Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Роль синегнойной палочки в этиологии желудочно-кишечных заболеваний молодняка

ГОСУДАРСТВЕННАЯ КОМИССИЯ СОВЕТА МИНИСТРОВ СССР ПО ПРОДОВОЛЬСТВИЮ И ЗАКУПКАМ

Воронежский сельскохозяйственный институт имени К. Д, Глинки

На правах рукописи

ШАРОНИН СЕРГЕЙ АЛЕКСЕЕВИЧ

УДК 619:579.841.11:616.33/34 ]:63б,03

РОЛЬ СИНЕГНОЙНОЙ ПАЛОЧКИ в этиологии ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ МОЛОДНЯКА

16.00.03—ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Воронеж—1990

Работа выполнена на кафедре эпизоотологии и микробиологии Воронежского сельскохозяйственного института имени К. Д. Глинки.

Научные руководители:

Официальные оппоненты:

Ведущая организация

доктор ветеринарных наук, профессор Б. Т. АРТЕМОВ,

кандидат ветеринарных наук, доцент Л. И. ЕФАНОВА

доктор ветеринарных наук, профессор А. Г. ШАХОВ,

кандидат ветеринарных наук, доцент А. В. КУЗЬМИН

Белгородский филиал Всесоюзного института экспериментальной ветеринарии

Защита диссертации состоится „ ^ " 1^^/1990 г.

часов на заседании специализированного совета

К. 120.54.03 при Воронежском сельскохозяйственном институте имени К. Д. Глинки по адресу: 394012, г. Воронеж, ул. Ломоносова, 114-а, Ветклиника ВСХИ.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института по адресу: 394012, г. Воронеж, ул. Мичурина, 1.

Автореферат разослан _" 1990 г.

в

Ученый секретарь

специализированного совета,

доцент Т. Н. РАКОВА

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность темы. В этиологии желудочно-кишечных и респираторных заболевании молодняка сельскохозяйственных животных, в условиях интенсивного ведения животноводства, наряду с патогенной микрофлорой, повысилась роль условно-патогенных микроорганив-мов. Концентрация поголовья на малых площадях, изменение микроклимата в помещениях способствуют накоплению условно-патогенной микрофлоры, которая при пассаже на животных усиливает свои вирулентные свойства и может вызывать массовые заболевания у новорожденного молодняка.

Данные литературы последних лет свидетельствуют о возрастании роли синегнойной палочки, как этиологического фактора при заболеваниях сельскохозяйственных животных.

Эпизоотслогические особенности синегнойной инфекции, ее диагностика, а также методы профилактики й лечения до последнего времени выяснены недостаточно. Среди ученых, занимающихся данной инфекцией, нет единого мнения о роли Ре.аегие1пова в патологии животных. Некоторые авторы (В.Ф.Шаталов с соавт.,1986, В.П. Радченкоп с соавт., 1987} отрицает значение этого возбудителя в патологии животнух. В то же время, ряд отечественных и зарубежных ученых доказали, что сйнегнойная палочка является этиологическим фактором при заболеваниях сельскохозяйственных животных. Опытами 'В.11.Парус'.ова, 1974, Н.Н.Михайлова, В.А.Зудилина, 1975, Е.В.Кочер-гиноЯ-НикитичскоЙ, 1986, 1987 и др.было установлено, что инфицирование коров синегнойной полочкой сопровождается развитием эн* дометритов, мертворождаемостьп, абортами, гибельп эмбрионов, маститами, а у быков-производителей она вызывает воспаление органов мочеполовой системы (А.Г.Шипкцин, 1981, В.А.Зудияии,1984 и др.). У пушннх зверей псевдомоноз протекает в виде геморрагического воспаления легких и септицемии Ш.К.Седов, 1981, Е.П.Данилов,

1984}. Доказана, также Этиологическая роль возбудителя при заболеваниях птиц (3.И.Артемьев, Н.А.Радчук, -1976,1977, В.Т.Больных с совет., 19й7, С.Г.Африкантов с соавт., 1908). У молодш.ка сельскохозяйственных животных инфицирование Ps.aeruginosa вызывает же-лудочно-кшечные и респираторные заболевания {З.М.Ильина, 1975, В.К.Проданов.с соавт.,1983, Б.А.Корж, Я.Д.Злонкевич, 1979,1988).

В то же время, как показывает практика, многими ветеринарными лабораториями не уделяется должного внимания данному возбудителю, что связано с отсутствием единых подходов в. диагностике псевдомоноза, а также налой специфичности клинических симптомов и сходством с заболеваниями другой этиологии, что значительно затрудняет дифференциации заболеваний молодняка и правильную организацию мероприятий по борьбе с ними. .

Неизученность патогенеза болезни, высокая устойчивость возбудителя к антибиотикам, отсутствие специфических средств терапии и профилактики требуют всестороннего изучения роли синегнойной палочки в этиологии заболеваний молодляка сельскохозяйственных животных.

Учитывая приведенные сообщения, остро встает вопрос.о необходимости более глубокого изучения вопросов патогенеза, усовершенствования диагностики, лечения, средств и методов профилактики, а также выяснения роли отдельных- факторов, способствующих и предрасполагающих возникновению болезни у телят.

1,2. Цель и задачи исследования; В нашей работе ставилась цель: изучить роль -Ре. aeruginosa в этиологии заболеваний те ля? раннего возраста, разраб-отать и предложить практике подходы к распознованию болезни и определению путей л методов борьбы с синегнойной инфекцией.

Для решения этих вопросов поставлены следующие задачи:

1. йзучг.?ь культуральные, морфологические, тинкториальные, биохимические, патогенные и антигенные свойства ытаммов

Рг,. aeruginosa , изолированных из патологического материала от павших телят и из спермы быков-производителей.

2. Изучить чувствительность выделенных штаммов Ps.aeruginosa к антибактериальным и дезинфицирующим препаратам.

3. Определить в эксперименте этиологическую роль синегноЯ-ной палочки в патологии телят раннего возраста..Изучить клиническую, патологоанатомическую и морфологическую картину при псевдо-моноэе телят.

1.3. Научная новизна. Изучена распространенность синегной-ной инфекции в-хозяйствах Воронежской \\ Липецкой облэсте5и Экспериментально доказана роль Po.aeruginosa в этиологии заболеваний телят раннего возраста. Изучена выживаемость возбудителя во внешней среде, а также чувствительность его к действию антибактериальных и дезинфицирующих препаратов.

1.4. Практическая ценность работы. Полученные данные расширяют имеющиеся сведения о синегнойной инфекции у молодняка сельскохозяйственных животных. .Предложены методы лабораторной диагностики псевдомоноза, а также средства терапии и профилактики данного заболевания.

1.5. Апробация работы. Основные материалы диссертации изложены и обсуждены на Всесоюзной конференции "Эпизоотология, эпидемиология , средства диагностики, терапии и специфической профилактики инфекционных болезней, общи* для человека и животных" (Львов,' 1988), на региональной на:учно-практическоР конференции "Вклад молодых ученых ДЧЗ в интенсификации сельскохозяйственного производства в новых условиях хозяйствования" (Воронен, 1989) и научных конференциях профессорско-преподавательского составе,

научных сотрудников и аспирантов ветеринарного факультета Воронежского сельскохозяйственного института имени К.Д.Глинки (Воронеж, 1989 и 1990гг.).

1.6. Публикация результатов исследований. Основные положения диссертации опубликованы в 4 научных статьях.

1.7. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 137 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений и списка использованной литературы. Работа содержит 16 таблиц и иллюстрирована 12 рисунками. Список литературы включает 228 наименований, из них 53 иностранных авторов.

2. МАТЕРИАЛЫ И ЫЕТОДО ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в период с 1987 по 1989 год в лаборатории кафедры эпизоотологии и микробиологии Воронежского сельскохозяйственного института им.К.Д.Глинки ив хозяйствах Воронежской и. Липецкой областей.

В процессе выполнения работы были использованы методы: опи-зоотологический, экспериментальных исследований, клинический, па-тологоанатомический, серологический, гематологический, бактериологический и гистологический.

Бактериологическому исследованию подвергнуто 144 трупа телят и 21 труп поросят, в опытах было использовано 322 белых мыши , экспериментальное заражение проведено на 5 телятах. Выделено и изученр ОЙ итаммов Ра.аегие1поаа , из которых 12 были изолированы из спермы быков-производителей, 70 - из трупов молодняка сельскохозяйственных животных, в том числе 60 штаммов выделено из патологического материала от пэеших телят, 10 - из трупов поросят. Б рябого использовано 12 эталонных штаммов

коллекции Хабс, предоставленных ВГПШ ветпрепаратов.

Посевы из патологического материала от павших животных проводили на МПА, Ш1Б, среду Эндо и селективную питательную среду с н-цетилпиридиний хлоридом (К - ЦДХ). У выделенных культур изучали морфологические, тинкториальные, биохимические, серологические и патогенные свойства по общеприняты?-! методам в бактериологии.

Для идентификации культур синегнойной палочки использовали схему, предложенную С.К.Борисовой и И.С.Богатовой (1983). Пигмен-тообрэзование определяли по методике, описанной В.А.Зудилиным (I9B2).

Для определения окислительного или ферментативного типа расщепления глюкозы использовали среду Хыо-Лейфсена в модификации Л.Г.Воронежской (1970). .

Серологическое типирование'выделенных культур проводили методом постановки реакции агглютинации на стекле с использованием поливалентных и моновалентных сывороток для диагностики псездомо-ноза, согласно "Временного наставления по применению набора 0-аг-глютинирующих сывороток для диагностики псевдомоноза" (Утверждено Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 15 декабря 1982 года).

Патогенность культур возбудителя изучали на белых мышах массой 18-20 граммов путем внутрибрюшинного их заражения смывом агаровой культуры в дозе Q3-Q5 мл в концентрации 500 млн.микробных клеток в I мл.

Чувствительность выделенных культур к антибактериальным препаратам определяли согласно "Методическим указаниям по определению чувствительности к антибиотикам возбудителей инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных" (Утверждены Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 30 октября 1971г.). Для этого

применяли метод диффузии в агар с использование« стандартных дисков, содержащих антибиотики. Количественную чувствительность определяли методом серийных разведений в жидкой питательной среде. За минимальную подавляющую концентрацию принимали наименьшую концентрацию антибиотика, вызывающую полную задержку роста микробов.

Аминокислотный состав белков микробных клеток Ps.aeruginosa определяли на автоматическом аминокислотном анализаторе ААА-339.

Выживаемость культур синегнойной палочки на объектах внешней среды определяли путем инфицирования тест-объектов (доска, кирпич, вода, почва, навоз, комбикорм) суточной агаровой культурой, с последующим посевом через определенное время проб на селективную питательную среду с N -ЦДХ.

Действие дезинфицирующих средств, оптимальную их концентрацию и экспозицию определяли путем инфицирования тест-объектов смывом суточной агаровой культуры Pa.aeruginosa , с последующим нанесением различных дезинфицирующих средств. Определение дезинфицирующего действия проводили по методике А.А.Полякова (1975).

Опыты по экспериментальному заражению телят культурами Рз.aeruginosa были поставлены на 5 телятах 7-8 дневного возраста,

•Животных заражали смывом суточных агаровых культур синегнойной палочки, выделенных ранее от павших телят, путем.перорально-го, внутривенного и внутритрахеального введения разных доз возбудителя. За опытными телятами в течение 2-х недель велось клиническое наблюдение с-ежедневным измерением температуры тела, пульса и частоты дыхания утром и вечером. Перед началом опыта, на 5 и 10 день после заражения у телят брали кровь из яремной вены для серологических и гематологических исследований.

Гематологические исследования проводили по общепринятым ме-

тодам. Определение количества лейкоцитов и эритроцитов проводили в счетной камере Горяева, гемоглобин определяли по методу Са-ли, количество общего белка - рефрактометрически. Относительное содержание Т-лимфоцитов определяли методом спонтанного розетко-образования с эритроцитами барана (Р.В.Петров с соавт., 1976), а количество В-лимфоцитов, несущих рецептор для третьего компонента комплемента - по методу Б.И.Ксндаурова с соавт. (1981).

Выявление антител в сыворотке крови проводили в пробирочной реакции агглютинации в разведениях 1:25, 1:50, 1:100, 1:200, 1:400. В качестве антигена использовали взвесь живой (24-часовой) культуры синегнойной палочки в изотоническом растворе хлорида натрия, содержащей I млрд.микробных клеток в I мл.

Гистологические исследования проводили по общепринятой методике, препараты окрашивали гематоксилин-эозином.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Клиническая и патологоанатомическая картина при псевдомонозе телят

Анализ эпизоотического состояния хозяйств Воронежской и Липецкой областей за 1987-1989 годы показал, что при бактериологическом исследовании трупов павших животных и особенно телят раннего возраста, наряду с патогенной микрофлорой,- а нередко в чистом виде, выделяется возбудитель псевдомоноза.

Проведенные нами исследования показали, что пОевдомоноэ имеет значительное распространение среди телят, в основном 3-20 дневного возраста. Способствующими факторами проявления болезни -у телят являются нарушения ветеринарно-санитарных и зоогигиени-ческих носи содержания. Случаи заболевания отмечаются в лсбое время года, но наиболее часто, в период массовых отелов.

Заболевание телят псегдсмонсэом было зарегистрировянс я у.с-

зяйствах, где не соблюдались профилактические перерывы в заполнении помещений новорожденными животными, отмечалась гх скученность, повышенная вланость в помещении. Болезнь характеризовалась острым течением, сильным угнетением, потерей аппетита и слабостью, появлялась как правило внезапно, без заметных продромальных симптомов. У больных животных повышалась температура тела до 41°С, учащалось дыхание и пульс, у некоторых отмечались нервные явления, слюнотечение, серозный ринит. С первых дней болезни наблюдался прсфуз-ный понос, у некоторых животных с примесью крови. Смерть как правило наступала на 2-3 день с начала болезни. Заболеваемость при отом составляла 45-Ь0$. Летальность доходила до dCß.

При патологоанатомическом вскрытии павших телят выявлены изменения, свидетельствующие о септико-токсическом характере патологического процесса: набухание селезенки, увеличение лимфоузлов, особенно брыжеечных, застойные и дистрофические явлении б печени, почках, отек легких, наличие точечных и мелкопятнистых кровоизлияний под эпикардом, под капсулой почек, селезенки, на слизистой оболочке тонкого кишечника. Отмечалось острое катаральное воспаление слизистой оболочки сычуга и тонкого кишечника. У некоторых животных наблюдали гиперемию и отек головного мозга.

При бактериологическом исследовании патологического материала от 144 павших телят у 25 - из паренхиматозных органов, а иногда и из головного мозга были выделены культуры Рз.aeruginosa.

Возбудитель псевдомоноза, как правило, выделялся в чистом виде и только в отдельных случаях его удалось изолировать в ассоциации с дипло- и стрептококками. Наиболее часто возбудитель выделялся из печени, кишечника и селезенки ¡соответственно о'Л-, •ИТ, 40'?). Частота выделения синегнойной палочки из почек, сердца, легких, лимфоузлов, головного мозга и желудка примерно рдшшкорл

•(16-283!). От телят одного хозяйства одновременно выделялись эн-■теропатогенные штаммы E.coli (сер^тип 0117). Однако мы не изолировали этого возбудителя из трупов, из которых была выделена Fs.aeruginosa . Полученные результаты лабораторных исследований являются свидетельством самостоятельного течения колибакте-риоза и синегнойной инфекции среди телят одной группы.

3.2. Характеристика культур Ps.aeruginosa выделенных от телят и из спермы быков

Для идентификации выделенных культур были изучены культураль-ные, тинкториальные, морфологические, биохимические, антигенные и патогенные свойства. .

По морфологическим признакам все исследуемые штаммы jP.acrugin. представляли собой прямые, подвижные, грамотрицательнке палочки, с закругленными концами, размером 1-3x0,5 мил, спор не образовывали. Вмазках располагались поодиночке или скоплениями.

Проведенные исследования показали, что синегнойная палочка хорошо растет на простых питательных средах (ЫПА, ¡Л1Б). Рост культур характеризуется выделением пигмента, окрашивающего среды в сине-зеленый цвет, и наличием специфического запаха, напоминающего запах земляничного мыла. Эти признаки позволяют легко дифференцировать возбудителя синегнойной инфекции от других энтеробакте-рий. Наряду с обычными питательными средами, нами была использована селективная среда с И - ЦПХ, которая обладает высокой избирательной способность по отношению к синегнойной палочке и подавляет рост других микробов, в том числе из семейства Enterobacterial^.

Нашими исследованиями установлено, что наиболее стабильными признаками Ps.aeruginosa являются подвижность, пигмонто-

образование, способность синтезировать цитохромоксидазу, рост при 42°С и отсутствие его при 4°С, способность окислять глюкозу

ю

в аэробных условиях-и отсутствие ферментации в анаэробных условиях, выраженная протеолитическая, гемолитическая и каталазная активность, отсутствие образования сероводорода и индола и рост на среде с N -ЦГ1Х. • •

При биохимическом исследовании культур на средах Гисса, содержащих глюкозу, лактозу, маннит, сахарозу, мальтозу и арвбинозу отмечена низкая сахаролитическая активность. По отношению к перечисленным углеводам данные получились не стабильными, за исключением сахарозы и мальтозы, к которым окааались индефферентны все изученные штаммы. При сравнительном изучении биохимических свойств штаммов синегнойной палочки, выделенных из патологического материала от- павших животных и из спермы быков, установлено, что изолированные из органов павших животных обладали более активными сахаролитическими свойствами, чем штаммы, выделенные из спермы. Из 25 штаммов, полученных из патматериала, 21 разлагали глюкозу (84%), по 5 - манниг и арабинозу (20$) и 4 - лактозу (16%). В то время, как из 12 штаммов, выделенных из спермы, только 4 (33,3%) разлагали глюкозу, по I - лактозу и арабинозу (8,3$). В отношении маннита все щтаммы были не активны.

При серологическом типироваНии, изученные нами штаммы Рв. аегиб1пова были отнесены к 6 серотипам (0 2,03,04,05,06,010). Один штамм имеющимися сыворотками не типировался, несмотря на то, что имел-все характерные свойства синегнойной палочки. Большинство типированных культур отнесено к 03 и 06 серотипам (соответственно 33,"3^), Среди штаммов, изолированных из патологического материала, наиболее часто встречаются 06 и 03 серотипы (соответственно 48^ и 28?), а выделенных из спермы - 05 серотип (41,65?) и ни оданшгямм не был отнесен к 06 серотипу (таблица I). Различная серо-типовая принадлежность изученных штаммов, связана, по-видимому, с

тем/что данные, культуры были выделены из различных хозяйств, где преобладает тот, или иной серотпп. Нами не выявлено значительных различиГ: по биохимической активности, аминокислотному составу и иатогенности между культурами синегнойной палочки различных серологических групп.

Таблица I

Серологическая характеристика выделенных штаммов

СеР°тип 1?Дано |йз~ патмате риала*! * из спермы быков' Iикамиов Iкол-во ! Й -[кол-во Т %-

02 4 3 12,0 I • 8,3

03 9 7 28,0 2 16,6

04 4 I 4,0 3 25,0

05 ь I 4,0 5 41,6 Сб ' 12 12 48,0 0 0 010 I 0 0 1 8,3

Не типиров._I__4,0 0___0_

Есего 37 25 100 12 100

Изученные штаммы Ps.aerugj.nc3aоказались высоковирулентными для белых мышей. Гибель белых мышей наступала в первые.18-24 часа после заражения. Следует отметить, что культуры, изолированные из патологического материала от павших животных, оказались более вирулентными, чем культуры, выделенные из спермы быков. ЗОЙ культур, Еыделенных из патмятериала, вызывали гибель мышей в первые 6-8 часов после заражения, 45,- через 8-18 часов, 14,3^ - через 1824 часа и 9,8^ - в более поздние сроки. Штаммы, изолированные из спермы, в перша 6-8 часов /ибели мышей не вызывали, а в более поздние сроки гибель белых мылей наступала соответственно в 33,3$ - через 8-Ш часов, 41,6% - через 18-24 часа и 2Щ - более чем 24 часа.

На основании полученных данных по изучению биологических свойств штампов еинйгнойноЯ палочки, выделенных из различных ис-

точников, можно предположить, что в этиологии псевдомоноза телят возможно участие Ps.acrucinooa , находящихся в сперме, rie исключена возможность передачи возбудителя телятам при осеменении коров спермой, контам1$ованной синегнойной палочкой, что'подтверждается исследованиями H.Н.Михайлова и В.А.Зудилина, доказавших, что введение со спермой патогенных культур Ps. acruf;lnosa вызывает рождение нежизнеспособного молодняка.

3.3. Экспериментальное воспроизведение псевдомоноза у телят

Дня уточнения роли Pa.aeruginoaa в этиологии заболевания, выяснению путей заражения и механизма передачи возбудителя, а также для изучения клинической картины и патологоанатомических и морфологических изменений нами было проведено экспериментальное заражение телят. Для этого были использованы культуры синегнойной палочки 03 и 06 серотипов, выделенных нами ранее от павших телят.

Теленку № I культуру вводили в желудок с помощью зонда в дозе 250 млрд.микробных клеток в объеме 100 мл.

Теленку № 2 - внутривенно в дозе 25 млрд.микробных клеток в объеме 10 мл.

Теленку № 3 - внутривенно в дозе 50 млрд.микробных клеток в объеме 20 мл.

Теленку № 4 - внутритрахеально в дозе 25 млрд.микробных клеток.

Теленок № 5 заражению не подвергался.

В результате исследований нами установлено, что течение болезни и инкубационный период зависели от способа заражения и дозы возбудителя. Ил четырех зараженных телят дна пали. Теленок, заражен-' uvjtl ■лнутрив'.чшо в дозе ЬС млрд.микробных клеток, пал на вторые оуткн иосчче введения возбудителя. Теленок, 'зараженный рнутритра-

хеально, пал на третьи сутки. Клиническая картина у этих телят развивалась с признаками, характерными для острого течения болезни при естественном переболевании.

У теленка, зараженного перорально, клинические признаки болезни проявились на третий день после заражения. Болезнь характеризовалась угнетением, снижением аппетита, незначительным подъемом температуры. Учащенно пульса до 102-122 ударов в минуту отмечено с 3 по б день болезни.

Наиболее отчетливо клинические признаки отмечены у теленка, зараженного внутривенно дозой 2Ь млрд.микробных клеток, которые характеризовались нарастающей слабостью, отсутствием аппетита, угнетением, ¡¡а второй день болезни отмечались судорожные явления, подергивание отдельных групп мышц. В течение болезни у теленка отмечалось повышение температуры тела до 40,3-41,3°С, стучащий пульс, частота сердечных сокращений до 116-132 ударов в минут}'. С развитием болезни учащалось дыхание, в отдельные дни количество дыхательных движений в два раза превышало норму. У контрольного теленка отклонений от физиологических норм не наблюдалось.

Результаты.патологоанагомического.вскрытия показали, что экспериментальная синегнойная инфекция у телят характеризуется отеком легких, незначительным набуханием лимфоузлов, селезенки, кровоизлияниями под эпикардом, на слизистой оболочке кишечника, застойными явлениями в паренхиматозных органах, катаральным энтеритом и колитом и слабовыраженнш общим застойным полнокровием.

При гистологическом исследовании органов наиболее ярко изменения проявились в печени, печках и сердце в виде резко выраженной дистрофии и сосудистых реакций. Обнаруженные гистологические изменения при эксперимент-!льном псевдомонозе свидетельствовали о токсическом -.характер; пзтслсгическсгс процесса.

Исследования морфологического состава.крови у опытных животных показали увеличение количества лейкоцитов по мере развития болезни и незначительное снижение количества эритроцитов и гемоглобина .

Изучение уровня специфических янтител к возбудителю псевдо-моноза в сыворотке крови больных телят показало их присутствие в низких титрах (1:25) к 10 дню очлезни только у теленка, зараженного внутривенно. У других телят наличие антител нами не установлено.

3.4. Чувствительность культур Ра.аегикхпоиа к антибактериальным препаратам

Одной из трудностей при борьбе с синегнойной инфекцией является высокая резистентность возбудителя к большинству антибиотиков. Поэтому выбор рациональной антибиотикотерапии основывается на определении чувствительности возбудителя к применяемым препаратам,-.

Нами было проведено изучение чувствительности выделенных штаммов синегнойной палочки к ряду антибактериальных препаратов, наиболее широко применяемых в ветеринарной практике: гентамицяну, тетрациклину, эритромицину, карбенциллину, стрептоцицину, линко-мицину, метициллину, ристомицину, полимиксину, мономицину, неоми-цину, левомицетину, окситетрациклину, ампициллину, фармпзину, ка-намицину, а также новых антибактериальных препаратов стабриллу, тионип». япромицина сульфату и апроляну.

Чувствительность Рв,аегиБ1псаа к вышеперечисленным антибиотикам определяли методом диффузии в агар с применением стандартных дисков, содержащих антибиотики.

Изучена чувствительность 40 штаммов синегнойной палочки, вы- • деленных из различных источников, из которых 26 - изолированы из

1Ь

органов павших животных, 12 - из спермы быков и 2 - от детей. Установлено, что наибольшей активностью в отношении Р.aeruginosa обладает карбснциллин, к которому чувствительно подавляющее большинство штаммов (9£Л!), к гентамицину и стрептомицину чувствительны соответственно 45$ и 40$ штаммов. Высокая резистентность отмечена к эритромицину, линкомицину, метициллину, пенициллину, рис-' томицину, левомицетину.

При сравнении чувствительности-к антибиотикам штаммов Ра.aeruginosa, изолированных из разных объектов, следует отметить, что выделенные из патматериала от павших животных, оказались более устойчивыми к действию антибиотиков, чем выделенные из спермы быков. Культуры, изолированные из спермы, были чувствительными к карбенциллину - 100%, к стрептомицину - 755?, гентамицину - 66,755, полимиксину - 58,3/5. Из числа штаммов, выделенных из патологического материала, чувствительными к данным антибиотикам были соответственно 92,3%, 26,9%, 38,5%, 7,755 штаммов.

Учитывая, что определение чувствительности к антибиотикам методом дисков носит преимущественно качественный характер, для изучения степени чувствительности культур к наиболее активным в отношении синегнойной палочки антибиотикам, а также в свяаи с отсутствием в наием распоряжении коммерческих дисков с апромицином, тионием, стабриллом, фармазином, окси^етрациклином и апроланом применили метод двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде.

Критерием чувствительности культур к антибактериальным препаратам служила минимальная концентрация препарата в I мл питательной среды, подавляющая рост возбудителя. На основании этих результатов, все изученные культуры по степени их чувствительности к антибиотикам, в соответствии со схемой Кирби, разделены на три труп-

пы: чувствительные, умеренно чувствительные и устойчивые.

К чувствительным отнесены штаммы, рост которых подавляется при концентрации препарата, обнаруживаемой в сыворотке крови при использовании обычных доз антибиотика.

Умеренно' чувствительные микроорганизмы - для подавления роста которых требуется концентрация препарата, создающаяся в сыворотке крови при введении максимальных доз препарата.

. К устойчивым отнесены штаммы, рост которых не подавляется при концентрациях препарата, достигнутых в организме при использовании максимальных доз.

Ка основании полученных данных, наиболее активным антибиотиком оказался стрептомицин,обладающий бактерицидным действием в отношении 85% изученных штаммов синегнойной палочки. В числе них, 65% штаммов чувствительны к концентрациям препарата, которые мож-нс создать в организме при Использовании обычных доз антибиотиков (Ы11К до 25 мкг/мл). Большинство штаммов оказались чувствительными также к действию полимиксина и гентамицина, при этом 30% и 10% соответственно обладали высокой, а 55% и 90$ штаммов умеренной чувствительностью. 45% штаммов обладали средней чувствительностью к карбенциллину (таблица 2). Все изученные штаммы оказались резистентными к действию окситетрациклина, ампициллина, фармазина, тиония и стабрилла. Большие концентрации этих препаратов (до 1000 мкг/мл) не оказывали подавляющего действия на P.aeruginosa.

Таким образом, выделенные нами культуры оказались наиболее чувствительными к гентамицину и стрептомицину. Положительное лечебное действие можно также получить при применении карбенцилли-на и полимиксина при введении их в максимальных дозах.

•3.5. Действие дезинфицирующих средств на синегнойную палочку

При изучении устойчивости выделенных штаммов Ps.aeruginosa

Таблица 2

Распределение штаммов синегнойной палочки по степени чувствительности к антибактериальным препаратам (на ос-нопе минимальной подавляющей концентрации)

Антибиотик т ! Степень ! чувствитёль-! ности 1 мпк | мкг/мл | ¡Количество ¡штаммов 1 <1 ¡0

Стрептомицин I >25 13 65

2 25-50 4 20

3 <50 9 15

Карбенциллин I >2 •0 0

2 2-25 9 45

3 <2Ь II 55

Ампициллин I > 2 0 п

2 2-25 п и 0

3 <25 20 100

Скситетрациклин I >10 0 0

О 10-50 0 0

3 <50 20 100

Полимиксин 1 >2 6 30

2 3 2-10 <10 II 3 55 15

Апромицина сульфат I 0,5 0 0

2 4-10 4 ' 27

з 64 II 73

Гентамицин : 0,5 2 10

ц. ■4-10 . 16' 00

3 64 0 0

во внешней среде установлено, что возбудитель сохраняет свою жизнеспособность на поверхности доски 60 суток, на поверхности кирпича-7 суток, в комбикорме - 15, в навозе и почве- до 100 суток. Наибольший срок выживаемости отмечен в воде, где возбудитель сохраняет свою жизнеспособность в течение года.

Учитывая, что возбудитель синегнойной инфекции длительное время сохраняет свою жизнеспособность во внешней среде, одним из способов борьбы с данной инфекцией, в комплексе с другими мероприятиями, является дезинфекция.

Нами было изучено действие дезинфицирующих средств на сине-гнойную палочку, определены оптимальная концентрация и экспозиция. Из дезинфицирующих средств были изучены хлорамин, ДО-2, едкий натрий, формальдегид, карболовая и молочная кислота.

Полученные данные свидетельствуют о том, что наилучшим бактерицидным действием в отношении синегнойной палочки обладают хлорсодержащие препараты. Препарат Д1-2 (действующее начало которого является трихлорциануровая кислота) подавляет рост Ре.асги-с!поза в концентрации 0,25$ при экспозиции 5 минут; 0,Ь$-ный раствор хлорамина - 20 минут, а 1%-ный раствор - обезвреживает псевдомонад за 5 минут. Несколько слабее проявляют свое действие

растворы едкого натрия, формальдегида, карболовой и молочной кис-

кислот

лот. Положительные результаты действия молочной и карболовойЧю-лучены при концентрации 1% и 2% при экспозиции соответственно 60 и 30 минут. Раствор формальдегида в 0,Ь и 1%-ноР концентрации обладает бактерицидным действием при экспозициях соответственно 60 и 30 минут. Слабым бактерицидным действием в отношении синегнойной палочки обладает едкий натрий. Только 1-£Й-ные растворы его при экспозиции 60 минут губительно действуют на ¡\orucinoaa 'таблица 3).

Действие дезинфицирующих средств на синегнойную палочку

Таблица 3

Экспозиция

Концентрация препарата

!Хлорамин

» ДП-2'

r/Va ОН

¡0,2o ¡U,b\ {Г |Ü,1 ; 0,2o ( ü,bj ü,o ji ¡2

Формальдегид

0,o j i j 2

Карболовая. к-tti

U7o

"Z

5 минут 10 минут 20 минут 30 минут 60 минут 120 минут

- + -

+ + -

+ + -

+ + -

+ + -

+ +

+ + +

- - + +

+ + + + + + + + + +

+ + + + + +

(+) - препарат обладает бактерицидным действием (-) - препарат не обладает бактерицидным действием.

о

Изложенные в настоящей работе результаты собственных исследований позволяют более полно представить особенности синегнойной инфекции у телят, а также предложить наиболее эффектигпые методы лечения и профилактики данного заболевания.

ВЫВОДЫ ,

1. Б этиологии желудочно-кишечных болезней телят первых трех недоль жизни а хозяйствах Воронежской и Липецкой областей, наряд' с энтерспэтогенкыми кишечными палочками, сельмонеллами, стрептококками принимает участие Ре.аегизэ.пооа.

Псевдомоноз у телят 3-20 дневного возраста характеризуется острым течением, признаками общего угнетения, повышением температуры тела до 41°С, нарушением сердечно-сосудистой деятельности, пора?кенкем желудочно-кишечного тракта с симптомокомплексом диареи, нервными явлениями.

2. Возбудитель псевдомоноза от павших животных изолирован из печени (6С%), кишечника (44%), селезенки (40%), почек (28%), легких (28%), сердца (24%), головного мозга (20%), лимфоузлов (16%), желудка (16%), других органов (8%). Для выделения синегнойной палочки ио патологического материала, наряду с обычными средами (ША, 1лПБ), целесообразно использовать селективную среду с

-цетилпиридииий хлоридом, ■

' у

3. Изученные штаммы Р.аеги<;.1.пова по культуральным, морфологическим и тинкториальным свойствам аналогичны представителям данного вида. Наиболее типичными свойствами синегнойной палочки являются: подвижность, пигментообраэование, способность синтезировать цитохромоксида'зу, рост при 42°С и отсутствие его при 4°С, способность окислять глюкозу в аэробных условиях и отсутствие ферментации в анаэробных условиях, наличие выраженной протеолити-чесхой, гемолитической и каталазной активности, отрицательная

реакция на индол и сероводород.

4. Штаммы Ps.aeruginosa , выделенные из патологического материала от павших животных, более вирулентны по сравнению со штаммами, изолированными из спермы быков. Гибель белых мышей при пар-энтеральном заражении Ps. aeruginosa , изолированными из органов павших телят, через 6-8 часов наступала в 30$ случаев (при отсутствии гибели животных, зараженных культурами Ps.aeruginosa

из спермы быков), через 8-18 часов - в 45,7% (против 33,3$),. через 18-24 часа - в 14,3% (против 41,6$), в более поздние сроки -в 9,8$ (против 2Ег$).

5. Выделенные штаммы Ps.aeruginosa представлены 6 сероти-поми: 02 (II, 1$), 03 (25$), 04 (11,1$), 05 (16,6$), 06 (33,3$), 010 (2,8$). Среди штаммов, изолированных от павших животных, наиболее часто встречались 03 (28$) и Об (48$) серотипы, среди выделенных из спермы преобладал^ 05 серотип (41,6$).

6. Б опытах in vit.наиболее активными антибиотиками в отношении Pa.aeruginosa были стрептомицин (100$), полимиксин (85$)

и гентамицин (85$) при использовании максимальных доз'препаратов. Эффективность средних доз составляла соответственно 6Э£, 30$, 10$. Эритромицин, линксмицин, метициллин, пенициллин, ристсми-цин, яевомицэтин, окситетрациклин, ампициллин! фармазин, тионий, стабрилл не обеспечивали подавление роста Ps.aeruginosa даже при использовании максимальных доз.

7. Доказана возможность экспериментального заражения телят при интратрахеальном, внутривенном и пероральном введении куль-гур Ps.aeruginosa ; инкубационный.период при этом составлял от 24 до 43 часов. Тяжесть течения болезни зависела от способа заряжения и дозы возбудителя.

6. Пэтолопянатомичес'кие изменения при естественной к зкспе-

риментальной синегнойной инфекции у телят характеризуется отеком легких, кровоизлияниями на серозных покровах паренхиматозных"органов и слизистой оболочке желудочно-кишечного тракта, дистрофией и застойными явлениями в паренхиматозных органах, катаральным гастроэнтеритом, незначительным увеличением селезенки и брыжеечных лимфоузлов.

Гистологические изменения при экспериментальной инфекции характеризовались выраженной сосудистой реакцией и дистрофией паренхиматозных органов, что свидетельствует о септико-токсическом характере патологического процесса при псевдомонозе телят.

9. Возбудитель псевдомоноза устойчив во внешней среде, сохраняя свою жизнеспособность в условиях помещения на поверхности кирпича -- 7 суток, в комбикорме - 15, на поверхности доски - 60, в навозе и почве - до. 100 суток, в воде - в течение года^срок наблюдения).

10. Выраженным дезинфицирующим действием в отношении возбудителя псевдомоноза обладают хлорсодержацие препараты: 0,25$-ный раствор Д1-2 и 1%-ный раствор хлорамина при окспозиции 5 минут. Обезвреживание синегнойной палочки I и 2$-ными растворами формалина, карболовой и молочной кислот достигается лишь при экспозиции 60 и 30 минут, а I и 2&-иого раствора едкого натрия - 120 и 60 минут соответственно.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРВД0ЖШ1Я

I. При лабораторной диагностике инфекционных болезней телят первых трех недель жизни, наряду с исследованиями на колибакте-риоз, сальчонеллез. стрептококков необходимо проводить исследования на синегнойную инфекцию.

Учитывая различную степень пигментообразования культур синегнойной палочки срок культивирования необходимо продлить. ;;о 4-5

суток. Для идентификации Ро.асгие1поаа от других грамотрицатель-ных бактерий и для одноступенчатого ее выделения в чистом виде целесообразно использовать селективную среду с N -цетилпирпди-ний хлоридом.'

2. При установлении псевдомоноза у телят, учитывая высокую резистентность возбудителя к антибиотикам, применять антибактериальные препараты для лечения необходимо в максимальных дозах и только после определения чувствительности возбудителя к этим препаратам.

. 3. Для проведения дезинфекции при псевдомонозе наиболее целесообразно использовать хлорсодержацие препарат« (ДД-2, хлорамин и др.).

Список опубликованных работ по теме диссертация

1. Артемов Б.Т., Ефанова Л.И., Жеглов В.В., Шаронин С.А. Роль синегнойной палочки в патологии у телят //Эпизоотология, эпидемиология, средства диагностики, терапии и специфической профилактики инфекционных болезней, общих для человека и животных /Материалы Всесоюзной конференции/. - Львов,'1988. - С.251-252.

2. Артемов. Б.Т., Ефанова Л.И., Шаронин С.А, Лабораторная диагностика псевдомоноза //Инф.листок № 232-90 Воронежского меж-отрасл.территориальн.центра НШ1-. - Воронеж,' 1990.

3. Артемов: Б.Т., Ефанова Л.И., Шаронин С.А. Псевдомоноз телят //Инф.листок № 234-90 Воронежского межотрасл.территориальн. центра НТИП. - Воронеж,.1990.

4. Шаронин С,А. Чувствительность культур синегнойной палочки к действию антибиотиков и дезинфицирующих средств //Тезисы докладов региональной научно-практической конференции молодых ученых "Вклад молодых ученых ЦЧЗ в интенсификацию сельскохозяйственного производства в новых условиях хозяйствования". - Воронеж.-17-19 мая 1989 . - С Л44-147.