Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Совершенствование метода цитологической диагностики опухолей молочной железы у собак

На правах рукописи

Герасименко Ирина Иосифовна

СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДА ЦИТОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ОПУХОЛЕЙ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ У СОБАК

16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ставрополь -2008

003450369

Работа выполнена в ГНУ «Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт» Россельхозакадемии

Научный руководитель: Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

доктор биологических наук Карташов Сергей Николаевич

доктор биологических наук, профессор Лапина Татьяна Ивановна

доктор медицинских наук, профессор Боташева Валентина Салиховна

ФГОУ ВПО «Донской государственный аграрный университет»

Защита диссертации состоится «/^ » и^Ры^/ыЛ _ 2008 г. в Ю00 часов на заседании диссертационного совета Д.220.062.02 при ФГОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет» (355017 г. Ставрополь, пер. Зоотехнический, 12).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет».

Автореферат размещен на официальном сайте ФГОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет»: http://www.stgau.ru «/»ситгге^мгш г.

Автореферат разослан «// » 2008 г.

Ученый секретарь диссертационного совета ^¿У/ Квочко А.Н.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования. Среди злокачественных новообразований животных, особенно собак, рак молочной железы является одной из наиболее распространенных патологий. Плохой прогноз и высокая смертность больных раком молочной железы животных определяется поздней его диагностикой и отсутствием онкологической настороженности при выявлении фоновых процессов. Ежегодный прирост заболеваемости животных от рака молочной железы, опережающий эти показатели по сравнению с другими опухолями, выдвигает проблему борьбы с этим заболеванием на ведущее место. Вследствие высокой частоты поражения молочной железы заболевание чаще наблюдается у самок. Наибольшее число патологий молочной железы, по мнению некоторых авторов, приходится на возраст 6-9 лет. Раннее выявление злокачественного новообразования, предраковых изменений, а также групп животных повышенного риска с применением цитологического метода исследования позволит снизить выявление запущенных форм рака молочной железы у животных.

В последние годы у ветеринарных врачей все чаще возникают трудности дифференциальной диагностики рака и Других заболеваний молочной железы у собак. Для правильного выбора метода лечения более необходимой становится морфологическая верификация диагноза, поэтому усилия ветеринарных врачей должны быть направлены на совершенствование методов, позволяющих получить материал для гистологического и цитологического исследования.

За последние годы наблюдается рост заболеваемости собак раком молочной железы, поэтому объяснимо пристальное внимание к этой проблеме. Тем не менее, более половины хозяев обращаются с запущенными формами заболевания у своих питомцев, что объясняется двумя причинами: ветеринарной и социально-психологической. Последняя из них заключается в простом неверии в лечение, страхе перед неудачной операцией и, как следствие, позд-

нем обращении к специалисту. Поэтому основной задачей, наряду с поисками путей первичной профилактики, является исследование процесса канцерогенеза в зависимости от пола и возраста и разработка способа раннего выявления рака молочной железы у собак.

Цитологический метод дает возможность отслеживать изменения на клеточном уровне, которые могут привести к возникновению рака молочной железы, следить за течением патологического процесса в предоперационном, операционном и послеоперационном периодах. Данный метод позволяет исследовать выделения из соска, пунктаты опухоли, соскобы и мазки-отпечатки с разреза опухоли, а также соскобы и пунктаты из послеоперационных рубцов или лимфатических узлов.

Цель исследования: совершенствование метода комплексного цитологического исследования опухолей молочной железы у собак.

Задачи исследования:

1. Изучить структуру и распространение патологии молочной железы у собак в Ростовской области.

2. Выяснить диагностическую ценность и сопоставимость различных методов цитологического исследования новообразований молочной железы у собак.

3. Определить преимущества и недостатки различных методов цитологического исследования.

4. Установить основные цитологические особенности различных клинико-морфологических форм рака молочной железы у собак.

5. Выяснить основные цитологические особенности диагностики метастатических поражений лимфатических узлов.

6. Выяснить диагностическую ценность метода комплексной цитологической диагностики опухолей молочной железы у собак.

Научная новизна работы. В результате проведенной работы предложен метод комплексного цитологического исследования опухолей молочной

железы у собак, который включает в себя микроскопирование мазков-отпечатков с эрозированной поверхности; исследование выделений из соска; пунктатов, полученных методом тонкоигольной биопсии до операции; исследование мазков-отпечатков во время проведения операции; микроскопирование соскобов из послеоперационных рубцов; исследование пунктатов лимфатических узлов. Впервые в ветеринарной практике изучена цитологическая картина клинико-морфологических форм рака молочной железы у собак, установлены дифференциально-диагностические особенности различных ин-фильтративных процессов в молочной железе.

Теоретическая и практическая значимость. Полученные на большом цитологическом материале результаты позволяют рекомендовать комплексный метод цитологического исследования больного животного для внедрения в практику, так как он позволяет точно ставить диагноз. С использованием комплексного метода описаны цитологические картины при доброкачественных процессах, воспалительных болезнях, раке молочной железы и метастазах у собак. Использование комплекса цитологических методов позволяет распознавать злокачественное новообразование на ранних стадиях развития, дает возможность для своевременного оперативного, лучевого лечения и гормонотерапии. Осуществление цитологического контроля с оценкой результатов лечения позволяет констатировать изменения в молочной железе в динамике, а также улучшать прогноз заболеваний. Результаты исследований могут быть использованы в ветеринарных клиниках, а также при написании учебных пособий в области клинической цитологии.

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены и одобрены на заседаниях ученого совета ГНУ СКЗНИВИ, Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы, задачи и пути научного обеспечения приоритетного национального проекта «Развитие АПК»» (г. Новочеркасск, 2008), VIII Всероссийской научно-практической конференции «Современные проблемы и перспективы развития» (г. Саратов, 2008),

XVI Московском международном конгрессе по болезням мелких домашних животных (г. Москва, 2008).

Внедрение результатов исследований. Разработанные практические предложения используются в практической работе городских станций по борьбе с больными животными Ростовской области, в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий на кафедре внутренних незаразных болезней Донского государственного аграрного университета. По результатам исследований опубликованы методические рекомендации.

Публикации. По материалам представленной к защите диссертации опубликовано 14 научных работ, в том числе 1 из списка изданий, рекомендованных ВАК.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

Изучение цитологической картины позволяет установить различные клинико-морфологические формы рака молочной железы собак.

Комплексный цитологический метод исследования молочной железы позволяет увеличить информативность, достоверность и практическое значение цитологического исследования патологий молочной железы собак.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 149 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов, предложений для практики и списка литературы, включающего 229 источников, в том числе 135 на иностранных языках. Диссертация содержит 9 таблиц и иллюстрирована 83 рисунками.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы, методы и объем исследований

Работа выполнена в лаборатории функциональной диагностики болезней

сельскохозяйственных животных ГНУ СКЗНИВИ Россельхозакадемии, на базе ветлечебниц гг. Ростова-на-Дону, Шахты и Таганрога.

В работе использованы статистические данные о поступлении собак с опухолями молочных желез начиная с января 2003 года по 2007 год, регистрируемые в амбулаторных журналах. Клинико-экспериментальная часть выполнялась с середины 2003 г. На всех животных были оформлены истории болезни, отражающие клинический статус каждого больного животного, данные лабораторных исследований, сведения о клиническом течении опухолевой болезни, отдаленные результаты лечения, а также дальнейшую судьбу каждого больного животного.

В историю болезни заносились сведения о породе, возрасте, поле, анамнестические данные условий содержания, кормления и др., начале появления и характере дальнейшего проявления опухолевого роста, предшествующих болезнях, перенесенных животными.

Особое внимание обращалось на сведения о возможных нарушениях полового цикла, количестве щенностей, наличии ложной беременности; устанавливалось время появления опухолей в связи с щенением и лактацией.

При клиническом осмотре больных животных проводилось общее исследование: определение температуры, частоты пульса, дыхания, учитывалось наличие, снижение или отсутствие аппетита. Определялась локализация опухоли, ее величина, форма, консистенция, связь с окружающей тканью. Устанавливалось наличие первичной множественности опухоли, метастазов, рецидивов. Гематологические исследования проводились по общепринятой методике. Для уточнения и дифференциации опухолей проводились цитологические и патологоморфологические исследования в лаборатории ГНУ СКЗНИВИ.

Объектом цитологического исследования служили пунктаты из опухолей и опухолевидных образований молочных желез; пунктаты регионарных лимфатических узлов; выделения из сосков; соскобы с эрозированных и язвенных поверхностей соска, околососковой зоны и других участков органа; отпечатки с удаленной ткани молочной железы и лимфатических узлов.

Диагностическая пункция молочной железы проводилась иглами диаметром не более 1 мм. Для аспирации материалов использовались шприцы емкостью 20 мл. Во всех случаях при пунктировании больные животные надежно фиксировались. При больших размерах опухоли (5 см и более в диаметре) и различной ее плотности получались два или три пунктата из разных участков.

Выделения из соска были получены путем легкого надавливания пальцами на область соска и околососковой зоны, а затем на ткань молочной железы с последовательным переходом от одного сектора к другому. Во всех случаях мазки готовились как из первой капли, так и из всех последующих. Если выделения были обильные и капли различны по цвету, то они помещались на разные стекла, при этом особое внимание акцентировалось на кровянистые и сукровичные выделения.

Отпечатки и соскобы с эрозий и язв готовились после того, как с поверхности патологического очага осторожно удалялись гноевидные массы, корочки, некротический налет. Отпечатки получались путем прикосновения предметным стеклом к изъязвленному участку. Соскоб был получен путем осторожного поскабливания патологической поверхности деревянным шпателем или краем покровного стекла. Если появлялись капли крови, то получение соскоба прекращалось.

Отпечатки и соскобы с ткани удаленного патологического очага готовились сразу же после операции путем прижатия предметного стекла к поверхности свежего разреза или при поскабливании ткани покровным предметным стеклом или скальпелем.

Из пунктатов, выделений из сосков, соскобов и отпечатков готовились тонкие мазки. Если полученный пунктат представлял собой жидкость, то она центрифугировалась и мазки готовились из осадка. Отпечатки с поверхностей опухолей и мазки из пунктатов готовились в первый день приема животных. Полученные отпечатки и мазки высушивались на воздухе, фиксировались и окрашивались.

В работе использовались основные методы окраски цитологических препаратов: окраска по Романовскому-Гимзе и гематоксилином и эозином для мазков. Сухие мазки фиксировались в метиловом спирте 5 минут или в смеси Никифорова 15 минут. Затем стекла погружались в рабочий раствор готового красителя Романовского-Гимзы на 15-20 минут, после чего препараты промывались дистиллированной водой и высушивались. При окраске гематоксилином и эозином мазки фиксировались в смеси равных частей эфира и 96 % спирта или в 96 % спирте 7-10 минут. Препараты окрашивались в гематоксилине 5 минут и промывались в проточной воде 1-2 минуты. Затем стекла окрашивались 1 минуту в 0,3 % спиртовом растворе эозина и промывались в проточной воде 1-2 минуты и высушивались. Готовые препараты просматривались под микроскопом с иммерсионной системой (увеличение 7x90) по 2-5 отпечатков из одной опухоли.

Цитограммы сопоставлялись с результатами исследований гистологических препаратов. Во всех случаях при цитологическом заключении учитывалась клиническая картина заболевания и макроскопический характер пунктатов.

2.2. Распространение патологии молочной железы у собак

В период с 2003 по 2007 годы было проведено 29 210 цитологических исследований у 5655 больных собак с различными заболеваниями молочной железы в возрасте от 2 до 16 лет. Из них рак молочной железы был выявлен у 1010 собак, что составило 17,8 % от всех инфильтративных заболеваний молочной железы, доброкачественные дисплазии были выставлены у 2885 боль-

ных животных, что составило 51 %. Доброкачественные опухоли встречались чаще, чем злокачественные. Они наблюдались у 1160 собак, что от общего числа заболеваний молочной железы у собак составило 20,5 %. Воспалительные процессы были обнаружены у 175 животных (3,1 %), метастатические опухоли встречались только у 398 животных (7 %), а саркомы - у 27 животных, что составило 0,5% от общего количества.

Таблица I

Статистические данные по различным заболеваниям молочной железы

в зависимости от способа получения материала (2003-2007 гг.)

Характер заболевания Кол-во случаев (гол.) Выделения из соска (гол.) Пунктаты (гол.) Соскобы и мазки (гол.) Комплексное исследование

Доброкачественные дисплазии 2885 52 2702 49 82

Доброкачественные опухоли 1160 12 1121 - 27

Воспалительные процессы 175 9 142 24 -

Раки 1010 53 722 24 211

Метастатические опухоли 398 - 351 - 47

Саркомы 27 - 27 - -

Всего 5655 126 5065 97 ' 367

Как видно из данных, представленных в таблице, чаще всего материалом для цитологического исследования служат пунктаты (89,6 %), затем следуют выделения из молочной железы (2,25 %), на мазки-отпечатки и соскобы приходится еще меньший процент (1,7 %). Данные таблицы подтверждают большое значение аспирационной биопсии в своевременной диагностике новообразований молочной железы у собак.

2.3. Морфологическая характеристика цитограмм молочной железы

Цитологический метод диагностики имеет определенные критерии и возможности диагностики при различных способах получения материала для исследования. Ниже представлены материалы исследований препаратов патологических состояний молочной железы у собак, полученных из отделяемого

соска, пунктатов опухоли, соскобов из изъязвившейся опухоли или мамилляр-ного поля, с разреза оперативно удаленной опухоли. Продемонстрированы препараты дисгормональных гиперплазий, доброкачественных опухолей (фиброаденом, фиброзно-кистозных мастопатий, липом), воспалительных процессов, злокачественных новообразований.

Каждая форма опухоли и опухолеподобных образований охарактеризована с учетом данных, полученных при макроскопическом и микроскопическом (цитологическом) исследовании.

2.3.1. Морфологическая характеристика цитограмм молочной железы, полученных из выделений соска

Наличие выделений из соска может сопровождать заболевания молочной железы различной этиологии. Особая ценность цитологического исследования материала, полученного таким образом, заключается в возможности обнаружить в ряде случаев рак, при полном отсутствии характерных для него клинических данных.

В цитограммах выделений из соска, соскобов с эрозированной поверхности в зависимости от патологического процесса наличие и количество тех или иных клеток может быть разным.

Таблица 2

Количество диагнозов, поставленных методом исследования выделений

из соска (МВС) и подтвержденных гистологическим методом

Характер заболевания Выделения из соска Количество диагнозов, поставленных МВС и подтвержденных гистологическим методом

гол. гол. %

Доброкачественные дисплазии 52 42 80,7

Доброкачественные опухоли 12 8 66,6

Раки 53 42 79,2

При анализе данных таблицы 2 установлено, что доброкачественные дисплазии, выявленные при исследовании выделений соска, только в 80,7 % случаев подтверждались гистологически. Правильность диагноза о доброкачественности патологического процесса не вызывала сомнений при исследовании вьщелений из соска в 66,6 % и подтверждалась другими методами цитоло-

гической диагностики. Воспалительные процессы гистологически подтверждались в 100 % случаев. Из 53 животных, больных раком, правильно диагноз был поставлен 47 животным, что составило 79,2 % случаев.

Таким образом, цитологические исследования из соска могут рекомендоваться как скрининговый метод исследования доброкачественных процессов и не могут являться основным методом цитологического исследования. Вместе с тем, преимуществом метода остается безболезненность, неинвазив-ность, возможность многократных повторных исследований.

2.3.2. Цитоморфологическая характеристика патологий молочной железы путем исследования пуиктата, полученного методом тонкоигольной аспирационной биопсии (ТАБ)

При рассмотрении эффективности цитологического исследования методом тонкоигольной аспирационной биопсии видно, что диагностическая информативность метода увеличивается при повторных исследованиях у одного и того же животного. Так, при первом проведении ТАБ доброкачественные дисплазии и доброкачественные опухоли выявлялись только в 94,5 и 91,6 % случаев соответственно. При повторном пунктировании эффективность данного исследования повысилась по доброкачественным показателям до 96,3 и 96,6 %, что было полностью подтверждено гистологическим методом.

Таблица 3

Количество диагнозов, поставленных методом ТАБ

и подтвержденных гистологическим методом_

Характер заболевания ТАБ Количество диагнозов, поставленных ТАБ и подтвержденных гистологическим методом

гол. гол. %

Доброкачественные дисплазии 2784 2632 94,5

Доброкачественные опухоли 1148 1052 91,6

Раки 816 612 75

Повторные исследования выявляли воспалительные процессы и злокачественные опухоли соединительной ткани так же эффективно, как и гистологический метод. Злокачественные новообразования вьивлялись более чем в 98,1% случаях под контролем гистологического метода, тогда как при первом исследовании методом ТАБ диагноз удалось поставить только в 75 % случаев (табл. 3).

При рассмотрении эффективности метода тонкоигольной аспирацион-ной биопсии молочной железы представляется, что этот метод прост, малотравматичен для животного, обладает достаточно высокой степенью достоверности и может быть применен неоднократно у одного и того же больного животного. Цитологическое исследование пунктатов позволяет выявить не только доброкачественные, но и злокачественные опухоли, определить степень дифференцировки злокачественного новообразования, а также дифференцировать неопухолевые процессы.

Цитологическое исследование пунктатов молочной железы имеет особое значение в тех случаях, когда результаты клинического исследования сомнительны, или в случаях скрытого течения рака. Наличие комплексов из клеток железистого эпителия с интенсивно окрашенными ядрами, а также крупных клеток вытянуто-овальной формы с базофильной цитоплазмой настораживает. В таких случаях необходим повторный цитологический контроль через 1-2 месяца. Нарастание полиморфизма клеток и образование комплексов из них свидетельствует о малигнизации процесса.

Таким образом, цитологическое исследование методом аспирационной биопсии сопоставимо по диагностической значимости с гистологическим методом, но неинвазивно, не требует местной и тем более общей анестезии, проводится очень быстро, являясь методом экспресс-диагностики. Кроме того, данный метод является достаточно недорогостоящим по сравнению с гистологическим.

2.3.3. Цитоморфологическая характеристика цитограмм молочной железы, полученных при интраоперационной биопсии

Материал для срочного цитологического исследования получался с разреза оперативно удаленной ткани, осадка смыва с операционной раны, инструментария во время операции или после операции. Готовились мазки, мазки-отпечатки или соскобы. Срочная диагностика по соскобам и мазкам-отпечаткам методом комплексного макроскопического и цитологического исследования осуществлялась на операционном материале. Заключался в соче-

тайном макроскопическом изучении опухоли, разрезанной на несколько пластин, и отбора материала из участков, наиболее полно характеризующих патологический процесс или подозрительных в отношении малигнизации. Использование цитологического метода при срочной диагностике опухолей молочной железы хорошо помогает в комплексном цитологическом исследовании. Преимуществом его являются высокие результаты диагностики, особенно при затруднительном предварительном обследовании животного. Учитывается быстрота приготовления препарата, отсутствие риска израсходования ткани, возможность изучения патологии молочной железы на клеточном уровне в различных положениях и проекциях как изолированных клеток, так и их комплексов.

Количество диагнозов, поставленных при интраоперационном исследовании с применением комплексного цитологического метода составило 367 случаев. Данные интраоперационного цитологического исследования представлены в таблице 4.

Таблица 4

Количество диагнозов, поставленных методом интраоперационного

цитологического исследования (ИЦИ)

Характер заболевания ЩИ Количество диагнозов, поставленных ИЦИ и подтвержденных гистологическим методом

гол. %

Доброкачественные дисплазии 82 80 97,6

Доброкачественные опухоли 27 23 85,2

Раки 211 210 99,5

Из таблицы можно определить, что срочное цитологическое исследование позволяет с высоким процентом достоверности поставить правильный диагноз, подтвержденный гистологическим методом. Вместе с тем, очевидны ограничения метода, он может быть использован только при оперативном вмешательстве.

2.3.4. Характеристика комплексного цитологического метода исследования животного и его преимущества

С целью выявления диагностической ценности и достоверности цитологического метода, в зависимости от способа получения материала от собак, больных раком молочной железы, было проведено комплексное цитологическое обследование, которое включало в себя исследование мазков-отпечатков с эрозированной поверхности околососковой зоны или выделений из соска молочной железы; исследование пунктата (при необходимости неоднократно), взятого до проведения операции; исследование мазка-отпечатка, взятого во время проведения операции; исследование соскоба с послеоперационного рубца; исследование пунктатов лимфатических узлов, а также гистологическая верификация цитологического заключения. То есть неоднократное исследование материала у одного и того же больного животного позволяет достоверно и точно выставить диагноз и определить правильную тактику ведения больного животного (табл. 5).

Таблица 5

Информативность различных цитологических методов исследования

Характер заболевания Методы цитологического исследования, достоверные диагнозы, %

Выделения из соска ТАБ ИЦИ Комплексное цитологическое исследование

Доброкачественные дисплазии 80,7 94,5 97,6 100

Доброкачественные опухоли 66,6 91,6 85,2 99,6

Раки 79,2 75 99,5 100

Из таблицы видно, что при обследовании одного животного последовательно предложенными методами цитологического исследования возможно добиться высокой результативности. Информативность и достоверность метода комплексного исследования при постановке диагноза на злокачественные заболевания приближается к 100 %.

Таким образом, метод комплексной цитологической диагностики опухоли молочной железы у собак позволяет повысить диагностическую значимость и увеличить процент выставления точного цитологического заключения.

2.4. Цитологическая диагностика рака молочной железы

Приведена цитологическая картина клинико-морфологических форм рака молочной железы с описанием характерных особенностей, позволяющих осуществлять дифференциальную диагностику различных клинико-морфологических форм злокачественных новообразований.

2.4.1. Морфологическая характеристика рака молочной железы по данным цитологического исследования

В настоящей работе использовалась цитологическая классификация различных патологических состояний молочной железы, разработанная с учетом Международных гистологических классификаций опухолей молочной железы (ВОЗ 1982), рекомендаций проблемной комиссии по морфологии опухолей АМН РФ, цитологической классификации опухолей в ряде руководств по морфологической диагностике опухолей человека. В зависимости от степени дифференцировки клеток паренхимы опухоли, ее гистологической формы и особенностей гистогенеза в цитологической практике мы различали: низко-дифференцированные, умереннодифференцированные, высокодифференциро-ванные и недифференцированные раки. Вопрос об инфильтрирующем или не-инфильтрирующем характере рака может быть решен только гистологическим исследованием. В зависимости от гистологической формы опухоли и с учетом степени дифференцировки клеток паренхимы различают: солидные, фиброзные, скиррозные, медуллярные, папиллярные раки. А также дольковые, плоскоклеточные, слизистые, апокринные раки. Сюда же относятся аденокарцино-мы и цистаденокарциномы различной степени дифференцировки, рак Педже-та, саркомы, метастатические опухоли.

Повторные пункции давали возможность выставить цитологическое заключение о наличии патологических процессов в молочной железе больного животного.

При развитых формах рака, в случае правильно выполненной пункции, цитологическая диагностика рака молочной железы не вызывает затруднений. Иногда при цитологическом исследовании пункгатов можно выявить рак в

случаях неясной клинической картины или тогда, когда рак вообще не подозревается.

2.4.2. Цитологическая диагностика метастатических поражений лимфатических узлов

Дифференциальная диагностика поражений лимфатических узлов представляет определенные трудности. Использование цитологического исследования пунктатов, полученных тонкой иглой из опухолевидно-измененных лимфатических узлов, позволяет правильно разобраться в трудных для дифференциальной диагностики случаях.

Клеточная картина, которая позволяет установить диагноз метастаза рака молочной железы, представлена в иллюстрациях. Метастазы молочной железы во многом зависят от гистологической формы опухоли. По мере роста опухоли происходит постепенное замещение ткани лимфатического узла на злокачественное новообразование. Тогда под микроскопом определяется только метастаз. Можно определить наличие метастаза рака молочной железы, исходящего из различных гистологических форм. В тех случаях, когда опухолевые клетки сохраняют сходство с элементами первичного очага, есть возможность установить детальный патоморфологический диагноз.

Метод цитологического исследования помогает не только распознать метастатическое поражение лимфатического узла злокачественным новообразованием, но и определить, по данным клеточного состава и по расположению клеток, орган, из опухоли которого исходит метастаз. Это имеет чрезвычайно важное значение при отсутствии клинически выявляемого первичного очага злокачественного новообразования.

4. ВЫВОДЫ

1. У собак в условиях Ростовской области доброкачественные дисплазии составляют 51,0 %, доброкачественные опухоли - 20,5 %, рак - 20,5 %, метастатические опухоли - 7,0%, саркомы - 0,5% от всех патологий молочной железы.

2. Пик заболеваемости раком молочной железы у собак приходится на 8-10 лет (29,1 %), в возрасте 12-15 лет происходит резкое снижение заболеваемости (6,0 %), у животных старше 15 лет рак молочной железы встречается только у 1,7 %.

3. При постановке диагноза на доброкачественные опухоли молочной железы информативность метода цитологического исследования выделений из соска составила 66,6 %, метода тонкоигольной биопсии - 91,6 %, инграопера-ционного цитологического метода - 85,2 %, комплексного цитологического метода исследования - 99,6 %.

4. При постановке диагноза на рак молочной железы информативность метода цитологического исследования выделений из соска составила 79,2 %, метода тонкоигольной биопсии - 75 %, интраоперационного цитологического метода - 99,5 %, комплексного цитологического метода исследования - 100 %.

5. В зависимости от степени дифференцировки клеток паренхимы опухоли в цитологической практике целесообразно различать: низкодифференциро-ванные, умереннодифференцированные, высокодифференцированные и недифференцированные раки молочной железы у собак.

6. На основании особенностей клеточных структур, распределения клеток в препарате, характера структур клеточных групп и межклеточного вещества целесообразно выделять солидные, фиброзные, скиррозные, медуллярные, папиллярные, дольковые, слизистые, апокринные раки, а также саркомы.

7. Рекомендованный комплексный метод цитологического исследования с обязательным установлением клинико-морфологических форм рака позволяет увеличить информативность и достоверность метода комплексного исследо-

вания при постановке диагноза на злокачественные заболевания до 100%, что позволяет проводить раннее выявление рака молочной железы, назначать адекватное лечение и улучшать прогноз при злокачественных заболеваниях молочной железы у собак.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Представленные цитологические особенности различных форм рака позволяют при цитологической диагностике и постановке диагноза указывать на клинико-морфологическую форму рака с указанием степени дифференци-ровки.

2. Для квалифицированной своевременной помощи животным с различными патологиями молочной железы предлагается использовать метод комплексной цитологической диагностики.

3. Материалы исследования могут использоваться в учебном процессе при трактовке различных форм злокачественных новообразований молочной железы.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Герасименко И.И. Медико-экологические проблемы возникновения злокачественных новообразований кожи в шахтерских регионах /И.И. Герасименко, Н.С. Проскура // Новости клинической цитологии России. Журнал клинической и практической цитологии. - М., 1998. - Т. 2, № 3-4. - С. 124-125.

2. Герасименко И.И. Некоторые проблемы возникновения злокачественных образований кожи / И.И. Герасименко, Н.С. Проскура // Здравоохранению дона - 80 лет. Материалы научно-практической конференции, посвященной 80-летию здравоохранения Российской Федерации. - Ростов-на-Дону, 1998. - С. 223-224

3. Герасименко И.И. Клиническая цитология в ветеринарной практике мелких домашних животных (методические рекомендации) / И.И. Герасименко, С.Н. Карташов, А.И. Бутенков, Е.В. Карташова. - Новочеркасск: ЮРГТУ, 2006. - 62 с.

4. Герасименко И.И. Возможности цитологического метода исследования в диагностике рака молочной железы у собак / И.И. Герасименко, С.Н. Карташов // Вестник Саратовского госагроуниверситета им. Н.И. Вавилова. -2008. - № 5. - С. 22-24.

5. Герасименко И.И. Возможности цитологического метода в предоперационной диагностике рака молочной железы у собак / И.И. Герасименко А.П. Разин, С.Н. Карташов, A.M. Ермаков, Е.П. Кульпинова // Ветеринария Кубани. - 2008. - № 2. - С. 30-32

6. Герасименко И.И. Влияние морфологических особенностей рака молочной железы у собак на выживаемость / И.И. Герасименко, С.Н. Карташов// Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития. Материалы VIII Всеросс. науч.-практич. конф. - Саратов, 2008. - С. 144-147.

7. Герасименко И.И. Особенности течения рака молочной железы у собак в зависимости от морфологической характеристики/ И.И. Герасименко // Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития. Материалы VIII Всеросс. науч.-практич. конф. - Саратов, 2008. - С.147-149.

8. Герасименко И.И. Особенности течения рака молочной железы у собак в возрасте до пяти лет/ И.И.Герасименко, С.Н. Карташов// Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития. Материалы VIH Всеросс. науч.-практич. конф. - Саратов, 2008. - С.149-151.

9. Герасименко И.И. Характеристика разных вариантов рака молочной железы у собак/ И.И. Герасименко// Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития. Материалы VIII Всеросс. науч.-практич. конф. - Саратов, 2008. - С.151-152.

10. Герасименко И.И. Фоновые процессы при инфильтрирующем раке молочной железы/ И.И. Герасименко// Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития. Материалы VIII Всеросс. науч.-практич. конф, - Саратов, 2008.- С. 152-154.

11. Герасименко И.И. Морфологическая диагностика рака молочной железы у собак/ И.И. Герасименко// Материалы XVI Московского международного конгресса по болезням мелких домашних животных. - М., 2008 -С. 42-43.

12. Карташов С.Н. Продолжительность жизни собак с разными формами рака молочной железы/ С.Н. Карташов, И.И. Герасименко// Проблемы, задачи и пути научного обеспечения приоритетного национального проекта «Развитие АПК»». Материалы Всеросс. науч.-практич. конф. - Новочеркасск, 2008. - С.149-152.

13. Герасименко И.И. Рак молочной железы у собак разного возраста/ И.И. Герасименко// Проблемы, задачи и пути научного обеспечения приоритетного национального проекта «Развитие АПК». Материалы Всеросс. науч.-практич. конф. - Новочеркасск, 2008. - С.152-154.

14. Герасименко И.И. Морфофункциональная характеристика рака молочной железы у собак/ И.И. Герасименко// Проблемы, задачи и пути научного обеспечения приоритетного национального проекта «Развитие АПК». Материалы Всеросс. науч.-практич. конф. - Новочеркасск, 2008. - С.154-155.

ИД №06457 от 19.12.01 г. Издательство ЮРГУЭС Подписано в печать 08.10.2008 г. Формат бумаги 60к84/16. Усд. пл. 1,2. Тираж 150 экз. Заказ № 432.

ПЛД №65-175 от 05.11.99 г. Типография Издательства ЮРГУЭС 346500, г. Шахты, Ростовская обл., ул. Шевченко, 147

Актуальность темы исследования. Среди злокачественных новообразований животных, особенно, собак рак молочной железы,является одной из наиболее распространенных патологий. Плохой прогноз и высокая смертность больных раком молочной железы животных определяется поздней его диагностикой и отсутствием онкологической* настороженности при выявлении фоновых процессов. Ежегодный прирост заболеваемости животных от рака молочной железы, опережающий эти показатели по сравнению с другими опухолями, выдвигает проблему борьбы с этим заболеванием на ведущее место. Вследствие высокой частоты поражения молочной железы, заболевание чаще наблюдается у самок. Наибольшее число патологий молочной железы, по мнению некоторых авторов, приходится на возраст 6-9 лет. Раннее выявление злокачественного новообразования, предраковых изменений, а также групп животных повышенного риска с применением цитологического метода исследования позволит снизить выявление запущенных форм рака молочной железы у животных.

В последние годы у ветеринарных врачей все чаще возникают трудности дифференциальной диагностики рака и других заболеваний молочной железы у собак. Для правильного выбора метода лечения, более необходимой становится морфологическая верификация диагноза, поэтому усилия ветеринарных врачей должны быть направлены на совершенствование методов, позволяющих получить материал для гистологического и цитологического исследования

За последние годы наблюдается рост заболеваемости собак раком молочной железы, поэтому объяснимо пристальное внимание к этой проблеме. Тем не менее, более половины хозяев обращаются с запущенными формами заболевания у своих питомцев, что объясняется двумя причинами: ветеринарной и социально-психологической. Последняя из них заключается в простом неверии в лечение, страхе перед неудачной операцией и, как следствие, позднем обращении к специалисту. Поэтому основной задачей, наряду с поисками путей первичной профилактики- является исследование процесса канцерогенеза в зависимости от пола и возраста и разработка способа раннего выявления рака молочной железы у собак.

Цитологический метод дает возможность отслеживать изменения на: клеточном: уровне, которые могут привести к возникновению рака молочной железы, следить за течением патологического процесса в: предоперационном, операционном и послеоперационном периодах. Данный метод позволяет исследовать выделения из соска, пунктаты опухоли, соскобы и мазки- отпечатки с разреза: опухоли* а также соскобы и пунктаты из послеоперационных рубцов или лимфатических узлов.

Цель исследования: усовершенствовать метод цитологического исследования опухолей молочной1 железы у собак.

Задачи исследования:

1. Изучить структуру и распространение-патологии молочной железы у собак в Ростовской области.

2. Выяснить диагностическую ценность. ш сопоставимость различных методов цитологического исследования новообразований молочной' железы у собак

3. Определить преимущества и недостатки различных методов цитологического, исследования;

4. Установить основные цитологические особенности различных клинико-морфологических форм рака молочной железы у собак.

5. Выяснить основные цитологические особенности диагностики метастатических поражений лимфатических узлов:

6. Выяснить диагностическую ценность метода комплексной цитологической диагностики опухолей молочной железы у собак.

Научная новизна работы. В результате проведенной работы предложен метод комплексного цитологического исследования опухолей молочной железы у собак, который включает в себя микроскопирование мазков-отпечатков с эрозированной поверхности; исследование выделений из соска; пунктатов, полученных методом тонкоигольной биопсии до операции; исследование мазков-отпечатков во время проведения операции; микроскопирование соскобов из послеоперационных рубцов; исследование пунктатов лимфатических узлов. Впервые в ветеринарной практике изучена цитологическая картина клинико-морфологических форм рака молочной железы- у собак, установлены дифференциально-диагностические особенности различных инфильтративных процессов в молочной железе.

Теоретическая и практическая значимость. Полученные на большом цитологическом материале результаты позволяют рекомендовать комплексный метод цитологического исследования- больного животного для внедрения в практику, так как он позволяет точно ставить диагноз. С использованием комплексного метода описаны цитологические картины при доброкачественных процессах, воспалительных болезнях, раке молочной железы и метастазах у собак. Использование комплекса цитологических методов позволяет распознавать злокачественное новообразование на ранних стадиях развития, дает возможность для своевременного оперативного, лучевого лечения и гормонотерапии. Осуществление цитологического контроля с оценкой результатов лечения позволяет констатировать изменения в молочной железе в динамике, а также улучшать прогноз заболеваний. Результаты исследований могут быть использованы в ветеринарных клиниках, а также при написании учебных пособий в области клинической цитологии.

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены и одобрены на заседаниях ученого совета ГНУ СКЗНИВИ; на Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы, задачи и пути научного обеспечения, приоритетного национального проекта «Развитие АПК»» (г.Новочеркасск, 2008), на VIII. Всероссийской научно-практической конференции- «Современные проблемы и перспективы развития» (г.Саратов,

2008), на XVI Московском международном конгрессе по болезням мелких домашних животных (г. Москва, 2008).

Внедрение результатов исследований. Разработанные практические предложения используются в практической работе городских станций по борьбе с больными животными Ростовской области, в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий на кафедре внутренних незаразных болезней Донского государственного аграрного университета. По результатам исследований опубликованы методические рекомендации.

Публикации. По материалам представленной к защите диссертации опубликовано 14 научных работ, в том числе 1 из списка изданий, рекомендованных ВАК.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

Изучение цитологической картины позволяет установить различные клинико-морфологические формы рака молочной железы собак.

Комплексный цитологический метод исследования молочной железы позволяет увеличить информативность, достоверность и практическое значение цитологического исследования патологий молочной железьг собак.

Структура и-объем работы. Диссертация изложена на 149 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов, предложений для практики и списка^ литературы, включающего 229 источников, в том числе 135 на иностранных языках. Диссертация содержит 9 таблиц и иллюстрирована 83 рисунками.

4. ВЫВОДЫ

1. У собак в условиях Ростовской области доброкачественные дис-плазии составляют 51,0%, доброкачественные опухоли - 20,5%, рак - 20,5%, метастатические опухоли - 7,0%, саркомы - 0,5% от всех патологий молочной железы.

2. Пик заболеваемости раком молочной железы у собак приходится на 8-10 - лет (29,1%), в возрасте 12-15 лет происходит резкое снижение заболеваемости (6,0%), у животных старше 15 лет рак молочной железы встречается только у 1,7%.

3. При постановке диагноза на доброкачественные опухоли молочной железы информативность метода цитологического исследования выделений из соска составила 66,6 %, метода тонкоигольной биопсии 91,6 %, ин-траоперационного цитологического метода 85,2 %, комплексного цитологического метода исследования 99,6 %.

4. При постановке диагноза на рак молочной железы информативность метода цитологического исследования выделений из соска составила 79,2 %, метода тонкоигольной биопсии 75 %, интраоперационного цитологического метода 99,5 %, комплексного цитологического метода исследования 100 %.

5. В зависимости от степени дифференцировки клеток паренхимы опухоли, в цитологической практике целесообразно различать: низкодиффе-ренцированные, умереннодифференцированные, высокодифференцирован-ные и недифференцированные раки молочной железы у собак.

6. На основании особенностей клеточных структур, распределения клеток в препарате, характера структур клеточных групп и межклеточного вещества целесообразно выделять солидные, фиброзные, скиррозные, медуллярные, папиллярные, дольковые, слизистые, апокринные раки, а также саркомы.

7. Рекомендованный комплексный метод цитологического исследования с обязательным установлением клинико-морфологических форм рака позволяет увеличить информативность и достоверность метода комплексного исследования при постановке диагноза на злокачественные заболевания до 100%, что позволяет проводить раннее выявление рак молочной железы, назначать адекватное лечение и улучшать прогноз при злокачественных заболеваниях молочной железы у собак.

5.ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Представленные цитологические особенности различных форм рака позволяют при цитологической диагностике и постановке диагноза указывать на клинико-морфологическую форму рака с указанием степени диффе-ренцировки.

2. Для квалифицированной своевременной помощи животным с различными патологиями молочной железы предлагается использовать метод комплексной цитологической диагностики.

3. Материалы исследования могут использоваться в учебном процессе при трактовке различных форм злокачественных новообразований молочной железы.

5. Заключение

Возникновению и развитию рака молочной железы предшествуют структурные изменения эпителиального слоя, который морфологически характеризуется как пролиферация, дисплазия и преинвазивный рак. Изучению этих предраковых процессов на клеточном уровне посвящены многие исследования, результаты которых в значительной степени отличаются друг от друга. Цитологически, при пролиферативных процессах и дисплазиях, в эпителии молочной железы появляются клетки с признаками атипии. В зависимости от глубины поражения различают простую пролиферацию, выраженную пролиферацию, пролиферацию эпителия по типу предрака, а также дис-плазию легкой, средней и тяжелой степени. Или слабую, умеренную и выраженную дисплазии. Преинвазивный рак характеризуется изменениями в эпителиальных клетках, свойственных инвазивному раку. Цитологическое определение предракового поражения эпителия молочной железы основывается на степени атипии клеток, находящихся в препарате, а также критериев злокачественности клеток (И.И. Лазарев с соавт., 2001).

В* настоящее время рак молочной железы рассматривается, как хроническое заболевание и подходы к нему несколько изменились.

Не подлежит сомнению, что прогресс в лечении рака молочной железы лежит, прежде всего, в своевременности диагностики, так как результаты терапии его определяются, главным образом, степенью местного и регионарного распространения опухолевого процесса. Это стало особенно очевидно после новых методик лучевого лечения, новейших схем дополнительной хи-мио- и гормонотерапии, иммунотерапии этих опухолей.

Поэтому, основной задачей наряду с поисками путей первичной профилактики, является раннее выявление рака молочной железы у со-бак.Преинвазивные и инвазивные формы рака имеют тесную патогенетическую и гистогенетическую связь с предшествующими и существующими предраковыми изменениями (дисгормональными гиперплазиями, фиброаде-номатозом и т.п.).

Если учесть, что в настоящее время в ветеринарные клиники поступает лишь 10-20% собак, больных раком молочной железы 1 стадии, обнаружение начальных форм его имеет огромное значение в проблеме ранней диагностики, что является существенным сдвигом в сторону более своевременного выявления и успешного лечения этих опухолей. Плохой же прогноз и высокая смертность обычно определяются поздней ее диагностикой и отсутствием онкологической настороженности при выявлении фоновых процессов.

В связи с этим, большое значение приобретает четкая дифференциальная диагностика клинических и морфологических проявлений доброкачественных и злокачественных вариантов предраковых состояний, а также выделение и описание характерных признаков возникновения и начала развития злокачественных опухолей.

Потенциально опасными по трансформированию в злокачественные опухоли в настоящее время, бесспорно, являются дисгормональные гиперплазии (фиброаденомы, диффузные фиброаденоматозы). Фиброаденома' превращается в рак в 18-51%.случаев.

Своевременное выявление характерных клинических, гистологических цитологических признаков злокачественных новообразований, с проведением профилактического адекватного лечебного воздействия предупреждает возможность возникновения рака молочной железы у собак.

Известно, что быстрая и качественная диагностика обеспечивает успех в лечении заболеваний молочной железы животных. Во всем мире продолжается разработка эффективных и экономичных диагностических методов, средств и оборудования, в том числе и в цитологии. Цитологическое исследование биологических жидкостей (выпотных, кистозных и других) имеет большую диагностическую ценность, так как позволяет определить характер процесса (воспалительный, доброкачественный, злокачественный), иногда сделать предположение о локализации первичного очага опухолевого поражения (З.Ф: Климанова, З.В. Гольберт,2002). Очень важна дифференциальная диагностика опухолей по клеточному составу серозных жидкостей с использованием классических цитологических методик и современных иммуноци-тохимических подходов (В.А. Липова, В.А. Котов, 2003). Клеточный состав выпотов при метастазах рака молочной железы чрезвычайно разнообразен вследствие многообразия гистологических форм опухолей.

При метастазах в жидкости могут содержаться крупные изолированные опухолевые клетки, которые складываются в комплексы, в редких случаях выпоты содержат мелкие клетки, лежащие разобщенно и цепочками. В; ряде случаев используется иммуноцитохимия. Клетки рака дают положительную реакцию с НЕА-125, Sam-2yl0, Leu-M-1, CD-I5, MLF-DR, CA-15, Cathepsin D (В.А. Котов, В.А. Липова, 2003).

Рак молочной железы является системным заболеванием, уже на ранних стадиях связанным с нарушениями состояния иммунной системы. Прогрессирующий рост опухоли сопряжен с нарастанием сдвигов клеточно-опосредованного и гуморального, иммунитета, с превалированием иммуноде-прессирующих механизмов: с активацией клеток - супрессоров, повышением уровня блокирующих факторов в сыворотке крови, угнетением эндокринной функции тимуса, усилением глюкокортикоидной функции коркового вещества надпочечников (Дж.ПлейферД998).

Информативность метода во многом зависит от правильной методики получения материала и учета данных комплексного обследования больного. Тонкоигольная аспирационная; биопсия (ТАБ) при диагностике рака, молочной железы является достаточно высоко достоверным^ и эффективным' методом исследования. Этот метод имеет ряд преимуществ по сравнению с биопсией. Пункция может быть проведена в амбулаторных условиях, не травматична и не дает осложнений. Материал для цитологического исследования может быть получен неоднократно, обработка его достаточно проста. Этот метод объективен, достоверен, легко доступен.

Возможности цитологической-диагностики заболеваний молочной железы при интраоперационной экспресс - диагностике в настоящее время являются большим подспорьем клиницистам при хирургическом лечении.

Происходит не только дополнительное исследование больного животного, уточнение диагноза в случае его предположения, но и постановка диагноза, когда он не был выставлен в результате неполного набора цитологических критериев для установления патологического процесса.

Таким образом, результаты цитологического исследования соскобов во время срочного интраоперационного исследования, срочного гистологического исследования, а также окончательного гистологического диагноза дают клиницисту весь комплекс морфологического исследования и выбора дальнейшей тактики ведения больного животного.

Основное значение приобретает четкая дифференциальная диагностика клинических и морфологических проявлений доброкачественных и предопу-холевых процессов в молочной железе, а также выделение и описание характерных признаков возникновения и начала развития злокачественных изменений в молочной железе собак. Своевременное выявление характерных клинических, гистологических и цитологических признаков новообразования с проведением профилактического- адекватного лечебного воздействия предупреждает возможность возникновения рака молочной железы.

Большую актуальность имеет проблема ранней диагностики злокачественных новообразований молочной железы, особенно начальные этапы развития, когда еще можно вылечить больное животное. Возникновение и развитие рака молочной железы имеет свои возрастные особенности. Возраст создает определенный риск в возникновении рака молочной железы(В. Мае Malvón е. А.,2000).

Факторы риска заболеваемости раком у собак с пролиферативными процессами в молочных железах различны в зависимости от возраста, когда изменения начинаются на клеточном уровне, и исход заболевания зависит от иммунологического, психологического и этиологического статуса. (W.D. Dupont, D.L. Page, 2003)

Важным аспектом лечения рака молочной железы является обычно проводимое удаление регионарных лимфатических узлов. Имеются разные мнения о роли регионарных лимфатических узлов при развитии рака молочных желез. С помощью исследования активности лимфоцитов in vitro (торможение миграции лейкоцитов в присутствии ассоциированных с опухолью антигенов и др.) показано, что функциональная активность лимфоцитов регионарных лимфатических узлов без метастазов значительно выше, чем клеток периферической крови (H.H. Александров с соавт., 2001). Это различие особенно выражено в реакциях на опухолевые антигены. На основании этого R. Ellies и соавторы (2003) рекомендуют при I стадии рака молочной железы проводить лишь мастэктомию без удаления регионарных лимфатических узлов.

Поиск информативных маркеров рака молочной железы пока не завершается разработкой метода ранней специфической диагностики заболевания. Однако определение некоторых из них в пораженных тканях гистохимическими методами позволяет выявить даже единичную опухолевую клетку, что невозможно* при. применении обычных исследований. Для каждой больной собаки, можно подобрать индивидуально комплекс маркеров, который позволил бы объективизировать оценку эффективности лечения, своевременно сигнализировал бы о развитии рецидивов и метастазов (Гриневич Ю.А., Каменец Л.Я., Билынский Б.Т., Лобода В. И., 2000).

С большими надеждами связаны исследования по разработке методов специфической и неспецифической, активной и пассивной иммунотерапии. Данные литературы последних лет подтвердили положение,, выдвинутое. Ж. Матэ о том, что иммунотерапия может быть эффективна для больных собак, у которых удалена основная масса опухолевых клеток. Применение неспецифической активной иммунотерапии у больных раком молочной железы позволяет не только улучшить непосредственные результаты лечения,.но и увеличить продолжительность безрецидивного периода и выживаемость больных животных, подвергшихся'радикальному лечению. Это является основанием для более широкого использования и рационального комбинирования средств, повышающих функциональную активность им-ммунной системы.(Г.К. Закенфельд,2002).

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материал и методы исследований

Работа выполнена' в лаборатории функциональной диагностики болезней сельскохозяйственных животных ГНУ СКЗНИВИ Россельхозакадемии, на базе ветлечебниц г. Ростова-на-Дону, г. Шахты и г. Таганрога.

В работе использованы статистические данные о поступлении собак с опухолями молочных желез, начиная с января.2003 года по 2007 год, регистрируемые в амбулаторных журналах.

Клинико-зкспериментальная часть выполнялась с середины 2003 г. На всех животных были оформлены истории болезни, отражающие клинический статус каждого больного1 животного, данные лабораторных исследований, сведения о клиническом-течении опухолевой болезни, отдаленные результаты лечения, а также дальнейшую судьбу каждого больного животного.

В историю болезни- заносились сведения, о породе, возрасте, поле, анамнестические данные условий содержания, кормления и др., о начале появления и характере дальнейшего проявления опухолевого роста, о предшествующих болезнях, перенесенных животными.

Особое внимание обращалось на сведения о возможных нарушениях полового цикла, о количестве щенностей, о наличии ложной, беременности; устанавливалось время появления опухолей в связи с щенением и лактацией.

При клиническом осмотре больных животных проводилось общее исследование: определение температуры, частоты пульса, дыхания, учитывалось наличие, снижение или отсутствие аппетита. Определялась локализация опухоли, ее величина, форма, консистенция, связь с окружающей тканью. Устанавливалось наличие первичной-множественности опухоли, метастазов, рецидивов.

Гематологические исследования проводились по общепринятой методике.

Для уточнения и дифференциации опухолей проводились цитологические и патоморфологические исследования в лаборатории ГНУ СКЗНИВИ.

Объектом цитологического исследования служили пунктаты из опухо лей и опухолевидных образований молочных желез; пунктаты регионарных лимфатических узлов; выделения из сосков; соскобы с эрозированных и язвенных поверхностей соска, околососковой зоны: и других участков органа; отпечатки с удаленной,ткани молочной железы и лимфатических узлов.

Диагностическая пункция молочной железы проводилась иглами диаметром не более 1 мм. Для аспирации материалов использовались шприцы емкостью 20 мл. Во всех случаях при пунктировании, больные животные надежно фиксировались. При больших размерах опухоли (5 см и более в диаметре) и различной ее плотности; получались два или три пунктата из разных участков. Выделения, из соска, были получены путем легкого- надавливания! пальцами на область соска и околососковотзоны, а затем;на: ткань молочной; железы с последовательным; переходом от одного сектора к другому. Во всех случаях мазки готовились как из первой капли; так и из всех последующих. Если выделения были обильные и капли различны по цвету, то они помещались на разные стекла, при этом особое внимание акцентировалось на кровянистые и сукровичные выделения;

Отпечатки; и соскобы с эрозий и язв готовились после того, как с поверхности патологического очага осторожно удалялись гноевидные массы, корочки, некротический налет. Отпечатки получались путем прикосновения предметным стеклом к изъязвленному участку. Соскоб был получен путем осторожного поскабливания патологической поверхности деревянным шпателем или краем покровного стекла. Если появлялись капли крови, то получение соскоба прекращалось.

Отпечатки и соскобы с ткани удаленного патологического очага готовились сразу же после операции, путем прижатия; предметного стекла к поверхности свежего разреза; или при поскабливании, ткани покровным предметным стеклом или скальпелем.

Из пунктатов, выделений из сосков, соскобов и отпечатков готовились тонкие мазки. Если полученный пунктат представлял собой жидкость, то она центрифугировалась и мазки готовились из осадка.

Отпечатки с поверхностей опухолей и мазки из пунктатов готовились в первый день приема животных. Полученные отпечатки и мазки высушивались на воздухе, фиксировались и окрашивались. В работе использовались основные методы окраски цитологических препаратов: окраска по Романов-скому-Гимзе и гематоксилин - эозином для мазков; Сухие мазки фиксировались в метиловом спирте 5минут или в смеси Никифорова 15 минут. Затем стекла погружались в рабочий раствор готового красителя Романовского-Гимзе на 15-20 минут, после чего препараты промывались.дистиллированной водой и высушивались. При окраске гематоксилин - эозином мазки фиксировались в смеси равных частей эфира и 96% спирта или в 96% спирте 7-10 минут. Препараты окрашивались в гематоксилине 5 минут, и промывались в проточной воде. 1-2: минуты. Затем стекла окрашивались 1 минуту в 0,3% спиртовом растворе эозина и промывались в проточной воде 1-2 минуты и • высушивались. Еотовые. препараты просматривались под. микроскопом с иммерсионной системой (увеличение 7x90) по 2-5 отпечатков из одной? опухоли.

Цитограммы сопоставлялись с результатами исследований гистологических препаратов. При цитологическом заключении, учитывалась клиническая картина заболевания* и макроскопический характер пунктатов;

В' части случаев было проведено вскрытие трупов павших или умерщвленных больных животных с целью уточнения клинического диагноза, установления наличия или отсутствия метастазов и сопутствующих изменений со стороны отдельных органов.

В случаях хирургического лечения проводилось описание операции: наркоз, местное обезболивание, оперативный доступ и оперативный прием, исход оперативного вмешательства.

Сразу после операции на молочной железе и доставки материала в лабораторию с ткани' удаленного патологического очага готовились соскобы предметным стеклом или скальпелем с поверхности свежего разреза, и мазки- отпечатки либо путем прижатия предметного стекла к поверхности патологического очага, либо путем соскоба с участка ткани другим предметным стеклом или скальпелем.

Материал для срочного цитологического исследования получался с разреза оперативно удаленной ткани, осадка смыва с операционной раны, инструментария, во время операции или после операции. Готовились мазки, мазки- отпечатки» или соскобы. Срочная диагностика по соскобам и мазкам-отпечаткам методом комплексного' макроскопического и цитологического исследования осуществлялась на операционном материале в сочетании с макроскопическим изучением опухоли, разрезанной на несколько пластин из участков, наиболее полно характеризующих патологический процесс или подозрительных- в отношении малигнизации. Острием скальпеля брался соскоб; из которого готовились мазки или брались мазки-отпечатки на предметные стекла. Мазки фиксировались и окрашивались по Романовскому-Гимзе или гематоксилин - эозином. Параллельно проводилось срочное гистологическое исследование.

Взятие материала на срочное цитологическое исследование проводилось одновременно со срочным гистологическим исследованием. Иногда материал брался из 2-3 участков, которые соответственно маркировался, окрашивался по Романовскому - Гимзе или гематоксилин - эозином. Затем проводилось микроскопическое исследование.

Параллельно готовились гистологические препараты. Гистологический метод позволяет определить наличие и установить степень инвазии злокачественного процесса, а цитологический метод позволяет увидеть ранние изменения на клеточном уровне, а также установить степень дифференцировки злокачественного процесса. Таким образом, обе морфологические службы дают более полную информацию о патологическом процессе в молочной железе и помогают в выборе адекватной тактики лечения. После проводки гистологического материала (фиксации, уплотнения, заливки в парафин, резки на микротоме, окраски и заключения в среды) выставляется окончательный гистологический диагноз после срочного исследования, что верифицирует и цитологическое заключение. Расхождение в диагнозах весьма невелико и составляет около 0, 6% от общего количества исследований за год.

2.2. Распространение патологий молочной железы у собак.

В период с 2003 по 2007 годы было проведено 29210 цитологических исследований у 5655 больных собак с различными заболеваниями молочной железы в возрасте от 2 до 16 лет, из них комплексному цитологическому исследованию подвергнуто 367 животных. Из них рак молочной железы был выявлен у 1010 собаки, что составило 17,8% от всех инфильтративных заболеваний молочной железы, доброкачественные дисплазии были выставлены у 2885 больных животных, что составило 51%. Доброкачественные опухоли встречались чаще, чем злокачественные. Они наблюдались у 1160 собак, что от общего числа заболеваний молочной железы у собак составило 20,5%. Воспалительные процессы были обнаружены у 175 животных (3,1%), метастатические опухоли встречались только у 398 животных (7%), а саркомы -у 27 животных, что составило 0,5% от общего количества (табл.1).

Вместе с тем, диагностическая значимость материала, полученного различными методами исследования, неодинакова: Как видно из таблицы, наибольшее число диагнозов было-поставлено по пунктатам. Распределение материала, полученного различными способами, представлено в таблице 1 и на диаграмме (рис.2).