Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Токсическое действие Т-2 токсина на организм кур иобоснование максимально допустимого уровня в кормах

НАЦЮНАЛЬНИЙ АГРАРНИЙ УН1ВЕРСИТЕТ

ГБ ОД

-: На правах рукопису

г," т

К0РЗУНЕНК0 Ольга Федот!вна

ТОКСИЧНА Д1Я Т-2 ТОКСИНУ НА ОРГАН13М КУРЕЙ ТА ОБГРУНТУВАННЯ МАКСИМАЛЬНО ДОПУСТИМОГО Р1ВНЯ В КОРМАХ

16.00.03 — ветеринарна лпкробюлопя, в1русолог1я, егп'зоотолопя, ¡мунолопя I мшолопя

АВТОРЕФЕРАТ

дисертацп на здобуття наукового ступеня кандидата ветеринарних наук

КиТв — 1995

ДисертаиЛя в

р у к о п и с.

Робота виконаиа в Гнститут! ветеринарноГ медицини УААН.

Науков1 кершники: г- доктор ветеринарних наук Погребняк

Л1д1я [ваншна; ,

— кандидат ветеринарних наук Ображей Анатолш Федорович.

Офщжж опоненти: ' лауреат Державно? премп, доктор бюло-

пчннх паук, професор Харченко Св)тлана МихолаТвна;

— кандидат ветеринарних наук КулМч Ми-кола Миколанович.

ПрОВ1ДНа оргажзащя — 1нститут експериментально! I клшшпо! вс-

теринарно! медчцшш УААН.

Захист дисертацп в1дбудеться && ?2£ОЬ о . . . год. на зааданш спещ°ал1зованоТ ради Д.01.05.10 в Нацюналыюму аграрному ушверснтет1 за адресою: 252041, м. КиТв, вул. Потехша, 16, уч. корпус, 12, ауд. 412.

Просимо взяти участь в обговорешп дисертацп при и захист! або вислати Ваш вщгук на автореферат в 2-х пришрниках, засв1дченпй печаткою, за адресою: 252041, м. КиГв-41, вул. ГероГв оборони, 15, НАУ, сектор захнсту ди-сертацш.

3 дисерташею можна ознайомитись у б{блютещ Нащо- • пального аграрного ушверситету.

Автореферат роз|'сланнй « . ^С/ОСС 1995

Р-

Вченнй секретар спец1ал1зованоТ ради, професор

В. А. БОРТН1ЧУК

ЗАГАЛЬНА ХАРАКТЕРИСТИКА РОБОТИ

Актуадьн1сть теми. Серед факгор1в 8овн1инього середовища, як! впливаоть на орган1вм тварин 1 птиц1 велика увага прид1ля-еться продуктам метабол1вму м!кроскоп1чних пл!сеневих гриб1в -Шкотоксинам. На сьогодн1шн1й день в1домо б1ля 150 ввд!в шйсеневта гриб!в,як1 продукують майзке 300 м!котоксин1в, р1з-них еа сво1ми токсичними властивостями та х1м1чною структурою. Вид1лено 1 вивчено в тему числ1 i 45 трихотеценових м!ко-•roKCHHiB, як1 в природн1ми аабруднювачами корм1в та продук-т!в харчування.

Згодовування с.-г. тваринам та птиц! корм1в, контам1нова-них м1котоксинами, викликае у них м1котоксикози, як1 приэводять до поПршення ефективност! використання корму, вменшення приросту,. порушення в1дтворення та продуктивност1 , зниження резистентност1. порушення 1мувного стану погол1в'я, вб1льшення 8агибел1 Ix.

Найб1лып вежливою групою м!котоксин1в е фувар1отоксини, як! продукуються грибами роду Fusarium секцП Sporotrichiella.

Бт1олог1чна роль деяких гриб!в - продуцент1в роду Fusarium в розвитку ал!ментарних токсикоз1в у людини 1 с.-г. тварин була встановлена давно тагами вченими. як Ворон1н М.С.,1890 ; Со-poKiu H.B., 1890; Габрилович Д.Е.» 1906; Квашн1на С.С.. 1933; 0арк1сов А.Х., 1944, 1948, 1954; Спесивцева H.A., 1964; Дхила-вян Х.А., 1971; Б1лай B.I.. 1970.

- г -

Серед спонтанних випадк1в м1котоксикоз1в птиц! в наш!й кра1н1 гареестрований т!льки фузар1отоксикоз. При цьому, як правило, корми були вракен! грибами Fusarlum sporotrichiella Bllal ( Яровой П.Ф., 1961; Б1рб1н С.С., 1967; Дорошко I.M.. -Котик A.M., 1975). В вв'яку в цим фувар1отоксикоз вважаеться одним is головнях м1котоксикоэ1в птиц! (BipQiH С.С.,1966; Курманов 1.0., 1960, 1971; Спесивцева 1.0., 1964; Котик A.M., 1976, 1980).

До фу8ар1отоксин1в в1дносяться токсичн! стероли (Ол!фсон Л.Е.» 1957), аеараленон ( Urry W.et fl., 1966), бутенолид (Yates S.S. et rl., 1968, 1970) i трихотеценов1 м1котоксини (Bamburg J.R., 1968). Т-2 токсин - один 1з найб1льш токсичних серед трихотеценових м!котоксин1в 1 в ет1олог1чним фактором фузар1отоксикоз!в птиц1 (Wya'tR.D., Hamilton Р.В., 1975; Hamilton Р.В. et al., 1975 ; Котик A.M., 1976).

За останн! два десятил1ття встановлена х!ы1чна структура Т-2 токсину, вивчен1 ф!зико-х1м!чн! властивост1 , розроблен! методи його отрицания, а таксж д1я на тварин. Але ще не вияв-лен! умови виникнення токсикозу, не достатньо вивчена чут-лив1сть р1зних вид!в тварин та птиц1 до даного токсину, особливо в сублетальних дозах, 1 механ18м д!1 Т-2 токсину. Не встановлен! також максимально допустим! р!вн! /ЩР/ цього токсину в кормах для р1зних вид1в тварин 1 птиц! та не вивчено його накопичення 1 виведення з орган!зму.

Мета досл1джень. Метою роботи було вивчення чутливо-ст! курей до Т-2 токсину при одноразовому та тривалому надход-женн! його в орган1зм в гострому та хрон!чн,..1у досл1дах, вивчення ознак Т-2 токсикозу, визначення його кумуляцП в ор-

ган18м1 курей. експериментальне обгрунтування максимально допустимого р!вня ЛЩР/ токсину в кормах для курей.

Робота проводилась эг1дно план1в НДР.

Основн! вавдання досл!джень:

1. Отримати очищений Т-2 токсин для проведения досл1д!в.

2. Вивчити чутлив!сть курей до Т-2 токсину 1 особливост! кл1н1ко-морфолог!чного виявлення гострого та хрон1чного пе-реб1гу експериментальпого Т-2 токсикозу.

3 Вивчити кумулятивн! вдастивост! Т-2 токсину в ор-ган1ам! курей.

4.Теелетично 1 екслериментально обгрунгувати максимально допустимий р!вень Т-2 токсину в кормах для курей.

Наукова новизна. Вперше вивчена д!я субтоксичних доз Т-2 токсину на оргаи18м курей. Вувчена чутлив1сть курей до Т-2 токсину, клШчяа картина 1 патологоанатом1чн! зм!ни при гос-трому та хрон!чному токсикозах. Встановлен1 ДЦ50 Т-2 токсину для курей в гострому досл!д1, максимально нед!юча, п1дпорогова та порогова дози в хрон1чному досл1д1. Вперше отриман! дан1 про кумуляЩю Т-2 токсину в орган1зм! курей. Теоретично 1 екслериментальяо обгрунгований максимально допустимий р1вень Т-2 токсину в кормах.

Удосконалено спос1б отримання Т-2 токсину з культури гриба-продуцента Г.эрогоШсМеПа уаг роае В11а1 штам 407/4.

Практична ц!нн1сть роОоти. Дан! про чуглив!сть курей до Т-2 токсину,матер!ади гострого та хрон1чного Т-2 токсикозу курей, кумулятивн! властивост! Т-2 токсину та експериментальне

обгрунтування максимально допустимого р1вня токсину в кормах для курей дадуть вмогу практичним ветеринарним спец!ал1стам 1 лабораториям прац1вяикам своечасно д1агностувати випадки от-руення птиц!, квал1ф1ковано використовувати корми, як1 м1стять м1котоксин та орган1вовувати проф1лактичн! ваходи.

Розробден1 техн!чн! умови, 1нструкц1я по виготогленню та контролю якоот1 1 настанова по 8асгсюуванно Т-2 токсину вико-рисговуються для отримання 1 застосуванкя м!котоксину лабора-тор!ями р1вних проф1л1в для м 1котоксиколог1чних досл1джень корм1в та продукт!в харчування, де Т-2 токсин використовують в якост1 речовини - св!дка.

Матер1али досл1джень ввАйшли в " Временные предельно допустимые концентрации /ПДК/ Т-2 токсина в кормах и воде " 1 '* Рекомендации по предупреждению ущерба в животноводстве при поражении животных Т-2 токсином ". роароблен! сп!льно 8 Всесоюзним науково-досл!дним ветеринарним 1нститутом /ВНДВ1/ м.■Казань та ватверджен1 ГУВ Держатропрому СРСР.

Апробац1я роботи. Магер1али дисертацИ допов!дались на :

- зас!даннях вчено1 ради науково- досл1дного ветеринарного 1нституту, ы. Казань.- 1987, 1988, 1989, 1990 р.р.;

- м!жлабораторному вас1данн! сп!вроб1тник1в 1нстигуту ветеринарно! ыедицини УААН, м. Ки1в.- 1995 р.;

- науково-практичн1й конференцН "Не1нфекц1йна патолог!я тварин", м. Б1ла церква. - 1995 р.

Публ1кац11. По тем! дисертацИ опубл!ковано 8 наукових роб1т.

Об'ем 1 структура дисертацИ. -Дисертац1я викладена на 158 стор1нках машинописного.тексту, 1люстрована 24 таблицями, 11

- Б -

фото8н1мками. Об'ем тексгово1 часиши робота складае 102 стор1нки. Робота складае гься el вступу, огляду д1тератури, власних досл!джень, обговорення результата досл1джень, висковк1в, практичних пропозиц1й 1 додатк1в. Список використа-но1 лИератури включав 363 джерела, в тому числ! 125 в1тчиэня-них та 238 - заруб1жних автор1в.

На вахист виносяться сл1дуюч1 матер1али :

- вдосконалення способу отримання Т-2 токсину;

- дан! гострого та хрон!чного nepeölry експериментально-го Т-2 токсикозу курей;

- матер1али про кумуляц!» Т-2 токсину в орган1зи1 курей;

- дан1 теоретичного 1 експериментального обгрунтування максимально допустимого р1вня ЛЩР/ Т-2 токсину в кормах для курей.

ВЛАСН1 Д0СЛ1ДЖЕННЯ \

Матер! али та метода. Досл1джешм проводились в лабора-торИ м1котоксиколог11 Укра1нського науково- доел i дного ветеринарного 1нституту.

Експерименти виконан1 на 85 курях 12-ти ы!сячного в1ку в умовах експеримевтально! бази "Пияипович!". В сво!й робот! ми користувалися токсиколог1чшпш. хроматограф1чними, бак-тер1олог1чвими, клШчними, б1ох1м!чними. патоморфолог1чними, г1столог1чними та х1м1ко-токсииолог1чними методами досл1джень.

В досл!дах використовували Т-2 токсин, отрицаний в лабо-раторН м1котоксиксшогИ вг1дно ТУ 10-07-301-86 "Т-2 токсин", затверджених ГУВ Держагропрому СРСР 14.11.1986 р.,а та ткж. культуру гриба-продуцента Fusarium sporotrlchlella var роае Bllal

штам 407/4. отриманого нами 1а в1дд1лу незара8них хвороб Ук-раХнського науково-досл1дного 1нституту еюспериментально! ве-териларП /м.К1ровоград/.

Т-2 токсин отримували за методом, описаним в "Временной инструкции по изготовлению и контролю Т-2 токсина для мико-токсииологических исследований", ватверджен!й УкрНДВ! 16.06.1986 р.

В процес! сдержанна Т-2 токсину проводилось посПйне вдосконалення способу отршання цього токсину 1в культури гриба-продуцента, розробленого нами ран!ше в сп1вавторств1 8 Котиком A.M., Труфановок) В.О., Рухлядою В.В. /1986/.

Спочагку гриб-продуцент культивували на зволоженому npocl при температур! 4-6* С протягом трьох м1сяц!в, в подальше робот! продуцент вирощували на зерн! жита при температур1 24*С протягом 7 дн1в а пот!м при температур! 4-6'С протягом м!сяця.

Для екстракцП Т-2 токсину 1в нативно! культури гриба-продуцента використовували ацетон 1 етилацетат.

Очистку Т-2 токсину проводили методом хроматограф!! на колонц! в посл!довною кристал1аац!ею. В якост! адсорбент1в використовували окис алш!н!ю 40/250 мкм лужний, окис алюм1н1ю 40/400 мкм нейтральний, виробництва Чехословаччина,сил1кагель Л 100/400 мкм, виробництва Чехословаччина 1 окис алш!н!ю для хроматограф!! ТУ-6-09-3916-75 в!тчизняного виробництва.

ЕшоаЩю т-2 токсину 1в колонки проводили спочатку ва до-помогою семи фракц1й розчинник!в: 1-а - гексан, '¿.-а -гексан-бензол в об'емному сп1вв1дношенн! . 1:9, , а-я -гексан-бензол /1:7/, 4-а - гексан-бензол /1:5/, 5-d гексан-бензол /1:3/,() 6-а - гексан-бензол /1:2/, 7-а -

гексан-бензод /1:1//. 3 метою спрощення технологи хроматограф! чно! очистки 1 скорочення строк1в отримання токсину елшц1ю зд!йсиовали посл!довно гексаном, сум1шшю гексана в бензолом в об'емному сп1вв1дношенн! 1:1 1 бензолом.

1дентиф1кац1ю отриманого кристал1чного токсину проводили зг!дно "Методических указаний по обнаружению, идентификации и определению Т-2 токсина в пищевых продуктах и продовольственном сырье", ватверджених зам.Головного державного сан1тарного л1каря СРСР 29.12.1984 р.

При вивченн1 гострого Т-2 токсикобу використано 30 курей 12- ти м!сячного в1ку, як1 були под1лен1 на б труп, за принципом аналог1в, по 5 гол1в у кожн!й груп1. Птиц1 п'яти труп 1ндив!дуально одноразово перорально вводили Т-2 токсин в дозах 1,3,5,7 1 9 мг/кг живо! маси. Шосту групу птиц1 використовува-ли в якост1 контролю. В ход! досл1ду за птицею вели пост!йне кл1н1чне спостереження, рееструючи строки розвитку токсикозу 1 загибел1 птиц!. ДД50 Т-2 токсину для курей вираховували по В. Б. Прозоровскому (1962).

Вивчення кумуляцП Т-2 токсину зд1йсюовали двома методами; метод Ю.С.Каган 1 В.В.Станкевич та метод Л!м Р.К. з сп1вавто-рами. За мотодом Ю.С.Каган 1 В.В.Станкевич в досл1д1 використано 15 курей. як1 под1ляли на 3 групи, за принципом аналог^, по 5 гол1в. Птиц1 першо1 групи. п1сля попереднього одноразового введения Т-2 токсину в доз! 3 мг/кг, щоденно перорально протягом 29 дн!в вводили токсин в доз! 0,3 мг/кг, дру-го! - в доз! О,с-1 мг/кг ! третьо! - в дов! 1,2 мг/кг. Досл!д тривав 30 дн!в. В ход! досл!ду за птицею вели пост1йне спостереження. '■>

Вивчення кумуляцП Т-2. токсину за методом Р.К.Л!м з

- а -

сп 1вавторами проводили на п'яти курях, трив.ад1сть досл1ду тага» була 30 дн1в. Але Т-2 токсин пгидя отримувала в доз1, яка зб1льшувалась через кожи! 4 дн! (табл.1)

1 ■ ■ ■■ 1Дн1 |досл1ду 1 — " |Частина ДЦ50 1 1 1 • • | Доза токсину | /иГ/КГ/ 1 "1..........- ------------- I Сумарна доза I /мг/кг/ 1 1

1 I 1-4 1 1 0,1 1 1 0.6 1 1 2.4

| 5-8 1 0.15 1 0к9 1 6.0

1 0-12 I 0.22 1 1.32 1 11,28

113-16 1 0.34 1 2.04 | 19,44

117-20 1 0.5 1 3,0 | 28,44-31,44

121-24 1 0.75 1 4,5 1 49,44

125-28 1 | 1 1.12 1 I.......... ., _ 1 6,72 1 | I 56,16 1 1 ...... --------- -. 1

Таблиця 1. Схема введения Т-2 токсину курям.

Т-2 токсин вводили один раз на добу перорально через вонд в вигляд! IX 1 2 X.'- ного розчин1в на 40*етанол1. В ход1 досл1ду аа птицею, вели пост1йне кл1н1чне спостереження, реестрували строки роввитку токсикозу 1 загибел!. Коеф1ц1ент кумуляцИ вираховували еа формулою:

£ ЛД50 Кк ----------- .

ДЦ50/гостра

П вивченн! матер!ально1 кумуляцИ Т-2 токсину визначали

вм!ст Т0КС1Г.:;' в м'язах , кров1, серц1, вол1. печ!нц1, нирках, вм1ст! илунку , тонкого 1 товстого кишечншса. зг1дно "Методических указаний по определению содержания Т-2 токсина в биологических тканях и экскретах" /1989/.

в досл!дах по вивченню хрон!чного Т-2 токсикозу вико-ристано 25 курей, як1 под1лено на п'ять груп, за принципом ана-Л0Г1В, ПО 5 ГОЛ1В В К0ЖН1Й груп1. Птиц1 чотирьох груп згодову-зали ком01корм 8 Т-2 токсином в дозах 0,4: 0,8: 1,6 1 3,2 мг/кг. П'ята група правила контролем. Досл1д тривав 90 дн1в.

Для обгрунтування максимально допустимого р!вня /МЦР/ Т-2 токсину в кормах длр курей був додатково поставлений експери-мент на 10 курях, яких було под1лено на 2 групи по 5 гол1в. Птиц! першо! групи протягом 2-х ы1сяц!в згодовували комб1корм, який м!стив жито, 1нокульоване грибом-продуцентом Т-2 токсину, концентраЩя якого становила 0,4 мг/кг. Починаючи а 60 дня дос-л!ду дова Т-2 токсину становила 0,2 мг/кг. Птиця контрольно! групи отримувала комб1корм без токсичного зерна.

В ход! досл1д1в за птицею вели пост1йне спостереження. Один рае в м1сяць курей зважували, а також проводили досл!дження кров1,в як1й визначали вм1ст гемоглоб1ну, п1дра-ховували к1льк!сть еритроцит1в, тромбоцит!в 1 лейкоцит1в, ви-водили лейкоцитарну формулу; в сироватц! визиачали вм1ст за-гального б!лиа.

По вак1нченн1 досл1д!в проводили патологоанатом1чн1 досл1дження труп!в птиц1, що загинула, а такод тушок вимушено забито1 птиц1 досл!дно! 1 контрольно! груп з виведенням ваго-вих коеф!ц1ент1в маси внутр!шн1х орган1в та досл!дження ор- . ган!в 1 тканин на наявн!сть Т-2 токсину.

Зразки орган!в 1 тканин, призначен! для ПстолоПчних

досл!джень, ф1ксували в 10%-ному розчин1 нейтрального фор-мал1ну. Параф1нов1 препарати готовили за еагальноприйнятао методикою, фарбували - гематоксил1н-еозином 1 по Маллор! /1976/.

Г1столог1чн1 досл1дження проводили разом з доцентом Б1ло-церк1вського державного с1льськогосподарського 1нституту М.СЛваницькш.

Статистичну обробку отриманих реаультат1в експерименталь-них досл!джень проводили за методом 1.0.0йв1на /1960/ з виве-денням середнъо-арифметично! величини (М), середйьо? арифме-тично! помилки (in) 1 ступени в1рог1дност1 (Р) в!дм1нностей.

РЕЗУЛЬТАТИ Д0СЛ1ДЖЕНБ ТА IX ОВГОВОРЕННЯ

1. Отрнмання кристал1чного Т-2 токсину.

Для проведения дослШв на доросл!й птиц! необх1дно було отримати за короткий час велику к!льк1сть кристал1чкого Т-2 токсину.

Для цього нами було вдосконалено, ран1ше розроблений нами в сп!вавторств1 з Котиком A.M..Труфановою В.0.1 рухлядою В.В., спосЮ отримання Т-2 токсину /1986/, принцип я кого грунтуеть-ся на культивуванн! гриба-продуцента на вволоженому жит1 при температур! 24°С протягом 7 дн!в, а пот1м при температур1 4-6° С протягом мХсяця, екстракцИ Т-2 токсину з культури ети-лацетатом, очистцГ на хроматограф1чн1й колонц! з окмсем алюмШю, посл1довн1й елюацИ Т-2 токсину гексаном, сум1шшо гексан-бенволу /1:1/ 1 бензолом, об'еднанн1 та Еипарюванн1 Фракц1й з Т-2 токсином в вакуум1, реекстракцП токсину 1з от-риманого елюату етанолгм, крастал1зацП 1з сум1ш1 ацетону з

- 11 -

гексаном в сл1вв1дношенн1 1:10 та його 1дентифЗкацЛ.

Отриманий нами Т-2 токсин являв собою безбарвн1 гольчат1 кристали , добре розчинн1 в ацетон!, хлороформ!, етилацетат1 1 етанол1. На пластинках "Силуфол" п1сля хроматографування, об-робки 20 Х-ним сяиртовим розчином с!рчано! кислоти 1 прогр!вання в супиш>н1й mai>i при температур1 110е С протягом 3 хв. Т-2 токсин виявляли при к!мнатному осв1тленн1 в вигляд1 гемно'-cipo'i плями з Rf 0,42 в систем1 егилацетаг-толуол (3:1), а в УФ - пром1нн! довжкною хвил1 365 нм в вигляд1 плями, яка давала флуоресцекЩю голубим кольором. На пластинках "Силуфол" п1сля хроматографування токсину в систем! етидацетат-толуол (3:1) та б1оавтограф1чного проявления за допомогою Candida pseudotroplcal is штам 44 ПК встановлено, ¡до концеятрац1я Т-2 токсину 0,1 мкг давала зону пригн1ченння росту тест-культури д!аметром 10 мм, з Rf 0,42. Температура плавления Т-2 токсину - 149-152*С.

Проведен! досл!дження показали, шэ отримана кристал!чна речовина за ф!зико-х1м1чними властивостями ! за даними 14 -спектрометр!! в1дпов1дае Т-2 токсину.

Необх!дко в!дм!тити, що вих!д Т-2 токсину при огриманн! його з р!аних парт!й культури гриба-продуцента Сув не пост!йним 1 становив в1Д 0,33 до 2,1 г/кг.

Удосконалений "Спос1б отримання Т-2 токсину" виэнаний рац!онал!заторською пропозиц1ею (Посв1дчення N 1, видане ГУВ МСГ 1 продовольства Укра!ни 25.11.91 р., сп!вавтори : Л.1.Пог-ребняк, А.Ф.Обралсл, О.М.Васянович).

Завдяки використанни цього способу значно скорочуються строга очистки то ину в!д коекстрактивних речовин (а 170 до 97 годин), зменшуються витрати на орган1чн! розчинники. Його

включено також .в "1нструкц1ю по виготовленню 1 контролю. Т-2 токсину для м!котоксиколог!чних досл1джень", затверджену ГУВ при ДержкомЮИ Ради М1н1стр1в СРСР по продовольству 1 закупках 23.11.90 р.

Таким чином, в результат! проведено1 нами науко-во-досл1дно1 робота в 1987-1990 р.р. булэ налраньовано 1 отри-мано 26,1 г. кристал!чного Т-2 токсину для проведения експери-мент1в ; розроблена нормативно-техн1чна документац!я: 1нструкц1я по виготовленню 1 контролю Т-2 токсину для м!ко-то(ссикалог 1 чних досл1джень, настанова по застосуванюо Т-2 токсину при м!котоксиколог1чних досл!дженнях та техн1чн1 умови *"Т-2 токсин".

2. Вивчення гостро! токсичност! Т-2 токсину для курей.

При вивченн! гостро! токсичност1 Т-2 токсину для курей встановлено, щр одноразове перорадьне введения його в дозах в!д 1 до 9 мг/кг живо! маси викликае гострий токсикоз. Зб!ль-шення дози призводить до загибел1 птиц! в трупах.

Перш1 кл!н!чн! ознаки токсикозу проявлялися через 5-8 годин п1сля введения токсину, причому ступ!нь виявлення !х вале-жав в1д величини дози токсину. Загибель птиц1 рееструваля т1льки п!сля введения токсину в дов! 5 мг/кг живо! ыаси 1 ви-ще.

Гострий Т-2 токсикоз характериэувався в1дсутн1стю апетиту, пригн!ченням,-порушенням стану оперення - п!р'я скуйовдкене, не прилягае одне до одного, крила опущен1, птиця малорухома, синюшнЮть гребен!в 1 бор1док (у курей 3,4 1 5 груп), у окремих курей проноси. В1дм!чали вииження живо! маси курей (Р < 0,2) .

- 13 -

В кров! реестрували зниження Ем1сту гемоглоб1ну (Р<0,1),8меншення к!лькост! еритроцит!з (Р<0„05), тромбоцит!в (Р>0,02) 1 лейкоцит!в (р<0,02), а також загального б!лка в си-роватц! кров! (Р<0,05).

Основн! патологоанатом1чн1 зм1ни характеризузались ката-рально-гемораг!чним гасгроенгерктом, крововилквашг на слквоа! оболонкн кишечника. печ!нки 1 серця. дистроф1чкяшз та некро-тичними процесами в серц!, печ!нц! ннркак 1 селез!нц1.

Г1столог!чниш доел Жжениями внявлен1 р!8н! деструктивн1 зм1ни в еп1тел11 орган!в травления ; залозах стразоходу, зола. На слизоз!й оболонц1 занозистого шунку в!дм1чали десквамац!» еп!тел1ю та гемораПчну 1нф1льтрац!ю гласного шару.

Серцевий м'яз неоднор1дно вабарвдений в червоний, с!рий 1 жовткй кольори» сухий, в'ялий, малюнок погано виражений. В селез1нц1 - дезорган!зад1я червоно! пульпи, капсули, трайекул 1 ст!нок судин. В нирках наявн1сть некрозу еп!гел1ю канальШв 1 ендотел1ю судинних клубсчк1в. В печ!нц1 - жирова !нф!ль-трац!я паренх1ми. Атроф!чн1 пронеси в ?1мус1.

В результат! введения токсину в дозах в1д 1 до 9 мг/кг встановлено, що ДД16 Т-2 токсину для курей становить 3,92 мг/кг, ДЦ84 - 8,08 мг/кг, а ДЦБО - б /3,9 : 8.1/ мг/кг ЖИВ01 маси.

Таким чином, Т-2 токсин е сильнод!ючою речовиною по в!д-ношенню до орган!аму птиц!„ вокрема курей 1 в!дноситься до 1 класу токсичиост!, зг!дно 8 ГОСТ 13357-81.

- 14 ~

3. Вивчення кумулятивних властивостей Т-2 токсину в орган1вм1 курей.

' При визначенн! кумуляцП Т-2 токсину ва допомогою методу Каган Ю.С. 1 Станкевич В.В. /1964/ встановлено, що Т-2 токсин в дозах 1,2; 0,6 та одноразове введения його в доз! 3 мг/кг живо! маси викликав Т-2 токсикоз у курей, який проявлявся лише неэначним пог1ршенням стану оперення. зниженням апетиту, зменшенням живо! маси ( Р < 0,05; Р <0,001 ; Р < 0,001 ).

Патологоанатом!чн! вм!ни окреких орган!в 1 тканин у птиц!, що загинула або була вбита в к!нц! досл1ду,. характеризувалися слабким катаральним запалэнням стравоходу, катарально-гемора-г1чн!ш запаленням 1 виразками з вюют1ванням ф!брину на слизову оболонку вола, набряком та катаральним запаленням слизових оболонок залозистого шлунку 1 початкових в!дд1л!в тонкого кишечника, крововшшвами п!д кутикулу мускульного шуику, нер1в-ном1рним кровонаповненням печ!нки , г!перем!си нирок та пере-повненням кров'ю судин брижейки.

В результат! досл!ду визначено коеф!ц1ент кумуляцП, який становив 6 одиниць. Тобто, Т-2 токсин взноситься до речовин з слабкими кумулятивными властивостями.

При вивченн! матер1ально"1 кумуляцП максимальний вм1ст Т-2 токсину виявлено в нирках , що складае 54 7. в1д введено! дози. Таким чином, материальна кумуляШя Т-2 токсину в ор-ган!зм1 курей також невелика.

. Визначення кумуляцП Т-2 токсину за методом Л1м Р. К. 8 сШвавторами /1961/ дало можлив!сть встановити як кумуляц1ю, так 1 звикання 'орган1эму до Т-2 токсину. 18 зб!льшенням дози токсину прискорювався час виявлення клШчних ознак токси-

козу, п1дв:гувалась легальн!сть курей в груп1. На осков1 отриманих ревультат1в п1драхована сумарна ДЦ50 Т-2 токсину, яка становила 33,21 мг/кг живо1 маси, а коеф1ц1ент кумуляцП - 5,535 одиниць. Пор1внюючи результати двох метод1в вивчен-ня кумуляцП, можна эробити висновок, щр Т-2 токсин взноситься до речовин в слайкими кумулятивними властивостями.

4. Вивчення хрон1чно"1 токсичносП Т-2 токсину для курей.

Хрон1чну д1ю Т-2 токсину вивчали на чотирьох трупах птиц! /по 5 гол!в/, яка поденно в кормом отримувала токсин в дозах 0,4; 0,8; 1,6 ! 3,2 мг/кг корму.

Щоденне згодовування курям комб1корму з Т-2 токсином в концентрацП 0,4 мг/кг не викликало токсично! д11 на них.

Кури досл!дних груп, як1 поддали корм з Т-2 токсином, Оу-ли активн1, в рост1 та розвитку не в!др1знялись в1д птиц! контрольно! групи. 1з зб!льшенням середньодобово! дози Т-2 токсину до 0,8 мг/кг у птиц! в1дм1чали непост1йн! 1 недостатньо виявлен! зм1ни, характерн! для хрон1чного Т-2 токсикозу. Кури добре по!дали корм, були активн1, вовн! не в1др1знялись в!д птиц1 контрольно! групи, але у 3-х курей спостер1гали окрем! неч1тко проявлен! некрози в ротов!й порожнин!.

В кров! череэ м1сяць виявлено зб1льшення вм!сту гемог-лоб1ну (Р < 0,1), лейкоцитоз ( Р < 0,2 ), короткострокову нейтрофШю (Р < 0,02 ), моноцитопен1ю ( Р < 0,05).

Патологоанатом!чн1 зм1ни характеризувалися сл!дуючими по-казниками: печ1нка переповнена кров'ю, г1перем1я слизово! обо-лонки дванадцятипало1 кишки з плямистими крововиливами у-одн!е! курки. В1дм!чали эб!льшення в1дносно! маси серця, се-

лез1нки 1 нирок у птиц! досл1дних груп. Г1столог!чними досл!джеянями встановлена десквамаЩя еп!тел1в вола, дест-рукц1я к1нцевих в!дд1л1в слизових залоз валозистого шлукку, 1нф1льтрац1я л1мфо1днимк елементами власного шару слизово1 оболонки дванадцятилало1 кишки. В печ1нц! заст1йна г1перем1я 1 жирова дистроф1я.

Т-2 токсин в дов1 1,6 мг/кг корму викликав у курей добре виявлен1 некрози в ротов1й порожнин1: на 30-й день - у трьох курей, на 60-й - у чотирьох 1 на 90-й - у двох. Пост!йн1 некрози були вареестрован! у двох курей.

В |фов1 встановлено зб1льшення в«1сту гемоглоб1ну (Р<0,01), вникення к!лькост1 еригроцит1в (Р<0,01>, короткост-рокове энюкеняя тромбоцит1в 1 лейкоцит!в, а такой нейтрофШю 1 моноцитопеШю.

Патологоанатом1чн1 вм1ни характеризувалися переповненням кров'с судин брижейки, катаральним запаленням початкового в1дд1лу тонкого кишечника з окремими крововиливами. У деяких курей в!дм!чали крапчаст1 крововиливи в облает1 переходу зало. зистого шлунку в мускульний 1 в сл!лях кишках, нер 1внои1рн1стъ забарвлення селез1нки . У досл1дно1 птиц! встановлено вб1ль-шёння в1дносно! ыаси печ1нки 1 легень. При г1столог1чних досл1джешшх в!дм1чали деструктивн! гм1ни в еп1тед11 вола, кл1тин загозкетого шлунку 1 дванадцятипало! кишки, порушення порозност1 спнок кровокосних судин.

В печ1нц1 васт1йна г1перем1я 1 жирова дистроф1я. В се-лез1нц! в!дм!чали дезорган1зац1ю червоно! пульпи 1 капсулл.

Т-2 токсин в доз! 3,2 мг/кг корму викликав хрон1чний токсикоз, перш1 ознаки якого в!дм1чались на 30-й день досл!ду 1 характеризувались ''езначним пригн1ченням, малорухом1стю,

вменшенням алетиту, сильним забрудненням оперения. У досл1дно1 птиц! в1дм!чади некроаи в ротов!й порсжнин1 в складках верхньо1 1 ншсньо1 частини дзьоба. Такох встановлено лро-гресуюче зниження живо! маси у птиц! досл1дних труп, в той час як у контрол! був прир!ст.

В кров! реестрували аб!льшення вм1сту гемоглоб!ну (Р<0,05), виражений лейкоцитоз на 30-й 1 60-й день,.зменшення к1лькост1 тромбоцит!в на 60 -й день 1 зб!льшення до к!нця досл!ду, еозинофШю, нейтрофШю ! моноцитопен!ю.

7 птиц!,як!й агодовували комб!корм з концентрац!ею Т-2 токсину 3,2 мг/кг, спостер!гали найб1льш характерн! патологомор-фолог!чн1 зм!ни в органах 1 тканинах, як! супроводжувалися зб1льшенн...! в!дносно1 маси серия, селез!нки, легень 1 нирок.

В легенях встановлено переповнення кров'ю судин, набряк, некроз ст1нок альвеол; в серцевому м'яз! зерниста дистроф1я 1 некроз окремих м'язових волокон, дезорган!зац!я ст1нок кровоносних кап!ляр!в; в печ!нц! - дискомплексац!я балок, дезорган!зац!я ст!нок кровоносних судин, ааст!йна г!пе-рем!я, зерниста дистроф!я, жирова декомпозиц1я ! некроз окремих груп гепатоцит!в; в нирках - заст!йна г!перем!я, атроф!я клубочк!в , аерниста дистроф!я, десквамаЩя '! некроз еп1тел!я канальц!в, розр!ст сполучно! тканини в 1нтерстиц!1; в се-лез!нц! - дезорган1зац!я червоно! пульпи, капсули, трабекул ! ст1нок судин ; в т1мус! - зм!ни коркового шару в результат! оО!дй!ння його л1мфоцитами.

В!дм!чали десквамаШю еп1тел!я слизових оболонок вола, стравоходу 1 занозистого шлунку з гемораг1чною !нф1льтрац1ею власного шару.

Зм!ни в тонкому кишечнику були ч!тко виявлен! т1льки в

початковому в!дд1л1. На слизов!й оболонц! дванадцятипало! кишки в1дм1чали алущення еп!тел1ю, вруйнування ворсинок, гемора-г1чну !нф!льтрац!ю власного шару, велику к1льк1сть бокал эвид-них кл1тин. Слизова оболонка товстого кишечника в стан1 катарального запалення, яке характеризувалося окремими розрос-тами ф1бробласт!в 1 ф1броцит1в.

В результат! проведено1 роботи встановлено, що дозу Т-2 токсину 0,4 иг/кг корму иожна вважати максимально нед!ючою, 0,8 иг/кг - п1дпороговою, 1,6 мг/кг - хрон!чною пороговою, а 3,2 мг/кг - хрон1чною токсичною дозою для курей.

б. Обгрунтування максимально допустимого р1вня Т-2 токсину в кормах для курей.

Для обгрунтування максимально допустимого р1вня (МНР) Т-2 токсину в кормах був додагково поставлений досл1д з метою вив-чення д11 на курей корму э вм1стоы Т-2 токсину в к1лькост1, р1вн1й МДР.

11тиц1 протягом 3 м1сяц1в досл1ду вгодували комб1корм , який м!стив жито вракене грибом-продуцентом Т-2 токсину, кон-центрац1я Т-2 токсину в комб1корм1 становила 0,4 мг/кг . Але такий комб1корм через деякий час викликав у курей неэначне пригн1чення, знихення по1даемост1 корму. Тому, починаючи 8 60-го дня досл1ду, дозу Т-2 токсину в корм! анизили до 0,2 мг/кг п!сля цього загальний стан птиц! швидко нормал!зувався, покрадалась по1даем!сть корму 1 до к!нця експерименту досл!дн! кури н1чим не в1др1бнядись в1д контрольних.

На основ1 цього, курям можна вгодувати корми, як1 м!стять Т-2 токсин в к!лькост1 0,2 мг/кг без шкоди для 1х здоров'я.

V

висновки

1.Встановлена чутлив1сть курей до Т-2 токсину. ЛД50 /гостра/ Т-2 токсину для курей при пероральному введенн! стано-вить 6 иг/кг живо1 маси. Максимально нед1юча, п1дпорогова 1 порогова / хрон!чн!/ концентрацИ Т-2 токсину в кормах для курей в!дпов1дно дор1вншть 0,4; 0,8; 1,6 мг/кг. Допустима добо-ва доза очищеного Т-2 токсину в кормах для курей становить 0,4 мг/кг.

2.Експериментаг чо встановлено, то Т-2 токсин е речовн-ною, яка мае слабк1 кумулятивн1 властивост1. Коеф1ц1ент куму-ляцП дор1внюв 6,0 1 5,535 одиниць.

3. Гострий переб1г експериментального Т-2 токсикозу курей характеризуеться В1дсутн1стю апетиту, пригн!ченням вагального стану, порушенням оперення, малорухом!стю, порушенням функцИ шлунково-кишкового тракту, зниженням живо1 маси, 8меншенням вм!сту гемоглоб1ну, еритроцит1в, тромбоцит1в, розвитком лейко-пен11 1 вменшенням загального б1лка в сироватц1 кров!.

Основними патологоморфолог1чними зм1нами при гострому Т-2 токсикоз 1 е катарально-гемораг!чний гастроентерит, кровови-ливи на слизов! оболонки кишечника, печ1нки 1 серця, дис-гроф!чн1 та некротичн! процеси в серц1, печ1нц1, нирках 1 оелез1нц1.

4. Хрон1чний переб1г експериментального Т-2 токсикозу у курей характеризуеться незначним пригн1ченням , розвигком нек-роз!в в ротов1й. порожнин1, зниженням живо! маси, короткостро-ковим п!двищенням вм!сту гемоглоб!ну, лейкоцитозом, зниженням к!лькост! тромбоцит!в, еозиноф!л!ею та зб!лыпенням к!лькост!

\

- во -

сегментоядерних нейтроф!л!в.

Основними патологоморфолог!чниии вм1нами е г!перем!я, катаральне 8апалення та крововиливи початкових в!дд!л!в тонкого кишечника та сл1пих кишок, атроф!чн1 процеси коркового шару TiMyca та залов товстого кишечника.

5. Максимально допустимий р1вень Т-2 токсину в кормах для курей складае 0,2 мг/кг.

6. Вдосконалено "Cnociö отримання Т-2 токсину" в культури гриба-продуцента, в результат! чого отримано 26,1 г. кристал1чного Т-2 токсину, необх!дного для проведения м1котоксиколоП-лих досл1джень корм!в, продукт 1в харчування та наукових досл!д!в.

7. Розроблена нормативно техн!чна докуыентац!я /НТД/ на виробництво стандарту Т-2 токе..ну : техн!чн1 умови, !нструкц1я по виготовленню 1 контролю, настанова по застосуванню.

ПРАКТЙЧН1 ПРОПОЗВДН

1. Вдосконалений "Спос!б отримання Т-2 токсину" визнано рац1онал1ваторсько» пропозиШвю /Посв1дчення N1 в!д 29 травня 1992 р., видане Головины управл!нням ветеринар!1 МСГ 1 продо-вольства УкраТни. сп1вавтори JI. I. Погребняк» А.Ф.Обрахей, О.М.Васянович/. Cnociö введений в "Инструкцию по изготовлению

и контролю Т-2 токсина для микотоксикологических исследований", затверджену Головням упразл!нням ветеринар!! при Дерхком!сП Ради М!н1стр!в СТСР по продовольству ! закупках 23 листопада 1990 р., сп!вавтори JI.1.Погребняк, А.Ф.Обр .«ей., О.М.Васянович.

2. Матер!али досл!джень вв!йшли в техн!чн! умови "Т-2

токсин" ТУ-10-07.77.93, эагвердден1 Головним управл1нням ве-теринарП при Держком!с11 Ради М1н1стр1в СРСР по продовольсгву 1 закупках 15 кв1ткя 1991 р., сл1вавгори Л. I.Погребняк, А.Ф.Ображей, О.М.Васянович, А.М.Котик, В.О.Труфанова, В.В.Рух-ляда.

3. На основ! матер!ал!в досл1джень розроблено "Наставление по применению Т-2 токсина при микотоксикологических исследованиях", аатверджене Головним управл1нням ветеринар!1 при Держком!с11 Ради М!н1стр!в СРСР по продовольству 1 закупках 23 листопада 1990 р., сШвавтори Л.I Погребняк, А.Ф.Ображей, О.М.Васянович

4. Результата досл1дженъ введен! в "Методические рекомендации по» предупреждений ущерба в животноводстве при поражении животных Т-2 токсином" , затвердден! Головним управл1нням ве-теринарП Держагропрому СРСР 27 грудня 1990 р., сп1вавтори Л. I.Погребняк, А.Ф.Ображей, О.М.Васянович, П.К.Олегов, М. Я.Тремасов, Ю. А.Жуков.

5. Результата досл!джень введен! в "Временные ПДК Т-2 токсина в кормах и воде затверджен! Головним упразл1нням ветеринар!1 Держагропрому СРСР 2 лютого 1990 р. сп1вавтори Л.I.Погребняк. А.Ф.Ображей, О.М.Васянович, П.К.Сметов, М.Я.Тремасов, Ю. А.Жуков.

0СН0ВН1 РОБОТИ, НАДРУКРВАН1 ЗА ТЕМОЮ ДИСЕРТАЦП:

1. 2.

3.

// Отчет НИР.// Отчет НИР.-// Отчет НИР.-

1987.

1988.

1989.

- Исх. N 67.сс. - с.14.

- Исх. N 45. сс.- с.22.

- Исх. N 35. сс.- с.27.

- SS ~

4. Погребняк Л.1., Ображей А.Ф., Корауненко О.Ф., Васяно-вич О.М.. Обоснование МНУ Т-2 токсина в кормах для кур /К. - 1989. - Исх. N 36. сс. - 0.26.

б. // Отчет НИР. - 1990. - Исх. N25. сс. - с.ЗО.

6. Погребняк Л. I., Ображей А.Ф., Корзуненко О.Ф., Васяно-вич О.М.. Методические указания по диагностике и профилактике Т-2 токсикоза у кур /К. - 1990. - Исх N 27. сс. - с. 8.

7. Погребняк Л.I., Ображей А.Ф..Корзуненко О.Ф.. Васяно-вич О.М.. "КумуляЩя Т-2 токсину та фувар1отоксикоз у птиц!" //Тези допов!дей науково-лрактично1 конфе-ренц11, "Не!нфекц!йна патолог!я тварин". Б!ла Церква. 1995 .

8. Погребняк Л. I., Ображей А.Ф., Корзуненко О.Ф., Васяно-вич О.М.. "Хрон!чний Т-2 токсикоз курей" //Тези до-пов1дей науково-практично! конференц11 "Не!нфекц1йна патолог!я тварин". Б!ла Церква - 1995 .

- 23 -SUMMARY

Korzunenko 01ga Phedotovna.

The effect of T-2 toxin on fowl and experimental substantiation of maximum permissible concentration /МРС/ in feed.

Rights of manuscript. The application for the Candidate of Veterinary Science degree.

16.00.03 - Veterinary Microbiology, Virology,, Epizootology and Mycology.

National Agricultural University, Kiev 1995. Main ideas: To study susceptibility of fowl to T-2 toxin in conditions of the acute and chronic experiment and to substantiate experimentally MPC of T-2 toxin in feed. Results: The susceptibility of fowl to T-2 toxin was Investigated in the conditions of the acute and chronic experiment and MPC of T-2 toxin in feed was experimentally substantiated, which enables veterinary specialists and laboratory assistants to diagnose timely cases of fowl poisoning, to use efficiently feed and to take prophylactic measures.

АННОТАЦИЯ

Корзуненко Ольга Федотовна

Токсическое действие Т-2 токсина на организм кур и обоснование максимально допустимого уровня в кормах. На правах рукописи. На соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук.

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, иммунология и микология. Национальный Аграрный Университет, г. ( Киев, 1995 . Основные идеи: Изучить чувствительность кур к Т-2 токсину в условиях острого и хронического опыта и экспериментально обосновать ОДУ Т-2 токсина в кормах. Результаты: Изучена чувствительность кур к Т-2 токсину в условиях острого и хронического опыта и экспериментально обоснован максимально допустимый уровень ЛЩУ/ Т-2 токсина в кормах, что позволит практическим ветеринарным специалистам и лабораторным работникам своевременно диагностировать случаи отравления птицы, а также квалифицированно использовать корма и организовывать профилактические мероприятия.

Нлючов! слова: Т-2 токсин, м!котоксини, гриби, хроматогра-ф!я, б1оавтограф1я, д1агностика, кумулящя, токсичн1сть, проф1лакт!?ка.

<1

Ки1в друщФПУ Зш.1б90-100.