Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Этиология, методы диагностики и меры профилактики фузариотоксикозов сельскохозяйственных птиц

;:л ..... - ' •

УКРАИНСКАЯ АКАДРЛШЯ АГРАРНЫХ НАУК ИНСТИТУТ ПТИЦЕВОДСТВА

На правах рукописи КОТИК Анатолий Николаевич

УДК 636.5.619: 616—02.615.9.

ЭТИОЛОГИЯ, МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ И МЕРЫ ПРОФИЛАКТИКИ ФУЗАРИОТОКСИКОЗОВ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ПТИЦ

!П.ОО 03 — Ветеринарная микробиология, вирусологии, эпизоотология, микология и иммунология

А и I о р е ф е р а т диссертации на соискание ученой степени

доктора нетерниярных наук

Борки — 1992 г.

Работа выполнена и Институте птицеводства УААН.

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук Л. Б. Байдевлятов, доктор биологических наук А. М- Зайченко^ доктор биологических наук С. Н. Харченко

Ведущее учреждение: Украински» научно-исследовательский ветеринарный институт УААН.

-Защита диссертации состоится «_»_199 г. на заседании

специализированного совета по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук при Институте экспериментальной и клинической ветеринарной медицины УААН.

Адрес института: 310023, г. Харьков-23, ул. Пушкинская, 183.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института экспериментальной и клинической ветеринарной медицины УААН.

Автореферат разослан «_»_199 г.

Ученый секретарь специализированного совета

J. ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы.

Корма — сырье промышленного птицеводства — должны быть физиологически полноценными и не содержать вредных примесей.

Существенное значение имеет загрязнение фуражного зерна и комбикормов микотоксинамн, вследствие чего в птицеводческих хозяйствах могут проявиться ухудшение поедаемости и эффективности корма, уменьшение привесов, нарушение воспроизводительных качеств и продуктивности, устойчивости к инфекционным заболеваниям. Однако в условиях практики распознать причинУ подобных синдромов в настоящее время весьма затруднительно, что не позволяет ее устранить. Профилактика мпкотоксикоюн требуе: комплексного подхода; прежде всего необходимы знания этнологии. патогенеза, клинических симптомов и патолого-анатомпчеекпх изменений, надежные методы диагностики. В нашей стране ветеринарная <ичетность не содержит сведении о млкоток-c.ihojas сельскохозяйственных птиц. Недостаточно известно какие именно мп котоксчшы н в каких количествах загрязняют корма; к юму ;кс арсенал мико-токепколо! ическнх методом анализа в областных и районных ветеринарных лабораториях страны иключае; главным образом определение видового состава микофлоры и определение токсичности кормов с помошыо биопроб. Поэтому г л сдует изучить уровень фактического загрязнения кормов микотоксинамн, разработать и осуществить программы направленные из fn снижение, а также мероприятия, позволяющие предотвратить пли уменьшить до минимума возможные отрицательные последствия в случаях, если корм загрязненный микотокеннами приходится скармливать животным.

К числу наиболее часто встречающихся факторов загрязнения кормов сле-.jve-T отнести фузариотокенны. Отечественным исследователям (Пальчевский Н. А„ 189!; Воронин М. С, 1890; Сорокин II В., 1890; Габрилович О. Е., 1906; Лунин .М С.. 1926; Квашнина Е. С, 1938, 1918; Абрамов И. П., 1939; Сарки-соб А. Х„ 1914, 1948, 1954; Вертинский К. II., Адуцкевич В А., 1948; Спесивцев а. Н. А., Джцларян X. Д, I960; Курманов И. А.. 1971) принадлежит приоритет в изучении фузариотоксикозов человека и сельскохозяйственных животных. Последующие работы Hsu 1С, et al ■, ¡972; ЦеПО Y et al 1971,

1972; Yoshisaiva Т., Murooka N.. 1973; Vesonder R. F. et al I 1976; Mirocha С. J., PathreS.,i973;Marasas VV F. О et al., 1979: Ту-! тельяна В. А., Кравченко Л. В., 1985; Эллера К. И. и др., .1982; Харченко С. Н„ . 1988, Леонова А. Н. и др., 1990 показали широкое распространение грибов рода Fusarium И фузарнотоксшюв как загрязнителей фуражного зерна и кормов. Было установлено, что фузарии вырабатывают несколько различных типов микотоксинов: зеараленон (Christensen С et alM 1965; Urry VV- et al., 1966), трихотецены (Bamdurg J. of al., 1968; Ueno Y. et al , (1971, 1972, 1973), монилиформин (Cole В et- al,, 1973), бутенолид Yates "5, 1968; Yoshisawa Т., ¡983), фузарохроманон /Lee Y. VV- et al.; 1985; Pathre 5. et al., 1986), вортманшш (Abbas N. К.. Mirocha С J. 1988), фузарин С ( y^iebe L. A., Bjeldanes L. F.,. 1981). В связи с выявлением названных фузариотоксинов возникла необходимость определить их роль и значение в патологии человека и животных.

. Цель наших исследований, которые явились частью ведомственных и ¡государственных заданий и были выполнены в лаборатории профилактики болезней птиц Украинского научно-исследовательского института птицеводства в 1974-90 гг, заключалась в разработке методов диагностики и мер профилактики микотоксикозов сельскохозяйственных птиц-

Задачи включали:

1. Выявление факторов, вызвавших вспышки кормовых токсикозов сельскохозяйственных птиц.

2. Выделение микотоксинов, связанных со вспышками, н изучение их свойств.

3. Разработку методов определения микотоксинов в кормах.

4. Получение данных о влиянии различных концентрации микотоксинов в кормах на сельскохозяйственных птиц.

.5. Разработку методов, предотвращающих загрязнение кормов (зерна) микотоксинами.

На защиту выносятся:

1. Данные об этиологическом факторе некротического стоматита у сельскохозяйственных птиц-

2. Данные об этиологическом факторе синдрома ухудшения качества яиц У кур, ■ •

■ ■•3. Способ оценки качества зерна, включающий определение в нем ранее" неизвестного фактора загрязнения — димерного нафтохинона аурофузарйна. •

4. Методы получения фузариотоксинов: Т-2 токсина, НТ.2' токсина, Т-2 триола, Т-2 тетраола, аурофузарина,

5. Биоавтографические методы определения в кормах трихотененовых ми. котоксшгов типов А и С и аурофузарина.

6. Штаммы микроорганизмов, высокочувствительные к трихотсценозым мнкотоксннам типов А и С и аурофузарииу.

7. Высокоактивные штаммы-продуценты Т-2 токсина и аурофузарина

8. Данные о влиянии различных концентраций Т-2 токсина в корме на сельскохозяйственных птиц — кур, индеек, уток н гусей.

9. Данные об использовании в кормлении птиц фуражного зерна, обработанного углеаммоннйными солями с целью консервирования и детоксикации.

Научная новнзна и практическое значение работы.

Впервые описаны спонтанные вспышки некротического стоматита у гусей и индеек; при этом в корме был обнаружен фузариотоксин Т-2. Изучена чувствительность к ряду микотоксинов дрожжеподобных микроорганизмов, относящихся к 25 различным родам; установлено, что более половины штаммов чувствительны к Т-2 токсину и аурофузарииу; ни один из Штаммов не обна'. ружил чувствительность к афлатокснну В1, охратоксину А и дезоксинивзлено-лу. Разработан бноавтографнческии метод качественного и количественного определения и кормах Т-2 токсина н других трихптеценов типов А и С с использованием высокочувствительного штамма микроорганизмов (А. С 660G53), применяющийся в настоящее время в научно-исследовательских учреждениях п ветершифных лабораториях нашей страны. Разработан способ повышения чувствительности тест-мпкроорганнзмов и мнкотоксннам; получен высокочувствительный к трихотецензм чипов А и С штамм Candida pseudotropicalis н И (А. С. 1508574). Разработаны способы получе.

ния Т-2 токсина, НТ-2 токсина, Т-2 трнола, Т-2 тетраола. Получены высокоактивные штаммы-продуценты Т-2 токсина (А. С. 1503295)- Получены штаммы, характеризующиеся различными сочетаниями способностей вырабатывать Т-2

токсин и зеаралгнпн: +4-, + —, —¡-,---. В пшенице урожая 1988, 1989 й

¡990 гг. из ряда районов Украины обнаружили ранее не встречавшийся фактор загрязнения зерна — аурофузарин (до 2,5 мг/кг); из пшеницы выделили штам. мы Fusarium graminearum, характеризующиеся способностью продуцировать аурофузарин. Разработан способ получения аурофузарина в крис. таллическом состоянии. Разработан бноавтографнческий метод определения аурофузарина в зерне. Описан ранее неизвестный синдром ухудшения качества яиц у кур, проявляющийся при включении в рацион зерна пораженного грибами-продуцентами аурофузарина, ведущей к снижению оплодотворенности и выводимости. Изучено действие Т-2 токсина на кур, индеек, уток и гусей; по- ■ лучены данные о клинических, патолого-анатомических н гистологических продлениях TOKQHK033 в зависимости от содержания Т-2 токсина в корме. В экспериментальных условиях минимальный действующий уровень Т-2 токсина в

корме для утят, гусят, индюшат и цыплят составляет соответственно 0,25, 0,30, 0,50 и 1 мг/кг. В полевых условиях воздействие Т-2 токсина на кур и индеек наблюдали при значительно более низких концентрациях — 0,04-0,10 мг/кг. Установлено, что обработка зерна углеаммонийными солями ведет к потере жизнеспособности у фузариев и других плесневых грибов, а также к химическому разрушению трихотеценов, афлатоксинов и некоторых других микотоксинов (А- С. 1634233).

Для практического использования приняты следующие нормативно-технические документы:

1. Методические указания по количественному определению Т-2 токсина в зерне и комбикормах. Утверждены ГУВ Госагропрома СССР 26 мая 1987 г. В книге: «Лабораторные исследования в ветеринарии: биохимические и мико логические», под ред. Б. И. Антонова, — М., ВО «Агропромиздат». — 1991, — С 122-124.

2. Временная инструкция по изготовлению и контролю Т-2 токсина дл? микотоксикологических исследований. Утверждена директором Украинское НИВИ 16 июня 1986 г. С. 1-16.

3. Инструкция по изготовлению н контролю Т-2 токсина для микотокси кологических исследований. Утверждена ГУВ при Госкомиссии Сов. Мин СССР по продовольствию и закупкам 23 ноября 1990 г. С. 1-164. Временное наставление по применению Т-2 токсина при микотоксиколо

гических исследованиях. Утверждено ГУВ Госагропрома СССР 14 ноябр: 1986 г. В книге: «Лабораторные исследования в ветеринарии: биохимически! и микологические», под ред. Б. И. Антонова. — М., ВО «Агропромиздат». — 1991. — С. 164-166.

5. Наставление по применению Т-2 токсина при микотоксикологичесик; исследованиях. Утверждено ГУВ при Госкомиссии Сов. Мин.

СССР по продовольствию и закупкам 23 ноября 1990 г. С. !-4.

6. Т-2 токсин. Технические условия. ТУ-10-07-301-86. Утверждены ГУ! Госагропрома СССР. — 1986. — С. 1-13.

7. Т-2 токсин. Технические условия. ТУ-10 07.77.91. Утверждены ГУВ пр1 Гос. комиссии Сов. Мин. СССР по продовольствию и закупкам 15 апрел 1991 г- — С. 1-13.

8. Методические рекомендации по диагностике, профилактике и лечении микотоксикозов с-х животных и птиц. Утв. методкомиссией Укр. НИИ экспе риментальной ветеринарии (протокол № 13 от 13.12.1991 г.).

Апробдция. Материалы диссертации доложены и одобрены на Всесою; ном совещании «Итоги научных исследований и рекомендации но профилак тике болезней птиц в хозяйствах промышленного типа» (Куйбышев, 1973); н региональном симпозиум? «Микотокеины: продуценты, химия, биосинтез,' от

ределенпе. действие на организм; (Оренбург, 1977); на 1-й Всесоюзной конференции «Чуж.-родные вещества и пищевых продуктах» (Алма-Ата, 1979); на Всесоюзной н.'о'чно-технической конференции «Проблемы защиты кормов и продукты» ,»iiiobíuc4:¡i от загрязнений токсическими веществами» (Москва, 1980]; на 8-й Всесоюзной конференции по на i ологнческой анатомии живот иы.\ «Актуальные вопросы наюлого-анатомичсскоП диагностики болезней ли во i мы ч (Витебск, 1981); па Всесоюзной научно-технической конференции «Эффекшвпое использование кормов в птицеводстве» (Новосибирск, 1990); i а Украине кои конференции с международным участием «Актуальные проблемы i «временною п i нцеводс i ва» (Харьков, 1991), а также использованы в качестве учебно-методических материалов на международных учебных курсах C'AO/IOHFFT/CCC" «-Подготовка специалистов по оценке загрязнения пищевых' продустог, мпкотокеяпачп: контроль и мониторинг» (Москва, 1980-85 гг.) и на Всесоюзном семинаре ветврачей-микологов республиканских ветеринарных лабораторий «Новые методы определения мпкотоксинов Т-2 и патулнна в кормах» (Боркп, Харьковской области, 1987).

По материалам диссертации опубликовано 46 печатных работ, в т. ч. 5 авторских свидетельств, методические указания и методические рекомендации.-

Диссертация включает: введение; материалы и методы исследований;-шесть глав, содержащих литературные данные, экспериментальный материал авюра г, -включение; выводы; список литературы, включающий 490 источии i.ob, в г >:., ЮГ) отечественных авторов, приложения. Объем диссертации—260 с i ранни машинописного н-кстн; i екс i \\.лы1ая часа, состоит из 203 страниц и содержи i 19 ¡..блиц. 28 рисунком и 5 фоюграфпи

2. МАТЕРИАЛЫ П МГ.ТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Ок'шр нр'.Г» »cpua н комбикормов для микотокснкологических анализов производили в счоi ненм вин с ipi-бованиямн ГОСТ 10839-61, 8770-58,13586.3-83 п I 3-196 O.SO.

Определение токсичности, микологическое исследование — на основании

c.Ut-ío tn-нскнл указании по сани i арно-мнкологпческому исследованию кормов» (Моек <а, 1970) и "Me i одических указаний по санитарно-микологической оценке и улучшению качества кормов» (Москва, 1986).

Видовую принадлежность изолятов Fusarium определяли по Би-лай В. М. (1977).

Использовали 39 штаммов Fusarium секцнл 5poroLrichiella ii¡ коллекций Ппснпута микробиологии и вирусологии АН УССР и Всесоюзного 1П111 экспериментальной ветеринарии.

63 штаммов дрожжеподобны.ч микроорганизмов, относящихся к 44 различным родам, получены из Всесоюзной коллекции микроорганизмов ИБФМ АН СССР.

27 штаммов грибов рода Candida получены от В. В. Рухляды (Украинский НИИ экспериментальной ветеринарии).

Штамм Saccharomyces fragilis 1° д получен от В. И. Дахнов. ского (Институт вирусологии и микробиологии АН УССР).

Для определения микотоксинообразующей активности культуры Fusarium выращивали на стерильном увлажненном зерне (проф, рис и др.) в течение недели при 26-28 и далее 3 4 недели при 50 илй 26-28 градусах. BÜ--ращенные культуры инактивнровали текучим паром, вЬгсушнваЛн и хранилй в прохладном месте.

Мутаген N -нитрозометилмочевину ( |s] -НММ) получили из Института химической физики АН СССР-

С целью получения мутантов двухсуточную культуру Candida pseudot-ropicalis 44 пк или двухнедельную культуру Fusarium смывали физиологическим раствором, отмывали центрифугированием и обрабатывали N'HMM в концентрации Ю-3—5х10-4 в фосфатном буфере pH 6,1 при 28 на аппарате для встряхивания в течение 6-24 часов. Действие мутагена частично снимали разведением в дистиллированной воде. Суспензию высевали на агаризированные среды и инкубировали при 28°. У мутантов С. pseudotropicalis 44 пк с замедленным ростом определили чувствительность к Т-2 токсину. У мутантов Fusarium определили микотоксннобразующую активность.

Стандарты или образцы микотоксинов получены:

афлатоксин В1 — от А. Н. Леонова, ВНИИ ветеринарной санитарии;

охратоксин А — от P. Krouhg, Дания;

зеараленон — от Н. А. Костюниной, ВНИИ ветеринарной санитарии;

Т-2 токсин и НТ-2 токсин — от Н. В Burmeister, США;

дезоксиниваленол и веррукарнн А — от В. С. Соболева, Институт пита, иия АМН СССР;

роридин А — от Заиченко А. М., Институт микробиологии и вирусологии АН УССР.

Определение микотоксинов в анализируемых кормах и культурах фуза-риев проводили с помощью методов, основанных на тонкослойной хроматографии.

Идентификацию выделенных микотоксинов и их производных (Т-2 токсина, НТ-2 токсина, Т-2 триола, Т-2 тетраола, аурофузарина) проводили в Харьковском химико-фармацевтическом НИИ, ВНИ ветеринарном институте (г. Казань) и в Институте биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР. Спектры поглощения изучаемых веществ в УФ-видимой области регистрировали на спектрофотометре UV-160 „Shimadzu" (Япония). Масс-спектры снимали на масс-спектрометре „Finegan" МАТ-8430. ИК-спектры регистрировали на спектрофотометре FTTP-1710BPerkin Eimer" в таблетках KB г. Спектры Н-ЯМР снимали в CDC13 на спектрометре yY^TO 5-9 „Bruckner" (ФРГ) с триметилсилаиом в качестве внутреннего стандарта-

Острый Т.2 токсикоз воспроизвели на двухмесячных цыплятах пяти раз-цчиых порч., бо.шй лепорн, мраморный леггорн, родайланд, австралорп и тимутрок. Т ? токсин расттюрчлн в подсолнечном масле и перорально ввели )Допы1пым 1и.1]1.)ятам в дозах от 0 до 12 мг/кг (ш'голов 10 каждой породы на аждую дозу), наблюдения цели в течение последующих двух недель.

Подосчрое действие Т-2 токсина изучили на цыплятах породы белый лег->ри ппдюша; ах белой широкогрудой породы, утятах белой украинской породы и сятах серой украинской породы (в двухкратной повторноеги), В состав комба-флюв для нсех видов птиц вчотили кукуруза, пшеница, подсолнечниковыи мых, рыбгзя »тука, кормовые дрожжи, травяная .мука, Сад. Птицу содержали п •таллпчеекпх клетках при электрическом освещении и обогреве. Температура и ажность соошетствовалн принятым нормам. Воду и корм птица получала в не-раничепиом количестве-Все виды молодняка получали корм с Т-2 токсином с до 21-дневною возраста. В первых опытах 5 группам цыплят, индюшат и утят э 10 голов в группе) в корм добавляли 1,2,4,8 к 16 мг Т-2 токсина/кг; 5 групп :ят получали 0,25, 0,5, 1, 2 и 4 мг/кг. Контрольные группы получали анало-шый комбикорм без мнкотокенна. В повторных опытах для цыплят концен-шин Т-2 токсина не изменили; индюшата получали 0,5, I, 2, 3 и 4 мг/кг; па — 0,25, 0,5, 1, 2 и 4 мг/кг; гусята — 0,3, 0,6, 1,2 и 2,4 мг/кг; контроль-.■ группы не получали Т-2 токсина. В процессе опытов ежедневно пели наб-•I'.шш .(.1 ь.пошчсским состоянием молодняка учитывая сохранность, пропо-п| искры ше павших, еженедельно взвешивали. Пп 22-й день молодняк за. а.т. пройоднли иаюло»сайтомическое вскытис определяли относительную су вглчреиних органов; отбирали и фиксировали для гистологических не доваппй зоб, нитевод. железистый отдел желудка, 12-перстную кишку, ли,, сердце, иочни шм\с, бурсу и поджелудочную железу Гистологические ¡едова;шя выполнены в Харьковском зооветеринарном институте профессо-М. Е. Пплипенко. Парафиновые препараты готовили по общепринятой >дпке. окрашивали гематокенлниом и по Маллорн.

Опыты ко изучению влияния Т-2 токсина на кур-несушек производили в жратвой пйвторкости в летнее время в начальный период яйцекладки-породы леггорн содержали в колониальном домике на полу. В 1-м и 2-м г ах было сформировано 6 групп по !0 шестимесячных кур и 1 петуху, месячном возрасте в корм подопытной птицы включили Т-2 токсин в кон-рациях 2, Н. 16 и 32 мг/кг (опыт 1-й, длившийся 3 недели) и 0,5,1, 2, 8 мг/кг (опыт 2-й, 5 недель). В З-.ч опыте Т-2 токсин включили в корм в дневным курам в количестве 0,25, 1 и 4 мг/кг. Контрольные группы полу-аиалогичнып комбикорм не содержащий Т-2 токсин. В процессе опытов ывали клиническое состояние кур, сохранность, яйценоскость, выводи-ь и оплодотворенпость яиц.

Эпыты по обработке зерна повышенной влажности углеаммонийными сопроводили в опытном хозяйстве УНИИП«Борки» в соответствии с «Ме-

тодическими указаниями по проведению опытно-производственной проверки технологий заготовки и скармливания с.-х. животным кормов с использованием углеаммонийных солей» (Киев-1986).

3. НЕКРОТИЧЕСКИЙ СТОМАТИТ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ПТИЦ, ВЫЗЫВАЕМЫЙ РШАИШМ 5РСЖОТВ1СНЮГОЕ5

Весной 1974 года в одном из птицеводческих хозяйств Украины мы наблюдал» тяжело протекавшие заболевания гусят и индюшат-

Симптомы у гусят включали скучиванне, отказ от корма, задержку роста: смертность в отдельных группах составляла от 10 до 90%, гибель наступал« преимущественно с 5 по 20 день жизни. На слизистой оболочке ротовой по лости, около небной щели, на языке, в области гортани обнаружили очап некрозов. При вскрытии отмечены дегенеративные изменения предсердий \ желудочков, увеличение и гиперемия печени, язвенный кутикулит, дуоденит С помощью биопроб на гусятах и на гусиных и куриных эмбрионах возбу днтели вирусных и бактериальных заболеваний выделены не были. Исключи ли также влияние инкубации на сохранность гусят.

В это же время на ферме по выращиванию индеек у 60-80% нндюша различных возрастных групп (от 3-4-дневных до 4-месячных), которых содер жали как в помещениях так и в летних лагерях, обнаружили некротически поражения слизистых оболочек ротовой полости и языка и кожи головы. ! многих индюшат некротнзированный кончик языка заворачивался вверх, язы складывался вдвое; создавалось впечатление, что конец языка отрублен. Кг Правило, отмечали сухость слизистых оболочек ротовой полости, при это комки корма приклеивались к слизистым и птица не могла закрывать клю Кроме того, у индюшат наблюдали взъерошенное оперение, опущенные кр! лья, угнетение, ослабление ил и утрату аппетита, мышечную слабость. Нек торые индюшата, если их клали на спину, не могли в течение 1-2 минут пО; нятся на ног и. В этот период во многих группах индюшат появились призн • ки респираторного заболевания: хрипы, синусит; увеличился отход. П) вскрытии павших было установлено, что основными причинами гибели инд! шат оказались заболевания органов дыхания, однако более чем у 50% павш) индюшат находили некротические очаги в ротовой полости- Из пораженщ ■ тканей возбудитель кандидомикоза и дерматофнты выделить не удалось. I был выделен также и вирусный агент путем ннокулирования 10-дневных кур ных эмбрионов суспензией из внутренних органов в аллантоисную полость суспензий из некротнзнрованных тканей ротовой полости на хорио-алланто! ную оболочку. ......

Предположив, что наблюдаемые нами заболевания гусят и индюшат Я1 лнсь следствием загрязнения кормов микотоксинами, мы провели микотокс кологический анализ комбикормов и их ингредиентов — пшеницы, кукурузы

овса. В пробах кукурузы урожая 1973 года, выращенной в этом же хозяйстве, были обнаружены термостабильные ядовитые вещества, характеризующиеся дермонекротпческим действием при нанесении на кожу кролика. Из этих же проб были выделены токсигенные штаммы грибов, которые на основании куль-туралъгшх if морфологических признаков были идентифицированы как Fusa.-

rium sporotrichioidcs

Изучаемый синдром воспроизвели на гусятах после скармливания им в течение 11 дней культуры одного из штаммов Fusarium в количестве 2 н 4% к массе корма. Заключили, что заболевание гусят и индюшат явились следствием загрязнения корма фузариотоксинамп.

О случаях подобных заболеваний у гусей и индеек ранее не сообщали.

Представлялось необходимым выяснить, какие именно микотоксины вызвали токсикозы.

С этой целью провели биоавтографню экстрактов культур изучаемых ток. енгенных штаммов Fusarium Оказал ось, что в экстрактах содержнться не менее трех различных веществ, подавлящюих pocTSaccliaromyces fragil is 1 Од; хроматографическая подвижность обнаруженных антибиотических веществ в системе этилацетат-толуол 3: 1 была равна 0,17, 0,30 и 0,58. Вещество-антибиотик из самой большой зоны подавления тест-микроорганизма с Bf 0,58 выделили препаративным путем; нанесение его растлора в этилаце-гатс на кожу кролика вызвало гиперемию, ок>к и некро.;. в связи с чем мы определили данное вещество как мнкотокенн. Оюутстане у обнаруженного «икотоксина способности флуоресцировать г. УФЛ не позволило отнести его к токсическим стеролам, характеризующимся, и о ут ьсржлсиию Олифсона Л. С и др. (1972), серозетеный или изумрудно-че.тепой флуоресценцией. Поэтому возник вопрос, не относится ли обнаруженный фузартлоксин к трихотецено-вым минотоксинам. Предположение подтвердилось: в экстрактах культур? и-sarium с помощью тонкослойной хроматографии и биоавтографии были обнаружены НТ-2 токсин, неосолягшол и Т-2 токсин, а также зеаралеи'он.

В процессе анализа комбикормов и их ингредиентов, скармливание которых вызвало изучаемое заболевание птиц, с помощью биоавтографии а пробах кукурузы обнаружили Т-2 токсин-

Результаты выполненной работы показали, что кормовой токсикоз гусят и индюшат был следствием загрязнения кормой трихогеаегтовымн фузэриотдк. сипами, в частности, Т-2 токсином.

Случаи фузариотокенкоэз сельскохозяйственных птиц в этом же и других птицеводческих хозяйствах мы наблюдали и в последующие годы. На ферме (Харьковская область) с поголовьем около 130000 кур преимущественно 7-10-мссячного возраста I октября 19Ö2 года в рацион включили кукурузу нового урожая в количестве 20%. В течение последующих трех недель яйценоскость постоянно увеличивалась, что характерно для данного возраста кур, и превысила 65%-ний уровень. Затем неожиданно произошло резкое снижение яйце-

носкости до 51%. Отклонений в клиническом состоянии птицы при этом отмечено. не. было; на протяжении всего двухмесячного периода наблюдений птица полностью поедала дневную норму . корма- В двух из'пяти исследованных образцах кукурузы обнаружили Т-2 токсин в количествах 40 и 110 мкг/кг; афлатоксин В1, охратоксин А и зеараленон не обнаружили. После исключения недоброкачественной кукурузы - из рациона кур восстановился высокий уровень яйценоскости. Заключили, что токсичность кукурузы связана с ее загрязнением микотоксинами, в частности, Т-2 токсином.

.. Следующий случай имел место в августе 1983 года в крупном нндейко'вод-ческом хозяйстве (Харьковская область), когда в рацион взрослых индеек (более 2000 голов) включили пшеницу, которая после уборки урожая хранилась. в условиях повышенной влажности. В результате развилось- тяжелое заболевание, проявившееся массовыми некротическими стоматитами, пневмонией, Антибиотикотерапия оказалась неэффективной. Большое количество Индеек пало или было выбраковано. В пшенице обнаружили Т-2 токсин в концентрации более 1000 мкг/кг. ■

. -I Тяжелое поражение некротическим стоматитом взрослых индеек и увеличение отхода произошло весной 1984 года в одном из хозяйств Калужской области; в комбикорме обнаружили Т-2 токсин (40 мкг/кг).

Некротический стоматит с выраженной деформацией клюва наблюдали в сентябре 1990 года на бройлерной фабрике в Донецкой области, где в течение трех недель из 40200 принятых на выращивание цыплят пало 14300. Из комбикорма выделили грибы Fusarium sporotrichioides

К массовому поражению некротическим стоматитом 2.3 месячных индюшат (более 20000 голов; хозяйство Полтавской области; август 1991 года) привело скармливание им пшеницы, пораженной фузариозом-

В июне 1991 года слабовыраженный некротический стоматит проявился в группе из 1300 цыплят:бройлеров (Харьковская область) — у 20°/о поголовья. Признаки заболевания исчезли после завоза очередной партии корма.

- ' Следует заключить, что спонтанные вспышки фузариотоксикозов птиц встречаются чаще, чем их диапюсцируют. Действительно,' ¿'течение 20 лет мы "наблюдали восемь таких случаев; пять из них . имели, место, в одном, из птицеводческих хозяйтств Харьковской области. Полевые. случаи фузариотоксикозов гусят и индюшат описаны нами впервые. Течение заболеваний определялось, видом; и возрастом птицы, - а- - также- .степенью к ¡загрязнения; кормов фузарнотоксинами. У - Гусят фузариотоксикоз проявился в наиболее тяжелой форме, что указывает, на выраженную их чувствительность . к.данным'.лшро.; тЬксинай.'.Вероятно, закономерно.,, чтр 'половина .всех..случаев связана с_ ддай; ¿¿ми',' которые' также .'весьма чувствительны', к ф^ариотоксипам....Иацбрдес постоянным и характерным" " симптомом у всех видов птиц — гусей, индеек, кур — был некротический стоматит, который несомненно следует считать су: Щественным диагностическим признаком фузариотоксикозов,' вызываемых

12

■ 1

Fusarium sporotricllioides Изоляты названных грибов, выделенные из кормов в процессе изучения полевых случаев токсикозов птиц, оказались продуцентами микотоксинов характеризующихся дермонекротическим действием; в культурах грибов, а также в пробах кормов, вызвавших токсикозы, обнаружили трнхотеценовые фузарнотоксины типа Л, в частности, Т-2 токсин. Для выявления в кормах и культурах грибов трихотеценовых микотоксинов типа А мы внерые использовали биоавтографию, представляющую собой сочетание физико-химического и биологического методов анализа—тонкослойной хроматографии и обнаружения веществ с помощью чувствительных микроорганизмов. Следует особо отметить характерную, на наш взгляд, особенность данных случаев фузариотоксикозов птиц — проявление их с определенной периодичностью: 1974, 1982-84 и 1990-91 годы. Возможно, выяснение закономерностей поражения зерна видами Fusarium послужит осно-

вой прогнозирования загрязнения кормов фузарнотоксинами. Следует заклю-чнсть, что загрязнение кормовых субстратов Fusarium spore trichiöides ' и фузарнотоксинами типа А наносит птицеводству серьезный экономический ущерб, по крайней мере в определенные периоды. Очевидно, необходимо осу-гкествтять контроль за содержанием п зерне названных микотоксинов.

1 ПОЛУЧЕНИЕ Т-2 ТОКСИНА И ЕГО ПРОИЗВОДНЫХ

Для выделения мпкоюксина из экстракта культуры J-. sporetrichioidcS. мы применили метод адсорбционной колоночной хроматографии, используя. в качестве сорбентов сплнкагель или окись алюминия и в качестве элюеитов иетролейный эфир или гексан, бензол, хлороформ и ацетон. Контроль за разделением веществ осуществляли путем тонкослойной хроматографии. Фракции, содержащие вещество, не отличающееся хроматографически от Т:2 ток сипа, объединяли, упаривали и кристаллизовали из диэтилового эфира ИЛИ ацетона добавлением 10-12% гексана, В результате было выделено индивидуальное кристаллическое вещество с точкой плавления I50-I523; +12® (с 1,0 в этаноле), — 50° в циклогексане, —35° в смеси цнклэгексана. с .хлороформом 8: 2; C;iHz<Oa. В ПК—области спектра обнаруживаются полосы ...поп

лощения характерные для ОН-, — — С— и СН-групп, слож^

СН- ^ "

ноэфнрных связей и др. Для определения природы кислот, образующих ело ж';, ноэфирныз связи, были получены гидроксаматы. Методом хроматографии на бумаге определены гидроксаматы уксусной и изовалериановай кйслоты.:;¥?с-ходное вещество ацетнлйруется, что подтверждает, присутствие в молекуле свободной окс'игруппы, и не восстанавливается боргндрндом" натрия, . В. соединении определены два ацетильных остатка. При параллельном хроматографи-

г

ГЗ

рований в системах хлороформ-метанол 95:5, бензол-ацетон 3:2 и бензол-метанол-уксусная кислота 24:2:1 полученного нами вещества и Т-2 тЬксина установлено, что оба вещества имеют одинаковые величины R{ (соответственно, 0,53, 0,58 и 0,28). Проба смешения не дала депрессии температуры плавления; их ИК-спектры также были тождественны. Эти данные позволили заключить, что полученное нами вещество идентично Т-2 токсину — Зо<.-гидрокси-4("! , 15 -диацетокси-8 ot -(3-метилбутирилокси)-12, 13-эпокситрихотецену.

Основываясь на полученных результатах, была разработана иаучно-тех-ническя документация, необходимая для производства Т-2 токсина для нужд диагностических лаборатории, контролирующих качество продовольственного и фуражного зерна, а также для ряда научно-исследовательских ^учреждений.

С целью получения производных раствор Т-2 токсина в метаноле смешали с водным раствором аммиака. В результате реакции, ход которой контролировали с помощью тонкослойной хроматографии в системе этилацетат-аце-тон 4:1, из Т-2 токсина (В! =0,85) образовалось три вещества (/?f 0,60, 0,45 и 0,18), характеризующиеся как и исходное способностью флуоресцировать голубым свечением в УФЛ после обработки Серной кислотой и нагревания до 110°. Для прекращения реакции pH смеси доводили до 7,0 и экстрагировали образовавшиеся продукты хлороформом. Экстракт упарили и нанесли на окись алюминия- Отдельные вещества получили путем распределительной колоночной хроматографии. Таким способом были получены НТ-2 токсин (15-ацетакси-Зо^ 4ß -дигидрокс11-8а -(3-метллбутирнлокси)-12, 13-эпокситрнхотец-9-еи), Т- 2триол (3? ,4? , 15-тригидрокси-8 а -(З метилбутирилокси)-12, 13-эпокситрихотец-9-ен и Т-2 тетраол (За, 4ß, 8а' 15-тетрагидрокси-12, 13-

эпокситрихотец-9.ен), которые ранее в нашей стране не производились. Используя. чувствительные тест-микроорганизмы Candida pseudotropicalis 44 пк определили, что биологическая активность четырех фузариотоксинов— Т-2 токсина, НТ-2 токсина, Т-2 триола и Т-2 тетраола — находится в соотно-щениц 800:73:2, 8:1.

5. МИКОТОКСИНООБРАЗОВАНИЕ У FUSARIUM СЕКЦИИ 5POROT-RICffiELLA, ПОЛУЧЕНИЕ ВЫСОКОАКТИВНЫХ ПРОДУЦЕНТОВ Т-2

ТОКСИНА

Изучение микотокеинообразования у FusaJium секции 5porotrichielIa показало, что большинство штаммов—32 из 51—являются продуцентами трихотеценов, преимущественно Т-2 н НТ-2 токсинов; в- 5 культурах обнаружили неосоляниол, .в 4-зеараленон. При 10° в'культурах -накапливалось значительно большее количество микотоксинов, чем при 28°; содержание Т-2 токсина находилось в пределах от 40 до 200 мг/кг. Добавление, в среду молочной, уксусной, лимонной кислот в количествах 100-400 мг/кг вызвало подавление роста грибов и выработки Т-2 токсина; сорбиновая кислота в этих же

копцентрацпях"обнаружила стимулирующее влияние па токсшюобразованиё. При вырашиваинп пиамма F. sporotriclliOick'S 5328а на зерне с добавлением сирбиьовой кислоты (300500 мг/кг) содержание Т2 токсина в, культуре соединяло 250-300 мг/'кг против 80-100 мг/кг в контроле. Столь внткне концентрации затрудняли получение Т-2 токсина в количествах, достаточных для изучения его действия на птиц. Следовало вести поиски более ак-1ивны\ штаммов-продуцентов. Рапсе в процессе изучения генотипнческой изменчивое'! и штамма 5328а нами было получено от него 177 морфологических и' ауксотрофных мутантов; один из мутантов—2т —в 4-5 раз превосходил исходный ни ими 5328а но способности вырабатывать микотоксин летальный для мышей- Штаммы 5323а и 2щ поддерживали на картофельном агаре (пересевы— 1 раз в 6 месяцев) и хранили при 4-10° в холодильнике. В 1986 году, мы сравнивали активность обоих продуцентов; оказалось, что по способности вырабатывать Т-2 токсин 2щ в несколько раз превосходил штамм 5328а: в культурах -2т и 5328а па рисе содержание Т-2 токсина составляло 1330-1600 и 180-310 мг/кг, соответственно. Следовательно, мутант 2fp характеризуется довольно высокой токспнообразующей активностью; это качество сохранилось в течение 16 лег. " :

В последующем от 2¡¡i были получены несколько десятков мутантов, среди которых обнаружили весьма активных продуценюв Т-2 токсина. Мутант 2 ni '15 депонирован в коллекции культур трибов ВНИИ антибиотиков Минмедпрома СССР екмклрлциоиг.ый помер 315Л); характеризуется следующими признаками ¡la агаре Чапека 10-суточная .колония не превышает в диаметре 12-15 мм, округлой формы, с неровными краями во ¡душный мицелий слаборастущий, пнвкпн, po.ijBoro цвит а. С возрастом окраска колонии становится фиолетово-бурой. Па сусло-агаре колония слабо-паутинистая, ровная,округлой формы, с неровными краями, воздушный мицелий розово-фиолетовый. Строма лилово-фиолетового цвета. Па картофельном агаре колония складчато-бугристая, округлой формы, с неровными краями, воздушный мицелий бело-розовый. Строма крас-по-лплово'о цвета. Ликроконнднн образуются в воздушном мицелии на прос-иь н р:оасг,>ле.шы\ конидионосцах, многочисленные, большей частью округлые одноклеточные, реже с 1-2 перегородками. Макроконидии веретеновидно--серповидные, образуются в воздушном мицелии, обычно, с 3 перегородками. Хламндоспоры в мицелии промежуточные, реже конечные. Испытания мико-токсниообразующей акгизносгп штамма 2 ш -15 показали, что он на порядок презосходит родственные штаммы 5328а и 2щпо способности вырабатывать Т-2 токсин и зеараленон. Более того, 2т "15 — в отличие от 5328а и 2 т-характеркзустск существенно новым качеством, нехарактерным для Р. spo-ГОtricilioiites —- вырабатывать Т-2 токсин при 24-28°, к тому же в весьма больших количествах — 8-12 г/кг-

От 2 m "15 были получены более 300 мутантов, отличающихся по культу-рально-морфологическим признакам. Более активные продуценты Т-2 токсина

обнаружены не были; однако выявили 4 группы мутантов, различающихся пб .способности вырабатйвать Т-2 токсин и зеараЛеИон: +4-- 4—. —f- и —~ Следовательно, способность вырабатывать мнкотоксины не является жизнен-нонеобходимой для организма гриба. Представляется возможным получать штаммы, хорею сризующпеся определенным типом микотоксннообразования, что открывает возможность более углубленно изучить ряд особенностей образования. Т-2 токсина и зеараленона, например, взаимосвязь процессов биосинтеза названных микотокспнов.

Необходимо отметить, что подавляющее большинство мутантов 2щ "15 отличается соматической нестабильностью. Так, мутант 2щ -15-206, являющийся высокоактивным продуцентом Т-2 токсина (10-12 г/кг среды), при культивировании на среде Чапека постоянно выщепляет несколько типов сег-регантов — менее способных к токсинообраованню, но имеющих явное селективное преимущество в сравнении с исходным типом. Поэтому единственным способом сохранения высокой T-2-продуцирующей активности мутанта 2т "15 ■206 пвлле;ся моиокониднальный рассев с последующим отбором колоний исходного типа- Аналогичное расщепление харкатеризует мутант 2щ "15-278, высокоактивный продуцент зеараленона.

6, БНОАВТОГРАФИЧЕСКИЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТРИХОТЕЦЕНОВ

ТИПОВ А И С И ПОВЫШЕНИЕ ЕГО ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ

Применение нами биавтографического (БАГ) метода обнаружения Т-2 токсина в ■ процессе • выяснения причины кормовых токсикозов гусят и индюшат пока-залр высокую чувствительность этого метода, его специфичность и простоту исполнения. При разработке БАГ-метода пригодного для применения в практике прежде всего предстояло подобрать высокочувствительный тест-микроорганизм. Из 27 штаммов грибов рода Candida 14 оказались чувствительными к. Т-2 токсину; некоторые штаммы по чувствительности значительно превосходили 5accharomyces fragilis Ю Д. Так, с помощью С. pseudotropicalis 44 пк оказалось возможным обнаруживать на ТСХ-пластинке 0,1 мкг Т-2 токсина, а: минимальная подавляющая рост концентрация его в питательной среде составляла 0,3 мкг/мл. Зависимость величины зоны подавления'роста С. pseudotropicalis 44 пк от количества Т-2 токсина (в пределах от 50 до 500 нг) на ТСХ-пластинке «Силуфол» (методика описана ниже) выражается уравнением регрессии у — 1,26-f 0,07х, где у—-lg количества Т-2 токсина (нг), х*— диаметр зоны подавления роста (мм). Минимальному количеству Т-2 токсина, обнаруживаемому на ТСХ-пластинке и равному 50 нг, соответствует зона подавления роста диаметром 6 мм.

Используя штамм С. pseudotropicalis 44 пк в качестве тест-микроорганизма, разработали метод определения Т"2 токсина в зерне и комбикормах- : .

Для определения Т-2 токсина из средней пробы измельченного зерна пли

комбикорм;! берут образец массой 20 г, помещают п колбу на 250 мл, добавляют 10%-но. а раствора NAC! и 100 мл ацетона и экстрагируют при встряхивании с течение часа. После фильтрации емесч к 50 мл фильтрата добавляют 20 мл 15%-ного раствора усксуспокпслого свинца для осаждения сопут-с;вующих веществ; 80 мл фильтрата очищают 40 мл гексана; водно-ацетоновую фракцию дважды экстра: ируют 40 мл хлороформа. Экстракт после упаривания хромат о! рафиру'От на пластинке «Силуфол» 7смх15см в смеси днэти-лнвого эфира и гексана 1:1 и затем перпендикулярно направлению первого развития—г- смеси этялпчетата и толуола 3:1. Высушенную пластинку располагает горизонтально и наносят на поверхность 8 мл расплавленного сусло-агара; выдерживают 40 минут. IIa поверхность агара наносят культуру С. pscüdoiropicalis ' 44 ПК. Пластинку помещают во влажную камеру

при 28,, в течение 16 часов, после чего отмечают наличие и размеры зон подавлений роста дрожжей. Зона, идентичная по хроматографической подвижности'' "зоне вызванной' Веществом-свидетелем, указывает на, наличие Т-2 ток-сипа в исследуемом образце. Количество Т-2 токсина определяют по форму-, ле: Х=14А'Б, где X—концентрация Т-2 токсина в корме, мгк/кг; А—объем экстракта, мкл; В—количест во Т-2 токсина, соответствующее величине ■ доны подавления роста дрожжей: 0,05 мкг —0 мм, 0,06—7, 0,07—8, 0,08—9, 0,10-10 Наименьшие обнаруживаемые копценiрации Т-2 токпна в зерне и комбикормах с< ei.'iH.i ,:ui 50-60 и 80-100 мкг/кг, еогл век-1пенно

БЛГ-мею i оказался пригодным для обнаружения в культурах грибов и р ¡eiи 1 ел: шi\ субстратам не только Т-2 токсина, но и других трихотеценовых •..üKo.tAcihiCB, oi носящихся к тинам Л и С, а т а.кже аурофузарнна (пигмента F. V l'allliiiOUl'U 111) и сапонинов. В системе эшлацеТдТ'ТОлуол 3:1 НТ-2 токсин

1>,ж.1р\ жчкаек'я как .¡она подавления роста с Bf 0,10, неосоляниол—0,15; ве-рр\карпны Л, В и J -0,36, 0,65 и 0,82; роридипы А. D » ^ — 0,19, 0,54'и 0Л5; сатратоксииы С, D, F, G Н—0,04, 0,15, 0,44, 0,61 и 0,79; трихоте-цин —0,80. Однако благодаря иекоюрым различиям, — в хроматографической-подвижное in, xapaKiepe очерченаостн зон подавления роста тест-микроорганизмов — можно различить все названные вещества. -

Ряд факторов могут существенно изменить чувствительность - БАГ-метода, особенно состав среды—наличие тех или иных углеводов, витаминов или ве-' шести, способствующих проникновению мнкотоксина через клеточную оболоч---kv Величина зоны подавления роста тест-микроорганизмов тем больше, чем меньше толщина слоя питательной среды и чем меньше клеток нанесено на ее. поверхносп). Однако в основном чувствительность метода зависит от тест-мик-рооргаинзма. Пьнаись найти более чувствительные штаммы мы определили отношение к Т-2 токсину,, зеараленону, аурофузарину, афлатоксину В1 и . охра-токсину А у 63 штаммов дрожжей из Всесоюзной коллекции микроорганизмов. 47 штаммов оказались чувствительными к одному или нескольким

мпкотоксинам, из них 3 —к зеараленону (1000 миг), 29 —к аурофузарину и 32 —к т-2 токсину. Представители родов ВгеЦапотусев, Bhodosporidium> ВЬс^о1оги1а, и 5с1п208ассЬагогпусез обнаружили значительную

чувствительность к Т-2 токсину и — за исключением видов ВЬс^о1оги1а — к аурофузарину- Однако по чувствительности к Т-2 токсину штамм С. рве^О'Ьгор^аПв 44 ПК превосходил все остальные штаммы. Поэтому попытались повысить его чувствительность с помощью мутагенеза. Предположили, что более чувствительными к Т-2 токсину, чем исходный штамм, могут оказаться мутанты характеризующиеся замедленным ростом. Действительно, у 4 из 37 таких мутантов чувствительность к Т-2 токсину была больше, чем у исходного штамма С. р5еиб01г0р1саН8 44 пк. Один из мутантов—

Н-11 — депонирован в коллекции грибов ВНИИ антибиотиков Мннмедпрома СССР под номером 314А. Испытания показали, что наименьшие количества НТ-2 токсина, выявляемые штаммами 44 пк и Н-11, равны 0,9 и 0,2 мкг, Т-2 токсина— 0,05 и 0,03, роридина А — 0,04 и 0,004, веррукарнна А —0,004 и 0,0017. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЙ Т-2 ТОКСИКОЗ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ

ПТИЦ

При псроральном введении двухмесячным цыплятам масляного раствора Т-2 токсина ЛД 50 составили для породы белый леггорн — 5,72-4-0.28, родай-ланд — 6,07 Ч; 0,41, австралорп — 6,22-4-0,40, мраморный леггорн — 6,27 4-0,38 и плимутрок — 8,09±0,47 мг/кг. Различий между породами по клиническому проявлению острого Т-2 токсикоза у цыплят не выявили- Через 3-4 часа после 'введения Т-2 токсина у цыплят проявилась астения и отсутствие аппетита; крылья были опущены; отмечали затрудненное дыхание, понос. У по1 лучивших большие дозы наступало коматозное состояние; летальному исходу предшествовали конвульсии. Смерть наступала преимущественно в течение двух суток после введения Т-2 токсина. Сублетальные дозы вызывали в последующий период наблюдения уменьшение потребления корма и привесов, пропорциональное дозе. При вскрытии павших цыплят в брюшной полости обнаруживалось подобное мелу вещество, отложившееся на серозной оболочке в виде кристаллов; на слизистой зоба и желудка находили утолщения, струпья и некрозы. При забое оставшихся в живых цыплят какие-либо патологические изменения не обнаружили.

Скармливание комбикорма, содержащего Т-2 токсин в концентрациях от 1 до 16 мг/кг, вызвало у цыплят токсикоз, проявившийся развитием характерных некротических поражений слизистых оболочек ротовой полости и языка (концентрации мг/кг), нарушением развития оперения, задержкой роста (^8 мг/кг) , увеличением отхода (^4 кг/мг), уменьшением относительной массы бурсы и селезенки (^16 мг/кг).

._ У_'индюшат, при Т-2 токсикозе наблюдали некрозы в ротовой полости (при

^0,5 мг/кг I, отставание н росте и развитии оперении, увеличение смертности (^2 мг/кг). уменьшение относительной массы бурен (^4 мг/кг). В тпм\'се обнаружили ннполютнпные процессы, проявившиеся уменьшением размеров долей и кордовой .¡они, а также увеличением величины мозговой зоны- При 0,5—2 мг/кг наблюдали лишь начальные фазы нпволютивных процессов и тимусе, характерна;,ющшеч появлением миолеопсиных очаго,! протзо.шза тпмоцптв. При более высоких копнент рациях Т 2 гоксина в корме помимо шт-пенвного иротеолнза тимоцитов отмечено значительное уменьшение корковой зоны. В зобе происходили утолщение и деформация эпителиального пласта, десквамп-ция и деструкция ею клеточных элемент он. метпплгпня бпзялыюго слоя эшг ¡елия в железистые элементы, деструкция концевых отделов слизистых желез н тотальное их перемещение в толщу эпителиального пласта. При 4 мг/кг наблюдали очаговые инфильтрации лимфоцитами собственного слоя слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки. В печени отмечена жировая инфильтрация паренхимы перппортального (при ^2 мг Т-2 токсина / кг корма) или диффузного (при^З мг/кг) типа'с сохранением общей структуры ткани. Три-глицериды определялись в виде капель до предела заполнивших цитоплазму гепатоцптов. Нередко переполненные .жиром клетки, сливаясь вместе, образовывали жировые кнс!ы. Колпчеспш гликогена и печеночной ткани было енн жено. При 3 мг/кг обнаруживали десфуктавные изменения г, днегальных отде лах извитых канальцев ночек, а 1 акже пшои.киию фолликул»» селезенки.

Скармливание .¡-месячным индейкам и течение 30 дней от 0.5 до 2 мг Т-2 юксина/кг корма не вызвало каких либо клинических признаков токсикоза ча исключением некрозов в ротовой полости, однако проявилось в гпстоструктур пых нарушениях в предзобной части пищевода, зобе, двенадцатиперстной кишке и тимусе; в надпочечниках наблюдали усиление секреторной активности клеток модулярной зоны. ,У подопытных индеек титры гемагглюпшиноп после иммунизации эритроцитами барана были существенно ниже, чем в контроле.

У утят при Т-2 токсикозе появляются некрозы роговой полости, языка, нитевода, зоба, железистого желудка и двенадцатиперстной кишки (при 0,25 0,5 мг/кг), задержка роста (при ¡^1 мг/кг), ухудшение аппетита, уменьшение подвижности, скучивание (при ^2 мг/кг), увеличение отхода (при ^4 мг/кг). Весьма чувствителен к Т-2 токсину железистый желудок: усиление активности клеток покровного эпителия с явлениями отторжения и превращения его в детрит наблюдали при ^0,25 мг/кг.

ЛД 50 Т-2 токсина при введении внутрь 10-дневным гусятам итальянской породы составила 3,4 мг/кг, что указывает па их высокую чувствительность. Включение Т-2 токсина н корм псятам серой украинской породы вызвало деструктивные изменения в ротовой полости и пищеводе (при ^0,3 мг/кг), задержку роста (при ^0,5 мг/кг). В группах, получавших <^2 мг/кг, отхода гусят в результате токсикоза не было, однако 2,4 и 4 мг/кг вызвали значитель-

цую смертность. Увеличение относительной массы сердца отмечено при ^0,6 мг/кг и уменьшение относительной массы печени — при мг/кг.- В железистом отделе желудка и двенадцатиперстной кишке обнаружили деструктивные изменения, характеризующиеся некрозом ворсинок. В сердце при 0,3-0,0 мг/кг наблюдали мутное набухание и жировую дистрофию кардиомиоцитов. нарушение анастомозов между мышечными волокнами, образование очагов некроза; ядра кардиомиоцитов были набухшие, гипохромные; сосудистая , сеть миокарда — кровенаполнена. Изменения в печени при всех концентрациях Т-2 токсина характеризовались резко выраженной жировой дистрофией гепатоци-тов; в ночках наблюдали нарушение проницаемости стенок кровеносных сосудов, появление очагов мутного набухания и жировой дистрофии.

Включение Т-2 токсина в корм кур-несушек отрицательно сказывается на массе яиц (при мг/кг), вызывает уменьшение яйценоскости (при ^2 мг/кг), живой массы (при мг/кг) и выводимости яиц (при мг/кг).

В концентрациях 0,5 и 1 мг/кг Т-2 токсин не оказал отрицательного влияния на сохранность 10-месячных индеек и не вызвал каких-либо клинических отклонений; не изменились объем, концентрация и подвижность спермы индюков, а также масса яиц, оплодотворяемость и выводимость. Однако у подопытных индеек отмечено уменьшение яйценоскости в сравнении с контролем.

. Таким образом, у с.-х- птиц наиболее чувствительна к действию Т-2 токсина слизистая оболочка ротовой полости. В экспериментальных условиях некротический стоматит проявляется при 0,25-1 мг Т-2 токсина /кг корма. При 0,25 0,30 мг/кг обнаруживаются деструктивные изменения в органах гусят п утят. Задержка роста молодняка проявляется при значительно больших концентрациях— 0,6-4 мг/кг. Снижение яйценоскости у кур и индеек наблюдается соответственно при ^2 и ^0,5 мг/кг; следовательно, птица чутко реагирует па микотоксин в корме, уменьшая яйценоскость. Другие симптомы у кур и цыплят проявляются -при более выйоких концентрациях Т-2 токсина: нервные расстройства, ненормальное развитие оперения, уменьшение в сыворотке уровней щелочной фосфотазы, лактатдегидрогеназы," холестерола, протеина, альбуминов, К и Mg,увеличение содержания мочевой кислоты — при 4 мг/кг (Wy-att В. D. et àl., 1973; Chi M. 5. et al., 1977; Bichard К. E. et al., 1978; Huff w. E. et al-, 1988).

Однако в процессе изучения нами полевых вспышек токсикозов кур (1982 г.) и индеек (1984 г.) Т-2 токсин был обнаружен в относительно низких концентрациях — от 0,04 до 0,11 мг/кг — неактивных в условиях эксперимента. Следовательно, обнаруживается явное — примерно, 25-кратное — несоответствие результатов полевых наблюдении и экспериментов по скармливанию птице кормов, содержащих Т-2 токсин. Одной из причин такого несоответствия является, по-видимому, обстоятельство, на которое указал Hamilton Р- В. (1984): минимально действующий уровень микотоксина определяется количеством животных в эксперименте. Удвоение поголовья на каждую дозу мйкоток-

спид могут модифицирован, , различимо биологические активные вещества-витамины (Солш Л. Ь. а СошЬя Л,, 1981), кокцпдпостатикп Уапхд А- С" 1989). Мы наблюдали, как включение в корм ацетилнрованного мо-ноглицерида АМГС-100 (поверхносТно-активного вещества) существенно усугубляло проявление у цыплят Т-2 токсикоза в сравнении с группой. получавшей только Т-2 токсин. У цыплят, получавших АМГС-100, живая масса в <1-иедельиом возрасте была наибольшей -— 235 ' -28 г; у получавших Т-2 токсин (8 мг/'кг) обнаружились значительная задержка роста — 204 ± 20 г против 218 ±21 г в контроле — и некрозы в ротовой полости; одновременное включение в корм Т-2 токсина и АМГС-100 дало наихудший результат: средняя масса те ла 155±39 г, опюаиелыыя масса селезенки 0,09->-0.02 г/100 г против 0,1Н-0,19 г/100 г в остальных трех группах. Необходимо также учитывать, что диагностические ветеринарные лаборатории контролируют в кормах лишь несколько микотоксииов из более чем двухсот известных. Поэтому в случаях обнаружения какого-либо одного микотоксина представляется вероятным наличие и других микотокеннов. При одновременном содержании в корме Т-2 токсина и афлатоксина возможно их взаимодействие (Нин Е. 1988). Птица более чувствительна к Т-2 токсину, если в корме одновременно содержится охратоксин А или дезокешшваленол (лиЬепаГ. Г. е( а!., 1989). Наблюдения в производственных условиях приводят к заключению, что уровни микотоксииов в кормах, ранее расцениваемые как «безопасные», имеют существенное экономическое значение. .\1и!г110:к1 .V (1989) сообщил, что содержание в кормах зеараленона, к коюрому птица в'евма устойчива в экспериментальных условиях, связано с увеличением выбраковки бройлеров, а также с проявлением как у петушков так и у курочек различных патологических отлонеинп. При определении влияния рационов на основе кукурузы или сорго на продуктивное!ь яичных кур ПгаШОП \. I.. (1989) наблюдали через 24 недели после начала опыта значитльное снижение яйценоскости, а также изъявления слизистой ротовой полости и чешуйчатую метаплазию желез пищевода и подчелюстных слюнных желез- Анализы показали, что к комбикорме на основе сорго содержатся ДОН (298 мкг/кг) и зеар,%тьноц( 1102 мкг/кг); уровень . загрязнения микокжеинами комбикорма на основе кукурузы был значительно ниже (ДОН-102 и афлатоксина В1-0,5 мкг/кг). Дезоксиниваленол — так же как и зеараленон — характеризуется относительно слабым действием на птицу, — факт, который, казалось бы, должен означать, что бес смыцленно искать дезоксиниваленол даже при явных признаках токсикоза, вызванного трихотецепами. Однако такая оценка дезокешшваленола не учитывает корреляции между уровнем дезоксиниваленол:! и наличием фузариев в зерне. Характерную ситуацию описал НатПюп Р. В. (1990), в которой скармливание птице кукурузы заспоренной фузйриями (в среднем, 240000 к. о. е./г) вызвало признаки трихотеценового токсикоза, однако оказалось невозможным выяснить, какие именно микотоксины вызвали эту проблему. Третья

часть образцов кукурузы США содержала дезоксппиваленол, и его наличие является маркером, указывающим на нечто, характеризующееся дейстнем на птицу. Маркер свидетельствует о возможном наличии других микотоксннов, в том числе малоизученных или совсем неизученных. Напрашивается вывод, что выявление в корме какого-либо мик-отоксина даже в следовых количествах следует рассматривать как признак неблагополучия.

8. СИНДРОМ УХУДШЕНИЯ КАЧЕСТВА ЯЙЦА У КУР, ВЫЗЫВАЕМЫЙ FUSARIUM G R А МIN Е А В U М. А У Р О ФУЗ А Р И Н - НОВЫЙ ФАКТОР ЗАГРЯЗНЕНИЯ ЗЕРНА

В предыдущих разделах показана роль Т-2 токсина, вырабатываемого Fusarium секции 5рогоtrichlellа , ка1; фактора загрязнения зерна и причины токсикоза птиц. Случаи заболеваний птиц, вызванные другими фу-" зариотокснпамп — дезоксиннвалсполом, зеараленоном, монилиформином, фу-зарохроманоном, вортманнпном и другими — до настоящего времени не зарегистрированы. Тем по менее, исследования, направленные на выяснение значения названных фузариотоксинов в патологии птиц ведутся в ряде стран весьма интенсивно. Особенно о^то отностся к F. graminearum ■ и его Мико-токсннам.

Проведенные нами анализы зерна, выращиваемого в хозяйствах Украины показали, что Fusarium graminearum выделяется из кукурузы и пшеницы ежегодно. Особенно массированное поражение зерновых в Украине произошло в 1988 году, когда некоторые наиболее неблагополучные участки посевов, — по свидетельству специалистов Винницкой областной ветеринарной ла- ' боратории, — сжигали.

Включение 6% культуры на зерне одного из выделенных нами штаммов Р. graminearum 5-87 в корм цыплятам породы род-айланд (при этом содержание дезоксиниваленола в корме не превышало 1,8 мг/кг), которых выращивали с 1- до 60-дневного возраста, не сказалось на сохранности, однако вызвало сильное подавление роста, а также поражение почек, инволюцию тимуса и бурсы. Объяснить столь выраженное токсическое действие F. graminearum 5-87 на цыплят можно было лишь присутствием какого-то неизвестного фактора — помимо дезоксиниваленола и зеараленона.

При скармливании курам породы полтавские глинистые с 1-го дия жизни культуры F graminearum 5-87 в количестве 5% к массе корма было обнаружено развитие ранее неизвестного синдрома, характеризующегося ухудшением качества яйца и снижением яйценоскости. Яйцо подопытных кур— в отличие от контрольных — характеризовали следующие особенности: необычный коричневый оттенок желтка (в 100%, случаев); пятнистость желтка, нередко с мясными и кровяными включениями; слаборазвитые или разжиженные градинки; зеленоватый оттенок белка; кровяные включения и утолщенные муциновые

подокна в белке; уменьшение диаметра и увелечени" высоты желтка и белка; уменьшение средней толщины скорлупы; ухудшение выводимости п качества молодняка. Через 7-8 дней после исключения культуры гриба из корма морфологические характеристики яйца подоньппых кур возвращались к норме.

Синдром воспроизвели и на курах породы лет горн после включения ку.ть-1уры I-. цгатшсаПИП 5-87 в количествах 2,5, 5 и 10%. Изменение окраски желтка п появление других аномалий в яйце наблюдали на 5-8Й день после включения в корм культуры гриба. При максимальных концентрациях (5 и 10%) через 10-13 дней полностью прекращалась яйцекладка-После исключения культуры гриба из корма через 3-9 чней яйцекладки ночобнонлились: нормальная окраска желтка восстанавливалась через 1-2 педели.

Путем постановки биопроб' на курах установлено, что фактор, вызывающий синдром, термосгабилен (сохраняется после автоклавирования в течение часа при 1 атм.) и не разрушается в водном растворе аммиака в течение двух суток при комнатной температуре.

Изучение штаммов F. gramincarum выделенных в разные годы из пшеницы, кукурузы, ячменя и овса) покалю, что более половины нз них (13 из 20) характеризуются способностью вызывать синдром ухудшения качества яйца; эти штаммы являются также продуцентами те-юксниипн.тенода н зеа-раленона.

В послсд\ ющем удалось заметить, чю каждый из 13 шымчы). вьнывакг щнх синдром, вырабатываем па зерне пигмеи!, коюрый можно выдетпп, пу тем экстрагирования хлороформом и далее распредели i е н>ной колоночной хромаю) рафией экс > раю а и крпс i аллн ¡ацпен. Характ ерпой особенностью ¡пимента явилась его биологическая активность относительно предегавпгелей 15 ролов дрожжеподобных грибов (и» -М нсслсдоиэнныл). в ч.чеш-кми. Lm'i.'I-aiinomyCCS, Mctschnikowia и других. Были выявлены ппзммы дрожжей, с помощью которых пигмент обнаруживается в количествах 30-40 нг.

Для изучаемого пшмепта характерны, в УФвндпмом cneKipe 'V max (им), этанол, 96°-213, 268, 378; ИК-спеюр >/шах (см-1) -1677 (СО-песитз.), 1662 (СО-пирон), 1612 (СО-хелат.), 1597 (двойная связь); Н-ЯМР-спектр .S (м. д.)■ относительно ТМС-2,44 (СНз), 4,10 (ОСНз), 6,22 (Н), 7,60 (Н), 14,13 (ОН); основные пики ' и масс-спектре, m/z (%) — 570 (26), 550 (56); 540 (45), 525 (100), 5И (10); пигмент идентифицирован как дпмерптлй- пафтохи-пон а у р о ф у з а р и и, описанный ранее в работах .\shlcv Л. N. Cl 1)1.

(1037) л ¿hibaia S. nt al. (1968).

Способность вызывать изучаемый сиидрсм отмечена только у штаммов, вырабатывающих аурофузарин; Г. gramiГЮаППИ "е вырабатывающие ауро ^jiyipiiii, не вызывают синдром-.

Мы попытались выяснить, сохранится ли у Г.: gramincarum способность вызывать синдром, если будет понижена способность вырабатывать аурофузарин. С этой целью использовали штамм 88-1, характеризующийся спо-

способностью вырабатывать зеараленон, дезоксиннваленол и аурофузарин. У мутантов штамма 88-1, полученных с помощью -нитрозометилмочевины, отмечено существенное изменение способности вырабатывать микотокенны. В культурах некоторых мутантов содержание зеараленона превышало 8 г/кг, т. е., увеличилось в сравнении с исходным штаммом в 65 раз; содержание де-зоксипиваленолд и аурофузарина в культурах мутантов значительно уменьшилось; случаев увеличения концентрации этих двух веществ не было. Для биопробы на курах отобрали культуры трех мутантов и исходного штамма, содержащие зеараленон, дезоксиннваленол и аурофузарин в следующих количествах (мг/кг):

88-1 (исходный штамм) 120 400 1100

88-1к-3 310 . 200 1100

881к-36 5 40 50

88-1к-41 600 200 500

После включения в корм курам четырех названных культур в количестве 4% признаки синдрома обнаружили только в трех случаях- Куры, получавшие культуры 88-1 и 88-1к-3, — с наиболее высоким содержанием аурофузарина, — несли яйцо с нездоровой коричневой окраской и глубокой пятнистостью желтка и разжиженными градинками. Культура 88-1к-41 с пониженным содержанием аурофузарина вызвала лишь появление яиц с коричневатым желтяком, а культура 88-1к-36 с наименьшим содержанием ауйзузарина оказалась нетоксичной — в яйце не обнаруживались какие-либо патологические отклонения.

Таким образом, содержание аурофузарина в корме связано со степенью проявления признаков изучаемого синдрома.

Необходимо также отметить, что аурофузарин способен изменить окраску от желто-оранжевой при низких рН до фиолетовой в щелочной среде. Можно предположить, что именно это его цвойство проявляется в первую очередь при изменении окраски желтка.

Содержанием аурофузарина, следовательно, можно объяснить розовую окраску зерна пораженного Р. дгат!п е. а гит. Розовоокрашенное зерно пред-тавляет собой серьезную санитарно-гигиеническую проблему. Министерством здравоохранения СССР установлены Санитарные правила «Определение токсичности зерна (ржи, пшеницы) с розовой окраской оболочек» (Москва, 1987), в которых отмечается,' что «в зерне с розовой окраской оболочек, пораженном микроскопическими грибами, может накапливаться целый ряд токсических грибных- метаболитов, природа которых не всегда известна..,»- В фузариозных розовоокрашенных зернах пшеницы урожая 1988 года (Харьковская область) разработанным нами биоавтографическим методом аурофузарин обнаружили в' количествах до 30 мг/кг; кроме того обнаружили дезоксиннваленол. В средних пробах пшеницы содержание аурофузарина и дезоксиниваленола достигало

соответственео 2-2,5 в 0,6 мг/кг. Оба метаболита были обнаружены нами в пробах пшеницы и в последующие годы — в 1989 и 1990 — в количествам до 4-5 мг/кг.

Ранее о случаях обнаружения аурофузарина н зерне к литературе не сообщалось.

Учитывая, что нафгопироиы, к числу коюрых относится аурофузарпп. обладают токсичностью для мышей и крыс (Ghosal 5. ct ul., '979), данный биологически активный пигмент следует рассматривать как природный загрязнитель зерна. Предсюиг изучить его влияние на живые организмы. С процессе оценки качества зерна и продуктов его переработки, по-нпдпмо.ну. следует учитывать наличие и концентрацию как аурофузарина так и других пигментов грибов, хотя в настоящее время при определении в кормах мнко-токенпов их удаляют за ненадобностью как коэкстрактпвные вещества, мешающие проведению анализа...

9. ПРОФИЛАКТИКА ФУЗАРИОТОКСИКОЗОВ

Проблема профилактики фузарпотокенкозов сельскохозяйственных животных ----- комплексна!!, ее решение требует координированных усилий на все\ этапах производства, хранения, транспортировки к переработки 'ч-рпа, а 1акже и процессе скармливания ею животным Дешм пепнос: ь меронрин, ий можно »ценить только осуществлия контроль за уровннмч мнкотокеннов |( кормах. В настоящее время основные усилия д. б. направлены на предо; вращение -ли: ф'.попш фузарпозов злаковых культур и зги рязконин зерни мс.кокженнами в период уборки путем высушпвпння пли применения консерванта. Сре ш многочисленных химических средств обработки зерна с целью предо! вращении порчи одними из наиболее практичных являются аммиак и соли нмонпя. п частности, углсаммонпниые соли (УАС). представляющие собой смесь различных карбонатов аммония. При добавлении i< зерно УАС поси-пснпо разлагаются на углекислоту и аммиак, вследствие чего подавляется ж извелся к-.тв-ность. бактерий и грибов. Существенно, что аммиак вызывает уменьшение содержания афлатоксинов, пеницилловой кислоты, охратокенна А, цитринпна, зеаралензна fCheikOWski .!• et ai., 1981), а также, как было показано нами в разделе 4, превращение Т-2 токсина в менее токсичные соединения --НТ-2 токсин, Т-2 трнол и Т-2 тетраол. В лабораторных и производственных условиях мы наблюдали, как через 1-3 суток после внесения в зерно повышенной влажности (ячмень — 19,5-24,1%, кукуруза — 30-32V УАС с коли чествах. 2,5-4%. грибы, теряли жизнеспособность и в течение иос тсдуюши.ч О-12 месяцев из зерна не- выделялись: Мы установили также, что кроме фунгицид-нон активности УАС характеризуется способностью разрушать в кормах некоторые микотоксины. В частности, содержание афлатоксинов В1 и - G1 в пшенице с влажностью 24% в течение, 4-8, недель после внесения 4-9% УАС

уменьшилось с 12,5 и 3,75 мг/кг до уровней ниже чувствительности метода анализа (<0,02 мг/кг); токсичность зерна, пораженного Р. graminearum после обработки УАС также значительно уменьшилась, '

Токсичность УАС для птиц, невысокая; у кур токсикоз проявляется после однократного введения внутрь УАС в дозе 1,5 г/кг (Гладенко И. Н- и др., 1985). В наших опытах у 1-28-дневных цыплят, в корм которым включили УАС в количествах 1, 2 и 4%, задержка роста отмечалась 'лишь в группе, получавшей максимальное количество препарата; каких-либо других патологических отклонений не наблюдали. У кур, получавших УАС в концентрациях 1 ,2 и 4%, отмечено уменьшение яйценоскости; по массе яиц и качеству скорлупы различий не было.

В следующий опыт взяли 6 групп 2-педельных цыплят породы леггорн (по 10 голов в каждой). Контрольная группа получала основной рацион, в корм остальных групп добавили УАС в количествах 1, 2, 4, 8 и 16%. Клинические отклонения наблюдали у цыплят, получавших наибольшие количества УАС (8 и 16%); в течение первых 6 недель опыта цыплята хуже поедали корм, были малоподвижны, ноги у них были тоньше, чем у остальных, а гребешки — наименее развиты; цыплята этих групп заметно отстали в росте. В крови у подопытных цыплят по данным сотрудников лаборатории токсикологии Украинского, НИИ экспериментальной ветеринарии отмечено повышение некоторых показателей азотистого обмена (аммиака, мочевой кислоты, небелкового азота) и щелочного резерва. В 12-недельном возрасте цыплят вакцинировали протмв оспы и Ныокастлской болезни. Учет количества воспаленных перьевых фолликулов па 7-9 день показал, что реакция на протнвооспен-ную вакцину во всех группах вырал<ена одинаково; не выявили различий между группами и по величине титров антигемагглютинннов- В дальнейшем какие-либо различия между группами не обнаруживались; наблюдения вели за 4 группами, получавшими соответственно 0, 2, 4 и 8% УАС; в каждой группе было по 8 кур и по 2 петуха. Начало яйцекладки отмечено в 157-162-дневном возрасте; яйценоскость в течение последующих 4-х месяцев во всех четырех группах была на одинаковом уровне (в контроле: 43, 78, 83 и 82%; в группе получавшей 8% УАС: 42, 79, 82 и 73%), однако масса яиц у кур, получавших УАС, на протяжении всего опыта была ниже, чем у кур контрольной группы. Влияние УАС на оплодотворяемость не 'обнаружено; выводимость в опытных группах"была выше,' а цыплята от подопытных кур — мельче, чем в контроле.

Убедившись в том, что УАС сравнительно малотоксичны для цыплят и кур, мы' обработали данным препаратом кукурузное зерно с влажностью 24% и курузные початки с влажностью 25%. Зерно в процессе хранения приобретало более темную окраску и запах аммиака, который со временем уменьшался. Скармливание цыплятам-леггорн в течение первых 4 недель жизни ра-рациона, содержащего 40% консервированной УАС кукурузы, ■ не позволило

вышинь какие-либо различия с контрольными «ыпляташг, получавшими г>а- -цон включающий 40% высушенной кукурузы

В последующие ¡985-87 годы в производственных условиях было законсервировано 13 т кукурузы с влажноеп>ю 30-32% н 30 т ячменя с влажностью 19,5-24.1%. Научно-производственные оаыты на курах яйценоских пород (всею по 1100 голов в контрольных и опытных групглх) покачали, что включение птице начиная с 10- пли ЮО .ик'впою вырастн в рацион кукипчы или ячменя, консервированных УАС, в количестве 30% не оьаоыавст огрицателывно влияния на продуктов;,wo клчсстял. Сохранность кур в опытных и контрольных группах находилась в пределах 95,7-99.4 и 93,009,2%. гйненоекпп ь ла 4 месяца на начальную несушку — 63, 84,4 и 83,6 (опыт) и 06, и 77,3

(контроль). Масса яиц в опытных и контрольных группах находилась в пределах 50,354,5 н 50,1-54,0 т. Биологические показатели качества инкубационных яиц были определены в 12 закладках (1610 из опытных и 171 о яиц — из контрольных групп): оплодотворенпость яиц была на одинаковых уровнях, соответственно, 86,8-96,2 и 88,2-94,8%; выводимость яиц в опытных группах (82,1-85,1%) была выше, чем в контрольных (76,1-78,9%); вывод цылят в опытных 1 руинах (71.1-80,9%) также превышал вывод в контрольных группах (67,7-75%) Жгсикспособное (ь цыплят от опытных кур была не хуле, чем от контрольных. При проведении биохимшкекнч исследоваши"! крови с>meciвей ной разницы между опытной и контрольном 'р\пилмп кур их обнаружено Ветеринарьо-еапи i арная эксперт та, включающая ограполет ические, бпохп мнческне п бактериологические нсследовипя, показала, что содержание t; кор ме курнес\шек .'50% кукурузы, консервированной УАС, не оказало суии-овсп кого влияния на качество полученного от них мяса.

11а основании ре улыатов выполненной работы можно оценить УАС как удовлетворительное средство для консервирования Фуражкою зерна повышенной влажности. Представляется возможным включать в рацион кур-несушек зерно, обработано? УАС, в количестве 30% От меченное в данной работе увеличение относительно контроля выводимости янн и вывода цыпляг у куп, корм которых содержал зерно, обработанное УАС, можно объяснить разрушением некоторых токсических веществ под действием УАС. Brake Y et al. (¡987) также сообщили об улучшении оплодотворенности и выводимости у кур, и корм контрим включили ингибиторы грибов.

10. ВЫВОДЫ

I. Впервые описаны и диагноецпроваиы спонтанные случаи фузариотокск-козов гусят и индюшат, вызванные микоюксинамн F. sporotriciiioides Существенным диагностическим признаком фузариотоксикозов является некротический стоматит- В пробах кормов, вызвавших заболевание, обнаружен Т-2 токсин; в культурах выделенных грибов F. sporotrichioides кроме

Т-2 токсина обаружсны НТ-2 токсин, неосоляниол и зеараленон. Зарегистрированы также вспышки кормовых токсикозов кур, цыплят и взрослых индеек, вызванные микотоксинами F. sporotrichioides. Проявления фузарио-токсикозов, вызванных трпхотецепамн типа А, носят периодический характер и могут причинить экономический ущерб.

2. Разработаны способы получения трнхотецеповых фузариотоксинов типа А: Т-2 токсина, НТ-2 токсина, Т-2 триола, Т-2 тетраола. Антибиотическая активность названных микотоксинов относительно Candida pscudotropiciilis

44 пк определяется соотношением 800:73:2, 8:1.

3. С помощью индуцированного мутагенеза и селекции получены высокоактивные штаммы-продуценты Т-2 токсина (8-12 г/кг питательной среды). У мутанта F. sporotrichioidos Гш '15 отмечено новое качество нехарактерное для данного вида: способность вырабатывать Т-2 токсин при 24-28°.

4. Разработан бпоавтографпческий метод определения в зерне и комбикормах трнхотецеповых микотоксинов типов А и С с использованием штаммов дрожжей, высокочувствительных к названным микотоксинам. Чувствительность метода определяется качеством тест- микроорганизма и в меньшей степени — составом питательной среды и другими факторами. С помощью наиболее чувствительных «диких» штаммов дрожжей на ТСХ-пластинке типа «Снлуфол» можно обнаружить 40-50 нг,Т-2 токсина. Установлено, что увеличить чувствительность дрожжей к трихотеценам не менее, чем в 3-4 раза, возможно путем получения мутаций, характеризующихся замедленным ростом колоний.

5. Получены данные о клиническом и патолого-гистологическом проявлении Т-2 токсикоза, а также о степени развития признаков токсикоза у молодняка кур, индеек, уток, гусей и кур- и индеек-несушек в зависимости от концентрации Т-2 токсина в корме. Клиническое проявление Т-2 токсикоза сходно у всех изученных видов птицы и характеризуется развитием некротических поражений слизистых оболочек ротовой полости и языка (при концентрациях ^>0,25-1 мг/кг), угнетением, нарушением развития оперения (^2-4 мг/кг), задержкой роста (^1-8 мг/кг), увеличением смертности (^2-4 мг/кг). Пато-логотистологические изменения при Т-2 токсикозе птиц включают: деструктивные изменения в эпителии органов пищеварения, деструкцию желез пищевода, зоба и железистого отдела желудка, нарушение проницаемости стенок кровеносных сосудов, развитие атрофических процессов в тимусе, жировую шфильтрацию паренхимы печени. У кур Т-2 токсикоз проявляется снижением гйценоскости (при ^2 мг/кг), уменьшением массы яиц (^1 мг/кг) и сниже-шем выводимости. У индеек снижение яйценоскости отмечено при 0,5 мг Т-2 оксина/кг корма.

6. В производственных условиях болезнетворное действие Т-2 токсина на ельскохозяйственных птиц может проявиться при содержании его в кормах ,04-0,05 мг/кг, т. е., в концентрациях, недействующих на птиц в условиях эк-перимента.

1. Установлено, что у кур при скармливании культуры на зерне Р. mifiearum темотипа DON (2"3 г/сутки) обнаруживается ранее неизвестный синдром ухудшения качества яйца, характеризующийся коричневым цветом, н пятнистостью желтка, аномалиями градинок, ухудшением выводимое!п. Штаммы, вызывающие синдром, являются продуцентами желто-оранжевою пш мента с антибиотической активностью относительно многих родов дрожжей, идентифицированного как димерный нафтохипон — аурофузарин- Разработан сп-особ получения аурофузарнна. Разработан нысокочупсгнптелышй onoaBiuipa-фический метод определения аурофузарнна в зерне, с помощью которою аурофузарин обнаруживали в пшенице, выращенной в Харьковской облает в 198890 гг в количествах до 5 мг/кг Вероятно, аурофузарин следует рассматривать как природный фактор загрязнения зерна и учитывать его наличие и количество при оценке качества зерна.

8. Осуществление профилактики фузариотокенкозов сельскохозяйственных птиц возможно только при объединении усилий предприятий, производящих и хранящих компоненты кормов, комбикормовых заводов и птицеводческих хозяйств. В государстве необходим систематический контроль за уровнями ми-котокспиов в зерне и продуктах его переработки.

9. Обработка фуражного зерна углеаммонийными солями ведет к прекращению жизнедеятельности фузариев и других плесневых грибов. Включение в рацион зерна, консервированного углеаммонийными солями, в количестве 30% вызывает v кур увеличение выводимости яиц и вывода цыплят и не оказываем отрицательного влияния на продуктивность и качество мяса.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ

1- А. С. 660653 СССР, М. Кл. А 23 Kl/Qgll. Способ обнаружения в кормах мпкотоксннов из группы 12, 13-эпокси-д-трихотсценов/ Котик А. Н., Ру-хляда В В„ Труфанова В. А. (СССР). — Кз 2473360/30-15; Заявл. 04.04 /: Опубл. ] 979, бюлл. ЛЬ 17.

2. А. С 1503295 СССР, М. Кл. 4 12 № 1/14. Шцшм гриба Fusarium spo-rutrichiclla, используемый для получения Т-2 токсина / Котик А. Н., Труфанова В. А. (СССР). — № 4373312/30-13; Заявл. 03.02.88; Опубл. 1989, бюлл- Л1> 31.

3. А. С. 1508574 СССР, М. Кл. 4 С 12 № 15/00. Штамм дрожжей Candida pscudtilrupiculis, используемый в качестве тсст-мнкроорганизма при обнаружении трпхотсцеиовых мпкотоксннов / Котик А. Н., Труфанова В. А. (СССР). — № 4373311/30-13; Заявл. 03.02.80; Опубл. 1989, бюлл. Л» 34.

4. А. С. 1521430 СССР, М. Кл. А 23 К 1/00. Способ выращивания цыплят-бройлеров / Крюков В. С., Котик А. П., Полунина С- В. (СССР). — Л14351787/30-15; Заявл. 29.12.87; Опубл. 1989, бюлл. № 42.

5 А. С. 1634233 СССР, М. Кл. А 23 К 1/00. Способ обработки корма .содержащего мпкотокспны / Труфанова В. А., Котик А. Н. (СССР). — № 4418990/15; Заявл. 03.05.88; Опубл. 1991, бюлл. № 10.

6. Горобец А. И., Котик А. II., Труфанова В. А. К методам определения сапонинов в люцерне // Птицеводство. —К.: Урожай- — 1990.— Вып. 43,С. 35-38.

7. Дорошко П. П., Котик А. Н. Случай фузарпотоксикоза гусят / / Птице-пронзводство. — М-, 1975. — № 11. — С.40-41.

8. Котик А. II. Ауксотрофные и морфологические мутанты Fusarium spo-rotrichioidics полученные при воздесгвии \т-питрозометилмочевпны / /Генетика. — 1969. — Т.5. — JV> 7--С.98-101.

9. Котик А. Н. Генотнпическая изменчивость токсигеиности FusariumceK^ui "^porolrichiclhi/ / Материалы 2-й годичной коиф. ВИЭВ--М., 1970. -С.123-126.

10. Котик А. Н. Токсико-бпологическое исследование корма для птиц / / Итоги научи, нссл. и рекомендации по профилактике болезней птиц в хозяйствах промышленного типа; тез. докл. Всес. совещан. — Куйбышев, 1973. -С.117.

11. Котик А. И. Случай фузарпотоксикоза индюшат / / Научи, -техн.бюлл. УШШ. — Харьков, 1976. — Л"» 3. -С.36-37.

12- Котик А. Н. Микотоксикозы птиц // Тез. докл. Всес. научн.-техн. коиф. Проблемы защиты кормов и продуктов животноводства от загрязнения токсическими веществами». — М., 1980. — С.39-41.

13. Котик А. II. Обнаружение стахиботриотоксипов / / Ветеринария. — М-, 1982. — № 5.-С.66-67.

14. Котик А- II. Фузариотоксикоз птиц // Бюлл. ВИЭВ. М., 1984. — Вып. 54.-С.50-52

15. Котик А. Н. Биоатографический метод для определения трихотецено-

шч wwr.i'Kcmwa я >ерие и продуктах его переработки j / Сб. учсбпо-мсл одп •tccKiix материалов «Оценка загрязнения пищевых продуктов микогокспнзмн.'Г. 3: Контроль м загрпзненпеч продоплльстг.снипго сырья и nnmcni.ix продуктов мпкотоксипамти. •• -.Международные учебны,- курсы ФАО/ЮПГ.П/СССР. Иентр международных проемов, ГКПТ, — М., 1985. — С.297 299.

16. Котик А И Ветер.чнарпо с:',тч арный контроль клчеевл кормов ' / Промышленное гппиО'одпко - К,- Урожчи • 198'). — С.210-215.

17. Котик А. II-, Рухляда В. В., Труфанова В. А. Методические указания по кол нчес i ванном v опредслсИмЮ Т 2 Токсина в зерне и коме...корми... Ь .вер ждены Р^ В Роса, риприМа сССР 2о м,., д 1С27 .. В кии. е. .'ЛаСс-рс гзрпыз не следования в ветеринарии: биохимические и микологические», под ред. Б. И. Антонова. — М„ ВО <- Ат роиромпзда1». — 1991- — С.122-124.

18. Котик А. Н., Труфанова В. А. Действие микотоксина Т-2 в рационе на индюшат и цыплят // Тез. докл. регион- сими. «Мнкотоксииы». — Оренбург, 1977. — С.89-90.

19. Котик А. II., Труфанова В. А. Определение трнхотецеповых микоток-инов в кормах и культурах грибов биоавтографическим методом / / Труды ВНЭВ «Ветеринар:;,-л микологи:: и мпкпобно "огп-г* -М. !9"7. -- Т 05. — С. 127 1.31

"0. Котик Д. И. 1 р\ iP,i:,iu;,i В Д. , ■! ¡•¡•.•.•,¡«:,;i п »г.офн ц.; > ima ф\ -¡¡>рно-мксикоза с \ и i.nw ' í í -1 у ч; i ;e\|i. «'кт. • Nillíll'l Хар: >в. : os",. ,\» I.'n - C.-15-16

21. Koinx Д. 1!. Труф.ч.еиа В. Д iV-м •• ••р.-ф,!,-:ч mí, ■■-.- ...¡ о. ■•<■ n . пня

трнхо!еце'повтт\ микото'<ени'ni н ..ер.те :: ер;. !\ • i м> ыро;: •'•ои.и • /' 1 n¡ и -

ни и t-aiiHiapim М.- .Медицин.", I98P. ЛЬ 0 С ".>-5!.

22. Ко; ПК Л. 11. Трут').,нона В Д. л-.е ф; рот: '; ■. ■ ;. ■ i Л-'л.ор ;:,,р;и-нения зерна // Научн.-техн. бюлл. УНИИП.-Харьков, 1990- — № 29. — C.39-4J.

23. Котик А II. Труфанова В. Об-з--"".-;;:-- - т-;чен'т':е пур-фуз?1"нп и с; о снял, с тачестгом яиц у к \ п / t Тс ток т. Все и омт. кочф • Эффективное использование кормов в нтицс»одс1т.~. -- llouocu¿uf>¿.v, i 290.

С.101-102.

24- Котик А. П., Труфанова В. А. Подострыи Т-2 мпкотосикоз у птиц // Пет ернп.зрня. - !9?0 -- ЛЪ -1. - €58-59.

2.", Ко п"; А И, 'Груфагона В. Д , Пи.г "c¡ ко М К. К в •ирт*) " нчьс-пшых уровнях Т2 ¡оксипа в кормах для птиц ,-', Тез. дик/:. Весе изучи-гемт т.онф .Проб к.мы "¡шиты кормов и :шсд jk.cü АТг-.о"! т и; ! , 11 ' тчгрязтт" пня токсическими вешссгвами. -— м , 19R0 ----- С.oí о-о

26. Котик А. П., Труфанова В. А-, Бреславец В. А. Синдром изменения качества яиц у кур // Научн.-техн. бюлл. УНИПП. — Харьков, 1990. — № 29- - С.41-42.

27. Котик А. Н., Чернобай В. Т., Комиссаренко Н. Ф., Труфанова В. А. Выделение мнконжеина р^а^ит эрогоШсЫеПа и изучение его

физико-химических свойств // Микробиологический ж-л. — 1979. — Т.41. _

Х° 6. — С.630-639.

28. Котик А. Н., Труфанова В. А-, Гладенко И. Н.( Малинин О. А., Шевцова Г. Н., Щуляк В. Д., Ярошенко С. С., Дроздова Н. Г- Влияне углеам-монийных солей на птиц // Развитие производства аммонийно-карбонатных соединений и их использование в сельском хозяйстве. — К-: Наукова думка, 1986. — С. 168-175.

29. Котик А. Н., Труфанова В. А., Дегтярь И- Н., Шевцова Г. Н„ Малинин О. А., Ярошенко С. С-, Дроздова Н. Г. Влияние корма, обработанного углеаммонийными солями, на продуктивность и воспроизводительные функции кур-несушек / /Консервирование и обогащение азотом продуктов растениеводства аммонийно-карбонатными препаратами. К.-. Наукова думка, 1988. —С.95-9830. Котик А. Н., Труфанова В. А., Рухляда В. В., Погребняк Л-И., Обра-

жей А. Ф-, Корзуненко О. Ф., Васянович О. Н. Инструкция по изготовлению и контролю Т-2 токсина для микотоксикологических исследований. Утверждена ГУВ при Госкомисснн Сов. Мин. СССР по продовольствию и закупкам 23 ноября 1990 г.С.1-16.

31 Котик А. Н., Труфанова В. А., Рухляда В. В., Погребняк Л. И., Обра-жей А. Ф., Корзуненко О. Ф., Васянович О. Н. Т-2 токсин- Технические условия. ТУ-10 07.77-91. Утверждены ГУВ при Гос. комиссии Сов. Мни. СССР но продовольствию и закупкам 15 апреля 1991 г. — С.1-13.

32. Котик А. П., Труфанова В- А., Красников Г. А., Кленнна Н.В., Антонов В. С., Колоусова Н. Г., Гудкова О. Н-, Руденко Е. П. Методические рекомендаций по диагностике, профилактике и лечению микотокенкозов сельскохозяйственных животных и птиц. Утверждены методической комиссией Укр. НИИ экспериментальной ветеринарии (протокол1 № 13 от 13 декабря 1991 года). — Харьков- — 1991.

33. Кравченко Л. В., Котик А. Н- О биохимическом механизме действия Т-2 токсина // Материалы 1-й Всес. конф. «Чужеродные вещества в пищевых продуктах» ■— Алма-ата., 1979. — С.37-38.

3-1. Кравченко Л. В., Котик А. Н. Действие однократного введения Т-2 токсина па активность лпзосо-мальных ферментов печенн, почек и селезенки индюшат // Научн.-техн. бюлл. УНИПП- — Харьков, 1983. — Л» 14. — С.44-46.

35. Кравченко Л. В., Тутельян В- А., Поздняков А. Л, Котик А. Н., Труфанова В. А. Морфологические и биохимические изменения у индюшат, вызванные Т-2 токсином // Научн.-техн. бюлл- УНИИП. — Харьков, 1984. — № 16, —С.30-32.

36. Кутшок П. Н-, Котик А. Н., Труфанова В. А., Бондаренко 10. В. Поиск генетико-биохимических маркеров резистентности с-х птиц к мнкоток-

сину Т-2 // Паучн,-произв. коиф. еНопые методы селекции и биотехнологии в животноводеIвс. 2 Репродукция, популяипонпая генетика и биотехнология» - К.. 1991. — С. 108-109.

37. Кутнгок П. И, Котик А. Н., Труфапова В. А., Бондаренко Ю.В. Гене-1 ическне аспекты резистентности кур к м икот окоту Т-2 // Тезисы докз. VI с|>:\*да Украинского общества генетиков и селекпнонеров им. 11. И. Вавилова. Полтава, 1992 г. — Киев, 1992. — С 60.

38 Мсдепцси А. Г.. Ког,,к А. П.. Труфапова В. А. Акн.менко В. К. Идентификация аурофуjapiiiia и цзолятах Fusarium yramiiiear шн вызывающих у кур синдром ухудшения качества яйца / / Прикладная биохимия » микробиология (в печати).

39. Пилипенко Л1- В., Когпк А. Н. Труфапова Ü. А. Изучение действия различных концентраций Т-2 токсина в корме на 3-4 месячных индеек // Научи.-техн. бюлл. УНИИП. --- Харьков, 1979. — № 7. - С.37-41-

40. Пилипенко М Е , Труфапова В. А., Котик А. II. Изучение гистологических изменений в органах индюшат при Т-2 токсикозе / / Нау«.н.-техн. бюлл. УНИИП. — Харьков, 1979. — № 7. — С.35-37.

41. Пилипенко М. Е., Бырка В. С-, Котик А. II., Труфанона В. А. Экспериментальный Т-2 токсикоз гусят // Научн.-техн. бюлл. УНИИП. — Харьков, 1981 — 11 - С.49-62.

12. Пилипенко М I.., Н г.т р к а В. <".. Котик А, П., Труфапова В-А. Гпскг ло] нчеекие изменения в органах гусят при 'жеперпмег.талвном Т-2 токсикозе / .' Научи. ii-Mi бюлл. Villilin. - X.ipi.ho». 1980. М- 20 С 47 19.

43. Труфапова В. А., Котик А. П. Вирусоподобные частицы п мицелии ткешенпого ипам.ма Fusarium «'"»urolrichiuitjcs .' / Тел токл. рс-: нон симп. <Мико!окс1Ш№>. - ОреиОург. 1977. • С.14-15.

•11 Труфапова В. А.. Копт А П. Применение в щ-пцепидсгве хглеачмо-нпйных о,злей для консервировании п дегоксиклцин фуражного зерна // Тез. докл. Всес. научи.челн- коиф. «Эффективное использование кормов в птицеводстве». — Новосибирск. 1990. — С. 103-104.

13 Труфапова В Д.. Пилипенко М .К.. Котик V 11. Эксперимент альщ-ш Т 2 токсикоч утят / / Паучн,-техн. бюлл. У111111П. - - 1980. - .V- 9. - С.40-49

46- Труфанова В. О., Котик А. М. Використанпя фуражного зерна, Кон-сервованого вуглеамон1йними солями, в годт'вл! смьськогосподарськоГ rmiui // Птах1вннцтво. — К.: Урожай, 1992. — Вии. 45. — С.43-45.