрил на кожу и слизистые оболочки белых мышей и крыс /Л.К. Шарипова, Н.Н. Олейник, А.Ф. Исмагилова //Международная научно-практическая конференция «Посвященная 130-летию казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана», Казань, 2003.-С. 266-267.

7. Шарипова Л.К. Изучение сенсибилизирующего действия Политрила на морских свинках /Л.К. Шарипова, Н.Н. Олейник, А.Ф. Исмагилова //Международная научно-практическая конференция «Посвященная 130-летию казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана», Казань, 2003.-С. 267-268.

8. Файрушин Р.Н. Изучение эмбриотоксических, тератогенных и мутагенных свойств Политрила /Р.Н. Файрушин, Л.К. Шарипова, И.В. Чудов, А.Ф. Исмагилова, В.Г. Кирилов, ВА Антипов, Б.П. Струнин //Журнал «БИО». -2003. -№ 5. -С.17-19.

9. Шарипова Л.К. Влияние Т-лимфоцитов в реакции трансплантационного иммунитета /Л.К. Шарипова //Человек и лекарство: тез. докл. /X Российский национальный конгресс. -М., 2004. - С. 850,

10. Шарипова Л.К. Биологическая оценка воздействия Политрила на массу внутренних органов кур /Л.К. Шарипова //Наука сельскохозяйственному производству и образованию: тез. докл. /Международная научно-практич. конф. -Смоленск, 2004. - С. 352-353.

На правах рукописи

ШАРИПОВА ЛИЛИЯ КАМИЛОВНА

ТОКСИКО-ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ПОЛИТРИЛА И ЕГО ВЛИЯНИЕ НА МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ ОРГАНОВ ПТИЦ

16.00.04 - ветеринарная фармакология с токсикологией 16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Сдано в набор 06.04.04. Подписано в печать 08.04.04 Формат 60x84 1/16 Усл. печ. л. 1.0. Печать оперативная. Бумага офисная Гарнитура «Times». Заказ № 1205. Тираж 100 экз.

Издательский центр УГАВМ, Лицензия ЛР № 01252 от 31 декабря 1997 г. 457100, Челябинская область, г. Троицк, ул. Гагарина 13 тел.: (35163) 2-64-75

19 M.'й 2005

'» г

Актуальность проблемы. В последние годы в производстве и переработке животноводческой продукции России сложилось тяжелое положение. Ощущается острейший дефицит в кормах, сокращается поголовье животных и количество птицы, увеличивается их заболеваемость, ухудшается санитарное состояние животноводческих помещений.

Следует отметить, что существующими путями, методами и средствами трудно обеспечивать продуктивное здоровье сельскохозяйственных животных и птицы. Со всей остротой встал вопрос о новой стратегической политике в этом направлении. Сущность нового направления заключается во введении в технологию получения, выращивания и использования животных, комплекса новых фармакологических средств и способов для постоянного поддержания их продуктивного здоровья (Беркович A.M., Бузлама B.C., 2003).

Из всех антибиотиков, применяемых в ветеринарной медицине, в ЕС применяется всего 1 % фторхинолонов, больше всего тетрациклинов (66%), беталактамов (9%) и макролидов (12%). Больше всего фторхинолонов в ветеринарной медицине в ЕС применяется в Нидерландах. Кроме того, существуют доказательства того, что строгие санитарные меры на современных мясокомбинатах (скотобойнях) значительно снижают риск возможной контаминации мяса и мясных изделий, а правильное замораживание, различные процессы производства мясных изделий, а также термообработка снижают риск контаминации почти до ноля.

К настоящему времени препараты группы фторхинолонов прочно зарекомендовали себя как высокоактивные химиотерапевтические средства системного действия с широким диапозоном показаний к применению в ветеринарной практике (Андреева H.JI., 2001; Антипов В.А., 2002; Олейник

H.H., Файрушин P.H., Исмагилова А.Ф., Чудов И.В., Кирилов В.Г., Антипов В.А., 2003; Самородова И.М., Рабинович М.И., Гюрджи-Оглы С.Ж., 2004).

В связи с вышеизложенным в ООО «Поливит» проведен целенаправленный синтез производных фторхинолонов адерентного типа действия (Струнин Б.П., Антипов В.А., 2001).

Цель и задачи исследований. Целью наших исследований явились изучение токсико-фармакологических свойств Политрила - нового препарата из группы фторхинолонов, а также обоснование для применения в ветеринарной практике.

Для достижения поставленной цели нами были определены следующие задачи: установить параметры острой токсичности для цыплят и кур; изучить антиульцерогенные и противовоспалительные свойства Политрила; изучить процессы перекисного окисления липидов и антиоксидантные свойства Политрила; раскрыть некоторые механизмы иммунотропного и сенсибилизирующего действия Политрила; изучить мутагенные и эмбриотоксические свойства; изучить влияние Политрила на морфологические показатели крови и массу внутренних органов кур; провести гистологические и гистохимические исследования внутренних органов кур;

Научная новизна. Впервые определены параметры острой токсичности для цыплят и кур, изучены антиульцерогенные и противовоспалительные, мутагенные и эмбриотоксические свойства, а также антиоксидантные свойства Политрила. Впервые раскрыты некоторые механизмы иммунотропного и сенсибилизирующего действия Политрила, проведены гистологические и гистохимические исследования внутренних органов кур.

Практическая и теоретическая значимость работы. Установленные особенности и закономерности морфологических изменений крови, гистологических и гистохимических исследований внутренних органов открывают возможность и перспективы применения Политрила в птицеводстве для улучшения и постоянного поддержания продуктивного здоровья животных и птицы.

Получено временное наставление, утверждённое Департаментом ветеринарии РФ от 12 августа 2002 года № 001417 ОП. Представленные материалы используются в учебном процессе на кафедре внутренних незаразных болезней, клинической диагностики и фармакологии ФГОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет».

На защиту выносятся следующие положения: токсико-фармакологическая характеристика Политрила; обоснование степени безвредности применения Политрила; о возможности использования Политрила для постоянного поддержания продуктивного здоровья животных и птицы.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы были представлены и обсуждены на: X и XI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2003, 2004); международной научно-производственной конференции по актуальным проблемам агропромышленного комплекса (Казань, 2003); Всероссийской научно-методической конференции патологоанатомов ветеринарной медицины (Уфа, 2003); на международной научно-практической конференции «Агро-2003» (Уфа, 2003); XV международной научно-практической конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии» (Санкт-Петербург, 2003); международной научно-практической конференции «Наука сельскохозяйственному производству и образованию» (Смоленск, 2004).

Настоящая работа проведена в соответствии с тематикой научных исследований Башкирского государственного аграрного университета (номер государственной регистрации 01.86.0-07.68.78).

Публикация результатов исследований. Основные положения диссертационной работы изложены в 10 печатных работах, опубликованных в периодической печати, материалах конференций и семинаров.

Внедрение результатов исследования: опытно-промышленные испытания проведены на птицефабриках «Турбаслинская» Благовещенского района, «Уфимская» Уфимского района, племптицесовхозе «Знаменский» Бе-лебеевского района Республики Башкортостан.

Структура и объём работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, сведений о практическом использовании результатов, рекомендаций по использованию научных выводов, списка используемой литературы и приложения. Диссертация изложена на 135 страницах машинописного текста, содержит 19 таблиц и 35 рисунков. Список литературы включает 158 источников, из них 79 зарубежных авторов.

ВЫВОДЫ

1. Среднесмертельная доза Политрила для цыплят кросса «Родонит» составляет 5250,0±208,10 мг/кг, для кур 5312,50±202,21 мг/кг. Согласно ГОСТ 12.1.00. 7-76 препарат относится к 4 классу опасности (малотоксичные вещества).

2. Политрил в дозе 5 мг/кг обладает наиболее выраженным антифлоги-стическим действием по сравнению с вольтареном и защищает слизистую оболочку желудка от появления язв, не тормозя секреции кислоты.

3. Политрил в дозе 5 мг/кг тормозит процессы разрушения биомембран и функциональную активность белков-ферментов, активизирует процессы антиоксидантной защиты в организме кур, играя важную роль в поддержании гомеостаза.

4. Политрил в пяти различных дозах: 2, 3, 4, 5 и 6 мг/кг - в течение 7 дней на фоне иммунизации оптимальной иммуногенной дозой эритроцитов барана приводит к достоверному увеличению количества антителообразую-щих клеток и положительно влияет на эффекторную способность Т-лимфоцитов. Супрессия клеточного звена иммунитета связана с противовоспалительным и антиоксидантным действием изучаемого препарата.

5. Политрил не обладает эмбриотоксическими и мутагенными свойствами.

6. Применение Политрила способствует улучшению лимфоцитоза и моноцитоза, что свидетельствует об активизации иммунной системы и стабилизации неспецифического иммунитета у птиц. Оказывает благоприятное влияние на увеличение массы внутренних органов, что связано с анаболическим действием и антиоксидантной активностью.

7. Применение Политрила с лечебной целью в дозе 5 мг/кг приводит к восстановлению структуры печени у кур, а также предотвращает процессы акцидентальной инволюции фабрициевой сумки, что наиболее ярко проявляется на 21 сутки.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Политрил рекомендуется для применения в птицеводстве и ветеринарии в качестве препарата, повышающего неспецифическую резистентность организма и ростостимулирующего средства. Препарат рекомендуется применять в дозе 5 мг/кг в течение 5 дней с лечебной и профилактической целью (временное наставление по применению препарата подготовлено на основании проведенных испытаний, утверждено Департаментом ветеринарии РФ от 12 августа 2002 года №0014 ПОП). ,,

Политрил является перспективным в птицеводстве для улучшения и постоянного поддержания продуктивного здоровья животных и птиц.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В течение последних 10 лет в ветеринарии представлено всего 6 новых противобактериальных действующих веществ, входящих в уже известные группы: тилмикозин относится к макролидам, флорфеникол - к фениколам, пирлимицин - к линкозамидам, цефтиофур - к цефалоспоринам, валнемулин - к плевромутилинам и тулатромицин - к макролидам (триамилидам). Озабоченность вызывает также факт, что все меньше средств вкладывается в разработки препаратов для так называемых «животных на откорме» (food producing animals) и всё больше — в разработки лекарственных препаратов для домашних любимцев (30%: 70%).

Таким образом, фторхинолоны ещё долгое время будут играть особо важную роль в лечении «продуктивнго скота» (англ. food animals), самыми важными из которых являются крупный рогатый скот, свиньи и птица. Однако в последнее время всё чаще поднимается вопрос о развитии устойчивости к фторхинолонам и переносе устойчивых штаммов бактерий от животных человеку. Устойчивость наблюдается у сальмонелл и кампилобактерий. В настоящее время этот факт имеет меньшее значение для здоровья человека, но, тем не менее, вызывает тревогу. Более того, в Нидерландах после начала введения энрофлоксацина цыплятам сообщалось о появлении устойчивых к ципрофлоксацину культур C.jejuni; и очень скоро после начала введения энрофлоксацина крупному рогатому скоту обнаружились устойчивые к ципрофлоксацину культуры S.typhimurum DT 104.

Тем не менее, некоторые важные факты указывают на то, что применение фторхинолонов в ветеринарной медицине не является серьёзной проблемой в отношении здоровья человека. Доказано, что:

• степень возникновения устойчивых к фторхинолонам бактерий в ветеринарной медицине мала, более всего она повышается в гуманной медицине, в которой фторхинолоны применяются чаще,

• резистентность возникает из-за мутаций, в то время как перенесение с плазмидами — спорадическое / единичное и поэтому не является клинически важным. В плазмидной репликации важную роль играет ДНК-гираза. Это означает, что фторхинолоны сокращают возникновение и перенос плазмидной устойчивости и у других антимикробных активных веществ благодаря механизму своего антимикробного действия,

• некоторые бактерии, обнаруживаемые у животных, могут вызывать различные заболевания у людей (Campylobacter sp., E.coli, Salmonella sp.),

• устойчивые культуры бактерий всё чаще присутствуют при применении фторхинолонов, но исчезают после окончания курса применения. Доказано также, что вирулентность устойчивых мутантов постепенно уменьшается, и эта часть флоры бактерий постепенно исчезает из-за различных проблем, связанных с ростом.

Препарат рекомендуется давать животным, основываясь на индивидуальном принципе там, где это возможно; время приёма препарата должно быть определённое и соответствовать научным данным о том, как устойчивость бактерий и оптимальное использование фторхинолонов в соответствии с их фармакокинетикой и фармакодинамикой уменьшает селекцию резистентных микробов. Очень важным моментом является также постоянный контроль качества применяемых фторхинолонов, т.к. большинство этих активных веществ, производимых в странах Азии, плохого качества!

При введении Политрила в дозе 6750,0-7500,0 мг/кг цыплятам и курам признаки отравления проявлялись через 20-25 минут в виде подёргиваний крыльев и лапок, запрокидывания головы, в последующем они совершали плавательные движения на животе, отмечались выделения из клюва. Смерть наступала через 65-70 минут после введения препарата в токсической дозе. При введении Политрила в среднетоксических дозах у цыплят и кур отмечалось угнетение с понижением двигательной активности, у выживших цыплят и кур аналогичные симптомы отравления исчезали через 3,5-5 часов.

Среднесмертельная доза Политрила для белых мышей составила: 2575,0±91,1 мг/кг, крыс 3066,6±46,6 мг/кг, цыплят 5250,0±208,1 мг/кг и кур 5312,5±202,21 мг/кг. Согласно ГОСТ 12.1.00.7-76 препарат относится к 4 классу опасности (малотоксичные вещества).

При применении Политрила наблюдалось минимальное количество изъязвлений (2,2±0,32) вызванных действием индометацина. При его введении в дозе 5 мг/кг противоязвенная активность составила 6,95, превысив таковую у животных, получавших байтрил, на 67%, а у получавших фуразоли-дон на 74,9%. Фуразолидон практически не предохранял слизистую оболочку желудка от повреждений и проявил наименьшую антиульцерогенную активность. В контрольной группе животных отмечались язвенные поражения в различных отделах желудка. Слизистая оболочка желудка была отечной, гиперемированной, с множественными мелкоточечными эрозиями и крупными язвами.

При моделировании «ацетилсалициловых» язв у крыс было установлено, что Политрил в дозе 5 мг/кг обладает выраженной антиульцерогенной активностью. Так, при его применении индекс изъязвления уменьшился с 16,17±0,32 (контроль) до 2,9±0,3. Противоязвенная активность составила 6,30. Как видно из проведенных исследований, байтрил и фуразолидон обладают минимальной противоязвенной активностью.

Политрил в дозе 5 мг/кг обладает наиболее выраженным антифлоги-стическим действием по сравнению с вольтареном и защищает слизистую оболочку желудка от появления язв, не тормозя секреции кислоты.

На современном этапе проблема местного лечения воспалительных заболеваний приобретает большую актуальность. В качестве новых противовоспалительных средств для ветеринарии и медицины представляют интерес соединения, проявляющие антиоксидантную активность.

Как показали наши исследования на моделях воспалений, вызванных формалином, каррагенином, лидокаином и яичным белком, Политрил в дозах 2,3,4,5 и 6 мг/кг достоверно задерживает развитие воспалительного отека по сравнению с контролем. Так, Политрил в дозе 5 мг/кг достоверно угнетает развитие отека при лидокаиновом воспалении на 27%, при белковом на 29,4%, а при каррагениновом на 38,7% по сравнению с вольтареном.

Известным и традиционным методом количественной оценки изменений активности В-звена иммунитета является метод определения числа анти-телообразующих клеток (АОК) в селезенке по Jerne N.K., Nordin Е.А., который в 1965 году Cunningham назвал методом свободной суспензии.

Введение Политрила в пяти различных дозах: 2, 3, 4, 5 и 6 мг/кг в течение 7 дней на фоне иммунизации оптимальной иммуногенной дозой эритроцитов барана приводило к достоверному увеличению количества антите-лообразующих клеток. Причём максимальная активность проявилась при дозе 5 мг/кг (в 10,4 раза больше по сравнению с контрольным значением и в 5,3 раза активнее оксиметилурацила, байтрила, которые рекомендованы, в качестве ростостимулирующих средств для телят и цыплят).

Применение антигистаминных препаратов при аллергии замедленного типа теоретически мало обосновано, тем не менее, в практике они применяются очень часто, формируя при этом смешанную аллергию. Нами исследована эффективность Политрила при гиперчувствительности замедленного типа, моделированной методом «лапки».

Все вновь внедряемые в медицину и ветеринарию соединения подлежат оценке с позиции возможного раздражающего или повреждающего действия на кожу и развитие контактного неаллергического дерматита.

Политрил в пяти различных дозах: 2, 3, 4, 5 и 6 мг/кг - в течение 7 дней на фоне иммунизации оптимальной иммуногенной дозой эритроцитов барана приводит к достоверному увеличению количества антителообразующих клеток и положительно влияет на эффекторную способность Т-лимфоцитов.

Супрессия клеточного звена иммунитета связана с противовоспалительным и антиоксидантным действием изучаемого препарата.

Изучение мутагенных свойств новых химических препаратов является одним из необходимых этапов токсикологического исследования.

При испытании Политрила с помощью теста 8а1шопе11а/микросомы на разных штаммах ТА98, ТА 1950, ТА 100 во всех случаях были получены отрицательные результаты, демонстрирующие отсутствие мутагенных свойств.

Основные показатели, характеризующие эмбриотропное действие препарата - предимплантационная смертность зигот, постимплантационная гибель эмбрионов и общая эмбриональная смертность у опытных животных, получавших препарат в исследуемых дозах, были в близких пределах с контрольными (Р<0,05). При микроскопическом наружном осмотре плодов и их плацент в опытных и контрольных группах изменений не обнаружено. При анатомическом исследовании внутренних органов и костной системы плодов дефектов развития не выявлено, что указывает на отсутствие эмбриотоксиче-ского действия.

Установлено, что роды у опытных самок, получавших Политрил, наступали, как правило, на 23-24 дни беременности. В те же сроки наступали роды и у контрольных самок. Численность помета у самок, получавших препарат, была такой же, как и в контроле. Крысята рождались живые, без внешних аномалий. Длина и масса опытных крысят мало отличались от контроля на протяжении всего периода исследований. Как в опытных группах, так и в контроле шерстный покров у крысят появлялся на 3-5 день, ушные раковины открывались на 4-5 день, резцы прорезывались на 8-9, - открывание глаз происходило на 16-18 день. При исследовании крысят с помощью горизонтальной и вертикальной веревки не было выявлено различий с контролем в способности удерживаться на веревке. Постнатальная гибель крысят наблюдалась в единичных случаях и была сравнима с контролем. Вышесказанное свидетельствует об отсутствии отрицательного влияния Политрила на постнатальное развитие крысят. Эти данные позволяют сделать заключение о том, что тестируемый препарат не влияет отрицательно на постнатальное развитие крысят.

Регуляция перекисного окисления липидов осуществляется ферментами: каталазой, оксидазой и глутатионпероксидазой и др. Центральное же место в неферментативном звене антиоксидантной защиты занимает такой жирорастворимый витамин, как токоферол (Витамин Е), в значительно меньшей степени каротин и ретинол (Витамин А).

По нашему мнению, Политрил тормозит процессы разрушения биомембран и функциональную активность белков-ферментов, а функционирующие в организме животных механизмы антиоксидантной защиты играют исключительно важную роль в поддержании гомеостаза.

Система крови принимает непосредственное участие в специфических и неспецифических реакциях организма, влияя на его резистентность и реактивность. Кровь чутко реагирует на различные воздействия и служит важным критерием физиологического состояния живого организма.

Политрил положительно влияет на клетки белой крови и их продукцию в целом. Соотношение отдельных видов лейкоцитов находилось в пределах физиологических границ (Кудрявцев A.A., Кудрявцева JI.A., 1974; Болотников И.А., Конопатов Ю.В. 1993), однако наблюдались некоторые особенности. Увеличение количества лейкоцитов на 5,08 и 8,47% в крови кур опытных групп по сравнению с контролем свидетельствует о мобилизации иммунной системы в ответ на применение Политрила. Повышение уровня лейкоцитов в крови указывает на усиление специфического иммунитета птиц, поскольку эти клетки являются основным исполнительным звеном в проявлении клеточной и гуморальной защиты организма (Болотников И.А., Соловьев Ю.В., 1980, Болотников И.А., Конопатов Ю.В., 1987).

В последние годы в России шире стали применять в птицеводстве про-биотики. Иммунобиологические препараты необходимы для формирования нормабиоценоза, повышения общей резистентности и продуктивности птицы. Политрил оказывает благоприятное влияние на увеличение массы внутренних органов у кур.

По нашему мнению, Политрил через гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковую систему оказывает влияние на белковый и углеводно-энергетический обмены. Анаболическое действие, возможно, связано с анти-оксидантной активностью.

Введение Политрила в состав полнорационных комбикормов для кур при их откорме на мясо обеспечивает повышение переваримости питательных веществ, улучшается конверсия корма. Об этом свидетельствуют данные наших опытов, где представлены^токазатели об увеличении массы внутренних органов опытных кур (печени, мышечного и железистого желудков, лёгких, селезёнки и сердца).

Печень принимает участие в метаболизме, детоксикации и иммунных процессах организма и быстро реагирует на многие экспериментальные воздействия. Поэтому по гистологическим и ультраструктурным изменениям можно судить как об интенсивности обменных процессов, так и о токсическом действии препаратов.

Данный эксперимент проведен с целью выявления токсического действия Политрила на структурные элементы печени кур.

Опыты проводились с лечебной целью на курах с признаками общей дистрофии. У птиц наблюдался дефицит живой массы тела, отставание в росте и развитии. Согласно литературным данным существует корреляция между состоянием некоторых внутренних органов и общим состоянием организма кур. Так, в частности, М.Е. Пилипенко с соавторами (1978) отмечает, что по мере того, как увеличивается истощение курицы, соответственно уменьшаются доли внутренних органов/Ьри временном повышении кормового рациона начинается восстановление внутренних органов, но всякое нарушение нормального состояния организма приводит к тому, что в органе начинается акцидентальная инволюция. , и

Согласно нашим исследованиям, применени£Политрила слечебной целью в дозе 5 мг/кг в течение 21 суток, морфологическая картина печени кур соответствовала норме. Пареюшма состояла из однородньигмёлких гепатоцитов с восстановленными тинкториальными свойствами - цитоплазма окрашивалась в ровный розовый цвет. Гепатоциты были составлены в типичные печеночные пластины, состоящие из двух рядов клеток. Синусоид-ные капилляры выстилали веретеновидные эндотелиальные клетки, а в просветах хорошо определялись звездчатые эндотелиоциты (клетки Купфера). Области центральных вен и портальных трактов были без изменений. Признаков воспалительных явлений не обнаружено. В цитоплазме гепатоцитов гликоген определялся в значительном количестве (от ++ до +++). При окраске амидочерным 10В в цитоплазме большинства гепатоцитов белок выявлялся слабо (+).

Функциональное значение фабрициевой сумки подчеркивает необходимость гисто-морфологического изучения ее, что помогает расшифровывать многие невыясненные вопросы влияния различных факторов на формирование гуморального иммунитета.

Изучение структуры центральных органов иммунитета птиц контрольной и опытных групп позволяет прийти к выводу, что применение Политри-ла способствовало повышению естественной резистентности организма, благоприятно влияя на структурные особенности клоакальной сумки.