Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Специфическая профилактика, терапия трихофитии и микроспории пушных зверей, кроликов, мелких домашних животных

1 ы "г ,5», / „^ ;^ .....

I ' V:' '' ,' V' "1 4

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ

НАУК

ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ им. Я. Р. КОВАЛЕНКО

На правах рукописи

ГОРЯЧКИНА ЕЛЕНА ИГОРЕВНА «СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА, ТЕРАПИЯ ТРИХОФИТИИ И МИКРОСПОРИИ ПУШНЫХ ЗВЕРЕЙ, КРОЛИКОВ, МЕЛКИХ ДОМАШНИХ ЖИВОТНЫХ»

(видовой состав, биология возбудителей, сравнительная оценка

иммуногенеза) 16.00.03 - ветеринарная микробиология , вирусология эпизоотология, микология и иммунология

г Диссертация на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель доктор биологических наук Н.П. Головина

Москва, 1999 г.

Оглавление

Стр.

ВВЕДЕНИЕ..........................................................................................I

Глава! ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Биологические и иммуногенные свойства дерматофитов...........

1.2. Иммунитет при дерматофитозах животных.................................?..

1.3. Качественные и количественные иммунологические изменения у животных после переболевания и иммунизации биопрепаратами против дерматофитозов......................................................................?.?..

1.4. Серологические и иммунологические исследования у животных и человека после переболевания и иммунизации биопрепаратами против дерматофитозов.....................................................................

1.5. Специфические биопрепараты для профилактики и терапии

27

трихофитии пушных зверей, кроликов, собак и кошек..........................

Глава 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ..........................................................30

2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Культурально-морфологические свойства дерматофитов М. canis, выделенных от разных видов с симптомокомплексом

37

микроспории............................................................................................

2.2. Культурально-морфологические свойства дерматофитов Т. mentagrophytes, выделенных от пушных зверей и кроликов с симптомокомплексом трихофитии....................................................4.?..

2.3. Культурально-морфологические свойства смешанных культур дерматофитов выделенных от пушных зверей.................................48

2.4. Культурально-морфологические свойства штаммов,

54

использованных в работе.....................................................................?..

2.5. Сравнительная оценка антигенной активности вакцин Ментавак и Микканис на кроликах по результатам реакции

60

агглютинации..........................................................................................

2.6. Оценка профилактической эффективности вакцин Ментавак

65

и Микканис на кроликах в сравнительном аспекте..............................

2.7. Сравнительная оценка терапевтической эффективности вакцин Ментавак и Микканис на кроликах......................................................69

2.8. Определение антигенной активности вакцины Пушвак на

76

кроликах по результатам реакции агглютинации..................................

2.9. Оценка профилактической эффективности вакцины Пушвак на

сю

кроликах и собаках................................................................................?.

2.10. Оценка терапевтической эффективности вакцины Пушвак на

83

кроликах...................................................................................................

2.11. Сравнительная оценка гематологических показателей у кроликов после иммунизации вакцинами против дерматофитозов...

2.12. Патоморфологические изменения у кроликов иммунизированных вакциной Микканис............................................

2.13. Патоморфологические изменения у кроликов

иммунизированных вакциной Ментавак.............................................ТР-*-

3. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.......................Ц°

ВЫВОДЫ.............................................................................................

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.................................................

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ...................................................................

ПРИЛОЖЕНИЕ...................................................................................И2

ВВЕДЕНИЕ.

ДЕРМА ТОФИТОЗЬЦстригущий лишай) - это инфекции кожных покровов животных и человека, вызываемые группой несовершенных грибов принадлежащих и родам Trichophyton и Microsporum.

Видовой состав указанных дерматофитов очень разнообразен, в особенности у возбудителей дерматофитозов человека.

В середине XIX века врачом D. Gruby была дана характеристика гриба, названного им Microsporum Audoinii позднее были описаны другие виды грибов этого рода, M.eguinum М. ferrugineum и др. в том числе М. canis (прежнее название М. lanosumf.TaK же описаны и изучены многочисленные грибы рода Trichophyton, полученные от разных видов животных и человека, в частности Tr. mentagrophytes (Robin) Blanchard 1896.

В современных условиях дерматофитозы, вызванные данными патогенными грибами, широко распространенны во многих странах мира. Препараты для местного лечения трихофитии и микроспории, оказывая лишь ограниченное действие на возбудителя, не могли остановить распространение дерматофитозов. Поэтому были начаты исследования по разработке средств специфической профилактики и терапйи стригущего лишая. В основе этих исследований лежало воздействие на иммунную систему животных специфическими средствами, с целью активизации гуморальной и клеточной защиты к возбудителям трихофитии и микроспории.

Многолетний опыт изучения биологии дерматофитов, их видового состава, культурно-морфологических свойств, позволили разработать методы отбора (по спорообразованию и иммуногенности), перспективных штаммов для приготовления вакцин и контроля их иммуногенности.

Начиная с 1959 года, как отечественными учёными (Носков A.A., Докудовский Е.Г. 1959, Петрачёв Д.А. 1963, Расулов Ш.П. 1957) так и зарубежными (Florian Е.1964, Kielchtain Р. 1970., Bryal К. 1976., Wawrzkiewich К. 1976) предлагались различные средства специфической профилактики против дерматофитозов животных. В основном против трихофитии крупного рогатого скота вызванной грибом Tr. verrucosum. Биопрепараты готовили в виде грибной суспензии, к которой добавляли для инактивации грибных клеток раствор формалина. Это делалось по аналогии с технологией изготовления противобактериальных и противовирусных вакцин. Применение инактивированных вакцин приводило к созданию иммунитета лишь у небольшой части вакцинированных животных а 50-60% из их числа заражалось и заболевало стригущим лишаем повторно.

Предложенный и разработанный коллективом отечественных авторов под руководительством академика РАСХН А.Х. Саркисова, в начале 70-х годов, препарат ТФ-130 (ВИЭВ) создавал у вакцинированных телят напряжённый, стойкий иммунитет. Этот биопрепарат, а также сухая живая вакцина ЛТФ-130 и концентрированная ТФ-130(К) (предложенные тем же коллективом позднее), обладали также и терапевтическим действием при введении в удвоенных дозах телятам с клиническими признаками трихофитии.

С начала 80-х годов и по настоящее время коллективами учёных ВИЭВ и ВГНКИ предложены, апробированы и утверждены нормативные документы на ряд вакцин против трихофитии и микроспории, как отдельных видов животных, так и для нескольких видов (С-П-1, Ментавак, Триховис, Поливак, Вакдерм, Микканис, Микродерм и др.).Все эти вакцины, разработанные с профилактической це-

лью, создают у животных иммунитет к повторному заражению дер-матофтами.

В лаборатории микологии и антибиотиков исследования патологического материала, поступающего из зверохозяйств и частных хозяйств показали, что основными возбудителями дерматофитозов у пушных зверей являются патогенные грибы Tr. mentagrophytes и М. canis, которые вызывают и смешанные инфекции. Ранее разработанные коллективом авторов ВИЭВ моновакцины Ментавак и Микканис эффективны только против одного возбудителя дерматофитоза, поэтому возникла необходимость создания вакцины, в состав которой входили бы одновременно 2 штамма грибов рода Trichophyton и Mi-crosporum.

Коллективом авторов лаборатории микологии и антибиотиков ВИЭВ под руководительством академика РАСХН профессора А.Х. Саркисова и доктора биологических наук Н.П. Головиной была разработана и предложена вакцина Пушвак для профилактики и терапии трихофитии и микроспории пушных зверей, кроликов и мелких домашних животных. Она содержит два вакцинных штамма Тг. mentagrophytes №135 и М. canis №473, являющихся основным действующим началом для моновакцин Ментавак и Микканис.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЙ

Цель: Определение в сравнительном аспекте иммунного ответа у животных против трихофитии и микроспории с применением моновакцин Ментавак и Микканис и вакцины Пушвак, содержащей два грибных штамма Tr. mentagrophytes №135 и М. canis №473.

Задачи:

1.Определить видовой состав, исследовать культурно-морфологические свойства циркулирующих в настоящее время эпизоотических, а также вакцинных и вирулентных штаммов - возбудителей трихофитии и микроспории пушных зверей, кроликов и мелких домашних животных.

2.Изучить и сопоставить антигенную активность штаммов Тг. mentagrophytes и М. canis при их введении животным.

3. Оценить и сравнить профилактическую и терапевтическую эффектность вакцин против трихофитии и микроспории пушных зверей, кроликов и мелких домашних животных .

4. Определить иммуноморфологические изменения в организме животных опытных групп после введения биопрепаратов против трихофитии и микроспории.

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования проведены с использованием серий вакцины Ментавак, имеющих промышленное производство и образцов опытных серий вакцин Микканис и Пушвак, изготовленных в лаборатории микологии и антибиотиков ВИЭВ. Выделение чистых культур дерматофитов проводилось общепринятыми методами, также использовалось прямое заражение опытных животных, применялись гематологические и гистологические методы исследования.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Определён видовой состав на фоне многолетнего применения грибных вакцин и культурально-морфологические свойства циркулирующих в настоящее время штаммов Tr. mentagrophytes и М. canis, вызывающих стригущий лишай у пушных зверей, кроликов и мелких домашних животных.

Выделены и описаны чистые культуры дерматофигов Tr. mentagrophytes и М. canis от кошек, собак, песцов, чёрно-бурых лисиц, кроликов.

Впервые от больных песцов получены и описаны смешанные культуры Tr. mentagrophytes и М. canis одновременно.

Наряду с характерными для этих видов грибов культурально-морфологическими признаками отмечено отсутствие мицелия со спирально загнутыми концами при микроскопии культур Tr. mentagrophytes и выявлены очень редко встречающиеся макроконидии этих дерматофигов.

Изучены в сравнительном аспекте некоторые вопросы иммуногенеза у животных, вакцинированных как моновакцинами Ментавак и Микканис, так и вакциной Пушвак, содержащей два грибных штамма. Отмечена непрямая корреляция между патоморфологиче-скими изменениями, свидетельствующими об иммунологической перестройке регионарных месту введения вакцин лимфатических узлов и динамикой уровня антител в сыворотке крови вакцинированных животных.

Определено отсутствие перекрёстной иммунной защиты при введении гетерологичных вакцинных штаммов опытным животным при их экспериментальном заражении возбудителями трихофитии и микроспории. Получены положительные результаты иммуногенной активности вакцины Пушвак (содержащей два грибных штамма) против трихофитии и микроспории.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ.

Дано теоретическое обоснование эффективности применяемых моновакцин (Ментавак и Микканис) , также вакцины Пушвак, со-

держащей два грибных штамма, для профилактики и терапии трихофитии и микроспории.

.Полученные материалы по некоторым вопросам иммуногенеза у животных, вакцинированных этими биопрепаратами, могут быть использованы в научно-исследовательских учреждениях, а также ветеринарной практике при изучении патогенеза и иммунитета при дерматофитозах.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ ДИССЕРТАЦИИ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. Материалы по сравнительному изучению биологических свойств возбудителей трихофитии и микроспории пушных зверей, кроликов и мелких домашних животных (видовой состав, культурально-морфологические свойства).

2. Результаты сравнительного изучения антигенной активности штаммов Tr. mentagrophytes и М.canis.

3. Результаты сравнительного изучения иммуногенной активности штаммов Tr.mentagrophytes и M.canis.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ Основные материалы диссертации доложены на Ученом Совете ВИЭВ , 1998 г. и на межлабораторном совещании сотрудников ВИЭВ, 1999 г.

ПУБЛИКАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ. По теме диссертации опубликовано 3 научных статьи.

ОБЪЕМ РАБОТЫ. Диссертация изложена на 142 страницах машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов выводы, практические предложения, библиографический список литературы и приложение. Мате-

риалы диссертации иллюстрированы 11 таблицами, 37 рисунками. Библиографический список литературы включает 187 источников, из них 78 иностранных.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1 Л.БИОЛОГИЧЕСКИЕ И ИММУНОГЕННЫЕ СВОЙСТВА ДЕРМАТОФИТОВ.

Связь между культурально-морфологическими свойствами гриба и иммунитетом очевидна, также как и с другими биологическими показателями дерматофитов. Определено, что чем обильнее снороносит культура гриба, тем сильнее иммуногенная перестройка макроорганизма против данной конкретной культуры, по сравнению с другими линиями. Однако речь идёт о эпизоотических штаммах, поиавших в стерильные условия пробирки и селекционируемых в этом направлении. Именно при работе с эпизоотическими штаммами необходимо особенно отмечать высокоспорообразующие культуры.

Очень важно, что культурально-морфолгические признаки -последний, завершающий филогенетический цикл и поэтому они меньше всего подвержены изменениям под действием внешней среды и макроорганизма. Именно поэтому систематика базируется прежде всего на морфологических признаках грибов.

Поли - и плеоморфизм дерматофитов, также имеет свои рамки в пределах вида.

Морфология гриба и другие его показатели могут иметь как "прямую, так и не прямую корреляционную связь. Как было указано, высокое спороношение культуры впрямую коррелирует с иммуно-генностью. Однако опубликованные данные, показали что культура Тг. Уеггисозит уаг. аиЮ^орЫсит №118 (выделенная от овец) вообще не имела спороношения, но при испытании на животных обнаружила высокую вирулентность и была предложена как штамм для контроля иммуногенности вакцины Триховис.

В последствии при пересевах штамм приобрёл весьма значительное спорообразование (60).

Большую роль в успехе селекции количественных признаков играют эффективные и точные методы их обнаружения: получение моноконидиальных изолятов, сравнение этих изолятов по продуктивности. С помощью таких методов достигается интеграция незначительных отклонений (ступенчатый отбор).Таким образом метод ступенчатого отбора моноконидиальрых линий по признаку спорообразования перспективен при разработке грибных вакцин (21).

Существует сравнительно небольшое количество работ по изучению иммунитета у возбудителей грибных болезней, хотя микология имеет ряд глубоко изученных направлений.

Вопрос иммунитета рассматривался в 40-е годы, как выявление стойких рас и их искусственная селекция, освещение состава биотопов, которые имеются в России и имеют для нас прямое значение при отборе иммуногенности (44).

Другой путь изучения иммунитета идёт через углублённый анализ патологического (болезненного) процесса. К этому направлению необходимо прибавить связь иммунитета с вопросами патогенеза и диагностики (53). А изучение гуморального и клеточного иммунитета при микозах идёт по пути методов разработанных бактериологами и медиками. Но применение этих методов требует коррекции с учётом особенностей грибных клеток, которые являются основой для приготовления антигенов и грибных вакцин.

1.2. ИММУНИТЕТ ПРИ ДЕРМАТОФИТОЗАХ ЖИВОТНЫХ.

Иммунитет может быть естественным и приобретенным. Иммунитет приобретённый - иммунологическая резистентность к дер-

матофитам, которая возникает в результате взаимодействия макроорганизма и специального инфекционного агента. При микотической инфекции в формировании протективного иммунитета участвуют как антиген-специфические, так и не специфические факторы иммунной системы. Характер течения и прогноз заболевания при прочих равных условиях определятся активностью эффекторных механизмов иммунной системы, среди которых при микозах решающая роль принадлежит фагоцитарной системе и Т-лимфоцитам больного. Активизация этих компонентов иммунной системы обеспечивается как клетками и продуктами жизнедеятельности возбудителей, так и разнообразными эндогенными иммуннорегуляторными факторами (хемотаксисные молекулы, мидиаторы воспаления, белки системы комплемента, цитокины и др.) (132,134,171,182).

При различных микотических заболеваниях объём, схемы и частота иммуно-лабораторного обследования больных могут существенно отличатся соответственно патогенеза и стадии развития заболевания, но непременно должны обеспечивать диагностику инфекции, прогнозирование течения и исхода инфекции и оценку эффективности проводимой терапии. Иммунотропная терапия инфекционных больных должна осуществляться