Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Псевдомоноз свиней в Краснодарском крае

ВАСИЛЬЕВ АЛЕКСАНДР КЛИМЕНТЬЕВИЧ

ПСЕВДОМОНОЗ СВИНЕЙ В КРАСНОДАРСКОМ КРАЕ

16.00.03. - Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Краснодар - 2003

Работа выполнена в Краснодарском научно-исследовательском ветеринарном институте.

Научный руководитель: заслуженный деятель науки Кубани, доктор ветеринарных наук Болоцкий И.А.

Научный консультант: доктор биологических наук Терехов В.И.

Официальные оппоненты:

1. Доктор ветеринарных наук, профессор Тутов И.К.

2. Доктор ветеринарных наук, профессор Малышева Л.А.

Ведущая организация: Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт (СКЗНИВИ).

псС

Защита диссертации состоится "28" октября 2003 г. в час. на заседании диссертационного совета Д 220.038.07 в Кубанском государственном аграрном университете (350044, Краснодар, ул. Калинина, 13).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Кубанского государственного аграрного университета.

Автореферат разослан " "(ЗиЛ Ар2003 г.

Ученый .секретарь диссертационного совета, '¡-сУ

/ * /■

профессор •' / Боровой В.Н.

Zoo 3-h

777?

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность проблемы. В последние годы появилось много сообщений о возрастающей роли P. aeruginosa в патологии человека, животных и птиц. Этот микроорганизм, ранее считавшийся условно-патогенным, начинает приобретать одно из ведущих значений в развитии как местных, так и генерализованных гнойно-воспалительных процессов у людей и животных. В связи с этим, ряд авторов Больных В. Т., с соавтор. (1987), Азямов М. А., (1988), Афонин Э. А. (1999) считают, что P. aeruginosa перестала в настоящее время быть условно-патогенным микроорганизмом и предлагают выделить синегаойную инфекцию в самостоятельную нозологическую единицу.

В ветеринарной практике накопилось достаточно фактов, свидетельствующих о возрастающей роли P. aeruginosa в этиологии различных болезней животных. Синегнойная палочка практически постоянно принимает участие в возникновении и течении эндометритов, маститов у коров, свиноматок и других видов животных (Шигощын А. Г., 1981, Турченко A. Н.. 1999,) в желудочно-кишечных и респираторных заболеваниях телят и поросят (Терехов В. И., 2001, Басова Н. Ю., 2002, Тельнов С. Н., 2002).

Однако, многие вопросы данной инфекции не изучены, и заболевание продолжает приносить животноводству убытки. Не изучены вопросы сезонности, источников и путей распространения псевдомоноза у свиней, клинические признаки и картина патологоанатомических изменений при данной инфекции у свиней различных половозрастных групп. Нет данных по экспериментальному воспроизведению псевдомоноза у этого вида животных.

Для своевременной диагностики псевдомоноза свиней, разработки и внедрения эффективных мероприятий, направленных на борьбу с этой инфекцией, раскрытие и изучение указанных вопросов является своевременным и актуальным.

Цель и задачи исследований. Целью нашей работы являлось изучение распространения псевдомоноза свиней в Краснодарском крае, степень инфицированное™ этого вида животных P. aeruginosa, клинического проявления и картины патологоанатомических изменений при экспериментальном и спонтанном заболевании.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

- изучить распространение и этиологию псевдомоноза свиней в хозяйствах Краснодарского края;

- изучить некоторые биологические свойства выделенных изолятов Р. aeruginosa;

- изучить клиническое проявление и картину патологоанатомических изменений у свиней разных половозрастных групп при спонтанном псевдомонозе и у поросят при экспериментальном заражении;

- изучить динамику морфологических и некоторых биохимических показателей крови поросят при экспериментальном псевдомонозе;

- усовершенствовать методы диагностики пггпгтпмппша nmmnft

MC НАЦИОНАЛЬНА*

мвлйотекА СЛстервДО V f

т тЗ**гм

ля |

У

Научная новизна. Впервые изучено распространение псевдомоноза свиней в Краснодарском крае; определены эпизоотические критерии заболевания. Определена этиологическая структура заболевания и изучены некоторые биологические свойства возбудителя Р. aeruginosa у свиней. Впервые экспериментально воспроизведено заболевание на поросятах, определен инкубационный период, изучены клинические проявления, динамика морфологических и биохимических показателей крови, и патологоанатомические изменения при 'спонтанном и экспериментальном псевдомонозе свиней в хозяйствах Краснодарского края.

Практическая значимость. Изучены источники и пути распространения, степень инфицированности и этиологические особенности псевдомоноза свиней в Краснодарском крае. Изучены клинические проявления, изменения показателей крови и патологоанатомическая картина, позволяющие раскрыть патогенез инфекции. Данные этих исследований позволяют рекомендовать ввести самостоятельную нозологическую единицу - псевдомоноз свиней, а также дают возможность более быстро и точно поставить диагноз на псевдомоноз, организовать и провести противопсевдомонозные мероприятия и сократить наносимый ущерб свиноводству.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на:

- научно - практической конференции, посвященной 55-летию ГУ Краснодарской НИВС "Новые фармакологические средства для животноводства и ветеринарии", Краснодар, 2001.

- Всероссийской научно - практической конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии, Казань, 2002.

- международной научно - практической конференции "Актуальные проблемы инвазионной, инфекционной и незаразной патологии животных", Ставрополь, 2003.

Публикации: По материалам исследований опубликовано 6 научных работ, в том числе "Методические рекомендации по диагностике, профилактике и лечению псевдомоноза сельскохозяйственных животных", утвержденные РАСХН, Москва, 2003г.

Основные положения диссертации выносимые на защиту:

- эпизоотология псевдомоноза свиней в Краснодарском крае;

- биологические свойства выделенных от свиней изолятов Р. aeruginosa;

- особенности клинического течения и патологоанатомических изменений при спонтанном и экспериментальном псевдомонозе свиией в Краснодарском крае;

- диагностика псевдомоноза свиней.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 143 страницах машинописного текста, иллюстрирована 20 таблицами и 1 графиком. Состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов исследований и

их обсуждения, выводов и практических предложений. Список цитированной

, - ■ .у*

литературы включает 251 источник, из них 133 отечественных и 118 иностранных авторов.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

» Работа выполнялась в соответствии с государственными планами

научных исследований по заданию 07.01.01., утвержденными Российской Академией сельскохозяйственных наук в 1999-2003 годах в лаборатории эпизоотологии Краснодарского НИВИ (отдел болезней свиней Краснодарской ' НИВС), Краснодарской краевой ветлаборатории, в хозяйствах Выселковского,

Каневского, Красноармейского, Курганинского, Тимашевского, Тихорецкого районов Краснодарского края, города Краснодара, на свинокомплексе "Краснодонское" Волгоградской области.

При выполнении диссертационной работы было поставлено 11 научно-производственных опытов, при этом использовано 676 белых мышей, 576 поросят разного возраста, 847 свиноматок, 99 хряков-производителей. Всего проведено бактериологических исследований проб из хозяйств - 915, проб от подопытных животных - 418, гематологических ~ 125, биохимических - 95.

Вопросы распространения, зональности и сезонности псевдомоноза свиней в хозяйствах края изучали путем анализа данных краевой ветеринарной отчетности и данных собственных наблюдений за последние 7 лет.

Биологические свойства выделенных культур P. aeruginosa изучали проведением бактериологических, биохимических, серологических и других исследований.

Бактериологические исследования проводили общепринятыми методами, описанными в руководствах: «Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии» (1985) и «Медицинские лабораторные технологии (1999 г.). Патматериал от павших поросят, абортированных и мертворожденных плодов, отбирали в хозяйствах, где ставили предварительный диагноз на псевдомоноз. Для исследований использовали пробы печени, почек, селезенки, легких, лимфоузлов, сердца, головного и костного мозга, а также пробы кала, мочи, слюны, мокроты.

Микробиологическим исследованиям подвергали сперму хряков-производителей, смывы из препуциальной полости, маточные выделения из » гениталий свиноматок. Нативную сперму хряков-производителей получали с

помощью асептически подготовленной искусственной вагины. Исследуемую сперму разбавляли стерильным физиологическим раствором в соотношении 1:10, 1:100, 1:1000 и 1:10000 и из каждого разведения делали посевы на стерильные чашки Петри с МПА. Посевы инкубировали 24 часа в термостате при +37°С, затем подсчитывали колонии и типировали изоляты. Смывы из препуциальной полости хряков-производителей получали после туалета наружной поверхности, введением 10 мл стерильного физраствора NaCl в полость препуция с помощью шприца и резиновой трубки, массировали 2-3 минуты, затем раствор отбирали шприцом и делали посевы. Смывы с

поверхности чучел, вагин, спермоприемников, инструментов, оборудования пунктов искусственного осеменения делали с помощью увлажненных дистиллированной водой стерильных тампонов в пробирки, из которых делали посевы на МПБ, МПА. Маточные выделения и пробы из шейки матки от свиноматок после абортов, мертворождений или больных эндометритом брали после туалета наружных половых органов смонтированным стерильным шприцом с полистироловой пипеткой с помощью стерильного влагалищного t

зеркала. Для исследований материала из рогов матки и яичников свиноматок, а также паренхиматозных органов, больных свиноматок, из лимфоузлов, придатков хряков-производителей, пробы отбирали при диагностических и вынужденных забоях. Пробы для бактериологических исследований из 1

свиноводческих корпусов, станков, кормушек, полов, поилок,' подстилки, навоза отбирали непосредственно на свинофермах с помощью стерильных ватных тампонов, увлажненных стерильной дистиллированной водой с последующими посевами на питательные среды.

Культуральные свойства выделенных изолятов изучали в процессе их роста на жидких и плотных питательных средах, при этом учитывали интенсивность помутнения, наличие и характер осадка, пристеночного кольца или пленки. Изучали форму, величину, структуру колоний.

В своей работе при изучении культуральных, морфологических, сахаролитических, гемолитических и других свойств изолятов P. aeruginosa руководствовались «Методическими указаниями по лабораторным исследованиям на псевдомоноз животных и птиц», утвержденных ГУВ МСХ СССР № 432 - 3 от 14.11.1988 г.

Серотипизацию выделенных изолятов P. aeruginosa проводили по общепринятой методике с типоспецифическими сыворотками, изготовленными Днепропетровским предприятием по производству бактерийных препаратов и ГИСК им. Тарасевича (Москва).

Определение вирулентных свойств P. aeruginosa проводили на белых, беспородных мышах весом 18-20 г путем внутрибрюшинного введения взвеси суточной агаровой культуры P. aeruginosa на физрастворе с определением ЬД„, Lfto, ЬДюо-

Экспериментальное воспроизведение псевдомоноза на поросятах проводили в изоляторе Ильской участковой ветеринарной лечебницы Северского района Краснодарского края. Для этого в агроплемз аводе «Индустриальный» было приобретено 20 здоровых поросят 1,5 месячного i

возраста со средней массой 10,5 кг. В процессе карантинирования у поросят дважды в день измеряли температуру тела, вели клинический осмотр. На третий день взяли кровь для изучения биохимических и морфологических фоновых показателей. Затем поросят разделили на 4 группы, разместили в '

отдельные станки и провели внутрибрюшинное заражение вирулентным изолятом 6/2-9 P. aeruginosa, который был выделен из спермы хряка-производителя, принадлежащего ЗАО «Индустриальный». 1 гр. (5 поросят) - по 40 мл (по 80 млрд. мкрт.) микробной взвеси, суточной культуры P. aeruginosa

2 гр. (5 поросят) - по 20 мл (по 40 млрд. мкрт.) микробной взвеси

3 гр. (5 поросят) - ничего не вводили, контроль на контактное заражение, содержали совместно с поросятами группы 1 и 2.

4 гр. (5 поросят) - контрольная группа, внутрибрюшинно ввели 40 мл (80 млрд. мкрт.) микробной взвеси P. aeruginosa, убитой нагреванием при 60°С в течение 30 минут. У поросят измеряли температуру тела через каждые 12 часов, брали кровь через 3, 8, 12 и 21 день после заражения для бактериологических и биохимических исследований. Вели наблюдение за клиническими проявлениями заболевания, а при падеже проводили патологоанатомическое вскрытие с полным описанием и бактериологическое исследование проб из лимфоузлов, печени, почек, селезенки, сердца, легких, головного и костного мозга, содержимого желудка, кишечника, мочевого пузыря, а также кала, мочи, слюны.

Гематологические и биохимические исследования сыворотки опытных животных проводили до и в ходе опыта. Определяли количество эритроцитов и лейкоцитов, используя камеру с сеткой Горяева, уровень гемоглобина и цветной показатель (гемоглобинцианидным методом). Содержание общего белка определяли рефрактометрически, а белковых фракций калориметрически.

Биохимические исследования проводили согласно "Методическим указаниям по применению унифицированных биохимических методов исследования крови, мочи и молока в ветеринарных лабораториях", Москва, 1981.

Чувствительность выделенных изолятов к некоторым антибиотикам и другим препаратам определяли, используя методы диффузии в агар и серийных разведений.

Математическую и биометрическую обработку полученных цифровых данных результатов исследований проводили с помощью программы Microsoft Excel 2000 на компьютере с процессором Pentium 3, степень достоверности "Р" устанавливали по распределению Стьюдента.

2. 2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. ЭПИЗООТОЛОГИЯ ПСЕВДОМОНОЗА СВИНЕЙ В КРАСНОДАРСКОМ КРАЕ.

Для изучения вопросов эпизоотологии мы проанализировали за последние 7 лет результаты бактериологических исследований лаборатории эпизоотологии (отдела болезней свиней Краснодарской НИВС) Краснодарского НИВИ, ветбаклабораторий края, в т. ч. и краевой, и установили, что в 12,1-16,5% от всех случаев выделения микроорганизмов выделялась культура P. aeruginosa.

Таблица № 1.

Количество случаев выделения Р. аепщтова от животных, из кормов и объектов внешней среды.

№ Объекты

п/п Исследований 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002

1. Свиньи 224 189 196 194 278 369 464

05.5%) (19,3%) (16.4%) (17,5%) (20,5%) (31,2%) (31,3%)

2. Крупный рогатый СКОТ 245 287 338 187 150 222 368

3. Птица 761 335 391 392 525 343 332

4. Пушные звери 6 18 7 21 13 - 32

5. , Другие виды: (овцы, козы, собаки. кошки"» 118 86 106 215 315 172 182

6. Сперма производ. 89 62 57 98 77 94 106

Итого: 1443 977 1195 1107 1358 1183 1484

7. Объекты внешней

среды: СсЬеомы. И 47 34 18 15 24 38

вода, почва)

8. Коома 112 87 137 118 104 140 132

Итого: 123 134 171 136 119 164 170

Всего: 1566 1111 1366 1243 1477 1347 1654

Примечание: в графе данных по свиньям показано количество выделенных изолятов от свиней, в скобках- процент данных изолятов к общему количеству выделенных имлятов от всех животных.

Анализ показал, что синегнойная папочка в крае имеет широкое распространение и часто выделяется из патматериала от свиней, крупного рогатого скота, птиц, пушных зверей, овец, коз, спермы сельскохозяйственных животных, т смывов и проб животноводческих объектов, различных кормов. Из вссх указанных объектов культуры P. aeruginosa выделяли как в чистом виде, так и в ассоциациях, причем, в ассоциациях возбудитель выделялся в 63-72%. Ассоциации встречались чаще всего с Е. coli, S. albus, S. aureus, Streptococcus ssp., P. vulgaris, B. subtilis, Aspergillus ssp., Mucor ssp., Fusarium ssp., Candida ssp. От свиней в разные годы изолировали от 15,5 до 31,3% P. aeruginosa, из патматериала павших, абортированных и мертворожденных поросят, из маточных выделений, проб

молока от свиноматок больных маститом, спермы хряков. Для выявления сезонности выделения возбудителя мы попользовали данные исследований только от животных за 3 года по месяцам. Рис.№1.

Рис. 1. Динамика выделения Р.аеп^тоза от животных по месяцам за 1999-2001 годы

Месяцы

--■--динамика выделения P.aeruginosa от всех видов животных —■—динамика выделения P.aeruginosa от свиней

Прослеживается тенденция снижения выделения изолятов P. aeruginosa от всех видов животных начиная с апреля и по август. С ноября по март идет нарастание случаев выделения P. aeruginosa из патматериалов до 10,3-12,0% Аналогичную картину мы отмечали при исследовании патматериала от свиней. С апреля происходило четкое снижение количества случаев выделения P. aeruginosa, которое шло вплоть до августа, после чего происходило увеличение частоты встречаемости с пиком в декабре. Таким образом, в наибольшей степени инфицированность и заболеваемость животных, в том числе и свиней на территории Краснодарского края проявляется в осенне-зимний период.

Природно-климатические и ландшафтные особенности зон Краснодарского края практически не оказывали влияния на степень инфицированности животных и птиц P. aeruginosa. Чтобы установить распространение Р. aeruginosa и степень контаминирования ею различных объектов свиноводческих ферм были проведены бактериологические исследования патматериала, кормов, смывов с оборудования свиноводческих ферм, пунктов искусственного осеменения. Таблица № 2.

Таблица 2.

Результаты бактериологических исследований проб различных материалов, объектов

№ п/п Обьекш бактериологических исследований К-во исследованных проб Всего выделено изо-лятов Выделенные изоляты:

Р. aeruginosa шт (%) Е coli Плесневые 1рибьт Enteroba cter Р. vulgaris S. albus, S. aureus s. Dublin S. typhimur imn Citrobac ter Pasteuiella rrultocida

1. Патматериал от поросят 182 151 35 (23,2) 63 14 11 6 7 6 4 5

2. Патматериал от свиноматок 146 130 28(21,5) 71 8 13 3 4 3 - -

3. Патматериал от абортплодов 57 37 14(37,8) 15 2 - 1 - - - -

4. Сперма хряков-производителей 94 116 35(30,2) 69 - 10 - - - 2 -

5 Смывы препуция хряков-производ. 115 154 39 (25,3) 82 6 8 6 6 3 3 1

6 Маточные истечения 96 146 42(28,8) 79 4 6 1 11 2 1 -

7 Корма: зерновые 83 74 12(16,2) 26 25 - 9 - 2 - -

8. Мука: мясокостная, рыбная 38 72 21(29,2) 26 11 4 б 2 1 1 -

9. Обрат, сыворотка 19 16 3(18,8) 9 1 2 1 - - - -

10. Оборудование СИО 21 19 2 (10,5) 11 1 - 3 - 1 1 -

11. Корпуса, полы, станки 38 89 24 (27,0) 32 14 2 7 1 4 2 3

12. Вода для поеиня 26 22 2(9,1) 19 - - - - 1 -

Вссло: 915 1021 (100) 257(25,1) 502(49,2) 86(8,4) 56(5,5) 43(4.9) 31(3.0) 23(2,2) 14(1,4) 9(0,9)

За период работы исследовано 915 проб различных материалов, при этом выделен 1021 изолят микроорганизмов и грибов. В большинстве случаев они представлены всевозможными ассоциациями, состоящими из 2,3,4 и более видов. Наиболее часто выделялась Е. coli (49,2% от общего числа изолятов), Р. aeruginosa (25,17%), плесневые грибы (8,4%), Enterobacter (5,5%), Р. vulgaris (4,2%), S. albus, S. aureus (3,0%), S. Dublin, S. typhimurium (2,2%), Citrobacter (1,4%), Pasteurella k multocida (0,9%).

Синегнойная палочка выделялась из всех исследуемых материалов и объектов, но частота ее встречаемости была различной. Данное обстоятельство свидетельствует о ее широком распространении на свиноводческих фермах ' края. Наибольший процент выделения изолятов Р. aeruginosa получен при

исследовании абортированных плодов, спермы хряков-производителей, и репродуктивных органов свиноматок. Из 915 исследованных проб в 257 случаях (28,41%) изолирована культура Р. aeruginosa, причем из этих 257 изолятов в чистом виде данный микроорганизм выделили в 80 случаях (31,1% от всех выделенных).

Из числа изолированных культур Р. aeruginosa 48,2% были вирулентны для белых мышей. Наибольший процент высоковирулентных изолятов выделяли из биообъектов (абортированных плодов, павших поросят, спермы хряков-производителей), затем из кормов (мясо-костной и рыбной муки, комбикормов) и смывов с оборудования пунктов искусственного осеменения.

Все те объекты, из которых выделяли вирулентные изоляты Р. aeruginosa могут являться потенциальными источниками синегнойной инфекции. В агроплемзаводе «Индустриальный» отобрали 10 здоровых холостых свиноматок, которых разделили на 2 группы по 5 голов. Свиноматок первой, опытной группы осеменяли спермой хряка-производителя (№ 3678), контаминированной культурой Р. aeruginosa серогруппы 08. Свиноматки контрольной группы были осеменены интактной спермой.На 83 день супоросности абортировала свиноматка из первой опытной группы. Серологически были исключены абортогенные инфекции: бруцеллез, лептоспироз и листериоз. Из внутренних органов абортированных плодов была изолирована патогенная Р. aeruginosa серогруппы 08. По одной свиноматке из опытной и контрольной групп при опоросе принесли часть приплода мертвым. У опытной свиноматки было 4 мертвых плода, у контрольной - 2. При бактериологическом исследовании мертворожденных плодов от опытной | свиноматки изолирована культура Р. aeruginosa серогруппы 08. Из плодов

контрольной свиноматки изолированы культуры Р. aeruginosa серогруппы 08 и вирулентная Е. coli. У обеих свиноматок на 2-ой день после опороса появились t слизисто-гнойные выделения из матки, развились признаки ММА, они долго не

приходили в охоту. От опоросившихся свиноматок опытной группы получили 15 гипотрофичных поросят со средней живой массой 0,9 кг, которые заболели бронхопневмонией, 6 из них пали, из патматериала выделена культура Р. aeruginosa серогруппы 08. От свиноматок контрольной группы получен 41 нормально развитый поросенок, со средней массой тела 1,1 кг.

Опыт показал, что контаминированиая P. aeruginosa сперма хряков-производителей приводит к снижению оплодотворяющей способности спермиев, воспалительным процессам в репродуктивных органах свиноматок, абортам, мертворождениям и рождению гипотрофичных, инфицированных синегнойной палочкой поросят.

В 2002-2003 году в Тихорецком племпредприятии содержалось несколько хряков-производителей, у которых постоянна из спермы выделялась синегнойная палочка. Спермой от этих хряков осеменяли свиноматок в колхозах «Колос» и «Родина» Выселковского района. В результате, в этих хозяйствах происходили массовые заболевания свиноматок эндометритами, заболевания с синдромом ММА, рождение слабых, гипотрофичных поросят, иногда аборты, мертворождения. Всего в 2-х хозяйствах было зарегистрировано 478 больных свиноматок. Также была зарегистрирована высокая заболеваемость и повышенный отход новорожденных поросят с признаками диареи и бронхопневмонии. От больных поросят, свиноматок и хряков-производителей выделялась культура P. aeruginosa серогруппы Об, идентичная культурам, изолированным из спермы. Это доказывает, что первоначально источником инфекции служила контаминированиая сперма хряков-производителей, а в последующем, больные свиноматки и поросята.

Факт передачи возбудителя инфекции через корма был установлен в АО «Нива Кубани» Кореновского района, где поросятам-отьемышам в качестве белково-минеральной подкормки давали мясокостную муку, обсемененную синегнойной палочкой серогруппы Об. Заболевание протекало остро и подосчро, вначале с поражением желудочно-кишечного тракта (диарея, иногда с кровью), а позднее (через 15 дней), с поражением легких (бронхопневмония). За две недели пало 168 поросят. Летальность составила 38,2%. При бактериологическом исследовании выделена культура P. aeruginosa серогруппы Об.

В АФ «Кавказ» Приморско-Ахтарского района причиной гибели поросят в 20-25 дневном возрасте стали обрат и подсырная сыворотка, содержащие Р. aeruginosa. Из патматериала павших поросят и молочной сыворотки выделены идентичные культуры P. aeruginosa серологической фуппы 08.

Псевдомоноз свиней, подтвержденный бактериологически был установлен в следующих хозяйствах: АО «Победа», АО «Воронцовское», АО им. Чапаева, АО «Пластуновскос» Динското района, ПСС «Заречный» Новокубанского р-на, АКТ «Ясенское» Ейского района, АО им. Кирова и АФ "Россия" Красноармейского района, АО «Ровенское» Новопокровского района, к-з «Новый путь» Брюховецкого района, АФ «Ладожское» Усть-Лабинского р-на, АО " Колос" Выселковского р-на и других. Для доказательства того, что комбикорма, контаминированные P. aeruginosa, могут быть причиной развития инфекции, мы в агроплемзаводе «Индустриальный» отобрали 40 поросят-отъемышей 45-дневного возраста, разделили их на две группы по 20 голов и скармливали поросятам 2-ой группы в течение 7 дней комбикорм СК-4, контаминированный вирулентной синегнойной палочкой серогруппы Об. Поросята первой группы получали интактный корм. Через 25 дней после начала опыта у поросят обеих групп взяли кровь и исследовали гематологические показатели и бактерицидную

активность сыворотки крови. Установлено, что в первой группе заболело 5 и пало 2 поросенка, а во второй группе соответственно 9 и 4. Заболевание начиналось на 12-14 день после скармливания контаминированного корма и протекало подостро в течение 4-6 дней. У поросят снизился, а затем полностью пропал аппетит, развился понос, у некоторых с примесью крови и слизи. У 3 поросят появились поражения ЦНС, мышечная дрожь, кашель, одышка, рвота с k пенистыми кровянистыми выделениями. Бактерицидная активность сыворотки

крови поросят первой группы была выше на 18,46%, чем во второй группе. Количество эршроцитов, гемоглобина и лейкоцитов у поросят второй группы через 25 дней после скармливания контаминированного корма было ниже на 10> 21%, чем у поросят первой группы. Бактериологически удалось из всех паренхиматозных органов изолировать культуру P. aeruginosa серогруппы Об.

2.2.2. БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗОЛЯТОВ

P. aeruginosa

Бактериологическими исследованиями было установлено, что клетки Р. aeruginosa представляли собой грамотрицательные, короткие, прямые с закругленными концами палочки, расположенные одиночно, парами, иногда короткими цепочками, с активной подвижностью. Спор и капсул не образовывали, но активно продуцировали слизь, которая, в виде капсулы, тонким слоем окружала бактериальную клетку и выявлялась при окраске по Гинсу.

Через 24 часа на мясо-пептонном бульоне (МПБ) культуры P. aeruginosa образовывали слизеподобную пленку, помугнение и светлый слизистый осадок при встряхивании, поднимающийся в виде тонкой косички. На 2-3 сутки мясо-пептонный бульон окрашивался в зеленый цвет, вследствие синтеза микроорганизмом пигмента - пиоцианина, который выявляли, добавляя несколько капель хлороформа, при этом отмечали сдвиг рН среды с 7,4 до 8,0. К 20-21 дню бульон приобретал тягучую слизистую консистенцию. Рост культур отмечали в диапазоне от +5° до +42°С.

На МПА культуры P. aeruginosa образовывали крупные (2-4 мм в диаметре), блестящие колонии сероватого цвета, полупрозрачные, выпуклые с ровными краями, слизистой консистенции, центр колоний более темный, чем по периферии. На 2-3 день колонии окрашивались в пепельно-зеленый цвет.. Все культуры обладали специфическим запахом карамельных конфет.

Изолированные культуры в 69,2% случаев окисляли глюкозу, в анаэробных условиях окисление отсутствовало. Большая часть изолятов разлагали арабинозу (60,4% изолятов), не окисляли сорбит и дульцит. Все культуры не окисляли мальтозу и очень слабо сахарозу и лактозу. Не очень активно образовывали сероводород (38,5% изолятов) и индол. Все культуры разжижали желатин. Большинство выделенных культур (90,1%) обладали гемолитической активностью в виде зон р - гемолиза на мясо-пептонном агаре с 5% дефибринированной кровью барана. Только 18 (9,9%) культур обладала а - гемолизом. Все выделенные культуры образовывали пигмент пиоцианин,

свертывали и пептонизировали молоко. Все выделенные культуры синегнойной палочки по своим морфологическим и культурально-биохимическим свойствам были типичными для данного вида.

Типирование выделенных культур P. aeruginosa проводили с использованием моновалентных и поливалентных агглютинирующих О-сывороток. Идентификацию бактерий суточной агаровой культуры проводили в реакции агглютинации, согласно утвержденному наставлению (Разрешение зам. министра здравоохранения П. Н. Бурга0ова., Приказ № 558 от 25.05.1981). Агглютинация наступала в течение 1-3 минут. Имеющимися в распоряжении сыворотками удалось установить серогрупповую принадлежность всех выделенных нами культур, у 12 (4,7%) реакция была положительной с несколькими сыворотками.

Из 257 выделенных культур, 85 (33,1%) отнесены к серогруппе 02, 47 (18,3%) к серогруппе Об, 32 (12,5%) - к серогруппе 08, 24 (9,3%) - к серогруппе 01, 23 (9,0%) - к серогруппе ОЗ, 13 культур (5,1%) - к серогруппе 05, 10 культур (3,9%) к серогруппе 04, 7 культур - к Ol 1, 6 культур - к 07, 4 культуры - к 012. Культур, принадлежащих к серогруппе Ol0 нами не выделено.

В агроплемзаводе «Индустриальный» Тимашевского района и в племзаводе «Краснодонское» Волгоградской области, в течение трех лет из спермы и препуциальной слизи хряков-производителей, патматериала от павших и мертворожденных поросят, маточных выделений свиноматок выделено 97 культур Р. aeruginosa. Из них 86,2% были отнесены к серогруппе 02. Большинство (67,4%) изолятов Р. aeruginosa, выделенных из объектов внешней среды данных предприятий, также отнесены к серолошческой группе 02. Далее по количеству выделенных изолятов стоят серогруппы 06 и 08. Культуры указанных серогрупп выделялись в 55,4% случаев из патматериала от свиней, из кормов и различных объектов станций и пунктов искусственного осеменения, животноводческих ферм. Очевидно, что животные являясь в основном носителями возбудителя этих трех серогрупп и, выделяя возбудителя во внешнюю среду, контаминируют ее, затем инфицируются вновь поступающие животные. При серологической идентификации культур Р. aeruginosa, выделенных только из кормов, в большем количестве (27,8%) были выделены изоляты серогруппы 02, далее (16,7%) изоляты серогруппы 01, по 13,8% изоляты серогрупп Об и 08, (11,1%) изоляты серогруппы 03.

Приоритетными источниками возбудителя инфекции для свиней являются животные - псевдомононосители и объекты внешней среды (в 63,8% случаев выделены изоляты серогрупп 02, Об, 08), затем корма, контаминированные Р. aeruginosa (в 55,6% случаев выделены изоляты серогрупп Ol, 02, ОЗ).

Вирулентные свойства 120 изолированных культур Р. aeruginosa из различных объектов изучали на белых беспородных мышах весом 18-20 г. Из них 98 (81,7%) были высоковирулентными, вызывающими гибель 100% мышей от дозы 100 млн. мкрт. за 18-24 часа. У девяти изолятов Р. aeruginosa вычислили ЛДзо для белых мышей. Статистическая обработка по

модифицированному методу Кербера (Ашмарин И. П., Воробьев А. А., 1962) показала, что ЛД50 колебалась от 22,10 до 267,94 млн. мкрт. Четкой корреляции между серогрупповой принадлежностью и вирулентностью выделенных культур не отмечено. Установлено, что синегнойная палочка не теряла исходной вирулентности при культивировании на различных средах до 10 пересевов. Хранение в замороженной сперме хряков при температуре - 196°С в течение года (срок наблюдения), не влияло на патогенные свойства возбудителя.

Для определения отношения выделенных культур P. aeruginosa к различным препаратам был использован ряд антибиотиков, традиционно применяемых в ветеринарной практике и появившихся совсем недавно, отечественного и зарубежного производства известных групп: пенйциллинов, цефалоспоринов, фторхинолонов, тетрациклинов, макролидов, полимиксинов, аминогликозидов, левомицитин, фармазин, а также: сульфаниламиды, нитрофураны, препараты йода (лазин), диоксидин, ампиокс, нитроксалин -всего 32 препарата. Большая часть изолятов P. aeruginosa проявила значительную устойчивость к большинству исследованных препаратов. Так, в группе аминогликозидов при общей резистентности по группе 50, 8%, к гентамицину было чуйствительно 77, 5% проверяемых изолятов. Аналогичная картина в группе пенициллинов, где общая устойчивость 67, 5%, к карбенициллину резистентных было 38,6% изолятов.

Наибольшее количество чувствительных изолятов выявлено в отношении следующих групп и отдельных препаратов: фторхинолоны - 76, 7%, фармазин - 62, 6%, полимиксины - 54, 2%, цефалоспорины - 51, 5%. Наибольшее

количество чувствительных изолятов выделено от поросят и свиноматок - 49, 4%, затем от хряков - 45, 3%. Меньшее количество изолятов чувствительных к препаратам выделено из объектов внешней среды - 40, 6%, из кормов - 38,2%.

2. 2. 3. ОСОБЕННОСТИ КЛИНИЧЕСКОГО ТЕЧЕНИЯ ПСЕВДОМОНОЗА СВИНЕЙ В КРАСНОДАРСКОМ КРАЕ

Клинические проявления заболевания зависят в первую очередь от пути проникновения возбудителя в организм, и протекать болезнь может остро, подостро и хронически. Мы наблюдали вспышку псевдомоноза на 147 поросятах сразу после рождения на СТФ № 1 в АО «Нива Кубани» Кореновского р-на и на 213 поросятах в ООО «Разгуляй Полтава» Красноармейского р-на. Диагноз в обоих хозяйствах был подтвержден бактериологическими исследованиями. Многие поросята рождались слабыми, гишлрофичными, со слабым сосательным рефлексом. У поросят развивалась диарея, они быстро отставали в росте. Щетина имела серый, тусклый цвет. Каловые массы серо-зеленого цвета, неприятного запаха, иногда с кровью. Нередко проявлялись признаки поражения нервной системы: тремор мышц, непроизвольные движения конечностей. Температура тела в норме или на 0,5°С выше нормы. Спустя 3-4 недели заболевание началось на подсосных поросятах 10-15 дневного возраста. Энзоотия протекала остро. Температура тела

повышалась до 41°С, снижался или полностью отсутствовал аппетит, развивался конъюнктивит, ринит и профузный понос, иногда с примесями крови и слизи. У некоторых поросят наблюдали признаки поражения нервной системы - клонические судороги, которые, продолжались 2-5 дней. Летальность поросят в «Ниве Кубани» составил 42,9%, а в «Разгуляй Полтава» 39%. При вскрытии павших поросят отмечали набухание селезенки, значительное увеличение брыжеечных, средостенных, заглоточных лимфоузлов с кровоизлияниями. Кровоизлияния на эпи- и миокарде, под капсулой почек и на селезенке. Отмечали отеки слизистой оболочки желудка, острое геморрагическое, иногда катаральное воспаление слизистой оболочки желудка и кишечника с множественными кровоизлияниями, застойные и дистрофические процессы в печени, почках и сердечной мышце, отеки в легких, иногда пенистые массы в бронхах и трахее, инъекцию сосудов коры и отек головного мозга. Энзоотии псевдомоноза у поросят после отъема регистрировали реже, чем у подсосных. Эти энзоотии протекали остро и подостро.Так, на СТФ № 1 АФ «Дружба» Каневского р-на в 2002 году отмечали энзоотию псевдомоноза у поросят отъемышей (2-х месячного возраста). Причиной вспышки заболевания явилась мясо-костная мука, которую давали в качестве белково-минеральной подкормки, и, которая была обильно обсеменена P. aeruginosa. Первые 3 дня выделяли по 5-7 больных в сутки, а затем по 15-18 поросят. Лечение пенициллином и стрептомицином было малоэффективным, и через 2-3 дня поросята погибали.

Клинические симптомы заболевания и картина патологоанатомических изменений были аналогичны таковым при заболевании поросят подсосного периода. Когда течение болезни осложнялось сальмонеллезом, отечной болезнью и другими заболеваниями, картина патвскрытия была неспецифична для какой-то одной инфекции.

Клиническое течение псевдомоноза у свиноматок проявляется в форме абортов, мертворождений и синдрома мастит, метрит, агалактия (ММА). На протяжении 1999-2002 годов, мы регистрировали заболевание свиноматок псевдомонозом в ЗАО «Дружба» Каневского р-на {444 гол), «Нива» Выселковского р-на (216 голов) ООО «Разгуляй Полтава» Красноармейского р-на (54 головы) и др. На СТФ № 1 хозяйства «Нива» Выселковского района при заболевании свиней лабораторными исследованиями были исключены абортогенные инфекции: лептоспироз, бруцеллез, листериоз, болезнь Ауески. При бактериологических исследованиях материалов из матки, рогов матки и яичников, убитых с диагностической целью свиноматок были выделены 14 изолятов: P. aeruginosa (29,0%), E.coli (21,3%), P. vulgaris (7,1%), Streptococcus ssp. (7,1%), Aspergillus ssp. (7,2%), Fusarium ssp. (14,2%), C. albicans (7,1%).

На ферме абортировало 48 свиноматок, у 76 часть приплода было мертвым. Аборты и мертворождения регистрировали за 15-20 дней до ожидаемых опоросов, приплод был слабым и нежизнеспособным. Абортированные плоды были разложившиеся, с кровоизлияниями в почках, на сердце, с гидроперикардитами, с дистрофичной печенью. Из родившихся поросят до 45-65% были слабыми, гипотрофичными, у них после приема

молозива отмечали диарею, обезвоживание и быструю гибель. Общая заболеваемость свиноматок на ферме составила 67,9%, из них 22,2% абортировали, 35,2% принесли часть мертвого приплода, 105 гол заболело острым послеродовым гнойно-катаральным эндометритом, 82 эндометритом и 29 синдромом ММА, клинически здоровыми на ферме оставались 102 свиноматки.

При клиническом исследовании свиноматок, с синдромом метрит-мастит-агалактия у всех животных было выявлено заметное угнетение. У 76% животных наблюдалось заметное ухудшение аппетита, у 20% свиноматок -полный отказ от приема корма и воды. Свиноматки большую часть времени лежали, температура тела 39,8-40,50°С. Частота пульса составила от 92 до 112 ударов в минуту. Число дыхательных движений составило от 28 до 40 в минуту. Через сутки после опороса или аборта у свиноматок наблюдали выделение из половых путей слизисто-гнойного экссудата, полужидкой консистенции, бурого цвета, выраженную отечность половых губ. У 28% свиноматок было выявлено увеличение и уплотнение 4 задних брюшных пакетов молочной железы: 2-х правых и 2-х левых смежных долей. Слизисто-гнойные выделения у свиноматок через 5-7 дней прекращались, отмечали агалактию, они приходили вовремя в охоту, их осеменяли, но выделения опять возобновлялись и оплодотворялись только 60-68%.

Несмотря на то, что выделялась ассоциация микроорганизмов, все же превалирующее место принадлежало синегнойной палочке, потому что она встречалась у большего количества животных, и 66,7% изолированных культуры P. aeruginosa оказались патогенны для белых мышей, в то время как только 16,6% выделенных культур Е. coli были патогенны, остальные микроорганизмы были непатогенными для белых мышей.

Взрослые хряки-производители, инфицированные Р. aeruginosa клинические признаки заболевания проявляют редко. Нами выявлены хряки-псевдомононосители в ЗАО агроплемзаводе «Индустриальный», (34) ЗАО племзаводе «Краснодонское» (36) Волгоградской области, племпредприятиях «Курганинское» (И), «Тихорецкое» (6), «Брюховецкое» (12). Всего под наблюдением было 99 хряков-производителей-псевдомононосителей. Во всех случаях в перечисленных хозяйствах носительство Р. aeruginosa у хряков протекало одинаково.

В агроплемзаводе «Индустриальный» на протяжении 1999 - 2002 было выявлено 34 взрослых хряка, у которых регулярно из спермы и препуциальных смывов выделялась Р. aeruginosa. При этом у некоторых отмечали снижение половой активности, они не охотно шли на чучело, и объем эякулята был меньше, чем обычно. У отдельных животных регистрировали трудноизлечимые баланопоститы, изъязвление слизистой препуциальной полости, а при садке на чучело появлялись кровянистые пенистые истечения из препуция. Качество спермы по показателям загрязненности и активности спермиев было низким. При контрольном забое в разное время 5-ти хряков-производителей, длительное время бывшими псевдомононосителями, у 3-х при бактериологическом исследовании печени и селезенки выделена Р. aeruginosa, у

четырех - из почек, мочевого пузыря и паховых лимфоузлов, канальцев семенников, у всех пяти хряков синегнойная палочка выявилась из препуциальной полости, мочеполового канала, придаточных половых желез, спермы, придатков семенников.

У трех убитых хряков при патвскрытиии отмечено перерождение печени, она кровенаполнена, дряблая. Почки слегка увеличены, граница коркового и мозгового слоя не четкая, лоханка увеличена. У одного хряка пиелонефрит, у двух нефрозо-нефриты.

Паховые лимфоузлы у четырех хряков увеличены, в них воспалительные изменения, разрастание соединительной ткани, очаговые кровоизлияния.

При исследовании спермы хряков-производителей-псевдомононосителей установлено, что у врех объем эякулята уменьшался на 10-14%. На 20-25% повышалось количество случаев аутоспермоагглютинации, и на 12% - случаев наличия патологических спермиев (мертвые, уродливые, малоподвижные). Спермин сохраняли активность всего 28-36 часов (вместо 3-4 суток).

Подобные клинические проявления и аналогичные патологические изменения мы находили у хряков-производителей-псевдомононосителей в указанных выше хозяйствах.

2. 2.4. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ВОСПРОИЗВЕДЕНИЕ ПСЕВДОМОНОЗА НА ПОРОСЯТАХ

Опыг по экспериментальному заражению поросят вирулентной культурой Р. aeruginosa проводили в изоляторе Ильской участковой ветеринарной лечебницы Северского района. Ход опыта отражены в таблице 3.

Таблица 3.

Экспериментальное инфицирование поросят Р. aeruginosa

V „„ lVIIVi поросят в группе Доза: млрд.мкрт. гол. После заражения

№ пп Метод заражения Появление клинич. признаков, на день Падеж, на день

1 5 В/бр 80 2-3 4-5

2 5 В/бр 40 9-13 13-15

3 5 контактный - 16-21 21-24

4 5 контроль 80 убитых - -

После внутрибрюшинного введения микробной взвеси культуры Р. aeruginosa стабильное повышение температуры тела отмечали у поросят 1 группы со второго дня, у поросят 2 группы с шестого дня после заражения. У поросят четвертой группы (контрольной) повторного повышения температуры не отмечали. У поросят третьей группы (контактной) температура тела начала

повышаться с 14 дня, после заражения опытных1 поросят 1-ой и 2-й грутт(табл.№4).

Таблица 4.

Развитие клинических признаков заболевания у поросят, инфицированных Р. аеп^поза

Группы поросят Признаки болезни Дни появления признаков болезни после заражения

инфицирование в дозе млрд.мкрт. Контакт ное заражение контроль, не инфициро ван

80 40

1 Поросят в группе 5 5 5 5

2 К-во павших поросят/ на день 3/4, 2/5 1/13,3/14, 1/15 1/21,1/22, 12/13,1/24 -

3 Повышение температуры тела 5/2,3/3, 1/4 3/6, 5/11, 7/12,4/13 2/14,3/15, 4/16, 5/17 3/1

4 Снижение аппетита 5/2 1/5, 5/6 1/11,5/13 -

5 | Вялость 5/2 1/5, 5/63 1/12, 5/13 -

6 ~ 1~ Жажда 3/2, 5/3 3/6,5/8 2/12,5/13 -

Анемия слизистых 5/2 4/4, 5/5 4/13,5/14 -

8 Понос 1/5, 5/3 1/9,5/10 1/14, 5/17 -

9 Понос кровавый 4/3, 2/4 4/10, 5/11 4/18, 5/19 -

10 Рвота 1/2,4/3 2/10,3/11, 4/13 1/17, 4/19, 3/20,2/21 -

__ 11 Рвота с кровью 3/3,1/4 2/12,3/13 2/19,2/20, 1/21 -

12 Одышка 2/2,4/3, 1/4 1/9,3/11, 5/12,4/13 1/16, 2/17, 3/19,4/20 -

13 Кашель 2/2, 1/4 1/10,2/11, 4/12,1/14 1/17,3/18, 4/20,1/22 -

14 Пенистые истечения из носа 1/4 2/13 1/22,1/23 -

15 Тремор 2/3 1/12,2/14 2/20,3/22 -

16 Судороги 1/2,2/3 2/9,3/11, 4/12,1/14 2/17,4/19, 3/20,2/22 -

17 Понижение температуры тела 1/3, 3/4 1/12, 3/13, 1/14 2/21,3/22 -

Примечание: в числителе - к-во поросят с зарегистрированным признаком, в знаменателе -день после заражения, когда впервые в группе появился падеж или признак болезни

Наиболее стремительно клинические признаки болезни развивались у поросят первой группы, которым вводили по 80 млрд. микробных тел Р. aeruginosa. Уже через двое суток у поросят появилась вялость, понижение

аппетита, а затем и полное его отсутствие, жажда. В это же время зарегистрирован понос, в каловых массах через 72 часа у 4-х поросят стали появляться сгусиси крови и слизи. Спустя это же время отмечали сначала у одного, а затем у трех рвоту. Рвотные массы были с кровью. Одышка и кашель стали развиваться спустя 2 дня. На четвертый день у одного поросенка кашель сопровождался пенистыми, розового цвета истечениями из носа.

У других отмечали ринит, конъюнктивит. Через 48 часов после инфицирования у одного поросенка первой группы начались судороги, плавательные движения конечностей, а через 72 часа судороги уже были у 2-х поросят. К этому же времени у двух других стал появляться тремор мышц, который продолжался до снижения температуры тела на 0,5-1°,. вначале у '

одного поросенка, а через 96 часов у трех до самой гибели. Через -96 часов (4 суток) после инфицирования три поросенка пали. Остальные два пали через 5 суток. Инкубационный период продолжался 30-48 часов, заболевание длилось от 48 до 72 часов, после чего наступала стопроцентная гибель поросят опытной группы.

Аналогичную картину клинических признаков заболевания мы наблюдали у поросят второй группы, которым вводили по 40 млрд. мкрт. культуры P. aeruginosa. Признаки болезни были те же, но были более растянуты по времени. Развитие клинических признаков заболевания у поросят третьей группы, которым возбудителя не вводили, а они были в контакте с инфицированными (больными) отмечали в более поздние сроки, чем у поросят первой и второй групп. У отдельных животных вялость, снижение аппетита отмечали на 11 сутки после начала контакта с инфицированными поросятами. Повышение температуры на 0,5-0,8°С, анемию слизистых оболочек, диарею регистрировали с 14 дня, причем не у всех сразу, а у отдельных, количество которых постепенно нарастало. Одышку регистрировали с 16 дня, кашель, рвоту, а иногда судороги с 17. Понос с кровью и слизью отметили на 18 день, рвоту с пенистыми, кровянистыми массами с 19 дня. Тремор и частые судорога отмечали с 20 дня. Понижение температуры тела опытных поросят регистрировали за 12-24 часа до гибели. В опыте показано, что возбудитель псевдомоноза может передаваться воздушно-капельным путем.

Длительность или острота развития болезни зависела от дозы возбудителя P. aeruginosa. Поросята второй группы были инфицированы дозой в 2 раза меньше, чем в первой группе, поэтому у них инкубационный период был на 2-4 суток продолжительнее, а заболевание с явной клинической картиной на 4-5 (

суток дольше. Даже падеж поросят второй группы продолжался не 2, как в первой, а трое суток. У поросят третьей группы, которые находились в тесном контакте с инфицированными первой, а затем второй группы, инкубационный период составил 10-12 суток, клиническое проявление болезни продолжалось *

10-13 суток, и пали все поросята в течение 4 суток.

У животных третьей группы, все вышеперечисленные показатели заболевания были наиболее выраженными и более продолжительными, чем в первых двух группах. Бактериологическими исследованиями материалов от больных и павших опытных поросят выделена исходная культуры серогруппы

Об. Изолировали культуру из сердца (крови), селезенки, печени, почек, брыжеечных, паховых, средостенных лимфоузлов, из легких, мышц, костного и головного мозга, кала, мочи, желчи, слюны и носовых истечений. Культура Р. aeruginosa из кала, мочи, слюны и носовых истечений высевалась одновременно с появлением явных клинических признаков заболевания.

При гематологических исследованиях у опытных поросят отмечали начиная с 12 и 21 дня снижение количества эритроцитов на 20%, гемоглобина на 26%, цветного показателя на 23%, лейкоцитов на 16%. Снижалось количество сегментоядерных лейкоцитов, а уровень палочкоядерных лейкоцитов незначительно увеличивался. Отмечено значительное снижение » общего белка сыворотки крови и его фракций. У поросят опытных групп в

сыворотке крови отмечено достоверное снижение глюкозы к 21 дню на 21,5%, цинка на 21%, кальция на 7%. Заметно увеличилось (на 14,2%) содержание фосфора.

При патологоанатомическом исследовании трупов павших поросят установили, что наиболее четкие и характерные патологические изменения были у поросят, которые болели более продолжительное время, т.е. у животных второй и, особенно, третьей групп. Четыре трупа поросят третьей группы были истощены, слизистые оболочки и мышцы анемичны. У трех трупов в области паха и брюшной полости небольшие кровоизлияния. У двух - пенистые массы в трахее и бронхах. У двух поросят 3-й группы в легких гнойно-катаральное воспаление, отек, на разрезе пенистые истечения. Гидроперикардит, по границе желудочков и предсердий мелкие кровоизлияния, кровь плохо свернувшаяся. Печень увеличена, дряблая, серо-желтого цвета, имеются кровоизлияния вокруг воротной вены. Селезенка увеличена, с редкими точечными кровоизлияниями. Почки слегка увеличены светло-коричневого цвета с мелкими кровоизлияниями под капсулой. Граница коркового и мозгового слоев сглажена, кровоизлияния в корковом слое. Лоханка увеличена, у двух поросят лоханки почек со слизисто-гнойным содержимым. У двух трупов мелкие кровоизлияния на слизистой оболочке мочевого пузыря. Лимфоузлы увеличены, с кровоизлияниями, особенно средостенные, брыжеечные, паховые.

Слизистая оболочка желудка и всех отделов кишечника отечна, катарально-геморрагически воспалена, с множественными кровоизлияниями. Содержимое желудка и кишечника скудное, разжиженное, серо-зеленого цвета, I со зловонным запахом, а в толстом отделе кишечника с редкими сгустками

крови и слизи.

В бедренных мышцах редкие, мелкие кровоизлияния. Оболочки головного Мозга отечны, кровеносные сосуды сильно инъецированы. Костный * мозг с кровоизлияниями. Регистрируемые кровоизлияния в подкожную

клетчатку, мышцы, в слизистые оболочки желудка, кишечника и мочевого пузыря, почки и др. указывают об увеличении порозности кровеносных сосудов, пониженной свертываемости крови. Данные, получгнные в ходе опыта, подтверждают, что чистая культура Р. aeruginosa может вызывать заболевание у поросят с характерными клиническими симптомами,

патологоанатомическими и биохимическими изменениями. Эти данные могут использоваться в ветеринарной практике при комплексной постановке диагноза на псевдомоноз.

4. ВЫВОДЫ

1. Инфицированность сельскохозяйственных животных P. aeruginosa в Краснодарском крае имеет широкое распространение. Возбудитель псевдомоноза из патматериала свиней выделяется в 15,5-31,5% случаев. Инфицированность животных, в т. ч. и свиней возбудителем псевдомоноза не зависит от природно-климатических и ландшафтных зон края, регистрируется в течение всего года, но в большей степени выявляется в зимне-весенний период.

2. Источниками возбудителя инфекции для свиней являются больные и переболевшие псевдомнозом поросята, хряки-производители-псевдомононосители, абортировавшие и принесшие мертвый приплод с синдромом ММА свиноматки, а также кал, моча, выделения из матки, бронхов, трахеи. Источниками и средствами передачи инфекции являются контаминированные P. aeruginosa все виды кормов, оборудование и инструменты, рабочий инвентарь пунктов (станций) искусственного осеменения, свиноферм. Основными путями заражения являются воздушно-капельный, алиментарный и половой.

3. а) Все выделенные культуры P. aeruginosa по своим морфологическим и культурально-биохямическим свойствам были типичными для данного вида микроорганизмов. При серологической типизации они отнесены к 11 серогруппам. Наибольшее распространение имели серогруппы 02 — 33,1%, Об - 18,3, 08 - 12,5%, частота встречаемости остальных составила менее 10%. Выделенные изоляты от свиней в 45,6% случаев были вирулентны для лабораторных животных, из них 81,7% высоковирулентны.

б) Большинство выделенных культур P. aeruginosa были высокорезистентны к испытуемым препаратам. Наибольшее , количество чувствительных изолятов P. aeruginosa выявлено к : фторхигнолонам-76,7%, фармазину-62,6%, полимиксину-54,2%, цефалоспоринам-51,9%. Чаще чувствительные культуры к указанным препаратам выделяли из патматериала, полученного от поросят и свиноматок (49,4%), из спермы хряков (45,3%). Из объектов внешней среды, кормов и воды в "большей степени выделяли высокорезистентные изоляты. (

4. Псевдомоноз впервые воспроизведен экспериментально на 1,5 месячных поросятах. Течение экспериментального псевдомоноза у поросят зависит от количества, вирулентности возбудителя и ворот инфекции, поэтому инкубационный период может колебаться от 2 до 12 дней, клиническое i проявление болезни может продолжаться от 2 до 13 суток, при 100% -ой гибели поросят опытных групп.

5. Спонтанный и экспериментальный псевдомоноз у молодняка свиней характеризуется токсическими явлениями, необратимыми поражениями в печени, почках, сердце, желудочно-кишечном тракте, лепсих, нарушением

функций ЦНС, повышением проницаемости кровеносных сосудов, уменьшением в периферической крови количества эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов, общего белка сыворотки крови и отдельных его фракций, глюкозы, кальция, цинка, снижением резистентности организма. Смертность при спонтанном псевдомонозе у молодняка свиней составляет 32-42%.

6. Псевдомоноз у свиноматок проявляется абортами за 10-20 дней до опороса, мертворождениями, эндометритами, маститами и ранней агалактией (синдром ММА), снижением воспроизводительной функции с последующей их выбраковкой. Заболеваемость составляет 40-67,9%.

7. У хряков-производителей клинические признаки псевдомоноза иногда проявляются в виде баланопоститов, но чаще регистрируется бессимптомное псевдомононосительство, продолжительностью до 3-6 месяцев, что снижает качество спермы и отрицательно влияет на воспроизводство.

8. Для диагностики псевдомоноза свиней следует использовать данные эпизоотологического обследования, клинической картины заболевания, патологоанатомического вскрытия, а также лабораторные методы(бактериологический, биологический, биохимический, серологический), основным из которых является бактериологический.

9. Непостоянство клинических признаков заболевания и их схожесть с признаками других инфекционных болезней объясняется частыми ассоциативными факторами.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

1. Данные проведенных исследований по эпизоотологии, клинической картине заболевания и патологоанатомических изменений у поросят, свиноматок и хряков-производителей, а также лабораторные методы можно использовагь для быстрой постановки диагноза на псевдомоноз.

2. Результаты проведенных исследований позволяют нам предложить ввести самостоятельную нозологическую единицу - псевдомоноз свиней.

3. "Методические рекомендации по диагностике и профилактике псевдомоноза сельскохозяйственных животных", РАСХН, Москва, 2003г.

6. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ.

1. Васильев А.К., Болоцкий И.А., Дружина К.В., Семенцов В.И., Куклев В.А., Молчан С.К. Вопросы эпизоотологии псевдомоноза свиней в Краснодарском крае // В сборнике «Новые фармакологические средства для животноводства и ветеринарии» - материалы научно-практической конференции, посвященной 55-летию Краснодарской НИВС (Краснодар, 2001г.), том 2, стр. 173-174.

2. Васильев А.К., Болоцкий И.А., Семенцов В.И., Пруцаков C.B., Молчан С.К. Эпизоотология псевдомоноза сельскохозяйственных животных в Краснодарском крае // Материалы Всероссийской научно-практической

конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии (Казань, 2002г.) часть 1, стр. 12-13.

3. Пруцаков C.B., Васильев А.К., Болоцкий И.А., Семенцов В.И., Васильев В. Ф., Хурай Р.Я., Ермакова Т.В., Молчан С.К. Псевдомонов свиней в условиях Краснодарского края // Журнал «Ветеринария», №12, стр. 12-14.

4. Васильев А.К. Распространение псевдомоноза свиней в Краснодарском крае и воспроизведение заболевания на поросятах // Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения проф. С.Н. Никольского «Актуальные проблемы инвазионной, инфекционной и незаразной патологии животных», Ставрополь, 1617.09.2003г, стр.154-155.

5. Болоцкий И.А., Васильев А.К., Семенцов В.И., Пруцаков C.B., Молчан С.К. Клиническое течение и результаты патологоанатомического вскрытия при псевдомонозе поросят-отьемьппей // Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения проф. С.Н. Никольского «Актуальные проблемы инвазионной, инфекционной и незаразной патологии животных», Ставрополь, 1б-17.09.2003г, стр.152-153.

6. Терехов В.И., Шипицын А.Г., Болоцкий И.А., Васильев А.К. и др. // Методические рекомендации по диагностике, профилактике и лечению псевдомоноза сельскохозяйственных животных, РАСХН, Москва, 2003г.

е

»

Лицензия ИД 02334 14.07.2000

Подписано в печать 16.09,03 Формат 60 х 84

Бумага офсетная Офсетная печать Печ. л. 1,0

Тираж 100 Заказ № 540

Отпечатано в типографии КубГАУ, 350044, Краснодар, Калинина, 13

I

IT

17775

P177 75

В последние годы появилось много сообщений о возрастающей роли Р. aeruginosa в патологии человека, животных и птиц. Этот микроорганизм, ранее считавшийся условно-патогенным, начинает приобретать одно из ведущих значений в развитии как местных, так и генерализованных гнойно-воспалительных процессов у людей и животных. В связи с этим, ряд авторов Дзюбак С. Т., (1981), Калина Г. П., (1985), Больных В. Т., с соавт. (1987), Гвоздяк Р. И., Яковлева JI. М, (1987), Азямов М. А., (1988), Афонин Э. А. (1999) считают, что P. aeruginosa перестала в настоящее время быть условно-патогенным микроорганизмом и предлагают выделить синегнойную инфекцию в самостоятельную нозологическую единицу.

В медицинской практике давно известны и описаны менингиты, отиты, пневмонии, эндометриты, фибринозные циститы, стоматиты, многочисленные случаи ожогового сепсиса, абдоминальных инфекций, обусловленные Р. aeruginosa.

В ветеринарной практике накопилось достаточно фактов, свидетельствующих о возрастающей роли P. aeruginosa в этиологии различных болезней животных. В пушном звероводстве P. aeruginosa вызывает острые энзоотии со значительным отходом поголовья. У этого вида животных проблема более или менее решена. Предложены и внедрены эффективные специфические препараты.

В настоящее время синегнойная палочка практически постоянно выделяется при эндометритах, маститах у коров, свиноматок и других видов животных (Шипицын А. Г., 1981, Турченко А. Н., 1999, Коба И. С., 2002) при желудочно-кишечных и респираторных заболеваниях телят и поросят (Терехов В. И., 2001, Басова Н. Ю., 2002, Тельнов С. Н., 2002).

Быки - производители, оставаясь длительное время псевдомононоси-телями, наносят воспроизводству крупного рогатого скота громадный экономический ущерб (Шипицын А. Г., 1981; Азямов М. А., 1988), и до настоящего времени эффективных средств терапии и специфической профилактики не разработано.

До настоящего времени не изучены вопросы сезонности, источников и путей распространения псевдомоноза у свиней, не изучены клинические признаки и картина патологоанатомических изменений при данной инфекции у различных половозрастных групп свиней. Не нашли мы в литературе данных по экспериментальному воспроизведению псевдомоноза у этого вида животных.

Для своевременной диагностики псевдомоноза свиней, разработки и внедрения эффективных мероприятий, направленных на борьбу с этой инфекцией раскрытие и изучение указанных вопросов является своевременным и актуальным.

Цель и задачи исследований. Целью нашей работы являлось изучение распространения псевдомоноза свиней в Краснодарском крае, степени инфицированности этого вида животных P. aeruginosa, клинического проявления и патологоанатомических изменений при экспериментальном и спонтанном заболевании.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

- изучить распространение и этиологию псевдомоноза свиней в хозяйствах Краснодарского края;

- изучить некоторые биологические свойства выделенных изолятов Р. aeruginosa;

- изучить клиническое проявление и картину патологоанатомических изменений у свиней разных половозрастных групп при спонтанном и экспериментальном псевдомонозе;

- изучить динамику морфологических и некоторых биохимических показателей крови поросят при экспериментальном псевдомонозе;

- усовершенствовать диагностику заболевания.

Научная новизна.

Впервые установлено распространение псевдомоноза свиней в Краснодарском крае; определены сезонность, источники и пути распространения заболевания. Изучена этиологическая структура заболевания и некоторые биологические свойства возбудителя у свиней. Впервые экспериментально воспроизведено заболевание на поросятах, определен инкубационный период болезни, изучены ее клинические проявления и динамика морфологических и биохимических показателей крови, патологоанатомических изменений при спонтанном и экспериментальном псевдомонозе свиней в хозяйствах Краснодарского края.

Практическая значимость. Изучены источники и пути распространения, степень инфицированности и этиологические особенности псевдомоноза свиней в Краснодарском крае. Установлены клинические проявления, изменения показателей крови и пато-логоанатомическая картина, позволяющие характеризовать данную инфекцию, а, следовательно, более быстро и точно поставить диагноз на псевдомо-ноз, организовать и провести противопсевдомонозные мероприятия.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на:

- научно - практической конференции, посвященной 55-летию ГУ Краснодарской НИВС "Новые фармакологические средства для животноводства и ветеринарии", Краснодар, 2001.

- Всероссийской научно - практической конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии, Казань, 2002.

- международной научно - практической конференции "Актуальные проблемы инвазионной, инфекционной и незаразной патологии животных", Ставрополь, 2003.

Публикации: По материалам исследований опубликовано 6 научных работ, в том числе "Методические рекомендации по диагностике, профилактике и лечению псевдомоноза сельскохозяйственных животных", утвержденные РАСХН, Москва, 2003 г.

Основные положения диссертации выносимые на защиту:

- эпизоотология псевдомоноза свиней в Краснодарском крае;

- биологические свойства изолятов P. aeruginosa, выделенных от свиней;

- особенности клинического течения и проявления спонтанного и экспериментального псевдомоноза свиней в Краснодарском крае;

- усовершенствование диагностики псевдомоноза свиней.

Объем и структура Диссертации.

Диссертация изложена на 143 страницах машинописного текста, иллюстрирована 20 таблицами и 1 графиком. Состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов исследований и их обсуждения, выводов и практических предложений. Список цитированной литературы включает 251 источник, из них 133 отечественных и 118 иностранных авторов.

4. ВЫВОДЫ

1. Инфицированность сельскохозяйственных животных P. aeruginosa в Краснодарском крае имеет широкое распространение. Возбудитель псевдомоноза из патматериала свиней выделяется в 15,5-31,5% случаев. Инфицированность животных, в т. ч. и свиней возбудителем псевдомоноза не зависит от природно-климатических и ландшафтных зон края, регистрируется в течение всего года, но в большей степени выявляется в зимне-весенний период.

2. Источниками возбудителя инфекции для свиней являются больные и переболевшие псевдомнозом поросята, хряки-производители-псевдомононосители, абортировавшие и принесшие мертвый приплод с синдромом ММА свиноматки, а также кал, моча, выделения из матки, бронхов, трахеи. Источниками и средствами передачи инфекции являются контамини-рованные P. aeruginosa все виды кормов, оборудование и инструменты, рабочий инвентарь пунктов (станций) искусственного осеменения, свиноферм. Основными путями заражения являются воздушно-капельный, алиментарный и половой.

3. а) Все выделенные культуры P. aeruginosa по своим морфологическим и культурально-биохимическим свойствам были типичными для данного вида микроорганизмов. При серологической типизации они отнесены к 11 серо-группам. Наибольшее распространение имели серогруппы 02 - 33,1%, Об — 18,3, 08 - 12,5%, частота встречаемости остальных составила менее 10%. Выделенные изоляты от свиней в 45,6% случаев были вирулентны для лабораторных животных, из них 81,7% высоковирулентны. б) Большинство выделенных культур P. aeruginosa были высокорезистентны к испытуемым препаратам. Наибольшее количество чувствительных изолятов P. aeruginosa выявлено к : фторхинолонам-76,7%, фармазину-62,6%, полимиксину-54,2%, цефалоспоринам-51,9%. Чаще чувствительные культуры к указанным препаратам выделяли из патматериала, полученного от поросят и свиноматок (49,4%), из спермы хряков (45,3%). Из объектов внешней среды, кормов и воды в большей степени выделяли высокорезистентные изоляты.

4. Псевдомоноз впервые воспроизведен экспериментально на 1,5 месячных поросятах. Течение экспериментального псевдомоноза у поросят зависит от количества, вирулентности возбудителя и ворот инфекции, поэтому инкубационный период может колебаться от 2 до 12 дней, клиническое проявление болезни может продолжаться от 2 до 13 суток, при 100% -ой гибели поросят опытных групп.

5. Спонтанный и экспериментальный псевдомоноз у молодняка свиней характеризуется токсическими явлениями, необратимыми поражениями в печени, почках, сердце, желудочно-кишечном тракте, легких, нарушением функций ЦНС, повышением проницаемости кровеносных сосудов, уменьшением в периферической крови количества эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов, общего белка сыворотки крови и отдельных его фракций, глюкозы, кальция, цинка, снижением резистентности организма. Смертность при спонтанном псевдомонозе у молодняка свиней составляет 32-42%.

6. Псевдомоноз у свиноматок проявляется абортами за 10-20 дней до опороса, мертворождениями, эндометритами, маститами и ранней агалактией (синдром ММА), снижением воспроизводительной функции с последующей их выбраковкой. Заболеваемость составляет 40-67,9%.

7. У хряков-производителей клинические признаки псевдомоноза иногда проявляются в виде баланопоститов, но чаще регистрируется бессимптомное псевдомононосительство, продолжительностью до 3-6 месяцев, что снижает качество спермы и отрицательно влияет на воспроизводство.

8. Для диагностики псевдомоноза свиней следует использовать данные эпизоотологического обследования, клинической картины заболевания, па-тологоанатомического вскрытия, а также лабораторные мето-ды(бактериологический, биологический, биохимический, серологический), основным из которых является бактериологический.

9. Непостоянство клинических признаков заболевания и их схожесть с признаками других инфекционных болезней объясняется частыми ассоциативными факторами.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

1. Данные проведенных исследований по эпизоотологии, клинической картине заболевания и патологоанатомических изменений у поросят, свиноматок и хряков-производителей, а также лабораторные методы можно использовать для быстрой постановки диагноза на псевдомоноз.

2. Результаты проведенных исследований позволяют нам предложить ввести самостоятельную нозологическую единицу — псевдомоноз свиней.

3. "Методические рекомендации по диагностике и профилактике псев-домоноза сельскохозяйственных животных", РАСХН, Москва, 2003г.

Заключение

1. Псевдомоноз свиней характеризуется, как остро протекающее инфекционное заболевание, в основном молодняка, с признаками диареи, ринита, нервными явлениями, сопровождающееся токсемией и септицемией. При экспериментальном заражении поросят P. aeruginosa и при энзоотических вспышках в хозяйствах клиническая картина заболевания аналогична.