Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.07) на тему:РОЛЬ СПЕРМОАГГЛЮТИНИНОВ В ЭТИОЛОГИИ-БЕСПЛОДИЯ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

; ( Ka правах рукописи) цишперство свлюкого хозяйства всс?

■ илорусскйй шчно^ссдарвлшьскийл ' v- ' -

' ■ ' ветеринарный ИЙСШТУТ • . ' ■ - V -

иалииовский иван францввич ;

. ЮЛЬ спбрмоагглюткншов в этиологии'евсплодия • . ; крупного рогатого скота'

( 16.00.07:- акушерство в искусственное осеменение )

- АВТО ? Е Ф В Р а т; . •

дисоврпн"« на соискевие учевой 05впвнв кандадем' . ветеринарных неук .■'. ■■■.■ ;;; ' '.

■ ^

а' ■ -

\ чу.-'-1

-: МИНСК' - 1974 .

( На правах рукописи)

министерство ешдкого зазяазтаА бсср

белорусский шучно-шшшвазельский ветеринарный мсжут

ЦДЛШЖЖЛЙ ИЬАН ФРАНЦШЧ

роль сшзшоагглютин¡шов в этиологии бесплодия крупного рогатого скота

( 16,00.07 - акушерство и искусственное осеменение )

автореферат

диссертации нч соискание ученой сгепени кандидата ветеринарных неук

МИНСК - 1974

Работа выполнена на беае хозяйств Минской, Гродненской, Витебской, Брестской и Могилеве к оВ областей, Лабораторные нс-следовеяяя проведены в отделе по научению незаразных болезней я обмена веществ Белорусского нвучво-исс ледова те льокого ввхе-риверного института.

Нэучиий руководимиь - кандидат ве«ерииврных неук, стервий научный сотрудник А Л.Ивеаов

НаучныВ коаоульгеи! - член Международного координационного ком и готе по иммунологии размножения, доктор биологических наук, профессор И.11«,Сокояовская Официальные оппоненты:

Доктор вотерииарньи иаук, профессор Я.И.Соколов

Кандида: биологических наук, старший иаучный сотрудник - Ь.З. Харкни

Ведущее учреждение - Львовский зооветеринарный институт

«втореферв* разослав "/¿Ь Л-С-З*-^ 197^ г.

Зенита диссертации состоится "/*2>™ 1974 г.

на заседания Совета Белорусского научно-исоледо вв те дь-ского вечери верного наст и ту та( 225020 г.Ывнск, п/о Кунцев-щине)

С диссертацией можно оанакопиться в библиотеке нас тв ту те

Ученый секретаре Совета В.Я. ЛШШК

Кошунисгическая партия Советского Союза и Советское правительство иного вникания уделяют интенсификации всех отраслей сельского хозяйства, которые должны обеспечить tbkoíí рост производства продуктов земледелия я животноводстве, чгоби полностью удовлетворить see возрастающие потрэбносги usuero народа в продуктах литания, & промышюнндоть в сырье.

"-. ¿иракгиваии ХНУ съезда КПСС по пятилетнему плану развитии неродного хозяйства СССР предусмотрено ускоренное развитие животноводства, в частности его ведущей о трас лк-ск о то во дсib э,

Одк0: из непременных условий интенсификации аивотковод-сгва - эхо получение высокой оллодотворяемости и увеличение выхода приплода телят не 100 коров и нетелей, йедду геи, оге-чественные и зарубежные данные показывают, что в стадах крупного рогатого скота продолжает иметь место высокая яловость коров* Поэтому разработка мероприятий по ликвидации яловости является одним из основных резервов, повышения продуктивности скота.

Hueeicn иного сообщений о влиянии витаминов, ферментов, гормонов, микроэлементов, условий внешней среда и других факторов на процесс оплодотворения к раннего зибряопального развития. {А.Ю.Тарасевич, А.П.Студекцйв, ВЛС.аилокенов, Г.В.Зверева, А.В.Бесхлебков, Я.Г.Губаравич, П.А.Еодосков).

Однако:,в практике еивотноеодствэ встречаются случаи бесплодия крупного рогатого енота, не связанные с заболеваниями пли плохими условиями кормления и содержания пивотных. Яричи-ной подобных явлении могут быть иммунобиологические.факторы. Научные исследования в этой области начались V открытия И.ít.Мечниковым в I8S9 году антигенных свойств/спермиев. За этот промежуток времени в мировой литературе появилось иного данных по иммунологии размвоненая. Исследования 4,(1.Тушнова (1923), И.Л.Руфшаского (1926), А.Д.Бернштейна, И.О.Тарасова (1935), А.Д.Бернштейна, Г.И.Лазарева (1935), И.II.Соколовской (1938), 1968-1973)i А.А.Осетрова, АЛ.Царчука (1969), Е.В.Ильинского^ Г.£).Сальникова (1970), К.Братенова, В.Дикова (1962) показали, что иммунологические реакции на антигены спермиев могут выражаться появление» специфических сперкоаяхител в организме самок. Когда .титр их повышается,' они становятся причиной бесплодия и предпосылкой к многократный повторник осеменениям. ,

Уногив авторы (Г.Йалышев, Я.Рошак>1970; Н.И.Полянцез, 1971; Г.в.Звереве,1972; Е.В.Илышскйй,19?2; ф.Н.0стешко,1972} 1).И.Родин,1973) указывают на необходимость исследований роли иммунных факторов в этиологии бесплодия коров. .

Современное состояние исследований по иммунология размножения показывает» что необходимо более углубленное изучение иммунных реакций-в организме коров в связи о плодовитостью и бесплодием.

Все аю иослуяило не« основание« для проведения настоящей работы« целью которой было:

X. Установить возможность внутриматочнойишунизации крупного рогатого скота гомологичными спермиямя.

2. Выяснить влияние иммунных реакций не оплодотворяем мосгь у коров. , ,

3. Научить динамику накопления спериоагглютининов в сыворотке крови коров при искусственном осеменении в норме и при патологии.

Проследить за элиминацией с не рмо агглютининов в снво-. ротке крови коров.

5. Изучить иммунный стагус спермоегглютининов в сыворотке крови коров.в некоторых хозяйствах республики.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДИКА

Работа проводилась па крупном рогатом скоге в условиях хозяйств, а такие в отделе по изучению незаразных болезней и . обмена веществ ЕелНИВй в 1970—1973гг. Все хозяйства были благополучными ло инфекционный заболеваниям крупного рогатого скота. Подопытные кнвогные были клинически здоровыми и входили в состав основного стада тех молочно-товарных ферм, где проводили исследования. В опытах использовано 18 кроликов,, 30 .полновоэрастпых иитзктш-рс телок и 1045 коров. .

акспсришигольное изучение иммунных реакций у млекопитающих проводипн путем иммунизации кроликов а топок спермиями, которые получали из. эпидидишса бычков, посыпающих для убоя из мясокомбинат. Хвосговую часть придатков семенников измельчали с последующим адмдаааием из няхсперкиев дистиллированной водой (для приготовления антигена) или изотопическим раствором хлористого натрия (для постановки реакции микроэгглитипации),

Образование и накопление специфических сперио'антител в организме подопытных животных определяли путец постановки реакции преципитации, шкроаггпкииибцин и пассивно;! гемагглю-тинацки.

Реакцию диффузной преципитации ставили в чашках ГЗэтри с применением 1% arepa Дифко на Соретноы буфере с рН-8,6.

Реакцию ипкроагглютинадаи (KÍA)' ставили не лредазтном стекле. При температуре 37°С смешивали каплз ни актированной сыворояки с каплей суспензии подвижных эпидидимелышх спер-, миев. Учет реакции проводили через 5-7 иииуг и оценивали в плюсах (++++,.+++, ++, +) в зависимости от количества склеившихся сперинев.

Реакцию пассивной гемэгглютинации (РПГА) ставили в плексигласовых яунках по методике Бойдз (1951). Сенсибилизацию твнизированных эритроцитов проводили райочей дозой спермаявного' антигена, приготовленного пр навей методика, растворимой антиген получали из эпидидкмальных спзр:люэ. С целью полного извлечения всех антигенных конпонеигов солевами растворами с pf[-?,2, экидидииаиьние спермин в виде 50% суспензии подвергали разрушению путем поперепейного ¿-3-х кратного .воздействия на них низких (-IS6°C) и высоких (+j9-<vO°C) температур с последующей гомогенизацией, цуттелированием и очистков хлороформом. Содержание растворимых белков в получением антигене было 6-8 ur/мл. Белки определяли по методу Лоури (1551).

Тигром считали иэксимэльное разведение исследуемой сыворотки, в котором наблюдалась агглютинация слермиев (в РШ1) или сенсибилизированных эритроцитов (в РПГА).

У экспериментально иммунизируемых аивотных наряду с определением уитра спермоан!Ител проводили.исследование белков сыворотки крови с помощью электрофореза нв бумаге по методу А.Е. Гурввча (1964). с

Для характеристики воспроизводительных функций коров учитывали время последнего отела, наличие осложнений во время родов и послеродовый период, количество дней от отела до появления первой охоты, интервалы мексду осеменениями, количество осеменений.

Состояние половых органов у коров во время охоты изучали

вйгинбльиьш и ректальный методами, о 'тзкке лабораторным исследованием эстрольноИ слизи. Определяли состояние слизистой ободочки ллагалица, глаголнциой части иеЗки изгки, шеечного квнале; иесюпококение, разиэрц, шшсиотеащт и сократительную способность аатк^} состояние яичников.

■ Анализ астральной слизи сроводили одновременно путей изучения кпогочи lk элементов в казнах из слизи, окрашенных по Ргазловетоиу и путей постановки иодафи цп роз а н в oil пробы Уайт-сзЛде, лродиохенаой Доксвиа СХИ,

1;скусст35!шоо осэионэпив корое осуцвсгвлялось г луб око ох-

даздонкш ce~enoii peicio или ивноцервикалынш аитодаии двухкратно в охоту с интервалы! в 10-12 чзсов, при этоы использовалось сеня с ода'йзиосгыэ не nine 0,4 балла.

С теп ьа ость определяли первоначально по реэулматаы ректального исследования через Z месяца посла последнего осеиеве-и;;я, а окончательно по .фактический отелам или абортам.

Резульгсгы опытов стйгисгическн обработали по В.В.УрЗеау (196?), Д.Ф.Рсяицкону (1967) и А.А.Сохвяу (1969).

РЗЗУЛЬТЛTU ИССЛЕДОВАНИЙ

¡ЖСЛЖКШ1&ДЫЮЗ ИЗУЧЕНИЕ КХ1УШШ £ШЦ1«1 У

KP0j;:-Ui03 НА СШРЖ КРУПНОГО РОГАТОГО С1С0ТА

Опит провопи »а 18 кроликах, кз которых 12 ни«у визировали, э в слуаили контролен. Иыиуниэ крова ли кроликов подкокно взвесь» эпкдвдаакьцьк споранов в стерильном изотонической растворе . хлористого пагрип. в 1мд. взвеси содержа лось около I алрд. спорииев и по 10000 ЕД. пен к цикли ко и стрептомицина. Ццыуниза-циа проза пи в 2 цикла. В перзои цикле кролики подучили через дс,(Ь 5 ихекций по I,i> мл.взвеси спериаев. ¿чихдрвал иеиду последней мъзкцией первого цикла u первой инъекцией второго цикла составил 7 д;:ей. Во второе цикле имауивээция проведена по окологичной схеме. ■ ■ ■

Ксцтрольнах кроликов раздолили на Z рзвнцо группы. Одна ' группа .сходилась под наблюденсен, о ввороЛ вводили лодкоано изоготический раствор хлористого натрия с ввткбиоткка^а по гэкой ze схеий, как к поделивши кровикоа.

Первые 1ШЕЬ инъекций взвеси сперинев кролики перенесли хорошо. Осложнений из иесгзх введений не отцечово, общее состояние оставалось хорошим. Во втором цикле ишуннзащш ошечана реакция во местах введений» Образовавшиеся л осла ннъекца'А желваки не рассвсиввикоь, превращались в горячае, плотице, болезненное припухлости, которые затеи некротизнровались и опор-гелий. Домино лестной реакции, отпечены наружная' ъ общем состоянии «азотных: сильное беспокойство в течение 10-15 минут после инъекций, учащенное дыхание, плохой вппетпг. * .

Сыворотки крова контрольных кроликов на прогяла кии всего опыта не реагировали со спермалышм внтигеаом, в то время как сыворотка ищу визированных животных нвчали реагировать по РЛГА на 6-7 день в разведении 1:5 - 1:10.

Титр спериоагглютининов постепенно увеличивался и достиг максимальной величины 1:5120 - 1:10240 на 12-14- день после окончания иммунизации. В это время кроликов обескровили, а полученную сыворотку ииофилизировали и она в дальнейшем служила контролем лри постановке реакций.

В'рзакции диффузной преципитации иммунные сыворотки реагировали со спериальным антигеном, тремя четкими лини™« преципитации.

Полученные данные свидетельствуют о тон', что спермин быка содержат це менее 3 антигенных компонентов, способных вызывать образование специфических слермоантител, а также местную и общи аллергические реакции. Спермоентитела в сыворотке крови появляются через 6-7 дней после начала иммунизации и достигают максимальных титров через 12-14 дней лосле ее окончания.

ЭКСПЕИ^ЕНТАЛНГОЕ ИЗУЧЕНИЕ ИММУННЫХ РЕАКЦИЯ НА ИЗОГШЫВ СЛЕШИ У . ТЕЛОК

Опт проведен на интвкгных телках совхоза "Ресовский" Ыинской области. По принципу аналогов сформировали 5 подопытных и одну контрольную группу. Телок первой (3 гол.), второй (5 гол.) третей (7** гол.) подопытных групп иммунизировали вну грима точно, дважды в период охоты с интервалом в 8-12 часов. В.матку вводили рзвто-цервмкалышм методом эпидидиманьиые епермии в изотоническом растворе хлористого натрия, Б одну охоту вводили 1,5-2 млрд. спермиев*

е

целок первой подопытной группы имиуниэироволи в течение 3-х, второй - 4-х и третей - 5-ти лоследовотельных половцх охот. Телок четвертой подопытной группы (4 гол.) иммунизировала внутримышечно в 2 цикле. В первом цикле 3 раза через день внутримышечно в облаоти шеи .вводили 1,5-2 илрд. сперм и ев на стерильном изотоническом растворе хлористого нагрия. Через 7 дней провели втррой аналогичный цикл иммунизации.

Телок пягой подопытной группи (5 гол.) 'иммунизировали спармиям«, находящимися в 20% растворе желтка куриного яйца. Три телки згой группа вмиунизироваая внутркиеточво по такой же схеме, как телок первой, второй и третей подопытных групп, а две-ввутримшиечно, как и телок чатверхоН подопытной группы.

Контрольных телок (б гол.) не иммунизировали.

После окончания иммунизации огщтных и контрольных телок случали с быком. Стельность определяли ректальный методом через 2 месяца после покрытия,, затем телок убили и.стельность определили вскрктиеы матки.

Сыворотку крови исследовали перед опытом, один-два резо в процессе опыта и перед случкой. Результаты исследований сыворотки крови по РПГА и РУЛ приведены в таблице I,

Тебиоца I.

Влияние количества иммунизация па величину титров спериоагглютининов в оплодотворяемоеть телок.

Т ~~ Те ¡ТеЯкТГе'тй три сТТе^иооГглюгиЛи- "¡"оказались Группа 1 К-во 1__нов _te тельными

1 i ! (го.юв)!яо «типизации 'после ии:иниз.| 1Í-BO ! (гол.)]

i К.:А 1 РПГА ! РЦА 1 РЛГ& ! % ■

I 3 1:1 1:6 1:20 1:40 г 66,7.

П 5 1:2 1:3 1:24 1:80 3 60,0

й 7 ' 1:5 1:2 1:29 1:88 2 28,5

1У 4 1:3 1:2 1:54 1:135 0 0

в начале наблюдения ' в конце наблюдения

к OFJ гроль 6 1*2 1:3 1:3 ' U5 5 35,3

Из таблицы видно, чго в сыворотке крови половозрелых телок содержатся иерыаль^ие спермоагглюгипияи в ¡¡иэких титрах, когорт с возрастом увеличиваются незначительно. Внутрииэточное введение сперш:ев £ период охоты способствует увеличению титров спериоагги.'пшкиов в организме к квотных. С увеличением количество Еиутраиоточних цшуниз&ций уойяичимзйтся » í;gí:us и грация спе-

цнфических алгител, в оплодотворяемоеть снижается. Ты;, шиле трехкратной, иииунпзации средние та три достигли величины 1:20 -1:40, четырехкратной - 1:24-1:80 и лятккрагноП - 1:29-1:88. В то время как в группа не иммунизированных телок они уьоличи незначительно. Оплодотворилось после трехкратной иммунизации 66,7%, четирехкрптпой-60 и пя1икраглоЙ-28,5^, в а конгролыюН rpyrfne-C5,3/i. После вну тршшиечиой иммунизации nltpu слораоаг-глюткиииов рсзг.0 возресли, а опло до ib оря о а ость снизилось до нуля.

Buy гриш точная и внутримышечная иануиизоциа юлок снимании, ввходящншюл в рьстворе жалисз куриного ялца, нрпводяг к образованию опериоагглвтияинов в титрах, не отличающихся по величине от титров, полученных при аналогична способах ищу низа цин сперминш без добавления келтка, Не установлено существенной разнкцы в оплодогворяэиостй мекду гругншш, иимунизиру-емнаи^сперияями или слершгяни с желгксы куриного яйца.

Наряду с определением титров сперыоагглютинипов изучали и спектр белков сыворотки крови. Установлено, что среди телок контрольной группы и иммунизированных внугриматочно в течение 3-х половых охот спектр белков сыворотки крови практически не .изменился. После четырех и пятикратной вну трииыочиой, а также внутримышечной ишуниээций количество альбуминов снизилось о 45% (в средней) до 43, 42 и 38$, о количество глобулинов возросло в основном за сче? гаыыэ-фрэкщш, при относительно неиз-uetiuou состоянии других г л обули новых фракций. При иммунизации спермиямв с желтком куриного яйца сохраняется подобная закономерность в изменении альбумпн-глобулкнового коэффициента. Однако в этом случае наряду о увеличением гамма-фракций наблюдается некоторое увеличение эльфа и бета-глобулинов. Это, невидимому, связано о реакцией организма на гетерогенные антигены иелтка куриного яйца.

Проведенный опт показал, что-существует взаимосвязь между титрами спермоантитея, числом иимуаизаций и результатами осеменений. Ззвксшостб мевду титрами спвриоаггшвтииинов и результатами осеменения представлены, в таблице 2.

Титр сыворотки lit-во !«и- !вот- 1h1jx U'i3 к их оказались

(стельны i ми -! нёс те л ь-!нымк

отр. I I

1:5 3 3 -

.1:10 4 3 I

1:20 5 5 -

1:40 'б г . 4

1:80 4 - 4

1:160 2 - 2

1:320 2 2

1:540 1 - I '

1:1280 2 . 2

а

Таблица 2. ¿.э тбмцц видно, чго опдодо-

Ошюдстзорпидость телок в творнемость практически не наг »гр ов'' с пе рн оо гг л юти н и н ов "Р" * «»4»*-

в сыворотко крови ке крови спермеагглютининов в

титрах до 1:20. Среди животных, имеющих в си в о ро псе крови спер-моагглюгинины в .титрах 1:40, наблюдается значительное снижение, а при титрах 1:80 и вше . полное отсутствие оллодотворе- .

нин.

Таким, образом, при внуЕри-паточном введении сперинев в период юхоты происходит изрим-мукизация телок, в результате которой образуются и накапливаются в организме животных специфические спермоантигела. С увеличением числа иимунпзаций титры специфических агглютининов увеличиваются и, достигнув определенной величины, отрицательно влияюI на оплодотвориекость,

К* ЛУННЫЕ РЕАКЦИЙ У КОРОЗ М ЛНТЩК1Ш СГ!ЕК,1::££

С целью контроля и оценки значения закономерностей, шяв-леиных в экспериментах по иммунизации телок, было проведено дальнейшее изучение иммунной реокпшюсгл корсь'к ^нзчл'енаи спермиев в процессе искусственного осеменения.

В совхозе "Ядановичи" Минской области для опыта подобрали 171 корову, у которых о!¿утствовали осложнения в течение родового и послеродового периодов. Возраст нивогных от 3 до 10 лет.. Во время осеменений квиникр-гинекологическими исследованиями с одновременным лабораторный а не лиэ о^ эстральной слизи был» ксаяючани клинические и субкпшшческие уормы эндометритов. Животные в стойловый период пользовались регулярнши прогулками 2 роза в сутки, а в летний период выпасались на культурных пастбищах.

Искусственное осеменение коров проводилось глубокоохлей-

денкыа семенем двухкратно в какду» охо?у, ыано-цервккадьнш методой. Кровь для серологических исследований брали в день осеменения или же спустя сутки.

Всех животных в зависимости о® чиола последовательных осеменений условно разделили на 5 груля. Ксрош первой группы (бб^ол.) были осеменена однократно,, второй (44 гол,) - двухкратно, третьей (23 гол.) - трехкратно, четверо (20 гол.) четырехкратно и пятой (12 гол.) осемененных 5 раз и более. У коров первой, второй и четвертой подопытных групп первая охота после отела проявилась в среднем через.50 дней, а у коров третьей и пятой групп - через 52 дня.

Результаты исследований сыворотки крови подопытных групп приведены в таблица 3. Из таблицы видно, что у коров всех подопытных групп ко времени первого после отела осеменения средние титры спераоагглютинилов в сыворотке крови были примерно одинаковые (1:6-1:9). Изучение накопления спераоегглэтининоа в сыворотке крови показало, что после каждого осеменения происходит закономерное увеличение титре сиермоагглютининов. Средняя величине титра спермоегглютининов повышается за счет увеличения числа животных с более высокими титрами специфических агглютининов.

Среди животных первой подопытной группы цаксинельнш титры 1:16 обнаружены по РПГА у I коровы (1,5£) и по ША у б коров (ЭД. Стельными по первой подопытной группе оказались 54

коровн (81,8^).

У коров второй подопытной группы ко времени второго осеменения средний титр.спермоагглютининов увеличился в 1,5 раза. Неряду с увеличением среднего татра воэрвсяо число животных',по сравнению с первый осеменением, о титром 1'Л6 (по РПГА) с I (2,35£) до 9 (20,5%) й 'по ША с I (2,3£) до 14 (31,®). Некси^ квяышИ титр 1:32 обнарунен у I коровы Стельными ока-

зались по второй подопытной группе коров (79,5$).

Средний титр сперйоагглюгининов в сыворотке крови коров третьей подопытной группа ко времени второго осеменения увеличился в 1,6-1,8 раза. Число животных с титреии 1:16 увеяичи-лось по сравнению с первым осеменением о 1 (4,3%) до 7 (30,4>>). Ивкскааяыш'Й титр 1:32 обнаружен у I (4.3%) животного. Во время

Табница 3.

Результаты серологических исследований кропи коров подопытных групп

Рс 0,05

й ' [ "тип ; . средние тигры и доверителыше г&эницы во время

г ЕЗрБ0ГО осеие- ! второго ссемене-!третьего осеие- 'четвертого осе- ¡пятого осеае-^ ! 1111 ! нения ! . якя ■' ! пения ! ыензния ! нения

РИГА 1:6(1:5*1:7)

ргц 1:3(1:7+1:9) ■

РПГА '1:6(1:5+1:7) ' 1:10(1:9+1:11)

ш , 1:6(1:7+1:9) 1:13(1:11*1:15)

РИГА 1:7(1:6ч1:8) 1:0(1:9+1:14) 1:15(1:13+1:21)

т 1:9(1:8+1;II) 1:13(1:11+1:15) 1:16(1:13+1;19)

РИГА 1:6(1:4+1:9) 1:13(1:9+1:14) 1:19(1:14+1:25) . 1:23(1:19+1:32)

Р-!А 1:9(1:7+1:11) 1:18(1:13+1:20) 1:23(1:18+1:28) 1:32(1:24+1:40)

РИГА 1:6(1:5+1:7) 1:14(1:11+1:16) 1:20(1:18*1:27) 1:25(1:20*1:3*) 1:64(1:35*1:123)

РдА 1:8(1:7+1:9) 1:15(1:14*1:23) 1:24(1:20+1:29) 1:33(1:26+1:42) 1:76(1:44+1:130)

j (

третьего осеиокенкя средний тигр слериоагглютининов бил no Kin 1:16 и до РПГА 1:15, т.е. он увеличился по сравнению с пиром перед первый осеыенениен в 1,8-2,1 разе. Увеличилось число животных с титрами Л :16 до 19 (43,5%) и 1:32 до 4 (17,4$). üексиааяыгае^титри сдериоагглютининов к ыоиенту третьего осеменения не превиыоли величины 1;3£. Стельнши оказались пи даннрЙ группе 16 коров (?a,3;í).

Результаты имцунологических исследований сыворотки крови коров в гечзние трех последовательных подовых охот свидетельствую« о той, чю после каждого осеыенения в сыворотке крови увеличивается содержание ene piso агглютининов, но титр их не превышает величины 1:32. Наблюдаемая некоторэн розница в результатах осеменения коров первой,-второй и третьей групп (81,8%; 79,5; 78,3%) недостоверна (Р >0,05). С дедова ¡геньяо, увеличение тизра спериоэгглютинииов в сыворотке крови коров после каждого осеменения в течение грех последовательных охот не оказывает отрицательного влияния на результаты осеменения*

В сыворотке крови коров четвертой подопытной группы средний титр спермoarглютининов во время второго осеменения был по РМА 1:18 к РПГА 1:13 т.е. увеличились в 2 разе по сравнению с титром нормальных сперыоагглютининов. Число животных о титрами 1:16 увеличилось с 10 до 40$ и 1:32 о 5 до 20%. Цаксвмаль-ный титр 1:64 обнаружен у 5% "животных. Во время третьего осеменения средний титр спериоаггимтинанов был по PIJA 1:23 к до РПГА 1:19, т.е. он увеличился по сравнении с титрами нормальных спермоагглютининов в 2",б - 3,1 раза. Увеличилось число яиьотнше с титрами 1:32 o I £5%) до 6 (30%). Число животных с максимальный тн трои (1;64) спермоагглютижшов не увеличилось. К моменту четвертого осеиенения средний татр спериоэггиютининов увеличился в 3,4-3,8 раза и составил по РИА.1:32 и по РПГА 1:23. Особенно резко увеличилось число животных с высокий» титрам* спермоагглютинивов. Так, тигр 1:32 обнаружен у 10 коров, что составляет 50%. Максимальный титр I¿64 обнаружен у 3 коров (15%). Стельными оказались после /четирех осеиенений 12 коров (60%).

В сыворотке крови коров пятой группы средниЛ титр сперыоагглютининов к моменту 5-G осеменений увзличился в 9-10 раз

•SECS

О !B к tt

й s О (О

О № S О

о ж е о

Í& £ ш н

Я Sc W <в

a W и

® 4 к» г

t

оплодотворяемость у коров в зависимости от

ВЕЛИЧИНЫ ТИТРА СПЁШОАГГЛКЯИНИНОВ В СШЗОКШЩ КРОВИ.

Изучение данного вопроса провели на 214 коровах. Результаты имаднологических исследований по кавдоиу животному сравнили с результатами оплодотворения. Полученные данные приведены в таблице 4.

Таблица 4.

Оплодотворяемоеть у коров в зависимости от величины тигре спермоэгглютинииов в сыворотке крови. .

. аг^тДГ I Количество \ из них оказались . ~~

леднегоЯосеме- I киготных | стельными ¡нестепьншГ' нения- ' ! К-во [ а ' ' 1Н-во I «

! I (Гол.) 1 > I (гол.) 1 36

I ; 4 44 39 88,4 5 11,6

I : 8 66 56 84,8 30 15,2

X :16 41 - 33 . 80,4 .8 19,6

I :32 20 8 40,0 12 60,0

I :64 18 - - 18 100

I . :Х28. 15 ■ - 15 100

I :256 6 - - ■■ 6 . 100

I : 5X2 4 - 4 100

Из таблицы видно, что осеменение оказалось результативным, когда титры спермоагглютинивов в сыворотке крови были в пределах от 1:4 до 1:32. При этом самая высокая оплодотворяв« мооть (80,4-88,4$) отнечеяа у коров, в сыворотке крови которых титр сперыоагглютивинов был 1:4 - 1:16. Это свидетельствует о том, что наиболее благоприятные условия для продуктивного осеменения коров сохраняются лри титрах сперц о э гглиги н оноэ до 1:16. По результатам исследований титр спермоагглютининов 1:32 является критический, так как результативность осеменения в этом случае составляет лишь 40%. Все хивотные, в сыворотке крови которых титры спериоагглютининов были 1:64 и выше, не оплодотворились.

Следовательно, прослеживается определенная законоиернооть, что с возрасталней титра специфических агглютининов црогнв сгирыиев ошюдотворясиосгь у коров' снижается. Слермоагглютини-

ш в титре до 1;1б не оказываю! отрицательного влияния на оплодотворение, а при титрах 1:64 ц выше оплодотворение не наступает.

ИШУКШЕ РЕАКЩШ У КОРОВ НА АНТИГйШ ШаЕШВ ПРИ ПОСЛЕРОДОВЫХ ОСЛОЖНЕНИЯХ.

Изучение'этого вопроса провели tía 10 коровах. Родовой процесс у 5 коров этой группы был удлиненным (по причина крупных плодов или слабых схваток и потуг), а в послеродовом периоде у 3 из них.наблюдалось задержание последа. У всех нивотных развились клинические формы эндометрита. После лечения прекратилось вида пение из половых путей катарального и катарально-гнойного истечения. Однако ректальным исследованием обиаруне но некоторое увеличение и атоничность мышечных стенок ».'чтки. Первая охота у коров наступила, в среднем по группе, через 65 дней после отела. Все пробы зстральной слизи, полученной до осеменения, показали положительную реакцию Уайтсайда, а в мазках-отпечатках обнаружены лейкоциты, преимущественно неЯпрофильного ряда. Установленные отклонения служили нам основанием считать, что у животных имеются субклинические эндометриты.

Аналогичные исследования провели в течение 4 последовательных половых циклов. Установлено, что в точение первых двух половых циклов характер изменений в половых органах оставался примерно одинаковым. К моиенгу четвертого осеменения со стороны матки не выявлено клинически выраженных изменений, а эстральная слизь была стекловидной. Тем не менее, при исследовании последней обнаружено небольшое количество лейкоцитов, хотя проба Уайтсайда в большинстве случаев была отрицательной или слабо положительной.

кивотншс но мере прихода в охоту искусственно осеменяли. Во время каждой охоты иоследовали сыворотку крови. Наблюдения проводили в течение пяти последовательных половых циклов.

Средний титр слермоагглютининов в сыворотке крови коров в первую после отела охогу был по PUA 1:6 и по РПГА 1:4.

Во,время второго осеменения средний титр ene pitos ггяютини-нов достиг уровня 1:20 во РИА и 1:14 по РПГА, т.е. он увеличился в 3,3-3,5 раза. Во время.третьего осеменения титр был по RÍA и РПГА 1:27, т.е. увеличился по сравнению с иоходншш

данными а 4,5-6,8 раза. К четвертому я пятому осеменению средний титр, спермоагглютинянов был по РИА 1:40 и 1:90, а по РПГА 1:32а 1:76, т.е. по сравнению с исходными данными увеличился соответственно в 6,7-8 и 15-19 раз.

Полученные данные свидетельствуют о том, что иммунный ответ на спетши.вводимые в половые пути при искусственном осеменении у коров, страдающих скрытыми формами эндометритов, в 2-3 раза сильнее, чем у здоровых животных.

Таким образом, при искусственном осеменении коров с субклиническими формами эндометрита может значительно быстрее возникнуть стойкая формв бесплодия, при которой лервбпричиной будут патологические процесса в гениталиях, а впоследствии ■ высокие титры .сперм о агглютининов.

ЗЛШ1ШЦИЯ СПЕраОАГГВОТКНИНОЗ В 1ШУШШ ОРГАН&ШЕ БЕСПЛОДНЫХ НОРОВ.

£о настоящего времени лечение иммунобиологически обусловленных форм бесплодия не разработано. Единственный дуть по недопущении появления таких форм бесплодия - соблюдение всех зоотехническо-ветеринарных правил по кормлению, содержанию, уходу и эксплуатации маточного поголовья, а также правильная организация и технология проведения искусственного осеменения. К сожалению, не всегда удается своевременно выявить ту или иную причину пеоплодотворения и принять иеры по устранению зтиоло-' гических факторов, что является причиной безрезультатных осеменений в течение нескольких половых циклов. Спермин; поступающие в матку при неоднократном осеменении изоиммунизируят организм самки. При этом уровень накопления, спермоантител все более возрастает и, достигнув определенной величины, отрицательно влияет не процессы оплодотворения.

Лечение в таких случаях оказывается безуспешным, как ив равной мере применение нейротропных и гормональных препаратов. Коровы, безрезультатно осемененные в течение длительного периода времени, как правило, выбраковываются, хотя при устранении иммунных (¿акторов не оплодотворения срок эксплуатации их можно продлить. Поэтому разработка мероприятий по борьбо с имнуно-лоп,чески обусловленным бесплодием шеег ваилое значение..

¡¿злостно, что иатптела из организма еквотных выделяются ■ не только с ко^оцью секреции « экскреции, но и постоянно ней-

тредизуются окислением, связыванием, растворением и т.д., т.е. происходит' их элиминация. Исходя из этого, мы изучали в дина-маке элиминацию слермоагглютининов в организме бесплодных воров. С этой целью Сын проведен оды® на 2-х группах много-крэгно перегуливающих коров. Клинико-гинекологическими исследованиями животных в лабораторным анализом астральной слизи была исключены*субклиническне форма эндометритов.

В первую'группу подобрали 10 коров, которых безрезультатно осеменяли от 3-х до 7 раз, после чего очередное осензнение было пропущено.Во вновь наступившую охоту после пропуска жи~ 'зогные были снова осеменены. Серологическое исследование крови на содориааие спермоагглагининов проводили во время последнего осеменения перед пропуском я в период очередного осеменения после пропуске охоты. Остановлено, что средний тигр спер-моаггнютиванов перед пропуском осеменения был по РИГА 1:35 и по РИА 1:3&, в через 42 дня он достиг величины 1:40 по РПГА и 1:4? по РМА. Осеменение коров после пропуска одной охоты оказалось безрезультатным. Подученные результаты с видагельствуюг о том, чю концентрация сперм оагглютимнов в сыворотке крови ■коров после пропуска одного осеменения не снижается, а нарушенная способность к оплодотворению не восстанавливается.

Во втору» группу было также подобрано 10 коров, безрезультатно осемененных от 4 до II раз, в сыворотке крови которых обнаружены высокие титры спермоагглютвнинов. Средняя величина титров спермоегглютининов во время последнего осеменения была по РПГА 1:55 (1:30-1:102), по Ш 1:79 (1:36-1:175).

Титр агглютининов резных сывороток колебался от 1:16 до ^¡256. Дальнейшее осеменение коров было прекращено.

Отсутствие осеменения в течение 2-3 последовательных половых циклов-способствовало-снижению концентрации спермоагглю-тининов в сыворотке крови в 6,5-7 рез. В средней по группе титры спермоа гглютиников за 84±3,2 дня снизились по РПГА с 1:55 до 1:8,5, а по РИА 0.1:79 до 1:11' (таблица 5).

Из таблицы видно,.что границы титров находятся уже в пре-делех'ог 1:4 до 1;32. Осеменение коров после снижения тигров спермоагглптининов оказалось успешным. Пять из десяти оказались стельными после первого осеменения и две после двух осеменений.

Таблица 5

Йинашпса элиминации спермоагглютининов в организма коров после пропуска двух-трех осеменений

__' ■__Р* 0.05

|-1|й 1К {Максимальные титры }» ,п ¡иаксииэльные титры живот- (осеме-!сп0Рмоаггяитивиаов ¡йоопу- спермоагглютининов ии? ! нйпиЦ во время последнего [ после пропуске осе-

ных |нении I ^осеменения , Ж^1®} иеиений

! , ! Я1ГА ! Ш I { М'А ■ I Ш-

2087. 4 ' 1:64 1:64 . 32 1:16 1:16

292 4 1:32 1:64 92 1:4 1:8

60 5 1:32 1:32 80 1:8 1:8

56 II 1:256 1:256 83 1:32 1:32

506 5 1:64 '1:32 . 70 1:16 1:8

1632 ' 4 1:32 1:32 . 78' 1:8 1:16

678 4 1:16 1:16 90 1:4 1:4

'>80 5 1:16 1:32 70. 1:4 1:8

207 7 . 1:256 1:512' ■ 101 ■1:8 1:8 '

257 б 1:128 1:128 91' 1:16 ■ 1:32

84-3,3

Средние титры 1:55 . 1:78 ' 1:8.5 ,.

Доверит.граа. 1:30+1:102 1:36*1:175 1:5+1:12 1:7+1:17

Следовательно, состояние бесплодия, обусловленное высоким содержанием спермоагглютининов в сыворотке крови коров яв-. ляется временным и обратимым процессом. Элиыинвция иммунных спермоагглютининов происходит в среднем.за 84 дня до уровня нормальных, обнаруживаемых у животных яеред первым осеменением. При этом временно утраченная способность к оплодотворению восстанавливается.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИЗУЧЕНИЯ СТАТУСА СГКГШАШЮТШШНОВ ■ У КОРОВ В НЕКОТОРЫХ ЖЗНйСТЗАХ БССР

С организацией крупных хозяйств особенно остро встает -проблема воспроизводства стада, возникает необходимость осве-: щевия многих сторон нарушения плодовитости при содержании в новых условиях. Предыдущими нашими исследованиями установлены определенные закономерности величин титра специфических спер- > мэльйых агглютининов от количества осеменений яизотных и влия-

нив их ва оплодотворение* Эгй закономерности ми проверили не животных ш хозяйствах, находящихся не обслуживании разных Государственных племенных станций и в разных агроклиматических зонах республики.

Всего иссгадовели 640 коров из 20 хозяйств Гродненской, Брестской, Витебской и ЫогилевскоЙ областей. Б зависимости от кратности осеменения всех животных условно разделили на б групп: в лервой-70 воров, которые находились в послеродовом периоде; во второй-90, которых осеменяли один раз; в гретьей-бО, осе-»еиенных две раза; в четвертой-157, осемененных три раза; в пятой-98, осемененных четыре раза; и в шестой-145 которых осеменяли многократно.

Животных подвергли тщательному клинико-гинекологическому обследованию. При этом учитывали общее состояние организма, время последнего отела, характер тачания родов и послеродового периода'-(и8-аиамиёза),"'йате'рв8л от отела до первого осеменения' .и лив личность охот.

. У животных первой группы кровь брали на 20-30 день после отела, а у остальных - в день осеменения или же в течение первых двух дней посла осеменения. Результаты исследований сыюротл ки крови коров первой группы показали, что к моменту оконченая инволюции.половых органов концентрация спермоагглюгининов в сыворотке крови находится в пределах физиологической норш (от 1:4- до 1:20). ■ ■

Сравнивая результаты исследований крови коров второй, третьей и четвертой подопытных групп установлено, что с увеличением кратности осеменения увеличивается число животных с более высокими титрами спермоагглюгининов. Однако максимальные титр« епермоагглютининов у животных, осемененных в течение одного, двух и трех последовательных половых циклов, не превышают величины 1:32-1:40. Причем, титры 1:32-1:40 обнаружены лишь у 1,411,455 животных. Среди коров, осемененных в течение четырех последовательных циклов, высокие титры епермоагглютининов (1:64 и вше) обнаружены от 12,2 до 18,3 процентов сяучвев.

В сыворотке крови коров, многократно осемененных (гр.б), уровень 'слермоагглютининов значительно выше ло сравнению с яи-вотными других групп. Среди этой группы от 21,3 до 45% коров содержат, в сыворотке крови спермоагглвгикины в титрах 1:64 и выше. У отдельных животных мтрй достигают величины 1:512-1:640

Результаты изучения спермаяьнсго статуса у коров в некоторых хозяйствах республики свидетельствуют о том, что многократное осеменение сопровождается непрерывный увеличением коицев-трации сперноагглютининов. Причем, если при осеменении в течение трех пес ледовательнах циклов максимальные титры не превышают величины 1:32-1:40, то четырех и особенно многократное ' осеменение приводит к увеличению числа животных с титрами 1:64 и ваше, которые отрицательно.влияют на оплодотворение у коров. Следовательно, если при осеменении в течение 4-5 последовательных циклов не устранена первопричине неоплодотворения, то ■ впоследствии у многих животных возникает стойкая форма бесплодия,обусловленная высоким сс-рержакием спермоагглютинанов в сыворотке крови.

Таким образом, в эксперименте, в научно-производственном опыте и в Условиях производства доказано, что а оргенизма крупного рогатого скота имеются нормальные слермоагглютинины, которые не влияют отрицательно на оплодотворение. При искусственном осеменении происходит иммунизация коров антигенами спермы* С увеличением числа осеменений, что в начале, обусловлено различными экзогенными и эндогенными причинами, титр спермоагглютининов в органвайе корсв непрерывно возрастает, а оплодотворение снижается. При титре спермоагглютининов в сыворотке крот коров 1:64 и выше, оплодотворение практически не наступает. Аля того, чтобы усыновить эту причину необходимо пропустить 80-30 дней, дня элиминации иммунных сперыеяьных агглютининов.

выводи

I. С пери и и бкка обладают антигенными свойствами и способны вызывать образование специфических антител, а такае местную и общую аллергические реакции при парентеральной введении кроликам1 и крупному рогатому .скоту., Спармоантителе в сыворотке крови появляются.на 5-6 день лосле начала иммунизации и достигают максимальной .величины через 12-14 дней после ее окончания.

Внутриматочное введение спзрмиев ингакгнш телкам в период охоты в течение трех, четырех и пяти последовательных подовнх циклов приводить: появлению и накоплению в организме иммунизированных животных специфических спермоагглюткнинов. Величина титров специфических антител возрастает по «ере увеличения.числа внутрима точных ишунизэций, о ;чнсло стельных животных соответственно сниянется.

Слериоаггдютивины в титрах до 1:20 не влияют ив результат осеменения* Отрицательное действие сперыоэгпшгинкнов проявляется в тот период, когда их титры достигают величины 1:64-1:80 и выше. '

3. £елток куриного яйца, как один из компонентов разбавителя спермы, не сникает интенсивность образования и накопления опериоагглютининов в организме крупного рогатого скота лри одновременном его введении со сяериигши.'

V 4. В сыворотке крови интактных телок имеются нормальные спермоагглютинины в низких титрах: по мере физиологического созревания титры несколько увеличиваются (не выше чей 1:10), но не оказывает отрицательного влияния на результаты осеменения,

5. Изменение фракционного состава белков сыворотки крови, при экспериментальной иммунизации телок гомологичными сперьш-ями, находится в прямой зависимости от способа иммунизации и числа введений антигена. У контрольных телок и иммунизирован-них внутримагочно-Б течение трех последовательных циклов состав фракций белков сыворотки крови не изменяется. Сдвиг альОумкн-глобуликового соотношения в сторону увеличения содержания глобулинов всдедствии нарастания количества гамиа-^ракций, насыпает лишь после 4-5 кратной внутриматочной и особенно внутри-

иьшечной ишуннэвций. Вяу гримегочная и внутримышечная иммунизации спермиями с желтком куриного яйца сопровождается увеличением глобупиновых фракций, при резком снижении альбуминов. Увеличение количества гемма-глобулинов в сыворотке крови иниувиэировен-ных животных совпадает по времени с наиболее высокими титрами специфических спермоаатитед.

6. Содеряаниэ в сыворотке крови коров спермоагглютининов в.титрах до. 1:32 не сказывает отрицательного влияния не результаты осеменения. Результативность осеменения снижается до 37»5-40^', когда титр спермо эгглютин и а ов в сыворотке кровц коров достигает величины 1:32-1:40. При титрах елермоагглютининов в сыворотке крови 1:64-1:80.и выше результативность осеменения практически снижается до нуля.

'7. Осеменение коров в течение трех последовательных половых циклов, при двухкратном введении семени в одну ¿хоту, сопровождается образованием и накоплением в сыворотке крови опер-иоагглютининов в невысоких титрех и это не может повлиять на оплодотворение у коров. Осеменение коров в течение четырех, пяти и более последовательных половых циклов сопровождается . дальнейшим накоплением спермоагглютвнинов в сыворотке крови* □ри этом процент животных о высоким титром спермоагглютинивоь (1:60-1:80 и выше) с каждым последующи осеменением возрастает.

3. У коров в условиях производства высокие титры спермоаг-лютининов в сыворотке, крови обнаруживаются лишь после четырех« пяти и более лоследовательных осеменений. Число животных о высокими титрами (1:64-1:80 и выше) слерыоегглютининов в отдельных хозяйствах, достигает 12,2~18>3 процентов после четырех последовательных осеменений и 21,3-45 процентов после многократных осеменений. ..'' ' '

9. Интенсивность образования и накопления сперыоагглютиня-нов в организме коров с клиническими и субклиническими формами эндометритов в 2-3 раза вше по сравнению со здоровыми живот- ' нымп.

10* Элиминация спермоагглютивинов, образовавшихся и Накопившихся в орггшизие коров в высоких титрах поела многократных осеменен«Л,происходит в среднем за Ь0-90 дней. После этого периода титры достигают величин не препятствующих наступлению

стельности. Необходимыи условней снижения содержания иммунных спермоагглюЬгаинов является прекращение осеменения таких животных в течение двух-трех подовых циклов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРИЛОЖЕНИЯ

1. Осеменение коров, у которых диагностировались клинические форма эндометритов, проводить только после полного их выздоровления.

2. У многократно перегуливающих коров, при отсутствии патологических изменений в половых.органах, следует исследовать сыворотку крови на ярисутсЬвие спермоаггпютининов. ¡¿ивот-ных у которых тигр агглютининов достигает величины 1:64 и ваш, не следует Ьсеменягь в течение 80-90 дней.

2 3

СШССК РАБОТ О ПУ Б ЛИКОВ А ИНЫХ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИЙ.

1. Способ получения эпид«дймалЕных сперыяев. "Ветеринаразя наука - производству", Труды БелНИВИ, т.XX.197?.

2. О возысвнооти ввдтринаточной иммунизации крупного рогатого скота гомологичными спершнши, "Ветеринарная наука-производству", Труды БелНИВИ, т. Я, 1973 (в соавтор, с Ивановым А.Т.)

3. Влияние, иммунных реакций на оплодотворяемость крупного рогатого скота. Известия АН БССР, серия с/х наук, 1973, на белорусском языке (в соввт. о Ивановым А.Т.).

Зависимость иммунологической активности сыворотки крови .крупного рогатого скота от кратности бсеменения. "Достихения ветеринарной науки и передового опыта - животноводству", Межведомственный сборник, Ыинск, Изд. "Урожай", 1974 (в соввт. с Кваповьм А.Х.).

■МАТЕРИАЛЫ диссертации ДОЛОЖЕНЫ :

I. Но заседании Ученого Совета Белорусского научно-исследовательского- ветеринарного института, март, 1974;

Подиямяо х печати 7.У.74 г. Формат 60 х В4 ¡/¡д Пвч.л. I 3*ыа 307. Тар«ж 130« Отпечатав« м ротллрвнта БИМСХ. Беспллт но.

Минск, ЛакшскмЙ пр. &9, ж, |