Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.05) на тему:Дифференциальная диагностика и лечение новообразований молочной железы и кожи у мелких непродуктивных животных

На правах рукописи

ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНАЯ ДИАГНОСТИКА И ЛЕЧЕНИЕ НОВООБРАЗОВАНИЙ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ И КОЖИ У МЕЛКИХ НЕПРОДУКТИВНЫХ ЖИВОТНЫХ

16.00.05- ветеринарная хирургия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Санкт-Петербург 2005

Работа выполнена на кафедре внутренних болезней и хирургии ФГОУ ВПО «Ижевская государственная сельскохозяйственная академия».

Научный руководитель: кандидат ветеринарных наук, доцент

Милаев Вячеслав Борисович

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, доцент Суховольский Олег Константинович кандидат ветеринарных наук, профессор Веремей Эдуард Иосифович

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана»

Защита диссертации состоится 16 февраля 2006 г. в 13 часов на заседании диссертационного совета Д 220.059.01. при ФГОУ ВПО «Санкт - Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» по адресу: 196084, г. Санкт - Петербург, ул. Черниговская, д. 5.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины»

Автореферат разослан « , у/ » 2005 г.

/ /

Ученый секретарь диссертационного совета, доцент

Никишина И.В.

¡U2££A_

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. За последние десятилетия интерес к проблемам онкологии значительно возрос. Это обусловлено как непрерывно увеличивающейся в последние десятилетия социальной значимостью заболеваний опухолевой природы, так и появившимися, наконец, обоснованными надеждами на реальный успех в противораковой борьбе.

Высокие показатели смертности от онкологических заболеваний и связанные с этим значительные социально-экономические потери позволяют рассматривать борьбу со злокачественными новообразованиями как государственную проблему.

Злокачественные опухоли являются довольно частой причиной гибели ценных служебных, охотничьих и декоративных собак и кошек (Терехов П.Ф.,1983).

До недавнего времени развитие ветеринарной онкологии тормозилось недостаточным вниманием к проблеме опухолей животных. Это связано с тем, что основное внимание в ветеринарной науке и тем более в онкологии обращали на продуктивных животных, у которых частота опухолевых заболеваний действительно ниже.

У собак и кошек наиболее часто встречаются опухоли молочных желез и кожи, при этом чаще встречаются злокачественные формы (Суховольский O.K., 2002). Как правило, это связано с поздним обращением к ветеринарному специалисту, в период, когда опухоль достигает больших размеров и находится в стадии метастазирования.

Единой причины возникновения опухолей не установлено. В настоящее время большинство ветеринарных онкологов, морфологов и клиницистов считают, что решающее значение имеют факторы окружающей среды, воздействие химических и физических веществ, онкогенных вирусов (Рыбак П.Я., 1959; Новых A.A., 1996; Трошин Е.И., 1997; Ежкова М.С., 1999, Суховольский O.K., 2002; Стекольников A.A., 2003).

В ветеринарной практике хирургический способ лечения является основным. Однако, его эффективность, даже при соблюдении необходимого онкологически обусловленного радикализма, не всегда бывает высокой (Терехов П.Ф, 1983; O'Brien M.G., 1992; Scott D.W. et. at., 1995; Bostock D.E., 1979 и др.).

Благодаря поверхностному расположению новообразования кожи и молочной железы, рано распознаются владельцами животных, но, к сожалению, животных приводят уже с запущенными формами опухолей. Широкая распространенность, поверхностная локализация делают опухоли кожи и молочной железы удобной моделью для апробации новых методов лечения животных с новообразованиями.

Электрохирургия играет в настоящее время крупную роль при терапевтических вмешательствах по поводу злокачественных новообразований, а также имеет большое значение и в гнойной хирургии (Я.М. Брускин, 1937). Диссертационная работа выполнена в рамках производственной программы кафедры внутренних болезней и хирургии ФГОУ ВПО Ижевской государственной сельскохозяйственной академии, имеет регистрационный номер (01.20.03 02043-).

Цель и задачи исследований. Цель наших исследований заключалась в поиске информативных методов дифференциальной диагностики, прогнозирования исходов опухолей молочной железы и кожи у собак и кошек, а также в поиске эффективных методов оперативного лечения.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить задачи:

1) изучить частоту, характер и распространенность опухолей у собак и кошек в Удмуртской Республике с учетом возраста, породы и других данных;

2) произвести анализ диагностической ценности цитологического метода исследования при спонтанных опухолях молочных желез и кожи у собак и кошек;

3) изучить значение иммуногистохимического метода диагностики опухолей и его практическое значение;

4) изучить роль продуктов онкогенов c-yes и с-егВ2 и протеина супрессора опухоли р53 при неопластических поражениях молочных желез у собак и кошек;

5) сравнить эффективность метода лечения больных собак и кошек с опухолями кожи и молочной железы при помощи электроножа ЭН-57М в сочетании с традиционным ножевым способом.

Научная новизна наших исследований заключается в том, что: изучены и дифференцированы опухоли кожи и молочной железы у кошек;

впервые в условиях Удмуртской республики изучены частота, распространенность и морфологические особенности опухолей молочных желез и кожи у собак и кошек;

применен иммуногистохимический метод диагностики опухолей молочной железы и кожи;

предложен и внедрен в широкую клиническую практику метод лечения опухолей молочной железы и кожи с помощью высокочастотного электроножа ЭН-57М в сочетании с ножевым методом лечения.

Практическая значимость работы. Проведенное исследование содержит новое решение проблем в лечении собак с опухолями кожи и молочной железы.

Результаты и рекомендации, полученные на основании клинической апробации и внедрения электрохирургии в терапию опухолей, позволяют существенно улучшить результаты комбинированного лечения.

Предложенные методики станут модельной основой для лечения онкологически больных, ранее считавшихся неоперабельными.

Дополнительный иммуногистохимический метод диагностики позволит разработать соответствующие схемы лечения опухолей.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Результаты изучения частоты и характера опухолей молочной железы и кожи собак и кошек в Удмуртской республике;

2. Результаты исследования значения наличия или отсутствия прогесте-роновых и эстрогеновых рецепторов в опухолевых клетках молочных желез у собак и кошек;

3. Практическое значение иммуногистохимического исследования при различных вариантах опухолей кожи;

4. Способ комбинированного лечения новообразований кожи и молочной железы у собак и кошек электрохирургическим и традиционным ножевым методом.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на ежегодных отчетных научно-практических конференциях факультета ветеринарной медицины ФГОУ ВПО «Ижевская государственная сельскохозяйственная академии».

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ.

Реализация результатов исследований. Результаты исследований внедрены в лечебно-консультационных центрах (отделах) при Ижевской СПБЖ при оперативном лечении онкологических больных собак и кошек, а также в учебный процесс ФГОУ ВПО «Ижевская ГСХА», ФГОУ ВПО «Казанская ГАВМ им. Н.Э. Баумана», ФГОУ ВПО «Ульяновская ГАВМ», ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская ГАВМ», ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ» ФГОУ ВПО «Оренбургский ГАУ», ФГОУ ВПО «Уральская ГАВМ», Витебской ГАВМ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и приложения. Изложена на 155 страницах машинописного текста, иллюстрирована 21 таблицей и 30 рисунками. Список литературы включает 188 источников, в том числе 62 - иностранных авторов.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКИ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнялась с сентября 2001 года по декабрь 2004 года на кафедрах незаразных болезней и радиобиологии, внутренних болезней и хирургии ФГОУ ВПО «Ижевская государственная сельскохозяйственная академия», в

республиканском клиническом онкологическом диспансере, в лаборатории па-тологоанатомического отделения железнодорожной больницы г. Ижевска, гематологической лаборатории поликлиники №3 г. Ижевска.

Под наблюдением находилось 148 собак с опухолями молочной железы и кожи различных пород и возраста, массой тела от 2 до 50 кг, и 123 кошки, принадлежащих жителям Удмуртской Республики.

При выполнении работы использовали статистические данные о поступлении животных с новообразованиями по записям амбулаторных журналов.

На всех животных заводили истории болезни, отражающие как клинический статус каждого животного, данные лабораторных исследований, так и сведения о клиническом течении опухолевой болезни и отдаленные результаты лечения.

При опухолях молочной железы особое внимание уделяли сведениям о возможных нарушениях полового цикла, о количестве щенностей и окотов, о наличии ложных беременностей; устанавливали время появления опухолей в связи с родами и лактацией. При опухолях кожи обращали внимание на предшествующие заболевания кожного покрова, наличие травм. Также при всех опухолевых процессах выясняли наличие или отсутствие новообразований у матерей и других животных из этого же помета. Помимо историй болезни эти данные отражались в регистрационных листках.

При клиническом осмотре больных животных проводили измерение показателей температуры, пульса, частоты дыхательных движений, учитывали наличие, снижение или отсутствие пищевой возбудимости. Определяли локализацию опухоли, ее величину, форму, консистенцию, связь с окружающими тканями. Устанавливали наличие первичной множественности опухоли, метастазов и рецидивов.

Гематологические исследования, которые включали в себя определение количества гемоглобина, эритроцитов и лейкоцитов, выведение лейкограммы, проводили на гематологическом анализаторе АВХ micros 60 ОТ8.

Для уточнения характера опухоли и ее дифференциации проводили цитологическое и патоморфологическое исследования на кафедре внутренних болезней и хирургии ФГОУ ВПО «Ижевская ГСХА» и в патологоанатомическом отделении железнодорожной больницы г. Ижевска.

Объектом цитологического исследования служили пунктаты из опухолей и опухолевидных образований молочной железы и кожи; пунктаты регионарных лимфатических узлов; выделения из сосков; соскобы с эрозированных и язвенных поверхностей опухолей; отпечатки с удаленных тканей и лимфатических узлов.

Диагностическую пункцию тканей проводили тонкими иглами диаметром не более 1 мм. Перед пункцией проводили тщательное пальпаторное исследование органа, намеченного для пункции, операционное поле обрабатывали 0,5% раствором хлоргексидина биглюконата на 70° спирте и 5%-ным спиртовым раствором йода. Для аспирации использовали шприцы емкостью 20 мл. Во всех случая при пунктировании животных надежно фиксировали. При небольшом (до 4 см в диаметре) однородном по консистенции и ограниченном очаге поражения материал получали из его центра путем одного прокола иглой. Для получения пунктата производили насасывательные движения поршнем шприца. Прежде, чем извлечь иглу, отсоединяли шприц. При больших размерах опухоли (более 5 см в диаметре) и различной ее плотности получали 2-3 пунктата из разных участков. При наличии кист, абсцессов или полости распада, их содержимое эвакуировали и, не вынимая иглы, место пункции повторно пальпировали. Если выявляли оставшееся уплотнение, то иглу продвигали в это уплотнение и брали из него пунктат. При пункции лимфатических узлов их надежно фиксировали, а затем концом иглы производили несколько колебательных и вращательных движений.

При опухолях молочной железы выделения из соска получали путем легкого надавливания пальцами на область соска и околососковой зоны, а затем на ткань молочной железы с последовательным переходом от одного сектора к другому. Во всех случаях мазки готовили как из первой капли, так и из после-

дующих. При наличии обильных выделений, а также капель пунктата различного цвета, брали материал на разные стекла, обращая внимание на характер содержимого (наличие крови, гноя и т.д.).

Аналогично проводили пункцию новообразований кожи.

Отпечатки и соскобы с эрозий и язв опухолей молочной железы и кожи готовили после того, как с поверхности патологического очага осторожно удаляли гноевидные массы, корочки засохшего экссудата, некротическое содержимое. Отпечатки получали путем прикосновения предметным стеклом к изъязвленному участку. Соскобы получали осторожным соскабливанием измененной поверхности краем покровного стекла. При появлении капель крови соскоб прекращали.

Отпечатки и соскобы с ткани удаленного патологического очага готовили сразу же после операции, прижимая предметное стекло к поверхности свежего разреза или соскабливая ткань покровным стеклом.

Из пунктатов, выделений, соскобов и отпечатков готовили тонкие мазки.

Отпечатки с поверхностей опухолей и мазки из пунктатов готовили в день приема животного. Полученные отпечатки и мазки высушивали на воздухе, затем фиксировали, окрашивали «лейкодифом 200» и по Романовскому -Гимзе. Просматривали под микроскопом с иммерсионной системой (увеличение 10x100) по 2-5 отпечатков одной опухоли.

Цитограммы сопоставляли с результатами исследований гистопрепара-тов. Во всех случаях при цитологическом заключении учитывали клиническую картину заболевания и макроскопический характер пунктатов.

Всего для гистологического и иммуногистохимического исследований было отобрано 165 опухолей после их удаления оперативным путем. Все случаи были исследованы гистоморфологически. Материал в патоморфологиче-скую лабораторию железнодорожной больницы г. Ижевска доставляли после экстирпации его и фиксации в 10%-ном нейтральном забуференном формалине в течение 1-2 суток. В зависимости от размеров опухоли, брали до 10-15 кусочков новообразования из различных мест размером 0,5x0,5x0,3 см для более

полного представления о структуре и характере опухоли. После фиксации материал промывали под проточной водой в течение 1 часа, затем проводили обезвоживание в спиртах нарастающей концентрации по В.И. Васильевой (1996). Далее проводили уплотнение парафином. Пропитанные парафином кусочки наклеивали на деревянные блоки и изготавливали гистосрезы на санном микротоме.

После депарафинирования проводили окраску гематоксилином и эозином и препараты заключали в канадский кедровый бальзам.

Если встречался материал с окостенением, то предварительно выдерживали его в течение 7 дней в декальцинирующей жидкости, состоящей из 150 мл водопроводной воды, 10 г уксуснокислого натрия, 30 мл формальдегида и 30 мл концентрированной азотной кислоты.

Для иммуногистохимического исследования использовались тканевые срезы из парафиновых блоков толщиной 6-8 мкм. Далее проводили депарафи-нирование и обезвоживание по следующей схеме:

1. помещали стекла с парафиновыми срезами на 10-20 мин. в термостат с

температурой 60°;

2. из термостата быстро переносили стекла в ксилол (2 раза по 3 мин.);

3. помещали в абсолютный этанол (2 раза по 3 мин.);

4. этанол 96° (2 раза по 3 мин.);

5. смывали в воде и переносили в трис-Нс1 буфер (ТБС);

6. далее проводили иммуногистохимическое окрашивание согласно протоколу LSAB.

Большинство новообразований молочной железы верифицировали с помощью световой микроскопии.

В качестве прогностических маркеров рака молочной железы использовали эстрогеновые и прогестероновые рецепторы, маркер пролиферации PCNA, протоонкоген Her-2/neu и р53 - блокатор апаптоза (Gambling R.M., Sagartz J.E., Conto C.J., 1997).

Иммунореактивность первичных антител фирмы DAKO обнаруживали с помощью вторичных антител, конъюгированных с пероксидазной системой, составляющей набор реактивов En Vision™+ System фирмы DAKO.

DAKO EnVision™+System, HPR является двухэтапным иммуногистохи-мическим методом окрашивания. Все реактивы DAKO EnVision™ +System, HPR с AEC выпускаются в готовой форме для использования. Для блокирования любой эндогенной активности препараты инкубировались с блокатором эндогенной пероксидазы на 5-ой минуте. Препараты инкубировали с соответствующим разведенным первичным антителом и затем инкубировали с маркированным полимером с использованием двух следующих друг за другом 30-минутных инкубирований. Окрашивание заканчивалось 5-30-минутным инкубированием с З-амино-9-этипкарбазолом (АЕС)+ субстрат-хромагеном. В каждой процедуре окрашивания были применены контрольные известные позитивные и негативные ткани. Как дополнительный отрицательный контроль использовали неиммунную сыворотку вместо первичных антител. При необходимости использовали дополнительные антитела, имеющиеся в нашем арсенале (моно- и поликлональные антитела фирмы DAKO).

Также проводили прижизненную иммуногистохимическую диагностику эпителиальных мягкотканых опухолей кожи и меланомы.

При иммуногистохимическом исследовании кожи нами использовались цитокератины (ЦКР) простых эпителиев и плоского. Антитела простых эпите-лиев окрашивают опухоли, происходящие из придатков кожи (ЦКР №7, №8), а плоского при плоскоклеточном раке (ЦКР №10 и №14).

При диагностике меланомы использовали маркер НМВ-45. из белков промежуточных филаментов.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Результаты диагностики опухолей молочной железы и кожи у собак и кошек цитологическим методом

Цитологическим исследованиям было подвергнуто 239 собак и 123 кошки со спонтанными опухолями, из них 81 случай опухолей молочной железы и 67 опухолей кожи у собак; 58 опухолей молочной железы и 8 опухолей кожи у кошек.

Анализ сопоставления цитологических и гистологических данных показал, что не все факторы, от которых зависит гистологическая форма рака, могут быть учтены при изучении цитологических препаратов. По пунктату трудно определить инфильтративный или неинфильтративный характер роста; не всегда можно судить о соотношении паренхимы и стромы. Лучшие результаты цитологии по мазкам достигались при окраске «лейкодифом 200».

Анализ состава клеток из опухолей обследованных собак и кошек позволил дифференцировать злокачественные процессы у 105 животных, в том числе рак молочной железы у 70 пациентов. Среди доброкачественных процессов были диагностированы фиброзно-кистозная болезнь в 10 случаях, фиброаденомы в 25 случаях. При опухолях кожи были изучены 16 случаев плоскоклеточного ороговевающего рака, 11 сирингоаденом, 8 базалиом, дерматофибромы и мела-номы. Цитологические исследования опухолевого материала позволяют дифференцировать доброкачественные и злокачественные опухоли. Выявленные цитологические признаки дополняют информацию о морфологии опухоли, а при необходимости с успехом могут быть использованы для экспресс диагностики злокачественного новообразования и назначения соответствующего лечения. Метод цитологического исследования спонтанных опухолей у животных дает возможность правильно оценить характер патологического процесса. Имея самостоятельное значение с гистологическим методом, он способствует совершенствованию диагностики указанных заболеваний.

3.2. Результаты гистологических исследований опухолей молочной железы

и кожи у собак и кошек

Нами был исследован материал хирургически удаленных опухолей молочной железы и кожи от 262 животных. При опухолях молочных желез, как у собак, так и у кошек преобладает смешанный (протоково - дольковый) рак (36% собак и 27% кошек). Дольковый рак был диагностирован у 17 собак (20%), и 13 кошек (22%) Зарегистрированы единичные случаи карциносаркомы и инвазив-ного протокового рака в 6-7 летнем возрасте у собак и в 8-9 летнем возрасте у кошек. Как у собак, так и у кошек при гистологическом исследовании были обнаружены простые аденомы, представленные пролифератами железистых элементов, окруженных массивными соединительнотканными прослойками.

Из новообразований кожи у собак лидирующее положение составляет плоскоклеточный ороговевающий рак (16 собак), а на втором месте - рак сальной железы (12 собак), на третьем месте - базалиома (8 собак). Среди доброкачественных форм встречались сирингоаденома (11 собак), фибромы (6 собак). В двух случаях были выявлены меланомы. У кошек в единичных случаях встречались плоскоклеточный ороговевающий рак и базалиомы (2 кошки), фибромы выявлены в 3 случаях.

3.3.1. Результаты иммуногистохимических исследований на наличие рецепторов прогестерона и эстрогена в опухолях молочной железы

у собак и кошек

Выполненное нами исследование на наличие прогестероновых рецепторов опухолей молочных желез у собак и кошек показало, что во всех случаях доброкачественных опухолей молочных желез обнаруживаются рецепторы к прогестерону. При злокачественных новообразованиях на опухолевых клетках отмечалась слабая положительная иммуногистохимическая реакция против рецепторов прогестерона. В то же время, в некоторых случаях злокачественных новообразований в связи со снижением дифференцировки рецепторы утрачиваются. Этот фактор следует учитывать при назначении в послеоперационном периоде гормональной терапии (табл. 1).

Таблица 1

Количество и гистологические типы исследованных опухолей молочной железы, и наличие рецепторов к прогестерону

Тип опухоли молочной железы Абсолютное число исследованных случаев Наличие рецепторов к прогестерону обнаружено

голов % голов %

Доброкачественные опухоли: 35 25 35 25

Фиброаденома 25 71 25 100

Фиброзно-кистозная болезнь 10 29 10 100

Злокачественные опухоли: 104 75 13 12,5

Инвазивный протоковый рак 70 67 4 5,7

Дольковый рак 25 24 2 8

Карциносаркома 7 9 7 100

Исследованиями установлено наличие рецепторов к эстрогену во всех случаях доброкачественных и злокачественных процессов, что свидетельствует о высокой гормональной зависимости опухолей молочных желез у собак и кошек (табл. 2).

Высокий уровень эстрогенов будет стимулировать развитие опухоли и ее метастазов.

Таким образом, проведенные нами исследования показали, что во всех случаях доброкачественных опухолей молочных желез у собак и кошек обнаруживаются рецепторы к прогестерону, тогда как при злокачественных опухолях отмечалась слабая положительная иммуногистохимическая реакция рецепторов прогестерона на опухолевых клетках.

Таблица 2

Количество и гистологические типы исследованных опухолей молочной железы, и наличие эстрогенных рецепторов

Тип опухоли молочной железы Абсолютное число исследованных случаев Наличие рецепторов к эстрогенам обнаружено

голов % голов %

Доброкачественные опухоли: 35 25 35 75

Фиброаденома 25 71 25 100

Фиброзно-кистозная болезнь 10 29 10 100

Злокачественные опухоли: 104 75 13 25

Инвазивный протоковый рак 70 67 70 100

Дольковый рак 25 24 25 100

Карциносаркома 7 9 7 100

3.3.2. Результаты иммуногистохимического анализа экспрессии продуктов онкогенов с-уев и с- егВ2 и протеина супрессора р53 в опухолях молочных желез у собак и кошек

Экспрессия с-уев определялась в железистом эпителии (33 из 104 опухолей молочных желез). Доброкачественные опухоли были с-уев - отрицательными. Экспрессия с-уев наблюдалась в 27% (33 из 104) злокачественных опухолей.. Положительная иммунореактивность на онкоген с-егВ2 наблюдалась в 27% (33 из 104) изученных опухолей молочных желез. Такой процент окрашивания клеточной мембраны наблюдался исключительно в неопластических клетках. В 27,5% (29/104) злокачественных опухолей, 30 из которых составил инвазивный протоковый рак, были положительными, причем реакция на эстрогены и прогестероны была отрицательной (табл.3).

Таблица 3

Экспрессия продуктов онкогенов с-уев и с-егВ2 и протеина супрессора опухоли р53, выявляемая иммуногистохимическим анализом

Тип опухоли молочной железы % положительных случаев (количество)

с-уев с-егВ-2 р53

Доброкачественные опухоли: 0(0/35) 0(0/35) 0(0/35)

Фиброаденома 0(0/25) 0(0/25) 0(0/25)

Фиброзно-кистозная болезнь 0(0/15) 0(0/10) 0(0/10)

Злокачественные опухоли: 27(33/104) 27,5(29/104) 41(42/104)

Инвазивный протоковый рак 30(21/70) 30(21/70 40(28/70)

Дольковый рак 20(5/25) 1(1/25) 28(7/25)

Карциносаркома 100(7/7) 100(7/7) 100(7/7)

Экспрессия протеина р53 была обнаружена в 41% (42 из 104) исследованных опухолей молочной железы. Фиброаденомы и мастопатии не окрашивались иммуногистохимически ни одним из трех антител.

3.33. Результаты иммуногистохимических исследований при новообразованиях кожи

При иммуногистохимическом анализе опухолей кожи мы выяснили, что большинство из злокачественных новообразований кожи не имеют специфических иммуноморфологических признаков.

Эпителиальные новообразования из плоского эпителия экспрессировапи цитокератины (ЦКР) плоского эпителия (ЦКР 10,14), в данном случае при плоском ороговевающем раке, базалиомах, а эпителиальные образования из придатков (аденогенные - опухоли сальных, потовых желез) экспрессировали цитокератины простых эпителиев (ЦКР 7,8,17,18,19).

В клетках базально-клеточного рака экспрессировапись ЦКР 7,8,17 и группа кератинов супрабазапьных слоев эпидермиса (табл. 4).

Таблица 4

Иммуногисггохимическая диагностика некоторых опухолей кожи

Антитело к: Меланома Злокачественные эпителиальные опухоли кожи Злокачественная фиб-рогистиоцитома

Циокератинам - +++ -

Белку Б100 +++ -/± -

Виментину +++ - +++

Десмину - - -

СЭ68 - - -/±

Актину гладкомы-шечному -/±

НМВ-45 ++/+/± - -

3.4. Результаты хирургического лечения

Лечение животных с опухолями молочной железы и кожи проводили оперативным способом. При этом использовали электронож ЭН - 57М в сочетании с традиционным ножевым методом.

Во всех группах собак каких-либо изменений в общем состоянии животных после операции нами не отмечено.

Анализ результатов гематологических исследований показал наличие достоверных изменений в морфологическом составе крови через 3 дня после операции в обеих группах.

Также нами отмечена сходная динамика гематологических показателей после удаления опухолей скальпелем и при лечении электроножом.

Мы проводили послеоперационное наблюдение за животными в течение года. Среди прооперированных собак (72 головы с опухолями молочной железы и 64 головы с опухолями кожи) и кошек (55 животных с опухолями молочной железы и 5 животных с опухолями кожи) рецидивы возникли у 17 живот-

ных. У прооперированных ножевым способом с гистологической формой про-токово-долькового и долькового рака рецидивы появились у 9 собак и 4 кошек.

Животные с рецидивами, удаление опухолей у которых выполнялось с применением электроножа ЭН 57М, с диагнозом дольковый рак, составили 3 головы (2 кошки и 1 собака). При удалении опухолей кожи только в 1 случае у собаки при гистологической форме злокачественной фиброгистиоцитомы обнаружили метастазы в легкие (по клинике и аускультации). Новообразование удалялось ножевым способом.

4. ВЫВОДЫ

1. В Удмуртской Республике опухоли молочной железы составляют 35%, кожи 23%, а у кошек соответственно 47% и 1% от общего числа новообразований, что диктует настоятельную необходимость совершенствования диагностики неоплазм и лечения больных мелких непродуктивных животных.

2. В молочных железах самок опухоли возникают с неодинаковой частотой: в 1-й и 2-й парах желез они являются редкостью, в 3-й паре встречаются чаще, а в основном поражают 4-ю и 5-ю пары. Опухоли молочных желез характерны для собак и кошек как биологических видов, встречаются почти исключительно у самок, чаще породистых, средний возраст собак при этом составляет около 9 лет, а кошек 10 лет.

3. Опухоли кожи составляют 23% у собак и 1% у кошек от всех хирургических заболеваний и 28% и 7% соответственно от всей онкологической патологии. У кобелей опухоли кожи встречаются чаще, чем у сук (65%).

4. Гистологические исследования дают высокую степень информативности о бластоматозном изменении тканей при неоплазмах, позволяя определять характер атипизма эпителиальных и мягких тканей.

5. Цитологический метод дифференциальной диагностики является простым, доступным и достаточно информативным, позволяющим на начальном этапе обследования животного дифференцировать доброкачественные и злокачественные опухоли, бластоматозные процессы (инкапсулированные абсцессы, ге-

матомы, мастопатии), а также прогнозировать исход заболевания и тактику лечения.

6. Использование иммуногистохимии позволяет верифицировать опухоли, вызывающие затруднение при гистологической диагностике, дает дополнительную информацию о прогнозе заболевания и выборе дополнительных методов лечения. Установленная сверхэкспрессия онкогенов с-уев, с-егВ2 и р53 указывает на высокий злокачественный потенциал опухолей молочных желез, а наличие гормонов позволяет говорить о благоприятном прогнозе при выборе тактики соответствующего (гормонального) лечения.

7. Наиболее эффективным методом лечения при опухолях молочной железы и кожи остается хирургический. При этом предпочтение нужно отдавать расширенной экстирпации новообразований с удалением пораженных лимфоузлов, используя сочетание высокочастотного электроножа с острым рассечением кожи скальпелем.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для раннего выявления новообразований у кошек и собак следует ежегодно подвергать собак онкологической диспансеризации у ветеринарного врача и проводить хирургическое лечение как можно раньше с момента выявления опухоли с использованием высокочастотного электроножа в режиме частота тока 1760 Кгц и мощность 150-200 вт в сочетании с рассечением кожи скальпелем.

2. С целью профилактики неоплазм молочной железы кастрировать сук и кошек до первой или перед второй течкой. Некастрированных сук и кошек вязать с последующим вскармливанием ими щенков и котят.

3. Результаты исследований следует использовать в учебном процессе профильных ВУЗов и факультетов, при чтении лекций практикующим ветеринарным врачам, при написании монографий.

. лА

р-- 4 9$

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Тарасова Е.А. Распространенность и дифференциальная диагностика опухолей молочной железы у собак /В.Б. Милаев, Е.А. Тарасова //Труды региональной научно-практической конференции «Аграрная наука - состояние и проблемы». - Т.1. - Ижевск, 2002 - С. 210.

2. Тарасова Е.А. Опухоли кожи у собак /Е.А. Тарасова, В.Б. Милаев //Сборник трудов научно-практической конференции молодых ученых. «Перспективы развития регионов России в XXI веке». - Ижевск, 2002. - С. 170-171.

3. Тарасова Е.А. Диагностика лимфосарком у собак методом иммуногистохи-мии /Е.А. Тарасова, С.А. Суханов, В.Б. Милаев//Материалы научно-производственной конференции «Эффективность адаптивных технологий» -Ижевск, 2003.-С. 321-322.

4. Тарасова Е.А. Распространенность новообразований у мелких домашних животных Удмуртской республики/Е.А. Тарасова, В.Б. Милаев //Материалы всероссийской научно-практической конференции «Современные проблемы аграрной науки и пути их решения». - Т.1. - Ижевск, 2005. - С. 212-215.

5. Тарасова Е.А. Цитологические исследования при диагностике опухолей /Е.А. Тарасова, В.Б. Милаев//Труды региональной научно-практической конференции «Аграрная наука - состояние и проблемы».-Т.1 .-Ижевск, 2005 - С. 217-219.

6. Тарасова Е.А. Базально-клеточные опухоли кожи у кошек и собак (клиника, патоморфология, лечение) /Е.А. Тарасова, В.Б. Милаев //Материалы всероссийской научно-практической конференции «Современные проблемы аграрной науки и пути их решения». - Т. 1. - Ижевск, 2005. — с.216-221.

Сдано в набор 27.12.05 г. Подписано в печать 29 12 05. Бумага офсетная Гарнитура Times New Roman. Формат 60x84/16 Объем 1 печ.л Тираж 100 экз. Заказ №8172. Издательство ФГОУ ВПО «Ижевская ГСХА» г. Ижевск, ул. Студенческая, 11.

Актуальность темы: Злокачественные новообразования кожи и молочной железы занимают одно из первых мест в структуре онкологической заболеваемости населения Российской Федерации. Методы диагностики и лечения большинства форм этих патологий разработаны достаточно хорошо в гуманитарной медицине, но важной проблемой остается возможность проведения целенаправленной профилактики (Нуров А.У., Гайдарова У.М, Дестенбекова Э.Н., 1991).

Высокие показатели смертности от онкологических заболеваний и связанные с этим значительные социально-экономические потери позволяют рассматривать борьбу со злокачественными новообразованиями как государственную проблему.

Современное состояние ветеринарной онкологии позволяет утверждать, что существуют реальные возможности добиться стойкого излечения или продолжительных ремиссий у большинства онкологически больных животных при условии современного выявления злокачественных опухолей, а также при использовании правильной диагностической и лечебной тактики.

Важным обстоятельством является то, что собаки и кошки по некоторым аспектам жизнедеятельности ближе всего стоят к человеку, а это означает, что клинические проявления основных закономерностей опухолевого процесса у человека и у этих животных в гораздо большей степени характеризуются сходством (Веревкина Т.С., Зубова Н.Н., 1952).

К сожалению, до недавнего времени развитие ветеринарной онкологии тормозилось недостаточным вниманием к проблеме опухолей животных. Это связано с тем, что основное внимание в ветеринарной науке и тем более в онкологии обращали на продуктивных животных, у которых частота опухолевых заболеваний действительно ниже, что, по нашему мнению, связано с относительно небольшим сроком их жизни.

Лишь за последние 40-50 лет интерес к сравнительной патологии новообразований у животных резко возрос. На сегодняшний день по мере развития ветеринарной науки накоплен определенный материал по онкологии домашних животных, в том числе собак и кошек. Причем кошкам нужно уделять все больше внимания, так как их численность резко возрастает, и люди нуждаются в оказании им квалифицированной помощи. Ветеринарный врач, лечащий кошку, зачастую исцеляет дискомфорт ее хозяина.

Примерно 50% всех опухолей являются злокачественными (Filder I.Y., Brodey R.S., 1967; Brodey R.S., Goldohmidt M.H., Roszel Y.R., 1983; Kurzman I.D., Gilbertson S.R., 1986; Баранов С.В., 1991; Суховольский O.K., 1994; Голубева В.А., Пономарьков В.И, 1998; Рылов А.С., Анников В.А., 2000 и др;).

Единой причины возникновения опухолей не установлено. В настоящее время большинство ветеринарных онкологов, морфологов и клиницистов считают, что решающее значение имеют факторы окружающей среды, воздействие химических и физических веществ, онко-генных вирусов (Рыбак П.Я., 1959; Новых А.А., 1996; Трошин Е.И., 1997; Ежкова М.С., 1999, Суховольский O.K., 2002; Стекольников А.Н., 2003).

Несмотря на огромные успехи в области фундаментальных знаний, практическая ветеринарная онкология еще не достигла существенного уменьшения показателей смертности больных потому, что отсутствует реалистическое понимание естественной истории генезиса рака. Организм погибает не столько из-за чрезмерной клеточной пролиферации, сколько вследствие местной инвазии и дистанционного метастазирова-ния.

По данным I.Y. Filder, R.S. Brodey (1974), до 48% животных, подвергнутых лечению, погибают. Или их усыпляют в течение первого года после операции из-за рецидива опухоли или метастазов.

Возрос интерес к проблемам сопоставления опухолей человека и домашних животных, поскольку изучение опухолей домашних животных в качестве «моделей» новообразований человека играет значительную роль в расширении наших знаний о сущности опухолевого процесса.

Все выше перечисленное свидетельствует об актуальности проведения исследований по дифференциальной диагностике опухолей и совершенствованию лечения больных мелких непродуктивных животных.

Диссертационная работа выполнена в рамках плановой научно-производственной программы кафедры внутренних болезней и хирургии ФГОУ ВПО Ижевской государственной сельскохозяйственной академии, имеющей государственный регистрационный номер (01.20.03 02043-).

Цель наших исследований заключалась в поиске информативных методов дифференциальной диагностики, прогнозирования исходов опухолей молочной железы и кожи у собак и кошек, а также в поиске эффективных методов оперативного лечения.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить задачи:

1) изучить частоту, характер и распространенность опухолей у собак и кошек в Удмуртской Республике с учетом возраста, породы и других данных;

2) произвести анализ диагностической ценности цитологического метода исследования при спонтанных опухолях молочных желез и кожи у собак и кошек;

3) изучить значение иммуногистохимического метода диагностики опухолей и его практического значения;

4) изучить роль продуктов онкогенов c-yes и с-егВ2 и протеина супрессо-ра опухоли р53 при неопластических поражениях молочных желез у собак и кошек;

5) сравнить эффективность метода лечения больных собак и кошек с опухолями кожи и молочной железы при помощи электроножа ЭН-57М в сочетании с традиционным ножевым способом.

Научная новизна наших исследований заключается в том, что: изучены и дифференцированы опухоли кожи и молочной железы у кошек; впервые в условиях Удмуртской республики изучены частота, распространенность и морфологические особенности опухолей молочных желез и кожи у собак и кошек; применен иммуногистохимический метод диагностики опухолей молочной железы и кожи; предложен и внедрен в широкую клиническую практику метод лечения опухолей молочной железы и кожи с помощью высокочастотных электроножей ЭН-57М в сочетании с ножевым методом лечения. Практическая значимость.

Проведенное исследование содержит новое решение проблем в лечении собак с опухолями кожи и молочной железы.

Результаты и рекомендации, полученные на основании клинической апробации и внедрения электрохирургии в терапию опухолей, позволяют существенно улучшить результаты комбинированного лечения.

Предложенные методики станут модельной основой для лечения онкологически больных, ранее считавшихся неоперабельными.

Дополнительный иммуногистохимический метод диагностики позволит разработать соответствующие схемы лечения опухолей. Положения на защите.

-результаты изучения частоты и характера опухолей молочной железы и кожи собак и кошек в Удмуртской республике;

-результаты исследования значения наличия или отсутствия про-гестероновых и эстрогеновых рецепторов в опухолевых клетках молочных желез у собак и кошек;

-практическое значение иммуногистохимического исследования при различных вариантах опухолей кожи;

-способ комбинированного лечения новообразований кожи и молочной железы у собак и кошек электрохирургическим и традиционным ножевым методом.

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены и одобрены на ежегодных отчетных научно-практических конференциях факультета ветеринарной медицины Ижевской государственной сельскохозяйственной академии.

Материалы диссертации доложены, обсуждены и одобрены: на Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ.

Внедрения. Результаты исследований внедрены в лечебно-консультационных центрах (отделах) при Ижевской государственной ветеринарной станции при оперативном лечении онкологически больных собак и кошек, а также в учебный процесс ФГОУ ВПО ИжГСХА, Казанской ГАВМ, Ульяновской ГАВМ, Санкт-Петербургской ГАВМ, Саратовского ГАУ.

Структура и объем работы.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и приложения. Изложена на 155 страницах машинописного текста, иллюстрирована 21 таблицей и 30 рисунками. Список литературы включает 188 источников, в том числе 62 - иностранных.

5. Выводы

1. В условиях Удмуртской Республики опухоли молочной железы у собак составляют 35%, кожи 23%, а у кошек соответственно 47% и 1% от общего числа новообразований, что диктует настоятельную необходимость совершенствования диагностики неоплазм и лечения больных мелких непродуктивных животных.

2. В молочных железах самок опухоли возникают с неодинаковой частотой: в 1-й и 2-й парах желез они являются редкостью, в 3-й паре встречаются чаще, а в основном поражают 4-ю и 5-ю пары. Опухоли молочных желез характерны для собак и кошек как биологических видов, встречаются почти исключительно у самок, чаще породистых, средний возраст собак при этом составляет около 9 лет, а кошек 10 лет.

3. Опухоли кожи составляют 23% у собак и 1% у кошек от всех хирургических заболеваний и 28% и 7% соответственно от всей онкологической патологии. У кобелей опухоли кожи встречаются чаще, чем у сук (65%).

4. Гистологические исследования дают высокую степень информативности о бластоматозном изменении тканей при неоплазмах, позволяя определять характер атипизма эпителиальных и мягких тканей.

5. Цитологический метод дифференциальной диагностики является простым, доступным и достаточно информативным, позволяющим при начальном этапе обследования животного дифференцировать доброкачественные и злокачественные опухоли, бластоматозные процессы (инкапсулированные абсцессы, гематомы, мастопатии), а также прогнозировать исход заболевания и тактику лечения.

6. Использование иммуногистохимии позволяет верифицировать опухоли, вызывающие затруднение при гистологической диагностике. Дает дополнительную информацию о прогнозе заболевания и выборе дополнительных методов лечения. Установленная сверхэкспрессия онкогенов c-yes, с-егВ2и р53 указывает на высокий злокачественный потенциал опухолей молочных желез, а наличие гормонов позволяет говорить о благоприятном прогнозе при выборе тактики соответствующего (гормонального) лечения.

7. Наиболее эффективным методом лечения при опухолях молочной железы и кожи остается хирургический. При этом предпочтение нужно отдавать расширенной экстирпации новообразований с удалением пораженных лимфоузлов, используя сочетание высокочастотного электроножа с острым рассечением кожи скальпелем.

5. Практические предложения

1. Для раннего выявления новообразований у кошек и собак следует ежегодно подвергать собак онкологической диспансеризации у ветеринарного врача и проводить хирургическое лечение как можно раньше с момента выявления опухоли с использованием высокочастотного электроножа в режиме частота тока 1760 кгц и мощность 150-200 вт в сочетании с рассечением кожи скальпелем.

2. С целью профилактики неоплазм молочной железы кастрировать сук и кошек до первой или перед второй течкой. Некастрированных сук и кошек вязать с последующим вскармливанием ими щенков.

3. Результаты исследований следует использовать в учебном процессе профильных ВУЗов и факультетов, при чтении лекций практическим ветеринарным врачам, при написании монографий.