Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Сочетанное действие микотоксина Т-2, гексахлорциклогексана и гамма-излучения на организм животных

Б

■« О *» ЛЯ)

На правах рукописи

УЛК 619:616.992.28-084:615.9:^616-001.28/.29:636.1.9

КУПЦОВА КСЕНИЯ ВИКТОРОВНА

■ С0-1ЕТАННОЕ ДЕЙСТВИЕ А1ИК0ТОКСИНА Т-2, ГЕКСЛХЛОРЦИКПОГЕКСАНА И ГАММА-ИЗЛУЧЕНИЯ - НА ОРГАНИЗМ ЖИВОТНЫХ

I6.00.0A - ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

/диссертации на соискание ученой степени \ | кандидата биологических наук

Покров - 1336

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте ветеринарной вирусологии н микробиологии РАСлп.

научный руководитель - доктор биологически:: наук

о ЛкьО^'лиЬ.

Официальное оппоненты:

доктор медицинских наук й.Л.ГОРх&ТО^Л иТп&КК.Т),

кандидат биологических наук о.о.иАК иГл вегерииарноЛ медицин::

п ипот'ехнологпп).

иодуцве учреждение - исероссипскин научно-исследователье;-. институт ветерниараол санитарии, гигиены и окологпп.

¿ацита состоится 1ч н?оня 1^6 г. в /3> часов на засодаг дисс;ртацисжного совета ,С1 во Всероссийском научно-исс;

доватсльском институте вотерипарнои вирусологии и. микробиологии РАСлИ (60X120, г.Гюкров, Владимирской ооласти, Ш&Цд&и).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке БИл^ш.л:..!. Автореферат разослан " ^ " _1-Л6 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат ветеринарных наук

Г.II.Фёдоров

ОЕШ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. -&тсло воздействующих на животных и чело-веха неблагоприятных факторов и веществ различной прирош непрерывно возрастает. Резкое возрастание загрязнения окружающей среды выдвинуло проблему количественной оценки биологических эффектов сочетанного действия факторов разной природы.

Известно, что среди загрязнителей наиболее 'лироко распространены радионуклиды, хлорорганические пестициды, микотоксины. При это:: для реальных ситуаций характерно одновременное воздействие различных факторов и это является более распространенным вариантом, чем изолированное воздействие каждого фактора. Следует отметить, что до сих пор существующие подходы к оценке экологического риска основаны на учете эффектов отдельных фактороз, без оценки возможности индукции нелинейных (синергизм, антагонизм) эффектов. Это обусловлено, главным образом," недостаточной изученностью последствий сочетанного воздействия факторов различной природы.

При изучении эффектов сочетанного действия ванным является выяснение вопроса об условиях модификации каждого фактора: произойдет ли простая суммация эффектов, характерных для каждого действующего фактора, появятся ли новые реакции, будет ли повреждающий эффект существенно усилен или ослаблен. Для практической ветеринарии особую значимость имеют сведения об иммунодепрессив-ном влиянии таких загрязнителей, как пестициды, особенно хлорорганические, микотоксины, радиационные агенты. Угнетение естественной иммунологической реактивности, вызванное факторами физической, химической и биологической природы, способствует возникновению инфекционных болезней среди сельскохозяйственных животных и снижению продуктивности. Применяемые в ветеринарии вакцины на

этом фоне могут сникать сбою активность. Поэтому исследования, посвященные изучению сочетанного воздействия факторов химической, физической и биологической природы на организм животных, являете; актуальной проблемой в биологии вообще и в ветеринарии в частност

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы являете; изучение закономерностей сочетаниего действия микотоксина Т-2, гексахлорциклогексана (ГХЦГ) и ^-излучения на организм животных.

В задачи исследования входило:

- опрзделитьегзпень токсичности микотоксина Т-2, ГХЦГ и пор: жающего действия "/(-излучения при однократном воздействии на белах мышей;

- определить степень поражающего сочетанного однократного воздействия микотоксина Т-2 и ^-излучения на белых мышей;

- изучить влияние однократного сочетанного воздействия микотоксина Т-2 и ^-излучения на кроликов;

- изучить влияние хронического сочетанного воздействия микотоксина Т-2 и ГХЦГ на кроликов;

- изучить формирование и напряженность иммунитета против вирусной геморрагической болезни кроликов (ВГЕК), подвергнутых соче тайному воздействия микотоксина Т-2, ГХЦГ и ^-излучения.

Научная новизна. Впервые:

- изучено биологическое действие на животных однократного сочетанного действия микотоксина Т-2 и ¡^-излучения, хронического сочетанного действия микотоксина Т-2 и ГХЦГ;

- показано, что степень поражающего действия микотоксина 1-1 и ^-излучения на животных зависит от исходного физиологического состояния организма;

- исследованы закономерности развития острого сочетанного воздействия на животных сублетальных и среднелетальных доз мико-

токсина Т-2 и ^-излучения на животных к установлено взаимо-отя-гощаетзо (синзргическое) взаимодействие обоих факторов на организм животных;

- исследовано влияние сочетанного однократного острого воздействия микотоксина Т-2 и ^-излучения и хронического сочетанного воздействия микотоксина Т-2 и ГХЦГ на естественную и специфическую реактивность кроликов.

Теоретическая и практическая значимость. Теоретическая зна-■¡кмость работы состоит в ток, что экспериментально обоснована необходимость разработки физиологического подхода к оценке сочетан--:ого воздействия факторов физической, химической и биологической тоироды на организм животных по клиническим, биохимическим и иммунологическим показателям.

Практическая значимость - на примере сочетанного воздействия Г-2 токсина, ГХЦГ и $ -облучения дана оценка иммунного статуса животных. Иммунодефицитное состояние животных, диагностированное то показателям количества и функциональной активности иммуноком-ютентных клеток венозной крови, не является противопоказанием 1ля проведения специфической профилактики ВГЕК кроликов, выживших юсле острого и хронического воздействия микотоксина Т-2, ГХЦГ [ ^-излучения.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на за-

иту:

- степень и исходы поражения животных связаны с уровнем доз очетанного воздействия микотоксина Т-2, ГХЦГ и ^-излучения и .ависят от исходного физиологического состояния животных;

- для показателей состава и функциональной активности клеток енозной крови в условиях острого сочетанного воздействия на жи-отных микотоксина Т-2 и ^-излучения характерно проявление си-ергических, а в условиях хронического воздействия микотоксина

.7-2 и ГХЦГ - антагонистических эффектов взаимодействия;

- вызванный сочетанным воздействием на кроликов микотокснна Т-2, ГХЦГ и $-излучения иммунодефицит не препятствует у выживших животных формированию напряженного иммунитета после вакцинации против ВГБК.

Апробация работы. Резутьтаты проведенных исследований доложены на научной конференции ВНШЗСГЭ, посвященной 60-летию института (Москва, 1ЭЭ5), Всероссийской научно-практической конференции 17-21 апреля 1935 г., Владимир. Апробация диссертации состоялась на межлаборзторном семинаре Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной вирусологии и микробиологии.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 3 работы.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, изложения результатов, их обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы. Диссертация содержит 137 страниц ^машинописного текста, 5 рисунков, 35 таблиц. Список литературы включает 218 работ, в том числе 65 иностранных.

•■ ; МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

{ Работа выполнена в соответствии с плановой научно-исследовательской тематикой ВНИШВиМ (задание 01.01.03Д), определенной

I

Россельхозакадемией в 1ЭЭЗ-1Э95 гг. в лабораториях пестицидов и изотопных методов исследования.

В пяти сериях экспериментов использовано 105 беспородных белых мышей массой тела 15-25 г, 35 морских свинок массой тела ^50-

I

600 г, 106 кроликов породы шиншилла массой тела 1,3-3,8 кг.

3 исследованиях использовали ГХЦГ, микотоксин Т-2 и ^-излучение. Микотоксин Т-2, производства Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института (г.Казань), растворяли в

диметилсульфоксиде с добавлением физиологического раствора так, чтобы в рабочем растворе количество диметилсульфоксида составляло не более 1-2%.

ГХЦГ - смесь двух равных количеств гамма- и альфа-изомеров получали из стандартного X2íí-ro дуста по методике З.К.Поляковой (1Э76). Высушенный порошок ГХЦГ перед введением животным растворяли в диметилсульфоксиде до конечной концентрации

Омесь растворов микотоксина Т-2 и ГХЦГ доводили до рабочего разведения растительным маслом. Растворы токсикантов вводили животным с учетом массы тела перорально через металлический зонд с помочью априца в объемах: мызам - от ОД до 0,3 мч, морским свинкам - от 0,9 до 1,3 мл, кроликам - по 1,0 мл.

Общее равномерное облучение животных производили ^-лучами

137

С на установке ГУС-400Э при мощности дозы 1,4 Р/мин в дозах от 200 до 1000 Р. Равномерность облучения составляла + 10$.

В первой серии экспериментов уточняли поражаемость белых мыпей, морских свинок и кроликов при однократном воздействии микотоксина Т-2, ГХЦГ и ^-излучения. ЛД^ определяли по Литчфилду и Уилкоксону.

Во второй серии в 2-х опытах на 8-ми группах кроликов изучали влияние сочетанного воздействия микотохсина Т-2 и -излучения. В первом опыте животных облучали дозой 400 Р (1-я группа), перорально вводили Т-2 токсин в дозах 0,5 и 1,0 мг/кг и облучали дозой 400 Р (2-я и 3-я группы соответственно). Животных 4-й группы воздействии микотоксина Т-2 и ^-облучению не подвергали и они служили контролем для кроликов первых трех групп. Во втором опыте кроликов 5-й группы облучали дозой 600 Р, животным 5-й группы вводили перорально микотоксин Т-2 в дозе 1,0 мг/кг, кроликам 7-й группы внутрь вводили Т-2 токсин в дозе 1,0 мг/кг и

облучали дозой 600 Р. Кролики 6-й группы воздействию Т-2 токсина и -излучения не подвергались и служили контролем для кроликов 5, 6 и 7-й групп.

3 третьей серии экспериментов на 4-х группах кроликов изучали влияние на животных хронического сочетанного воздействия ГХЦГ и Т-2 токсина. Были взяты следующие дозы токсикантов: 0,05 мг/кг микотоксина Т-2 для кроликов 1-й группы, что составляло приблизительно 1/50 ЛЛ^; 0,05 мг/кг Т-2 токсина и 4,0 мг/кг ГХЦГ для кроликов 2-й группы; 0,25 мг/кг Т-2 токсина и 20,0 мг/кг ГХЦГ для кроликов 3-й группы, что составляло около I/IO ЛДдд Яля обоих токсикантов. Интактные кролики 4-Г: группы служили контролем для животных первых трех групп. Токсиканты вводили ежедневно пер-орально перед кормлением кроликам 1-й и 2-й групп 50, а 3-й -30 суток. Кроликам 3-й группы введение токсикантов прекратили при появлении видимых клинических признаков отравления. Кролики контрольной (4-й группы) 50 раз получали эквивалентное для подопытных животных количество 'растворителя.

В четвертой серии экспериментов изучали воздействие микотоксина Т-2 и X-излучения на животных с измененным физиологическим

i

состоянием. Кроликов с клиническими признаками бронхопневмонии и энтерита подвергали воздействию Тг2 токсина в дозе 1,0 мг/кг и ^-излучения дозами 400 и 600 Р. Морских свинок, которые перенесли вакцинацию против сибирской язвы и заражение вирулентным штаммом возбудителя этой болезни, подвергали заражению микоток-сином Т-2 в дозе 0,75 мг/кг и ^-облучении дозой 200 Р. Мышей, выживших после острой лучевой болезни в результата применения сывороточных противолучевых препаратов в профилактическом и лечебном вариантах подвергали воздействию микотоксина Т-2 в дозе 6,0 мг/кг.

В пятой серии экспериментов изучали формирование и напряженность иммунитета после прививки вакциной против ВГБК у кроликов, подвергнутых воздействию Т-2 токсина, ГХЦГ и ^-излучения. Для вакцинации использовали тканевую инактивированнуа вакцину против ВГБК производства ВНИИВВиМ. Вакцинацию проводили через 2, 10, 3045 суток после сочетанного воздействия на животных микотоксина Т-2 в дозах 0,5 и 1,0 мг/кг и ^-излучению з дозах 400 и 600 Р, а также через 30 и 50 суток после сочетанного воздействия Т-2 токсина и ГХЦГ в дозах 1/10 и 1/50 ЛJ^q. Спустя 30-45 суток после вакцинации животных подвергали контрольному заражению вирулентным штаммом возбудителя ВГБК. Эту работу проводили-совместно с сотрудниками отдела биологического контроля института.

Лля оценки результатов опытов использовали следующие тесты: общее состояние животных, температуру, .массу тела, содержание в венозной крови эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, лейкоформулу, активность щелочной фосфатазы сыворотки крови, количество Т- и В-лимфоцитов в крови, фагоцитарную способность нейтрофилов, тест торможения миграции лейкоцитов (ТТМЛ), редакцию блзсттрансформации

лимфоцитов (РБТ1), титры специфических антител против ВГБК в сы-

\

воротке крови, выживаемость, данные патологоанатомического вскрытия погибших животных. ^ J

Общее состояние животных оценивали общепринятыми методами -

учитывали поведение, реакции на внешние раздражители, интенсив-

j

ность приема корма и воды. Изучали состояние видимых слизистых оболочек, шерстного покрова, температуру и массу тела. Учитывали случаи заболевания и гибели животных. J

Венозную кровь у кротаков получали из краевой вены наружной поверхности уха и использовали для подсчета 'эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов и для приготовления мазка по общепринятым методикам.

Активность щелочной фосфатазы сыворотки крови определяли по методике Боданскова (1Э69) или с помощью биохимического автоанализатора фирмы "Техникон" (США), используя в качестве субстрата -глицерофосфат.

Количество Т-лимфоцитов в крови кроликов определяли в реакции спонтанного розеткообразования с гомологичными эритроцитами по методике [I у (!а^с&>с?сС^ (1977).

Количество 3-лимшоцитов в крови кроликов изучали в реакции комплементарного розеткообразования с эритроцитами барана по методике тех же авторов.

Функциональную активность Т-клеток определяли с помощью агар-миграционного теста торможения миграции лейкоцитов (ТТМЛ) в модификации Г.П.Лаврусенко (1983).

Фагоцитарную способность нейтрофилов изучали с использованием бактериальной культуры &С1р1ш¿'обо¿¿^¿¿4Ч(штамм 209) / а

в суспензии, содержащей I*10 частиц в мл.

Реакцию бласттрансформации лимфоцитов оценивали с использо-

ваниеьггтимидина - % по методике ВНИИВВиМ. ! \

Титры антител в сыворотке крови кроликов, привитых вакциной против ВГБК, определяли в реакции задержки гемагглютинации в соответствии |с разработанными во ВНИИВВиМ методическими указаниями по лабораторной диагностике ВГБК. Напряженность иммунитета у кроликов определяли путем заражения вирулентной культурой возбудителя ВГЕК по методике, принятой во ВНИИВВиМ.

Цифровые данные экспериментов подвергали статистической обработке по Стьюденту.

\

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕЛОВАНИЙ

На первом этапе наших исследований (для сопоставимости с литературными данными) по критерию ЛД^ была определена чувствительность животных к однократному введению через рот микотоксина Т-2, ГХЦГ и однократному общему ^-облучению. Методом пробит-ана-лиза по Литчфилду и Уилкоксону установлено, что среднесмертель-ные дозы Т-2 токсина, ГХЦГ для белых мышей составляют 6,0 (4,7 * 7,7) и 320 (250 * 410) мг/кг соответственно. Средняя продолжительность жизни животных при этих дозах была равна 2,5 + 0,7 суток для Т-2 токсина и 2,3 +0,7 суток для ГХЦГ.

Средне смертельные дозы (W50/30) однократного общего -облучения белых мышей, морских свинок и кроликов при мощности дозы излучения 1,4 Р/час составили соответственно 680 (458 * 986), ■ 210 (160 т- 260) и 600 (440 ^ 816) Р. Средняя продолжительность жизни всех животных при воздействии среднесмертельных доз была

примерно одинаковой и колебалась от 12-ти до 15-ти суток.

\ \ ■

Сходные параметры поражающего однократного действия. Т-2 токсина, ГХЦГ и общего -излучения "^Cí описаны JI.И.Медведевым (1962), М.В.Загородовым (1976), В.А.Тутельяном и í.В.Кравченко (1985), В.А.Киршиным с соавторами (1986, 1990), С.П.Ярмоненко

Как видно из результатов наиих исследований, а та! ( ите-ратурных данных, при воздействии среднесмертельных доз химических и физических факторов выживаемость животных существенно различается по критерию средней продолжительности жизни, которая достверно ниже (в 5-7 раз) при введении внутрь микотоксина/Т-2 и ГХЦГ по сравнению с таковой при общем ^-облучении. Причиной тому являются особенности механизмов биологического действия исследованных факторов.

(1988), М.Я.Тремасовым и др. (1994) и другими учеными.

Следовательно, критерии средней продолжительности жизни животных может быть использован для дифференциальной диагностики отравлений животных Т-2 токсином, ГХЦГ и поражений ¡^-лучами. Это мы учитывали в дальнейших исследованиях сочетанного воздействия на животных факторов химической и радиационной природы.

Опыта на белых мышах, подвергнутых воздействию Т-2 токсина в дозах от 4,0 до 10,0 мг/кг и ^-облучению дозами 500 и 800 Р позволили определить особенности сочетанного действия этих факторов. Установлено, что сочетание Т-2 токсина в дозах от 4,0 до 6,0 мг/кг и у-облучением дозами 500 и 600 Р вызывает гибель шести из девяти взятых в опыт животных, т.е. 66%. Судя по продолжительности жизни пораженных животных (от 7 до 12-ти суток) причиной их гибели явилась острая лучевая болезнь.

Микотоксин Т-2 в дозе 4,0 мг/кг в сочетании с ^-облучением дозами 700 и 800 Р обуславливал 100^-ную гибель животных со средней продолжительностью жизни от 2-х до 3-х суток. Резкое сокращение продолжительности жизни (до одних суток) отмечали как при до--зе Т-2 токсина 6,0 мг/кг в сочетании с ¿"-облучением дозой 700 Р, так и при дозах токсина 8,0 и 10,0 мг/кг в сочетании с ^-облу-чением дозой 500 Р. Причиной гибели в этих случаях был микотокси-коз.

Сочетанное действие микотоксина Т-2 и ^-излучения на кроликов изучали в двух опытах, различающихся дозами использованных факторов. В первом опыте животным вводили сублетальные дозы микотоксина Т-2 (0,5 и 1,0 мг/кг) и облучали сублетальными дозами

^-лучей (400 р). Во втором опыте на кроликов воздействовали ми-котоксином Т-2 в сублетальной дозе (1,0 мг/кг) и среднелетальной дозой ^-излучения (600 Р).

• Опытами установлено, что сублетальные уровни сочетанного во-

здействия микотоксина Т-2 и ^-излучения вызывают у кроликов развитие патологического процесса, который проявлялся лейкопенией, в основном за счет лимфоцитов, тромбоцитопенией, угнетением активности щелочной фозфатазы сыворотки крови, подавлением фагоцитарной способности нейтрофилов венозной крови. Учитывая, что все подопытные кролики выжили, а тагаз степень выявленных изменений и их динамику, патологический процесс при воздействии на животных сублетальных доз Т-2 токсина и ^-излучения можно классифицировать как острую лучевую болезнь легкой степени тяжести.

У кроликов, подвергнутых сочетанному воздействие Т-2 токсина в сублетальной дозе (1,0 мг/кг) и среднелетальной дозе ^-излучения (500 Р) изменения показателей состояния организма имели тот же характер и динамику, что и при меньших дозовых нагрузках, однако были выражены сильнее. Это проявлялось более глубокой яимфо-пенией, нейтропзнией, угнетением фагоцитарной способности найтро-

филоз (рис. I).Два кролика из трех взятых в опыт погибли: один

\

на^зторые сутки'от микотокеикоза, второй - на 15-е сутки от острой лучевой болезни тяжелой степени тяжести.

Многие исследователи наблюдали, что прогнозируемый эффект поражения химическими, физическими и биологическими факторами зависит от исходного физиологического состояния животных (А.5.Левицкая и др., 1334; З.Н.Шербова и др., 1387; Б.Н.Анненков, Е.а.Юдин-цева, 1383). Поэтому в дальнейших опытах мы

исследовали влияние Т-2 токсина и ^-излучения на организм животных с измененным физиологическим состоянием.

Опытами установлено, что сублетальные для здоровых кроликов уровни сочетанного воздействия Т-2 токсина и ^-излучения вызывают 100,"¿-ну» гибель животных, у которых перед началом опытов клиническими методами были диагносцированы бронхопневмония и энтерит, в то время как среди больных животных, не подвергшихся

~

Ъ

( 3 5 7 40

50 СУТКИ

) 5И 10

Рис. I. Изменения общего числа лейкоцитов (А), фагоцитарной емкости нейтрофилов (Б), числа нейтрофилов (В) и лимфоцитов (Г)

.30 С!

Условные обозначения:

400 р

2- в-о-{.Омг/нг +Ч00Р.

3- о—о - 0.5мг/нр+Ч00Р

4- с-о- КОНТРОЛЬ

5~*-*- 600 Р

В-«-»-{.0м%г

7-«——-1.0мЙР+60()Р А-*—КОНТРОЛЬ

сочетанному воздействию указанных факторов, смертельных исходов не наблюдали.

3 учетом данных патологоанатомического вскрычгия трупов и средней продолжительности жизни животных при сочетанном поражении Т-2 токсином и ^-излучением можно сделать заключение, что основной причиной гибели больных кроликов являлся микотоксихоз.

3 опытах на морских свинках, перенесших вакцинацию против сибирской яззы и заражение вирулентным атаимом возбудителя этой болезни, использовали дозу Т-2 токсина, не вызывающую смертельных исходов (0,75 мг/кг) и ¡(-облучение в дозе, приводящей к гибели 53« облуч'енных животных (200 Р). Показано, что сублетальные дозы Т-2 токсина и среднелетальные дозы ^-излучения для здоровых морских свинок приводят к повышению летальности подопытных животных (на 3¥ü. Эффект сочетанного воздействия этих факторов на морских свинок определялся, в основном, влиянием мико токсина Т-2.

3 другой серии опытов использовали белых мышей, выживших после' ^"-облучения дозой 700 Р в результате применения средств профилактики и лечения острой лучевой болезни. Через месяц от качала облучения на мышей воздействовали Т-2 токсином в дозе 6,0 мг/кг (JIÍ^q). При этом установлено, что среднелетальные для здоровых белых мышей.дозы микотоксина Т-2 имели вдзое меньший смертельный эффект у животных, выживших после применения противолучевых средств в профилактическом и лечебном вариантах. Это свидетельствует о том, что противолучевые средства, наряду с повышением радиоустойчивости животных, индуцируют также и повышенную устойчивость к токсическому действию микотоксина Т-2.

Обобщая результаты исследований однократного сочетанного воздействия Т-2 токсина и ^-излучения на животных, можно сделать заключение о том, что по критериям выживаемости и средней продол-

жительности жизни пораженных тавотных можно выявить однонаправленность действия факторов, то есть наблюдается синергический эффект или синдром взаимного отягощения.

Явления синергизма усиливались, если у животных перед началом сочетанного воздействия физиологическое состояние было изменено болезнью (бронхопневмония, энтерит) или массивной нагрузкой на иммунную систему (вакцинация с последующим заражением). В противоположность этому животные, выжившие после облучения смертельными дозами )f-лучей в результате применения противолучевых препаратов, приобретали повыпенную устойчивость к введению микотоксина Т-2. В наших опытах это был единственный случай, когда на уровне организма изменение его физиологического состояния применением средств профилактики и лечения острой лучевой болезни привело не к суммированию эффектов ^-облучения и микотоксина, а к существенному их ослаблению. В этом можно усмотреть признаки противоположно направленных или антагонистических взаимодействий исследованных факторов.

При изучении влияния хронического сочетанного воздействия Т-2 токсина и ГХЦГ на кроликов установлено, что с повышением дозовой нагрузки токсикантов видимые клинические признаки интоксикации усугублялись. Однако следует отметить, что признаки лейко-, нейт-рофило-, лкмфсцито- и тромбоцитопении, индуцированные введением в организм одного микотоксина Т-2 в дозе 1/50 ЛЛ^ц, несколько ослаблялись при добавлении к микотоксину ГХЦГ в такой же дозе. Они еще более сглаживались при повышении дозы токсикантов до I/IO JIM^q (рис. 2).

В изменениях количественного состава венозной крови при повышении дозовой нагрузки можно усмотреть не синергические, а скорее антагонистические взаимодействия обоих токсикантов.

Анализируя гематологические изменения при сочетанном воздей-

5 9

20

50 55"

30 35

Рис. 2. Изменения общего числа лейкоцитов (А), лимфоцитов (Б), нейтрофилов (В), тромбоцитов (Г) в крови кроликов, подвергнутых хроническому сочетанному воздействию микотоксина Т-2 и ГХЦГ

Условные обозначения:

'-1-ГХЦГ VsoAAso

■-■ -ГХЦГ Vso ЛАю * Тг (AoUso

----ГХЦГ VIO ЛД50 ±Тг У(0ЛД50

•—КОНТРОЛЬ

ЧГсуткы

47CVTKU

ствии на кроликов микотоксина Т-2 и ГХЦГ, можно сделать заключение, что основной причиной и ведущим звеном патологического процесса в повреждениях гемопоэза является фузариотоксикоз.

В этом убеждают также и литературные данные о том, что фу-зариотоксин действует непосредственно на кроветворные органы и, главным образом, на костный мозг (Ю.й.Рубинштейн, 1948). При этом регистрируют 'стойкую лейкопению, тромбоцитопению, а в отдаленные сроки анемию (В.В.Рухляда, гпс>ъ а., 1981 \Qutmln¿ С. , 1983Р. e¿ а€. t 1984). Скорость появления и глубина развития гематологических изменений были связаны с дозой токсина.

Подобного действия на кроветворение при интоксикации ГХЦГ в литературе не описано. У животных почти всех видов, получавших длительное время ГХЦГ, обнаруживают дегенеративные изменения в

•печени и почках (С.Димитров, А.Джуров, С.Антонов, 1986). Но функциональное состояние клеток крови в наиих экспериментах, в частности, процент миграции лейкоцитов, РБТЛ изменялись однотипно у всех подопытных животных - резко снижались к 5-м суткам и оставались на этом уровне до конца наблюдений (рис. 3). Это свидетельствует о высокой чувствительности этих тестов как к относительно небольшим, так и высоким дозам Т-2 токсина и ГХЦГ.

Важным признаком интоксикации животных различными ядами, в том числе ГХЦГ и Т-2 токсином, считается значительное снижение уровня щелочной фосфзтазы в сыворотке крови (Л.И.Авреньева и др., 1983). Мы обнаружили, что после двадцати введений токсикантов у подопытных кроликов актизность щелочной фосфатазы достверно снижалось (р(<10,01) по сравнению с контролем и оставалась сниженной до конца наблюдений (рис. 4). Наибольшее снижение активности это: го фермента отмечено у кроликов, получавших один микотоксин Т-2, тогда как при сочетанном воздействии снижение активности фермен-| та по сравнению с контролем было незначительным. По этому пока-^ зателю эффекты сочетанного действия Т-2 -токсина и ГХЦГ скорее ^ всего могут быть расценены как антагонистические. По-видимому, \ можно сделать заключение о том, что в этих условиях нарушение активности щелочной фосфатазы, так же как и повреждение гемопоэза, определяется, в первую очередь, влиянием микотоксина Т-2. | Выраженное повреждающее влияние даже одногб из факторов со-

четанного воздействия на делящиеся клетки органов кроветворения | и иммунной системы должны обуславливать нарушения иммунореактив-ности. Несмотря на то, что данные о влиянии микотоксинов на иммунный ответ и неспецифические факторы иммунитета относительно . ' немногочисленны, у исследователей не вызывает сомнения, что эти , ~ токсины обладают свойствами иммунодепрессантов и действуют прей-

№■ Ш; 80■ 6040-£0-

_1_

5

20

_I_

30

45" СУТКИ

Рис. з. Изменения миграции лейкоцитов крови кроликов, подвергнутых хроническому сочетенному воз-

действию микотоксина -Условные обозначения:

Т-2 и ГХЦГ

4_1-ГХЦГ '/50 М50 '

.-, -ГХЦГ </50 -ЛЛ50 * Тг /50ИД5»

_ _ гх Ц(ЧД о Л Л 5 О * Та '/10 ЛА 5 о

.-КОНТРОЛЬ /

мужественно на клеточные (Т-зависимые) формы иммунного ответа (Р(1ш>ши)И. еШ, 1977; ОХакгъЯ)Мае., 1982). .

Об этом свидетельствуют результаты наших исследований пока- ~ зателей естественной и специфической иммунологической реактивности кроликов, подвергнутых воздействию Т-2 токсина отдельно и в сочетании с ^-излучением.

Количество иммунокомпетентннх клеток в венозной крови (ней-трофилы, лейкоциты, лимфоциты, Т- и В-лимфоциты) в течение первых пяти суток у кроликов, подвергнутых воздействию сублетальных и среднелетальных доз токсиканта и ^-излученияпонижалось.

При этом степень снижения числа этих клеток при однократном изолированном воздействии среднелетальной дозы Т-2 токоина проявлялась значительно слабее, чем при однократном воздействии средне-летальной дозы ^-лучей. Но сочетанное воздействие на кроликов этих факторов вызывало достоверное падение числа иммунокомпетент-

ПО

т 80 60 40 Р.О

7

20

40 4ГСУТКН

Рис.4. Динамика активности щелочной фосфатазы сыворотки крови кроликов, подвергнутых хроническому сочетанному воздействию микотоксина Т-2 и ГХЦГ

Условные обозначения:

»-« - ГХЦГ У*о ЛДго

•-» -ГХЦГ У50 -ЛДзо + Тг Уэ о ИД 50

----ГХЦГ УюЛДю 4 Тз '/(0У1Д50

•-КОНТРОЛЬ

ных клеток, степень которого находилась в прямой связи с уровнем суммарной нагрузки. В то же время, если при одной и той же дозе ^-излучения увеличивали дозу токсиканта, то уменьшение числа иммунокомпетентных клеток возникало в более ранние сроки и било выражено глубже.

Соответственно к аналогичным последствиям приводило и увеличение дозы $-облучения-при неизменной дозе Т-2 токсина.

Фагоцитарная способность нейтрофилов крови кроликов нарушалась тем сильнее, чем была выше доза Т-2 токсина или суммарная нагрузка в случае сочетанного воздействия микотоксина Т-2 с ¿'-излучением.

Сопоставляя результаты, полученные в наших экспериментах, с литературными данными, можно предположить, что клетки-мишени для _ микотоксина Т-2 и ^-излучения в большинстве случаев одинаковы: интенсивно делящиеся клетки костного мозга, лимфоидных органов,

эпителия кишечника. По-видимому, этим и определяется синергичес-кое взаимодействие этих факторов.

По мнению З.Г.Петина (1987) инактивация клеток в условиях синергического взаимодействия воздействующих агентов сопровождается более "тяжелыми" формами инактивации по сравнению с гибелью клеток после действия одного ионизирующего излучения. В основе механизмов синергического усиления при комбинированном воздействии находится пониженная способность клеток восстанавливаться от повреждений, формируемых при этих условиях.

Оценивая диагностическую и прогностическую значимость исследованных параметров,можно отметить связь степени изменений отдельных показателей состояния организма кроликов с уровнем доз сочетанного воздействия Т-2 токсина и ^-излучения. Информативным прогностическим показателем в первые трое суток от начала сочетанного воздействия является понижение температура тела на 1,5°С. Этот признак, как правило, свидетельствовал о небланопри-ятном исходе в течение ближайиих пяти суток.

Определенное заключение об уровне суммарной дозовой нагрузки на кроликов можно сделать при анализе клеточных показателей венозной крови. Достаточно отчетливо связь с дозой проявлялась в динамике снижения суммарного количества лейкоцитов, а также числа лимфоцитов, нейтрофилов, тромбоцитов, угнетения фагоцитарной способности нейтрофилов (рис. 5).

Диагностическая значимость других показателей состояния организма после сочетанного воздействия Т-2 токсина и ^-излучения, включая данные о динамике активности щелочной фосфатазы сыворотки крови, была относительно ниже.

Дифференциальный диагноз сочетанного поражения Т-2 токсином и ^-излучением затруднителен. Это связано с общностью патофизиологических механизмов повреждения критических органов. В этих ус-

Рис. 5. Изменения суммарного количества лейкоцитов (А), лимфоцитов (Б), найтрофилов (В), фагоцитарной способности нейтрофилов (Г) в крови кроликов в зависимости от

уровня сочетанного воздействия Т-2 "токсина и ^-излучения

" Условные обозначения:

4_0 5"7ЯР + 400 Р

,_\ 0 мг/кг + 400Р

,-»_ { о«Укс * 600Р

'ловиях на основную причину гибели животных может указать срок их жизни после сочетанного воздействия: если животные гибнут в течение 3-5 суток с момента появления симптомов болезни, то основной причиной является микотоксикоз, а если гибель наступает в течение второй декады- то причиной является острая лучевая болезнь.

В наяих экспериментах, несмотря на уменьшение количества и функциональной активности иммунокомпетентных клеток после сочетанного воздействия на кроликов токсикантов и излучения, прививка выживших кроликов вакциной против ВГЕК сопровождалась достаточно выраженным антителообразованием. В динамике накопления антител в сыворотке крови пораженных кроликов были и низкие титры, и запзз-" дывание со сроками максимального их накопления, однако иммунитет против ВГЕК формировался напряженный. Это подтверждено тем, что все привитые подопытные животные выжили после контрольного заражения при гибели непривитых кроликов. . , Однако, И.С.Елистратовым, В.А.Борисовым (1386) в опытах на \ свинках, подвергнутых острому и хроническому поражению микс.оконном Т-2, установлено резкое снижение специфической резистентности'', животных к возбудителя сальмонеллеза. Введение вакцины, проводи--' '■ мое на фоне острого Т-2 токсикоза, не приводило к выработке антител, что подтверждено контрольным заражением животных. В этой си- ; туации лииь повторное введение вакцины, проводимое в период ост- | рого Т-2 токсикоза, создавало напряженный иммунитет у животных. ;

Расхождение приведенных опубликованных данных с результатами натах исследований может быть связано как с особенностями проявления и течения ВГБК, так и со спецификой формирования иммунитета против этой болезни.

Следовательно, независимо от уровня суммарной дозовой нагрузки микотоксина Т-2, ГХЦГ и ^ -излучения, выжившие животные спо-

собны адекватно реагировать на введение вакцины против ВГБК и формировать надежный иммунитет. Показатели кроветворения и естественной иммунологической реактивности, отражая степень повреждения функций организма при сочетанном воздействии и в ряде случаев критического его состояния, еще не служат основанием для принятия решения о прекращении специфической профилактики инфекционных болезней. Поэтому в неблагополучных по БГЕК хозяйствах животных, выживших после поражения микотоксином Т-2, ГХЦГ и ^ -из лучения, мы рекомендуем в случае необходимости прививать. Это будет способствовать снижению потерь от распространения этой опасной инфекции.

ЗЬШОДЫ

1. Дана экспериментальная оценка сочетанного действия микотоксина Т-2, гексахлорциклогексана и ^-излучения на организм животных по клинико-гематологическим, биохимическим ,и иммунологическим показателям. . )

2. Дозы микотоксина Т-2 (0,5-1,0 мг/кг) и ¡^-излучения (400 Р), не вызывающие гибель животных при изолированном воздействии, способны вызвать смертельные исходы при сочетанном применении. !

3. При сочетанном воздействии на кроликов микотоксина Т-2

и ¿¡'-излучения в сублетальных дозах (0,5 мг/кг и 1,0 мг/кг микотоксина и 400 Р ^-излучения) развивается поражение, основные признаки которого характерны для острой лучевой болезни легкой степени тя?кести. ,

I

4. При сочетанном воздействии на кроликов микотоксина Т-2

в сублетальной дозе (1,0 мг/кг) и ^-излучения в среднелетальной дозе (600 Р) причиной гибели животных в первые двое суток является микотоксикоз, а в более поздние сроки - острая лучевая болезнь тяжелой степени тяжести.

5. Сочетанное воздействие микотоксина Т-2 и гексахлорцикло-гексана в дозах 1/50 ЛД^ в течение 50-ти дней вызывает у подопытных животных лейкопению, угнетение миграции лейкоцитов и снижение активности щелочной фосфатазы сыворотки крови.

6. Хроническое сочетанное воздействие микотоксина Т-2 и гексахлорциоогексана в суточных дозах 1/10 ЛЛ30 приводит к 30-м суткам к развитию клинических признаков отравления: угнетение общего состояния, некротические участки слизистой оболочки рогозой полости, лимфо- и нейтропения, угнетение активности щелочной фосфатазы сыворотки крови и миграции лейкоцитоз.

7. Острое однократное и хроническое сочетанное воздействие на кроликов микотоксина Т-2, гексахлорциклогексана и ^-излучения приводит к угнетению естественной иммунологической резистентности, степень которого зависит от дозы токсикантов и проявляется: лей-ко-, лимфо- и нзйтропенией, уменьшением количества Т- и В-лимфо-цитов в крови, угнетением фагоцитарной способности нейтрофилов, миграции лейкоцитов, реакции бласттрансформации лимфоцитов.

8. Сочетанное воздействие на кроликов микотоксина Т-2, гек-сахторцикюгексана и ^-излучения существенно не влияет на формирование и напряженность иммунитета против вирусной геморрагической болезни. Несмотря на некоторое снижение титров специфических антител, все привитые животные выдерживают контрольное заражение.

9. Сочетанное воздействие микотоксина Т-2 и ^-излучения оказывает значительно бользее поражающее действие на животных с клиническими признаками болезни легких и желудочно-кишечного тракта, чем на интактных животных. ■

Ю. Препараты, используемые в качестве радиопротекторов при острой лучевой болезни, снижают токсическое действие микотоксина Т-2.

пРАКгл-isлкйз ИР:ШО;:знуШ

1. Информативным диагностическим показателем развитая острого поранения организма мккотоксикои Т-2 и -излучением слуиит степень ле:'::со-, лимшо-, нейтсо- и тромбоцптопзнии. Б условиях хронической интоксикации животных микотоксйном Т-2 и ГХЦГ эти показатели не отражают степень поражения организма.

2. Кротиков, выкивзях посте сочетанного воздействия микоток-сика Т-2 и -излучения, микогокенна Т-2 и ГХЦГ, можно прививать против ВГБХ. При этом у животных формируется напряженный иммунитет

3. Необходимо учитывать, что в условиях сочетанного действия сублетальных доз микотокскна Т-2 и ß -излучения, а тате микотоксина Т-2 и ГХЦГ происходит суммация поражающего действия на органа

¿ЮК РАБОТ, ОП/ЕЛИКОзАННЫХ ПО EMS /ШССЗРТА1Ш

1. Лаврусенко Г.П., Купцова К.В., Волков В.К. Сочетанное воздействие микотоксина Т-2 и гексахлорана на клинико-гематологи-ческие, биохимические и иммунологические показатели кроликов // Сборник научных трудов ВНХИВСГЭ, т. 38, ч.2, Мос.квг, 1335, 113.

2. Купцова К.В., Лаврусенко Г.П., Волков а.Ii., йзвченко A.A., Малоголовкина Н.В. Влияние кикотоксина Т-2 и гексахлорана на формирование иммунитета у кроликов // Тез.докл.Зсзрос. науч.-прпкт.

конф., 17-21 апр. 1335 г., Владимир, 1335, 138.

i

3. Купцова К.В., Волков Ü.H., Оевченко A.A., Малоголовкина Н.В. Формирование иммунитета против ВГБК'у кроликов при сочетанно;-воздействии микотоксина Т-2 и гамма-облучения// ТЬз. докл. Всерос. науч.-практ. конф., 17-21 апр. 1ЭЭ5 г., Владимир, 1335, 131.