Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Совершенствование технологии получения стафилококковой анатоксин-вакцины и испытание ее эффективности при мастите у коров
- Ученая степень
- кандидата ветеринарных наук
- ВАК РФ
- 16.00.03
Автореферат диссертации по ветеринарии на тему Совершенствование технологии получения стафилококковой анатоксин-вакцины и испытание ее эффективности при мастите у коров
На правах рукописи
ПОЗДЕЕВ Александр Владимирович
Р Г Б ОД
1 ФЕЗ 2000 СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИИ
ПОЛУЧЕНИЯ СТАФИЛОКОККОВОЙ
АНАТОКСИН-ВАКЦИНЫ И ИСПЫТАНИЕ
' ЕЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРИ МАСТИТЕ У КОРОВ
16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук
Курск - 2000
Работа выполнена в Курской государственной сельскохозяйственной академии имени профессора И.И.Иванова, 278 лаборатории ветери-нарно-санитарной экспертизы МО РФ.
Научный руководитель: доктор ветеринарных наук,
профессор А.А. ЕВГЛЕВСКИЙ
Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук,
профессор В.А. КУЗЬМИН
кандидат ветеринарных наук, доцент Л.С. ШИБУТ
Ведущая организация: Московская государственная Академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина
Защита состоится " Я1/ " Ф^Лфяибс* 2000 г. - в " ! У " час. на заседании диссертационного боветс! К.120.25.03 в Курской государственной сельскохозяйственной академии им. проф. И.И.Иванова по адресу: 305021, г. Курск, ул. К.Маркса, 70.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Курской государственной сельскохозяйственной академии им. профессора И.И. Иванова.
Автореферат разослан " 2- 1 " ^иЛ-^С/^Л 2000 г.
Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук, . *
доцент Гф рЫЖК0ВА
[7Ш. О
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность исследования. Одним из вопросов, связанным собес-печением населения доброкачественными продуктами, является своевременная профилактика маститов у коров, возникающих в связи с широким применением механической дойки.
Наиболее часто при маститах из вымени выделяют стафилококки (до 90% всех случаев воспаления), главным образом токсикогенные коагула-зоположительные стафилококки, затем стрептококки, значительно реже -бактерии группы кишечной палочки и другие микроорганизмы.(Карташова В.М.,Тырина B.C., 1980;Сатаров С.С.,Орзуев М.И., 1987; Ивченко В.М.,1988; Garcia Lopez M.L., Moreno Garcia В. 1987; Cohen Jay О., 1987).
При употреблении молока от больных маститом животных у людей возникают ангины, гастроэнтериты, а у молодняка сельскохозяйственных животных - заболевания желудочно-кишечного тракта. (Нефедьева Н.П., 1964; Архангельский A.A., 1974; Карташова В.М., Ярных B.C., 1981; Карташова В.М., Ивашура А.И., 1988).
Все методы лечения мастита подразделяются на этиотропные, патогенетические, физические и комплексные.
Этиотропная терапия мастита основана на применении противомик-робных средств - антибиотиков, сульфаниламидов и других химиотерапев-тических препаратов, при этом, специфическая профилактика и лечение стафилококковых инфекций представляют немалые трудности, обусловленные недостаточными представлениями о патогенезе стафилококкового носительства, неполнотой знаний об изменениях биологической активности стафилококков, легко приобретающих резистентность к большинству антибиотиков, особенно при параллельной активации болезнетворных свойств так называемых условно патогенных микроорганизмов.
Известно, что патогенное действие многих микроорганизмов обусловлено токсинами, а ответные иммунные реакции организма в свою очередь проявляются выработкой антитоксических антител (Бургасов Н.П., 1978; Осидзе Д.Ф. 1981).
В частности, установлено, что при стафилококковой инфекции большую роль играет противотоксический иммунитет, поэтому наиболее эффективным препаратом при стафилококкозах является стафилококковый анатоксин.
Впервые стафилококковый анатоксин получен и применен в 1936-37 годах для лечения пневмоний, дерматитов, маститов и гнойных ран.
Вышеизложенное послужило обоснованием целесообразности изучения при маститах лечебно-профилактического действия стафилококковой анатоксин-вакцины, разработанной профессором A.A. Евглевским (1992). Выполненное диссертационное исследование осуществлялось по основному плану научно-исследовательской работы Курской государственной сельскохозяйственной академии имени профессора И.И. Иванова на 1997-1999 гг. по теме № 8 (№ госрегистрации 01.970000672). Тема диссертации утверждена на заседании Ученого Совета Курской государственной сельскохозяйственной академии имени профессора И.И. Иванова 31 января 1997 г.
Цель исследования. Установить закономерность изменения структуры популяции стафилококков при культивировании на питательных средах и в процессе пассирования через организм животных с различным уровнем иммунологической защиты, для усовершенствования технологиии получения стафилококковой анатоксин-вакцины и оценка ее лечебно-профилактического действия при мастите у коров.
Задачи исследования:
изучить динамику изменений структуры популяций стафилококков по антибиотикорезистентности и некоторым признакам патогенности в процессе пассажей через интактных, иммунодепрессированных и иммунизированных стафилококковой вакциной лабораторных животных - мышей.
усовершенствовать технологию получения стафилококковой анатоксин-вакцины.
изучить лечебно-профилактическое действие стафилококковой анатоксин-вакцины при мастите у коров.
определить экономическую эффективность стафилококковой анатоксин-вакцины при лечении мастита у коров.
Научная новизна. Впервые установлено лечебное и профилактическое действие усовершенствованной стафилококкоковой анатоксин-вакцины при мастите у коров. Выявлена динамика и закономерность изменений структуры популяций стафилококков по основным биологическим признакам в процессе пассирования через организм животных. Установлено, что направленность этих изменений в сторону увеличения числа особей с более выраженной вирулентностью и обладающих меньшим набором признаков лекарственной устойчивости или в обратную сторону при пассировании стафилококков по некоторым биологическим признакам коррелирует с уровнем иммунной защиты организма.
Практическая значимость. Полученные данные являются экспериментальным обоснованием рационального способа получения стафилококковой анатоксин-вакцины и перспективности ее применения для лечения мастита у коров и других болезней стафилококковой этиологии.
Положения, выносимые на защиту:
1. Изменения состава популяций стафилококков в процессе пассирования по антибиотикорезистентности и некоторым признакам патоген-ности, в зависимости от иммунологического статуса организма животных.
2. Обоснованность рационального способа получения стафилококковой анатоксин-вакцины.
3. Лечебно-профилактическое действие стафилококковой анатоксин-вакцины при мастите у коров.
4. Экономическая эффективность лечения мастита у коров стафилококковой анатоксин-вакциной.
Апробация работы. Результаты исследования доложены и обсуждены на итоговой научной сессии Курского государственного медицинского Университета (1997), научно-практической конференции Курской государственной сельскохозяйственной академии имени профессора И.И. Иванова (1998), научной конференции Военно-ветеринарного факультета при МГАВМиБ (1999).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ.
Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы , описания материалов и методов, результатов исследований и их обсуждения, выводов, практических предложений и указателя литературы, включающего 165 источников, в том числе 113 отечественных и 52 зарубежных авторов.
Диссертация изложена на 125 страницах машинописного текста, содержит 7 таблиц, 3 рисунка, 1 схему.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
В Курской государственной сельскохозяйственной академии им.И.И. Иванова в 1992 году коллективом авторов под руководством профессора А.А. Евглевского был разработан метод получения анатоксин-вакцины для использования при стафилококкозе у птиц.
С целью усовершенствования получения и повышения эффективности стафилококковой анатоксин-вакцины в случае ее применения при ма-
5
стите у коров в нашем исследовании изучен свежевыделенный тип Staphylococcus aureus сгт больных маститом коров и музейные штаммы.
В качестве средства активной иммунотерапии мастита у коров применена анатоксин-вакцина, полученная по усовершенствованному нами методу. Ее эффективность оценивали в сопоставлении с действием препарата сравнения мастисана А.
В опытах было использовано 250 мышей, 48 коров с катаральным маститом, 48 коров с субклиническим маститом.
Для определения влияния состояния иммунной системы на структуру популяций стафилококков применяли методы депрессии и стимуляции иммунной системы организма мышей.
Иммунодепрессия достиглась путем внутримышечного введения 5-фторурацила троекратно с интервалом в 1 сутки в дозе 20 мкг/г массы животного.
Специфическая стимуляция иммунной системы достигалась с помощью убитых нагреванием вакцин гомологичных штаммов стафилококков путем однократного внутрибрюшинного введения взвеси микробов в количестве 4-Ю9 М.Т. в объеме 0,5 мл.
Изучение гетерогенности популяций стафилококков проводили по следующим свойствам каждого клона: отношение к минимальной подавляющей концентрацией (МПК) антибиотиков в агаре, гемолитической активности, устойчивости к солям ртути и кадмия, лецитиназной активности; использовались антибиотики: пенициллин, стрептомицин, тетрациклин, эритромицин, мономицин; гемолитическая активность определялась на агаре с добавлением 5% взвеси эритроцитов барана.
Лецитиназная активность определялась на агаре с добавлением яичного желтка.
Устойчивость к хлориду ртути, сулеме и сульфату кадмия определялась аналогично устойчивости к антибиотикам.
Адгезивность стафилококков определяли по методике Брилис В.И. (1985).
Определение стафилококкового белка А производилось по методике Каральника В.В. (1983).
Устойчивость стафилококков к бактерицидному действию крови кролика определяли по методике Закарян Л.М. (1985).
Вирулентность культур и популяций микробов определяли при внут-рибрюшинном заражении белых мышей взвесью суточной агаровой культуры стафилококков в дозах от 0,5-Ю8 М.Т. до 4-Ю9 М.Т. в объеме 0,5 мл.
Вирулентность определяли в lgLD50 по Керберу (Ашмарин И.П., Воробьев A.A., 1962).
Изучение клинических признаков маститов и их лечение проводили на фермах совхоза "Надежда" Курской области, учебных хозяйствах Курской государственной сельскохозяйственной академии им. проф. И.И.Иванова, на фермах подсобных хозяйств воинских частей МО РФ.
Диагноз устанавливали на основании клинических данных, результатов лабораторного исследования биоматериалов от больных животных на кафедре эпизоотологии и микробиологии КГСХА им. проф. И.И. Иванова и 278 лаборатории ветеринарно-санитарной экспертизы МО РФ.
Полученные материалы обрабатывались методом вариационной статистики на персональной ЭВМ.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
В процессе работы изучены изменения структуры популяций стафилококков при культивировании на питательных средах и в процессе пассажей через мышей с различным уровнем иммунной защиты.
В популяциях стафилококков, полученных при пассажах через интак-тных и иммунодепрессированных мышей, наблюдалось снижение количества гемолитически активных клеток в популяции по сравнению с исходной (94,7%) после первых 3-х пассажей как через интактных, так и через иммунодепрессированных мышей (0 и 12,8% соответственно). Вслед за этим следовало постепенное статистически достоверное повышение их содержания к 9-му пассажу, которое сменялось затем вновь их уменьшением. При этом на протяжении всего времени пассажей пропорция гемолитически активных клеток в популяциях, выделенных от иммунодепрессированных животных, была достоверна выше чем в популяциях от интактных мышей (84,5% и 21,2% на 9-м пассаже, 59,7% и 3,2 % на 12-м).
Структура популяций по антибиотикорезистентности существенно не менялась, как и структура популяций по лецитиназной активности: от 87,5 до 100% клеток было устойчиво к исследованным препаратом и характеризовалось продукцией лецитиназы.
Существенно отличающиеся результаты были получены при пассировании стафилококков через организм иммунизированных мышей: количество гемолитически активных клеток в популяции резко снизилось после 3-го пассажа (до 16,7 %), а начиная с 6-го пассажа и до конца эксперимента гемолитически активные клетки в популяциях не обнаруживались. На-
7
ряду с этим популяции 6-го и 9-го пассажей характеризовались отсутствием клеток, устойчивых к пеницилину и мономицину, а так же отсутствием особей, продуцировавших лецитиназу, тогда как в популяциях, выделенных после 3-х и 12-ти пассажей указанными свойствами обладали практически все клетки популяции.
Если учесть имеющиеся в литературе сведения о патогенетическом значении гемолизинов стафилококков (Robinson, Thatcher, 1958; Акатов А.К. 1966, 1972), то из полученных данных следует, что в организме мышей с иммунодепрессией происходил отбор преимущественно более патогенных, а у иммунизированных - менее патогенных особей, приспособленных в каждом из этих случаев к конкретным условиям существования. Причем такой отбор происходил с определенной цикличностью (рис. 1).
пассажи
Рис. 1 - Динамика изменений пропорции гемолитически активных особей в популяции
1 - интактные мыши, 2 - иммунодепрессированные мыши,
3 - иммунизированные мыши.
Изменения структуры популяции стафилококков по устойчивости составляющих ее особей к сулеме практически не зависели от состояния иммунной системы животных. Они характеризовались после снижения содержания резистентных клеток в популяциях от интактных и иммунизиро-ванних мышей и некоторого повышения у иммунодепрессированных животных к 3-му пассажу, нарастанием их количества к 9-му и последующим снижением к 12-му пассажу. Такая динамика изменений структуры популяции по устойчивости к сулеме, не зависящая от состояния иммунной системы организма, по-видимому, не отражает изменение вирулентности (рис. 2).
%
о
3
6
9
12
пассажи
Рис. 2 - Динамика изменений пропорции устойчивых к сулеме клеток в популяции
1 - интактные мыши, 2 - иммунодепрессированные мыши,
3 - иммунизированные мыши.
Более показательным является изменение гетерогенности популяции по вариантному составу, т.е. по количеству клонов с различным сочетанием биологических признаков. Было установлено, что при пассажах через иммунодепрессированных животных преобладали клоны с большим числом биологических признаков, имевшихся у исходной культуры, а при пассировании через иммунизированных мышей - клоны с минимальным количеством изучаемых признаков. Характер изменений структуры популяции по вариантному составу совпадал с изменениями, описанными для отдельных признаков (т.е. максимальное количество клонов с наибольшим числом признаков - у интактных и иммунодепрессированных мышей- и с наименьшим - у иммунизированных - отмечалось на 9-м пассаже).
Максимальное накопление как гемолитически активных клеток на 9-м пассаже при пассировании через иммунодепрессированных и интактных мышей, так и клонов с небольшим числом признаков, сопровождалось повышением микробной обсемененности почек на этом этапе (от 28 м.т./ мг для интактных и 4 м.т./мгдля иммунодепрессированных на 3-м пассаже до 123 м.т./мг и 169 м.т./мг соответственно на 9-м пассаже). В то же время обсемененность почек к 9-му пассажу у иммунизированных животных снижалась (от 31 м.т./мг на 3-м пассаже до 2 м.т./мг) (рис. 3).
м .т ./м г
А
1 4 О- •
10 0-
20 •■
60 ■■
0
3
6
9
1 2
пассажи
Рис. 3 - Динамика изменения обсемененности почек (число микробов на мг массы почки)
1 - интактные мыши, 2 - иммунодепрессированные мыши,
3 - иммунизированные мыши.
Вместе с тем, при изучении субкультур популяции стафилококка после 12 пассажей, отличавшихся по гемолитической активности, устойчивости к сулеме, не было обнаружено статистически достоверных различий по способности к адгезии, продукции белка А, устойчивости к бактерицидному действию крови кролика и вирулентности для мышей. Отсутствие разности в проявлении патогенных свойств может быть объяснено тем, что вирулентность стафилококков является полидетерминатным признаком, поэтому изменение структуры популяции стафилококка по одному или нескольким признакам при сохранении остальных не может, по-видимому, оказать существенного влияния на вирулентность культуры в целом.
СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ СТАФИЛОКОККОВОЙ АНАТОКСИН-ВАКЦИНЫ
Для изготовления стафилококковой анатоксин-вакцины предложена синтетическая среда с лимонной кислотой, глицерином и повышенной концентрацией до 5-6% поваренной соли. Это дает возможность получать высокую концентрацию стафилококков до 10-12 мрд взвеси в 1 мл в тече-
ние 10-15-дневного культивирования. Выращивание стафилококков проводилось в двухлитровых биобутылях с объемом среды 1 литр при 37° С.
В основу предложенного рационального способа изготовления стафилококковой анатоксин-вакцины положена устойчивость стафилококковых экзо- и эндотоксинов к термическому воздействию.
Указанная устойчивость была использована для изучения возможности предварительной стерилизации выращенных стафилококков и проведение детоксикации токсинов формалином при более высокой температуре в пределах от 40-45° до 50°С.
Дальнейшее совершенствование технологии получения стафилококковой анатоксин-вакцины заключается в снижении концентрации формалина с 1 % при одномоментной детоксикации до 0,6% при внесении формалина в 2 этапа:
I этап - детоксикация 40% раствором формалина с доведением концентрации в суспензии до 0,4 %, в течение 7 -10 дней при температуре 4045° С.
II этап - детоксикация стафилококковых токсинов путем дополнительного внесения 40% раствора формалина и доведение концентрации формалина в суспензии до 0,6 % в течение 5 -7 дней при температуре 45 -50° С.
В последующем к продуктам детоксикации прибавляли гидроокись алюминия из расчета 1-3 мг/мл. Полученные указанными способами стафилококковые биопрепараты не вызывали воспаление или некроз тканей на месте введения, не разрушали эритроциты, лейкоциты, не ингибирова-ли хемотаксис лейкоцитов при инкубировании в течение 2-3 часов.
Контроль детоксикации проводился путем постановки биопробы на белых мышах и кроликах. Отсутствие гибели животных и отрицательная дермонекротическая реакция свидетельствовали об отсутствии токсичности препарата.
Таким образом, внесение формалина в два этапа с интервалом 7 дней при повышении температуры до 45 -50° С обеспечивает полную и необратимую детоксикацию стафилококковых токсинов в более сокращенные (12 -15 дней) сроки при снижении его концентрации до 0,6 % вместо 1,0 % при одномоментном действии.
Усовершенствованная технология получения анатоксин-вакцины представлена на схеме (рис.4).
Рис. 4 - Схема получения стафилококковой анатоксин-вакцины
РЕЗУЛЬТАТЫ ПРИМЕНЕНИЯ СТАФИЛОКОККОВОЙ АНАТОКСИН - ВАКЦИНЫ ПРИ МАСТИТЕ У КОРОВ
Для испытания лечебной эффективности стафилококковой анатоксин-вакцины в сравнении с мастисаном А было отобрано 72 коровы, больных катаральным и субклиническим маститами. Животных разделили на 3 группы по 24 головы в каждой. В каждой группе животные были разделены на 2 подгруппы по 12 голов с катаральным и 12 голов с субклиническим маститами.
Схемы лечения были назначены следующие:
1 группа - лечение мастисаном А.
2 группа - комбинация " 0,25% раствор трипсина + стафилококковая анатоксин-вакцина".
3 группа - комбинация " 2% раствор гидрокарбоната натрия (соды) + стафилококковая анатоксин-вакцина
Перед лечением вымя обмывали теплой водой с мылом и обсушивали полотенцем.
Для лечения 1 группы использовали препарат Курской биофабрики Мастисан А в дозах согласно " Наставления по применению мастисана А для лечения воспаления вымени у коров
Из 24 коров 1 группы, больных катаральным и субклиническим маститами, выздоровело через 8-10 суток с момента лечения 16 животных. Лечебная эффективность составила 66,6%.
Для лечения 2 группы коров, больных катаральным и субклиническим маститами применяли 0,25% раствор трипсина и стафилококковую анатоксин-вакцину. Для растворения и ферментативного расщепления сгустков и хлопьев казеина в пораженную четверть интрацистерально вводили 0,2-0,25% раствор трипсина в количестве 4-5 мл. Вымя массировали и через 20-30 мин. молоко сдаивали. После сдаивания, внутриальвеолярно в каждую долю вымени вводили 3-4 мл стафилококковой анатоксин-вакцины в разведении 1:1 с физиологическим раствором, с интервалом 48 часов до полного выздоровления. Иглу вводили в основание вымени, а потом в альвеолярную ткань по направлению к противоположной доле на сосок вымени ( например: задняя левая - правая передняя ).
Далее также через молочный катетер или канюлю шприца в больную четверть вымени интрацистерально вводили 3-4 мл стафилококковой анатоксин-вакцины с интервалом 48 часов до полного выздоровления. Выздоровление животных контролировали клиническими методами и лабораторными исследованиями перед каждой лечебной процедурой, и в течение всего времени лечения до отрицательных результатов исследований.
Из 24 коров 2 группы, больных катаральным и субклиническим маститами, выздоровело через 7-9 суток с начала лечения 20 голов. Лечебная эффективность составила 83,3%.
Для лечения 3 группы животных применяли 2% раствор гидрокарбоната натрия (соды) и стафилококковую анатоксин-вакцину.
Для разжижения скопившихся в молочной железе сгустков секрета в пораженную четверть вымени интрацистернально вводили 50 мл теплого 2% раствора гидрокарбоната натрия (соды). Вымя массировали по направ-
13
лению к соскам и через 20-30 мин. молоко сдаивали. Затем применяли стафилококковую анатоксин-вакцину по методике, указанной при лечении 2 группы. Из 24 коров, больных катаральным и субклиническим маститами, выздоровело в течение 8-10 дней с начала лечения 18 животных, что составляет 75%. Выздоровление контролировали клиническими методами и лабораторными исследованиями.
Проведенные исследования свидетельствуют о том, что применение усовершенствованной стафилококковой анатоксин-вакцины в сочетании с 0,25%. раствором трипсина и 2% раствором гидрокарбоната натрия повысило ее эффективность и позволило излечить до 83,3% и 75% соответственно заболевших маститом коров, от которых выделены патогенные штаммы стафилококков.
Стафилококковая анатоксин-вакцина показала достаточно хорошую лечебную эффективность по сравнению с мастисаном А и рекомендуется к применению в практической ветеринарии. В целом препарат считаем перспективным.
Возможность изыскания способов лечения не только маститов, но и других заболеваний стафилококковой этиологии подтверждается нашими исследованиями об эффективности усовершенствованной стафилококковой анатоксин-вакцины при лечении и профилактике стафилококкоза птиц, пневмоний телят и поросят, дерматитов, ускорению заживления ран, а также ее эффективность подтверждена в работах Сидорчука A.A., Авдиен-ко В.А., Васенко C.B. (1999 г), Тимковой Е.А.(1999 г.).
ЭКОНОМИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ СТАФИЛОКОККОВОЙ АНАТОКСИН-ВАКЦИНЫ ПРИ МАСТИТЕ У КОРОВ
Затраты на приобретение лекарственных препаратов приведены в таблице 1.
Таблица 1 - Затраты на приобретение лекарственных препаратов
Препараты Затраты на 1 корову (pv6.)
мастисан а 25,4
стафилококковая анатоксин-вакцина + 0,25% раствор трипсина 7,2
стафилококковая анатоксин-вакцина +2% раствор гидрокарбоната натрия 5.6
0,5% раствор новокаина 53,1
Эффективность ветеринарных мероприятий представлена в табл. 2 и рис.5.
Таблица 2 - Экономические показатели при лечении мастита у коров
Показатели Применяемое лечение ( зуб.)
мастисанА стафилококковая анатоксин-вакцина + 0,25% раствор трипсина стафило -кокковая анатоксин-вакцина + 2% раствор гидро карбоната натрия 0,5% раствор новокаина
Затраты на ветеринарные МерОПрИЯТИЯ (Взато.) 254 72 56 531
Фактический ущерб У*=(м,„ - мв) • Мв • Ц • Д + В,ЯТп 1214 912 1016 1491
Вероятный ущерб Увео = М0 • Кэаб • Мая * Ц 2160 2160 2160 2160
Предупрежденный >щерб Уп п —Увео " Уф 946 1248 1144 669
Эффективность (на 10 коров) Ээф = Упр - Взато 692 1176 1088 138
Эффективность на 1 руб. ветзатрат Ээф на 1 руб. = Эьл: В,аТп 2,7 16,3 19,4 0,26
Экономический эффект (на 1 корову) на 1 руб. ветзатрат Ээл на 1 руб. = Ээ[Ь на 1 руб.: 10 0,27 1,63 1,94 0,026
Экономический эффект при лечении 1 коровы больной маститом на 1 рубль ветеринарных затрат составляет: при лечении мастисаном А
при лечении стафилококковой анатоксин -вакциной+0,25% раствором трипсина
при лечении стафилококковой анатоксин -вакциной+2% раствором гидрокарбонатом натрия
при использовании 0,5% раствора новокаина
-0,27 руб.
-1,63 руб.
-1,94 руб. - 0,026 руб.
Затраты на ветеринарные мероприятия
692 138
ЯЯШ
1 t щт
Эффективность ветеринарных мероприятий 19,4
- мастисан А
- стафилококковая анатоксин -вакцина + 0,25% раствор трипсина
- стафилококковая анатоксин -вакцина + 2% раствор гидрокарбоната натрия
- 0,5% раствор новокаина
Рис. 5 -
Эффективность ветеринарных мероприятий при лечении мастита у 10 коров (руб.) 16
Результаты экспериментального исследования лечебной эффективности стафилококковой анатоксин-вакцины при мастите у коров, а также сведения об экономической эффективности ее использования, свидетельствуют о целесообразности внедрения стафилококковой анатоксин-вакцины в практическую ветеринарию.
ВЫВОДЫ
1. Популяция Staphylococcus aureus сохраняет высокую степень однородности при культивировании на питательных средах в течение 12 пассажей.
2. Пассирование Staphylococcus aureus через организмы мышей со сниженной и повышенной иммунной защитой вызывает разнонаправленные изменения в составе популяции: в организме иммунодепрессирован-ных мышей выделяются преимущественно гемолитически активные клетки, а у иммунизированных - гемолитически неактивные стафилококки.
3. Для изготовления стафилококковой анатоксин-вакцины пригодны Staphylococcus aureus с выраженными плазмокоагулирующими или гемолитическими свойствами.
4. Использование синтетической среды с лимонной кислотой для выращивания Staphylococcus aureus исключает подачу углекислого газа и кислорода, обеспечивает стабильно высокое накопление микроорганизмов до концентрации 10±0,5млрд/мл при объеме среды 1-1,2 литра в течение 12-14 дней инкубирования и содержания экзотоксинов до 0,72 + 0,02 мг/мл после стерилизации суспензии при 100°С в течение 60 минут.
5. Внесение формалина в два этапа с интервалом 7 дней при повышении температуры до 40-50°С обеспечивает полную и необратимую де-токсикацию стафилококковых токсинов в более сокращенные (12-15 дней) сроки при снижении его концентрации до 0,6% вместо 0,8-1,0% при одномоментном действии.
6. Интрацистернальное введение стафилококковой анатоксин-вакцины в дозе 4,0 мл и внутриальвеолярное введение 3,0-4,0 мл с предварительным разведением 1:1 физиологическим раствором с интервалом 48 часов с промыванием пораженных долей вымени 0,25% раствором трипсина или 2% раствором гидрокарбоната натрия способствуют выздоровлению до 83,3% и 75% соответственно коров, больных катаральным и субклиническим маститом.
7. Экономическая эффективность ветеринарных мероприятий при лечении коров, больных катаральным и субклиническим маститом стафилококковой анатоксин-вакциной, составляет 1,63-1,94 руб. на 1 руб. ветеринарных затрат в зависимости от метода ее применения.
В качестве эффективного и экономически выгодного метода лечения мастита у коров стафилококковой этиологии в производственных условиях рекомендуется применять усовершенствованную стафилококковую анатоксин-вакцину , что позволит использовать молоко практически без ограничений уже на второй день после выздоровления коров, больных маститом.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:
1. Евглевская Е.А., Поздеев A.B. Материалы по выращиванию стафилококков и получению экзо- и эндотоксинов// Матер, итог. науч. сес. КГМУ,-Курск, 1997.- С.54-55.
2. Евглевская Е.А., Поздеев A.B. Особенности специфической профилактики и лечения стафилококкозов// Матер, итог. науч. сес. КГМУ,- Курск, 1997,- С.55-56.
3. Поздеев А.В..Евглевская Е.А. Протективные свойства стафилококковых биопрепаратов// Матер, итог. науч. сес. КГМУ,- Курск, 1997,- С.130.
4. Поздеев A.B.,Евглевская Е.А. Современные подходы получения и применения инактивированных биопрепаратов// Матер, итог. науч. сес. КГМУ,- Курск, 1997,- С. 130-131.
5. Поздеев A.B. Терапевтическая роль и эффективность стафилококкового анатоксина при бактериальном мастите у коров// Проблемы межклеточного обмена электролитов, белково-минерального питания и резистентности животных: Матер.науч.практич.конф. Курск, КГСХА, 1998.-С.89^91.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
Оглавление диссертации Поздеев, Александр Владимирович :: 1999 :: Курск
ВВЕДЕНИЕ.
Глава 1. Обзор литературы.
1.1. Эпизоотология и эпидемиология стафилококковой инфекций.
1.2. Основные факторы патогенности стафилококков.
1.3. Характеристика гетерогенности популяций стафилококков по некоторым биологическим признакам.
1.4. Причинные и предрасполагающие факторы в этиологии стафилококкового мастита коров, методы его лечения и профилактики.
1.5. Стафилококковые токсины, анатоксины и перспективы их использования для профилактики стафилококковой инфекции.■.
Глава 2. Материалы и методы исследования.
Глава 3. Результаты собственных исследований.
3.1. Влияние состояния иммунной системы организма на структуру популяций St. aureus.
3.1.1. Изменение гетерогенности популяций стафилококков по отдельным биологическим свойствам.
3.1.2. Изменение структуры популяций по совокупности признаков у отдельных клонов.
3.2. Результаты определения некоторых признаков вирулентности популяций стафилококков, полученных после пассажей через мышей с различным уровнем иммунной защиты.
3.2.1. Продукция белка А, адгезивная активность стафилококков и обсемененность почек мышей.
3.2.2. Устойчивость к бактерицидному действию крови и вирулентность пассажных культур стафилококков.
3.3. Материалы по совершенствованию и получению стафилококковой анатоксин-вакцины.
Зг 4. Результаты применения стафилококковой анатоксинвакцины при мастите у коров.
3.5. Расчет экономической эффективности ветеринарных мероприятий.
Глава 4. Обсуждение результатов.
ВЫВОДЫ.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.
Введение диссертации по теме "Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология", Поздеев, Александр Владимирович, автореферат
Актуальность исследования. Одним из вопросов, связанным с обеспечением населения доброкачественными молочными продуктами, является своевременная профилактика маститов у коров, возникающий в связи с широким применением механической дойки. Маститы коров получили широкое распространение и стали одной из важнейших проблем молочного животноводства. Наиболее вероятными и частыми причинами мастита являются:травмы, нарушение правил доения и эксплуатации доильных аппаратов, эндометриты, интоксикация и инфекция (Карташова В.М., Тырина B.C., 1980;Сатаров С.С.,0рзуев М.И., 1987; Ивченко В.М. ,1988; Garcia Lopez M.L., Moreno Garcia В. 1987; Cohen Jay 0., 1987 и др.).
Наиболее часто при маститах из вымени выделяют стафилококки (до 90% всех случаев воспаления), главным образом токси-когенные коагулазоположительные стафилококки, стрептококки, значительно реже - бактерии группы кишечной палочки и другие микроорганизмы. В молочную железу микробы чаще всего проникают через сосковый канал, раны молочной железы и сосков, из других органов при развитии в них воспалительных процессов (эндометритов, гастроэнтеритов) (Нефедьева Н.П., 1964).
Молоко, полученное от больных маститом животных, в большинстве случаев содержит патогенные микроорганизмы, представляющие опасность для человека и молодняка сельскохозяйственных животных. При употреблении такого молока у детей возникают ангины, гастроэнтериты, а у молодняка сельскохозяйственных животных - заболевания желудочно-кишечного тракта (Архангельский
A.A., 1974; Карташова B.M., ЯрныхВ.С., 1981; Карташова В. М., Ивашура А.И., 1988).
Все методы лечения мастита подразделяются на этиотропные, патогенетические, физические и комплексные, сочетающие два или три вида.
Этиотропная терапия мастита основана на применении проти-вомикро0ных средств - антибиотиков, сульфаниламидов и других химиотерапевтических препаратов отдельно или в сочетании. При этом специфическая профилактика и лечение стафилококковых инфекций представляют немалые трудности, обусловленные недостаточными представлениями о патогенезе стафилококкового носи-тельства, неполнотой знаний о механизме развития патологических процессов разной локализации, изменениями биологических свойств стафилококков, легко приобретающих резистентность к большинству антибиотиков, при параллельной активации болезнетворных свойств так называемых условно патогенных микроорганизмов, возникающей в процессе антибактериальной терапии.
Проблема лечения больных маститом коров заставляет специалистов, работающих в данном направлении, разрабатывать и внедрять неантибиотические препараты, которые не должны оказывать вредного воздействия на организм животного и обладать хорошими лечебными свойствами.
Создание неантибиотических препаратов для лечебно-профилактических целей - актуальный вопрос в области ветеринарии и медицины в мировом масштабе.
Как известно, стафилококки вызывают сложное воздействие на иммунную систему организма-хозяина, приводящее к низкой сопротивляемости с последующим подавлением ее функциональной активности. Поэтому современная терапия и профилактика стафилококковой инфекции заключается в стимуляции иммунологической реактивности организма либо средствами активной профилактики (анатоксин, вакцина), либо пассивной (гипериммунные плазмы и иммуноглобулин).
Известно, что патогенное действие многих микроорганизмов обусловлено токсинами, а ответные иммунные реакции организма в свою очередь проявляются выработкой антитоксических антител. На этой основе обоснована профилактика ряда инфекционных болезней формоланатоксинами и формолвакцинами, а лечение соответствующими сыворотками (Бургасов П.Н., 1978; ОсидзеД.Ф., 1981).
Установлено, что при стафилококковой инфекции большую роль играет противотоксический иммунитет, поэтому наиболее эффективным препаратом при стафилококкозах является анатоксин.
Впервые стафилококковый анатоксин получен и применен в 1936 - 37 годах для лечения пневмоний, дерматитов, маститов и гнойных ран.
Вышеизложенное послужило обоснованием целесообразности совершенствования технологии получения и изучения лечебно-профилактического действия стафилококковой анатоксин-вакцины при маститах, разработанной профессором А.А. Евглевским (1992). Выполненное диссертационное исследование осуществлялось по основному плану научно-исследовательской работы Курской государственной сельскохозяйственной академии имени профессора И.И. Иванова на 1997-1999 гг. по теме N 8 (I госрегистрации 01.970000672). Тема диссертации утверждена на заседании Ученого Совета Курской государственной сельскохозяйственной академии имени профессора И.И. Иванова 31 января 1997 г.
Цель исследования: Установить закономерность изменения структуры популяции стафилококков при культивировании на питательных средах и в процессе пассирования через организм животных с различным уровнем иммунологической защиты для усовершенствования технологии получения стафилококковой анатоксин-вакцины и оценка ее лечебно-профилактического действия при мастите у коров.
Основные задачи исследования:
- Изучить динамику изменений структуры популяций стафилококков по антибиотикорезистентности и некоторым признакам па-тогенности в процессе пассажей через интактных, иммунодепрес-сированных и иммунизированных стафилококковой вакциной лабораторных животных - мышей.
- Усовершенствовать технологию получения стафилококковой анатоксин-вакцины.
- Изучить лечебно-профилактическое действие стафилококковой анатоксин-вакцины при мастите у коров.
- Определить экономическую эффективность стафилококковой анатоксин-вакцины при лечении мастита у коров.
Научная новизна: Впервые установлено лечебное и профилактическое действие усовершенствованной стафилокок-коковой анатоксин-вакцины при мастите у коров. Выявлена динамика и закономерность изменений структуры популяций стафилококков по основным биологическим признакам в процессе пассирования через организм животных. Установлено, что направленность этих изменений в сторону увеличения числа особей с более выраженной вирулентностью и обладающих меньшим набором признаков лекарственной устойчивости или в обратную сторону при пассировании стафилококков по некоторым биологическим признакам коррелирует с уровнем иммунной защиты организма.
Практическая значимость. Полученные данные являются экспериментальным обоснованием рационального способа получения стафилококковой анатоксин-вакцины и перспективности её применения для лечения мастита у коров и других болезней стафилококковой этиологии.
Положения, выносимые на защиту:
1. Изменения состава популяций стафилококков в процессе пассирования по антибиотикорезистентности и некоторым признакам патогенности, в зависимости от иммунологического статуса организма животных.
2. Обоснованность рационального способа получения стафилококковой анатоксин-вакцины.
3. Лечебно-профилактическое действие стафилококковой анатоксин-вакцины при мастите у коров.
4. Экономическая эффективность лечения мастита у коров стафилококковой анатоксин-вакциной.
Апробация работы. Результаты исследования доложены и обсуждены на итоговой научной сессии Курского государственного медицинского Университета (1997), научно-практической конференции Курской государственной сельскохозяйственной академии имени профессора И.И.Иванова (1998), научной конференции Военно-ветеринарного факультета при МГАВМиБ (1999).
- 9
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ.
Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы , описания материалов и методов, результатов исследований и их обсуждения, выводов, практических предложений и указателя литературы, включающего 165 источников, в, том числе 113 отечественных и 52 зарубежных авторов. «
Заключение диссертационного исследования на тему "Совершенствование технологии получения стафилококковой анатоксин-вакцины и испытание ее эффективности при мастите у коров"
- 100 -выводы
1. Популяция Staphylococcus aureus сохраняет высокую степень однородности при культивировании на питательных средах в течение 12 пассажей.
2,. Пассирование Staphylococcus aureus через организмы мышей со сниженной и повышенной иммунной защитой вызывает разнонаправленные.изменения в составе популяции: в организме иммунодепрессированных мышей выделяются преимущественно ге-молитически активные клетки, а у иммунизированных - гемоли-тически неактивные стафилококки.
3. Для изготовления стафилококковой анатоксин-вакцины пригодны Staphylococcus aureus с выраженными плазмокоагули-рующими или гемолитическими свойствами.
4. Использование синтетической среды с лимонной кислотой для выращивания Staphylococcus aureus исключает подачу углекислого газа и кислорода, обеспечивает стабильно высокое накопление микроорганизмов до концентрации 10+0,5 млрд/мл при объеме среды 1-1,2 литра в течение 12 - 14 дней инкубирования и содержания экзотоксинов до 0, 72 + 0, 02 мг/мл после стерилизации суспензии стафилококков при 100°С в течение 60 минут.
5. Внесение формалина в два этапа с интервалом 7 дней при повышении температуры до 40-50°С обеспечивает полную и
- 101 необратимую детоксикацию стафилококковых токсинов в более сокращенные (12-15 дней) сроки при снижении его концентрации до 0,6% вместо 0,8-1,0% при одномоментном действии.
6. Интрацистернальное введение стафилококковой анатоксин-вакцины в дозе 4,0 мл. и внутриальвеолярное введение 3, 0-4,(0 мл. с предварительным разведением 1:1 физиологическим раствором с интервалом 48 часов с предварительным промыванием пораженных долей вымени 0,25% раствором трипсина или 2% раствором гидрокарбоната натрия способствует выздоровлению до 83,3% и 75% соответственно коров, больных катаральным и субклиническим маститом.
7. Экономическая эффективность ветеринарных мероприятий при лечении коров, больных катаральным и субклиническим маститом стафилококковой анатоксин-вакциной, составляет 1,63-1,94 рублей на рубль ветеринарных затрат в зависимости от метода ее применения.
Список использованной литературы по ветеринарии, диссертация 1999 года, Поздеев, Александр Владимирович
1. Акатов А.К. Некоторые данные по вирулентности стафилококков в связи с их' происхождением, фаготипом и патогенными свойствами// Журн.микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -1966,- N 1.- С. 87-91.
2. Акатов А.К. Изучение термолабильного летального токсина патогенных стафилококков//Журн.микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -1972.- N 6,- С. 74-77.
3. Акатов А.К. Сравнительное изучение иммуногенности стафилококкового анатоксина и корпускулярных вакцин.- В кн.: Стаф. имфекция. Л., С. 81-83, 1967.
4. Акатов А.К., Кац Л.Н., Прохоров В.Я. О возможной связи между вирулентностью стафилококков и некоторыми особенностями их субмикроскопической структуры// Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1971,- N 5,- С. 58-62.
5. Акатов А.К., Ладанный М.М. О связи между наличием белка А и некоторыми признаками золотистых стафилококков// Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1977,- N 8,- С. 137-138.
6. Акатов А.К., Зуева B.C. Стафилококки. М., 1983.-256 с.
7. Анатолий O.A., Антоновская И.И. Факторы вирулентности и патогенного действия стафилококков// Тез. докл. 9-й Междуна-родн. конгресс по микробиологии. М., 1966. - С. 434-435.
8. Архангельский И.И. Санитария производства молока. М.:1. Колос, 1974.- С. 11-18. »
9. Ашмарин И.П., Воробьев A.A. Статистические методы в микробиологических исследованиях. М.: Медицина, 1962.- 180 с.
10. Вельский В. В., Московцева А. И. К методике получения реплик по способу Ледербергов// Лабор.дело. 1972. N 8,-С. 488-490.
11. И. Вельский В. В, Закарян Л.М. Характеристика структуры популяций стафилококков при различных иммунобиологических воздействиях на организм в эксперименте// Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1986,- N 2.- С. 77-81.
12. Биргер M.O. Справочник по микробиологическим и виру-соллогическим методам исследования. M.: Медицина, 1982.-С. 251-260.
13. Бландова З.К., Душкин В. А., Малашенко A.M. и др. Линии лабораторных животных для медико-биологических исследований.- М.: Наука, 1983,- 192 с.
14. Бобровник С.А. Биологическая роль белка А стафилококка// Докл. АН УССР. 1985,- N 10,- С. 3-9.
15. Богданов И.Jl. В кн.: Иммунные гаммаглобулины в терапии и профилактике инфекционных болезней. Киев,1965,- С. 21-37.
16. Бредихин В.Т. Влияние некоторых плазмид на устойчивость кишечной палочки к действию факторов естественной резистентности// Дисс. . канд.мед.наук.- Курск, 1984. 183 с.
17. Брилис В.И., Брилене Т.А., Ленцнер Х.Н. и др. Методика изучения адгезивного процесса микроорганизмов// Лабр.дело.-1986.- N 4.- С. 210-212.
18. Бургасов П.Н. Руководство по вакцинному и сывороточному производству. М.: Медицина, 1978.- С. 72-87.
19. Бухарин 0.В., Васильев Н.В., Усвяцов В.Я. Лизоцим микроорганизмов.- Томск: Изд-во Томск, ун-та, 1985.- 214 с.
20. Воропаева С.Д., Анкирская A.C. Связь множественной лекарственной устойчивости со степенью патогенности у клинических штаммов стафилококка// Вопр.биохимии и физиологии микроорганизмов.- Саратов, 1974. Вып. 2. - С. 73-75.
21. Воропаева С.Д., Анкирская A.C., Вартанян Ж.С. Биологические особенности множественноустойчивых к антибиотикам штаммов стафилококка, выделенных от больных// Ферменты в лабораторной диагностике: Тез.докл. М., 1973. - Т.З.- С. 118-119.
22. Воскресенский Б.В., Дмитриева А.И., Лебедева 3.И.
23. Журн. микробиологии. 1961.- N1.-0. 33.
24. Выгодчиков Г.В. Вести венерологии и дерматологии. N 1,- 1951.- С. 9.
25. Выгодчиков Г.В. Стафилококковые инфекции. М., 1963.112 с. ( *
26. Гасанов Н.Г. Лечение и профилактика маститов у коров.- М., 1987.- 16 с.
27. Гасанов Н.Г.,Порфирьев И.А. Профилактика мастита у сельскохозяйственных животных.-М., 1988,- 16 с.
28. Гасанов Н.Г. Фаготинирование стафилококков//Ветерина-рия, 1987.- N 6.- С. 21-22.
29. Говалло В.И. Парадоксы иммунологии. М.: Знание. 1983.- С. 156-158.
30. Голосова Т.В. Автореф.дис. на соиск учен, степени докт. мед. наук. М., 1969.- 18 с.
31. Гончаров В.П., Карпов В.А., Якимчук И.Л. Профилактика и лечение маститов у животных. М.: Россельхозиздат, 1987.-С. 58-62.
32. Давыдов И.К., Мороз З.Я. Изучение реактогенных и антигенных свойств сорбированного столбнячно-стафилококкового анатоксина при иммунизации людей. В кн.: Стаф.инфекция. Л. , 1967,- С. 31-40.
33. Евглевский A.A. Способ получения стафилококкового анатоксина// Курск, КГСХА им. И.И. Иванова, 1999.- 8 с.
34. Ефанова Л.И. Диагностика и профилактика наиболее распространенных инфекционных болезней телят и поросят. Липецк, 1995,- С. 80-86.
35. Ефремова В.Н., Егорова Н.Б. и др. Эффективность и ре-актогенность безклеточной стафилококковой вакцины при иммунотерапии больных хроническими пиодермиями// Журн. микробиологии, 1996, N 6 . - С. 39-41.
36. Закарян Л.М. Устойчивость к антибактериальному действию крови, как одна из биологических характеристик стафоло-кокка// Лабор. дело, 1985,- N 12,- С. 750-752.
37. Закарян Л.М., Печенин О.Д., Бойко Н., Касьян Н. Изменение клональной структуры популяции стафилококков в отношении чувствительности к антибиотикам под влиянием трипсина// МРЖ. -Разд Ш. 1981,- N 12. - С. 90.
38. Закиров И.А., Кабилов A.M. Основные биологические свойства стафилококков, выделенных у хирургических больных// Мед. журн. Узбекистана. 1986.- N 10.- С. 63-64.
39. Зароза В.Г. Эшерихиоз телят.- :ВО "Агропромиздат", 1991,- С. 18-23.
40. Здродовский П.Ф. Проблемы инфекции, иммунитета и аллергии. М. , 1969,- С. 194-196.
41. Змушко Л.С. ,Адарченко A.A. Неоднородность популяций стафилококков гнойно-воспалительного очага хирургических больных// Актуал. пробл. теоретич. и практич. медицины.1. Минск, 1975. С. 149-151.
42. Змушко J1. С., Гинзбург В. Е. Характеристика патогенных стафилококков, выделенных в клинической больнице г. Минска// Тез.докл. 5-й съезд гиг., эпидем., микробиол. и инфекционистов Белоруссии Минск - 1971,- С. 427-429.i i
43. Иванов Ю.А., Новиков В.А. Сравнительная характеристика стафилококков, выделенных от больных с различными заболеваниями// Стафилококковые инфекции,- Мат-лы Ш Межвуз. науч.конф. 12-15 декабря, 1972 .-Л., 1972.- С. 27-32.
44. Ивашура А.И. Гигиена производства молока. М.: Рос-сельхозиздат, 1984.- С. 17-21.
45. Ивашура А. И. Система мер по борьбе с маститами коров. М.: Росагропромиздат, 1991,- С. 21-25.
46. Ивченко В.М. Стафилококковая инфекция вымени у коров причина энтероколитов новорожденных телят// Инфекц. болезни телят. - Кишинев, 1988,- С. 9-12.
47. Игнатов П.Е. Обоснование разработки иммуноактивных препаратов для лечения и профилактики инфекционных болезней// Автореф. дисс. д.б.н. С-Петербург, 1994,- 31 с.
48. Игнатов П.Е. Очерки об инфекционных болезнях у собак. М. : Валта, 1995,- 100 с.
49. Информационный справочник "Препараты крови и кровезаменителей", 1969.- С. 52-61.
50. Каральник Б-. В., Шамардина В. А., Исина Х.Н. Индикация белка А стафилококков// Метод, рекомендации. Алма-Ата, 198.3.40 с.
51. Карташева В.Н. Индикация патогенных бактерий в молоке и молочных продуктах.- М.: Колос, 1973, 223 с.
52. Карташева В.М., Забелин Ю.А. Профилактика маститов в период сухостоя// Журн. Ветеринария, N П.- 1984.- С. 48-49.
53. Карташева В.М.Иванова О.Р. Метод контроля молочных стад на заболеваемость маститом// Ветеринария ,1993,- N 8.-С. 21-23.
54. Карташева В.М., Ивашура А.И. Маститы коров. : ВО Агропромиздат, 1981. - С. 3-15.
55. Карташева В.М., Ивашура А.И. Маститы коров. : ВО Агропромиздат, 1988. - С. 5-19.
56. Карташева В.М., Ярных B.C. Пути и методы повышениясанитарного качества молока. Санитария и гигиена содержания животных. М., 1981.- С. 83-90.
57. Касянчук В.В. Ультраструктурные изменения в тканях вымени коров при стафилококковом мастите//Докл. Росс. Академиисельхознаук, 1992.- N 7.- С. 3-5. *
58. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология// СПб Специальная литература, 1998.-С. 332-333.
59. Краснощекова Е.Е. Тест на определение ДНК-азной активности в диагностике стафилококковых инфекций// Мат-лы И Всеросс. съезда эпидемиол., микробиол. и инфекционистов. Горький, -М., 1966.- С. 133-134.
60. Кузнецова л. В. Ферменты патогенности стафилококков. Сравнительное определение активности ферментов патогенности местных штаммов стафилококков//Журн.микробиологии, эпидемиоио-лии и иммунобиологии. 1967.- N 12.- С. 130.
61. Литвин В.Ю. Эколого-эпидемиодлогические аспекты паразитизма некоторых патогенных бактерий// Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1986,- N1.-0. 86-91.
62. Мамыкина В.И. Связь вирулентности с антибиотикоустой-чивостью у стафилококков// Вопр. реактивности организма.- Саранск, ,1.980. С. 100-104.
63. Машковский М.Д. Лекарственные средства. В 2-х т. -13-е изд. Харьков: Торсинг, 1998. Т.-2. С. 456-457.
64. Мельников Н. И., Мельников В.Н., Гимранов Н.Г. Ферменты патогенности и токсины бактерий. М.: Медицина , 1969. -252 с.
65. Моргунов И.Н. Аллергические свойства анатоксинов.Явления аллергии у животных, иммунизированных стафилококковым анатоксином// Науч. труды Иркутского НИИЭМ. Иркутск, 1972.-С. 37.
66. Мороз А.Ф., Глатман Л.И. Роль плазмид в формировании госпитальных штаммов условно-патогенных грамотрицательных бактерий// Антибиотики. 1983. - N П. - С. 859-874.
67. Мутовин В.И. Борьба с маститами коров. М., 1963.-С. 58-62.
68. Нефедьева Н.П. Анализ стафилококковых пищевых токси-коинфекций в СССР за 5 лет (1959 1963)// Тез. докл. науч. сессии, посвящ. пробл. стафилококковых инфекций. Ленинградский сан.-гигиен, институт, 1964.- С. 18-21.- из
69. Никитин И. Н. и др. Организация и экономика ветеринарного дела. М., 1987. - 352 с.
70. Никитин И.Н. и др. Практикум по организации и экономике ветеринарного дела. М.: Колос. - 1998. - 192 с.i'
71. Никифорова H.A. Биохимические свойства стафилококков различной вирулентности// Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1981.- N 9,- С. 70-76.
72. Оксамитный Н.К. Субклинические маститы у коров// Авт. док. дисс. Львов, 1982.- 20 с.
73. Осидзе Д.Ф. Ветеринарные препараты.-М.: Колос, 1981. -С. 449.
74. Падерина Е.М., Иванова С.П. Изменение устойчивости к антибиотикам и показателей вирулентности у стафилакокков под влиянием акридина оранжевого// Мат-лы к 2-й науч. сесс., пос-вящ. пробл. стафилококк, инфекций. Л., 1967.- С. 64-65.
75. Панышева И. И., Степанова Л.А., Морозова М.Ф. ДНК-зная активность стафилококка// Журн. микробиологии, эпидемиологиии иммунобиологии. 1967. - N 10.- С. 49-52.
76. Перфильев Д.Ф. О корреляции бактериоциногенной активности стафилококков и их биологических свойств// Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии.-1973.-N 2,- С.66-70.t
77. Покровский В.И., Поздеев O.K. Медицинская микробиология. М.: ГЭОТАР Медицина, 1998,- С. 185-190.
78. Полянцев Н.И., Синявин А.Н. Акушерско-гинекологичес-кая диспансеризация на молочных фермах. М.: Россельхозиздат, 1985.- С. 12-21.t
79. Полянцев Н.И., Подкуйко Л.Г. Мастит у коров в сухос-тойкий период и заболеваемость телят диспепсией// Ветеринария, 1987.- N 3.- С. 62-64.
80. Пономарев А.В. Специфичная профилактика инфекционных болезней// Труды Ленингр. НИИ вакцин и сывороток М., 1959.-С. 157-181.
81. Проскуров В.А. Стафилококковый анатоксин и антифагин в комплексной терапии желудочно-кишечных заболеваний стафилококковой этиологии у детей раннего возраста.- В кн.: Вакцины и сыворотки. Киев , 1972. С. 31-37.
82. Риженко I.B., Левицький А.Е., Степанюк C.B. Викла-док дерматиту у собаки, викликаний Л-формами стафилококу// Аграрный вестник причерноземья. Одесса, 1999. - N2. -С. 53 - 55.
83. Русакова Е.В. Изучение сенсибилизирующих свойств стафилококкового л -токсина// Журн. микробиол., 1970.- N 4.-С. 77-81.
84. Саторов С.С., Орзуев М.И.Частота выделения стафилококков у домашних животных и идентификация штаммов//Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1987. -N12,- С. 37-39.
85. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Федотов В.Б. Определитель зоопатогенных микроорганизмов. М. : Колос, 1995.1. С. 80 -83.
86. Световидова В. М. Связь лецитиназы или желточного фактора стафилококков с их патогенностыо// Журн микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1967.- N 5.- С. 64-69.
87. Смирнова A.M. Трояшкин A.A., Подерина Е.М. Микробиология и профилактика стафилококковых инфекций.- М.: Медицина, 1977. 216 с.
88. Снопкова В.А. Специфическая профилактика и лечение стафилококковых инфекций.// Автореф. дисс. на соиск. учен, степени д. м.н. М., 1973.- 25 с.95. "Стафилококки и стафилококковая инфекция" . Саратов, 1980,- 320 с.
89. Стручков В.И. Основные вопросы гнойной хирургической инфекции// Мат-лы XII пленума Всес. общ. хирургов.- М., 1972.-С. 10-12.
90. Сытник И.А. О сенсибилизирующем действии стафилококковых анатоксинов.- В кн.: Стафилококковые инфекции. Л., 1972.
91. Тимкова Е.А. Пути совершенствования технологии изготовления и спектра применения стафилококковой анатоксин-вакцины. // Аграрный вестник причерноземья. Одесса, 1999. - вып. N2. - С. 81 - 83.
92. Тимонов П.С. К методике исследования популяций стафилококка.// Вопр. инфекц. патологии Забайкалья. Чита, 1971.-Вып.2 - С. 186-188.
93. Туржецкий П.И. Пищевая интоксикация стафилококковой этиологии, связанная с употреблением молока и молочных продуктов.// Журн. Гигиена и санитария.- 1959,- N3.-0. 28-31.
94. Усатова Е.А. Биологические особенности штаммов стафилококков , выделенных от детей , проживающих в районах с различным уровнем загрязненности отмосферного воздуха.// Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1986.- N 4.-С. 105-109.
95. Фоменко Г.А. Количественное определение белка А у штаммов стафилококков при различных клинических состояниях и локализации процесса.// Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1980.- N 10.- С. 57-61.
96. Холчев Н.В. Гамма-глобулин. Методы получения и стандартизации,- М., 1965. С. 46-49.
97. Чистович Г.Н. О соотношении между устойчивостью патогенных стафилококков к антибиотикам, вирулентностью и фаго-типам.// Антибиотики. 1963,- Т 8, N 1.- 0. 64-67.
98. Чистович Г.Н. Патогенез стафилококковой инфекции. -Л., 1961. 216 с.
99. Чистович Г.Н. Стафилококковая лецитиназа//Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1950.- N 10.1. С. 54-58. tt
100. Чуднер В.В. Об изменении чувствительности к антибиотикам In vivo и In vitro// Антибиотики.- 1981 . Т 25, N 5.-С. 370-374.
101. Шраер Д.П. Роль внеклеточных ферментов Staphylococcus aureus в патогенезе стафилококковой инфекции// Тез. докл. XVI Всес. съезда микробиол. и эпидемиол.- Ульяновск,- М. , 1977.- ч. 1,- С. 206.
102. Шраер Д.П. Усиление тяжести стафилококковой инфекции и трансдукция детерминантов пенициллиназной активности в опытах на белых мышах//Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1970.- N П. - С. 77-82.
103. Юркова В., Демидова Л. Противомаститные препараты// Ветеринарные новости 22 января 1998.
104. Янбаева Х.А. Изменение свойств стафилококка в процессе приобретения устойчивости к антибиотикам// Актуальн. вопр.теории и практики мед. науки. УФА, 1970. - С. 156-157.
105. Янбаева Х.А. Корреляция дезоксирибонуклеазной активности стафилококка с некоторыми ферментами вирулентности// Сб. науч. раб. Башкир.мед.ин-та.- 1972. Т. 18,- С. 152-156.
106. Яценко Н.Г. Корреляция между основными критериями патогенности стафилококков и их белковыми спектрами// Тр. Крым. м}ед. ин-та. 1974.- Т. 55.- С. 29-31.
107. Alkindale N.D. A trial of mercuric chloride for'the rapid identification of epidemia strains of staphylococcus py-egenee// W.Afric.Med.J.-1962.-v.11, N 1.- P. 35-38.
108. Baddiley J. Structure and properties of reichoic acids. Biochim. J. - 1962 .- N 82.- 562 p.
109. Bhakdi S. ,Muhly M. Correlation between toxin binding and hemolytic activity in membrane damage by staphylococcal toxin// Infect.and Immun.-1984.- v.46.- P. 318-323.
110. Blobel H., Kitarow D.,Schacy W. Protogenic effects of capeular substance from Staphylococcus aureus// Abetr. Ann.Amer.Soc.Microbiol., Atlantic City. 1976. - N7 - P. 15.
111. Bloom B. Games parasites play how parasiten erade immune aurveilance// Nature.- 1979,- v.279.- P. 21-26.
112. Burnet J.M., J. Pachol. Bacterid., 1929. - v. 32.-P. 717-721.
113. Burnet F.M., J. Pachol. Bacterid., 1930. - v.33.-P. 1-5.
114. Calmette A. Manuel Technique de microbiologic et se-rologie.-M. : nojiHrpa$KHHra. 1937.- 38 c.
115. Cohen Jay 0. Staphylococcosis// J.Amer. Vet.Med.Assoc., 1987.- 190. N2,- P. 150-152.
116. Cutler R.R. Relationahip between antibiotics resistance in the production of "virulence factora" and virulence for experimental animals in Staphylococcus aureus// J.Med Microbiol.- 1979.- v. 1, N 1.- P. 55-62.
117. Dalen A.B. Molecular forms of staphylococcal alpha-toxin// Staphylococci and Staphylococcal diseases.- Stutt-gard, 1976. P. 721-723.
118. Easmon G.S.F.,Glynn A. The role of hamoral immunity and acute inflammation in protection against staphylococcal dermenecrosis// Immunology.- 1975,- v.29.- P. 67-74.
119. Ekatedt R.D., Yoshida K. Immunity to Staphylococca-llnfaction in Mice Effect of liony versus Killed Vaccine, Hole of Circulating Antibody, and Induction of Protection-Indu-cingl24-Antigene(N) in Vitro// J.Bact.- 1969.- v.100,- P. 745.
120. ElekS.D., Levy T. J. Pathol.Bacteriol., 1950.v. 62. P. 541-545.
121. ElekS.D., Levy T. J. Pathol. Bacterid., 1950.v. 68. P. 31-40.
122. Elek S.D. Staphylococcus pyogenes and its relation to disease. Edindurgh-London, 1959,- P. 767-769.
123. Forsgren A. Contribution to Microbiology and Immunology, vol 1 Staphylococci and Staphylococcal Infections, Karger, Basel. 1973,- P. 102-108.
124. Forsgren A., Nordstrom K. Protein A Staphylococcus aureus: the biological significance of its reaction with IgG.-Ann.N. Y.Acad. Sci., 1974. P. 252-265.
125. Foragren A. Pathogenisity of Staphylococcus Aureus Mutants in General and Local Infections// Acta Path.Microbiol. Scaad. Sect. B. 1972. V. 80. - N 4.- P. 564-570.
126. Garsia Lopez M.L. Moreno Garsia B. Los estafylococos como agentes de mamitis en el ganado vacuno// An.Fac.vet.Leon, 1978.- 24.- N 1. ) P. 83-93.
127. Gladstone G.P. and W. E. Van Heyningen.-Brrit.J.Exptl.Hath, 1957,- v.267.- P. 123-137.
128. Gladstone G.P. Postery mirob. 1966,- v. 5,- P. 145-161.
129. Green Susan M. Mercuryconsitivity of staphylococci// J.Clin.Pathol. 1962. - v.15, N3.- P. 249-251.
130. Hallnader H. Acta Pathol, microbiol. Scand., 1965. v.63.- P. 299-305.
131. Hisatsune K.,Courcy S.J. Muad S. The immunologically active' cell wall peptide polimer of Staphylococcus aureus.-Biochemistry , 1967,- N 6. P. 595-603.
132. Joganovsky J. 7 Int.Congr.Microbiol., Abrtr. of commun. Uppsala, 1958. 356 p.
133. Johanovsky J. Stafylokokova infekce intaxikace a im-munisace u me ad'at. Gesk. Biol. 1955.- v. 4.- P. 198.
134. Kapral F. A. Clumping of Staphylococcus Aureus in the peritoneal cavity of mice "J.Bact.", 1966,- v. 92. - N4. -P. 1188-1195.
135. Kreger A.S., Kim K.S., Laboretsky E. and Bernheimer A., Intect. and Immun. , 1971.- v.3.- P. 449-465.
136. Kronvall G.,Gerveus H. Activation and inactivation of Ig G mediated complement fixation by staphylococcal protein A// Clin, Exp. Immune 1. 1970,- v. 7,- P. 211-220.
137. Lind J. Corrrelation between the occurrence of protein A and come other proparties in Staphylococcus aureus//Acta path, et microbiol.acand.-Sect.B. -1972. v. 80,- P. 702-708.
138. Lind J., Reyn A., Birch-Anderson A. Electron microscopy of staphylococcal protein a reactivity and specific antigen antibody reactions. - Acta path, microb. Scand., Sect. B, 1972,- V. 80. - P. 281-291.i
139. Mathier L.G. at all. In vitro adhesion of Staphylococcus strains to rabbit tissues// Rev.Can.Biol.Exp.-1982. v. 41, N 1,- P. 3-31.
140. Oeding P. Cellular antigens of staphylococci.- "Ann. N.Y.Acad. Sci. \ 1974, V. 128,- P. 15.
141. Paris! L.G. Significance of chromogenic variants in studies of virulence factors of Staphylococcus aureus// J.Bacterid. 1966. - v.92, N 3. - P. 589-591.
142. Park J.T., Shaw D.R.D. Chatterjee A. N. , Mirelman D. and all Mutants of staphylococci with altered cell walls.-Ann. N.Y.Acad. Sci., 1974,- v. 236.- P. 54-62
143. Rahal J.J. Comparative effects of purified alpha and delta toxins on mitochondrial metabolism// J. Infect.Diseases.-1972. v. 126, - N 1. - P. 96-103.
144. Robinson J.F.S. Thatcher and J. Gagnon.- Can.J. Microbiol, 1958. V.3. - P. 345-361.
145. Schleifer K.H. Chemical composition of staphylococcal cell walls. Staphylococci a. Staph. Infect. Recent Progress. 1973.- P. 13-21.
146. Schwartz M. Application de la recherche.// La lettrede l'Institut Pasteur.- 1997.- N 20,- P. 14-18.i »
147. Selim S.A., Osman K.M., Ismail M. at all.Virulance of staphylococci to mice and its relation to lyssyme production and coagulase activity// Arch.Exp. Veterinarmed. 1984.-v. 38. - N5. - P. 692.
148. Sjoquist J. Structure and immunology of protein A. Staphylococci A Staph. Infect. Resent Progress, 1973.-P. 83-92.
149. Smith M.L., S.A.Price. J. Path. Bact. , 1938. - v. 47. P. 379-393.
150. Strominder J. L. Biochemistry of the wall of Staphylococcus aureus. Ann. N.Y. Acad. Sei., N 128. - 1965.-P. 59-61.
151. Vacsi L.,Fodor M. Studies on the mercuric chloride resistance of Staphylococcus aureus// Acta Microbiol.Acad.Scient. Hung. -1962. v.9, N 1,- P. 81-87.
152. Vijver J. van der Es-Boon M.M., Michel M.F. Induction of Mutation in Staphylococcus aureus by Ethylmethane Sulphonate// J.Med.Microbiol. 1975. - v.8.- P. 265-277.
153. Voss F. Braveny I. Eur Congr Clin Microbiol and Infect diseases, Oslo, sept. 9-11, 1991.- Oslo, 1991.- P. 151.
154. Williams R.E., Harper G.Y.- J. Pathol.Bacteriol.,1947. V. 59. P. 69-97. *
155. Wiseman G.M. and Caird G.D.- Can. J. Microbiol., 1967. v. 13. - P. 369-376.
156. Wiseman G.M. Caird J.D. Mode of action of the alpha toxin of Staphylococcus aureus//Can.J.Microbiol.-1970.- v.16.-N1. P. 47-50.
157. Witte W.,Nguen van Dip,Hummel R. Resistens gagen Quacksilber und Cadmium bei staphylococcus aureus interachied-licher okologiecher Herkunft//S.allg.Microbiol.-1980.- v.20. -N8. P. 517-521.
158. Witte W., Dunnhaupt K., Klare A. Quacksilberresis-tens bei Staphylococcus aureus eis Erkennungamerkmal fur epidemische-virulente Hcapitalsamms// S.gesamte Hug.und Grens-geb. - 1983. - Bd.29, - N 2. - P. 58-61.1. УТВЕРЩДАЮ"
159. НИР КГСХА Иванова ^ Картамышев. Н.й S99t*1. АКТот " " дш* г. Курок
160. Животных разделили на 3 группы по 24 головы в каждой. В каждой группе животных еще разделили на 2 подгруппы по 12 голов с катаральным и 12 голов с субклиническим маститами.
161. Схемы лечения были назначены следующие:1 группа лечение мастисаном-А.2 группа комбинация " 0,25% раствор трипсина + стафилококковая анатоксин-вакцина3 группа комбинация " 2% раствор гидрокарбоната натрия (соды) + стафилококковая анатоксин-вакцина ".
162. Перед лечением вымя обмывали теплой водой о мылом и обсушивали полотенцем.
163. Для лечения 1 группы использовали препарат Курской биофабрики Мастисан-А в дозах согласно " Наставления по применению маотиоана=А для лечения воспаления вымени у коров ".
164. Из ?Л коров 1 группы, больных катаральным и субклиническим маститами, выздоровело черев 8-10 суток о момента лечения 16 животных. Лечебная эффективность составила 66,6%.
165. Из 24 коров 2 группы, больных катаральным к оубшганичвокиь« мао= титами, выздоровело через 7-9 суток с начала лечения 20 голов. Лечебная эффективность составила 83,3%л
166. Для лечения -3 группы животных применяли 2% раствор гидрокарбоната натрия (соды) и стафилококковую анатоксин-вакцину.
167. Конечные результаты опыта для наглядности приведены в таблице.
168. Результаты испытания лечебной эффективности стафилококковой анатоксин-вакцины и маотисана-А-!-;-!-:-1-1-1-1-1
169. Ч |Подвергнуто|Выздоровело!БольЁые пос-|
170. Груп-1Схемы ! Форма |лечению | |ле лечения |Лечебнаяпы | лечения \ мастита |--1—:-1-1-1-;-! -зффектрш• | |коров!доли |коров|доли |коров|доли Iность
171. Мао т ипан Кя.ТгЮ^иг 12 1Я р» 1' С; С 5
172. А Оубклин. 12 14 9 11 у 66,6 •V /а1. Всего: 24 27 16 19 С; р
173. Тптлттпшт — ---1--- Катаоал. 12 13 9 10 3 31I стафило- гй>л »г» пг '> У иР^ЙКЙ . А ! -1 Г} XX и * X X X А ! о о ^кокковая анатоксин Всего: 24 25 20 21 4 вакцина
174. Гидоокао- Катаоал. 13 8 9 ¿1 Абонат Ма Оубклин. -1 О 15 10 13 СП <? 4. 1. Ш ПТЭ"ЬИ7ТП---- ---- кокковая Т1 П * 24 28 18 99 р. 11 75 %1. Ян х'-} ¿^СУд " -вакцина 4
175. Стафилококковая анатоксин-вакцина показала высокую лечебную эффективность по сравнению с мастисаном-А и может применяться не только с лечебной, но и профилактической целью. В целом препарат считаем перспективным.
176. ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА 1астисан А имеет широкий антибактериальный спектр,действия, подавляет рост и развитие зкокков, стафилококков и других патогенных микроорганизмов.