Сравнительная характеристика основных биологических свойств различных штаммов герпесвируса лошадей 1

Чернявцева, Анастасия Павловна

Диссертации по ветеринарии → Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Сравнительная характеристика основных биологических свойств различных штаммов герпесвируса лошадей 1

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Чернявцева, Анастасия Павловна Москва 2006 г.

Ученая степень: кандидата биологических наук

ВАК РФ: 16.00.03

Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Сравнительная характеристика основных биологических свойств различных штаммов герпесвируса лошадей 1

На правах рукописи

Чернявцева Анастасия Павловна

Сравнительная характеристика основных биологических свойств различных штаммов герпесвируса лошадей 1

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

Москва - 2006

Работа выполнена в лаборатории эпизоотологии, диагностики и профилактики респираторных вирусных болезней лошадей и крупного рогатого скота ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко Российской академии сельскохозяйственных наук

Научный руководитель:

доктор ветеринарных наук, Заслуженный деятель науки РФ, лауреат Премии Совета Министров СССР, лауреат Государственной премии Республики Саха (Якутия), профессор Константин Павлович Юров

Официальные оппоненты:

- доктор ветеринарных наук, Заслуженный деятель науки РФ, профессор Валентин Александрович Бурлаков

- кандидат биологических наук, лауреат Премии Совета Министров СССР Григорий Андреевич Надточей

Ведущая организация - ФГУ Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов

Защита состоится « б » декабря 2006 г. в 14°° часов на заседании диссертационного совета Д 006.033.01 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук при ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко по адресу: 109472, Москва, Рязанский проспект, д. 24, корп. 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко.

Автореферат разослан «3 / » СиЗ^Е^А 2006 г. Учёный секретарь

ЯНСГМ^ТЯНИПШШГЛ

Н.П. Овдиенко

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

1.1. Актуальность темы.

В настоящее время в России функционируют 74 конных завода, 400 племенных конеферм, 42 ипподрома. Наиболее многочисленное поголовье — около 54% от общего количества лошадей - содержится в личных и подсобных хозяйствах.

Основной целью развития коневодческой отрасли на период до 2015г. является полное обеспечение сельскохозяйственных, спортивных и других организаций различного назначения и форм собственности, а также физических лиц высококачественными лошадьми (Программа развития коневодства в РФ на период до 2015г., Минсельхоз РФ, в материалах третьего Всероссийского съезда коннозаводчиков, 2004).

В связи с указанным большое значение приобретает обеспечение ветеринарного благополучия отрасли.

К числу наиболее распространённых и опасных вирусных болезней лошадей относится ринопневмония — герпесвирусная инфекция 1. Болезнь характеризуется значительным разнообразием форм клинического проявления. Форма течения ВГЛ-1 инфекции зависит от многих причин: пола, возраста, физиологического состояния (жерёбости), инфицирующей дозы возбудителя, иммунного статуса животных и в значительной степени от биологических свойств возбудителя. В структуре инфекционной патологии лошадей ВГЛ-1 является одной из главных причин респираторных болезней, абортов, перинатальной смерти жеребят и поражения нервной системы.

Нервное проявление ВГЛ-1 инфекции было впервые зарегистрировано в Норвегии в 1966 г (Б. 8ахе§аагс1, 1966). С тех пор нервная форма ВГЛ-1 инфекции была описана почти в каждой стране. В нашей стране нервную форму ринопневмонии впервые описал К.П. Юров (1984).

Несмотря на то, что в нашей стране нервно-паралитическая форма ВГЛ-1 инфекции регистрируется в виде локальных вспышек, в ряде стран с

развитым коневодством (США, Канада, страны Европы) в последние годы отмечается значительное увеличение заболеваемости лошадей с поражением ЦНС. Экономическая значимость этих вспышек определяется тем, что поражаются высокоценные племенные и спортивные лошади. По данным ряда авторов, проявление нервной формы ВГЛ-1 инфекции варьирует от единичных спорадических случаев до поражения 90 % поголовья. Смертность от болезни также значительно изменяется в течение различных вспышек и может достигать 40 - 50 % (J.A. Mumford and N. Edington, 1980; M.J. Studdert et al., 1981; M.J. Studdert, 1983; C. van-Maanen et al., 2001; B. Stierstorfer et al., 2002; G.P. Allen et al., 2006). Переболевшие лошади теряют свою племенную или спортивную ценность.

Кроме того, в последние годы появились сообщения об интродукции нейропатогенных вариантов ВГЛ-1 в популяции животных других видов: зебры, газели Томпсона, жирафа.

Распространение нервно-паралитической формы ринопневмонии ряд исследователей связывает с появлением новых доминантных штаммов вследствие мутантных изменений в геноме ВГЛ-1 (В. Stierstorfer et al., 2002; J.P. Tearle et al., 2003; M.J. Studdert et al., 2003; A.K. Gupta et al., 2005; J.R. Patel and J. Heldens, 2005 и др.). При этом происходит вытеснение старых эпизоотических вариантов (штаммов) ВГЛ-1. Эти изменения неизбежно определяют необходимость переоценки эффективности существующих средств и методов борьбы с инфекцией.

В связи с этим особенно актуальными являются исследования по изоляции и изучению штаммов в случае абортов у кобыл и респираторной инфекции у жеребят, выявлению нейропатогенных вариантов вируса.

1.2. Цель и задачи.

Целью нашей работы являлось: выявление и изучение нейропатогенных штаммов вируса герпеса лошадей 1, изолированных из абортированных плодов и респираторных органов лошадей и находившихся в активной

циркуляции в различных регионах РФ и стран СНГ в период с 1974 г. по 2004 г.; изыскание метода контроля реактогенности (нейропатогенности) коммерческих вирус-вакцин против ринопневмонии лошадей.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

- отработать методики культивирования эпизоотических штаммов ВГЛ-1 in vitro; индикации вируса в реакции непрямой иммунофлуоресценции; индикации вирусной ДНК в ПЦР;

- изыскать адекватную лабораторную модель для оценки вирулентности эпизоотических штаммов ВГЛ 1;

- изучить в сравнительном аспекте особенности экспериментальной инфекции у лабораторных животных (белых мышей линии BALB/c) при заражении их различными штаммами ВГЛ-1;

- разработать лабораторный метод контроля реактогенности (нейропатогенности) коммерческих вирус-вакцин.

1.3. Научная новизна.

Впервые предложен метод дифференциации штаммов ВГЛ-1 по их нейропатогенности для лабораторных животных (белых мышей линии BALB/c). Изучены нейропатогенные свойства эпизоотических штаммов ВГЛ-1, изолированных на территории ряда стран СНГ в период с 1974 г. по 2004 г. Установлено, что девять штаммов из шестнадцати исследованных (56%) обладают нейропатогенными свойствами. У мышат-сосунков линии BALB/c эти штаммы при интрацеребральной инокуляции вызывают нервно-паралитическое заболевание с 100% летальным исходом. Показано, что нейропатогенность свойственна штаммам возбудителя, изолированным из абортированных плодов кобыл.

Меньшее число штаммов (44%), выделенных преимущественно из органов дыхания жеребят, при интрацеребральной инокуляции слабовирулентны и не вызывают появления симптомов поражения ЦНС.

Полученные результаты позволяют объяснить причины возникновения вспышек заболевания лошадей с симптомами поражения ЦНС, их взаимосвязь с вирусными абортами у кобыл.

1.4. Практическая значимость.

Предложена лабораторная модель для дифференциации эпизоотических штаммов ВГЛ-1 по их нейропатогенным свойствам. Оценка нейропатогенности штаммов ВГЛ-1 позволяет проводить отбор штаммов, перспективных для создания новых и совершенствования существующих средств диагностики и специфической профилактики герпесвирусных инфекций лошадей. Оценка вирулентности вакцинных штаммов на лабораторных животных (белых мышах линии ВАЬВ/с) может служить методом контроля реактогенности (нейропатогенности) коммерческих вирус-вакцин против ринопневмонии лошадей.

1.5. Личный вклад соискателя заключается в проведении работ по культивированию и титрованию штаммов ВГЛ-1, в организации и проведении работы по экспериментальному воспроизведению инфекции ВГЛ-1 на белых мышах, по реизоляции вируса из органов заражённых животных и его идентификации в реакции нейтрализации, по выявлению ДНК ВГЛ-1 в органах заражённых животных методом ПЦР, по гистологическому исследованию срезов органов, по выявлению ВГЛ-1 методом непрямого иммунофлуоресцентного анализа, а также в анализе и обобщении результатов исследований.

1.6. Апробация работы.

предложения, изложенные в диссертации, обсуждены и одобрены на межлабораторном научно-производственном совещании научных сотрудников ГНУ ВИЭВ им. Я.Р. Коваленко (Москва, 2006 г.).

1.7. Основные положения, выносимые на защиту.

На защиту выносятся:

— экспериментальные данные, характеризующие нейропатогенность эпизоотических штаммов ВГЛ-1, находившихся в активной циркуляции на территории РФ и стран СНГ в период с 1974 г. по 2004 г., а также аттенуированных штаммов, используемых в производстве некоторых коммерческих вакцин;

— результаты сравнительного изучения особенностей ВГЛ-1 инфекции на лабораторных животных (белых мышах линии ВАЬВ/с);

— рекомендации по лабораторному контролю реактогенности (нейропатогенности) коммерческих вирус-вакцин против ринопневмонии лошадей.

1.8. Публикации.

По материалам диссертационной работы опубликовано 2 научные работы.

1.9. Структура и объём работы.

Материалы диссертации изложены на 129 страницах компьютерного текста и состоят из следующих разделов: введение, обзор литературы, собственные исследования, выводы, практические предложения, список литературы. Список литературы содержит 165 источников, из них 145 -иностранные. Диссертация иллюстрирована одной схемой, 11 таблицами, 21 рисунком.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Работа выполнена в 2003 - 2006 гг. в лаборатории эпизоотологии, диагностики и профилактики респираторных вирусных болезней лошадей и крупного рогатого скота ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко в соответствии с утверждёнными планами научно-исследовательских работ в период 2003 — 2006 гг. (исследования по заданию РНТП 02.02.04; 08.02.02.03.01).

2.1. Материалы и методы.

Вирусы.

В работе использовали 15 эпизоотических штаммов ВГЛ-1, выделенных в разные годы в лаборатории эпизоотологии, диагностики и профилактики респираторных вирусных болезней лошадей и крупного рогатого скота ВИЭВ им. Я.Р. Коваленко из абортированных плодов и респираторных органов жеребят (профессор К.П. Юров), 1 референтный штамм (КуБ) и 3 вакцинных штамма ВГЛ-1: штамм СВ/69 — производственный вакцинный штамм ВГЛ-1 (профессор К.П. Юров); штамм, обозначенный нами как Кт, выделен из коммерческой вакцины «Шипотипе» (производства США); штамм ЯРК — штамм, выделенный нами из коммерческой вакцины «ИРК» (производства ЧССР). Эпизоотические штаммы, прошедшие после их изоляции 6—10 пассажей в культуре клеток, хранились в музее лаборатории эпизоотологии, диагностики и профилактики респираторных вирусных болезней лошадей и крупного рогатого скота в лиофилизированном виде. Использованные в работе штаммы представлены в таблице 1.

Клеточные культуры.

Штаммы вируса пассировали, используя перевиваемую клеточную культуру почки кролика (ЯК-13). Штамм СВ/69 культивировали в перевиваемой клеточной культуре почки телёнка (ПТП), штамм Яш — первые два пассажа культивировали в перевиваемой клеточной культуре лёгкого

Таблица 1 - Штаммы ВГЛ-1, использованные в работе

№ штамм место выделения год выделения

1 ПП Московская обл. 2002

2 Став-74 Ставропольский край 1974

3 СТ-1 Ставропольский край 1976

4 СТ-2 Ставропольский край 1976

5 КР-1 Краснодарский край 2004

6 КР-2 Краснодарский край 2004

7 КБ-1 Кабардино-Балкарская Республика 1976

8 АБ-33 Ростовская обл. 1979

9 В/ж Краснодарский край 1985

10 КИР-1 Киргизия 1974

11 1каЗп Ростовская обл. 1974

12 МКЗ-1с Московская обл. 1987

13 КАЖ Ростовская обл. 1974

14 ОП-5-75 Рязанская обл. 1975

15 Т-1 Краснодарский край 1974

16 KyD США, штат Кентукки (референтный штамм) 1954

17 СВ/69 вакцинный штамм 1969

18 Rm вакцинный штамм

19 RPK вакцинный штамм

эмбриона лошади (EEL), в последующем использовали клеточную культуру RK-13.

Животные.

В опытах использовали 169 мышат-сосунков линии BALB/c в возрасте 3 суток с массой тела 1765 —2683 мг.

Титрование вирусов.

Инфекционный титр вируса определяли путём заражения культуры клеток: ПТП (для штамма СВ/69), EEL (для штамма Rhinomune), RK-13 (для остальных штаммов). Для титрования использовали 96-луночные планшеты

для клеточных культур (фирмы «CORNING Costar»). Титр вируса оценивали в lg ТЦД50/1мл по стандартной методике (по Риду и Менчу).

Реакция нейтрализации.

Реакцию нейтрализации с разведениями сывороток и постоянной дозой вируса использовали для определения титра специфических антител в сыворотках лошадей, которые в последующем использовались для идентификации реизолятов вируса из мозга заражённых животных и для непрямого иммунофлуоресцентного анализа.

Двукратные разведения сывороток исследовали против 100 ТЦД50 вируса. Для постановки реакции использовали 96-луночные планшеты для культур клеток (фирмы «CORNING Costar»). Учёт результатов реакции проводили через 72 часа по наличию цитопатических изменений.

Экспериментальная инфекция.

Для воспроизведения экспериментальной инфекции мышатам опытных групп вводили интрацеребрально по 20 мкл соответствующего штамма вируса в титре 6,5 lg ТЦЦ5о/мл. Животным контрольной группы вводили интрацеребрально по 20 мкл культурапьной жидкости неинфицированной культуры.

В течение 21 дня ежедневно проводили клинический осмотр заражённых животных. В течение первых 10 дней после заражения фиксировали изменение массы тела путём взвешивания на весах модели ЕК-205-А (d=0,lMr) производства ООО «ПетВес» (Санкт-Петербург).

Реизоляция вируса.

Головной мозг, лёгкие, печень, селезёнку мышат асептично отбирали после естественной смерти или эвтаназии и гомогенизировали в 200 - 400 мкл среды Игла MEM. Наличие вируса в полученной суспензии проверяли в культуре клеток по развитию характерного цитопатического действия. Для заражения культуры клеток полученную суспензию центрифугировали при 3000 об./мин. 20 мин. и полученный супернатант использовали для

заражения. Во всех случаях при отсутствии ЦПД в первом пассаже проводили три последовательных «слепых» пассажа.

Для идентификации каждого реизолята использовали реакцию нейтрализации со специфической сывороткой. Индекс нейтрализации, превышающий 2 ^ ТЦЦ50/мл, принимали за свидетельство принадлежности реизолированного вируса к ВГЛ-1.

Полимеразная цепная реакция.

Выделение ДНК из суспензии мозга, лёгких, печени, селезёнки осуществляли с использованием «Реагента в пробирках для выделения ДНК из биопроб с целью последующего анализа методом полимеразной цепной реакции ДНК-ЭКСПРЕСС» производства НПФ «Литех» (Москва).

Наличие ДНК ВГЛ-1 в суспензии из мозга, лёгких, печени и селезёнки мышей определяли методом ПЦР с праймерами, специфичными нуклеотидной последовательности фрагмента гена гликопротеина В, как описано у Я. Кпвахуа с1 а1. (1993). Размер амплифицируемого фрагмента -1181 п. н. Локализация праймеров на геноме ВГЛ-1 показана в таблице 2.

Таблица 2 - Праймеры, использованные для постановки ПЦР

праймер последовательность нуклеотидов (5' - 3') локализация на геноме ВГЛ-1

F CTTGTGAGATCTAACCGCAC 2427 - 2446

R GGGTATAGAGCTTTCATGGG 3607-3588

Праймеры синтезированы ЗАО «Синтол» (Москва). Для постановки реакции амплификации использованы реактивы компании «Fermentas АВ» (Литва).

Для анализа ПЦР-амплифицированной ДНК использовали метод электрофореза в 0,8% агарозном геле. Для проведения электрофореза использованы реактивы компании «Fermentas АВ» (Литва).

Гистологическое исследование.

Головной мозг, лёгкие, печень, селезёнку мышат, заражённых штаммами КР-1 и КБ-1 ВГЛ-1, отбирали для гистологического исследования после эвтаназии, осуществлённой на 5 сутки после интрацеребральной инокуляции им вируса. Отобранные органы помещали в фиксирующую жидкость (10%-ный водный раствор нейтрального формалина). Для изготовления гистосрезов зафиксированные органы заключали в парафин. Полученные на микротоме гистосрезы окрашивали гематоксилин-эозином и исследовали в световом микроскопе.

Непрямой иммунофлуоресцентный анализ.

Головной мозг и лёгкие мышат, заражённых штаммами КР-1 и КБ-1 ВГЛ-1, отбирали для иммунофлуоресцентного анализа после эвтаназии, осуществлённой на 5 сутки после интрацеребральной инокуляции им вируса. Отобранные органы помещали в фиксирующую жидкость (10%-ный водный раствор нейтрального формалина). Для изготовления гистосрезов зафиксированные органы заключали в парафин. Полученные на микротоме гистосрезы наклеивали на обезжиренные предметные стёкла и депарафинировали путём проведения через два ксилола, 96- и 70%-ный спирты и воду (по 2-3 минуты в каждой жидкости).

Подготовленные срезы фиксировали охлаждённым фосфатно-солевым буфером (137 mM NaCl, 2,7 mM КС1, 10 гпМ Na2HP04, 2 mM К2НР04, рН 7,2). Затем срезы инкубировали в 300 мкл лошадиной сыворотки с титром специфических антител в РН 1:32, взятой в разведении 1:5. Инкубация производилась во влажной камере при температуре 37°С в течение 45 мин. После этого срезы отмывались фосфатно-солевым буфером 3-4 раза по 2 — 3 минуты каждый раз. Затем срезы инкубировали в 300 мкл меченной изоционат флуоресцеином сывороткой во влажной камере при температуре

37°С в течение 45 мин. После чего предметные стёкла отмывались, как описано выше и готовились для исследования под микроскопом с нефлуоресцирующим иммерсионным маслом.

Обнаружение яркой жёлто-зелёной флуоресценции принимали за свидетельство наличия ВГЛ-1.

Статистическая обработка результатов.

Математическая обработка полученных данных проводилась с использованием компьютерной программы Microsoft Office Excel 2003. Статистическая обработка данных проводилась с использованием пакета "STA ТРАК-WIN".

2.2. Результаты исследований.

2.2.1. Культуральные свойства эпизоотических штаммов ВГЛ-1. использованных в работе.

В опытах использовали штаммы с титром 6,5 - 7,5 lg ТЦД30/мл. Штаммы вируса пассировали, используя перевиваемую клеточную культуру почки кролика (RK-13).

После заражения указанной культуры клеток цитопатические изменения характеризовались появлением в клеточном монослое очагов округлённых клеток через 24 часа после заражения. Через 48 часов в клеточном монослое наблюдалось образование пустот, окружённых многоядерными синцитиями.

При этом штаммы различались по их способности размножаться и вызывать деструктивные изменения в культуре клеток.

По характеру цитопатического действия различали:

— штаммы, которые вызывали разрушение монослоя с образованием крупных округлых клеток, часто собранных вместе наподобие виноградных гроздьев (штаммы В/ж, КИР-1, КАЖ, Т-1);

- штаммы, цитопатическое действие которых выражалось преимущественно формированием многоядерных клеток и симпластов (штаммы КБ-1, МКЗ-1с);

— штаммы, характеризующиеся смешанным цитопатическим действием (штаммы ПП, Став-74, СТ-1, СТ-2, КР-1, КР-2, АБ-33, 1каЗп, ОП-5-75).

2.2.2. Нейропатогенность эпизоотических штаммов ВГЛ-1 для белых мышей линии ВАЬВ/с.

При выполнении данного раздела работы использовали 15 эпизоотических штаммов ВГЛ-1, а также референтный штамм ВГЛ-1 КуО.

Проведёнными исследованиями установлено, что часть штаммов (эпизоотические штаммы ПП, СТ-1, СТ-2, КР-1, КР-2, Став-74, АБ-33, 1каЗп и референтный штамм КуО), обладает выраженной в разной степени нейропатогенностью для белых мышей линии ВАЬВ/с. После их инокуляции у мышей наблюдали развитие нервного симптомокомплекса. Первые признаки заболевания регистрировали на 3 - 5 день после заражения. Заболевание начиналось с возбуждения, повышения тонуса скелетной мускулатуры, затем появлялось нарушение координации движений, стремление двигаться вперёд, плавательные движения в положении на боку. Смерть наступала на 5 — 8 сутки после заражения (48 — 72 часа от начала заболевания), летальность составляла 100%.

Характерным признаком заболевания служило снижение массы тела (отставание в росте). На рис. 1 приведены типичные кривые изменения массы тела мышат, заражённых нейропатогенным штаммом (АБ-33) и штаммом, не обладающим нейропатогенностью (МКЗ-1с).

Масса тела у мышей с клиническими признаками поражения центральной нервной системы, отличалась (при ежедневном взвешивании) от массы тела контрольных животных с первого дня после заражения. Незначительный прирост массы тела наблюдался лишь в первые 2 — 3 дня, после чего

время после заражения, сут.

а)

время после заражения, сут.

б)

Рис. 1. Кривые изменения массы тела мышат, заражённых нейропатогенным штаммом — АБ-33 (а) и штаммом, не обладающим нейропатогенностью — МКЗ-1с (б) по сравнению с контрольными.

ежедневно до момента смерти фиксировались отрицательные приросты по сравнению с предыдущим днём. При этом, как правило, снижение массы тела по сравнению с предыдущим днём наблюдалось за сутки до появления первых клинических признаков.

У контрольных животных не наблюдали каких-либо признаков заболевания в течение всего срока наблюдения. Прирост массы тела на 10-й

день эксперимента составлял в среднем 301,7% к массе тела на момент начала опыта.

Инфекционный вирус реизолировали в культуре клеток Я.К-13 из проб мозга мышей, погибших (подвергнутых эвтаназии в атональной стадии) с признаками поражения ЦНС. При заражении клеточной культуры ШС-13 супернатантом суспензии мозга мышонка, инфицированного штаммом В/ж и погибшего на 8 сутки после инокуляции без каких-либо клинических признаков инфекции вирус удалось реизолировать путём двух последовательных пассажей в культуре клеток ЮС-13. Во втором случае (летальный исход на 14 день после инокуляции) размножение вируса не регистрировали в течение трёх последовательных слепых пассажей. Идентификацию каждого реизолята осуществляли, используя реакцию нейтрализации со специфической сывороткой.

Инфекционный вирус не выявлен в мозге контрольных животных, подвергнутых эвтаназии на5-йи 10-й день от начала эксперимента.

Суммарные данные по реизоляции вируса и выявлению ДНК ВГЛ-1 методом ПЦР в суспензии мозга погибших и убитых мышат представлены в табл. 3.

Используя метод полимеразной цепной реакции ДНК ВГЛ-1 выявили во всех исследованных пробах мозга мышей, погибших (или подвергнутых эвтаназии в атональной стадии) с явлениями поражения ЦНС, а также в мозге одного мышонка, заражённого штаммом В/ж и погибшего на 8 день после инокуляции без признаков поражения нервной системы. Определяя ДНК ВГЛ-1 в мозге мышонка, заражённого штаммом В/ж и погибшего на 14 день после инокуляции без каких-либо клинических признаков инфекции, а также в мозге контрольных животных, получили отрицательный результат.

Таким образом, девять штаммов из шестнадцати (56%), включая референтный штамм КуБ, оказались нейропатогенными для мышат линии ВАЬВ/с. Этиологическая роль вируса в развитии нервного

Таблица 3 - Результаты реизоляции вируса и выявления ДНК ВГЛ-1 методом ПЦР в суспензии мозга погибших (или подвергнутых эвтаназии в агональной стадии) мышат.

штамм количество реизоляция вируса выявление ДНК

мышей в в культуре клеток ВГЛ-1 методом

группе ПЦР

пробы % пробы %

ПП 6 б/б» 100 6/6 100

Став-74 б 6/6 100 6/6 100

СТ-1 б б/б 100 б/б 100

СТ-2 6 б/б 100 6/6 100

КР-1 6 6/6 100 6/6 100

КР-2 6 6/6 100 6/6 100

АБ-33 6 6/6 100 6/6 100

1каЗп 8 8/8 100 8/8 100

КуБ 8 8/8 100 8/8 100

В/ж 6 1/1 100 1/1 100

1/0 0 1/0 0

контроль 9 4/0 0 4/0 0

'' числитель - количество исследованных проб; знаменатель - количество положительных проб

21 повторное воспроизведение опыта (второй пассаж)

симптомокомплекса была доказана реизоляцией инфекционного вируса из мозга заражённых животных в культуре клеток и его идентификацией в РН со специфической сывороткой. ДНК ВГЛ-1 в мозге таких мышат была выявлена также с помощью ПЦР.

Семь из шестнадцати исследованных штаммов (КБ-1, В/ж, КИР-1, МКЗ-1с, КАЖ, ОП-5-75, Т-1) не вызывали развития у мышей клинических признаков поражения центральной нервной системы при интрацеребральной инокуляции в течение всего срока наблюдения. Масса тела таких мышей постоянно возрастала и через 10 дней составляла 125,2 - 218,1% к массе тела до заражения. Исключение составлял штамм В/ж. У одного мышонка (из шести в группе) наблюдалось отставание в росте и летальный исход на 8

день после инокуляции без каких-либо клинических признаков поражения ЦНС. При повторном воспроизведении опыта (второй пассаж) также наблюдалось отставание в развитии одного из шести мышат и летальный исход на 14 день после заражения.

Полученные экспериментальные данные позволяют нам сделать заключение, что полевые штаммы вируса ринопневмонии лошадей различаются по их вирулентности для белых мышей линии ВАЬВ/с. Белые мыши линии ВАЬВ/с могут служить адекватной лабораторной моделью для изучения нейропатогенных свойств штаммов ВГЛ-1, дифференциации по этому признаку эпизоотических штаммов возбудителя.

2.2.3. Патоморфологические и иммуногистологические исследования.

На данном этапе работы использовали два эпизоотических штамма ВГЛ-1: КБ-1 (Кабардино-Балкарская республика; 1976 год) и КР-1 (Краснодарский край; 2004 год).

В предыдущих исследованиях было установлено, что штамм КР-1 ВГЛ-1 обладает выраженной нейропатогенностью для мышат линии ВАЬВ/с. Штамм КБ-1 ВГЛ-1 не вызывает развития у мышей клинических признаков заболевания при интрацеребральной инокуляции.

В данном опыте мышата были разделены на 3 группы. Восьми мышатам группы № 1 вводили интрацеребрально по 20 мкл штамма КР-1 в титре 6,5 ^ ТЦД5о/мл. Восьми мышатам группы № 2 вводили интрацеребрально по 20 мкл штамма КБ-1 в титре 6,5 ^ ТЦЦ50/мл. Восьми мышатам группы № 3 вводили интрацеребрально по 20 мкл культуральной жидкости неинфицированной культуры клеток ЮС-13.

Суммарные данные по реизоляции вируса из суспензии мозга, лёгких, селезёнки, печени мышат, подвергнутых эвтаназии на 2, 4 и 6 сутки после

инокуляции, а также данные по выявлению ДНК ВГЛ-1 в этих органах методом ПЦР, представлены в табл. 4.

Таблица 4 — Результаты реизоляции вируса и выявления ДНК ВГЛ-1 методом ПЦР в суспензии мозга, лёгких, селезёнки и печени мышат, подвергнутых эвтаназии на 2, 4 и 6 сутки после инокуляции.

штамм день после инокуляции реизоляция вируса в культуре клеток выявление ДНК ВГЛ-1 методом ПЦР

мозг лёгкие селезёнка печень мозг лёгкие селезёнка печень

КБ-1 2 2/2"' 2/0 2/0 2/0 2/2 2/0 2/0 2/0

4 2/2 2/0 2/0 2/0 2/2 2/0 2/0 2/0

6 2/2 2/0 2/0 2/0 2/2 2/0 2/0 2/0

KP-I 2 2/2 2/1 2/0 2/0 2/2 2/2 2/0 2/0

4 2/2 2/2 2/0 2/0 2/2 2/2 2/0 2/0

6 2/2 2/2 2/0 2/0 2/2 2/2 2/0 2/0

контроль 2 2/0 2/0 2/0 2/0 2/0 2/0 2/0 2/0

4 2/0 2/0 2/0 2/0 2/0 2/0 2/0 2/0

6 2/0 2/0 2/0 2/0 2/0 2/0 2/0 2/0

числитель — количество исследованных проб; знаменатель - количество положительных проб.

Инфекционный вирус был реизолирован в культуре клеток ИС-13 из всех проб мозга мышей, заражённых штаммом КР-1 ВГЛ-1 и подвергнутых эвтаназии на 2, 4 и 6 сутки после инокуляции, а также из лёгких одного (из двух) мышонка, подвергнутого эвтаназии на 2 сутки и из лёгких всех мышат, убитых на 4 и б сутки после инокуляции им вируса. Инфекционный вирус не был выявлен в селезёнке и печени мышат этой группы.

Инфекционный вирус также был изолирован из всех проб мозга мышей, заражённых штаммом КБ-1 ВГЛ-1 и подвергнутых эвтаназии на 2, 4 и 6 сутки после инокуляции. В лёгких, селезёнке и печени мышат этой группы вирус не выявлен.

Вирус не выявлен в мозге, лёгких, селезёнке и печени контрольных животных.

При постановке полимеразной цепной реакции ДНК ВГЛ-1 выявили во всех исследованных пробах мозга и лёгких мышат, заражённых штаммом КР-1, а также во всех пробах мозга мышат, заражённых штаммом КБ-1.

Определяя ДНК ВГЛ-1 в органах контрольных животных, получили отрицательный результат.

Исследуя в световом микроскопе окрашенные гематоксилин-эозином срезы мозга мышат, заражённых штаммом КР-1 и подвергнутых эвтаназии на 5 сутки после инокуляции вируса, обнаружено, что оболочки мозга инфильтрированы лимфоидными клетками (рис. 2). Скопления лимфоидных клеток обнаружены также под оболочками мозга и по ходу кровеносных сосудов. Подобные изменения не были обнаружены в мозге мышат, заражённых штаммом КБ-1, и в мозге мышат контрольной группы.

Исследуя срезы из лёгких мышат, заражённых интрацеребрально штаммом КР-1 и подвергнутых эвтаназии на 5 сутки после заражения, обнаружено значительное кровенаполнение сосудов лёгких, а также десквамация эпителия бронхов на обширных участках лёгких. Эпителий бронхов округлый, набухший, неоднородно окрашен, отслаивается от базальной мембраны (рис. 3).

Рис. 2. Инфильтрация оболочки мозга мышонка, Рис. 3. Десквамация эпителия бронхов в лёгких заражённого штаммом КР-1 (окраска мышонка, заражённого штаммом КР-1 (окраска гематоксилин-эозином). Увеличение *160. гематоксилин-эозином). Увеличение * 160.

В лёгких мышат, заражённых штаммом КБ-1, и в лёгких мышат контрольной группы подобных изменений не обнаружено.

В срезах, изготовленных из селезёнки и печени мышат, заражённых штаммами КР-1 и КБ-1, не обнаружено каких-либо отклонений от нормы. В качестве контроля использовали срезы органов мышат из контрольной группы.

При учёте результатов непрямого иммунофлуоресцентного анализа яркая жёлто-зелёная флуоресценция, свидетельствующая о наличии ВГЛ-1, была обнаружена в оболочках и под оболочками мозга мышат, заражённых штаммом КР-1, в клетках головного мозга, а также вдоль кровеносных сосудов мозга (рис. 4).

а) 6)

Рис. 4. а) Специфическая флуоресценция в оболочке мозга мышонка, заражённого штаммом КР-1. Увеличение ><900. б) Лимфоидная инфильтрация оболочки мозга мышонка, заражённого штаммом КР-1 (окраска гематоксилин-эозином). Увеличение *400. Серийные срезы.

2.2.4. Нейропатогенность вакцинных штаммов ВГЛ-1 для белых мышей линии ВАЬВ/с.

Большой практический и научный интерес представляет изучение реактогенных свойств аттенуированных вакцинных штаммов ВГЛ-1.

Мы располагали тремя вакцинными штаммами ВГЛ-1: 1) штамм СВ/69 - производственный вакцинный штамм ВГЛ-1 (получен К.П. Юровым); 2) штамм, обозначенный нами как Кт, выделен из коммерческой

вакцины «Шнпотипе» (производства США); 3) штамм ЯРК — штамм, выделенный из коммерческой вакцины «ЯРК» (производства ЧССР).

На рис. 5 приведены графики изменения массы тела мышей, заражённых различными вакцинными штаммами ВГЛ-1.

зкпкфицсц

Рис. 5. Изменение массы тела мышей, заражённых различными вакцинными штаммами ВГЛ-1.

В результате проведённых исследований установлено, что один из штаммов — штамм КРК, выделенный из коммерческой вакцины «14РК» (производства ЧССР) — вызывает острую нейропатологию у белых мышей. Первые признаки заболевания у мышей были зарегистрированы на 3 сутки после инокуляции им вируса. Наблюдалось возбуждение, повышение тонуса скелетной мускулатуры, затем стремление двигаться вперёд, которое через 24 часа от начала заболевания становилось почти непрерывным, плавательные движения в положении лёжа на боку. Период плавательных движений удлинялся с 10 — 15 секунд (в начале заболевания) до 35 — 45 секунд на 2 сутки после появления первых симптомов. Смерть животных была зарегистрирована на 5 сутки после заражения (48 часов от начала заболевания), летальность составляла 100%.

В наших исследованиях инфекционный вирус был изолирован в культуре клеток ЮС-13 из всех проб мозга мышей, заражённых штаммом №К и погибших с признаками поражения ЦНС.

3. ВЫВОДЫ.

1. Белые мыши линии ВАЬВ/с являются адекватной лабораторной моделью для выявления и изучения нейропатогенных свойств различных эпизоотических и аттенуированных штаммов вируса герпеса лошадей 1.

2. Установлено, что в числе штаммов ВГЛ-1, находившихся в активной циркуляции на территории ряда стран СНГ в период с 1974 по 2004 гг., более половины (56%) обладают выраженной нейропатогенностью для мышей линии ВАЬВ/с. Другая группа штаммов (44%) при интрацеребральной инокуляции мышатам линии ВАЬВ/с не вызывает видимых признаков поражения ЦНС.

3. Показано, что нейропатогенность свойственна, главным образом, штаммам возбудителя, выделенным из абортированных плодов.

4. Все штаммы, изолированные из респираторных органов жеребят, а также отдельные штаммы из абортированных плодов, не вызывают у мышей поражения ЦНС. Экспериментальная инфекция характеризуется у них только угнетением и задержкой в росте.

5. Изучение нейропатогенности трёх коммерческих препаратов на основе аттенуированных штаммов ВГЛ-1 показало, что производственный вакцинный штамм ЯРК обладает выраженными нейропатогенными свойствами для мышей линии ВАЬВ/с. Два других штамма (СВ/69 и

Rhinomune) не патогенны для белых мышей. Следовательно, метод интрацеребрального заражения мышат-сосунков линии BALB/c может быть рекомендован для контроля реактогенности (нейропатогенности) коммерческих вирус-вакцин против ВГЛ-1.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Материалы диссертации использованы в дополнении, подготовленном Референтной лабораторией МЭБ по ринопневмонии лошадей (эксперт К.П. Юров) для нового издания «Manual of Standards for Diagnostic Tests and Vaccines», раздел Equine diseases in list В, глава Equine rhinopneumonitis, Office International des Epizooties.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Татаурова A.B. Нейропатогенность полевых штаммов герпесвируса лошадей 1 для белых мышей. / Татаурова A.B., Юров К.П., Алексеенкова C.B. // Материалы международного симпозиума «Научные основы обеспечения защиты животных от экзотоксинов, радионуклидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний».

- Казань, 2005, Т.2, С. 329 - 330.

2. Татаурова A.B. Нейропатогенные штаммы возбудителя ринопневмонии

— вирусного аборта кобыл / Татаурова A.B., Юров К.П., Алексеенкова C.B. // Ветеринария. - 2006. - № 3. - С. 20 - 23.

Принято к исполнению 30/10/2006 Исполнено 31/1СУ2006

Заказ № 878 Тираж: 100 экз.

Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (495) 975-78-56 www.autoreferat.rii

Оглавление диссертации Чернявцева, Анастасия Павловна :: 2006 :: Москва

I. ВВЕДЕНИЕ.

II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Историческая справка.

2.2. Таксономия герпесвирусов лошадей.

2.3. Морфология.

2.4. Формы заболевания.

2.4.1. Респираторная форма.

2.4.2. Абортогенная форма.

2.4.3. Генитальная форма.

2.4.4. Нервная форма.

III. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Материалы и методы.

3.1.1. Вирусы.

3.1.2. Клеточные культуры.

3.1.3. Животные.

3.1.4. Культивирование вирусов.

3.1.5. Титрование вирусов.

3.1.6. Реакция нейтрализации.

3.1.7. Экспериментальная инфекция.

3.1.8. Реизоляция вируса.

3.1.9. Полимеразная цепная реакция.

3.1.10. Гистологическое исследование.

3.1.11. Непрямой иммунофлуоресцентный анализ.

3.1.12. Статистическая обработка результатов.

3.2. Культуральные свойства эпизоотических штаммов ВГЛ-1, использованных в работе.

3.3. Нейропатогенность эпизоотических штаммов ВГЛ-1 для белых мышей линии BALB/c.

3.4. Патоморфологические и иммуногистологические исследования.

3.5. Нейропатогенность вакцинных штаммов ВГЛ-1 для белых мышей линии BALB/c.

IV. ОБСУЖДЕНИЕ.

V. ВЫВОДЫ.

VI. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение диссертации по теме "Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология", Чернявцева, Анастасия Павловна, автореферат

В последние годы произошли изменения в структуре коневодства России, которое в основном представлено тремя направлениями. Первое - племенное коневодство, которое даёт высокоценных племенных лошадей разного назначения (для классических видов конного спорта, конно-спортивных школ, секций, клубов и т.д.).

В России функционируют 74 конных завода, 400 племенных конеферм, 42 ипподрома.

Наиболее многочисленное поголовье - около 54% от общего количества лошадей - содержится в личных и подсобных хозяйствах. Как и прежде, коневодство имеет многостороннюю хозяйственную направленность.

Второе по величине направление - продуктивное коневодство - развито, преимущественно, в Восточных районных страны, располагающих большими территориями природных пастбищ. В районах развитого табунного коневодства, например в республике Саха (Якутия), на долю конины в мясном коневодстве приходится 20 - 25%.

Молочное коневодство предусматривает получение кобыльего молока на специализированных фермах и производство из него высокоценного пищевого, диетического и лечебного продукта - кумыса.

Основной целью развития коневодческой отрасли на период до 2015 г. является полное обеспечение сельскохозяйственных, спортивных и других организаций различного назначения и форм собственности, а также физических лиц высококачественными лошадьми (Программа развития коневодства в РФ на период до 2015г., Минсельхоз РФ, в материалах третьего Всероссийского съезда коннозаводчиков, 2004).

В связи с указанным большое значение приобретает обеспечение ветеринарного благополучия отрасли.

К числу наиболее распространённых и опасных вирусных болезней лошадей относится ринопневмония - герпесвирусная инфекция 1. Болезнь характеризуется значительным разнообразием форм клинического проявления. Форма течения ВГЛ-1 инфекции зависит от многих причин: пола, возраста, физиологического состояния (жерёбости), инфицирующей дозы возбудителя, иммунного статуса животных и в значительной степени от биологических свойств возбудителя. В структуре инфекционной патологии лошадей ВГЛ-1 является одной из главных причин респираторных болезней, абортов, перинатальной смерти жеребят и поражения нервной системы.

Нервное проявление ВГЛ-1 инфекции было впервые описано в Норвегии в 1966 г (F. Saxegaard, 1966). С тех пор нервная форма ВГЛ-1 инфекции была описана почти в каждой стране. В нашей стране нервную форму ринопневмонии впервые описал К.П. Юров (1984).

Актуальность темы.

Не смотря на то, что в нашей стране нервно-паралитическая форма ВГЛ-1 инфекции регистрируется в виде локальных вспышек, в ряде стран с развитым коневодством (США, Канада, страны Европы) в последние годы отмечается значительное увеличение заболеваемости лошадей с поражением ЦНС. Экономическая значимость этих вспышек определяется тем, что поражаются высокоценные племенные и спортивные лошади. По данным ряда авторов, проявление нервной формы ВГЛ-1 инфекции варьирует от единичных спорадических случаев до поражения 90 % поголовья. Смертность от болезни также значительно изменяется в течение различных вспышек и может достигать 40 - 50 % (J.A. Mumford and N. Edington, 1980; M.J. Studdert et al., 1981; M.J. Studdert, 1983; C. van-Maanen et al., 2001; B. Stierstorfer et al., 2002; G.P. Allen et al., 2006). Переболевшие лошади теряют свою племенную или спортивную ценность.

Цель и задачи.

В связи с вышеуказанным целью нашей работы являлось: выявление и изучение нейропатогенных штаммов вируса герпеса лошадей 1, изолированных из абортированных плодов и респираторных органов лошадей и находившихся в активной циркуляции в различных регионах стран СНГ в период с 1974 по 2004 гг.; изыскание метода контроля реактогенности (нейропатогенности) коммерческих вирус-вакцин против ринопневмонии лошадей.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

- изыскать адекватную лабораторную модель для оценки вирулентности эпизоотических штаммов ВГЛ 1;

- разработать лабораторный метод контроля реактогенности (нейропатогенности) коммерческих вирус-вакцин.

Научная новизна.

Практическая значимость.

Предложена лабораторная модель для дифференциации эпизоотических штаммов ВГЛ-1 по их нейропатогенным свойствам. Оценка нейропатогенности штаммов ВГЛ-1 позволяет проводить отбор штаммов, перспективных для создания новых и совершенствования существующих средств диагностики и специфической профилактики герпесвирусных инфекций лошадей. Оценка вирулентности вакцинных штаммов на лабораторных животных (белых мышах линии BALB/c) может служить методом контроля реактогенности (нейропатогенности) вакцин против ринопневмонии лошадей. коммерческих вирус

Апробация работы.

Материалы работы были представлены на международном симпозиуме «Научные основы обеспечения защиты животных от экзотоксинов, радионуклидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний» (Казань, 2005 г.). Основные положения, выводы и практические предложения, изложенные в диссертации, обсуждены и одобрены на межлабораторном научно-производственном совещании научных сотрудников ГНУ ВИЭВ им. Я.Р. Коваленко (Москва, 2006 г.).

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 2 научные работы.

Структура и объём работы.

Материалы диссертации изложены на! 136 страницах компьютерного текста и состоят из следующих разделов: введение, обзор литературы, собственные исследования, выводы, практические предложения, список литературы. Список литературы содержит 165 источников, из них 145 - иностранные. Диссертация иллюстрирована одной схемой, 11 таблицами, 21 рисунком.

Заключение диссертационного исследования на тему "Сравнительная характеристика основных биологических свойств различных штаммов герпесвируса лошадей 1"

V. выводы.

1. Белые мыши линии BALB/c являются адекватной лабораторной моделью для выявления и изучения нейропатогенных свойств различных эпизоотических и аттенуированных штаммов вируса герпеса лошадей 1.

2. Установлено, что в числе штаммов ВГЛ-1, находившихся в активной циркуляции на территории ряда стран СНГ в период с 1974 по 2004 гг., более половины (56%) обладают выраженной нейропатогенностью для мышей линии BALB/c. Другая группа штаммов (44%) при интрацеребральной инокуляции мышатам линии BALB/c не вызывает видимых признаков поражения ЦНС.

5. Изучение нейропатогенности трёх коммерческих препаратов на основе аттенуированных штаммов ВГЛ-1 показало, что производственный вакцинный штамм RPK обладает выраженными нейропатогенными свойствами для мышей линии BALB/c. Два других штамма (СВ/69 и Rhinomune) не патогенны для белых мышей. Следовательно, метод интрацеребрального заражения мышат-сосунков линии BALB/c может быть рекомендован для контроля реактогенности (нейропатогенности) коммерческих вирус-вакцин против ВГЛ-1.

VI. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 2006 года, Чернявцева, Анастасия Павловна

1. Крюков Н.Н., Юров К.П. Выделение вируса аборта кобыл // Труды ВИЭВ 1970.-С. 31-33.

2. Олейник Н.Н., Коваленко С.Е. Энзоотия вирусного аборта у лошадей // В сб.: Ветеринария, Киев, Урожай 1966. - Вып.6 - С.65-71.

3. Орлянкин Б.Г. Классификация и номенклатура ДНК-содержащих вирусов позвоночных. Обзор // Сельскохозяйственная биология 1995. -№4.-С. 3-15.

4. Практикум по ветеринарной вирусологии / Н.И. Троценко, Р.В. Белоусова, Э.А. Преображенская. 2-е изд., перераб. и доп. - М.: Колос, 2000.-272 с.

5. Сергеев В.А., Орлянкин Б.Г. Структура и биология вирусов животных. -М., Колос, 1983.-335с.

6. Шубуладзе А.К., Маевская Т.М. Герпес. М., Медицина, 1971. - 210с.

7. Юров К.П. Антигенная структура возбудителей, совершенствование диагностики и борьбы с некоторыми вирусными болезнями лошадей // Труды ВИЭВ 1984. - Т. 58 - С. 22-28.

8. Юров К.П. Биологические свойства штаммов вируса ринопневмонии лошадей и особенности течения этой инфекции // Труды ВИЭВ 1979. -Т. 49 - С. 64-68.

9. Юров К.П. Герпесвирусные болезни лошадей. В сб.: Актуальные вопросы ветеринарной вирусологии. - Казань, 1980. - С. 14.

10. Ю.Юров К.П. Диагностика респираторных болезней жеребят // Ветеринария. 1980. -№10. - С. 65-66.11 .Юров К.П. Инфекционные болезни лошадей. М., Росагропромиздат, 1991.-С. 169-175.

11. Юров К.П. Инфекционные болезни лошадей. М., Издательский Дом «Грааль», 2000. - С. 18-37.

12. Юров К.П. Некоторые вопросы экологии вирусов лошадей // Труды ВИЭВ 1976. - Т.44

13. Юров К.П. Профилактика вирусных болезней лошадей. М., Колос, 1984.-142с.

14. Юров К.П., Крюков Н.Н. Выявление вируса ринопневмонии лошадей методом иммунолюминесценции // Ветеринария. 1972. - №7. - С. 5354.16.10ров К.П., Крюков Н.Н. Ринопневмония лошадей // Коневодство и конный спорт. 1969.-№12.-С. 31.

15. Юров К.П., Крюков Н.Н., Надточей Г.А. Штамм вируса ринопневмонии equine rhinopneumonitis virus СВ-69, используемый для изготовления вакцины. Авт. Св. № 974650 от 14.06.82.

16. Юров К.П., Сологуб В.К. Болезни органов дыхания жеребят // Коневодство и конный спорт. 1976. - №8. - С. 33-34.

17. Юров К.П., Сологуб В.К. Выделение латентного герпетического вируса лошадей // Ветеринария. 1974. - №4. - С. 49-50.

18. Юров К.П., Сологуб В.К. Ускоренная серологическая диагностика ринопневмонии лошадей // Материалы 21-го Всемирного Вет. Конгресса. 1976. - Т.6. - С. 20.

19. Yurov К.Р. Antibody responses in mares infected with rhinopneumonitistVivirus. -Proc. 4 Int. Conf. on Equine Inf. Dis., Kentucky, 1978, p. 43.

20. Yurov K.P., Sologub V.K. Application of the hemagglutination inhibition test for the diagnosis of equine herpesvirus 1 infection. Proc. 4th Int. Conf. on Equine Inf. Dis., Kentucky, 1978, pp. 43-48.

21. Albrecht J.C., Nicholas J., Biller D., Cameron K.R., Biesinger В., Newman C., Wittmann S., Craxton M.A., Coleman H., Fleckenstein В., Honess R.W. Primary structure of the herpesvirus saimiri genome // J. Virol. 1992. - 66: 5047-5058.

22. Allen G.P. and Bryans J.T. Molecular epizootology, pathogenesis and prophylaxis of equine herpesvirus-1 infection // Prog. Vet. Microbiol, and Immunol. 1986. - 2: 78-144.

23. Allen G.P., Yeargan M.R., Turtinen L.W., Bryans J.T., McCollum W.H. Molecular epizootiologic studies of equine herpesvirus-1 infections by restriction endonuclease fingerprinting of viral DNA // Am. J. Vet. Res. -1983.-44(2): 263-271.

24. Allen G.P., Yeargan M.R., Turtinen L.W., Bryans J.T. A new field strain of equine abortion virus (equine herpesvirus-1) among Kentucky horses // Am. J. Vet. Res.- 1985.-46(1): 138-140.

25. Allen G.P. Antemortem detection of latent infection with neuropathogenic strains of equine herpesvirus-1 in horses // Am. J. Vet. Res. 2006. - 67(8): 1401-1405.

26. Awan A.R., Chong Y.C., Field HJ. The pathogenesis of equine herpesvirus type 1 in the mouse: a new model for studying host responses to the infection // J. Gen. Virol. 1990. -71:1131 -1140.

27. Batra S.K., Jain N.C., Tewari S.C. Isolation and characterization of EHV-1 herpes virus associated with paralysis in equine // Indian Journal of Animal Sciences. 1982. - 52: 671-677.

28. Bitsch V, Dam A. Nervous disturbances in horses in relation to infection with equine rhinopneumonitis virus // Acta Vet. Scand. 1971. - 12(1): 134-136.

29. Blunden A.S, Whitwell K.E, Pegler K.M. An outbreak of paralysis associated with equine herpes virus type 1 infection in a livery stable // Prog. Vet. Neurol. 1993. - 3: 95-100.

30. Booy F.P, Newcomb W.W, Trus B.L, Brown J.C, Baker T.S, Steven A.C. Liquid-crystalline phage-like packing of encapsidated DNA in hepres simplex virus//Cell- 1991.-64: 1007-1015.

31. Borchers K. Slater J. A nested PCR for the detection and differentiation of EHV-1 and EHV-4 // J. Virol. Methods. 1993. - 45(3): 331-336.

32. Bryans J.T. Serologic response of pregnant thoroughbred mares to vaccination with an inactivated equine herpesvirus-1 vaccine. // Am. J. Vet. Res. 1980. -41: 1743-1746.

33. Buchman T.G, Roizman В., Adams G, Stover B.H. Restriction endonuclease fingerprinting of herpes simplex virus DNA: a novel epidemiological tool applied to a nosocomial outbreak // J. Infect. Dis. 1978. - 138(4): 488-498.

34. Burek J.D, Roos R.P, Narayan O. Virus-induced abortion. Studies of equine herpesvirus 1 (abortion virus) in hamsters // Lab. Invest. 1975. - 33(4): 400406.

35. Burrows R. Rhinopneumonitis virus neutralizing antibody levels of British Thoroughbred mares // Proc. 1th Int. Conf. On Equine Inf. Dis, Stresa, 1966, pp. 122-130.

36. Burrows R, Goodridge D. Experimental studies on equine herpesvirus type 1 infection // J. Reprod. Fert. 1975. - 23: 611-615.

37. Burrows R, Goodridge D. In vivo and in vitro studies of equinelbrhinopneumonitis strains // Proc. 3W Int. Conf. on Equine Inf. Dis, Paris, France, 1972, pp. 306-321.

38. Cardwell J, Smith K, Newton R, Blunden T, Bestbier M, Whitwell K. EHV paralytic disease in the south of England // Vet. Rec. 2003. - 152(14): 441-442.

39. Carroll C.R. and Westbury H.A. Isolation of equine herpesvirus 1 from the brain of a horse affected with paresis // Aust. Vet. J. 1985. - 62: 345-346.

40. Charlton K.M., Mitchell D., Girard A., Corner A.H. Meningoencephalomyelitis in horses associated with equine herpesvirus 1 infection // Vet. Pathol. 1976. - 13(1): 59-68.

41. Chowdhury S.I., Kubin G., Ludwig H. Equine herpesvirus type 1 (EHV-1) induced abortions and paralysis in a Lipizzaner stud: a contribution to the classification of equine herpesviruses // Arch. Virol. 1986. - 90(3-4): 273288.

42. Crabb B.S., and Studdert M.J. Equine herpesvirus 4 (equine rhinopneumonitis virus) and 1 (equine abortion virus) // Advances in Virus Research 1995. -45: 153-190.

43. Crowhurst F.A., Dickinson G. and Burrows R. An outbreak of paresis in mares and geldings associated with equid herpesvirus 1 // Vet. Rec. 1981. -109: 527-528.

44. Daly P., Doyle S. The development of a competitive PCR-ELISA for the detection of equine herpesvirus-1 // J. Virol. Methods. 2003. - 107(2): 237244.

45. Darlington R.W., James C. Biological and morphological aspects of the growth of equine abortion virus // J. Bacteriol. 1966. - 92: 250 - 257.

46. Del Piero F., Wilkins P.A., Timoney P.J., Kadushin J., Vogelbacker H., Lee J.W., Berkowitz S.J., La Perle K.M. Fatal nonneurological EHV-1 infection in a yearling filly // Vet. Pathol. 2000. - 37(6): 672-676.

47. Diallo I.S., Hewitson G., Wright L., Rodwell B.J., Corney B.G. Detection of equine herpesvirus type 1 using a real-time polymerase chain reaction // J. Virol. Methods. 2006. - 131(1): 92-98.

48. Dimock W.W., Edwards P.R. Infections of foetuses and foals, Kentucky Agricultural Experimental Station. Bulletin, Lexington, 1933-333 p.

49. Dinter Z., and Klingeborn B. Serological study of an outbreak of paresis due to equid herpesvirus 1 (EHV-1) // Veterinary Record. 1976. - 99: 10-12.

50. Doll E.R. Seasonal incidence and fetal age in equine virus abortion // Cornell Vet.- 1952.-42: 505-509.

51. Doll E.R., Bryans J.T. Development of complement fixing and virus-neutralizing antibodies in viral rhinopneumonitis of horses // Am. J. Vet. Res. 1962.-23:843-846.

52. Doll E.R., Bryans J.T. Epizootology of equine viral rhinopneumonitis // J. Am. Vet. Med. Ass. 1963. - 142: 31-37.

53. Doll E.R., Bryans J.T., McCollum W.H., Crowe E.W. Propagation of equine abortion virus in Syrian hamsters // Cornell. Vet. 1956. - 46: 68-82.

54. Doll E.R., Crowe M.E.W., Bryans J.T., McCollum W.H. Infection immunity in equine virus abortion // Cornell. Vet. 1955. - 45: 387-410.

55. Dunowska M., Wilks C.R., Studdert M.J., Meers J. Equine respiratory viruses in foals in New Zealand // N. Z. Vet. J. 2002. - 50(4): 140-147.

56. Dunowska M., Wilks C.R., Studdert M.J., Meers J. Viruses associated with outbreaks of equine respiratory disease in New Zealand // N. Z. Vet. J. -2002.-50(4): 132-139.

57. Edington N., Bridges C.G., Patel J.R. Endothelial cell infection and thrombosis in paralysis caused by equid herpesvirus-1: equine stroke // Arch. Virol.-1986.-90(1-2): 111-124.

58. Elia G., Decaro N., Martella V., Campolo M., Desario C., Lorusso E., Cirone F., Buonavoglia C. Detection of equine herpesvirus type 1 by real time PCR // J. Virol. Methods. 2006. - 133(1): 70-75.

59. Foote C.E., Love D.N., Gilkerson J.R., Whalley J.M. Detection of EHV-1 and EHV-4 DNA in unweaned Thoroughbred foals from vaccinated mares on a large stud farm // Equine Vet. J. 2004. - 36(4): 341-345.

60. Frampton A.RJr., Smith PM, Zhang Y, Matsumura T, Osterrieder N, O'Callaghan DJ. Contribution of gene products encoded within the unique short segment of equine herpesvirus 1 to virulence in a murine model // Virus Res. 2002. - 90(1-2): 287-301.

61. Francki R.I.B., Fauquet C.M., Knudson D.L. Classification and nomenclature of viruses. 5th Rep. Int. Ctte. Taxonomy Viruses // Arch. Virol. -1991.-2, suppl.

62. Franklin Т.Е., Daft B.M., Silverman V.J., Powers E.L., Weidenbach S.J. Serological titres and clinical observation in equines suspected of being infected with EHV-1 // California Veterinarian. 1984. - 39: 22-24.

63. Friday P.A., Scarratt W.K., Elvinger F., Timoney P.J., Bonda A. Ataxia and paresis with equine herpesvirus type 1 infection in a herd of riding school horses // J. Vet. Intern. Med. 2000. - 14(2): 197-201.

64. Gerst S., Borchers K., Gower S.M., Smith K.C. Detection of EHV-1 and EHV-4 in placental sections of naturally occurring EHV-1- and EHV-4-related abortions in the UK: use of the placenta in diagnosis // Equine Vet. J. -2003.-35(5): 430-433.

65. Goehring L.S., van Maanen C., Sloet van Oldruitenborgh-Oosterbaan M.M. Neurological syndromes among horses in The Netherlands. A 5 year retrospective survey (1999-2004) // Vet. Q. 2005. - 27(1): 11-20.

66. Greenwood R. and Simpson A. Clinical report of a paralytic syndrome affecting stallion, mares and foals on a Thoroughbred stud farm // Equine Veterinary Journal. 1980. - 12: 113-117.

67. Gupta A.K., Kaur D., Rattan В., Yadav M.P. Molecular variability in different Indian isolates of equine herpesvirus-l // Vet. Res. Commun. 2005. - 29(8): 721-734.

68. Hartley C.A., Wilks C.R., Studdert M.J., Gilkerson J.R. Comparison of antibody detection assays for the diagnosis of equine herpesvirus 1 and 4 infections in horses // Am. J. Vet. Res. 2005. - 66(5): 921-928.

69. Hasebe R., Kimura Т., Nakamura K., Ochiai K., Okazaki K., Wada R., Umemura T. Differential susceptibility of equine and mouse brain microvascular endothelial cells to equine herpesvirus 1 infection // Arch. Virol.-2006.-151(4): 775-786.

70. Hasebe R., Kimura Т., Sato E., Okazaki K., Ochiai K., Wada R., Umemura T. Equine herpesvirus-l-induced encephalomyelitis in mice: a comparative study of neuroadapted virus and its parental strain // J. Сотр. Pathol. 2002. -127(2-3): 118-125.

71. Jackson T.A., Osburn B.I., Cordy D.R., Kendrick J.W. Equine herpesvirus 1 infection of horses: studies on the experimentally induced neurologic disease // Am. J. Vet. Res. 1977. - 38(6): 709-719.

72. Johnson R.T. The pathogenesis of herpes virus encephalitis // J. Exp. Med. -1964.- 119:343-356.

73. Kawakami Y., Kaji Т., Ishizaki R., Shimisu Т., Matumoto M. Etiologic study on an outbreak of acute respiratory disease among colts due to equine rhinopneumonitis virus // Jap. J. Exp. Med. 1962. - 32: 211-229.

74. Kirisawa R., Endo A., Iwai H. and Kawakami Y. Detection and identification of equine herpesvirus-4 and -4 by polymerase chain reaction // Vet. Microbiol. 1993. - 36: 57 - 67.

75. Kirisawa R., Ohmori H., Iwai H., Kawakami Y. The genomic diversity among equine herpesvirus-1 strains isolated in Japan // Arch. Virol. 1993. - 129: 11-22.

76. Kohn C.W., Fenner W.R. Equine herpes myeloencephalopathy // Vet. Clin. North. Am. Equine Pract. 1987. - 3(2):405-419.

77. Kraft W., Grabner A., Fiebiger I. EHV-1 myeloencephalitis in the horse // Berl. Munch. Tierarztl. Wochenschr. 1982. - 95(17): 321-325.

78. Kukreja A., Love D.N., Whalley J.M., Field H.J. Study of the protective immunity of co-expressed glycoprotein H and L of equine herpesvirus-1 in a murine intranasal infection model // Veterinary Microbiology 1998. - 60:111.

79. Kukreja A., Walker C, Fitzmaurice T, Awan A, Love D.N., Whalley J.M., Field H.J. Protective effects of equine herpesvirus-1 (EHV-1) glycoprotein В in a murine model of EHV-1-induced abortion // Veterinary Microbiology -1998.-62:303-311

80. Kurtz J, Anslow P. Infantile herpes simplex encephalitis: diagnostic features and differentiation from non-accidental injury // J. Infect. 2003. - 46(1): 1216.

81. Lieberman M, Pascale A, Schafer T.W, Came P.E. Effect of antiviral agents in equine abortion virus-infected hamsters // Antimicrob. Agents Chemother. 1972.-1(2): 143-147.

82. Little P.B. and Thorsen J. Disseminated necrotizing myeloencephalitis: a herpes-associated neurological disease of horses // Vet. Pathol. 1976. - 13: 161-171.

83. Liu I.K.M. and Castleman W. Equine posterior paresis associated with equine herpesvirus 1 vaccine in California: a preliminary report // J. Equine Med. Surg.-1977.-12: 397-401.

84. Lloyd-Evans L.P. Rhinomune (rhinopneumonitis vaccine) // Vet Rec. 1982. -111(17): 401.

85. Marques C.P, Hu S, Sheng W, Cheeran M.C, Cox D, Lokensgard J.R. Interleukin-10 attenuates production of HSV-induced inflammatory mediators by human microglia // Glia. 2004. - 47(4): 358-366.

86. Matsumura Т., Sugiura Т., Imagawa H., Fukunaga Y. and Kamada M. Epizootiological aspect of type 1 and 4 equine herpesvirus infection among horses population // J. Vet. Med. Sci. 1992. - 54: 207 - 211.

87. Matthews R.E.F. Classification and nomenclature of viruses. 2th Rep. Int. Ctte. Taxonomy Viruses, Intervirology, 1972,17, pp. 1-3.

88. Matumoto M., Ishizaki R., Shimisu T. Serological survey of equine rhino pneumonitis virus infection among horses in various countries // Arch. Ges. Virusforsch. 1965. - 50: 609-623.

89. Mayr A., Bohm H., Brill J., Woycierchowska S. Charakterisierung eines Stutenabort virus aus Polen und Vergleich mit bekannten Rhinopneumonitis Virus Stammen des Pferdes // Arch. Virusforsch. 1965. -17:216-230.

90. McCann S.H.E., Mumford J.A., Binns M.M. Development of PCR assays to detect genetic variation among equine herpesvirus-1 isolates as an aid to epidemiological investigation // J. Virol. Meth. 1995. - 52(1-2): 183194.

91. McCartan C.G., Russell M.M., Wood J.L., Mumford J.A. Clinical, serological and virological characteristics of an outbreak of paresis and neonatal foal disease due to equine herpesvirus-1 on a stud farm // Vet. Rec. -1995.-136(1): 7-12.

92. Melchjorsen J., Paludan S.R. Induction of RANTES/CCL5 by herpes simplex virus is regulated by nuclear factor kappa В and interferon regulatory factor 3 // J. Gen. Virol. 2003. - 84(9): 2491-2495.

93. Meyer H., Thein P., Hubert P. Characterization of two equine herpesvirus (EHV) isolates associated with neurological disorders in horses// Zentralbl Veterinarmed B. 1987. - 34(7): 545-548.

94. Minke J.M., Audonnet J.C., Fischer L. Equine viral vaccines: the past, present and future // Vet. Res. 2004. - 35(4): 425-443.

95. Molinkova D., Celer V. Jr., Jahn P. Isolation and partial characterization of equine herpesvirus type 1 in Czechia // Folia Microbiol (Praha). 2004. - 49(5): 605-611.

96. Mumford J.A. and Edington N. EHV-1 and equine paresis // Vet. Rec. -1980.- 106:277.

97. Nowotny N., Burtscher H. and Biirki F. Neuropathogenicity for suckling mice of equine herpesvirus 1 from the Lipizzan outbreak 1983 and of selected other EHV 1 strain // J. Vet. Med. B. 1987. - 34: 441-448.

98. O'Callagan D.J., Allen G.P., Randall C.C. Structure and replication of the equine herpesviruses. Proc. 4th Int. Conf. on Equine Inf. Dis., 1978, Lion, France, pp. 1-31.

99. O'Callagan D.J., Randall C.C. Molecular anatomy herpesviruses: recent studies // Prog. Med. Virol. 1976. - 22:152-210.

100. O'Callahan D.J. The equine herpesviruses // In: Herpesviruses, 1984, New York London, Vol. 2, pp. 215-318.

101. O'Keefe J.S., Murray S., Wilkes C.R. and Moriarty K.M. Amplification and differentiation of DNA of an abortigenic (type 1) and respiratory (type 4) stran of equine herpesvirus by polymerase chain reaction // Res. Vet. Sci. -1991.-50: 349-351.

102. Olsen T.F. Equine herpesvirus myeloencephalopathy in a 14-year-old quarter horse stallion 11 Can. Vet. J. 2001. - 42(3): 217-220.

103. Ostlund E.N. The equine herpesviruses // Vet. Clin. North Am. Equine Pract. 1993.-9: 283-294.

104. Patel J.R. and Edington N. The pathogenicity in mice of respiratory, abortion and paresis isolates of equine herpesvirus-1 // Vet. Microbiol. -1983.-8(3): 301-305.

105. Patel J.R., Edington N., Mumford J.A. Variation in cellular tropism between isolates of equine herpesvirus-1 in foals // Arch. Virol. 1982. -74(1): 41-51.

106. Patel J.R., Heldens J. Equine herpesviruses 1 (EHV-1) and 4 (EHV-4) -epidemiology, disease and immunoprophylaxis: a brief review // Vet. J. -2005.- 170(1): 14-23.

107. Perdue M.L., Cohen J.C., Kemp M.C., Randall C.C., O'Callaghan D.J. Characterization of three species of nucleocapsids of equineherpesvirus type-1 (EHV-1) // Virology. 1975. - 64(1): 187-204.

108. Petzold K., Rosenbrunch M., Thein P., Merkt H. and Schulze-Spuntrup. Case of Paresis and Paralysis in a German Thoroughbred Stud // Berl. Miinch. Tierarzl. Wochenschr. 1982. - 95: 81-85.

109. Piatt H., Singh H., Whitwell K.E. Pathological observations on an outbreak of paralysis in broodmares // Equine Vet J. 1980. - 12(3): 118-126.

110. Purdy C.W. Safety of RhinoquinTM, rhinopneumonitis vaccine in foals and pregnant mares // Vet. Med. Small Anim. Clin. 1977. - 72(9): 14781480.

111. Pursell A.R., Sangster L.T., Byars T.D., Divers T.J. and Cole J.R. Neurologic disease induced by equine herpesvirus 1 // J. Am. Vet. Med. Assoc.-1979.-175: 473-474.

112. Ratho R.K., Mishra В., Hassan S. Indirect immunofluorescence test: role in seroepidemiology and serodiagnosis of herpes simplex viral infections // Indian J. Pathol. Microbiol. 2004. - 47(4): 582-585.

113. Roizman В. The family Herpesviridae: a brief introduction. // In: Fields B.N., Knipe D.M. Virology 2nd edn. Raven Press, New York, 1990, pp. 17871794.

114. Roizman B. The Family Herpesviridae. // In: Roizman В., Lopez C., Whitley R.J. The human herpesvirus. Raven Press New York, N.Y., 1993, pp. 1-10.

115. Roizman B. and Pellet P.E. The family herpesviridae. // In: Knipe D.M. and Howley P.M. A Brief Introduction in Virology, 4th edn., 2001, pp. 23812397.

116. Rosier A., Pohl M., Braune H.J., Oertel W.H., Gemsa D., Sprenger H. Time course of chemokines in the cerebrospinal fluid and serum during herpes simplex type 1 encephalitis // J. Neurol. Sci. 1998. - 157(1): 82-89.

117. Sabine M., Robertson G.R., Whalley J.M. Differentiation of subtypes of equine herpesvirus-l by restriction endonuclease analysis // Austral. Vet. J. -1981.-57: 148-149.

118. Saxegaard F. Isolation and identification of equine rhinopneumonitis virus (equine abortion virus) from cases of abortion and paralysis // Nord. Vet. Med.- 1966.- 18: 504-512.

119. Schultheiss P.C., Collins J.K., Hotaling S.F. Immunohistochemical demonstration of equine herpesvirus-l antigen in neurons and astrocytes of horses with acute paralysis // Vet. Pathol. 1997. - 34(1): 52-54.

120. Sellner J., Lenhard Т., Haas J., Einsiedel R., Meyding-Lamade U. Differential mRNA expression of neurotrophic factors GDNF, BDNF, and NT-3 in experimental herpes simplex virus encephalitis // Brain Res. Mol. Brain Res. 2005. - 137(1-2): 267-271.

121. Shimisu Т., Ishizaki R., Ishii S., Kawakami Y., Kaji R., Sugimura K., Matumoto M. Isolation of equine abortion virus from natural cases of equine abortion in horse kidney cell culture // Jap. J. Exp. Med. 1959. - 29: 643649.

122. Sloet van Oldruitenborgh-Oosterbaan M. Neurologic form of rhinopneumonia // Tijdschr Diergeneeskd. 2005. - 130(20): 629-631.

123. Smith K.S. and Borchers K. A study of the pathogenesis of equid herpesvirus-1 (EHV-1) abortion by DNA in situ hybridization // J. Сотр. Pathol.-2001.- 125: 304-310.

124. Smith K.C., Blunden A.S., Whitwell K.E., Dunn K.A., Wales A.D. A survey of equine abortion, stillbirth and neonatal death in the UK from 1988 to 1997 // Equine Vet. J. 2003. - 35(5): 496-501.

125. Studdert M.J., Simpson Т., Roizman B. Differentiation of respiratory and abortigenic isolates of equine herpesvirus 1 by restriction endonucleases // Science.-1981.-214: 562-564.

126. Studdert M.J. Restriction endonuclease DNA fingerprinting of respiratory, fetal and perinatal foal isolates of equine herpesvirus type 1 // Arch. Virol. 1983. - 77: 249-258.

127. Szeredi L., Aupperle H., Steiger K. Detection of equine herpesvirus-1 in the fetal membranes of aborted equine fetuses by immunohistochemical and in-situ hybridization techniques // J. Сотр. Pathol. 2003. - 129(2-3): 147-153.

128. Szeredi L., Palfi V., Molnar T. Comparison of methods for the diagnosis of equine herpesvirus type 1 infection // Acta Vet. Hung. 2003. -51(2): 153-163.

129. Tearle J.P., Smith K.C., Piatt A.J., Hannant D., Davis-Poynter N.J., Mumford J.A. In vitro characterisation of high and low virulence isolates of equine herpesvirus-1 and -4 // Res. Vet. Sci. 2003. - 75(1): 83-86.

130. Telford E.A.R., Watson M.S., McBride K., Davison A.J. The DNA sequence of equine herpesvirus-1 // Virology. 1992. - 189: 304-316.

131. Thein P. Infection of the central nervous system of horses with equine herpesvirus serotype 1 // J. S. Afr. Vet. Assoc. 1981. - 52(3): 239-241.

132. Thomson G.W., McCready R., Sanford E., Gagnon A. Case report: An outbreak of herpesvirus myeloencephalitis in vaccinated horses // Can. Vet. J. -1979.-20(1): 22-25.

133. Thorsen J., Little P.B. Isolation of equine herpesvirus type 1 from a horse with an acute paralytic disease // Can. J. Сотр. Med. 1975. - 39(3): 358-359.

134. Varrasso A, Dynon K, Ficorilli N, Hartley C.A, Studdert M.J, Drummer H.E. Identification of equine herpesviruses 1 and 4 by polymerase chain reaction //Aust. Vet J. 2001. - 79(8): 563-569.

135. Verheyen K, Newton J.R, Wood J.L, Birch M, Hannant I.D, Humberstone R.W. Possible case of EHV-4 ataxia in a warmblood mare letter. // Vet. Rec. 1998. - 143: 456.

136. Vernon S.K, Lawrence W.C, Cohen G.H. Morphological components of herpesvirus. I. Intercapsomeric fibrils and the geometry of the capsid // Intervirology. 1974. - 4(4): 237-248.

137. Virmani N, Verma P.C, Panisup A.S, Singh B.K. and Batra M. Comparative studies on neurotropic properties of indigenous strains of equine herpes virus-1 // Indian J. of Animal Sci. 2005. - 75(4): 393-396.

138. Walker C, Ruitenberg K.M, Love D.N, Millar Whalley J. Immunization of BALB/c mice with DNA encoding equine herpesvirus 1 (EHV-1) glycoprotein D affords partial protection in a model of EHV-1 -induced abortion // Vet. Microbiol. 2000. - 76(3): 211-220.

139. Welch H.M, Bridges C.G, Lyon A.M., Griffiths L, Edington N. Latent equid herpesviruses 1 and 4: detection and distinction using the polymerase chain reaction and co-cultivation from lymphoid tissues // J. Gen. Virol. -1992.-73(2): 261-268.

140. Whitwell K.E. and Blunden A.S. Pathological findings in horses dying during an outbreak of the paralytic form of Equid herpesvirus type 1 (EHV-1) infection // Equine Veterinary Journal. 1992. - 24:13-19.

141. Wilson W.D. Equine herpesvirus 1 myeloencephalopathy // Vet. Clin. North. Am. Pract. 1997. - 13: 53-72.